Оценка специфической активности, безопасности и клинической эффективности аллерговакцины (АВ), полученной на основе аллергоида пыльцы полыни горькой, конъюгированного с полиоксидонием тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Маркатун, Максим Михайлович

• Маркатун, Максим Михайлович
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Маркатун, Максим Михайлович

Перечень условных обозначений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1 .Пыльца полыни как этиологический фактор поллиноза.

2.2 Аллергия к пыльце полыни - «полынный» поллиноз.

2.3.Современные представления о механизмах аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ) и совершенствование методов АСИТ.

2.4.Конъюгированные аллергены для АСИТ. «Полпол» - аллерговакцина нового поколения.

3. Материалы и методы исследования.

3.1. Материалы.

3.2.Методы общего клинического, лабораторного, инструментального, иммунологического обследования пациентов с аллергией к пыльце полыни

3.3. Методы клинико-лабораторного аллергологического обследования пациентов с аллергией к пыльце полыни.

3.4. Компьютерная обработка медицинских данных.

3.5. Методы статистического анализа.

4. Собственные исследования.

4.1 .Формирование группы пациентов с аллергией к пыльце полыни для исследования аллерговакцины «Полпол».

4.1.1.Разработка методов интерактивного анкетирования и их практическая реализация на примере сайта «Аллерголог.РУ».

4.1.2.Формирование предварительного контингента пациентов в базе медицинских данных.

4.1.3. Диагностика и дифференциальная диагностика «полынного» поллиноза.

4.1.4.Клиническая характеристика пациентов с «полынным» поллинозом.

4.1.5. Характеристика ограниченного контингента добровольцев для исследования аллерговакцины «Полпол». Условия проведения испытаний.

4.2. Обоснование применения разностных и непараметрических методов статистического анализа.

4.3. Оценка специфический активности аллерговакцины «Полпол».

4.3.1. Оценка специфической активности аллерговакцины в сравнении с коммерческим аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни в кожных прик-тестах.

4.3.2. Оценка специфической активности аллерговакцины в сравнении с немодифицированным аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни в тесте высвобождения гистамина из базофилов.

4.4. Разработка схемы проведения АСИТ аллерговакциной «Полпол».

4.5. Оценка клинической эффективности АСИТ аллерговакциной «Полпол» у пациентов с «полынным» поллинозом.

4.5.1. Изучение изменения в интенсивности симптомов, продолжительности периода обострения поллиноза и потребности пациента в антигистаминных препаратах системного действия.

4.5.2. Изучение изменения интенсивности кожно-аллергической реакции на гистамин и коммерческий аллерген пыльцы полыни в кожных прик-тестах.

4.5.3. Изучение изменения кожной чувствительности на гистамин и коммерческий аллерген пыльцы полыни в аллергометрическом прик-титровании.

4.5.4. Изучение изменения назальной чувствительности на коммерческий аллерген пыльцы полыни в назальном аллергометрическом титровании.

4.6. Динамика результатов клинико- лабораторного обследования пациентов с «полынным» поллинозом в процессе проведения АСИТ аллерговакциной «Полпол».

4.7. Анализ характера и интенсивности местных и системных реакций в процессе проведения АСИТ аллерговакциной «Полпол».

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка специфической активности, безопасности и клинической эффективности аллерговакцины (АВ), полученной на основе аллергоида пыльцы полыни горькой, конъюгированного с полиоксидонием»

Поллиноз является классическим примером атопического заболевания и распространен повсеместно в мире. Как известно, основными источниками пыльцевых аллергенов являются пыльца деревьев, злаковых и сорных трав. По данным эпидемиологических исследований, пыльца сорных трав - одна из ведущих причин поллиноза, как в средней полосе России, так и в ряде других регионов, а именно: Донецкой области, на Нижней Волге, в Ставропольском и Краснодарском краях, в Западной Сибири, на Кавказе, в Казахстане и республиках Средней Азии, а также в некоторых областях Европы.

Среди сорных трав весьма распространенным растением является полынь. Полынь горькая встречается в Европейской части, на Кавказе, в Западной Сибири, реже в Восточной Сибири.

При обследовании больных атопическими заболеваниями, проживающих в различных регионах России, сенсибилизация к пыльце полыни встречается в 12 - 59% случаев.

Эпидемиологические данные диктуют необходимость дальнейшего поиска и устранения причин высокой заболеваемости поллинозом, а также разработку новых эффективных методов его лечения. С точки зрения клинической эффективности наиболее перспективным методом лечения поллиноза остается аллерген-специфическая иммунотерапия (АСИТ). Известно, что АСИТ в настоящее время является единственным эффективным методом лечения поллиноза, терапевтическое действие которого распространяется на все звенья патогенеза аллергического процесса. Успешно проведенная АСИТ препятствует формированию тяжелых форм респираторной аллергии, бронхиальной астмы, предотвращает расширение спектра причинно-значимых аллергенов и формирование полисенсибилизации.

Существующие лечебные формы аллергенов для АСИТ имеют ряд недостатков, а именно: обладают высокой степенью риска развития реакций анафилактического типа, обладают высокой аллергенностью при недостаточно высокой иммуногенности и др. Существующие коммерческие лечебные формы аллергенов (так называемые водно-солевые экстракты) обладают выраженной ^Е-связывающей активностью, что обуславливает высокую частоту побочных реакций при проведении АСИТ. Риск развития анафилактических реакций при проведении АСИТ препятствует широкому внедрению этого метода лечения в аллергологическую практику.

В связи с этим разработка и внедрение безопасных форм лечебных аллергенов со сниженным риском стимуляции реакций анафилактического типа при проведении АСИТ является чрезвычайно актуальной.

Среди современных способов повышения эффективности и безопасности АСИТ следует отметить серию работ сотрудников Института иммунологии ФУ «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ, выполненных под руководством Р.В.Петрова и Р.М.Хаитова, по направленной регуляции иммунного ответа с помощью искусственно созданных комплексов на основе конъюгации антигена и полиэлектролитного иммуномодулятора полиоксидония. В частности, в данном случае речь идет об аллерговакцинах (АВ), представляющих собой химический конъюгат аллергоида и полиоксидония, названных «пыльцевыми аллерготропинами». Ранее в Институте иммунологии ФУ «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ апробированы два таких препарата: аллерговакцина «Тимпол» - на основе аллергоида пыльцы тимофеевки и «Берпол» - на основе аллергоида пыльцы березы. В данной работе впервые проведено клиническое испытание новой аллерговакцины, созданной на основе аллергоида пыльцы полыни и полиоксидония.

Цель работы.

Данная работа ставит целью оценку специфической активности, безопасности и клинической эффективности аллерговакцины «Полпол», полученной на основе аллергоида пыльцы полыни горькой и полимерного носителя полиоксидония, на ограниченном контингенте пациентов с аллергией к пыльце полыни («полынным» поллинозом).

Задачи исследования.

1. Провести отбор пациентов с аллергией к пыльце полыни -«полынным» поллинозом.

2. Провести общеклиническое и аллергологическое обследование пациентов; дать клинико-аллергологическую характеристику «полынного» поллиноза.

3. Сформировать контингент пациентов с «полынным» поллинозом для исследования АВ «Полпол».

4. Провести сравнительную оценку специфической активности коммерческого и немодифицированного аллергенов, аллергоида пыльцы полыни горькой и АВ «Полпол».

5. Разработать схему АСИТ АВ «Полпол».

6.Провести курс АСИТ в предварительно сформированной группе пациентов с «полынным» поллинозом.

7.Изучить безопасность введения терапевтических доз АВ «Полпол».

8.Провести анализ эффективности АСИТ с использованием АВ «Полпол».

Практическая значимость.

Настоящая работа является продолжением экспериментальных и клинических исследований в рамках программы "Аллерговакцины нового поколения", проводимых в Институте Иммунологии ФУ «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ. Созданы принципиально новые отечественные формы лечебных аллергенов, не имеющие аналогов в мире. Доклинические и начальные клинические испытания показали высокую специфичность, безвредность и хорошие иммуногенные характеристики аллерговакцин, созданных на основе пыльцевых аллергоидов и полиоксидония. Внедрение аллерговакцины «Полпол» на основе аллергоида пыльцы полыни и полиоксидония в клиническую аллергологическую практику пополнит арсенал современных средств эффективного и безопасного лечения поллиноза. Апробация материалов диссертации.

Результаты представлены на V Международном Конгрессе по медицинской реабилитации и иммунореабилитации, май 1999, Тенерифе, Испания; XVIII Конгрессе Европейской Академии Аллергологии и Клинической Иммунологии, 3-7 июля 1999, Брюссель; VI Российском Национальном Конгрессе "Человек и лекарство", 19-23 апреля 1999, Москва; V Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», 12-14 ноября 2002, Москва.

2. Обзор литературы.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Маркатун, Максим Михайлович

ВЫВОДЫ

1. Аллерговакцина «Полпол» обладает специфической активностью, что позволяет использовать ее для проведения АСИТ пациентам с аллергией к пыльце полыни.

2. Аллерговакцина «Полпол» обладает высокой клинической эффективностью у пациентов с «полынным» поллинозом, о чем свидетельствует: снижение выраженности, интенсивности симптомов заболевания, сокращение длительности периода обострения поллиноза и уменьшение потребности в применении антигистаминных препаратов системного действия у 100% пациентов после проведения АСИТ;

- снижение кожной чувствительности к коммерческому аллергену пыльцы полыни после проведения АСИТ; снижение назальной чувствительности к коммерческому аллергену полыни после проведения АСИТ.

3. Аллерговакцина «Полпол» обладает сниженной 1§Е-связывающей активностью, в сравнении с коммерческим аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни, что снижает риск развития реакций анафилактического типа при проведении АСИТ пациентам с «полынным» поллинозом.

4. Аллерговакцина «Полпол» не стимулирует у пациентов синтез ^Е-антител в процессе АСИТ, т.е. обладает низкой аллергенной активностью.

5. Аллерговакцина «Полпол» обладает высокими иммуногенными свойствами. Вызывает значительное увеличение показателей специфических ^0-«блок»-антител у пациентов, прошедших курс АСИТ.

6. Безопасность аллерговакцины «Полпол» при проведении АСИТ подтверждается отсутствием у 100% пациентов общих токсических реакций при введении терапевтических доз препарата. Показатели клинико-лабораторных исследований, полученные в динамике за период проведения и после окончания курса АСИТ, подтверждают отсутствие токсичности лечебных доз аллерговакцины.

7. С целью формирования контингента пациентов для исследования новых препаратов для проведения АСИТ целесообразно использовать автоматизированный подход к анализу медицинской документации.

8. Для установления точного этиологического диагноза «полынный поллиноз» следует прибегать к корреляционному анализу, выявляющему взаимосвязь между интенсивностью симптомов поллиноза и концентрацией пыльцы полыни в воздухе.

4.8. Заключение.

Настоящее исследование явилось логическим продолжением серии работ по созданию вакцин нового поколения, ранее выполненных в Институте Иммунологии ФУ «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ [44, 68]. Разработка новых, не имеющих аналогов в мире, конъюгированных с полиоксидонием антигенов [15, 40], позволила выявить ряд положений, которые явились основополагающими для создания пыльцевых аллерговакцин, получивших впоследствии название «пыльцевых аллерготропинов». Было показано [40], что комплексы белка и полиоксидония при введении в организм не стимулируют синтез IgE-антител и за счет иммуномодулятора полиоксидония приобретают свойство выраженной иммуногенности. Учитывая высокую чувствительность пациентов с поллинозом к пыльцевым аллергенам, разработчики пыльцевых аллерговакцин [44, 68] предложили ввести в состав конъюгата с полиоксидонием модифицированный формальдегидом аллерген пыльцы -аллергоид. Указанным способом были изготовлены препараты "Тимпол" и "Берпол", которые прошли клинические испытания на ограниченном контингенте пациентов и показали высокую эффективность при проведении АСИТ. Аллерговакцина «Полпол» - один из препаратов в серии «пыльцевых аллерготропинов», созданный на основе аллергоида пыльцы полыни, конъюгированного с полиоксидонием. Полученные сотрудниками Института иммунологии ФУ «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ результаты доклинических испытаний на животных подтверждали безопасность введения суммарных гипосенсибилизирующих доз препарата «Полпол» [35, 69]. Однако клинической апробации не проводилось, и настоящая работа является первой попыткой оценки эффективности и безопасности АСИТ аллерговакциной «Полпол».

Изучение специфической активности, клинической эффективности и безопасности АВ «Полпол» проведено в соответствии с рекомендациями ГИСК МЗ РФ на ограниченном контингенте пациентов с аллергией к пыльце полыни - «полынным» поллинозом. Исследования проведены по Программе апробации препарата, согласованной с ГИСК МЗ РФ, при использовании общеизвестных критериев отбора и оценки результатов АСИТ.

При проведении отбора пациентов для клинического исследования препарата «Полпол» было отмечено, что формирование группы пациентов для исследования новых иммунотерапевтических препаратов может представлять известные трудности из-за жестких критериев включения в группу исследования и, соответственно, исключения. Отбор пациентов для исследования эффективности лечебных аллергенов должен был проводиться с обязательным учетом всего спектра сенсибилизации. При большом объеме медицинских данных, в нашем случае собранных за несколько лет, такой анализ трудно реализуем вручную, хотя и до настоящего времени этот подход применяется исследователями.

На первом этапе данной работы в процессе формирования группы пациентов для исследования широко использовались компьютерные методы обработки медицинской документации. В результате использования ряда последовательных запросов в базу медицинских данных клиники Института иммунологии ФУ «Медбиоэкстрем» при МЗ РФ, включающую результаты обследования 2030 пациентов, была выявлена многочисленная по составу группа пациентов, соответствующих "критериям включения" в исследование по следующим показателям: возрасту - от 18 до 50 лет, с выставленным диагнозом "поллиноз", с наличием сенсибилизации к пыльце сорных \ сложноцветных \ полыни и с резко положительными кожными пробами на пыльцу полыни.

Последующий анализ медицинской документации и результатов кожных проб позволил выявить группу из 115 пациентов с поздним летним поллинозом, в этиологии которого пыльца полыни являлась ведущим аллергеном. Тем не менее, у значительной части этих пациентов отмечалась сенсибилизация не только к пыльце полыни, но и к другим атопическим аллергенам: аллергенам пыльцы злаковых трав, деревьев, к бытовым или эпидермальным аллергенам. Это подтверждало известные данные о широком спектре сенсибилизации у пациентов, сенсибилизированных к пыльце полыни [126, 137]. Удалось выявить полную картину спектра сенсибилизации у пациентов с аллергией к пыльце полыни, причем анализ проводился с учетом только «резко» или «очень резко» положительных кожных проб.

Было подтверждено, что поздний летний (летне-осенний) поллиноз может быть обусловлен как сенсибилизацией к пыльце полыни, так и сенсибилизацией к пыльце некоторых других «поздноцветущих» растений. В связи с этим, например, у пациентов с аллергией на пыльцу лебеды симптомы поллиноза проявляются в тот же период, т.е. в период пыления полыни. Все это требовало проведения дифференциальной диагностики у пациентов с сенсибилизацией к пыльце полыни.

С учетом этого, для отбираемых в группу исследования лиц были сформулированы дополнительные необходимые критерии исключения -сенсибилизация к аллергенам пыльцы злаковых трав или лебеды. Выделенная по этим критериям из 2030 ранее обследованных пациентов группа составила 74 пациента.

В настоящее время все более широкое развитие получает Интернет. Являясь интерактивной средой, Интернет позволяет его участникам удаленно общаться и обмениваться информацией. Известно, что в эпидемиологических исследованиях нередко используют специальные анкеты-опросники. Анализ анкетных данных дает информацию, которой нередко достаточно для постановки предварительного диагноза. Тем не менее, применение этого метода опроса в известном варианте требует непосредственного контакта врача с пациентом, что в ряде случаев затрудняет получение информации от больших контингентов населения. В данном исследовании впервые разработан и реализован на примере сайта Аллерголог.РУ метод интерактивного анкетирования пациентов. За два года получено более 1000 анкет, заполненных посетителями сайта Аллерголог.РУ. В части случаев можно было уверенно говорить об аллергическом характере заболевания, а в некоторых случаях подозревать участие пыльцы полыни, как этиологически значимого аллергена в развитии заболевания. Последующие за анкетированием очные консультации, как правило, подтверждали предполагаемый диагноз. Часть проанкетированных пациентов были впоследствии включены в клиническое исследование аллерговакцины «Полпол».

Следующей задачей было дать клинико-аллергологическую характеристику «полынного» поллиноза на основании общеклинического и аллергологического обследования пациентов.

На основании анализа совокупности данных: анамнестических - о продолжительности и периодах обострения поллиноза, палинологических - о концентрации пыльцы полыни в атмосфере и результатов аллергологического обследования пациентов, были сформулированы специфические диагностические критерии «полынного» поллиноза. При этом была отмечена необходимость проведения дифференциальной диагностики «полынного» поллиноза с целью его «отделения» от сезонного аллергического ринита или конъюнктивита, вызванного сенсибилизацией к близким к пыльце полыни сезонным аллергенам (пыльца злаков, лебеды, крапивы, подорожника, щавеля, спор плесени). В связи с отсутствием коммерческих диагностических аллергенов из пыльцы крапивы, подорожника, щавеля и спор плесени, выделить пыльцу полыни как единственный этиологический фактор формирования позднего летнего поллиноза в ряде случаев не удалось.

В данном исследовании для решения вопроса о приоритетности пыльцы полыни в этиологии позднего летнего поллиноза проведено изучение корреляционной связи между значениями индексов пыльцы полыни в воздухе и выраженностью симптомов поллиноза в исследуемой группе пациентов. Показано, что у пациентов, отобранных нами в группу для АСИТ, отмечалась зависимость между интенсивностью проявления симптомов болезни и концентрацией пыльцы полыни в атмосфере. Таким образом, доказана роль пыльцы полыни как причинно-значимого аллергена в этиологии позднего летнего поллиноза у этих пациентов.

На основании результатов очных консультаций и расширенного обследования 78 человек (в возрасте от 18 до 50 лет, 34 мужчины и 44 женщины), с диагнозом «поллиноз», сезонными обострениями, соответствующими периоду пыления полыни, и наличием резко положительных кожных проб с диагностическим аллергеном пыльцы полыни дана клиническая характеристика «полынного» поллиноза.

Были сформулированы критерии включения и исключения пациентов в группу для исследования аллерговакцины «Полпол». Кроме известных противопоказаний для назначения АСИТ был сформулирован ряд дополнительных критериев исключения: аллергия на пыльцу злаковых трав и лебеды. Впоследствии это помогло избежать трудностей в оценке эффективности АСИТ аллерговакциной «Полпол».

Был сформирован контингент пациентов с «полынным» поллинозом для исследования аллерговакцины "Полпол". Общая численность ограниченного контингента для исследования препарата «Полпол» составила 40 человек. Испытуемая группа составила 30 человек; контрольная группа практически здоровых лиц составила 10 человек. АСИТ аллерговакциной «Полпол» получили 15 человек, которые дали информированное согласие на участие в клинических испытаниях.

В процессе исследований, в зависимости от типа данных, использовались различные статистические критерии достоверности: общепринятый критерий Стьюдента, разностный критерий Стьюдента для зависимых измерений, непараметрические критерии Уайта и Вилкоксона, исследование корреляционной зависимости. В ряде исследований применялись последовательно два метода статистической обработки (обычный и разностный методы Стьюдента, разностный метод Стьюдента и критерий Уайта, разностный метод Стьюдента и критерий Вилкоксона), что позволило повысить объективность анализа.

Исследование специфической активности аллерговакцины «Полпол» проводилось методом постановки прик-тестов. В отличие от общеизвестного метода оценки кожно-аллергической реакции по шкале от 0 до +-Н-+, нами использовались более информативные методы: оценка уртикарной реакции по размеру в миллиметрах, площади реакции, а также метод Si (skin index test), определяющий чувствительность пациента к аллергену с учетом индивидуальной чувствительности кожи к гистамину.

Оценка специфической активности аллерговакцины «Полпол» включала:

- оценку активности в контрольной группе добровольцев;

- оценку специфической активности по интенсивности кожно-аллергической реакции в сравнении с коммерческим лечебно-диагностическим аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни горькой;

- оценку специфической активности по результатам аллергометрического прик-титрования с десятикратными и двукратными разведениями в сравнении с коммерческим лечебно-диагностическим аллергеном;

- оценку специфической активности в тесте высвобождения гистамина из базофилов периферической крови в сравнении с немодифицированным аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни горькой.

Во-первых, было показано, что аллерговакцина не вызывает положительных кожно-аллергических реакций у здоровых добровольцев, т.е. не обладает неспецифической гистаминолиберирующей активностью.

Во-вторых, было показано, что аллерговакцина вызывает менее интенсивные кожно-аллергические реакции, чем коммерческий аллерген и аллергоид пыльцы полыни горькой. Было показано также, что, с одной стороны, на результаты оценки различий в интенсивности реакции оказывает влияние концентрация аллергена. С другой стороны, учет размера уртикарной реакции по размеру волдыря выявляет большие отличия в интенсивностях кожно-аллергических реакций, чем учет тех же реакций по размеру гиперемии:

- кратность снижения интенсивности кожно-аллергической реакции для пары АЛ-К / АВ по размеру гиперемии на концентрацию 1000 РЖГ/мл составила 3,37±1,39, а по кожному индексу 81 - 3,66±1,59; различия достоверны только для размеров реакций (р<0,001);

- кратность снижения интенсивности кожно-аллергической реакции для пары АЛ-К / АВ по размеру волдыря на концентрацию 10000 Р>Ш/мл составила 3,03±0,9, а по кожному индексу 81 - 12,31±7,53; различия достоверны и для размеров реакций - р<0,001, и для 81 - р<0,01;

- кратность снижения интенсивности кожно-аллергической реакции для пары АЛД / АВ по размеру волдыря на концентрацию 10000 Р>Ш/мл составила 1,88±0,4, а по кожному индексу 81 - 3,92±1,7; различия достоверны и для размеров реакций - р<0,001, и для 81 - р<0,001;

- кратность снижения интенсивности кожно-аллергической реакции для пары АЛ-К / АЛД по размеру волдыря на концентрацию 10000 Р>Ш/мл составила 1,66±0,43, а по кожному индексу 81 - 3,7±2,24; различия достоверны и для размеров реакций - р<0,001, и для 81 - р<0,01.

В-третьих, было показано, что имеется высокая статистическая достоверность всех коэффициентов корреляции (<0,001), что подтверждает наличие корреляционной взаимосвязи между размерами уртикарной реакции и кожными индексами для пары массивов АЛ-К / АВ и АЛ-К / АЛД, что говорит о высокой специфичности аллергоида пыльцы полыни горькой и аллерговакцины «Полпол».

В-четвертых, показано, что кожная чувствительность на аллерговакцину ниже, чем на коммерческий аллерген, по результатам аллергометрического прик-титрования с десятикратными и двукратными разведениями препаратов. Сравнение десятичных титров по критерию Уайта показало, что концентрация для титра АВ достоверно выше, чем концентрация для титра АЛ-К (р<0,01). Средняя разность титров составила 0,87 (в десятичных логарифмах), что соответствует повышению концентрации для титра аллерговакцины в 7,41 раза. Сравнение двоичных титров разностным методом показало, что значение кожных титров для аллерговакцины достоверно ниже в среднем на 3,60 (в двоичных логарифмах), что соответствует повышению концентрации для титра аллерговакцины в 12,13 раза. Применение критерия Уайта показало достоверные различия в кожной чувствительности пациентов к АЛ-К и АВ даже без учета их индивидуальной кожной чувствительности к гистамину.

Таким образом, при использовании аллерговакцины «Полпол» при АСИТ существует меньшая степень риска реакций анафилактического типа. С одной стороны, кожная реактивность на аллерговакцину, оцененная по размеру вызываемой уртикарной реакции, оказалась ниже, чем на коммерческий аллерген или аллергоид пыльцы полыни горькой. С другой стороны, чувствительность к аллерговакцине, оцененная в аллергометрическом титровании, оказалась ниже, чем к коммерческому аллергену пыльцы полыни горькой.

Кроме исследований in vivo была проведена оценка специфической активности в тесте высвобождения гистамина из базофилов периферической крови. Для сравнения здесь были использованы немодифицированный нативный аллерген и аллергоид пыльцы полыни горькой. Было показано, что максимальное высвобождение гистамина наступает при значительно меньшей концентрации АЛ-Н (в 100-1000 раз), чем АЛД и АВ, т.е. чувствительность базофильных клеток периферической крови пациентов с аллергией к пыльце полыни к модифицированным аллергенам значительно снижается. При этом чувствительность клеток к аллерговакцине меньше, чем к аллергоиду. Статистическая обработка для Qmax (концентрация аллергена, при которой % высвобождения гистамина достигает максимального значения tmax) по критерию Уайта показала, что уменьшение его значения статистически значимо для массивов АЛ-Н / АЛД (pw <0,05) , АЛ-Н / АВ (pw

0,001) и АЛД / АВ (р\у <0,001). Сопоставление уровней максимального высвобождения гистамина 1;тах также показывает меньшую реактивность на модифицированные препараты, чем на немодифицированный аллерген: для аллергоида среднее снижение составляет 49,1%, для аллерговакцины -52,2%. Статистическая обработка для % максимального высвобождения гистамина, проведенная разностным методом, показала для пары массивов АЛ-Н / АЛД уровень значимости снижения 0,059, т.е. на границе достоверности, а для пары массивов АЛ-Н / АВ - меньше 0,005, т.е. статистически достоверно.

Следовательно, при использовании аллерговакцины при АСИТ существует наименьшая степень риска реакций анафилактического типа, т.к. количественный эффект высвобождения гистамина из базофилов у аллерговакцины наименьший, по сравнению с немодифицированным аллергеном; чувствительность базофильных лейкоцитов к аллерговакцине также оказалась ниже по сравнению с немодифицированным аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни горькой.

Общая схема введения препарата «Полпол» была разработана на основе опыта проведения АСИТ аналогичными аллерговакцинами, полученными на основе аллергоидов пыльцы тимофеевки и березы («Тимпол», «Берпол»). В программе испытаний и работах, посвященных клиническому исследованию препарата «Тимпол», указывается на возможность возникновения отсроченных реакций немедленного типа. Вся схема введения препарата «Тимпол» предусматривала 15 инъекций, а курс лечения занимал 54 - 76 дней. При исследовании клинической эффективности аллерговакцины «Полпол» было запланировано провести курс АСИТ в ограниченные сроки (2 месяца). С целью избежать значительной выраженности отсроченных реакций немедленного типа при проведении АСИТ в обозначенные сроки исследования, было решено модифицировать известную схему введения препарата «Тимпол». Количество инъекций в предложенной нами схеме было увеличено до 19, а интервалы между инъекциями сокращены, при общей дозе вводимой аллерговакцины 4667 PNU. Подразумевалось, что более дробное введение суммарной дозы препарата (19-ть инъекций вместо 15-ти) должно уменьшить выраженность отсроченных реакций в целом. Предполагаемая длительность курса при этом сокращалась до 52 дней.

АСИТ аллерговакциной «Полпол» получило 15 пациентов из испытуемой группы, для которых имелось информированное согласие. Начальная концентрация аллерговакцины для проведения АСИТ определялась индивидуально для каждого пациента на основании результатов кожного аллергометрического прик-титрования десятикратными разведениями аллерговакцины (от 1000 PNU/мл до 0,001 PNU/мл). Начальная доза аллерговакцины при проведении АСИТ соответствовала 0,1 мл препарата в концентрации, соответствующей кожному титру - минимальной концентрации аллерговакцины, первой дающей слабоположительную реакцию при прик-титровании. Учет индивидуальной чувствительности пациентов к аллерговакцине «Полпол» позволил сократить общую длительность курса АСИТ для 14 пациентов: до 44 дней в 9 случаях и до 36 дней в 5 случаях. При этом суммарная доза AB для отдельных пациентов практически не изменялась (< 17 PNU; снижалась менее чем на 0,4%).

Впервые было показано, что аллерговакцина «Полпол» обладает клинической эффективностью.

Клиническая эффективность АСИТ оценивалась по изменению уровней проявления симптомов поллиноза, ранжированных по 3-хбалльной шкале: а) насморк, чихание; б) заложенность носа; в) зуд век, слезотечение; г) головная боль; д) кашель; е) удушье; по длительности проявления болезни в днях; интенсивности симптомов, а также по потребности в антигистаминных препаратах системного действия (телфаст 120 мг/сутки). Статистическая достоверность результатов оценивалась разностным методом Стьюдента и по тесту Вилкоксона. Тест Вилкоксона оказался более информативным для анализа ранжированных данных; все результаты сравнения показывают снижение уровней проявления, длительности, интенсивности симптомов и потребности в антигистаминном препарате после АСИТ (все pv<0,01).

Оценка позитивных результатов устанавливалась также в соответствии с субъективными ощущениями пациентов от лечения: отличный эффект у 3 пациентов, хороший у 7 пациентов, удовлетворительный у 4 пациентов, неудовлетворительный у 1 пациента.

До проведения АСИТ 9 пациентов указывали на малую эффективность антигистаминного препарата в период сезонного обострения поллиноза, и только 2 пациента после проведения АСИТ. Это явилось дополнительным положительным эффектом АСИТ аллерговакциной «Полпол».

Оценка эффективности аллерговакцины «Полпол» проводилась также на основании изменения интенсивности кожно-аллергической реакции на гистамин и коммерческий аллерген пыльцы полыни горькой до и через 2 месяца после окончания проведения АСИТ (после окончания пыления полыни). Кратность снижения интенсивности кожно-аллергической реакции по размеру реакции составила для гистамина - 2,45±0,67, для коммерческого аллергена - 3,05+1,38; по кожному индексу Si - 2,06+0,92. Результаты сравнения достоверны при использовании разностного критерия Стьюдента: для гистамина р<0,005, для аллергена р<0,0001 (по размеру и площади реакции). Таким образом, в результате проведения АСИТ аллерговакциной «Полпол» интенсивность кожно-аллергической реакции на коммерческий аллерген пыльцы полыни горькой снижается через 2 месяца после окончания курса лечения.

Были исследованы также кожные титры до лечения и через 2 месяца после лечения аллерговакциной «Полпол». Средняя разность кожных титров для гистамина составила 0,47 (в десятичных логарифмах), что соответствует повышению концентрации для кожного титра гистамина в 2,95 раза (по критерию Уайта pw <0,01), а для коммерческого аллергена - в 1,2, что соответствует повышению концентрации для кожного титра коммерческого аллергена в 15,85 раза (pw<0,01). Таким образом, кожная чувствительность к гистамину и коммерческому аллергену пыльцы полыни горькой в результате проведенного курса АСИТ аллерговакциной "Полпол" снижается через 2 месяца после окончания курса лечения. При этом снижение кожной чувствительности более выражено на коммерческий аллерген пыльцы полыни горькой, чем на гистамин.

Дополнительно была исследована назальная чувствительность к коммерческому аллергену пыльцы полыни горькой до лечения и через 2 месяца после окончания курса АСИТ аллерговакциной «Полпол». При исследовании были получены следующие результаты: значение назальных титров после проведения АСИТ АВ «Полпол» достоверно снижается в среднем на 2,33 (в двоичных логарифмах; по Стьюденту р<0,001), что соответствует снижению назальной чувствительности в 5,03 раза. Таким образом, кожная и назальная чувствительность через 2 месяца после окончания курса АСИТ аллерговакциной «Полпол» ниже, чем до лечения.

Впервые была оценена безопасность введения терапевтических доз аллерговакцины «Полпол».

Оценка безопасности аллерговакцины «Полпол» основывалась на исследовании динамики клинико-лабораторных показателей. Перед началом курса АСИТ и через 2 недели после окончания курса АСИТ были проведены следующие исследования: клинический анализ крови, биохимический анализ крови, общий анализ мочи, ЭКГ, ФВД, исследование цитологии назального секрета, определение уровней общего 1§Е и специфических ^Е-антител к аллергену пыльцы полыни горькой в сыворотке крови, определение специфических 1§0-антител («блокирующих») к аллергену пыльцы полыни горькой, определение показателей гуморального и клеточного иммунитета по оценке первичного иммунного статуса. Дополнительно в процессе проведения АСИТ в промежутке между инъекциями N 16 - 17 были проведены клинический анализ крови, общий анализ мочи, ФВД, исследование цитологии назального секрета.

Статистический анализ результатов проводился разностным методом и по критерию Уайта. Показатели клинического анализа крови, функций внешнего дыхания, общего анализа мочи, ЭКГ и цитологии назального секрета при АСИТ аллерговакциной «Полпол» не претерпевали статистически значимых изменений.

Для показателей биохимического анализа крови статистически достоверными являются снижение содержания билирубина в сыворотке крови (р<0,05) и повышение содержания креатинина (р<0,05) в серии «после лечения» по сравнению с серией «до лечения». При этом значения этих показателей находятся в границах общепринятых нормальных значений.

При обработке результатов иммунологического обследования статистически достоверными являются увеличение показателей фагоцитоза (р<0,0001), увеличение количества моноцитов (р<0,05), снижение IgA (р<0,02) и увеличение IgM (р<0,05) в сыворотке крови. Значения иммунологических показателей оставались в пределах нормальных значений.

Анализ изменений показателей специфического IgG, специфического и общего IgE показал, что статистически достоверным является увеличение IgG специфического (р<0.05). Увеличение специфического IgG составляет 49,2% от его уровня до проведения АСИТ.

Чрезвычайно важным при оценке безопасности лечебных аллергенов является оценка их аллергенности. Было отмечено, что в процессе проведения АСИТ AB «Полпол» не стимулирует синтез IgE. Изменения специфического и общего IgE в сыворотке крови пациентов до и через 2 недели после окончания лечения статистически недостоверны (р>0,05). Отсутствие прироста специфического IgE и незначимое нарастание общего IgE говорит о низкой аллергенности аллерговакцины и, соответственно, низком риске развития реакций анафилактического типа в процессе проведения АСИТ. В то же время, нарастание показателей специфического IgG (^0-«блок»-антител) говорит об иммуногенности аллерговакцины «Полпол».

Безопасность введения аллерговакцины оценивалась также по интенсивности проявлений системных и местных аллергических реакций на инъекции препарата и проявлению побочных эффектов в течение курса терапии. Исследования показали, что при проведении АСИТ аллерговакциной «Полпол» возможно развитие немедленных и отсроченных местных аллергических реакций, однако, наличие данных реакций не послужило поводом для изменения схемы АСИТ. Все пациенты успешно прошли лечение. Ни одному пациенту не была изменена схема АСИТ или прекращено лечение.

Таким образом, в процессе нашего исследования было показано, что аллерговакцина «Полпол» обладает рядом преимуществ по сравнению с известным коммерческим лечебно-диагностическим аллергеном и аллергоидом пыльцы полыни горькой. Так, аллерговакцина «Полпол» обладает сниженным риском провокации реакций анафилактического типа, что показано в прик-тестах, в т.ч. в аллергометрическом титровании, на пациентах с аллергией к пыльце полыни и в тесте высвобождения гистамина из базофилов.

Полпол» является эффективным препаратом для лечения пациентов с аллергией к пыльце полыни - «полынным» поллинозом, что показано при исследовании изменений в выраженности, длительности и интенсивности симптомов поллиноза, а также по изменению потребности в фармакологическом лечении до и после проведения АСИТ аллерговакциной «Полпол». Объективные исследования изменения в реактивности и чувствительности тканей к коммерческому аллергену пыльцы полыни горькой, а также субъективные данные от самих пациентов подтверждают эффективность аллерговакцины «Полпол».

Дополнительным положительным эффектом АСИТ аллерговакциной «Полпол» явилось то, что до проведения АСИТ 9 пациентов указывали на малую эффективность антигистаминного препарата в период сезонного обострения поллиноза, тогда как после проведения курса АСИТ - только 2 пациента.

Показано, что аллерговакцина «Полпол» является безопасным препаратом. С одной стороны, за это говорит анализ динамики клинико-лабораторных показателей, подтверждающий отсутствие токсических свойств у аллерговакцины. С другой стороны, показано, что аллерговакцина «Полпол» обладает низкими аллергенными свойствами, т.к. не индуцирует синтез При этом, нужно отметить, что нельзя исключить возможность развития выраженных местных, и прежде всего отсроченных реакций, на введение лечебных доз аллерговакцины, а также системных аллергических реакций. При этом риск развития анафилактических реакций для аллерговакцины ниже, чем для коммерческого аллергена.

Таким образом, аллерговакцина (аллерготропин) «Полпол» является новым специфически активным, безопасным и клинически эффективным препаратом для лечения пациентов с аллергией к пыльце полыни -«полынным» поллинозом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Маркатун, Максим Михайлович, 2003 год

1. Адо А.Д. Общая аллергология. М., Медицина, 1978,464 с.

2. Адо А.Д. Частная аллергология. М., Медицина, 1976, 512 с.

3. Адо А.Д., Титова С.М., Лукманова Ф.Ф. Принципы производства аллергенов с пролонгированным действием и изучение их биологических свойств // Адъюванты в вакуумно-сывороточном деле. М., 1975, с.2-4.

4. Бабахин A.A., Хаитов P.M. Экспериментальная специфическая иммунотерапия аллергенполиэлектролитными комплексами. Иммунология, 1994, №5, с.37-42.

5. Беклемишев Н.Д., Ермекова Р.К., Мошкевич B.C. Поллинозы. М., Медицина, 1985, 240 с.

6. Бокеловадзе К. Клинико-иммунологическая и аллергологическая характеристика специфической иммунотерапии поллинозов новыми отечественными очищенными конъюгированными аллергенами: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1993, 22 с.

7. Брысин В.Г. Особенности поллинозов в условиях жаркого климата // Поллинозы. Тез.док.Всесоюзн.науч.сов. (26 27 июня 1973 г.), Краснодар, 1973, с.21-23.

8. Ганцева Х.Х. Аллергологическая служба республики Башкортастан. Материалы 1-го национального конгресса «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии» (28-31 января 1997 г. Москва), М., ВИНИТИ, 1997, с.543.

9. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. М., Практика, 1999,459 с.

10. Горячкина Л.А., Астафьева Н.Г. Специфическая иммунотерапия аллергических заболеваний. М., Medland Systems, 1998,16 с.

11. Гудман Д. JavaScript. Библия пользователя. М., Диалектика, 2002, 960 с.

12. Гургенидзе Г.В., Лабадзе P.M. Поллиноз в Грузии // Поллинозы. Тез.док.Всесоюзн.науч.сов. (26-27 июня 1973 г.), Краснодар, 1973, с.24-26.

13. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль. М., Фармарус Принт, 1998, 252 с.

14. Гущин И.С. Аллергия: аллергены, индукция и регуляция синтеза IgE Патол. физиология, 1999, №1, с.24-32.

15. Гущин И.С., Богуш H.JL, Алешкин В.А. Аллергенные свойства конъюгата овальбумина с сополимером акриловой кислоты и N-винилпирролидона. Иммунология, 1986, №1, с.61-63.

16. Гущин И.С., Курбачева О.М. Аллерген-специфическая иммунотерапия атопических заболеваний. М., РААКИ, 2002, 24 с.

17. Гущин И.С., Читаева В.Г., Латышев В.В. Сравнение гистаминвысво-бождающего действия анти-1§Е-антител, конканавалина А и специфического аллергена на базофилы человека. Иммунология, 1983, №5, с.79-83.

18. Гюллинг Э.В. Аллергия как проявление иммунодефицитных состояний. Врачебное дело, 1979, №11, с.57-63.

19. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. Обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах. М., Медицина, 1990, 224 с.

20. Ильина Н.И. Аллергический ринит. Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1997, №4, с.20-24.

21. Ильина Н.И. Аллергопатология в различных регионах России: Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1996, 37 с.

22. Ильина Н.И. Эпидемиология аллергического ринита. Российская ринология, 1999, №1, с.23-25.

23. Кабанов В.А., Петров Р.В., Хаитов P.M. Новый принцип создания искусственных иммуногенов. Журн. Всесоюз. хим. о-ва им. Д.И.Менделеева, 1982, Т.27, №4, с.57-68.

24. Камышева В.А., Хаитов P.M., Федосеева В.Н. Создание аллерговакцины на основе аллергоида из пыльцы березы и иммуностимулятора полиоксидония. Int. J. Immunorehabil, 1999, №12, с.29.

25. Келли Дж. Самоучитель Access 97. С-Пб., Питер, 2000, 336 с.

26. Кобзарь В.Н., Мейер Н.Р., Комаров Г.А., Харитонова 3*П. Аллергенная пыльца и загрязнение атмосферы. Иммунология, 1994, №3, с.43-45.

27. Котова Г.Ю. Клинико-аллергологическая характеристика аллергоида пыльцы березы, конъюгированного с полиоксидонием: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1997, 26 с.

28. Куприянов С.Н., Галактионова И.В., Куприянова Е.С. Аллергенная флора и пыльца земного шара. Ашгабат, Ылым, 1992,118 с.

29. Куприянов С.Н., Геринг-Галактионова И.В. К вопросу о комплектовании лечебно-диагностических наборов пыльцевых аллергенов // Поллинозы. Тез.док.Всесоюзн.науч.сов. (26 27 июня 1973 г.), Краснодар, 1973, с.37-39.

30. МакФедрис Пол. Язык HTML. М., Компьютер, 1996, 311 с.

31. Моносзон М.Х. Описание пыльцы видов полыней, произрастающих на территории СССР. Тр. ИГ АН СССР, 1950, вып.46.

32. Николь Н., Альбрехт Р. Электронные таблицы Excel 5.0 для квалифицированных пользователей. М., Эком, 1996, 304 с.

33. Остренок Л.И. Разработка аллерговакцины на основе пыльцы полыни и1. Ч/иммуностимулятора полиоксидония: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1908, 21 с.

34. Остренок Л.И., Федосеева В.Н. Полынные поллинозы. Врач, 1998, №6, с.14-15.

35. Передкова E.B. Специфическая иммунотерапия поллинозов пероральным методом: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1987, 24 с.

36. Петров Р.В., Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины. М., Медицина, 1988,288 с.

37. Петров Р.В., Хаитов P.M., Атауллаханов Р.И. Иммуногенетика и искусственные антигены. М., Медицина, 1983,255 с.

38. Петров Р.В., Хаитов P.M., Гущин И.С. Аллергенные свойства конъюгата овальбумина с сополимером акриловой кислоты и N-винилпирролидона. Докл. АН СССР, 1985, Т.283, №6, с.1513.

39. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлова A.A. Контроль и регуляция иммунного ответа. JI, Медицина, 1981, 312 с.

40. Петров Р.В., Хаитов P.M., Норимов А.Ш. Фенотипическая коррекция Ir-генного контроля иммунного ответа при иммунизации конъюгатами (Т.Г.)-А-Л с синтетическими полиэлектролитами. Иммунология, 1985, №2, с.21-24.

41. Петров Р.В., Хаитов P.M., Норимов А.Ш. Искусственные антигены со сниженной иммуногенностью комплексы белков с карбоцепными линейными полиамфолитами. Иммунология, 1982, №6, с.52-54.

42. Петров Р.В., Хаитов P.M., Федосеева В.Н. и др. Применение для специфической иммунотерапии конъюгированных аллергополимерных вакцин (пыльцевых аллерготропинов новой генерации). Терапевтический архив, 2002, №10, с.37-40.

43. Петрунов Б., Николаев Г., Константинова Д. Получение и характеристика химически модифицированного аллергена (аллергоида) из клещей Dspt. Микробиология, эпидемиология и иммунобиология, 1996, №6, с.53.

44. Положение об аллергологическом кабинете и аллергологическом отделении больницы. М., Минздрав СССР, 1991,28 с.

45. Поляк А.И., Ракова К.А. Распространенность и причины поллинозов в городе Ростове-на-Дону и его окрестностях // Поллинозы. Тез.док.Всесоюзн.науч.сов. (26-27 июня 1973 г.), Краснодар, 1973, с.50-51.

46. Порошина Ю.А., Полсачева O.B. Ускоренный метод специфической иммунотерапии поллинозов: Методические рекомендации. М., 1988, 6 с.

47. Порошина Ю.А., Полсачева О.В., Титова С.М. Клинико-иммунологическое изучение различных методов специфической иммунотерапии при поллинозах. Иммунология, 1985, №1, с.50-54.

48. Пыцкий В.И., Адрианова Н.В., Артомасова A.B. Аллергические заболевания. М., Триада-Х, 1999,470 с.

49. Пэтчетт К., Райт М. CGI/Perl: создание программ для Web. Киев: BHV, 2000, 622 с.

50. Райкис Б.Н., Воронкин Н.И. Лечебные аллергены. Л, Медицина, 1987, 185 с.

51. Райкис Б.Н., Казиев А.Х. Настоящее и будущее лечебных аллергенов. М., Триада-Х, 2001, 246 с.

52. Рахман Ю.А. Применение лиофилизитрованных аллергенов для диагностики и лечения поллинозов // Поллинозы. Тез.док.Всесоюзн.науч.сов. (26 -27 июня 1973 г.), Краснодар, 1973, с.54-55.

53. Студеникина М.Я., Балаболкин И.И., Баканов М.И. и др. Аллергические болезни у детей. М., Медицина, 1998. -348 с.

54. Феденко Е.С. Место аллергенспецифической иммунотерапии в лечении аллергических ринитов. Materia medica, 1999, №3, с.23.

55. Федосеев Г.Б. Механизмы воспаления бронхов и легких и противовоспалительная терапия. С-Пб, Нормед-издат, 1998. 333 с.

56. Федосеева В.Н. Аллергены окружающей среды. Врач, 1998, №6, с.6-8.

57. Федосеева В.Н., Хомутинин A.A., Литвинюк A.B. и др. Природные и антропогенные факторы окружающей среды в аллергизации населения Мангстауской области. Гигиена и санитария, 1993, №4, с.53.

58. Фрадкин В.А. Диагностические и лечебные аллергены. М., Медицина, 1990, 226 с.

59. Фрадкин В.А., Рошаль Н.И. Проведение диагностики аллергии тестом укола (прик-тест). Методические рекомендации. М., 1985,11 с.

60. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.,ВНИРО, 1995,219 с.

61. Хаитов P.M., Полсачева О.В., Порошина Ю.А. Специфическая иммунотерапия аллергеном, конъюгированным с синтетическим полимером. Иммунология, 1994, № 3, с.37-40.

62. Хаитов P.M., Федосеева В.Н., Некрасов A.B. и др. О сниженных аллергенных свойствах и высокой терапевтической эффективности комплекса аллергоида пыльцы тимофеевки и полимера. Иммунология, 1996, № 6, с.42-45.

63. Хаитов P.M., Федосеева В.Н., Некрасов A.B. и др. Аллерговакцина из пыльцы березы. Гипосенсибилизирующие свойства. Иммунология, 1997, № 5, с.47-49.

64. Хаитов P.M., Федосеева В.Н., Некрасов A.B. и др. Создание аллерговакцин на основе аллергоидов из пыльцы тимофеевки, березы, полыни и иммуностимулятора полиоксидония. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 2001, №1, с.23-28.

65. Хаитов P.M., Федосеева В.Н., Некрасов A.M., Камышева В.А. Создание аллерговакцин на основе аллергоидов из пыльцы тимофеевки, березы, полыни и иммуностимулятора полиоксидония. Аллергология и иммунология, 2000, Т.1, №2, с.112.

66. Хаитов P.M. Клиническая аллергология. М., МЕДпресс-информ, 2002, 624 с.

67. Хутуева С.Х. Бронхиальная астма и полиаллергия. Нальчик, Эльбрус, 1988, 128 с.

68. Хутуева С.Х., Федосеева В.Н. Аллергия и экология. Нальчик, Эльбрус, 1990, 168 с.

69. Хутуева С.Х., Федосеева В.Н. Аллерген-специфическая иммунотерапия бронхиальной астмы. М., Экон, 2000, 252 с.

70. Цецарский Б.М., Гюсан А.О., Райкис Б.Н. Эффективность иммунотерапии сезонных аллергических заболеваний верхних дыхательных путей аллергоидами // Поллинозы (клиника, диагностика и профилактика). Ставрополь, 1982, с.57-59.

71. Червинская Т.А. Пыльцевая бронхиальная астма (клинич., функцион. и аллергол. исследования): Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1975, 27 с.

72. Читаева В.Г., Гущин И.С., Порошина Ю.А. Динамика иммунологических показателей при специфической иммунотерапии. Иммунология, 1988, №5, с.54.

73. Шафран Э. Самоучитель "Создание Web страниц". С-Пб., Питер, 1999, 320 с.

74. Швец С.М., Гущин И.С., Порошина Ю.А., Читаева В.Г. Новый отечественный аллерген из яда пчел для специфической диагностики аллергических реакций на ужаление пчелами. Терапевтический архив, 1991, Т.63, №8, с.108-110.

75. Aas К. Adequate clinical trails of immunotherapy. Allergy, 1982, v.37, №1, p.1-14.

76. Abramson M., Puy R., Weiner J. Immunotherapy in asthma: an updated systematic review. Allergy, 1999, v.54, p. 1022-1041.

77. Arora N., Gangal S.V. Liposome entrapped allergen reduces plasma histamine in sensitized mice. Asian Рас. J. Allergy Immunol, 1998, v.16, №2-3, p.87-91.

78. Bao L., Sun Q.W., Hu L. Clinical and experimental study for allergic rhinitis with treatment of biminkang mixture. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi, 1997, v.17, №2, p.70-72.

79. Bernstein I.L. Tolerogenic vaccines in human allergy. J. Allergy Clin. Immunol, 1980, v.65, №3, p. 165.

80. Bousquet J., Hewitt В., Guerin В., Dhivert H., Michel F.B. Allergy in the Mediterranean area. II: Cross-allergenicity among Urticaceae pollens (Parietaria and Urtica). Clin. Allergy, 1986, v. 16, №1, p.57-64.

81. Brewczynski P.Z., Kroon A.M. Purethal-grasses, a modified allergen extracts. Eur. J. Allergy Clin. Immunol., 1983, v.48, №16, p.68.

82. Caballero Т., Pascual C., Garcia-Ara M.C. et al. IgE crossreactivity between mugwort pollen (Artemisia vulgaris) and hazelnut (Abellana nux) in sera from patients with sensitivity to both extracts. Clin. Exp. Allergy, 1997, v.27, №10, p.l203-1211.

83. Chen K., Liao Y.F., Zhang J.T. The major aeroallergens in Guanngxi, China. Clin. Allergy, 1988, v. 18, №6, p.589-596.

84. D'Amato G., Lobefalo G., Liccardi G., Cazzola M. A double-blind, placebo-controlled trial of local nasal immunotherapy in allergic rhinitis to Parietaria pollen. Clin. Allergy, 1995, v.25, p.141-148.

85. De la Hoz F., Polo F., Moscoso del Prado J. et al. Purification of Art v I, a relevant allergen of Artemisia Vulgaris pollen. Mol. Immunology, 1990, v. 27, №7, p.651-657.

86. De la Torre Morin F., Sanchez Machin I., Garcia Robaina J.C. et al. Clinical cross-reactivity between Artemisia vulgaris and Matricaria chamomilla (chamomile). J. Investig. Allergol. Clin. Immunol., 2001, v.l 1, №2, p. 118-122.

87. De Vries J.E., Yssel H. Modulation of IgE response. Eur. Respir. J., 1996, Suppl. 22, p.58-68.

88. Di Fonso M., Romano A., Papa G. et al. Allergy to cypress-tree pollen. The annual meeting of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology (EAACI'97), June 1-5, 1997,p.345.

89. Durham S.R. New insight into the mechanism of immunotherapy Eur. Arch. Otorhinolaryngol., 1995, Suppl. 1., p.64-67.

90. European Allergy White Paper, May 1997, Belgium, p. 117.

91. European Allergy White Paper Update, June 1999, Belgium, p.57.

92. Ellis H.J., Doyle A.P., Day P. et al. Demonstration of the presence of coeliac-activating gliadin-like epitopes in malted barley. Int. Arch. Allergy Immunol, 1994, v.l 04, №3, p.308-310.

93. Elsayed S., Holen E., Haugstad M.B. Antigenic and allergenic determinants of ovalbumin. II. The reactivity of the NH2 terminal decapeptide. Scand. J. Immunol., 1988, v.27, №5, p.587-591.

94. Fadel R., Andre C., Bellanger M. Tolerance compliance et effecacite de immunothérapie spécifique par des extraits allergeniques aquex ou absorbes sur phosphatic de calcium. Rev. Fr. Allergol. Immunol., 1998, v.38, №1, p.41-49.

95. Ford M.A., Cristea G. Jr., Robbins W.D. et al. Delayed psyllium allergy in three nurses. Hosp. Pharm., 1992, v.27, №12, p. 1061-1062.

96. Garsia Ortiz J.C., Cosmes P.M., Lopez-Asunsolo A. Allergy to foods in patients monosensitized to Artemisia. Allergy, 1996, v.51, №12, p.927-931.

97. Garcia-Selles F.J., Diaz-Perales A., Sanchez-Monge R. et al. Patterns of reactivity to lipid transfer proteins of plant foods and Artemisia pollen: an in vivo study. Int. Arch. Allergy Immunol., 2002, v. 128, №2, p. 115-122.

98. Grammer L.G., Shaughnessy M.A., Bernhard M.I. et al. The safety and activity of polymerized ragweed: a double-blind, placebo-controlled trial in 81 patients with ragweed rhinitis. J.Allergy Clin. Immunol., 1987, v.80, p.177-183.

99. Grote M., Fischer S., Muller W.D., Valenta R. In situ localization of a high molecular weight cross-reactive allergen in pollen and plant-derived food by immunogold electron microscopy. J. Allergy Clin. Immunol., 1998, v. 101, №2, Pt 1, p.250-257.

100. Guerra S., Allegra L., Blasi F., Cottini M. Age of symptom onset and distribution by sex and symptoms in patients sensitized to different allergens, Allergy, 1998, v.53, №9, p.863-869.

101. Halasa J. Simple and inexpensive method to assay IgG antibodies anti pollen. Pneumonol. Alergol. Pol., 1992, v.60, Suppl 2., p. 132-133.

102. Helbling A., Peter C., Berchtold E., Bogdanov S., Muller U. Allergy to honey: relation to pollen and honey bee allergy. Allergy, 1992, v.47, №1, p.41-49.

103. Ishizaka K., Ishizaka T. Biological function of gamma E andibodies and mechanisms of reaginic hypersensitivity. Clin. Exp. Immunol., 1970, v.6, p.25-42.

104. Ishizaka K., Jardieu P., Akasaki M., Iwata M. T cell factors involved in the regulation of the IgE synthesis. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1987, v. 82, №3-4, p.383-388.

105. Juhasz M., Jarai-Komlodi M., Kadosca E., Mezei G., Juhaz I. Grass pollen allergy in Hungary. The annual meeting of the European Academy of Allergology and Clinical Immunology (EAACI'97), June 1-5, -1997, p.157.

106. Kalyoncu A.F., Coplu L., Selcuk Z.T. et al. Survey of the allergic status of patients with bronchial asthma in Turkey: a multicenter study. Allergy, 1995, v.50, №5, p.451-455.

107. Katial R.K., Lin F.L., Stafford W.W. et al. Mugwort and sage (Artemisia) pollen cross-reactivity: ELISA inhibition and immunoblot evaluation. Ann. Allergy Asthma Immunol., 1997, v.19, №4, p.340-346.

108. Katz D.H. New concepts concerning the clinical control of IgE synthesis. Clin. Allergy, 1979, v.9, №4, p.609-622.

109. Khaito\ R.M., Bogova A.V., Iljina N.I. Epidemiology of allergic diseases in Russia. Int. Rev. Allergol. Clin. Immunol., 1999, v.5, №1, p.6-9.

110. Kljaic-Furkaly M., Cvoriscec B., Tudoric N. Decrease in CD23+ B lymphocytes and clinical outcome in asthmatic patients receiving specific rush immunotherapy. Int. Arch. Allergy Immunol, 1996, v.l 11, p. 188-194.

111. Kovalenko N.N., Kogosova L.S., Mjasnj I.S. et al. Determination of total and allergen-specific IgE in patients with bronchial asthma. Pneumonol. Alergol. Pol.,1992, v.60, Suppl. 1, p.41-43.

112. Kroon A.M., Brewczynski P.Z. Are allergoids effective due to residial allergen activity after modification only. Eur. J. All. Clin.Immunol., 1993, v.6, p. 1215.

113. Kwaasi A.A., Harfi H.A., Parhar R.S. et al. Cross-reactivities between date palm (Phoenix dactylifera L.) polypeptides and foods implicated in the oral allergy syndrome. Allergy, 2002, v.57, №6, p.508-518.

114. Larsen J.N., Lowenstein H. Allergen Nomenclature. J. Allergy Clin. Immunol., 1996, v. 97, p.577-578.

115. Leitner A., Jensen-Jarolim E., Grimm R. et al. Allergens in pepper and paprika. Immunologic investigation of the celery-birch-mugwort-spice syndrome. Allergy, 1998 v.53, №1, p.36-41.

116. Lebrun P., Lucas A.H., McKenzie D.T., Spiegelberg H.L. Interleukin 4 acts on both high- and low-density murine B cell subpopulations to induce IgE and IgGl synthesis in vitro. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1989, v.88, №1-2, p. 108-110.

117. Lelong M., Henard J., Bras C. et al. Does mugwort pollenosis occur in children in the northern region? Allerg. Immunol. (Paris), 1986, v. 18, №8, p.28-31.

118. Leng X., Fu Y.X., Ye S.T., Duan S.Q. A double-blind trial of oral immunotherapy for Artemisia pollen asthma with evaluation of bronchial response to the pollen allergen and serum-specific IgE antibody. Ann. Allergy, 1990, v. 64, №1, p.27-31.

119. Lowenstein H., Matthiesen F., Ipsen H. Preparation and standardization of allergen extracts (pollens, mites, molds, danders and venoms). J. Allergen Immunotherapy, 1991, v.25, p.45-49.

120. Lowenstein H., Mygind N. Extraction and degradation of timothy pollen allergen during simulated in vivo conditions. Allergy, 1978, v.33, №5, p.238-240.

121. Malley A., Bradley L., Shigi S. Antiidiotypes antibody regulation of timothy grass pollen IgE response. Immunology, 1982, v. 163, №2-4, p. 15.

122. Marsh D.G. Preparation and properties of allergoid derived from native pollen allergens by mild formalin treatment. Symp. Montreux 1970. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1971, v.41, p.199.

123. Marsh D.G., Lichtenstein L.M., Campbell D.H. Studies on allergoids prepared from naturally occuring allergens. Assay of allergenicity and antigenicity of formalinized rye group component. J. Immunol., 1970, v. 18, p.705-721.

124. May K.L. Allergy to Artemisia vulgaris in the region of Warsaw. Allergol. Immunopathol. (Madr.), 1990, vol.18, №1, p.57-60.

125. May K.L. Sensitivity to mugwort pollen allergens (Artemisia vulgaris). Pol. Tyg. Lek., 1990, v.45, №42-44, p.861-863.

126. Mohapatra S.S. Modulation of allergen-specific antibody responses by T-cell-based peptide vaccine(s). Principles and potential. Clin. Rev. Allergy, 1994, v. 12, №1, p.3-22.

127. Moneret-Vautrin D.A., Morisset M., Lemerdy P. et al. Food allergy and IgE sensitization caused by spices: CICBAA data (based on 589 cases of food allergy). Allerg. Immunol. (Paris), 2002, v.34, №4, p. 135-140.

128. Moran A., Martin M.L., Montero M.J. et al. Analgesic, antipyretic and antiinflammatory activity of the essential oil of Artemisia caerulescens subsp. Gallica. J. Ethnopharmacol., 1989, v.27, №3, p.307-317.

129. Negrini A.C., Arobba D. Allergenic pollens and pollinosis in Italy: recent advances. Allergy, 1992, v.47, №4, Pt 2, p.371-379.

130. Nilsen B.M., Grimsoen A., Paulsen B.S. Identification and characterization of important allergens from mugwort pollen by IEF, SDS-PAGE and immunoblotting. Mol. Immunol., 1991, v.28, №7, p.733-742.

131. Nilsen B.M., Paulsen B.S. Isolation and characterization of a glycoprotein allergen, Art v II, from pollen of mugwort (Artemisia vulgaris L.). Mol. Immunol., 1990, v.27, №10, p. 1047-1056.

132. Nordvall S.L., Berg T., Johannson S.G., Lanner A. Chemical studies of a purified timothy pollen extract. Int. Arch. Allergy, 1982, v.67, №2, p. 132-138.

133. Norman P.S., Marsh D.G., Lichtenstein L.M. Long-term immunotherapy with ragweed allergen and allergoid. J. Allergy Clin. Immunol., 1979, v.63, №3, p. 167.

134. Okuda M. Laboratory and clinical studies of nasal allergy. Nippon Jibiinkoka Gakkai Kaiho, 1974, v.77, №10, p.880-887.

135. Ortega N., Quiralte J., Blanco C. et al. Tobacco allergy: demonstration of cross-reactivity with other members of Solanaceae family and mugwort pollen Ann. Allergy Asthma Immunol., 1999, v.82, №2, p. 194-197.

136. Park-H.S., Kim-J.W., Hong-C.S. Immunoelectron-microscopic localization of IgE binding site of mugwort pollen. J. Korean Med. Sci., 1993, v.8, №1, p.30-33.

137. Paschke A., Kinder H., Zunker K. et al. Characterization of cross-reacting allergens in mango fruit. Allergy, 2001, v.56, №3, p.237-242.

138. Petrov R.V., Khaitov R.M. Highly immunogenic artificial complexes based on synthetic immunopotentiating polyons (Artificial antigens and vaccines). Amer. J Reprod. Immunol. Microbiol., 1986, v.10, p.105-110.

139. Petrov R.V., Khaitov R.M., Babakhin A.A., Popov A.N. IgE-response to allergen polyelectrolyte complexes. Allergy Clin. Immunol. News, 1992, v.4, №3, p.87-91.

140. Rak S., Hakanson L., Venge P. Immunotherapy abrogates the generation of eosinophil and neutrophil chemotactic activity during pollen season. J. Allergy Clin. Immunol., 1990, v.86, №5, p.706-713.

141. Rantio-Lehtimaki A., Heiander M., Karhu K. Does cutting of mugwort stands affect airborne pollen concentrations? Allergy, 1992, v.47, №4, Pt 2, p.388-390.

142. Raynaud J., Prüm N., Debourcieu L. Biochemical study of pollens of the genus Artemisia. Allerg. Immunol. (Paris), 1987, v. 19, №6, p.253-256.

143. Reid M.J., Moss R.B., Hsu Y.P. et al. Seasonal asthma in northern California: allergic causes and efficacy of immunotherapy. J. Allergy Clin. Immunol., 1986, v.78, p.590-600.

144. Rudeschko O., Fahlbusch B., Steurich F. et al. Kiwi allergens and their cross-reactivity with birch, rye, timothy, and mugwort pollen. J. Investig. Allergol. Clin. Immunol., 1998, v.8, №2, p.78-84.

145. Sehon A.H., Lee W.Y. Specific downregulation of IgE antibodies by tolerogenic conjugates of haptens and allergens with synthetic polymers. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1981, vol.66, Suppl. 1, p.39-42.

146. Sehra S., Chugh L., Gangal S.V. Role of liposomes in selective proliferation of splenic lymphocytes. Mol. Cell. Biochem., 1998, v.183, №1-2, p.133-139.

147. Spieksma F.T., Charpin H., Nolard N., Stix E. City spore concentrations in the European Economic Community (EEC). IV. Dummer weed pollen (Rumex' Plantago' Chenopodiaceae" Artemisia)' 1976 and 1977. Clin. Allergy, 1980, v. 10, p.319-329.

148. Standring R., Lavender E.A., Wheeler A.W. et al. Induction of T-helper cell activity by fragments of rye grass pollen extract produced by digestion with chymotrypsin. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1988, v.87, №4, p.337-341.

149. Subiza J., Jerez M., Jimenez J.A. et al. Allergenic pollen pollinosis in Madrid. J. Allergy Clin. Immunol., 1995, v.96, №1, p.15-23.

150. Subiza J., Subiza J.L., Alonso M. et al. Allergic conjunctivitis to chamomile tea. Ann. Allergy., 1990, v.65, №2, p. 127-132.

151. Tassi G.C., Sacch G. Immunotherapia delle manifestazioni allergiche. Boll. Ins. sieroter. Milan, 1983, v.62, №1, p. 1-36.

152. Tokushima M., Sanz M.L., de las Marinas M.D., Oehling A. Changes in the lymphocyte response and in the production of IgE regulatory factors in relation to thecourse of immunotherapy. Allergol. Immunopathol. (Madr.), 1990, v. 18, №3, p. 127133.

153. Valenta R., Duchene M., Ebner C. et al. Profilins constitute a novel family of functional plant pan-allergens. J. Exp. Med., 1992, v. 175, №2, p.377-385.

154. Van Metre T.E., Adkinson N.F., Amodio F.J. et al. A comparison of immunotherapy shedules for injection treatment of ragweed pollen hay fever. J. Allergy.Clin. Immunol., 1982, v.68, №2, p. 181-193.

155. Varney V.A., Hamid Q.A., Gaga M. et al. Influence of grass pollen immunotherapy on cellular infiltration and cytokine mRNA expression during allergen induced late-phase cutaneous responses. J. Clin. Invest., 1993, v.92, p.644-651.

156. Verini M., Rossi N., Verrotti A. et al. Sensitization to environmental antigens in asthmatic children from a central Italian area. Sci. Total Environ., 2001, v.270, №13, p.63-69.

157. Walsh D.J., Matthews J.A., Denmeade R. et al. Monoclonal antibodies to proteins from cocksfoot grass (Dactylis glomerata) pollen: isolation and N-terminal sequence of a major allergen. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1990, v.91, №4, p.419-425.

158. Wang Y., Wang X., Zheng S. Changes in the levels of artemisia pollen specific antibodies during rush immunotherapy for pollinosis. Zhonghua Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi., 1997, v. 32, №4, p.216-217.

159. Wen Z., Ye S. A report of 50 patients with artemisia pollenosis and plant food allergy. Zhonghua Yi Xue Za Zhi., 2002, v.82, №9, p.626-629.

160. Weyer A., Donel G., Debbia M. et al. Grass pollen hyposensibilization versus placebo therapy. II. Immunotherapy-induced changes in serum IgE and IgG levels. Allergy, 1981, v.36, №5, p.319-328.

161. Wheeler A.W., Drachenberg K. New routes and formulations for allergen-specific immunotherapy. J. Allergy, 1997, v.52, №7, p.602-612.

162. Wheeler A.W., Spackman V.M., Cottam G.P., Moran D.M. Retained T-cell reactivity of rye grass pollen extract following cleavage with cyanogen bromide and nitrothiocyanobenzoic acid. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1988, v.86, №1, p. 1-8.

163. WHO Position Paper. Allergen immunotherapy: therapeutic vaccines for allergic diseases. Allergy, 1998, v.53, №44, p. 1-42.

164. Wuthrich B., Dietschi R. The cellery-carrot-mugwort-condiment syndrome: skin test and RAST results. Schweiz. Med. Wochenschr., 1985, v.l 15, p.258-264.