Интеграция и экспрессия экзогенов в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Волкова, Наталья Александровна

• Волкова, Наталья Александровна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Волкова, Наталья Александровна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Методы получения трансгенных животных

1.1.1. Микроинъекция

1.1.2. Эмбриональные стволовые клетки

1.1.3. Ретровирусные векторы

1.1.4. Аденовирусные векторы

1.1.5. Аденоассоциированные векторы

1.1.6. Липосомы

1.1.7. Спермии

1.2. Ретровирусы как векторы для переноса экзогенных генов

1.1.1. Молекулярно-генетическая организация ретровирусов

1.1.2. Конструирование ретровирусных векторов

1.1.3. Основные этапы переноса чужеродных генов с помощью ретровирусных векторов

1.1.4. Использование ретровирусных векторов для направленного переноса генов

1.3. Использование молочной железы животных для синтеза рекомбинантных белков

1.3.1. Получение белков фармакологического назначения

1.3.2. Продукция рекомбинантных белков в молоко трансгенных животных

1.4. Эритропоэтин: биология, функции, методы получения

1.5. Биология, функции, получение и применение гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Интеграция и экспрессия экзогенов в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов»

Актуальность темы.

Одним из направлений в биотехнологии, интенсивно развивающихся в последнее годы, является создание трансгенных животных - продуцентов рекомбинантных белков фармакологического назначения. Учитывая сложность получения лекарственных препаратов белков из органов и биологических жидкостей человека ввиду их низкой концентрации, а также ограниченного объема сырья и возможности переноса опасных инфекций, производство рекомбинантных белков с помощью трансгенных животных имеет в настоящее время огромный коммерческий интерес. При этом наиболее интересным представляется получение биологически активных протеинов с молоком сельскохозяйственных животных. Экспрессия чужеродных белков в молочной железе трансгенных животных может достигать 1 г/л. Причем, выделение данных белков из молока становится возможным уже при их концентрации от25нг/мл (121,47,129,119,49).

Однако, стоимость производства трансгенных животных на сегодняшний день остается высокой. Кроме того, экспрессируемые уровни трансгена у крупных животных не всегда коррелируют с теми, которые были получены у лабораторных животных (123). Отрицательным моментом также является и то, что у крупных животных только 1% эмбрионов, микроинъецированных экзогенной ДНК, развивается в трансгенное животное, причем около 40% из них не экспрессируют трансген (125,69).

В рамках данной проблемы актуальным является разработка методов получения трансгенных животных, характеризующихся высокой эффективностью трансгенеза и низкими материальными затратами. Как перспективный в данном отношении метод рассматривают использование ретровирусных векторов. По сравнению с другими типами векторов ретровирусы обладают уникальной способностью переносить чужеродные гены и стабильно интегрировать их в геном делящихся соматических клеток.

На этом основано использование ретровирусных векторов для получения соматических трансгенных животных, т.е. животных с трансформацией отдельных органов (3). Введение экзогенных генов в органы взрослых животных позволяет значительно сократить сроки с момента введения генных конструкций до получения первых данных об уровне экспрессии чужеродных белков, что особенно важно для животных, характеризующихся большим генерационным интервалом (крупный рогатый скот, козы, свиньи). В связи с этим интересным представляется проведение экспериментов по переносу экзогенной ДНК с помощью ретровирусных векторов в клетки молочной железы сельскохозяйственных животных с целью получения продуцентов рекомбинантных белков.

Цель и задачи исследования.

Исходя из вышеизложенного, целью диссертационной работы явилось изучение интеграции и экспрессии экгогеной ДНК в молочной железе соматических трансгенных животных, полученных с использованием ретровирусных векторов.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Оценить используемые линии клеток-упаковщиц на наличие рекомбинантной вставки методом ПЦР;

2. Оценить эффективность использования ретровирусных векторов, содержащих гены гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и эритропоэтина человека, для осуществления переноса экзогенной ДНК в секреторные клетки вымени после введения клеток-упаковщиц в молочную железу крупного рогатого скота и свиней;

3. Изучить динамику экспрессии рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и эритропоэтина человека в молоке коров и свиноматок в течение лактации;

4. Выявить факторы, влияющие на уровень экспрессии рекомбинантных белков в молоко;

5. Провести анализ распространения ретровирусных векторов в других органах и тканях опытных животных.

Научная новизна.

В ходе выполнения диссертационной работы впервые подробно была изучена эффективность использования ретровирусных векторов, содержащих гены гранулоцитарного колониестимулирующего фактора и эритропоэтина человека, для осуществления локальной трансформации отдельных органов, в частности молочной железы коров и свиней. Была исследована динамика экспрессии рекомбинантного эритропоэтина и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека в молоке опытных животных в течение лактации.

Выявлено влияние лактации, времени введения генных конструкций в молочную железу, возраста и вида животных на уровень экспрессии рекомбинантного белка в молоко.

Практическая значимость работы.

- Показана возможность использования ретровирусных векторов для получения животных - продуцентов рекомбинантных белков.

- Изучены факторы, влияющие на уровень экспрессии рекомбинантного белка в молоко.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Возможность доставки генных конструкций эритропоэтина и гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в секреторные клетки вымени на основе использования ретровирусных векторных систем, вводимых в молочную железу.

- Синтез рекомбинантного белка в молоко в течение лактации носит периодический характер. 8

- Распространение ретровирусных векторов наблюдается как в месте инъекции, так и в других органах и тканях.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на международной конференции «ДНК-технологии в клеточной инженерии и маркировании признаков сельскохозяйственных животных», ВИЖ, п.Дубровицы, 2001; конференции аспирантов и молодых ученых, ВИЖ, п.Дубровицы, 2001; международной научно-практической конференции «Повышение конкурентноспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения», Быково, 2002, научных отчетах ВИЖа за 2000-2002.

Публикация результатов исследований.

По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Структура и объём работы.

Диссертация изложена на 100 страницах, содержит 11 таблиц, 17 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений. Список литературы включает 130 источников.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Волкова, Наталья Александровна

5. ВЫВОДЫ

1. Показана эффективность использования ретровирусных векторов для осуществления локального трансгенеза отдельных органов сельскохозяйственных животных, в частности молочной железы коров и свиней. Наличие генных конструкций эритропоэтина и Г-КСФ после введения ретровирусных векторов в молочную железу выявлено у всех исследованных животных.

2. Установлена экспрессия рекомбинантных белков в молочной железе опытных животных. Содержание эритропоэтина человека в молоке крупного рогатого скота достигало 400 нг/мл, свиней - 600 нг/мл. Рекомбинантный Г-КСФ экспрессировался у крупного рогатого скота в количестве до 200 нг/мл, у свиней - до 60 нг/мл.

3. Изучение динамики экспрессии рекомбинантных белков в течение лактации показало, что синтез рекомбинантного продукта в молоко носил периодический характер: периоды увеличения концентрации рекомбинантного белка сменялись периодами ее спада. Период активного синтеза белка продолжался 12-30 дней, после чего экспрессия чужеродного белка в молочной железе опытных животных падала. Максимальная концентрация эритропоэтина в молоке коров наблюдалась на 85-108, 120130, 150-160 и 196-210 дни лактации и составила 400 нг/мл. Максимальный уровень рекомбинантного Г-КСФ отмечался в первую неделю и на 104-112,127 дни лактации - 100-200 нг/мл.

У свиноматок содержание рекомбинантного эритропоэтина в молоке достигало максимального значения на 21 и 35 дни лактации - 500-600 нг/мл.

4. Установлено влияние дня лактации, времени введения ретровирусных векторов в молочную железу, возраста и вида животных на уровень экспрессии рекомбинантного белка в молоко. Максимальное число пиков

87 активного синтеза белка наблюдалось в первые 100 дней лактации. В последующие дни частота данных периодов снижалась. Более высокий уровень экспрессии рекомбинантного продукта в молоко отмечался при введении ретровирусных векторов в молочную железу опытных животных во второй половине беременности: у крупного рогатого скота - на 4-6 месяцах стельности, у свиней - на 3 месяце супоростности. При этом введение ретровирусных векторов в молочную железу нетелей оказалось более эффективным, чем у коров.

5. Исследование внутренних органов животных выявило, что распространение генных конструкций не носит локального характера. Так, после введения ретровирусных векторов в молочную железу коров и свиней ПЦР показал наличие рекомбинантной ДНК в слюнных железах, надпочечниках и поджелудочной железе.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Волкова, Наталья Александровна, 2002 год

1. Атабеков И.Г. Реализация генетической информации. М.: Наука, 1972.

2. Богдатенко Е.В., Свиридов Ю.В., Московцев A.A. и др. Невирусный перенос генов in vivo в генной терапии //Вопросы медицинской химии. -2000. -№3.

3. Брем Г., Зиновьева Н., Эрнст JI.K. Генные фермы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными //Сельскохозяйственная биология.- 1993.- № 6.- С. 3-27.

4. Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. Экспериментальная генетика в животноводстве. М.: РАСХН, 1995. - 326 с.

5. Генная терапия//Еженедельник Аптека. №6(227).

6. Георгиевский В.И. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Агромромиздат, 1990. - 511с.

7. Гинтер Е.К. Генотерапия наследственных болезней //Вопросы медицинской химии.- 2000. №3.

8. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПб.: Специальная литература, 1997. - 287 с.

9. Грачев И.И., Попов С.М., Скопичев В.Г. Цитофизиология секреции молока. JL: Наука, 1976. - 242 с.

10. Жданов Р.И., Семенова Р.И., Арчаков А.И. Реальность и надежды генной терапии //Вопросы медицинской химии 2000. - №3.

11. Зиновьева Н. А., Попов А. Н., Эрнст JI. К. и др. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве. Дубровицы,1998.- 47 с.

12. Зиновьева H.A., Эрнст Л.К., Брем Г. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно-генетические аспекты трансгенеза в животноводстве. ВИЖ, 2001.-128 с.

13. Иванова Л.Б. Создание векторов для тканеспецифической экспрессии генов эритропоэтина и гранулоцит колониестимулирующего фактора человека в молочной железе животных //Автореф. дисс.канд. биол. наук. Боровск, 2002. - 23 с.

14. На старт выходят генные инженеры // Наука и жизнь. №8. - 2000. -с.71-72.

15. Новое в клонировании ДНК. Методы. / Под ред. Д.Гловера. М.: Мир, 1989.-368 с.

16. Прасолов В.С. Ретровирусные векторы в генной терапии./УВопросы медицинской химии. 2000. - №3

17. Прасолов В.С. Ретровирусные векторы—эффективная система переноса и экспрессии чужеродных генов в клетках млекопитающих // Молокулярная биология. 1989. - Т.23. - Вып.2. - С.8-12.

18. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. М.: Мир, 1998. - Т.2.- 362 с.

19. Спиер Р.Е., Адаме Г.Д., Дж.Б.Гриффитс и др. Биотехнология клеток животных. М.: Агромпромиздат, 1989. - 520 с.

20. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных. ВНИТИБП. М., 1998.-С.363-460.

21. Титова В. А. Молекулярно-генетические аспекты использования ретровирусных векторов для трасгенеза в животноводстве // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Дубровицы. - 2001 - 22 с.

22. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1997. - 4.2. - 400с.

23. Эрнст Л.К., Прокофьев М.И. Биотехнология сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1995. - 192 с.

24. Abad J.L. et al. Single-step, multiple retroviral transduction of human T cells 11 J: Gene Med. V.4(l). - 2002. - P.27-37.

25. Anderson W. Human gene therapy: Scientific and ethical consideration // Recombinant DNA Tech. Bull. -V.8. 1985.-P.55-63.

26. Anderson W.F. Human gene therapy //Nature. 1998. - V.8. - P.25-30.

27. Archibald A.L. Molekular Biological Approaches and their Possible Aplications, in J.W. Owen and R.F.E. Axford (eds), Breeding for Disease Resistance in Farm Animals, C.A.B. International, UK. -1991. P.100-122.

28. Ayuk F.A., Zander A.R., Fehse B. T lymphocytes as targets of gene transfer with Moloney-type retroviral vectors //Curr Gene Ther. V.l(4). - 2001. -P.325-337.

29. Bachiller D. et al. Liposome-mediated DNA uptake by sperm cells.// Mol. Reprod. and Dev. -N30. 1991. - P. 194-200.

30. Bayna E.M., Rosen J.M. Tissue-specific high level expression of the rat whey acidic protein gene in transgenic mice //Nucleis Acids Res. N 18. - 1990. -P.2977-2985.

31. Bern N., Smith D., Goldwasser E. Evidance suggesting negative regulation of the erythropoietin gene by robonucleoprotein // J.Biol.Chem. 1990. - V.265. -P.14100-14104.

32. Blake J., Salinas P.S., Hughes S.M. Beta geo, a combined selection and reporter gene for retroviral and transgenic studies //Biotechnigues. V.23(4). -1997. -P.690-695.

33. Brem G. Transgenic animals In Biotechnology // N.-Y.:VCH Press.-1993.-P.745- 832.

34. Brinster R.L. et al. No simple solution for making transgenic mice //Cell. -Y.59. 1989. -P.239-241.

35. Brinster R.L., Avarbock M.R. Germline transmission of donor haplotype following spermatogonial transplantation // Proc. Natl. Acad. Sei., USA. -V.91.-1994.-P.l 1303-11307.

36. Brinster R.L., Zimmerman J.W. Spermatogenesis followin male gern- cell transplantation //Proc. Natl. Acad. Sei., USA. V.91. - 1994. - P.l 129811302.

37. Carver A.S. etal. Transgenic liverstock as bioreactors: stable expression of human alfa-l-antitripsin by a flock of sheep //Biotechnology. V.l 1. - 1993. — P.1263-1270.

38. Castro F.O. et al. Introduction of foreign DNA into the spermatozoa of farm animals //Theriogenology. -N 34. 1990. - P. 1099-1110.

39. Castro F.O. et al. Secretion of human erythropoetin by mammory gland expiants from lactating transgenic rabbit //Theriogenology. V.34. - 1999.

40. Chang L.G., Gay E.E. The molekular genetics of lentiviral vectors-current and future perspectives // Curr Gene Ther. V. 1(3). - 2001. - P.237-251.

41. Clark A.J. et al. Expression of human antihemophilic factor IX in the milk of transgenic sheep //Bio/Technology. -N 7. 1989. - P.487-492.

42. Colman A. Production of therapeutic protein in the milk of transgenic livestock//Biochem Soc. Symp. V.63. - P. 141-147.

43. Colony stimulating factors receiving more attention and results./ Appl. Genet. News.- 1987.-N1.-P.1-2.

44. Crystal R.G., MaElvaney N.G., Rosenfeld M. et al. //Nature Genet. 1994. -V.8. -P.42-51.

45. Denman J., Hayes M., Day S. et al. //Biotechnology. 1991. - V.8. - P.839-843.

46. Dillon N. Regulating gene expression in gene therapy // Trends Biotechnol. -1993. -V.ll. P. 167-172.

47. DiTulio P., Ebert K., Pollock J. et al. //In: Trancgenic animals: Generation and Use. 1995.- P.465-467.

48. Douglas J.J. Process development of viral vector //The Second Annual us Biotechnology Symposium Nov. 7-9. 1999.

49. Ebert K.M. et al. Transgenic production of a variant of human tissue-type plasmingen activator in goat milk: generation of transgenic goats and analysis of expression //BioTechnology. N 9. - 1991. - P.835-838.

50. Egrie J.C., Strickland T.W. , Lane J. et al. Characterization and biological effects of recombinant human erythrioietin // Immunibiol. 1986. - V.172. -P.213-224.

51. Emery D.W. et al. Development of a condensed locus control region cassette and testing in retrovirus vectors for a gamma-globin //Blood Cells Mol Dis. -V.24(3). 1998. -P.322-339.

52. Erickson R.P. Minireview: creating animal models of genetic diseases //Amer. J. Hum. Genet. 1988. - V.43. -P.382-386.

53. Evans M.G., Kaufman M. Establishment in culture of plurepotential cells from mouse embryos //Nature. 1982. - V.292. - P. 154-156.

54. Fransolini M. et al. Evidence for nuclear internalization of exogenous DNA into mammalian sperm cells //Mol. Reprod. and Dev. -N 34. 1993. - P.133-139.

55. Fried W. The liver as a sourse of extrarenal erythropoietin production // Blood. 1972. - V.30. - P.671-677.

56. Gail D. Gene therapy likely to target cancer patients on large scale // Genet. Eng. News. -N 2. -1994. P. 14-15.

57. Gao X., Huang L. Cationic liposome-mediate gene therapy //Gene Ther. V.2. - 1995. -P.710-722.

58. Garcia J.F., Ebbe S.N., Hollander L. et al. Radioimmunoassay of erythropoietin: circulating levels in normal and polycythemic human being // J.Lab.Clin.Med. 1982. - V.99. - P.624-635.

59. Gene therapy averts restenosis in pigs //Biotechnol. News 1994 - N 20- c.4-5.

60. Gene therapy for cystic fibrosis // Biotechnol. News. 1994. - N 5. - c.7.

61. Ghazizadeh S., Harington R., Taichmann L. In vivo transduction of mouse epidermis with recombinant retroviral vectors: implications for cutaneous gene therapy // Gene Ther. 1999. -N.7. - P. 1267-1275.

62. Gordon K., Lee E., Vitale J.A., Smith A.E., Westphal H., Hennighausen L. Production of human plasminogen activator in transgenic mouse milk // BioTechnology. 1987. - V.5. - P.l 183-1187.

63. Gottschalk S. Synthetic vehicles for effecient gene transfer and expression in mammalian cells // J. Cell Biochem. Suppl. 21a.- 1995. - P.393.

64. Gruenbaum J. et al. Sperm cells as vector for generation of transgenic chickens //J.Cell Biochem. -1991. Suppl. 15 E. - P. 194.

65. Haskell R.E., Bowen R.A. Efficient production of transgenic cottle by retroviral infection of early embryos // Mol. Reprod. Dev. V.3. - 1995. -P.386-390.

66. Heinz R., Reisner R, Pittermann E. Erythropoietin for chemotherapy patients refusing blood transplantation // Lancet. 1990. - V.335. - P.542-543.

67. Henighausen L. //J. Cell. Biochem. 1992. - V.49. - P.325-332.

68. Hicks G.C. et al. Retrovirus gene traps // Metods Enzumol. V.254. - 1995. -P.263-275.

69. Hodgson C.P. The vector void in gene therapy //Biotechnology. 1995. -V.13.-P.222-225.

70. Jacobson C.O., Goldwasser E., Fried W. et al. Role of kidney in erythropoiesis //Nature . 1957. - V.179. - P.633-634.

71. James D.S. et al. N-Glycocylation of recombinant human interferon-gamma produced in different animal expression system //BioTechnology. V.13. -1995. -P.592-596.

72. Yamada T., Kaneko H., Jizuko H. et al. Elewation of lymphocyte and hematopoetic stem cell numbers mice transgenic for human granulocyte CSF // Lab/ Invest. 1996. - V.74. - №2. - P.384-394.

73. Johnson L.G. Retroviral approaches to gene therepy of cistis fibrosis //Ann. Acad. Sci. V.953. - 2001. - P.43-52.

74. Kasahara N. et al. Tissue-specific targeting of retroviral vectors through ligand-receptor interactions //Science. 1994. - V.266. - P.1373-1376.

75. Kaufmann R.J. Advances toward gene therapy for hemophilia at the millenium// Hum. Gene Ther. V.10. - 1999. - P. 2097-2107.

76. Khoo H.-W., Patil J., Chen E. Sperm-mediated gene transfer: a review// SEAMEO Jasper Fellowship Monograph 1993 Series 1. 1993.

77. Ko J.H. et al. Production of biologically active human granocyte colony stimulating factor in the milk of transgenic goat // Transgenic Reseach. V. 9. - 2000.-P.215-222.

78. Korhonen V.P., Tolvanen M., Hyttinen J.M. et al. Expression of bovine beta-lactoglobulin human erythropoietin fusion protein in the milk of transgenic mice and rabbits // Eur. J. Biochem. 1997. - V.15. - P.482-489.

79. Kotani H. Improved methods of retroviral vector transduction and production for gene therapy //Hum Gene Ther. V.45. - 1994. - P. 19-28.

80. Krystal G., Pancratz H., Farter N. et al. Purification of human erythropoietin to homogeneity by a rapid five-step procedure // Blood. 1986. - V.67. - P.71-80.

81. Labosky P.A., Barlow D.P., Hogan B.L. //Development. 1994. - V.120. -P.3197-3204.

82. Lai F.F., Everett R., Wang F. et al. Structural characterization of human erythropoietin// J.Biol.Chem. 1986. - V.261.- P.3116-3121.

83. Lavitrano M. et al. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice // Cell. -1989. V.57. - P.717-723.

84. Lee-Huang S. Cloning and expression of human erythropoietin cDNA in E.coli. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1984. - V.81. - P.2708-2712.

85. Lin F.-K. , Suggs S. , Lin C.-H. et al. Cloning and expression of the human erythropoietin gene //Proc.Natl.Acad.Sci. 1985.- V.82. - P.7580-7584.

86. Lu Y.F., Tian C., Deng J.X. et al. Cloning of human G-CSF genomic gene and its expression transgenic mice mammery gland // Chuan Nsueh Pao. -1999. V.26. - №4. - P.281 -287.

87. Lu J. Viral based gene therapy for prostate cancer //Curr Gene Ther. V. 1(2). -2001. -P.183-200.

88. Lubon H. Transgenic animal bioreactors in biotechnology and production of blood proteins //Biotech. Annu Rev. V.4. - 1998. - P. 1-54.

89. Maeda H. , Hitomi Y. , Hizata R. et al. Erythropoietin and autologous blood donation // Lancet. 1989. - V.334. - P.284-285.

90. Massoud M., Attal J., Thepot D. et al. The deleterious effects of human erythropoietin gene driven by the rabbit whey acidic protein gene promoter in transgenic rabbits // Reprod. Nutr. Dev. 1996. - V.36. - P.555-563.

91. Meade H.L. et al. Bovine aSi-casein gene seguences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk //Biotechnology. V.8. -1990. -P.443-446.

92. Mitani K. Delivering therapeutic genes matchung approach and application// Trends Biotechnol. - 1993. - V. 11. - P. 162-166.

93. Moore M.A. The clinical use of G-CSF // ARI. 1991. -V.9. - P. 159-191.

94. Nagano M. et al. Retrovirus-mediated gene deliveryinto male germ line sterm cells // FEBS Letters. V.475. - 2000. - P.7-10.

95. Nagano M. et al. Transgenic mice produced by retroviral transduction of male germ line stem cell //PNAS. V.98. -2001. -P.13090-13095.

96. Nagata S. et al. Molecular cloning and expression of cDNA for human granulocyte colony stimulating factor // Nature. 1986. - V.319. - P.415-418.

97. Nagata S. Gene structure and function of G-CSF // BioEssays. -1989. -V.10. — P. 113-117.

98. Niemann H. et al. Expression of human cattihg factor VIII cDNA construct in the mammary gland of transgenic sheep //Transgenic animals in Agriculture Conference, Tahol City, CA, USA. 1997. - P.48.

99. Nilson B.H.K. et al. Targeting of retrovirae vectors through protease- substrate interactions //Gene Ther. 1996. - V.3. - P.280-286.

100. Peng K-W. et al. Retroviral gene delivery system activatable by plasmin// Tumor Targeting. 1998. - V.3. - P. 112-120.

101. Peng K-W. Strategies for targeting therapoutic gene delivery //Molec. Medicine today. 1999. - V.5. - P.448-453.

102. Persuy M.A. et al. High expression of the caprine ^-casein gene in transgenic mice //Eur.J.Biochem. V.205. - 1992. - P.887-893.

103. Platzer et al. Biological activities of a human granulocyte colony stimulating factor on normal and leukemic cells // JEM. 1985. -V.162. - P.1788-1801.

104. Powell J.S., Berkner K.L., Lebo R.V. et al. Human erythropoietin gene: high level expression in stably transfected mammalian cells and chromosomal localization//Proc.Natl.Acad.Sci. 1986 . - V.83. - P.6465-6469.

105. Richard M. Comparison of anti-HIV-1 retroviral vectors and their use inan AIDS gene therapy trial in identical twins //J.Cell Biochem. Suppl. 21a. -1995.-P.397.

106. Rubanyi G. The future of human gene therapy //Mol. aspects of Medicine. -2001.-V.22.- P.113-142.

107. Russell S.J. Gene therapy: Science, medicine and the future //Br. Med. J. -1997. -V.315. -P.803-815.

108. Seamon J.A. Inserting a nuclear targeting signal into a replication-competent Moloney murine leukemia virus affects viral export and is not sufficient for cell cycle-independent infection //J. Virol. V.76(16). - 2002. - P.8475-8484.

109. Sheridan W.P/ et al. Granulocyte colony stimulating factor and neutrophil recovery after high-dose chemotherapy and autologous bone marrow transplantation //Lancet. -1989. V.2. - P.891-891.

110. Sherwood J.B. The chemistry and physiology of erythropoietin // Vitam.Horm. 1984. - V.41. - P.161-211.

111. Simons J.P. et al. Alteration of the guality of milk by expression of sheep P-lactoglobulin in transgenic mice //Nature. V.328. - 1987. - P.530-532.

112. Snuder R.O. et al. Correction of hematophilia B in canine and murine models using recombinant adeno-associated viral vectors //Gene Ther. Res. 1999. -V.5. -P.64-70.

113. Sommerfeit M.A. Retrovirus receptors //J. Gene Virol. 1999. - V.80. -P.3049-3064.

114. Steward W.P. Granulocyte and granulocyte-macrophage colonystimulating factors // Lancet. -1993. Y.342. - P. 153-157.

115. Tran N.D. et al. In utero transfer and expression of exsogenous genes in sheep // Exp. Hematol. V.l. - 2000. - P. 17-30.

116. Uckert W., Walther W. Retro virus-mediated gene transfer in cancer therapy// Pharmac. Ther. V.63. - P.323-347.

117. Van Cott K.E., Lubon H., Rüssel C. et al. //Transg. Res. 1997. - V.6. -P.203-212.

118. Velande W.H. et al. Expression of human protein C in trancgenic swine // Harnessing biotechnology for the 21st century: Proc. 9th International Biotechnology Symposium and Exposition Virginia, August 16-21. 1997. -P.34-37.

119. Velander W., Johnson J., Page R. et al. //Proc. Natl. Acad. Sei., USA. 1992. - V.89. - P. 12003-12007.

120. Vilotte J.S. et al. Complete nucleotide seguence of bovine a-lactalbumin gene: comparison with its rat counterpart //Biochimie. V.69. -1987. - P.609-620.

121. Wall R.J. High level synthesis of a heterologous milk protein in the mammary glands of transgenic swine //Proc. Natl. Acad. Sei. V.88. -1991. - P. 16961700.

122. Wall R., Pussel V., Shamay A. et al. //Biotechnology. 1991. - V.8. - P.710-715.

123. Wilmut I., Archibald A., McClenaghan M. et al. //Experientia. — 1991. — V.47. P.905-912.

124. Wivel N.A. Regulatory considerations for gene therapy strategies and products // Trends Biotechnol. 1993. - V. 11. - P. 189-191.

125. Wojchowski D.M., Orkin S.H., Sytkowski A.S. Active human erythropoietin expressed in insect cells using a baculovirus vector: a role for N-linked oligosacharide // BBA. 1987. - vol.910. - P.224-232.100