Биологические и продуктивные особенности овец, трансгенных по гену химозина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.01, кандидат биологических наук Калмыков, Сергей Петрович

• Калмыков, Сергей Петрович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Калмыков, Сергей Петрович

Введение

1.0бзор литературы

1.1. Химозин, его получение, свойства и практическое применение

1.2. Воспроизведение овец

1.3. Молочная продуктивность овец

1.4. Факторы, влияющие на молочную продуктивность овец

1.5. Отбор овец для доения

1.6. Доение овец

1.7. Гигиенические требования к овечьему молоку

1.8. Использование овечьего молока как продукта питания 36 2. Материалы и методы исследований

2.1. Содержание и кормление овец

2.2. Разведение и изучение воспроизводительных способностей трансгенных овец

2.2.1. Получение и замораживание семени трансгенных баранов

2.2.2. Искусственное осеменение

2.2.3. Естественное осеменение

2.2.4. Изучение воспроизводительных способностей трансгенных

2.3. Изучение особенностей роста и развития трансгенных и не-трансгенных ягнят

2.4. Определение гематологических показателей трансгенных и интактных овец

2.5. Определение наследования гена химозина в различных поколениях овец

2.6. Исследование экспрессии рекомбинантного гена химозина в молоко у трансгенных овцематок

2.7. Технология доения трансгенных овец

2.8. Определение молочной продуктивности трансгенных

2.9. Гистологическое исследование особенностей молочной железы трансгенных овец

2.10. Гормональная обработка трансгенных овцематок, находящихся в запуске, с целью возобновления лактации

2.11. Изучение влияния кратности доения на молочную продуктивность трансгенных овцематок

2.12. Изучение влияния продолжительности подсосного периода на молочную продуктивность трансгенных овцематок

3. Результаты исследований

3.1. Воспроизводительные способности овец, трансгенных.по гену химозина

3.2. Рост и развитие трансгенных и нетрансгенных ягнят

3.3. Гематологические показатели трансгенных и интактных овец

3.4. Наследование рекомбинантного гена химозина

3.5. Гистологические и морфологические особенности молочной железы трансгенных овец

3.6. Молочная продуктивность трансгенных овцематок

3.7. Влияние кратности доения на молочную продуктивность трансгенных овцематок

3.8. Влияние продолжительности подсосного периода на молочную продуктивность трансгенных овцематок

3.9. Реакция трансгенных овец, находящихся в запуске, на обработку гормонами с целью возобновления лактации

3.10. Экспрессия гена химозина в секреторных клетках молочной железы

3.10.1. Методика определения присутствия химозина в молоке трансгенных овец и метод его получения в виде готового продукта

3.10.2. Зависимость экспрессии гена химозина от поколения трансгенных овцематок, их возраста и периода лактации

Обсуждение результатов исследований

Выводы

Практические предложения Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические и продуктивные особенности овец, трансгенных по гену химозина»

Достижения фундаментальных наук: биохимии, молекулярной биологии, генетики и других в последние десятилетия привели к возникновению новых прикладных отраслей - генной инженерии, биотехнологии, направленных на изменение генома прокариотов и эукариотов, животных и растений. Выяснение первичной структуры отдельных белков, порядка аминокислот, позволили кон-струироватъ адекватные нуклеиновые кислоты, рекомбинантные ДНК и РНК, встраивать их в геном живых организмов и таким образом превращать их в живые биореакторы для производства соответствующих белковых препаратов.

Одним из объектов, к которому могла быть применена такая? ультрасовременная технология, - ферментный препарат химозин (сычужный фермент), необходимый при производстве сыров. Первоначальный биотехнологический вариант производства был основан на синтезе его генно-инженерными микроорганизмами, но получаемый продукт при этом оказался недостаточно высокого качества, к тому же чрезвычайно дорогим. В связи с этим решено было пойти другим путём, когда в качестве производителей использовать крупных трансгенных животных, включив в их геном соответствующую рекомбинантную ДНК.

Усилиями российских и австрийских ученых были созданы трансгенные овцы, в геном которых был включён синтетический ген химозина. Нам предстояло выполнить следующий этап — разработать биотехнологию производства химозина, для чего нужно было от первичной трансгенной овцематки создать популяцию овец в количестве, необходимом для выполнения всей программы исследований, выяснить влияние трансгенеза на физиологические и продуктивные качества животных, и на базе полученных результатов разработать условия оптимальной эксплуатации овец как биореакторов для производства химозина.

Актуальность исследований. Среди молочных продуктов особым спросом у населения пользуются сыры, как биологически высокоценные диетические продукты питания. Ежегодное производство сыров в России составляет 371 тыс. т/год (Сельское хозяйство России, М., ФЕНУ «Росинформагротех», 2006). Технология производства сыра основана на использовании створаживающего молоко фермента-химозина, иначе называемого сычужным ферментом.

Традиционно химозин получают из сычугов молочных телят и ягнят. Однако в последние годы в Российской Федерации объем заготовок сычугов резко снизился по той простой причине, что забой животных в молодом возрасте экономически не оправдан. Вместе с тем, потребность в химозине довольно большая — на каждые 100 кг молока при приготовлении сыра требуется от 2,66 до 3,2 г этого фермента (Чепурков, Тезиев, 2006), а общая потребность для всего сыродельческого производства страны составит около 12 т в год. Острый дефицит сычужного фермента в нашей стране вынуждает импортировать этот продукт, что существенно удорожает конечную продукцию.

Для решения этой проблемы был разработан метод производства химозина путем микробного синтеза. Однако использование такого препарата в сравнении с полученным из сычугов телят также повышает себестоимость производимого сыра более чем на 10%, и сопровождается ухудшением качества сыра (Югова, Дорохов, 1988).

Эта ситуация привела к необходимости поисков других путей получения химозина. В частности, это может быть достигнуто биотехнологическим путём -созданием трансгенных животных, в геном которых встроен рекомбинантный ген этого фермента. Экспрессия этого гена в секретирующих клетках, в частности в молочной железе, позволит получать химозин непосредственно с молоком (Эрнст, Гольдман, Кадулин и др., 1993).

Усилиями международного научного коллектива, в России была получена первичная трансгенная овца многоплодной романовской породы со встроенным в геном рекомбинантным геном химозина (Гольдман, Эрнст, Брем и др., 1994). Это, в свою очередь, поставило задачу изучения особенностей разведения таких животных и использования их как продуцентов химозина.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований было выяснить особенности воспроизводительной, лактогенной и других функций овец, трансгенных по гену химозина, и на базе полученных данных разработать технологию производства химозина. Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи.

От первичной; трансгенной овцематки, создать популяцию животных-аналогов, выяснить при этом влияние трансгенеза на отдельные физиологические функции овец:

-состояние воспроизводительной функции; -рост и развитие трансгенных ягнят; -наследование гена химозина;

-способность экспрессии гена химозина в молочной железе и выход продукта экспрессии с молоком; -морфологию и функцию молочной железы и молочной продуктивности трансгенных овец; -действие отдельных факторов на молочную продуктивность трансгенных овец: кратности доения и длительности предшествующего доению подсоса. Предстояло разработать методы:

- определения содержания прохимозина в молоке;

- гормональной стимуляции лактогенной функции у овец;

- выделения химозина из молока трансгенных овец.

Научная новизна работы. Впервые установлено, что рекомбинант-ный ген химозина, встроенный в геном овцы, способен передаваться по наследству и экспрессировать в молочной железе с выделением, в молоко продукта экспрессии, прохимозина. Трансгенность животного не отражается на состоянии воспроизводительной функции животных, на, росте и развитии потомства, как самцов, так и самок, но подавляет молочную продуктивность из-за перехода прохимозина в химозин непосредственно в альвеолах молочной железы. Потерю молочной продуктивности отчасти можно компенсировать высокой частотой доения, подсосом ягнят перед периодом доения, а также гормональными обработками.

Практическая значимость. На настоящем этапе развития технологии получения химозина из молока трансгенных овец решены вопросы разведения гемизиготных трансгенных особей от одной первичной трансгенной овцематки - получения потомства, выявления трансгенных потомков, их выращивания и эксплуатации. Разработаны приёмы активации лак-тогенной функции режимом доения и предшествующим подсосом, а также гормональными обработками. Разработаны методы выявления химозина в молоке трансгенных овец и выделения его в виде готового продукта.

Апробация работы.

Материалы диссертации были доложены:

На совместной, научно-практической конференции Российской академии менеджмента в животноводстве (РАМЖ) и Всероссийского научно-исследовательского института свиноводства (ВНИИС), по проблемам-: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения»; «Эффективность развития свиноводства в современных условиях рыночной экономики», Быково, Московская область, 9-14 июня 1998 года; на международной научно-практической конференции Российской академии менеджмента в животноводстве (РАМЖ) по проблеме: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения», Быково, Московская область, 2-5 июля 2002 года; на научной конференции ВИЛАР, 2007 год.

Публикации результатов исследований

По результатам исследований опубликовано пять научных работ, в том числе в рецензируемых журналах - две.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных», Калмыков, Сергей Петрович

ВЫВОДЫ

1. Интеграция рекомбинантного гена химозина в геном овец не изменяет воспроизводительных способностей, как овцематок, так и баранов.

2. Постнатальные рост и развитие потомства, полученного как от трансгенных овцематок и интактных баранов, так и от интактных овцематок и трансгенных баранов находятся на уровне, присущем интактным особям.

3. Биохимические и клинические характеристики крови трансгенных овец находятся в пределах физиологических норм интактных животных.

4. При воспроизведении, когда трансгенный один из родителей, независимо овцематка или баран, трансгенное потомства составляет 27,3 -34,8%. Это соотношение трансгенных и нетрансгенных потомков сохраняется- в трёх поколениях.

5. Рекомбинантный ген химозина, локализованный в секреторных клетках молочной железы, способен экспрессировать с выходом продукта экспрессии, прохимозина, непосредственно в молоко.

6. Трансгенные овцы имеют в сравнении с интактными многократно пониженный суточный удой и укороченный период лактации, вследствие створаживания молока непосредственно в альвеолах молочной железы и подавления таким образом лактогенной функции.

7. Лактацию трансгенных овец, находящихся в запуске, можно вызывать инъекциями гормональных препаратов, с одновременным проведением массажа сосков и вымени.

8. Установлено, что молочную продуктивность трансгенных овец можно многократно повысить путем увеличения кратности доения, а также применением предварительного подсоса.

9. Гормональной обработкой возможна индукция лактации у холостых, никогда не ягнившихся животных (ярок) для раннего выявления особей — продуцентов химозина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Рекомендуем биотехнологическим лабораториям для оценки биологических и продуктивных особенностей овец, трансгенных по гену химозина, использовать метод разведения гемизиштных трансгенных овец с использованием ПЦР-диагностики; метод ранней диагностики экспрессии гена химозина у ярок.

Для преодоления депрессии лактогенной функции у трансгенных по гену хемо-зина овец предлагаем метод гормональной стимуляции, для определения присутствия химозина в молоке - экспресс-методику, и метод выделения химозина из молока в виде готового продукта.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Калмыков, Сергей Петрович, 2008 год

1. Абулашвили И.И. Влияние дойки на продуктивные качества тушинских маток и их приплода // Дис. канд. с.-х. наук. Тбилиси, 1978. - С. 144.

2. Арзуманян Е.А. // Животноводство. Под. ред. Москва, 1991. - С. 54.

3. Арипов У.Х., Виноградова В.М. и др. // Овцеводство и козоводство. Справочник. Москва, 1990. - С.65-69.

4. Арсеньев Д.Д. Селекция на многоплодность в романовском овцеводстве // Овцеводство, 1972. № 9. С. 26-29.

5. Арсеньев Д.Д, Арсеньева Т.В. // Селекция романовских овец. Москва, 1985.-С. 172.

6. Асатиани B.C. // Биохимическая фотометрия. Москва, 1957. - С. 569.

7. Атаев Д.А., Лавриненко Г.С. Характеристика молочной продуктивности овцематок грозненской тонкорунной породы // Сб. научно-исследовательских работ аспирантов ВНИИОК. Ставрополь, 1968. - Вып. 1. - С. 84-94.

8. Атаев ДА. Влияние молочности овец на шерстную продуктивность // Сб. науч. работ аспирантов ВНИИ овцеводства и козоводства. Ставрополь, 1968.-Вып. 1.-С. 62-69.

9. Атаев Д.А., Абетуллаев М.И. Шерсть и молоко // Сельские зори. 1985. -№5.-С. 51.

10. Брем Г., Зиновьева Н., Эрнст Л. «Генные фермы» новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными // С.-х. биология. - 1993. - С. 27.

11. Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. // Экспериментальная генетика в животноводстве. Москва, 1996.

12. Бурдуковская Т.К., Гребенюк А.З. и др. // Производство овцеводческой продукции. Справочник. Москва, 1989. - С. 45-52.

13. Вениаминов A.A., Буйлов C.B., Хамицаев P.C., Винников Н.И., Мгли-нец А. А. Изучение мясной продуктивности овец // Методические рекомендации ВИЖ. Москва, 1978. - С. 4-6.

14. Вениаминов A.A. // Породы овец мира. Москва, 1984. - С. 116, 206.

15. Волков A.C. Совершенствование методов искусственного осеменения овец // Пути повышения продуктивных и породных качеств овец. Москва, 1985. - С. 90-95.

16. Гизбрехт Я., Терлецкий В. Продуктивные качества у овец различных поведенческих типов и некоторые вопросы интенсификации овцеводства Сибири // Сб. науч. трудов СИБНИВИ. Омск, 1979. - С. 77-83.

17. Гольцблат А.И., Шацкий А.Д. // Повышение продуктивности овец. -Москва, 1982.-С. 221.

18. Гольцблат А.И., Ерохин А.И., Ульянов А.Н. // Селекционно-генетические основы повышения продуктивности овец. Ленинград, 1988. - С. 280.

19. Гольдман И.Л., Эрнст Л.К., Брем Г. и др. Получение трансгенных овец-продуцентов молока, содержащего физиологически активные белки, в условиях племенной фермы // С.-х. биотехнология. 1994. - С. 53.

20. Гольдман И.Л., Захарова Е.С., Кадулин С.Г., Сураева Н.М. Химозин — новый биотехнологический продукт // Биотехнология. 1996. - № 12. - С. 3-16.

21. Грачева A.A., Сафин Ф.Б. Молочная продуктивность маток //Овцеводство. 1982. - № 2. - С. 28-29:

22. Гребень Л.К. Молочность цигайских овец в сравнении с метисными,и другими чистопородными овцами // Бюл. зоотехн. опыт, и плем. станции в госзаповеднике «Чапли» (с. Аскания-Нова). 1931. - № 6. - С. 253-273.

23. Груев В. Корреляции между молочностью, шерстностью и живым весом овец // Междунар. с.-х. журн. 1959. - № 2. - С. 108-118.

24. Деревщикова И.Д. Влияние некоторых факторов на многоплодность романовских овец // Автореф. дис. канд. с.-х. наук, 06.02.04. Кострома, 1974.-С. 31-34.

25. Джанчаров ДМ1 Хозяйственная и племенная ценность овец романовской породы с разной плодовитостью // Дис. канд. с.-х. наук.—Москва, 1990. -С. 68-80.

26. Димов Н. Дойка овец в Болгарии // Овцеводство. 1958. - № 7. - С. 43-44.

27. Ерохин А.И. // Совершенствование мясо-шерстных пород овец. Москва, 1981.-С. 135.

28. Ерохин А.И., Карасев Е.А. Продуктивные качества овец романовской породы, финский ландрас и их помесей // Резервы повышения продуктивности романовского овцеводства. 1988. - С. 80-83.

29. Ерохин А.И., Ерохин С.А. Современное состояние овцеводства в мире // Овцы, козы, шерстяное дело. 1999. - № 3. - С. 1-4.

30. Желтобрюх H.A., Ивахненко В.К., Айбазов М.М. Оплодотворяющая? способность спермы баранов, замороженной в раффинозной и лактозно-гуммиарабиковой средах // Методы и приёмы эффективной селекции овец и коз. 1987. - С. 79-84.

31. Зайцева JI.B. Химический состав молока овец дагестанской горной породы // Тр. молодых ученых и аснир. Дагест. НИИСХ. Махачкала, 1969. -Т. 3. - С. 72-74.

32. Заморышев A.B. // За высокую продуктивность романовских овец. -Вологда, 1952. С.43.

33. Зарытовский B.C., Емельянов Г.И. Взаимодействие типов поведения с молочностью маток и резистентностью ягнят романовской породы в условиях промышленной технологии // Научные исследования в романовском овцеводстве. 1982. - С. 39 ■

34. Зарытовский B.C., Крисюк В.И., Вениаминов A.A. и др. // Справочник по овцеводству. Москва, 1982. - С. 239:

35. Зарытовский B.C., Лиев М.И., Емельянов Г.И. // Этология овещ Москва, 1990. - С. 35-40.

36. Зиновьева H.A. Трансгенные кролики как продуценты химозина // Биотехнология. -1998. №4. - С. 7-31.

37. Зиновьева H.A., Попов A.H., Эрнст Л.К., Марзанов Н.С., Бочкарёв В.В., Стрекозов Н.И., Брем Г. Методические рекомендации по использовнию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве // Дубровицы, 1998. - С. 46.

38. Илялетдинов E.H. Удой и состав молока кроссбредных маток от разных вариантов скрещивания // Вестн. с.-х. наук. Алма-Ата, 1968. - № 2. -С 43-48.

39. Инструкция по искусственному осеменению овец и коз // Москва, 1986.

40. Каюкова Н.В. Овечье молоко и продукты его переработки // Докл. ТСХА. 1995.-С. 15.

41. Карасев Е.А. Продуктивность и биологические особенности овец романовской породы, финский ландрас и их помесей от реципрокного скрещивания // Дис. канд. с.-х. наук. Москва, 1984. - С. 121.

42. Калашников А.П., Клеймёнов Н.И., Баканов В.Н., Венедиктов А.М., Викторов П.И., Герасимов Е.А., Махаев Е.А., Хаданович И.В. и др. // Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Москва, 1985. - С. 352.

43. Кесаев Х.Е. Зависимость молочности маток от уровня кормления // Овцеводство.^ 1982. - № 3. - С. 25-26.

44. Князев А.И. Влияние уровня кормления на молочную продуктивность тонкорунных овец различных конституциональных типов // Докл. ТСХА. -Вып. 5.- 1960.-С. 21.

45. Ковач В. Вопросы современного ухода за овцами // Сельское хозяйство за рубежом. 1956. - № 5. - С. 41-43.

46. Ковнерев И.П. О многоплодии маток и интенсивности развития молодняка романовских овец // Овцеводство. 1969. - № 5. - С. 25-27.

47. Ковнерев И.П. Крупноплодность в зависимости от численности и пола приплода// Овцеводство. 1973. - № 11. - С. 18-19.

48. Ковнерев И.П. Селекционно-племенная работа в романовском овцеводстве // Овцеводство. 1984. - № 12. - С. 24-26.

49. Кольмер М.И., Эрд Т. А., Улманен И. Клонирование и экспрессия химозина в клетках млекопитающих // Биохимия. 1989. - Том 308. - № 1. - С. 234-237.

50. Комов И. Остфризская молочная овца//Животновод. -1994. № 7-8. - С. 1415.

51. Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и др. // Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. Москва, 1985. - С. 287.

52. Коцарев В.Е., Винников Н.И., Белинский В.Е. // Производство и переработка овечьего молока. Москва, 1988. - С. 10-11.

53. Кравченко Н.А. // Племенной подбор. Москва, 1957. - С. 399 .

54. Кулешов П.Н. // Овцеводство. Москва, 1925. - С. 15.

55. Лебедев П.Т., Усович А.Т. Методы исследования кормов, органов и тканей животных // Москва, 1976.

56. Лискун Е.Ф.7/ Общее животноводство. Москва; 1935. - С. 107-109.

57. Лущихин М.Н. Молочность маток киргизской тонкорунной породы // Кормление и разведение с.-х. животных. Фрунзе, 1968. - G. 27-31.

58. Магомедов И.М. Развитие живой массы тройневых романовских ягнят в зависимости от уровня молочности и конституционально-продуктивного типа матерей // Научные исследования в романовском овцеводстве. 1976. - С. 49-53.

59. Маринов П.И. Грудова Ч.Н. Проучване на влиянието на различии про-тектори върху чувствителността на овчине сперматозоиди при криокон-сервация // Biol. Immunol, reprod. София, 1984. - Т. 9. - С. 26-31.

60. Мезина М.Н., Ермолаев В.И., Демидович С.С.,Черных В.Я. Получение химозина из молока трансгенных овец // Зоотехния. 1999. - № 10. - С. 25-26.

61. Миллз О. Молочное овцеводство //Москва, 1983.

62. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных // Москва, 1962.

63. Милованов В.К. Приоритет Советского Союза в создании метода искусственного осеменения и современные проблемы долгосрочного хранения семени баранов. Проблемы долгосрочного хранения семени баранов // Труды ВИЖа. Вып.51. - Дубровицы, 1989. - С. 5-54.

64. Модянов А.В. Потребность в кормах у суягных и подсосных овец и её физиологическое обоснование // Вестн. с. х. науки. Животноводство. — 1940.-№2.-С. 21-42.

65. Николаев А.И., Ерохин А.И. Овцеводство//Москва, 1987. С. 383.

66. Никулина К.Н., Никулин Н.М. Молочная продуктивность цигайских овец приазовского типа// Овцеводство. 1966. - № 2. - С. 21-24.

67. Охотина Д.Н. Молочная продуктивность асканийских тонкорунных овец // Автореф. дис. канд. с.-х. наук. Кировобад, 1960. - С. 19.

68. Платов Е.М., Кузнецов М. А., Чернова Н.Е. Технология длительного хранения спермы // Овцеводство. 1985. - № 5. - С. 22-24.

69. Платов Е.М., Балбасов Е.Ф. Научно-технический прогресс в искусственном осеменении овец // Зоотехния. 1988. № 4. - С. 51-54.

70. Платов Е.М. Криоконсервация спермы баранов // В кн. Курбатов А. Д., Платов Е.М., Корбан Н.В., Мороз Л.Г., Наук В.А. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных. Ленинград, 1988. - С. 161-195.

71. Погосян Г.А. Молочная продуктивность армянской полугрубошерстной породы овец (Мартунинский внутрипородный тип) и пути её повышения // Дисс. канд. с.-х. наук МСХА. Москва, 1988. - С. 112.

72. Покатилова Г.А. Селекция в мясо-шерстном овцеводстве//Обзорная информация. 1983. - С. 14-34.

73. Рощупкин Г.А. Тушинская овца // Автореферат, дисс. д-ра с.-х. наук. -Тбилиси, 1958.-С. 36.

74. Рухкян А.А. // Овцеводство-Армянской ССР и пути его качественного улучшения. Ереван, 1948. - С. 489.

75. Санников М.И., Снеговой В.В., Шиянов И.Е. Молочность маток важный селекционный признак в тонкорунном овцеводстве // Овцеводство. -1965.-№4.-С. 25-27.

76. Северин B.C. Молочность цигайских маток и развитие ягнят при разном многоплодии маток // Овцеводство. 1974. - С. 30-31.

77. Селянин Г.И. Подбор романовских овец по типам конституции// Овцеводство. 1983. - № ц. - С. 31-34.

78. Сельское хозяйство России // Москва. - ФГНУ «Росинформагротех», 2006.

79. Смирнов Л.Ф. // Романовская овца. Ярославль, 1950. - С. 153.

80. Смирнов Л.Ф. // Романовская овца. Москва, 1953. - С. 231.

81. Смирнова В Я. Молочная продуктивность овец романовской породы // Сб. науч. тр. Ярославль, 1958. - Вып. 3. - С. 276—288.

82. Соколов В.В., Куц Г.А. Мировое овцеводство. Справочник // Ижевск, 1994.-С. 335.

83. Теребиленко Н.Б. и др. // Интенсификация овцеводства. Москва, 1983. -С. 33-35.

84. Терновенко Н.М. Молочность маток кавказской породы//Овцеводство. -1958.-№4.-С. 24-25.

85. Тощев В.К. Некоторые вопросы интенсификации романовского овцеводства// Овцеводство. 1983. - №3. - С. 9.

86. Триччер Т.Т. Возможности улучшения продуктивности подсосных маток с тремя и более ягнятами при пастбищном содержании // Генетика воспроизведения у овец. Москва, 1987.

87. Ульянов А.Н., Рыжков A.B. // Рекомендации по технологии доения овец в Краснодарском крае. Краснодар, 1989. - С. 7-13.

88. Хоружий Ю.Ф. Воспитание цигайских ягнят при сдваивании под матерями и использование освободившихся маток для дойки // Бюл. сектора овцеводства института гибридизации и акклиматизации животных в Аска-нии-Нова. 1935. - № 8. - С. 104-116.

89. Хэммонд Д. // Рост и развитие мясности у овец. Москва, 1937. - С440.

90. Чепурков А., Тезиев Т. Сыропригодность молока коров в Центральном Предкавказье // Молочное и мясное скотоводство. 2006. - № 2. - С. 31-32.

91. Черекаев A.B., Герман A.A. Молочность чистопородных и помесных алтайских маток // Овцеводство. 1988. - № 2. - С. 24-26.

92. Шихов И.Я. Структурные изменения в молочной железе трансгенных по химозину овец // Международная конференция: ДНК-технологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных. Дубровицы, 2001. - С. 98-100.

93. Эрнст Л.К., Соколовская И.И., Шайдуллин И.Н. Дальние перевозки семени и отдалённая гибридизация // Проблемы долгосрочного хранения семени баранов. Труды ВИЖа. Дубровицы, 1989. - Вып. 51. - С. 86-93.

94. ЭрнстЛ.К., Гольдман И.Л., Кадулин С.Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные сельскохозяйственные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца// Биотехнология. 1993.- №5. - С. 2-14.

95. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Зиновьева Н.А., Башкеев Е.Д., Гоголевский П.А., Кадулин С.Г., Брэм Г. Получение овец, трансгенных по генной конструкции альфа aSl-казеин/химозин // Доклады АН/РАН. — 1995. Том 345. - № 4. - С. 555-558.

96. Эрнст Л.К., Зиновьева Н.А., Брэм Г. // Современное состояние и перспективы использования трансгенных технологий в животноводстве. Москва, 2002. -С. 341.

97. Югова Л.В., Дорохов В.В. Производство и применение продуктов микробиологических производств. Микробные заменители сычужного фермента»// Обзорная информация. Москва, 1988. - С. 20.

98. Ядричев В.И. Селекция романовских овец на промышленных комплексах// Научные исследования в романовском овцеводстве. 1975. - С. 31-36.

99. Ясаков А.П. и др. // Производство продукции овцеводства на промышленной основе. Москва, 1978. - С. 63-71.

100. Alifakiotis Т. A., Katanos I., Hatjiminaoglou I., Zervas N., and Zerfiridis G. Induced Lactation in Dairy Ewes by Various Brief Hormone Treatments J Dairy Sci // 1980. T. 63. - P. 750-755.

101. Alvarez P.J., GuaelaJ.A., Jorita E. Influencia del piano de ingestion«dupanta la lactación sobre la producion de leche en ovegas de opdeni deraza «Churra» // 1984. P. 47-68.

102. Armstrong D.T., Evans G. Intrauterine insemination enhances fertility of frozen semen in superovulated ewes J. Reprod. Fértil // 1984. Т. 71.-NI.-P. 89-94.

103. Baia, Gh et al. Contributi la choasterea Productiet de Lapte aoilortigaie rugini //Anaiette, 1956. 14. - P. 567-577.

104. Bochenek M., Kareta W. Domaciczna inseminacja owiec obnizona dawka nasienia mrozonego i swiezego // Med.weter. 1993. R.49. - N 4. - S. 172-174.

105. Brem G., Besenfelder U.,ZinovievaN. et al.//Teriogenology. 1995. -V. 43(1). -P. 175.

106. Davies H. Milk yield of Aystralian Merino owes and lami growthunder pastural conditions // Proc. Austral. Soc. Animal Product. 1958. - V. 2. - P. 140.

107. Handen T,J., Thomas C.R. and Forsyth I.A. // J. Dairy sei; 1979. - Vol: 62.- No 1.-P. 53-57.

108. Homayouni Rad A., Ehsani M.R., Mousavi S.M., Valizadeh M. and Emam-Djomeh Z. Improving the quality of low-fat ice cream by hydrolysis of casein micelles with chymosin (II) // Indian journal agricultural science, 2006. vol: 3 6i - No 6. -P.22. ; '

109. Hostiu C et. al. Cercetari asupra productielde lapte la oile Kapakulsiturcana brumaril // Analele, 14. P. 255 -277. - 1956.

110. Hunton J.R., Flecker S.E.; Maxwell W.M.C. Pregnancy rates following intra-uterine insemination with pellet or straw-frozen ram semen // J. agr. Sc. -1987.-T. 109.-Nl.-P. 189-191.

111. Katanos J.; Alifakiotis T. Induction of lactation in ewes of dairy breeds by hormonal treatment // Summaries 1. Vol. 2. - 1986. - P. 186.

112. Menger H., Nenbert L., Wenig H. Der Einflüss der Jareszeit auf die Qualität von Schafboc ksperma und seine In-vitro und In-vivo Konservierfahig-keit // Mh. Veter.-Med., 1986.« Bd.41. - H.2. - S.55-69.

113. Munor C. Problemas j perspektivas del ganadoovino ante lacommidad Economica Europa //Avances en Aliment mejora amin. 1983. - V. 24. - №4. - P. 11-26.

114. Peters A.R., Ball P. J. H. Reproduction in cattle // London, 1986. P. 188.

115. Regelj I., Perco B., Francky A. et al. Recombinant lamb chymosin // J: dairy science. -2001. 84 vol. - No 5. - P. 1020-1026.

116. Salamon S. Fertility of ram spermatozoa following pellet freezing on dry ice at -79°C and -140 °C // Aust. J. Biol. Sei. 1971. - 24 vol. - No 1. - P. 183185.

117. Salamon S. Fertility of ram spermatozoa frozen-stored for three years. // Proc. 7 Intern. Congr Anim.Reprod. AI, Munich. 1972. 2 vol. - P. 1493-1495.

118. Salamon S., Maxwell W.M.C. Storage of ram semen // Anim.Reprod.Sc. — 2000.- Vol. 62.-N1/3.-P. 77-111.

119. Takenaka S., Fukui Y., Ono H. Intrauterine insemination with frozen semen in the ewe using a laparoscope // Japan. J. anim. Reprod. 1985. - T. 31. -Nl.-P. 25-27.