Поиск и изучение механизма действия производных ксантина, проявляющих гемореологические свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат медицинских наук Науменко, Людмила Владимировна

• Науменко, Людмила Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Науменко, Людмила Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ФАРМАКОТЕРАПИЯ НАРУШЕНИЙ РЕОЛОГИИ КРОВИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Физиологические аспекты микроциркуляции и реологических свойств крови.

1.2. Реологический статус организма при патологии.

1.3. Фармакологическая коррекция нарушений реологических свойств крови.!.

ГЛАВА 2. ПОИСК ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В РЯДУ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ КСАНТИНА.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.2. Влияние производных ксантина на гемореологические свойства крови.

2.3. Зависимость гемореологических свойств изучаемых веществ от их химической структуры.

2.4. Зависимость гемореологических свойств изучаемых веществ от их физико-химических свойств.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Поиск и изучение механизма действия производных ксантина, проявляющих гемореологические свойства»

Актуальность темы. Реологическое поведение крови - один из главных механизмов, определяющих характер внутрисосудистой микроциркуляции (Катюхин Л.Н., 1996; Сторожок С.А., 1997; Петрищев H.H., 2001; Викулов А.Д. и др., 2001). Реологические свойства крови в норме и при патологии определяются функционально структурным состоянием эритроцитарной мембраны и составом плазмы крови, определяющих вязкость крови и плазмы, деформационные и агрегационные свойства клеточных элементов (Викулов А.Д. и др., 2003; Baskurt O.K. et. al., 2003). Расстройства микроциркуляторной гемодинамики и связанные с ними нарушения регионарного кровообращения неблагоприятно отражаются на функциях всех органов и систем, что отягощает течение основного заболевания. (Смирнова Т.А., 1998; Лиховецкая З.М. и др., 1996; Long D.S. et al, 2004). Именно на уровне сосудов микроциркуляторного русла происходит транскапиллярный обмен кислорода, углекислого газа, субстратов и продуктов метаболизма, ионов, биологически активных веществ (Коркушко О.В. и др., 2002; Викулов А.Д. и др. 2003; Baskurt O.K. et al., 2003). Реологические показатели нарушаются при ишемической болезни сердца (Алиев О.Б., 2004; Н.Л. Цапаева и др., 1999), артериальной гипертензии (Медведев И.Н. и др., 2003; Белоусов Ю.Б. и др., 2001; Шабанов В.А. и др., 2001), нарушении мозгового кровообращения (Вознюк И.А. и др., 2003; Мирзоян P.C. и др., 2000), сахарном диабете (Балаболкин М.И. и др., 2005; Колосова М.В. и др., 2001; Максимов Г.В. и др., 2005) аутоиммунных состояниях, воспалительных заболеваниях (Фирсов H.H. и др., 2003; Богомолов В.П. и др., 2001), при разных типах ожирения (Потемкин В. В. и др., 2006) и многих других патологических состояниях. Изменения реологических свойств крови возникают в сравнительно ранние сроки. На сегодняшний день гемореологическая терапия является общепринятой и неотъемлемой частью фармакотерапии многих заболеваний.

Современными препаратами, которые назначаются для коррекции нарушений реологических свойств крови являются: антиагреганты -блокаторы Р2У-рецепторов - тиклопидин, клопидогрел; вазоактивные препараты - пентоксифиллин, дипиридамол, угнетающие активность фосфодиэстеразы (приводя к увеличению внутриклеточной концентрации цАМФ); биофлавоноиды ~ диквертин, танакан, механизмом гемореологического действия которых является защита мембранных липидов от перекисного окисления; антагонисты кальция, оказывающие мембраностабилизирующее (повышение эластичности мембраны эритроцитов) и антигемолитическое действие. Однако, недостаточная эффективность и наличие нежелательных эффектов (диспепсические явления, кишечные кровотечения, кожные геморрагии, лейкопения, тромбоцитопения, агранулоцитоз) ограничивают их применение (Петров В.И., 1996; Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., 2003).

С целью создания гемореологически активных средств, ведутся исследования ингибиторов протеинкиназ (Tsuchiya М. et al., 2002), средств улучшающих микровязкостные свойства мембран (ТА-993 и МВЗ) (Katoh М. et al., 2001). Известно, что флавоноид- и экдистероидсодержащие растения могут быть перспективными источниками для разработки гемореологических средств (Плотников М.Б. и др., 2003). В настоящее время установлено, что коррекция «синдрома повышенной вязкости крови» асковертином, связана со способностью ограничивать патологические изменения в липидном бислое мембран эритроцитов при перекисном окислении (Плотников М.Б., 2005). Противомигренозный препарат, антагонист серотониновых рецепторов (5-НТ2) тропоксин оказывает влияние на агрегационную способность тромбоцитов. Антиагрегантные свойства также обнаружены у тромоседана (дибазол) (Rusu G., Danila G., and Nechifor M., 1993), антигельминтного препарата нокодазола (Yung S.M., 1981), этомерзола (5-этокси-2-этилтиобензимидазола) (Плотников М.Б., 1994). Для производного имидазобензимидазола - препарата эноксифол установлено корректирующее влияние на реологические свойства крови при состояниях, сопровождающихся развитием «синдрома повышенной вязкости крови» (Спасов A.A. и др., 2002). Гемореологическая активность также отмечена у препаратов обладающих антиоксидантной активностью (Шилов В.В. и др., 2000; Кармен Н.Б., 2004; Медведев И.Н., 2000).

Интерес к препаратам, улучшающим реологические свойства крови, постоянно возрастает. Это обусловлено тем, что большинство заболеваний сопровождается нарушениями в системе микроциркуляторного русла. И именно эти нарушения замыкают порочный круг, усугубляющий течение и прогноз основного заболевания.

Однако, число лекарственных препаратов используемых в клинической практике весьма ограничено и на сегодняшний день лидирующие положение в терапии гемореологических нарушений занимает пентоксифиллин (Зудин A.M. и др., 2004), относящийся к производным ксантина. Это определяет большой интерес к поиску корректоров синдрома повышенной вязкости крови среди производных ксантина для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов для коррекции нарушений гемореологии и микроциркуляции, превосходящих пентоксифиллин. Тема является составной частью научного плана НИР Волгоградского Государственного медицинского университета и утверждена на заседании Специализированного Совета (протокол №5 от 19.01.2005).

Целью исследования является поиск и экспериментальное изучение гемореологических свойств новых производных ксантина.

Для достижения указанной цели представляется необходимым решение следующих задач:

1. Поиск веществ, обладающих высоким уровнем гемореологической активности, среди различных производных ксантина на модели экспериментального «синдрома повышенной вязкости» крови in vitro.

2. Анализ зависимости гемореологической активности от структуры и физико-химических свойств изучаемых соединений.

3. Исследование влияния наиболее активных веществ на вязкость образцов крови доноров и больных сахарным диабетом.

4. Изучение влияния наиболее активного соединения и препарата сравнения на гемореологические параметры крови при экспериментальном моделировании «синдрома повышенной вязкость крови» (стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет, панкреатэктомизированные собаки, адъювантный артрит).

5. -Изучение влияния наиболее активного вещества на скорость локального кровотока в головном мозге крыс в норме и при глобальной ишемии мозга.

6. Исследование механизмов гемореологического действия наиболее активных соединений (влияние на агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, деформабельность, заряд мембраны красных клеток крови и ее микровязкость, а так же влияние на процессы адгезии лейкоцитов).

Научная новизна. Впервые проведено исследование гемореологической активности 7,8 замещенных производных ксантина. Наиболее активными, п среди исследованных веществ, оказались N -тиетанил замещенные производные ксантина, имеющие в С8 положении тиогидразидный заместитель. Установлено, что соединения, у которых имеются окси-группы в тиетанильном радикале, проявили наибольшую реологическую активность.

В ходе работы впервые получены данные о влиянии соединения С-83 на вязкость образцов крови доноров и больных с «синдромом повышенной вязкости крови», а так же на гемореологические показатели животных с экспериментальной патологией. Изучено влияние данных веществ на вязкость крови, агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, деформируемость и заряд мембраны эритроцитов, осмотическую и кислотную резистентность красных клеток крови, адгезию лейкоцитов, коагулографические параметры. Продемонстрирована мембранотропная активность соединения С-83, которая проявляется в изменении микровязкости и заряда мембраны эритроцитов, что приводит к улучшению деформабельности и снижению агрегации красных клеток крови.

Научно-практическая ценность. Установленные закономерности между структурой, физико-химическими свойствами и гемореологической активностью соединений являются основой для целенаправленного поиска и оптимизации синтеза новых производных ксантина с заданной структурой и уровнем гемореологической активности.

Выраженные реологические эффекты соединения С-83, превосходящие по активности препарат сравнения - пентоксифиллин, определяют перспективность проведения дальнейших фармакологических и токсикологических исследований данного вещества с целью создания на его основе нового высокоэффективного корректора гемореологических нарушений.

Реализация результатов исследования. Выявленные закономерности между структурой, физико-химическими свойствами и гемореологической активностью производных ксантина учитываются при синтезе новых соединений на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета. Результаты работы используются в лекционных курсах на кафедре фармакологии, кафедре фармакологии и биофармации ФУВ, кафедре фармацевтической химии Волгоградского государственного медицинского университета, а также на кафедре фармакологии Пятигорской Государственной фармацевтической академии.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Из всех изученных производных ксантина наиболее гемореологически активными соединениями являются Ы7-тиетанил замещенные ксантина, имеющие в С8 положении тиогидразидный заместитель.

2. Соединение С-83 обладает выраженной гемореологической активностью, что проявляется в снижении вязкости крови, ингибировании процессов агрегации эритроцитов, повышении осмотической и кислотной резистентности красных клеток крови, увеличении деформабельности и заряда мембраны эритроцитов, а также в снижении адгезии лейкоцитов ■при патологических состояниях, сопровождающихся «синдромом повышенной вязкости». 3. В основе механизма гемореологического действия соединения С-83 лежит влияние на деформабельность и агрегацию форменных элементов крови, которые определяются мембранотропными эффектами соединений (изменение заряда и микровязкости мембраны).

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на: 1 международной Пироговской конференции, Москва, 2006; 60-й итоговой научной конференции молодых ученых, Ростов-на-Дону, 2006; Всероссийской конференции (с международным участием) «Новые информационные технологии в медицине», Волгоград, 2006; IX—X Региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области, 2004 - 2005 гг.; 62,64 итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета, Волгоград 2004, 2006 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 186 страницах машинописного текста, иллюстрирована 11 рисунками, 28 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы (глава I), экспериментальной части (глава П-У1), обсуждения результатов (глава VII), выводов и списка литературы, включающего 93 отечественных и 96 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Науменко, Людмила Владимировна

выводы

1. Ns С8-замещенные производные ксантина, а именно 1чГ7-тиетанил и п

N -оксипропилзамещенные ксантина, обладают гемореологическая активностью. Наиболее выраженное ингибирующее действие на агрегацию эритроцитов оказывали ]\Г7-тиетанил замещенные производные 3-метил ксантина.

2. Высокий уровень гемореологической активности определяется наличием, тиетанильного радикала в N7 и тиогидразидного о заместителя в С положение. Введение в тиетанильный радикал окси-групп повышает выраженность данного вида активности. у

3. Наибольшее ингибирование агрегации эритроцитов среди N -оксипропилзамещенных проявило соединение, имеющее в оксипропильном радикале амино-группу. Наличие у N7о оксипропилзамещенных соединений в С положении аминоэтиламинового заместителя, а так же атома Вг приводит к инверсии эффекта - от, антиагрегантного к проагрегантному.

4. Соединение С-83 првышало» пентоксифиллин по показателю гемобиологической активности (ЕС20) в 4,58 раза. Кроме того, соединение С-83 оказалось наименее токсичным, а по широте терапевтического действия в 4,5 раз превосходило пентоксифиллин.

5. В исследованиях in.vitro на модели сформировавшегося «синдрома повышенной' вязкости крови», а так же в образцах крови больных сахарным диабетом соединение С-83 снижает вязкость крови во всем диапазоне скоростей сдвига, оказывая корректирующее действие как на агрегационный, так и* на деформационный компоненты показателя.

6. На моделях экспериментальной- патологии, сопровождающихся развитием синдрома «повышенной вязкости- крови» (стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет, панкреатэктомизированные собаки, адъювантный артрит), соединение С-83 оказывает выраженное терапевтическое действие на весь спектр показателей гемореологического статуса животных (вязкость крови, агрегацию эритроцитов и тромбоцитов, деформабельность эритроцитов, их резистентность к кислотному гемолизу, показатели свертывания крови) как при однократном, так и при курсовом введение.

7. Соединение С-83 вызывает повышение уровня локального мозгового кровотока у крыс, превосходя по активности пентоксифиллин, как в условиях нормы, так и при патологии, вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий.

8. Соединение С-83 оказывает выраженное ингибирующее действие на агрегацию эритроцитов, влияя как «мостиковый» (фибриноген нативная плазма) так и на «истощающий» (алциан-индуцированная агрегация) механизмы агрегации.

9. Соединение С-83 достоверно улучшает деформабельность эритроцитов, проявляющуюся в дозозависимом снижение вязкости взвеси отмытых эритроцитов и увеличение скорости их фильтрации.

10. В условиях in vitro на модели «синдрома повышенной вязкости крови» соединение С-83 достоверно подавляет повышенный уровень адгезии лейкоцитов.

11. Соединение С-83 дозозависимо снижает микровязкость мембраны и увеличивает поверхностный отрицательный заряд мембраны эритроцитов. По влиянию на микровязкость мембраны в различных концентрациях соединение С-83 несколько уступает, а по влиянию на электроотрицательность превосходит препарат сравнения пентоксифиллин в концентрации 10 и 100 мкМоль/л.

165

6.8. Заключение

В результате изучения действия соединения С-83 и пентоксифиллина на основные реологические параметры (агрегация форменных элементов

Влияние соединений С-83 и пентоксифиллина в концентрации 100 мкМоль/л на параметры АДФ-индуцированной (5 мкМ) агрегации тромбоцитов крови кроликов (М±ш).

Соединение Параметры агрегации тромбоцитов

ИАТ ИДТ МН

Контроль 7,10±2,45 40,46±5,62 18,63±6,01

Соединение С-83 3,28±0,64 44,36+3,58 13,27±4,37

Пентоксифиллин 5,71±0,67 44,81±14,14 23,40±12,07

Обозначения: ИАТ - индекс агрегации тромбоцитов, ИДТ - индекс дезагрегации тромбоцитов, МН - максимальный наклон агрегатограммы крови, деформабельность, микровязкость и заряд мембран эритроцитов, адгезию лейкоцитов) обнаружены следующие закономерности.

При микроскопии выявлено, что соединение С-83 снижает скорость образования эритроцитарных агрегатов в образцах крови, подвергшихся тепловому воздействию. Это может свидетельствовать о влиянии соединения на «мостиковый» механизм агрегации. Однако соединение С-83 достоверно превосходит препарат сравнения лишь на первой минуте, а на 5 и 7 минутах исследования соединение С-83 уступает препарату сравнения (данные не достоверны). Далее было изучено влияние соединений на агрегацию эритроцитов, индуцированную алциановым голубым, который, обладает положительным зарядом и при взаимодействие с отрицательно заряженными эритроцитами вызывает их агрегацию по «истощающему» механизму (ОВгет е1 а1, 1996; Булегенов К.Е. и др, 1993). Так наибольшую активность исследуемые соединения продемонстрировали в концентрации 1x10"4 моль/л. При этом наблюдалась четкая зависимость величины антиагрегантного эффекта от концентрации веществ.

Также было выявлено выраженное влияние соединения С-83 и пентоксифиллина на деформируемость красных клеток крови. Соединение С-83 достоверно увеличивает скорость фильтрации взвеси эритроцитов, что в свою очередь свидетельствует о повышение деформабельности эритроцитов. Подтверждением этого является снижение вязкости взвеси отмытых эритроцитов при всех скоростях сдвига. При этом более выраженное влияние на данный показатель соединение С-83 оказывает при низких скоростях сдвига, что может свидетельствовать о влиянии на вязкость самой мембраны эритроцитов. Следует отметить, что снижение концентрации соединения приводило к снижению их эффективности.

Соединение С-83 и пентоксифиллин уменьшали показатель анизотропии флуоресценции зонда ДСП-6 в суспензии эритроцитов. Подтверждением наличия антиагрегантного эффекта у исследуемых соединений является достоверное влияние на интенсивность флуоресценциции зонда ДСМ, что в свою очередь может свидетельствовать об увеличении электроотрицательности мембран эритроцитов.

В результате проведенного исследования установлено антиагрегантное влияние соединения С-83 и пентоксифиллина в отношении тромбоцитов. Однако полученные данные как для исследуемого соединения так и для препарата сравнения статистически не значимы

Известно, что лейкоциты при патологических состояниях могут нарушать нормальное структурирование кровотока в микрососудах и создавать значительное сопротивление кровотоку, приводящее к его замедлению и даже полной остановке (Мчедлишвили Г.И., 1996). Изучаемые соединения приводили к снижению адгезии лейкоцитов при экспериментальном синдроме повышенной вязкости крови.

Таким образом, по результатом проведенного исследования можно сделать заключение, что соединение С-83 преимущественно оказывает влияние на эритроцитарный компонент реологии крови.

ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Реологическое поведение крови - один из главных механизмов, определяющих характер внутрисосудистой микроциркуляции (Петрищев

H.H., 2001; Сторожок С.А., 1997; Катюхин JI.H. и др., 1996). Реологические свойства крови в норме и при патологии определяются функциональноструктурным состоянием эритроцитарной мембраны и составом плазмы t крови, обуславливающих вязкость крови и плазмы, деформационные и агрегационные свойства клеточных элементов крови (Michiels J.J. et.al., 2004; Мельников A.A. и др., 2004). Изменение гемореологического статуса является одним из патогенетических факторов, определяющих тяжесть заболевания, его течение, а иногда исход (Habón Т.,2001). Имеются многочисленные экспериментальные, а также клинические данные о наличие микроциркуляторных расстройств при сахарном диабете (Балаболкин М.И. и др., 2005; Колосова М.В. и др., 2001; Максимов Г.В. и др., 2005), гипертонической болезни (Медведев И.Н. и др, 2003; Белоусов Ю.Б. и др., 2001; Шабанов В.А. и др., 2001), ишемической болезни сердца (Алиев О.Б., 2004; H.JI. Цапаева и др., 1999), нарушении мозгового кровообращения (Вознюк И.А. и др., 2003; Мирзоян P.C. и др., 2000) аутоиммунных остояниях (Фирсов Н.Н.и др ,2003; Богомолов В.П. и др., 2001) и других патологических состояниях. Изменения реологических свойств крови возникают сравнительно в ранние сроки. На сегодняшний день гемореологическая терапия является общепринятой в мире и неотъемлемой частью фармакотерапии многих заболеваний.

Концепцией фармакотерапии гемореологических нарушений является улучшение реологических свойств эритроцитов, а в первую очередь снижение агрегации эритроцитов. Препаратов селективного механизма действия, изолированно снижающих процесс агрегации эритроцитов на сегодняшний день нет. Современными препаратами, которые назначаются при нарушениях микроциркуляции являются: антиагреганты - блокаторы Р2У-рецепторов тиклопидин, клопидогрел; еазоактивные препараты - пентоксифиллин, дипиридамол, угнетающие активность фосфодиэстеразы (приводят к увеличению внутриклеточной концентрации цАМФ); биофлавоноиды - диквертин, танакан, механизмом гемореологического действия которых является защита мембранных липидов от перекисного окисления; антагонисты кальция, оказывающие мембраностабилизирующее (повышение эластичности мембраны эритроцитов) и антигемолитическое действие. Однако недостаточная эффективность и наличие нежелательных эффектов (диспептические явления, кишечные кровотечения, кожные геморрагии, лейкопения, тромбоцитопения, агранулоцитоз) ограничивают их применение (Петров В.И., 1996; Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., 2003).

С целью создания гемореологически активных средств, ведутся исследования ингибиторов протеинкиназ (Tsuchiya М. et al., 2002), средств улучшающих микровязкостные свойства мембран (ТА-993 и МВЗ) (Katoh М. et al., 2001). Известно, что флавоноид- и экдистероидсодержащие растения могут быть перспективными источниками для разработки гемореологических средств (Плотников М.Б. и др., 2003). В настоящее время установлено, что коррекция «синдрома повышенной вязкости крови» асковертином, связанна со способностью ограничивать патологические изменения в липидном бислое мембран эритроцитов при перекисном окислении (Плотников М.Б., 2005). Противомигренозный препарат, антагонист серотониновых рецепторов (5-НТ2) тропоксин оказывает влияние на агрегационную способность тромбоцитов. Антиагрегантные свойства также обнаружены у тромоседана (Rusu G., Danila G., and Nechifor M., 1993), антигельминтного препарата нокодазола (Yung S.M., 1981), этомерзола (5-этокси-2-этилтиобензимидазола) (Плотников М.Б., 1994). Гемореологическая активность также отмечена у препаратов обладающих антиоксидантной активностью (Шилов В.В. и др., 2000; Кармен Н.Б., 2004; Медведев И.Н., 2000).

Интерес к препаратам, улучшающим реологические свойства крови, постоянно возрастает. Однако, число лекарственных препаратов используемых в клинической практике весьма ограничено и на сегодняшний день лидирующие положение в терапии гемореологических нарушений занимает пентоксифиллин (Зудин A.M. и др., 2004), относящийся к производным ксантина. Это определяет большой интерес к поиску корректоров синдрома повышенной вязкости крови среди производных ксантина для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов для коррекции нарушений гемореологии и микроциркуляции, превосходящих пентоксифиллин. Настоящая работа является продолжением« ранее проведенных исследований по поиску гемореологически активных средств среди гетероциклических соединений.

На первом этапе исследования был произведен скрининг 20 веществ, относящихся к производным ксантина. Для скрининга соединений, обладающих влиянием на гемореологический статус, использовалсяметод воспроизведения нарушений реологических свойств крови in vitro (Плотников М.Б. и др., 1996), заключающийся в инкубировании крови при 42,5 °С в течение 60 минут. Термостатирование проб крови приводит к выраженному сдвигу реологических свойств крови: увеличению агрегационнойл способности эритроцитов и значительному повышению вязкости крови. Длительное воздействие повышенной температуры in vitro ухудшает микрореологические свойства эритроцитов в связи с уменьшением в них уровня» АТФ и дефосфорилированным состоянием спектрина.

В результате проведенного скрининга среди производных ксантина выявлено, что наиболее эффективными являются соединения под лабораторными шифрами С-83 и С-82.

Для данных соединений была изучена зависимость реологического эффекта от доз веществ, экспериментально определен токсикологический показатель LD50, а так же произведен расчет условного терапевтического индекса. Полученные результаты позволили определить для дальнейшего углубленного изучения наиболее эффективное соединение под лабораторным шифром - С-83, т.к. по показателю ЕС2о данное соединение превосходило пентоксифиллин в 4,58 раза. Кроме того, соединение С-83 оказалось наименее токсичным, а по широте терапевтического действия в 4,5 раза превосходило пентоксифиллин.

Гемореологические свойства (ЕС20), показатели острой токсичности (ЬИ^о) и условного терапевтического индекса наиболее активных соединений.

Лабораторный шифр соединения ес2о (ммоль/л) 1л)5о (мМоль/кг) Крысы в/в УТИ= ЬБ5о / ЕС20

С-83 0,043 0,380 8,80

С-82 0,069 0,404 5,83

Пентоксифиллин 0,197 0,379 1,92

Анализ взаимосвязи между структурой и гемореологической активностью производных ксантина позволил определить, что для проявления данного вида биологической активности имеет значение п строение заместителей у N и в 8 положении. Наиболее активными, среди исследованных веществ оказались ТчГ7-тиетанил замещенных производные ксантина С-83 и С-82, имеющие в С8 положении тиогидразидный заместитель. Причем введение окси-групп в тиетанильный радикал у соединения С-83 повышает выраженность данного вида активности.

В результате проведенного анализа зависимости гемореологической активности производных ксантина от их физико-химических характеристик построена классическая регрессионная модель Хэнча. Статистические характеристики полученного регрессионного уравнения показывают, что оно с высокой достоверностью описывает зависимость гемореологической активности производных ксантина от их физикохимических параметров. Это дает возможность утверждать, что с помощью полученной зависимости можно с достаточной точностью, на основании структурной формулы, производить расчетную оценку гемореологической активности новых, в том числе планируемых к синтезу, производных ксантина с целью оптимизации поиска высокоактивных веществ этого ряда:

Анализ полученного регрессионного уравнения свидетельствует о том, что значительную вклад в проявление гемореологической активности соединений вносят электронные и липофильные параметры, в то время как стерические не имеют значения.

Проведенный подсчет уровня гемореологической активности на основании полученного регрессионного уравнения показал, что для соединения С-83 расчетная оценка совпадает с экспериментально полученными величинами.

Таким образом, в результате поиска потенциальных' корректоров синдрома повышенной вязкости крови среди изучаемых соединений самым активным оказалось соединение С-83:

8-ацетогидразид-3-метил-7-( 1,1 диоксотиетанил-3)ксантин

Известно, что вязкость крови - один из наиболее информативных и доступных для исследования гемореологических параметров (Плотников М.Б., 2003; Ройтман Е.В. и др., 2000). Вязкость крови обусловливается, с одной стороны, взаимодействием между компонентами, составляющими суспензионную среду и твердую фазу крови, и с другой - внутренним трением между составными элементами крови в процессе течения (Мищук О

И.И., 1993). Оценка вязкостных свойств чрезвычайно важна при выборе фармакотерапии с использованием препаратов влияющих на реологические свойства крови (Добровольский Н.А. и др., 1988).

Соединение С-83 при исследованиях на крови кроликов с экспериментально смоделированным синдромом «повышенной вязкости крови», в концентрациях 10 мкМ, 50 мкМ и 100 мкМ, приводило к снижению показателя вязкости крови. При этом соединение С-83 превосходило по активности препарат сравнения как по влиянию на вязкость крови, так и по величине показателя ЕСзо- Следует отметить, что данные соединения преимущественно снижают вязкость крови при низких скоростях сдвига. В свою очередь, это может свидетельствовать об их влиянии преимущественно на агрегацию эритроцитов. Полученные данные подтверждаются снижением индекса агрегации эритроцитов под действием изучаемых веществ (соединение С-83 достоверно превосходит препарат сравнения).

При действии изученных веществ на вязкость образцов крови доноров не было выявлено достоверных отличий от контроля.

У больных сахарным диабетом, выявлено увеличение вязкости крови во всем диапазоне изучаемых скоростей сдвига по сравнению с вязкостью крови доноров. Многими исследователями убедительно доказано изменение структурно-функциональных характеристик эритроцитов при сахарном диабете, большинство из которых особенно выражены при течении болезни, осложненном микро- и макро-васкулярными нарушениями (Балаболкин М.И., 2005; Vague Р. et. al, 2004; Galeone., 1998; Дедов И.И. и др., 2000; Балашова Т.С. и др., 1996). Усиление адгезивных и агрегационных свойств эритроцитов, изменение фосфолипидного состава, усиление процессов перекисного окисления липидов мембран, нарушение ионного транспорта через мембрану красных клеток крови усугубляет течение заболевания.

Соединение С-83, при добавление в образцы крови больных сахарным диабетом, нормализует вязкость крови во всем диапазоне скоростей сдвига, не уступая по активности препарату сравнения. Это свидетельствует о влиянии соединений, как на процессы агрегации, так и на пластические свойства эритроцитов. Также следует отметить, что наибольшую активность соединение С-83 и пентоксифиллин демонстрируют в концентрации 100 мкМ. При этом наблюдается четкая зависимость величины эффекта от его концентрации в пробах. Полученные данные также подтверждаются снижением индекса агрегации эритроцитов. Однако, по влиянию на данный показатель, в образцах крови больных сахарным диабетом, соединение С-83 практически не отличается по активности от препарата сравнения.

Таким образом, в результате изучения влияния соединения С-83 in vitro на вязкость крови кроликов с «синдромом повышенной вязкостью крови», доноров и больных сахарным диабетом, показали наличие у него гемореологической активности. Учитывая этот факт, представилось целесообразным изучение влияния соединения С-83 и пентоксифиллина (в качестве препарата сравнения) на реологические свойства крови в условиях целостного организма при синдроме повышенной вязкости крови (стрептозотоцин-индуцированный сахарный диабет, панкреатэктломизированные собаки, адъювантный артрит).

Моделирование тяжелой формы стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета (содержание глюкозы в крови более 17 ммоль/л) на крысах, а так же удаление поджелудочной железы у собак позволило выявить выраженные нарушения реологических свойств крови по отношению к интактным животным. Стрептозотоциновый сахарный диабет проявляется снижением или полным отсутсутствием I фазы секреции инсулина, которая характеризует в основном способность организма утилизировать глюкозу (Баранов В.Г., 1983). Исследования на панкреатэктомизированных собаках проводили на 7 день после операции, когда концентрация глюкозы в крови собак достигала 23-26 ммоль/л, так как по данным Power С. (1964), инсулин исчезает из крови оперированных животных после удаления поджелудочной железы не сразу и определяется в крови еще в течение 3-4 дней после операции. Также, выраженные гемореологические нарушения наблюдаются и при адъювантном артрите. Многими исследователями доказано появление тяжелых нарушений микрореологических свойств крови при аутоиммунных заболеваниях (Фирсов Н.Н.и др., 2003; Носков С.М. и др., 1999).

При исследовании гемореологического статуса у крыс со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом (СД), панкреатэктомизированных собак (ПЭС) и крыс с адъювантным артритом (АА) был выявлен ряд изменений. Так, показатель вязкости крови достоверно возрастал во всем диапазоне скоростей сдвига. Повышение вязкости крови при высоких скоростях на 35% (СД), 39,9% (ПЭС) и на 7,25% (АА), а при низких скоростях на 58,6% (СД), на 71,44% (ПЭС) и на 21,6% (АА) по сравнению с интактными животными (р<0,05), что по-видимому связано со снижением деформируемости эритроцитов и повышением их внутрисосудистой агрегации. Это подтверждается увеличением индекса агрегации как у животных с сахарным диабетом, так и с адъювантным артритом.

Деформируемость эритроцитов - одно из главных свойств, определяющих их нормальное функционирование и продолжительность жизни. Деформируемость обеспечивается структурой мембраны эритроцитов (Апсатаров Э.А. и др., 1994). В данном исследовании установленное снижение деформируемости эритроцитов также было выявлено вискозимитрическим и фильтрационным методами у крыс с сахарным диабетом и адъювантным артритом. Так при скоростях сдвига 300 с"1 наблюдается достоверное увеличение вязкости взвеси эритроцитов по отношению к контрольной группе на 6,31% (СД) и на 35,1% (АА). При низких скоростях сдвига данный показатель составил 22,07% (СД) и 38,3% (АА), что в свою очередь может свидетельствовать о снижении вязкостноэластических свойств мембраны эритроцитов. Также было < выявлено достоверное снижение скорости фильтрации эритроцитов на

68,6% при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете и на 39,6% при адъювантном артрите (р<0.05). Данные изменения могут приводить к уменьшению доставки кислорода в ткани, что и подтверждается достоверным уменьшением индекса доставки кислорода в ткани на 19,02% \ у животных с адъювантным артритом.

В настоящем исследование установлено выраженное изменение механическихг свойств красных клеток крови. Так показатели осмотической И' кислотной резистентности достоверно, по отношению к 1 интактным животным, снижались у крыс с сахарным диабетом на 25,6% и

21,4% соответственно, а у крыс с адъювантным артритом на 17,9% и I

19,0%. Известно, что снижение отрицательного заряда эритроцитов и как

• следствие, электрофоретической подвижности эритроцитов свидетельствует об изменение реологических свойств крови, определяя повышение агрегабельности эритроцитов и тромбообразования (Крылов В.Н. и др., 2005; ЗШкэ .ГЛ7. е1. а1., 1991). Так, у крыс больных сахарным диабетом и адъювантным артритом выявлено достоверное снижение заряда мембран эритроцитов, определяющего силу их взаимного отталкивания, на 45,4% и 28,5%, соответственно (р<0.05).

Хорошо известно, что свойство эритроцитов образовывать агрегаты внутри сосудов связано не столько с изменениями в мембранах самих эритроцитов, сколько с концентрацией в плазме высокомолекулярных белков, в первую' очередь фибриногена, а также некоторых глобулинов (Б^раИ Ь. Е1 а1.,2003; МаЛоп Ъ. е1 а1., 2001; Гущин А.Г." и др. 2000;

МчедлишвилиТ.И., 1991).

В формирование сосудистых осложнений- при сахарном диабете может вносить вклад нарушение функции тромбоцитов. Повышение внутриклеточного кальция в тромбоцитах больных сахарным диабетом является одной из причин повышенной активности тромбоцитов, которая сохраняется и при компенсации углеводного обмена (Кубатиев A.A. и др., 1995).Так, у крыс с сахарным диабетом, при использовании в каческтве индуктора АДФ (5 мкМ), выявлено значительное повышение индекса агрегации тромбоцитов, а так же скорости агрегациштромбоцитов.

Формирование сахарного диабета и адъювантного артрита приводило к изменению показателей свертывания крови. Так, отмечается достоверное повышение содержания фибриногена в плазме на 65,2% (СД) и 41,5% (АА), что дает возможность предположить о возникновение агрегации эритроцитов преимущественно по «мостиковому» типу. Тромбиновое время уменьшалось на 38,4% (СД) и 17,1% (АА) (данные достоверны по отношению к контрольной группе крыс), а величина растворимых фибрин-мономерных комплексов увеличивалась на 89% (СД) и 76% (АА). Все это может свидетельствовать о повышение свертываемости крови у экспериментальных животных.

Таким образом, наличие выраженных микроциркуляторных нарушений при экспериментально моделируемом сахарном диабете и адъювантном артрите подтверждается достоверными изменениями всех изучаемых реологических параметров.

Чтобы изучить влияние соединения С-83 и пентоксифиллина на реологические показатели крови, у животных с сахарным диабетом, было проведено две серии экспериментов. В первой сери изучаемые соединения вводили однократно внутривенно крысам со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом, а во второй серии панкреатэктомизированным собакам. Крысы с адъювантным артритом были разделены на две группы. Первой группе животных соединения вводились однократно внутривенно, а второй группе проводилось курсовое введение (двукратное ежедневное введение в течение 7 суток).

У крыс с развившимся сахарным диабетом по сравнению с интактными животными уровень глюкозы был выше в 4,3 раза. Исследуемые соединения при однократном внутривенном введении приводили к некоторому снижению уровня гипергликимии. Так, соединение С- 83 снижало уровень глюкозы на 24,74%, а пентоксифиллин на 20,44% (данные достоверны по отношению к диабетическому контролю).

Соединение С-83 приводило к снижению вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига. Так, при скорости сдвига 300 с"1 снижало вязкость крови на 2,14%, а препарат сравнения на 1,36%. Следует отметить, что при высокой скорости сдвига, данные не носили достоверный характер. При низких скоростях сдвига соединение С-83 достоверно снижает вязкость крови на 13,1%, превосходя по активности пентоксифиллин на 3%. Полученные данные подтверждаются снижением индекса агрегации эритроцитов под действием соединения С-83 на 9,17%.

Соединение С-83, вводимое внутривенно, улучшает реологические свойства крови у панкреатэктомизированных собак при всех скоростях сдвига. Уже через 30 минут после введения соединения С-83 панкреатэктомизированным собакам наблюдается достоверное снижение вязкости крови при высоких скоростях сдвига на 39,9%, а при низких скоростях сдвига - на 71,44%. Пентоксифиллин снижал вязкость крови в данном диапазоне скоростей сдвига на 36,6% и 67,97%. Наиболее эффективное снижение показателей вязкости крови для соединения С-83 наблюдается к первому часу исследования. При этом пентоксифиллин уступал по активности исследуемому соединению на 13,3% (300 с"1) и 4,25% (3 с"1). Затем наблюдалась стабилизация вязкости крови, которая находилась на стабильном уровне вплоть до 8 часа исследования. На 8 часу исследование у панкреатэктомизированных собак получавших соединение С-83, по сравнению с шестым часом, наблюдается статистически недостоверное повышение вязкости крови при всех скоростях сдвига на 33,3% при скорости 300 с"1, 50% при скорости 30 с"1, 50,5% при скорости 3 с"1. Пентоксифиллин к 8 часу исследования снижал вязкость крови достоверно лишь при, низкой скорости сдвига (Зс"1); на 47,2%.

Также, исследуемые соединения проявили значительное влияние на показатели вязкости крови у крыс с:, адъювантным артритом. Так соединение С-83', вводимое однократно, статистически не достоверно снижало вязкость крови при высоких скоростях, сдвига- на 6,28%), а при низких скоростях сдвига на 8,39% (р<0.05). Соединение С-83, вводимое в течение 7 дней, также снижает вязкость крови во всем диапазоне скоростей ■ сдвига: При; высокой" скорости сдвига исследуемое соединение снижало вязкость крови на 3,5% не уступая по'активности пентоксифиллину (2,39%). При; низких скоростях сдвига соединения* С-83 достоверно снижало вязкость: крови на 17,4%, при этом по активности превосходя препарат сравнения на 4,7%. Кроме того, под действием соединения С-83 и пентоксифиллина отмечается снижение индекса агрегации эритроцитов при^ однократном введение на 9,17%, а при курсовом введение на 14,25%). Следует отметить, что при курсовом введение наблюдается- повышение реологической" активности соединения С-83, а так же его превосходство, по влиянию на показатели вязкости крови, над пентоксифиллипом.

Таким образом; исследуемое соединение С-83 снижало вязкость крови при всех скоростях сдвига у животных с экспериментальной патологией; оказывая: воздействие, как на деформационный так и на агрегационный компоненты показателя: Следует отметить, что наиболее выраженное1 влияние на показатели; вязкости крови соединение С-83 демонстрирует при курсовом введении. .

Улучшение деформируемости эритроцитов установлено также вискозиметрическим и фильтрационным методами. Так, соединение.С-83, у крыс со стрептозотоцингиндуцированном сахарном диабетом;- при скорости сдвига 300' с"1 снижало вязкость взвеси: эритроцитов на 3,6%, . пентоксифиллин при: данной скорости практически не оказывал реологического эффекта (р>0.05). Наибольшую эффективность исследуемое соединение продемонстрировало при низкой скорости сдвига (3 с'1) - 19,7%, превосходя при этом препарат сравнения на 10,2% (р<0.05). Также соединение С-83' достоверно повышает скорость фильтрации взвеси эритроцитов в 2 раза, при этом на 6,4%, превосходя по активности препарат сравнения.

Изучаемое соединение препятствовало развитию структурно функциональных изменению мембран эритроцитов ^ крыс с адъювантным артритом: Следует отметить, что; соединение^ С-83, вводимое в течение недели, оказывает более: выраженное: влияние на данные процессы; Так, при скорости 300 с"', соединение С-83 и пентоксифиллин снижали вязкость взвеси эритроцитов на^ 4% и 2,47% (р>0,05). При: низкой скорости сдвига соединение: С-83 снижало вязкость, взвеси' эритроцитов на 14,8%, не уступая' по активности пентоксифиллину (р<0,05). Скорость фильтрации эритроцитов достоверно; увеличивалась, на 67% (С-83) и 61,3% (пеитокси ф ил л и н) :

При стрептозотоцин-иидуцированиом сахарном диабете соединение С-83 проявило выраженное влияние на механические свойства эритроцитов. Так, исследуемое соединение достоверно? увеличивало, осмотическую резистентность эритроцитов 24,29%, практически не уступая по активности препарату сравнения (24,82%). Устойчивость эритроцитов к действию соляной кислоты увеличивалась на 7,45% под действием соединения С-83, при этом активность пентоксифиллина составила лишь 2,16% (данные статистически, не значимы). Интенсивность флуоресценции; соединение С-83 повышало на 32,3%, уступая по активность пентоксифиллину на 6,2% (р<0,05),

Изучаемое соединение, вводимое внутривенно, в течение 7 дней крысам с адъювантным; артритом, наиболее выражено, по сравнению с однократным введением, увеличивало; электроотрицательность заряда мембран, эритроцитов на 78,6%, превосходя по ; активности пентоксифиллин на 13.9%. Соединение 0-83 приводило к достоверному увеличению осмотической резистентности эритроцитов на 14,95%, превосходя по активности пентоксифиллин на 3,36%. Устойчивость к действию соляной кислоты соединение С-83 и пентоксифиллин повышали на 23,3% и 22,1% соответственно (р<0,05). Однако наиболее выраженное влияние на данные показатели соединение С-83 проявило при однократном введение.

Снижение степени гемолиза, под влиянием соединений, может свидетельствовать об увеличении степени торрои дальности, т.е уменьшения соотношения площади и объема клетки, с образованием кренированных и кап-форм эритроцитов (Катюхин Л.Н, 2000; Сторожок С.А, 1997). Повышение интенсивности флюоресценции зонда ДСМ4", может свидетельствовать о увеличение электроотрицательность заряда мембран эритроцитов, что в свою очередь также определяет устойчивость эритроцитов к неблагоприятным воздействиям (Крылов В.Н. и др, 2005; Креницкий А.П, 2001).

Соединение С-83 оказывало корректирующее влияние на состояние гиперагрегации тромбоцитов при стрептозотоцин-индуцированном сахарном диабете у крыс. Так исследуемое соединение достоверно по отношению к группе крыс с сахарным диабетом ингибировало процесс агрегации на 67,7%, превосходя по активности пентоксифиллин на 52,4%. Скорость агрегации тромбоцитов1 под действием соединения С-83 снижается на 80,4%, при этом препарат сравнения уступал по эффективности на 46,2% (р<0.05). Индекс дезагрегации, характеризующий параметры разрушения образовавшихся агрегатов, для соединения С-84 составил 77,35%, а для пентоксифиллина 21,42% (данные статистически не достоверны).

При экспериментальном сахарном диабете и адъювантном артрите соединение С-83 оказывало выраженное влияние на коагуляционный статус. На активность факторов свертывания внутреннего и внешнего путей активации у крыс с сахарным диабетом соединение С-83 оказывало относительно нормализующее действие. Однако, нормализуя показатели коагулограммы при адъювантном артрите, данное соединение практически не превышает по эффективности препарат сравнения.

Острое нарушение кровотока является результатом критического снижения кровотока в<микроциркуляторной системе головного мозга, что часто связано с поражением артерий крупного и среднего диаметра и всегда сопровождается существенным ухудшением реологических параметров крови (Мирзоян P.C. и др., 2000; Вознюк И.А. и др., 2003). Поэтому следующим этапом исследований было изучение действия соединения С-83 на изменение локального мозгового кровотока при глобальной преходящей ишемии мозга у крыс.

Соединение С-83 и пентоксифиллин усиливают мозговой кровоток в условиях нормы и патологии вызванной билатеральной окклюзией общих сонных артерий. Физиологический раствор, вводимый внутривенно контрольной группе животных, не взывал изменение кровотока в проекции среднемозговой артерии. Исследуемое соединение вызывало повышение скорости мозгового кровотока от исходного уровня в среднем на 84.6% (р<0.05). Пентоксифиллин вызывал менее выраженное увеличение скорости кровотока на 58,7% (данные достоверны по отношению к исходным показателям).

Перевязка общих сонных артерий и снижение артериального давления, во всех экспериментальных группах животных, приводила к уменьшению мозгового кровотока в теменной области. Изменения данного показателя после окклюзии регистрировались в течение часа. Так в контрольной группе животных (физиологический раствор) выявлено наиболее сильное достоверное снижение мозгового кровотока на 61,17%, при этом данные изменения являются необратимыми.

Исследуемое соединение после перевязки общих сонных артерий с 5 минуты достоверно увеличивает скорость мозгового кровотока на 92%. При этом в первые 10 минут от начала ишемии данный параметр увеличивается практически в два раза, а начиная с 15 минуты постепенно снижается до уровня кровотока не ишемизированных животных, после введения соединения С-83, при этом соединение С-83 статистически достоверно^ превосходит препарат сравнения. Следует отметить, что пентоксифиллин постепенно, начиная с 5 минуты исследования увеличивает скорость локального мозгового- кровотока и к 60 минуте восстанавливает, его до исходного уровня не ишемизированных животных.

Таким образом, соединение С-83 проявило выраженное корректирующее влияние на гемореологичексий профиль у животных с экспериментальной патологией. Поэтому представляется целесообразным детальное изучения механизмов гемореологической активности исследуемых соединений.

С целью изучения механизма- действия соединения С-83 и• пентоксифиллина было исследовано их влияние на агрегацию и деформируемость эритроцитов-заряды мембраны и вязкостноэластические свойства красных„ клеток крови; а также влияние * на- процессы- адгезии лейкоцитов и агрегации тромбоцитов.

Известно, что скорость агрегации эритроцитов пропорциональна числу связей с молекулами фибриногена и иммуноглобулинов (Катюхин Л.Н., 2001).

При- микроскопическом- исследование выявлено, что соединение С-831 снижало скорость агрегации эритроцитов в образцах крови кроликов подвергшихся тепловому воздействию:

На следующем этапе изучалось влияние соединений на параметры алциан-индуцированной агрегации эритроцитов прогретых образцов крови кроликов в концентрациях 1х10-4; 1хЮ"5 и 1><106. В исследованиях Булегенова К.Е. и др.(1993) показано, что алциановый голубой-зависимая агрегация эритроцитов происходит с участием электростатических сил и совокупно зависит от фракционного, состава эритроцитов1 различного' возраста, а также изменений содержания холестерина в мембранах эритроцитов. Соединение С-83 проявило- наибольшую1 активность в концентрации 1x10"4 моль/л, достоверно снижая индекс агрегации эритроцитов на 49,82 %. Следует отметить, что снижение скорости агрегации эритроцитов и увеличение индекса дезагрегации эритроцитов под влиянием исследуемых соединений, не носили достоверный характер.

Большое значение в процессе агрегации имеет величина заряда эритроцита (Сторожок С.А. и др., 1999). Влияние соединения С-83 и пентоксифиллина на интенсивность флуоресценции зонда ДСМ* в суспензии эритроцитов изучали в концентрациях 10 мкМоль/л; 100 мкМоль/л; 1000 мкМоль/л. Применение флуоресцентного зонда ДСМ4" выявило увеличение поверхностного заряда эритроцитов под действием как соединения С-83, так и пентоксифиллина. Так соединение С-83 в концентрации 10 мкМоль/л достоверно превосходит по активности пентоксифиллин на 30,7%. В концентрации 100 мкМоль/л соединение С-83 и пентоксифиллин увеличивали данный показатель на 74,2% и 46,6%, соответственно (данные достоверны по отношению к контролю для соединения С-83). Следует отметить, что при увеличении концентрации до 1000 мкМоль/л интенсивность флуоресценции возрастала у обоих соединений, при этом соединение С-83 по активности не превосходило пентоксифиллин. Полученные данные могут свидетельствовать об увеличении электроотрицательности мембран эритроцитов, под влиянием изучаемых соединений, что может обуславливаться Са" зависимой агрегацией основного белка мембранного цитоскелета эритроцитов -спектрина, которая приводит к переориентации мембранных протеинов (МимЫ С. В., 2002).

Снижение деформируемости эритроцитов и повышение их агрегации происходят при участие различных механизмов (Ганелина И. Е. и др, 2000). Нарушение деформируемости эритроцитов, в немалой степени, зависит от эластичности мембраны эритроцитов, первичную роль в которой играет спектрин, и микровязкостью мембраны, которая характеризует сопротивление скорости деформации (Нагс1етапМ.К. е1.а1., 2003; Катюхин Л.Н., 1995; МищукИ.И. и др., 1993).

В результате проведенного исследования выявлено, что соединение С-83» достоверно, по отношению к прогретым образцам крови кроликов, увеличивет скорость фильтрации эритроцитов на 24,82%. Пентоксифиллин повышал способность эритроцитов к деформации на 20,91% (р<0,05). В свою очередь это свидетельствует о повышение деформабельности эритроцитов.

Установление механизма влияния исследуемых соединений на деформабельность эритроцитов методом вискозиметрией взвеси отмытых эритроцитов позволило определить следующее. Так, при добавлении исследуемых соединений^ в прогретые образцы крови кроликов в концентрациях 1хЮ"4, 1хЮ"5, Iх 10"6 моль/л наблюдается снижение вязкости при различных скоростях сдвига. Вискозиметрические методики с использованием ротационных вискозиметров позволяют выделить отдельно участие клеточной поверхности и внутреннего содержимого эритроцитов в их деформируемости, (Катюхин Л.Н., 1995). Наибольшее влияние на данный показатель соединения оказывают при низких скоростях сдвига, где главными определяющими являются вязкость самой мембраны и клеточная геометрия. Также, выявлена зависимость реологического эффекта от концентрации соединений.

Исследуемое соединение оказывало выраженное влияние на показатель анизотропии флуоресценции - оптический эквивалент вязкости мембраны в концентрации 1x10"4, 1x10"5, 1 х Ю"6. Однако соединение С-83 оказывало достоверное, по отношению к контрольным образцам, влияние на данный показатель лишь в концентрации 1хЮ"4, а в концентрации-1х 10" 5 и 1хЮ"6 уступало по активности пентоксифиллину (р>0.05).

Не менее важное значение в нарушении внутрисосудистого гомеостаза играет и функциональное состояние тромбоцитов центрального звена гемокоагуляции (Баркаган З.С., 2001; 1ез1у 5. оХ. а1., 2003). Соединение С-83 снижало.индекс агрегации тромбоцитов на 43,5%, превосходя пентоксифиллин на 42,5% (р<0.05). Индекс дезагрегации исследуемые соединения в равной степени повышали на 9,63%. Скорость агрегации тромбоцитов снижалась на 27,7% для соединения С-83, а для пентоксифиллина повышалась на 25,6%.

Лейкоциты также могут нарушать нормальный кровоток в микрососудах капиллярного и венозного ranai в следствие закупорки микрососудов (Петрищев H.H. и др.,2003; Sutton D.W. et. al., 1992; Мчедлишвили Г.И., 1991).

В данном исследовании выявлено, что изучаемые соединений приводили к снижению индекса адгезии лейкоцитов в образцах крови кроликов с «синдромом повышенной, вязкости» крови, смоделированным методом теплового воздействия.

Таким образом, проведенное исследование позволило установить, что все изученные вещества, относящиеся к 7,8-замещенным производным ксантина, проявили гемореологическую активность различной степени выраженности. Реологическая активность соединений в значительной степени зависит от их химической» структуры. Так, высокий уровень гемореологической активности определяется! наличием- тиетанильного радикала- в N и тиогидразидного заместителя1 в 8 положение, а наиболее активно ингибировало агрегацию эритроцитов соединение C-83j что в свою очередь связано с введением окси-групп в тиетанильный радикал. У данного соединения наличие высокой эффективности сочетается с низкой токсичностью. При этом по широте терапевтического действия данное соединение превосходит пентоксифиллин.

В результате проведенного анализа зависимости гемореологической активности производных ксантина от их физико-химических характеристик было выявлено, что данным видом активности будут обладать достаточно полярные соединения. Так же, для проявления реологической активности соединениям необходимо обладать определенной степенью липофильности, чтобы взаимодействовать с мембранами эритроцитов. Рассчитанная и экспериментально проверенная классическая зависимость гемореологической активности производных ксантина от их физикохимических параметров может являться основой для поиска и оптимизации синтеза новых производных ксантина с заданной структурой и уровнем гемореологической активности.

В исследованиях in vitro на модели сформировавшегося «синдрома повышенной вязкости крови», а также в образцах крови больных сахарным диабетом соединения С-83 по влиянию на вязкостные характеристики крови проявило выраженную гемореологическую активность.

Исследования, проведенные на экспериментальных моделях, определили наличие выраженного гемореологического эффекта у соединения С-83. При изучении механизмов гемореологических эффектов, было выявлено, что в основе действия соединения С-83 лежит его мембранотропная активность (повышение электроотрицательности мембраны, увеличению деформируемости мембран эритроцитов).

Таким образом, гемореологическая активность, проявленная соединением С-83, позволяет предположить перспективность дальнейшего изучения фармакологических свойств этого соединения с целью создания на его основе нового препарата, превосходящего по активности известный препарат пентоксифиллин.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Науменко, Людмила Владимировна, 2006 год

1. Акопов, С.Э. Исследование фильтруемости крови и ее коррекциянафтилдрофурилом у больных цереброваскулярными заболеваниями / С.Э. Акопов, В.Ж. Дабринян, Г.О. Ованесян // Невропат, и психиатр, им. С.С. Корсаковского. -1996, № 10. -С. 25-29.

2. Балаболкин, М.И. Диабетология / М.И. Балаболкин. -М.: Медицина, 2000. -С. 672.

3. Балаболкин, М.И. Роль гликирования белков, окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений при сахарном диабете / М.И. Балаболкин // Сахарный диабет. -2002, №5. -С. 8-16.

4. Баркаган, З.С. Общие принципы исследования системы гемостаза и анализ новых методов выявления внутрисосудистого свертывания крови / З.С. Баркаган, // Терапевтический архив. -1989, № 5. -С. 104110.

5. Баркаган, З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот-М.: «Ньюдиамед-АО» 1999., С.3-15.

6. Баркаган, З.С. Основы диагностики нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот. -М.: «Ньюдиамед», 2001. -С.285.

7. Блума, Р.К. Влияние присутствия гемоглобина в образце на флуоресценции зонда ДСМ и пропранолола / Р.К. Блума, К.В. Окунь, Т.Н. Шибаева // Люминесцентный анализ в медико-биологических исследованиях: Сб. науч. тр. -Рига, 1990. -С. 69-71.

8. Булегенов, К.Е. Агрегация эритроцитов в присутствии алцианового голубого / К.Е. Булегенов // Кардиология. -1993, №3. -С. 42-44.

9. Викулов, А.Д. Реологические свойства кровищу спортсменов / А.Д. Викулов, A.A. Мельников, И.А. Осетров // Физиология человека. -2001, №5.-с. 24-132.

10. Вознюк, И.А. Возможности реопозитивной терапии при острой ишемии головного мозга / И.А. Вознюк, М.М. Одинак, О.Г. Есипова, А.Н. Кузнецов // Регионар. Кровообр. и микроциркуляция. — 2003. -Т.2, №.1. -С. 21-27.

11. Воложин, А.И. Нарушения реологических свойств крови при хроническом генерализованном пародонтите в сочетание с заболеваниями гастродуаденальной области / А.И. Воложин, В.Ю.

12. Широков // Пат. Физиология и экспр. терапия. 2005.- №4. -С. 1011.

13. Галенок, В.А. Гемореология при нарушениях углеводного обмена /

14. B.А. Галенок, Е.В. Гостинская, В.Е. Диккер. Новосибирск: Наука, 1987-232 с.

15. Гущин, А.Г. Муравьев A.B., Шаечкина И.К. Оценка комплекса гемореологических параметров при эритроцитозе / А.Г. Гущин, А.В.Муравьев, И.К.Шаечкина // Физиология человека. 2000. № 2.1. C.111-114.

16. Дегтярев, А.Н Антиагрегантные свойства и механизм действия новых производных бензимидазола на реологические показатели крови: Дисс. . канд. мед. наук / А.Н. Дегтярев. Волгоград, 2001, -185 с.

17. Дедов, И.И. Введение в диабетологию / И.И. Дедов, И.И. Фадеев. -М.: Изд. Берг, 1998. С. 147-150.

18. Джанашия, П.Х. Нарушения реологических свойств крови у больных ИБС и гипертонической болезнью. / П.Х. Джанашия, С.М. Сороколетов, Е.В. Жиляев и др. // Реологические исследования в медицине: Сб. науч. тр. М.: НЦХ РАМН. 1998. -С. 68-74.

19. Добрецов, Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов / Г.Е. Добрецов. М.: Наука, 1989. —277с.

20. Добровольский, H.A. Анализатор вязкости крови / H.A. Добровольский, Ю.М. Лопухин, A.C. Парфенов и др. // Реологические исследования в медицине: Сб. науч. тр. М.: НЦХ РАМН, 1998. - с.45-51.

21. Духанин, A.C. Фармакологическая регуляция активности тромбоцитов / A.C. Духанин, Ф.Р. Губаева // Эксперим. и клин, фармакология,- 1998, № 4. С. 66-71.

22. Зборовский, А.Б. Осложнения Фармакотерапии / А.Б. Зборовский, И.Н. Тюренков М: Медицина.-2003.27.3инчук, B.B. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты / В.В. Зинчук // Физиол. чел. -2001, № 2. -С. 154-160.

23. Зудин, A.M. Нарушение реологических свойств крови и их коррекция1 при посттромбофлебитическом синдроме / А.М1 Зудин, Г.С. Кротовский, А.Е. Котов игдр. // Хирургия. -2004, № 2. -С. 33-36.

24. Иванов, К.П. Роль лейкоцитов в динамике микроциркуляции в норме и при патологии / К.П. Иванов, H.H. Мельникова // Общ. биол. -2004, № 1,-С. 3-13.

25. О.Ивашкина, Е.П. Методы оценки функциональной активности тромбоцитов у больных гемофилией А / Е.П. Ивашкина, С.А. Садков, JI.H. Тарасова // Вестн. служб, крови России. 1999, № 1. — С. 31-34.

26. Карандашов, В.И. Фототерапия гемореологических нарушений при сердечной недостаточности / В.И. Карандашов, Е.Б. Петухов и др. // Клин. мед. 2003, № 11. -С. 30-32.

27. Карандашов, В.И. Фототерапия гемореологических нарушений при сердечной недостаточности / В.И. Карандашов, Е.Б. Петухов // Клин, мед. -2003, № И.-С. 30-32.

28. Кармен, Н.Б. Влияние плеторического введение перфторана на параметры структурно-функционального состояния мембран эритроцитов / Российский биомедицинский журнал. Т.5, Ст. 32. -С. 128-129.

29. Катюхин, JI.H. Реологические детерминанты вязкостных свойств крови человека при'дыхании гипоксической смесью / JI.H. Катюхин, А.К. Добрылко // Авиакосмос и экологическая медицина. -2000, № 5. -С.29-32.

30. Катюхин, JI.H. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования. / Физиолог, жур. им. И.М. Сеченова. -1995, №6. -С. 122-129.

31. Катюхин, JI.H. Роль реологических детерминант эритроцитов в регуляции структуры кровотока. / JI.H. Катюхин. // Клин. лаб. Диагностика. -2001. №12, -С.22 25.

32. Катюхин, JI.H. Роль реологических параметров эритроцитов в поддержании структуры кровотока у стрессированных крыс / JI.H. Катюхин // Авиакосмос и экологическая медицина. -2002, № 1. -С. 64-67.

33. Китаев, Н.Д. Микрореологические нарушения эритроцитов у больных гипертонической болезнью / Н.Д. Китаев, В.А. Шабанов, Г.Е. Левин, В.А. Костров //Кардиология. -1991, № 1. -С. 51-53.

34. Колосова, М.В. Характеристика Ca " индуцированного ответа эритроцитов больных с опухолями различной локализации / М.В. Колосова, И.В. Петрова, И.Б. Соколова, Е.А. Степовая и др. / Бюл. эксперим. биологии и медицины. —1990, № 1. -С. 77-80.

35. Коркушко, О.В. Изменение отдельных показателей внутрисосудистого гемостаза в развитие циркуляторной гипоксии при старении / О.В.Коркушко, В.Ю.Лишневская // Российский биомедицинский журнал. -2002, № 3. -С.262.

36. Крылов В.Н. Типовые изменения электрофоретической подвижности эритроцитов при стрессовых воздействиях / В.Н. Крылов, A.B. Дерюгина // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -2005, № 4. -С. 364-366.

37. Кубатиев, A.A. Индуцированная АДФ и тромбином мобилизация внутриклеточного Са2+ в тромбоцитах больных сахарным диабетом с сосудистыми осложнениями / A.A. Кубатиев, Т.С. Балашова, E.H. Томилова // Бюлл. эксперим. биол. и мед. —1996, № 1. -С. 112-115.

38. Лебедева Е.А. Фармакологическая блокада гликозилирования белков при сахарном диабете производными сульфонилмочевины ибигуанидами / Е.А. Лебедева // Экс. и клин, фармакология. -1996, №5. -С.40-42.

39. Леонова, М.В. Некоторые аспекты антиагрегантного действия дилтиазема и кордафена у больных ишемической болезнью сердца / М.В. Леонова, Д.О. Румянцева, Ю.Б. Белоусов // Кардиология. -1991, №2.-С. 13-15.

40. Лиховецкая 3. М. Реологические свойства крови у больных гемофилией / 3. М.Лиховецкая, Л.И.Ершова, Г.М Курбанова и др. // Реологические исследования в медицине: Сб. науч. Тр./ НЦХ РАМН. -1998. С.55-58.

41. Люсов, В.А. Современные проблемы терапии нарушений реологических свойств крови у больных ишемической болезнью сердца/В.А. Люсов, М.П. Савенков //Кардиология. -1988, №5 -С. 58.

42. Маколкин, В.И. Микроциркуляция при артериальной гипертензии / В.И. Маколкин, В.И. Подзолков, В.И. Павлов, В.В. Самойленко // Кардиалогия. -2003, № 5. -С. 60-67.

43. Максимов, Г.В. Исследование роли вязкости и проницаемости плазматической мембраны эритроцита в изменениях связывания кислорода гемоглобином при сахарном диабете / Г.В. Максимов // Бюллетень эксп. биологии и мед. -2005, Т.140,.№11 -С. 519-522.

44. Матюшичев, В. Б. Связь электрофоретической подвижности эрироцитов с их концентрацией в крови крыс / В. Б. Матюшичев,

45. В. Г.Шамратова // Бюллетень эксп. биологии»И'мед. -2005, Т.139. № 3 -С.250-251.

46. Медведев, И. Н. Коррекция тромбоцитарно-сосудистого гемостаза при1 метаболическом синдроме / И. Н.Медведев, Н. И.Громнацкий, И. В. Волобуев и др. // Клиническая медицина. -2006, № 1. -С.46.

47. Медведев М.И. Синдром гипервязкости при артериальной гипертонии и его лечение тренталом // М.И. Медведев, A.C. Петрухин, К.Ю.* Мухин // Клин, фармакология и терапия.- 1998, № 7 -С.53-54.

48. Механизмы нарушения микроциркуляции при иммунном воспалении / O.A. Назарова, В.А. Бобкова, М.Н. Кирпикова^и др. // Материалы Второй международной конференции «Микроциркуляция и гемореология». -Ярославль Москва, 1999. -С. 82-84.

49. Минкин, В.И. Теория строения молекул / В.И. Минкин, Б.Я. Симкин, P.M. Миняев Ростов-на-Дону: Феникс, 1997. - С. 560.

50. Мирсаева Г.Х. Влияние танакана- на свободно-радикальное окисление и систему гемостаза у больных гемореологической лихорадкой с почечным синдромом / Г.Х. Мирсаева, Р.Ф. Фазлыева, Ф.Х. Камилов // Нефрология. -2001, №4. -С49-54.

51. Михайлов, В.П. Влияние лактоферина на развитие острого и хронического адъювантного артрита / В.П1 Михайлов, A.B. Данилов, Т.Г. Данилов // Эксперим. и клин, фармак. -2003, № 2. -С.30-31.

52. Мищук, И.И. Изменения реологических свойств крови у тяжелобольных и их коррекция- (лекция для врачей* интернов, анестезиологов - реаниматологов 3-го года обучения) / И.И. Мищук. // Эксперим. и клин, фармак. -1993, № 5. -С.70-74.

53. Мокеев, И.Н. Инфузионно-трансфузионная терапия / И:Н. Мокеев -М: Издательство Мокеев, 1998.-С.107

54. Муравьев, A.B. Гемореологические профили у пациентов с артериальной гипертензией в сочетании^ синдромом гипервязкости

55. A.B. Муравьев, B.B Якусевич, JI.Г. Зайцев, A.M. Сироткина и др. // Физиология человека. -1998, № 2. -С. 113-117.

56. Муравьев, A.B. Реологические механизмы, обеспечивающие эффективность транспорта кислорода кровью / A.B. Муравьев, B.C. Шинкаренко, И.А. Баканова, A.A. Муравьев // Тромбоз, гемостаз и реология. -2000, № 4: -С. 11.

57. Мчедлишвили, Г.И. Нарушения нормального структурирования кровотока в микрососудах как причина гемореологических расстройств / Г.И. Мчедлишвили // Физ. жур. им. И.И. Сеченова. -1996, № 12.-С. 41-47.

58. Нетяженко, В.З. Реологические свойства крови у больных инфарктом миокарда / В.З. Нетяженко, В.Н. Крамарева, Я.М. Ена, Е.А. Сушко // Кардиология. -1992, №3. -С. 15-19.

59. Петрищев, H.H. Сравнительная оценка эффективности локальной и дистантной ишемической адаптации миокарда у крыс / H.H. Петрищен, Т.Д. Власов^ В.Г. Сиповский и др. // Кардиология. -2001, № 10.-С. 53-56.

60. Плотников, М.Б. Влияние экстракта левзеи сафлоровидной на реологические свойства крови крыс с артериальной гипертензией / М.Б. Плотников, О.И. Алиев, A.C. Васильев, М.Ю. Маслов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. -2001, № 6. -С. 45-47.

61. Плотников, М.Б. Гемореологические эффекты полиэтиленоксида у крыс с острой ишемией миокарда / М.Б. Плотников, Е.А. Чернышова, М.С. Невзоров и др. // Эксп. клин, фармак. -2003, № 1. -С. 37-39.

62. A.A. Колтунов, М.Ю: Маслов* // Бюл. Эксперим. биологии и медицины. -1998, № 8. -С. 150-151,

63. Потемкин, В1 В. Метаболические показатели и.; структура мембран эритроцитов при ожирении и метаболическом синдроме у женщин /

64. B. В.Потемкин, С. Ю.Троицкая,. A-F. Максина // Российский медицинский журнал. 2006, jY«1. -С.35.

65. Приезжаев, A.B. Уменьшение деформируемости эритроцитов-у крыс с ишемией мозга // A.B. Приезжаев, А.Ю. Тюрина, O.E. Фадюкова, В;Б. Кошелев // Бюллетень эксп. биологии и мед. -2004, №3. С.352355:

66. Розенблит, А.Б., Логико-комбинаторные методы- в^конструировании-лекарств / А.Б Розенблит, В.Е. Голендер-Рига: Зинатне, 1983. -С352.

67. Ройтман,. Е.В. Биореология. Клиническая— гемореология:. Фундаментальные основы, показатели, приборы / Е.В. Ройтман // Клин, лаб: диагн.-2001, №'5.-С. 25-32.

68. Самохина, М.И. Гемореологические свойства конденсированных производных бензимидазола, проявляющих антиоксидантный эффект: Дисс. . канд. биол. наук / М.П. Самохина. Волгоград, 2003,-178 с.

69. Саркисов, К.Г. Микроциркуляция и гемореология при старении человека / К.Г. О. В Саркисов, А. С. Коркушко, Ступина и др. // Проблемы старения и долголетия. -1998, №3. С. 269 - 278.

70. Смирнова Т.А. Роль нарушений реологических свойств крови в этиопатогенезе внематочной беременности // Т.А. Смирнова // Сб. науч. Тр.-М.:НЦХ РАМН, 1998.-С.11-19.

71. Создание гипогликемических препаратов с антиагрегантными свойствами на основе конденсированных производных бензимидазола / A.A. Спасов, Г.П. Дудченко, А.Ф. Турчаева и др. // Вестн. Волгогр. мед. акад. -1995. -№1. -С. 33-36.

72. Сторожок, В.А. Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства / В.А. Сторожок, А.Г. Санников, Ю.М. Захаров -Тюмень.: Медицина, 1997. -110 с.

73. Топчян, A.B. Лазерный доплеровский' флоуметр и изучение фармакологических воздействий на микроциркуляцию корыголовного мозга крыс / А.В.Топчян, Р.С.Мирзоян, М.Г.Баласанян //i

74. Методология флоуметрии, 1997.- С.129-136.

75. Турчани, П. Пр'опентофиллин-фармакологическое действие и терапевтическая эффективность при сосудистых заболеваниях мозгаи деменциях / П. Турчани, М. Турчани // Словакофарма ревю.- 1998, №4.-С. 128-135.

76. Фирсов H.H. Классификация тяжести гемореологических расстройств/ Н.Н.Фирсов, Т.В.Коротаева, М.А.Вышлова // Тромбоз, гемостаз и реология. -2003, №1.- С. 14-15

77. Фисенко, В.П. Анализ наиболее перспективных исследований по созданию новых лекарственных средств / В.П. Фисенко, А.П. Дрожжин, М.Т. Абидов // Научный центр экспертизы и государственного контроля лекарственных средств Минздрава России, 2000. -48 с.

78. Царев, O.A. Возможности неинвазивного конроля показателей, характеризующих реологические и коагуляционные свойства крови / O.A. Царев, Ф.Г. Прокин, А.И. Набегаев //Ангиология и сосудистая хирургия.- 2004, Т. 10 -С.52-53.

79. Чернышева, Г.А, Взаимосвязь реологических и гемодинамических изменений при синдроме длительного раздавливания у крыс / Г.А. Чернышева, М.Б. Плотников, В.И. Смольякова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. —2001, № 11. -С. 509-511.

80. Шабанов, В.А. Изменения реологических свойств крови у больных гипертонической болезнью / В.А. Шабанов, Е.В. Терехина, В.А. Костров // Терапевт, архив. -2001, № 10. -С. 70-73.

81. Шамов, И. А. Состояние микроциркуляции при железодефицитной анемии / И. А.Шамов, Н. Р. Моллаева // Гематология и трансфузиология. 2005, № 2 -С.33.

82. Шилов, A.M. Влияние бисопролола на реологические свойства крови при артериальной / A.M. Шилов, М.В. Чубаров, С.А. Князева и др. // Thromb. Res. -1981, № 23. -С. 401-410.

83. Abbitt, К.В. Rheological properties of the blood influencing selectin-mediated adhesion of flowing leukocytes / K.B. Abbitt, G.B. Nash // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. -2003. -№ 1. P. 229-240.

84. Arntz, H.R. Blood rheology in acute myocardial infarction: effects of high dose i. v. streptokinase compared to placebo / H.R. Arntz, G. Perchalla, D. Roll et al. // Eur. Heart J. -1992. - Vol. 13.- № 2. P. 275-280.

85. Arslan O. Effects of replacement fluids on plasma viscosity used for therapeutic plasma exchange / O. Arslan, I. Тек, M. Arat et al. // Ther Apher. -2004, №8(2). P. 144-147.

86. Bae, S.H. Platelet activation in patients with diabetic retinopathy / S.H. Bae, J. Lee, K.H. Roh, J. Kim. // J. Ophthalmol. -2003. -№ 17. P. 140144.

87. Barone, F. A pivotal role for cADPR-mediated Ca2+ signaling: regulation of endothelin-induced contraction in peritubular smooth muscle cells / F.Barone, A. A Genazzanti., A.Conti et. al. // FASEB J 2002, № 16 (7). P. 697-705.

88. Baskurt, O.K. Blood rheology and hemodynamics / O.K. Baskurt, H.J. Meiselman // Semin. Thromb. Hemost. -2003. -№ 29. P. 435-450.

89. Baskurt, O.K. Protection of erythrocytes from sub-hemolytic mechanical damage by nitric oxide mediated inhibition of potassium leakage / O.K. Baskurt, M. Uyuklu, H.J. Meiselman // Biorheology. -2004.-№41. P. 79-89.

90. Birks, J. Ginkgo biloba for cognitive impairment and dementia / J. Birks, E.V. Grimley, M. Van Dongen // Cochrane Database Syst Rev. -2002, №4. C.312.

91. Boisseau, M.R.Are rheological markers of poor prognosis present in diabetic arteriopathies / M.R.Boisseau // J Mai Vase. -2001, №26(2). P. 117-21.

92. Borberg, H. The current state of extracorporeal haemorheotherapy: from haemodilution via cascadefiltration to rheohaemapheresis / H. Borberg, R. Brunner, M. Tauchert, R. Widder // Transfus Apheresis Sci. -2001,24(1). P. 57-64.

93. Buchwald, H. Effect of plasma cholesterol on red blood cell oxygen transport / H. Buchwald, T.J. O'Dea, H.J. Menchaca et al. // Clin Exp Pharmacol Physiol. -2000, №27(12). P. 951-5.

94. Buchwald, H. Plasma cholesterol: an influencing factor in red blood cell oxygen release and cellular oxygen availability / H. Buchwald, H.J. Menchaca, V.N. Michalek et al. // J Am Coll Surg. -2000, №191(5).1. P.490-7.

95. Burkert, U.N.L.Allinger Molecular Mechanics / Burkert U., Allinger N.L. Washington, D.C., USA: ACS, 1982.

96. Cancela, J. M. Specific Ca ~ signalic evoked by cholecystokinin and acetylcholin: The Roles of naadp cadpr, and IP3. // Annu. Rev. Physiol.-2001.-№ 63. P.99- 117.

97. Chini, E. N. Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate: a new intracellular second messenger / E. N. Chini and F. G. S. De Toledo // Am J Physiol Cell Physiol.-2002, №282 (6). C. 1191 1198.

98. Cicco G. Cytosolic calcium andhemorheological patterns during arterial hypertension / G. Cicco, M.C. Carbonara, G.D. Stingi, A. Pirrelli // Clin Hemorheol Microcirc. -2001, №24(1). P.25-31.

99. Ciuffetti G. Clopidogrel: hemorheological effects in subjects with subclinical atherosclerosis / G. Ciuffetti, R. Lombardini // Clin Hemorheol Microcirc. 2001, №25 (1). P. 31-39.

100. Dawson, D.L. Failure of pentoxifylline or cilostazol to improve blood and plasma viscosity, fibrinogen, and erythrocyte deformability in claudication / D.L. Dawson, Q. Zheng, S.A. Worthy et al. // Angiology. -2002. -№ 53i P. 509-520.

101. Dietrich, G.V. Therapeutic use of phospholipids in thrombocytopenic or thrombocytopathic patients / G.V. Dietrich, D. Sohngen, V. Kretschmer // Semin Thromb Hemost. -1995, №21. P. 77-78.

102. Dintenfass, L. Modifications of blood rheology during aging and agerelated pathological conditions / L. Dintenfass // Aging (Milano). -1989.-№ l.P. 99-125.

103. Dobbe, J.G. Validation and application of an automated'rheoscope for measuring red blood cell deformability distributions in different species / J.G. Dobbe, M.R. Hardeman, G.J. Streekstra, C.A. Grimbergen // Biorheology. -2004. -№41. P. 65-77.

104. Dobberstein H. Correlation between retinal microcirculation and blood viscosity in patients with hyperviscosity syndrome / H. Dobberstein, U. Solbach, A. Weinberger, S.Wolf // Clin Hemorheol Microcirc. -1999, №20(1). P. 31-35.

105. Dujovne, C.A. Effect of atorvastatin on hemorheologic-hemostatic parameters and serum fibrinogen levels in hyperlipidemic patients / C.A.

106. Dujovne, W.S. Harris, R. Altman et al. // Am J Cardiol. -2000, №85(3). P.350-3.

107. Eherli, A.M. Drugs that alter blood viscositi. Their role in therapy / A.M. Eherli // Drugs. -1990. Vol. 39. -№ 2. P. 155-159.

108. Ernst, E. Therapeutische Koncequenzen hamorheologischer Forschung / E. Ernst // Wiener Medizinische Wochenschrifl. -1989. Bd. 139.-№ 34. S. 569-577.

109. Fill, M. Ryanodine Receptor Calcium Release Channels / M.Fill, J. A. Copello // Physiol Rev. 2002, № 82 (4). P. 893 - 922.

110. Franzin-Garrec, M. William Harvey, the secret of blood / M. Franzin-Garrec // Soins. -2004. -№ 1. P. 21.

111. Gaehtgens, P. Physiological relevance of RBC aggregation the "con" viev / P. Gaehtgens, U Takahama., Y. Sorata and C.-Y. Jan. // Medical. Biochemical and Chemical Aspects for Free Rdicals.-Amsterdam, -1998.

112. Gavin, J. Microvascular involvement in cardiac pathology/ Gavin J., Maxwell L., Edgar S. // J. Mol. Cell. Cardiol. 1998.- 30, N12.- P. 2531-2540.

113. Gendron, A. Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Influence on Systemic Oxygen Homeostasis and Erythropoiesis in Wistar Rats / A. Gendron, E. Kouassi, S. Nuara et al. // Stroke. -2004. -№ 17.

114. Ghosh, K. Thrombohaemorrhagic balance in diabetes mellitus / K. Ghosh // J. Indian. Med. Assoc. -2002. -№ 100. P. 432-433.

115. Gomez, E. Hyperviscosity syndrome and mental disorders / E. Gomez, C. Roncero, J. De Pablo // Actas Esp Psiquiatr. -2000, №28 (4). P. 263-266.

116. Guida, Flora Equilibrative and Concentrative Nucleoside Transporters Mediate Influx of Extracellular Cyclic ADP-Ribose into 3T3 Murine Fibroblasts / Guida, S. Bruzzone, L. Sturla et al. // J. Biol. Chem. -2002, № 277 (49). P. 47097 47105.

117. Guse, A. H. Transient Tyrosine Phosphorylation of Human Ryanodine Receptor upon T Cell Stimulation / A. H.Guse, A. Y Tsygankov., K.Weber // J. Biol. Chem. 2001, № 276 (37). P.34722 -34727.

118. Hardeman, M.R. Laser-assisted optical rotational cell analyzer measurements reveal early changes in human RBC deformability induced by photodynamic treatment / M.R. Hardeman, G.A. Besselink, I. Ebbing etal. //Transfusion.-2003.-№43. P. 1533-1537.

119. Higashida, H. Cyclic ADP-ribose as a potential second messenger for neuronal Ca2+ signaling / H. Higashida, M. Hashii, S. Yokoyama, N. Hoshi, K. Asai, T. Kato // J. Neurochem. -2001'. -№ 76. P. 321-331.

120. Huang, K.T. Modulation of nitric oxide bioavailability by erythrocytes / K.T. Huang, T.H. Han, M.W. Vaughn et al. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. -2001, №98(20). P. 11771-6.

121. Influence of prestorage leucocyte depletion and storage time on rheologic properties of erythrocyte concentrates / T. Sollberger, R. Walter, B. Brand, J. Contesse et al. // Vox. Sang. -2002. -№ 82. P. 191197.

122. Jesty, J. Platelet activation in a circulating flow loop: combined effects of shear stress and exposure time / J. Jesty, W. Yin, P. Perrotta, D. Bluestein // Platelets. -2003. -№ 14. P. 143-149.

123. Kametas, N.A. Pregnancy at high altitude: a hyperviscosity state / N.A. Kametas, E. Krampl, F. McAuliffe et al. // Acta Obstet Gynecol Scand. -2004. -№ 83. P. 627-33.

124. Katoh, M. Effects of the antiplatelet agent TA-993 and its metabolite MB3 on the hemorheological properties of rat and human erythrocytes / M. Katoh, T. Karasawa, H.' Doi, A. Odawara // Thromb. Res. -2001. -№ 104. P. 105-112.

125. Katiukhin, L.N. Changes of rheologic and hematologic indexes in Wistar and SHR rats in single and multiple treadmill runnings /

126. N.Katiukhin , A.L.Khalma-Murad, L.P.Kisliakova et. al. // Zh Evol Biokhim Fiziol. -2005.- 14(4). P. 725-8.

127. Kensey, K.R. The mechanistic relationships between hemorheologicaLcharacteristics and cardiovascular disease / K.R. Kensey // Curr. Med. Res. Opin. -2003. -№ 19. P. 587-596.

128. Kowal, P. Comparison of whole blood viscosity in vascular diseases / P. Kowal, A. Marcinkowska-Gapinska, W. Elikowski, Z. Chalupka//Pol. Merkuriusz. Lek. -2003. -№ 15. P. 515-517.

129. Kwaan, H.C. Rheological abnormalities and thromboembolic complications in heart disease: spontaneous echo contrast and red cell aggregation / H.C. Kwaan, S. Sakurai, J. Wang // Semin Thromb Hemost. -2003, №29(5). P.529-534.

130. Liu, T.Z. Diethylenetriaminopentaacetic acid is unsuitable for long-term preservation of RBCs / T.Z. Liu, D.T. Chiu, A.Stern // Transfusion. 2001.-№41. P. 556-559.

131. Long, D.S. Microviscometry reveals reduced blood viscosity and altered shear rate and shear stress profiles in microvessels after hemodilution / D.S. Long, M.L. Smith, A.R. Pries et al. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. -2004. -№ 101. P. 10060-10065.

132. Lu Y.F. and R. D. Hawkins Ryanodine Receptors Contribute to cGMP-Induced Late-Phase LTP and CREB Phosphorylation in the Hippocampus / Y.F. Lu, R. D. Hawkins // J Neurophysiol. 2002,№ 88 (3). P 1270 - 1278.

133. Luquita, A. Haemorheological variables as a rheumatoid arthritis activity indicator / A. Luquita, L. Urli, A. Dominighini, M.J. Svetaz et al. // Clin Hemorheol Microcirc. -2004, №30 (1). P. 9-16.

134. Machiedo, G.W. Red blood cell damage after trauma-hemorrhage is modulated by gender / G.W. Machiedo, S. Zaets, T. Berezina, D.Z. Xu et al. // J. Trauma. -2004. -№ 56. P. 837-44.

135. Magagna, A. Hemodynamic and humoral effects of low-dose aspirin in treated and untreated essential hypertensive patients / A. Magagna, B. Abdel-hag, S. Favilla et al. // Blood Press. -1994, №3(4). P. 236-241.

136. Marton, Z. Follow-up of hemorheological parameters and platelet aggregation in patients with acute coronary syndromes / Z. Marton, B. Horvath, T. Alexy et al. // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2003. -№ 29. P. 81-94.

137. Marton, Z. Red blood cell aggregation measurements in whole blood and in fibrinogen solutions by different methods / Z. Marton, G. Kesmarky, J. Vekasi et al. // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2001. -№ 24. P. 75-83.

138. Mchedlishvili G. Acute problems of the hemorheological analysis / G. Mchedlishvili // Clin Hemorheol Microcirc. -2001, 24(2). P. 117-118.

139. Meiselman, H.J. Standard aggregating media to test the «aggregabiliti» of rat red blood cells / H.J. Meiselman, M. Bor-Kucukatay, O.K. Baskurt et al. // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2000. -Vol. 22. -№ 2. P. 161-166.

140. Mizuno, T. Ultrastructural alterations in red blood cell membranes exposed to shear stress / T. Mizuno, T. Tsukiya, Y. Taenaka, E. Tatsumi, T. Nishinaka et al. // ASAIO J. -2002. -№ 48. P. 668-670.

141. Molecular identification and characterisation of the platelet ADP receptor targeted by thienopyridine antitrombotic drugs / C.J. Foster // J. Clin. Invest. 2001. - V.107. - P.1591-1598.

142. Munshi, C. B. Evidence for a Causal Role of CD38 Expression in Granulocytic Differentiation of Human HL-60 Cells / C. B Munshi., R.Graeff, H. C. Lee // J. Biol. Chem 2002, № 277 (51). P. 49453 -49458.

143. Navazio, L. Mobilization of Ca2+ by Cyclic ADP-Ribose from the Endoplasmic Reticulum of Cauliflower Florets Plant / L. Navazio, P. Mariani, D. Sanders // Physiology. -2001. -№ 125. P. 2129-2138.

144. Pfister, M. NAD degradation and regulation of CD38 expression by human monocytes/macrophages / M.Pfister, A.Ogilvie, C. P. da Silva et. al. // Eur. J. Biochem. 2001, № 268 (21). P.5601 - 5608.

145. Philippe F Whole blood viscosity measurement in acute myocardial infarction: feasibility and significance / F. Philippe, C. Lacombe, C. Bucherer et al. // J. Mai. Vase. -2001. -№ 26. P. 243-247.

146. Pries, A.R. Rheology of the microcirculation / A.R. Pries, T.W. Secomb // Clin Hemorheol Microcirc. -2003, №29(3-4). P. 143-148.

147. Pribush, A. The effect of low-molecular weight dextran on eretrocyti aggregation in normal and preeclamptic pregnancy / A. Pribush, D. Mancuta, H.J. Meicelman et al. // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2000. -№ 2. P. 143-152.

148. Quinn, M.J. Ticlopidine and clopidogrel / M.J. Quinn, D.J. Fitzgerald // Circulation. 1999. - V. 100. - P.1667-1672.

149. Rampling, M.W. Influence of cell-specific factors on red blood cell aggregation / M.W. Rampling, H.J. Meiselman, B. Neu, O.K. Baskurt // Biorheology. -2004. -№ 41. P. 91-112.

150. Rao, G.H. Physiology of blood platelet activation / G.H. Rao // Indian J Physiol Pharmacol. -1993, №37(4). P. 263-75.

151. Rochon, G. Hemodilution with stoma-free hemoglobin at physiologically maintained viscosity delays the onset of vasoconstriction/ G. Rochon, A. Caron, M. Toussaint-Hacquard et al. // Hypertension. -2004. -№43. P. 1110-1115.

152. Rosenson, R.S. Aspirin. Aspirin does not alter native blood viscosity / R.S. Rosenson, D. Wolff, D. Green, A.H. Boss, K.R. Kensey // J. Thromb. Haemost. -2004. -№ 2. P. 340-341.

153. Rusu, G. Role of nitric oxide in the effect of blood flow on neointima formation / G.Rusu, G.Danila, M. Nechifor // Rev.Med.Chir.Soc.Med.Nat.Iasi. 1993, № 97(2). - P.269-271.

154. Shabanov, V.A. Changes in blood rheological properties in patients with hypertension / V.A. Shabanov, E.V. Terekhina, V.A.Kostrov // Ter Arkh. -2001, №73 (10). P.70-73.

155. Santos, R.F. Cognitive performance, SPECT, and blood viscosity in elderly non-demented people using Ginkgo biloba / R.F. Santos, J.C. Galduroz, A. Barbieri et al. // Pharmacopsychiatry. -2003. -№ 36. P. 127133.

156. Sargento, L. Hemorheological effects of sodium fluorescein in rats / L. Sargento, H. Sobral do Rosario, C. Saldanha, J. Martins-Silva // Clin Hemorheol Microcirc. -2001. №24(3) P. 175-81.

157. Shin, S. Characteristics of blood flow resistance under transverse vibration: red blood cell suspension in Dextran-40 / S. Shin, Y. Ku, J.S. Suh, S.Y. Moon, J.Y. Jang // Ann. Biomed. Eng. -2003. -№31. P. 10771083.

158. Spengler, M.I. Influence of plasma proteins on erythrocyte aggregation in three mammalian species / M.I. Spengler, M. Rasia // Vet Res Commun. -2001. -№ 25(7) P.591-9.

159. Spodaryk. K, The influence of low-power laser energy on red blood cell metabolism and deformability / K. Spodaryk // Clin. Hemorheol. Microcirc. -2001. -№ 25. P. 145-151.

160. Stoltz, J.F. New trends in clinical hemorheology: an introduction to the concept of the hemorheological profile / J.F. Stoltz, M. Donner // Schweiz Med Wochenschr Suppl. -1991, №43. P.41-9.

161. Sutton, D.W. Elevation of organ resistance due to leukocyte perfusion / D.W. Sutton, G.W. Schmid-Schonbein // Am J Physiol. -1992, №262(6 Pt 2). P. 1646-50.

162. Szapary, L. Effects of cardiovascular risk factors on hemorheologic parameters in cerebrovascular patients / L. Szapary, M. Szots, B. Horvath et al. // Orv. Hetil. -2003. -№ 144. P. 1085-1090.

163. The antiaggregating activity of clopidogrel is due to a metabolic activation by the hepatic cytochrome P450-1A / P. Savi // Thromb. Haemostasis. 1994. - V.72. - P.313-317.

164. Tsai, A.G. Influence of cell-free Hb on local tissue perfusion and oxygenation in acute anemia after isovolemic hemodilution / A. G. Tsai // Transfusion. -2001,№41(10). P. 1290-8.

165. Tsai, A.G. Intaglietta M. High viscosity plasma expanders: Volume restitution fluids for lowering the transfusion trigger / A.G. Tsai, M. Intaglietta // Biorheology. -2001, №38(2-3). P. 229-37.

166. Vague, P. C-peptide, Na+,K(+)-ATPase, and diabetes / P. Vague, T.C. Coste, M.F. Jannot et al. // Exp. Diabesity Res. -2004. -№ 15. P. 3750.

167. Vekasi J. Hemorheologic factors in hypertensive and diabetic retinopathy / J. Vekasi, Z. Marton, G. Kesmarky // Orv Hetil. -2001, №20. P.1045-1048.

168. Verderio ,C. Evidence of a role for cyclic ADP-ribose in calcium signalling and neurotransmitter release in cultured astrocytes / C.Verderio, S.Bruzzone, E.Zocchi et al. // J. Neurochem 2001, № 78 (3). P.646 -657.

169. Viscor, G. Hemorheology and oxygen transport in vertebrates. A role in thermoregulation? / G. Viscor, J.R. Torrella, V. Fouces, T. Pages // J. Physiol. Biochem. -2003. -№'59. P. 277-286.

170. Walden, R. Laser Doppler flowmetry in lower extremity ischemia: application and interpretation / R. Walden, A. Bass, M. Balaciano, M. Modan, L. Zulty, R. Adar // Ann Vase Surg. -1992, №6 (6). P.511-6.

171. Yusufi, N.K. Differential Mechanisms of Ca2+ Release from Vascular Smooth Muscle Cell Microsomes / N.K. Yusufi, J. Cheng, M.A. Thompson et al. // Experimental Biology and Medicine. -2002. VOL. 227. -№ l.P. 36-44.

172. Zakzook, S.I. Hyperviscosity syndrome in rheumatoid arthritis with Felty's syndrome: case report and review of the literature /S.I. Zakzook, M.B. Yunus, D.S. Mulconrey // Clin. Rheumatol. -2002. -№ 21. P. 82-85.

173. Zocchi, E. The temperature-signaling cascade in sponges involves a heat-gated cation channel, abscisic acid, and cyclic ADP-ribose / E.Zocchi, A.Carpaneto, C.Cerrano et. al. // PNAS. 2001, № 98 (26). P.14859- 14864.