Острые лейкозы с перестройками генов BCR/ABL и гена MLL тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Вернюк, Мария Андреевна

• Вернюк, Мария Андреевна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Вернюк, Мария Андреевна

Список используемых сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика больных.

2.1.1. Больные с острыми миелоидными лейкозами (1-я группа).

2.1.1.а) Первичные больные ОМЛ (1-я подгруппа).

2.1.1.6) Больные ОМЛ, включенные в исследование на фоне проводимой химиотерапии (2-я подгруппа).

2.1.2. Больные с острыми лимфобластными лейкозами (ll-я группа).

2.1.2.а) Первичные больные ОЛЛ (1-я подгруппа).

2.1.2.6) Больные ОЛЛ, включенные в исследование на фоне проводимой химиотерапии (2-я подгруппа).

2.1.3. Контрольная группа (Ш-я).

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Обнаружение перестроек генов BCR/ABL и частичной тандемной дупликации гена MLL методом двухэтапной обратнотранскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР).

2.2.2. Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH).

2.2.3. Стандартное цитогенетическое исследование.

2.3. Статистический анализ полученных данных.

2.4. Основные понятия.

Глава 3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Больные с острыми миелоидными лейкозами (1-я группа).

3.1.1. Первичные больные ОМЛ (1-я подгруппа).

3.1.1.А. Первичные больные с BCR/ABL-позитивными ОМЛ.

3.1.1.В. Первичные больные ОМЛ с частичной тандемной дупликацией гена MLL.

3.1.2. Больные ОМЛ, включенные в исследование на фоне проводимой химиотерапии (2-я подгруппа).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Острые лейкозы с перестройками генов BCR/ABL и гена MLL»

Актуальность проблемы.

В настоящее время ни одно клиническое исследование, направленное на улучшение результатов терапии острых лейкозов (ОЛ), не проводится без определения цитогенетических маркеров опухолевых клеток. Методом поперечного окрашивания хромосом аномалии кариотипа выявляются у 7090% больных ОЛ. Однако, приблизительно у 5-10% больных не удается получить достаточного количества метафаз для цитогенетического исследования. Кроме того, у трети больных с эффективным цитогенетическим анализом определяется нормальный кариотил. Поэтому, для выявления химерных генов или продуктов их транскрипции как при первичной диагностике ОЛ, так и в динамике заболевания используют более чувствительные методы: флюоресцентную гибридизацию in situ (FISH) и обратнотранскриптазную полимеразную цепную реакцию (ОТ-ПЦР).

Молекулярно-генетическая характеристика отдельных вариантов ОЛ позволяет выбирать прецизионную, а не унифицированную терапевтическую тактику. Обнаружение транслокации t(9;22)(q34;q11) и/или ее молекулярного эквивалента химерного гена BCR/ABL и перестроек с участием региона q23 хромосомы 11 (локуса гена MLL) является принципиальным. Эти хромосомные аберрации, являясь факторами неблагоприятного прогноза, обусловливают непродолжительность полных ремиссий, частое развитие первичной резистентности, высокий риск ранних рецидивов и неудовлетворительную общую выживаемость при использовании стандартных протоколов химиотерапии (XT). Это диктует необходимость интенсификации лечения (трансплантация костного мозга или стволовых клеток крови) на ранних этапах от момента достижения первой ремиссии и, возможно, проведение в дальнейшем биологической терапии.

На момент первичной диагностики острого лейкоза объем опухолевой массы составляет более 1012 лейкемических клеток. При достижении "морфологической" ремиссии может сохраняться до Ю10 бластных клеток [54], которые не могут быть выявлены при световой микроскопии. Использование метода FISH позволяет выявить одну опухолевую клетку с молекулярной перестройкой на 103 исследуемых клеток, ОТ-ПЦР - одну на 106, т.е. проводить детекцию минимальной резидуальной болезни (МРБ). Мониторинг МРБ позволяет определять конкретные терапевтические подходы при персистенции остаточной популяции опухолевых клеток или молекулярном рецидиве, а также оценивать эффективность новых методов лечения.

Все эти нерешенные вопросы послужили поводом для проведения нашего исследования.

Цель исследования:

Детекция и мониторинг минимальной резидуальной болезни при острых лейкозах с перестройками генов BCR/ABL и частичной тандемной дупликацией гена MLL методом ОТ-ПЦР.

Задачи исследования:

1. Отработать метод выявления частичной тандемной дупликации гена MLL с помощью ОТ-ПЦР.

2. Определить молекулярные, клинико-лабораторные характеристики и эффективность современной химиотерапии острых лейкозов с перестройками генов BCR/ABL и частичной тандемной дупликацией гена MLL

3. Изучить частоту достижения молекулярных ремиссий и их продолжительность в зависимости от методов лечения острых лейкозов (химиотерапия, трансплантация гемопоэтических стволовых клеток).

4. Определить критерии молекулярной диагностики острых лейкозов с перестройками генов BCR/ABL и MLL-дупликацией.

5. Разработать алгоритм мониторинга химерных транскриптов BCR/ABL и частичной тандемной дупликации гена MLL (субстрат и частота проведения исследования, чувствительность метода ОТ-ПЦР).

6. Оценить эффективность биологического метода лечения минимальной резидуальной болезни ("INF+ATRA").

7. Определить оптимальную терапевтическую тактику у больных острыми лейкозами с перестройками генов BCR/ABL и частичной тандемной дупликацией гена MLL.

Научная новизна:

Определена эффективная терапевтическая тактика у больных с BCR/ABL-позитивными острыми лейкозами и острыми лейкозами с частичной тандемной дупликацией гена MLL на основе молекулярно-генетических исследований.

Практическая ценность:

1. Отработан метод выявления частичной тандемной дупликации гена MLL, который стал основой создания тест-системы для диагностики данной молекулярной перестройки у больных острыми лейкозами.

2. Определены критерии молекулярной диагностики BCR/ABL-позитивных острых лейкозов и острых лейкозов с частичной тандемной дупликацией гена MLL.

3. Разработан алгоритм мониторинга минимальной резидуальной болезни (субстрат и частота проведения исследования, чувствительность метода ОТ-ПЦР) при BCR/ABL-позитивных острых лейкозах и острых лейкозах с частичной тандемной дупликацией гена MLL.

4. Определена оптимальная программа лечения BCR/ABL-позитивных острых лейкозов и острых лейкозов с частичной тандемной дупликацией гена MLL с применением на ранних сроках от момента достижения первой полной ремиссии трансплантации аплогенных или аутологичных гемопоэтических стволовых клеток и биологической терапии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Отработан метод выявления частичной тандемной дупликации гена MLL, который стал основой создания тест-системы для диагностики данной молекулярной перестройки у больных острыми лейкозами.

2. Химерный транскриггг BCR/ABL «методом обратнаггранскриптазной полимеразной цепной реакции на момент первичной диагностики обнаруживают у 27,8% больных острыми лимфобларгными лейкозами и у 13,5% - острыми миелоидными лейкозами. Частичная тандемная дупликация гена MLL выявляется при диагностике острых лейкозов с одинаковой частотой (11%).

3. Молекулярная ремиссия при этих формах острых лейкозов достигается позже клинико-гематологической на 4-8 месяцев; а молекулярный рецидив развивается раньше гематологического на 2 месяца.

4. Медиана безрецидивной выживаемости при BCR/ABL-позитивных острых лейкозах и острых лейкозах с частичной тандемной дупликацией гена MLL существенно меньше, чем при острых лейкозах без этих молекулярных перестроек.

5. Определена оптимальная программа лечения BCR/ABL-позитивных острых лейкозов и острых лейкозов с частичной тандемной дупликацией гена MLL с применением на ранних сроках от момента достижения первой полной ремиссии трансплантации аплогенных или аутологичных гемопоэтических стволовых клеток и биологической терапии.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Вернюк, Мария Андреевна

Выводы:

1. Создана тест-система для диагностики частичной тандемной дупликации гена MLL методом ОТ-ПЦР. При первичной диагностике острых лейкозов частичная тандемная дупликация гена MLL выявлена с частотой 11%, тогда как при стандартном цигогенетическом исследовании транслокация t(10;11)(p12;q13-21) обнаружена только при острых миелоидных лейкозах в 3,8% случаев. Острые лейкозы с MLL-дупликацией характеризуются большим объемом опухолевой массы и частым развитием ранних рецидивов, резистентных к химиотерапии.

2. Химерный транскрипт BCR/ABL методом ОТ-ПЦР обнаружен при первичной диагностике острых лимфобластных лейкозов у 27,8% больных, острых миелоидных — у 13,5%. Стандартным цитогенетическим методом частота выявления транслокации t(9;22)(q34;q11) существенно ниже и составила при острых лимфобластных лейкозах 9,1%, при острых миелоидных - 7,7%. BCR/ABL-позитивные острые лейкозы характеризуются высокой частотой развития ранних резистентных рецидивов.

3. На стандартных протоколах химиотерапии при BCR/ABL-позитивных острых лейкозах и острых лейкозах с MLL-дупликацией достигаются молекулярные ремиссии, но констатируются они реже и позже клинико-гематологических на 4-8 месяцев. Молекулярный рецидив развивается раньше гематологического (в среднем на 2 месяца), в связи с чем в течение первого года лечения мониторировать минимальную резидуальную болезнь необходимо с частотой один раз в 2 месяца.

4. Медиана безрецидивной выживаемости при BCR/ABL-позитивных острых лейкозах и острых лейкозах с частичной тандемной дупликацией гена MLL менее 9 месяцев. При острых лейкозах без этих молекулярных перестроек медиана безрецидивной выживаемости не достинута, так как более, чем у 50% больных сохранялась первая ремиссия.

5. Ранняя и агрессивная консолидация (трансплантация аллогенных или аутологичных гемопоэтических стволовых клеток) на сроке 6-8 месяцев от момента достижения первой ремиссии позволяет улучшать долгосрочные результаты терапии у больных с выявленными молекулярными перестройками.

6. Биологическое лечение интерфероном-альфа в сочетании с полностью транс-ретиноевой кислотой после выполнения трансплантации аллогенных или аутологичных гемопоэтических стволовых клеток является эффективным методом лечения минимальной резидуальной болезни, что подтверждается отсутствием молекулярных рецидивов.

Заключение.

Клинические пилотные и рандомизированные исследования остаются одними из самых объективных методов сбора и анализа информации по различным видам лечения больных острыми лейкозами. При этом удается выделить те биологические особенности острого лейкоза, которые в дальнейшем будут определять терапевтическую тактику в каждом конкретном случае. При острых лейкозах является принципиальным обнаружение транслокации t(9;22)(q34;q11) и перестроек с участием региона q23 хромосомы 11, как факторов неблагоприятного прогноза, обусловливающих непродолжительность полных ремиссий, высокий риск развития ранних резистегггных рецидивов и неудовлетворительную общую выживаемость при использовании стандартных протоколов химиотерапии.

Новые терапевтические способы воздействия на лейкемические клетки или новые лекарственные препараты могут принципиально изменять прогноз заболевания у больных этой группы риска. С целью достижения молекулярных ремиссий и увеличения их продолжительности при острых лейкозах с указанными хромосомными аберрациями, новые терапевтические подходы должны применяться на самых ранних этапах лечения. Для оценки клинического значения мониторинга минимальной резидуальной болезни у больных с реаранжировкой гена MLL необходимы перспективные исследования больших групп пациентов.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика больных.

В исследование включено 70 больных острым лейкозом, наблюдавшихся в отделении высокодозной химиотерапии гемобластозов и трансплантации костного мозга (руководитель член-корреспондент РАМН В.Г. Савченко) Гематологического Научного центра РАМН (директор академик РАМН и РАН А.И. Воробьев) в период с 2000 по 2004 гг. Среди них было 30 мужчин и 40 женщин. Медиана возраста составила 30 лет (15-74).

Образцы крови и костного мозга больных исследовали в различные сроки: до начала лечения, в периоды индукции и консолидации ремиссии, включая посттрансплантационный период, и на зтапе поддерживающей терапии. Всего выделено 458 образцов РНК. В среднем каждому больному было выполнено 6 исследований (от 1 до 19). Общее число реакций обратной транскрипции 89, полимеразных цепных реакций 562.

Все обследованные больные были разделены на 2 основные группы: 1) больные с острыми миелоидными лейкозами, 1-я группа; 2) больные с острыми лимфобластными лейкозами, 11-я группа. Обе группы, в зависимости от наличия или отсутствия предшествующей химиотерапии, были разделены на две подгруппы: первичные больные, молекулярное исследование которым выполнено до начала химиотерапии и пациенты, включенные в исследование на фоне проводимой XT. Больные с острыми промиелоцитарными лейкозами в исследование не включены. В качестве группы контроля были обследованы 13 здоровых доноров.

2.1.1. Больные с острыми миелоидными лейкозами (1-я группа).

В группу включено 44 пациента с острыми миелоидными лейкозами (18 мужчин и 26 женщин, медиана возраста 38 лет (15-74)).

2.1.1.а) Первичные больные ОМЛ (1-я подгруппа).

Было обследовано 37 пациентов с впервые выявленными острыми миелоидными лейкозами: 16 мужчин и 21 женщина, медиана возраста 38 лет

15-74). Первый больной включен в исследование в июле 2000 г., последний в мае 2004 г. Минимальный срок наблюдения 1 мес., максимальный 48,5 мес.

В подфуппе было: с острым миелобласгным недифференцированным лейкозом 1 больная (2,7%), с острым миелобласгным лейкозом с созреванием (М2) - 13 больных (31,1%), с острым миеломонобластным (М4) — 17 больных (45,9%), с острым монобластным (М5) - 4 пациента (10,8%) и 2-е (5,4%) с эритробластным (Мб) вариантом OMJ1. Результаты исследования периферической крови и костного мозга больных на момент диагностики острого лейкоза приведены в таблицей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Вернюк, Мария Андреевна, 2005 год

1. Волкова М.А. Хронический миелолейкоз. Клиническая онкогематология. М.:Медицина, 2001:237-262.

2. Волкова. М.А. Гливек-первый препарат патогенетического действия в терапии хронического миелолейкоза. Современная онкология, 2003, экстравыпуск, 5-10.

3. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. 3-е издание, переработанное и дополненное. М.: Ньюдиамед, 2002; Том 1:195-197.

4. Кобзев Ю.Н., Флейшман Е.В. Хромосомные изменения при гемобластозах. Клиническая онкогематология под редакцией Волковой М.А. М.:Медицина, 2001:100-101.

5. Савченко В.Г, Паровичникова Е.Н Лечение острых лейкозов. Москва, "МЕДпресс-информ", 2004:14-50,111-162.

6. Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н., Исаев В.Г. Програмное лечение лейкозов. Москва, ИПФ "Фолиант", 2002:7-36, 102-154.

7. Туркина А.Г. Ингибитор сигнальных путей STI 571 (Signal Transductor Inhibitor) новое направление в лечении хронического миелолейкоза. Современная онкология. 2001.Т 3 № 2:46-48.

8. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. Пер. с англ. М.:Мир,1999:91,375-376, 395-397.

9. Baer M.R., Stewart С.С., Lawrence D. et al. Acute mieloid leukemia with 11q23 translocations: myelomonocytic immunophenotype by multiparameter flow cytometry. Leukemia. 1998;12:317-325.

10. Barrett A.J., Horowits M.M., Ash R.C. et al. Bone marrow transplantation for Philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia. Blood. 1992;79:3067-3073.

11. Bedi A., Zehnbauer B.A., Barberand J.P. et al. Inhibition of apoptosis by BCR/ABL in chronic myelogenous leukemia. Blood. 1999;83:2038-2044.

12. Ben-Neriah Y., Daley G.Q., Mes-Masson A.M. et al. The chronic myeloid leukemia-specific p210 protein is the product of the bcr/abl hybrid gene. Science. 1986;233:212-214.

13. Von Bergh A., Gargallo P., de Prijck B. et al. Cryptic t(4;11) encoding MLL-AF4 due to insertion of 5' MLL seguences in chromosome 4. Leukemia 2001;15:595-600.

14. Bernard OA, Berger R. Molecular basis of 11q23 rearrangements in hematopoietic malignant proliferations. Genes Chromosome Cancer. 1995; 13:7585.

15. Birke M., Schreiner S., Garcfa-Cuelar M-P. et al. The MT domain of the proto-oncoprotein MLL binds to CpG-containing DNA and discriminates against methylation. Nucleic Acids Research. 2002;Vol.30,M:958-965.

16. Bloomfield C.D., Goldman A.L., Alimena G. et al. Chromosomal abnormalities identify high-risk and low-risk patients with acute lymphoblastic leukemia. Blood. 1986;67:415-420.

17. Bower M.T Parry P., Carter M. et al. Prevalence and clinical correlations of MLL gene rearrangements in AML-M4/5. Blood. 1994,84:3776.

18. Butler L.H., Slany R., Cui X. et al. The HRX proto-oncogen product is widely expressed in human tissues and localizes to nuclear stuctures. Blood. 1997; 89:3361-3364.

19. Caldas C., So C.W., MacGregor A. et al. Exon scrambling of MLL transcripts occur commonly and mimic partial genomic duplication of the gene.Gene.1998;208:167-69.

20. Caligiuri M.A., Schichman S.A.,Strout M.P. et al. Molecular rearrangement of the ALL-1 gene in acute myeloid leukemia without cytogenetic evidence of 11q23 chromosomal translocations. Cancer Res. 1994;54:370-373.

21. Caligiuri M.A, Strout M.P., Lawrence D. et al. Rearrangement of ALL1 (MLL) in acute myeloid leukemias with normal cytogenetics. Cancer Res. 1998;58:55-59.

22. Caligiuri M.A., Strout M.P., Oberkircher A.R. etal. The partial tandem duplication of ALL1 in acute myeloid leukemia with normal cytogenetics or trisomy 11 is restricted to one chromosome. Proc Natl Acad Sci USA. 1997;94:3899-3902.

23. Chan LC., Karhi K.K., Rayter S.L et al. A novel abl protein expressed in Philadelphia chromosome positive acute lymphocytic leukemia. Nature. 1987;325:635-637.

24. Cimino G., Rapanotti M.C., Elia L et al. AII-1 gene rearrangements in acute myeloid leukemia: assotiation with M4-M5 Frent-American-British classification subtypes and young age. Cancer Res. 1995;55:1625-1629.

25. Cotter T.G. BCR-ABL: an anti-apoptosis gene in chronic myelogenous leukemia. Leukemia and Lymphoma, 1995;18:231-236.

26. Djabali M., Selleri L, Parry P. et al. A trithorax-like gene is intertupted by chromosome 11q23 translocations in acute leukemias. Nat Genet. 1992;2:113-118.

27. Druker B.J., Tamura S., Buchdunger E. Effect of a selective inhibitor of the АЫ tyrosine kinase on the growth of Bcr-Abl positive cells. Nat Med. 1996;2:561-566.

28. Ennas M.G., Sorio C., Greim R. et al. The ALL-1/MLL/HRX antigen is predominantly localized in the nucleus of resting and proliferating peripheral blood mononuclear cells. Cancer Res. 1997,57:2035

29. Faderl S., Kantarjian H.M., Talpaz M. et al. Clinical significance of cytogenetic abnormalities in adult acute lymphoblastic leukemia.Blood, 1998,91,№11:3995-4019.

30. Faderl S., Talpaz M., Estrov Z. et al. The biology of chronic myeloid leukemia. N Engl J Med. 1999;341:164-172.

31. Fidanza V., Melotti P., Yano T. et al. Double knockout of the ALL-1 gene blocks hematopoietic differentiation in vitro. Cancer Res. 1996;56:1179.

32. Gale R.P., Grosveld G.,Canaani E.et al. Chronic myelogenous leukemia:biology and therapy. Leukemia.1993;7, №4:653-658.

33. Gehly G.B., Bryant E.M., Lee A.M. et al. Chimeric BCR-ABL messenger RNA as a marker for minimal residual disease in patients transplanted for Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia. Blood. 1991;78:458-465.

34. Gleisser В., Rieder H.t Thiel E.et al. Prospective study of BCR-ABL (by RT-PCR) in adult acute B-lineage lymphoblastic leukemia: RT-nested PCR reliability in comparison with cytogenetic evidence. Leukemia.2001; Vol 15,1834-1840.

35. Goekbuget N., Hoelzer D., Arnold R., et al. Treatment of adult ALL according to protocols of the German Multicenter Study Group of Adult ALL (GMALL). Hematol Oncol Clin North Am. 2000;14:1-19.

36. Harbott J., Mancini M., Verellen-Dumoulin C. et al. Hematological malignancies with deletion of 11q23: cytogenetic and clinical aspects. Leukemia. 1998;12:823-827.

37. Harrison C.J., Cuneo A., Clark R. et al. Ten novel 11q23 chromosomal partner sites. Leukemia. 1998;12:811-813.

38. Hoelzer D. Acute lymphoblastic leukemia progress in children, less in adults. N Engl J Med. 1993;329:1343-1344.

39. Hoelzer D., Gokbuget N., Martin H. Management of poor risk adult ALL. Ibid. 1998;34-37.

40. Hrusak O., Porwit-MacDonald A. Antigen expression patterns reflecting genotype of acute leukemias. Leukemia.2002;16:1233-1258.

41. Innis M., Gelfand D., Brow M. DNA sequencing of polimerase chain reaction-amplified DNA. PNAS USA 1988;85:9436-9440.

42. Janssen JWG., Fonatsch C., Ludwig W-D. et al. Polymerase chain reaction analysis of BCR/ABL sequences in adult Philadelphia chromosome-negative acute lymphoblastic leukemia patients. Leukemia. 1992;6:463-464.

43. Johansson В., Moorman A.V., Seeker-Walker L.M. Derivative chromosomes of 11q23 translocations in hematologic malignancies. Leukemia. 1998;12:828-833.

44. Kawaguchi Y., Jinnay I., Nagai K. et al. Effect of selective ABL tyrosine kinase inhibitor, STI571,on in vitro growth of BCR-ABL-positive acute lymphoblastic leukemia cells. Leukemia.2001; 15, №4:590-594.

45. Kelliher M., McLaughlin J., Witte O., Rosenberg N. Induction of a chronic myelogeous leukemia-like syndrome in mice withv-abl and BCR/ABL.// PNAS. 1990 v87 pp6649-6652.

46. Kolomietz E., Al-Maghrabi J., Brennan S. et al. Primary chromosomal rearrangements of leukemia are frequently accompanied by extensive submicroscopic deletions and may lead to altered prognosis. Blood. 2001 ;97(11 ):3581-3588.

47. Kourlas P.J.r Strout M.P., Beckneil B. et al. Identification of a gene at 11q23 encoding a guanine nucleotide exchange factor: evidence for its fusion with MLL in acute myeloid leukemia. Proc. Natl. Acad.Sci. USA 2000;97,№5:2145-2150.

48. Kurzrock R., Gutterman J.U., Talpaz M. The molecular genetics of Philadelphia chromosome-positive leukemias. N Eng J Med. 1988;319:990-998.

49. Liu Yin J.A. Minimal residual disease in acute myeloid leukemia. Best Practice & Research Clinical Haematology. 2002; 15(1): 119-125.

50. Lugo T.G., Pendergast A.M., Muler A.J. et al. Tirosine kinase activity and transformation potency of bcr/abl oncogene product. Science. 1990,247:10791083.

51. Marcucci G., Strout M.P., Bloomfield C.D. et al. Detection of unique ALL1 (MLL) fusion transcripts in normal human bone marrow and blood: distinct origin of normal versus leukemic ALL1 fusion transcripts. Cancer Res. 1998;58:790-793.

52. Maurer J., Janssen JWG., Thiel E. et al. Detection of chimeric BCR-ABL genes in acute lymphoblastic leukemia by polimerase chain reaction. Lancet. 1991; 337:1055-1058.

53. Maurer J., Kinzel H., Nentwig T. et al. Molecular diagnosis of the Philadelphia chromosome in chronic myelogenous and acute lymphoblastic leukemias by PCR. Disease Markers. 1990;8:211-218.

54. Melo J.V. The diversity of BCR- ABL fusion proteins and their relationship to leukemia phenotype. Blood. 1996;88(7):2375-2384.

55. Mitterbauer G., Nemeth P., Washa S et al. Quantification of minimal residual disease in patients with BCR-ABL-positive acute lymphoblastic leukemia using quantitative competitive polymerase chain reaction. Br J Haematol. 1999; 106:634643.

56. Mrozek K., Bloomfield C.D. Chromosome aberrations in de novo acute myeloid leukemia in adults: clinical implications. Rev Clin Exp Hematol. 1998;5:44-49.

57. Mrozek K., Heinonen K., de la Chapelle A. et al. Clinical significance of cytogenetics in acute myeloid leukemia. Semin Oncol. 1997;24:17-31.

58. Munoz L., Nomdedeu J.F., Villamor N. et al. Acute myeloid leukemia with MLL rearrangements: clinicobiologycal features, prognostic impact and value of flow cytometry in the detection of residual leukemic cells. Leukemia 2003;17:76-82.

59. Nilson I., Lochner K., Siegler G. et al. Exon/intron structure of the human ALL-1 (MLL) gene involved in translocations to chromosomal region 11q23 and acute leukemias. Br J Haematol. 1996; 93:966-972.

60. Ottmann O.G., Druker B.J., Sawyers C.L. et al. A phase 2 study of imatinib in patients with relapsed or refractory Philadelphia chromosome-positive acute lymphoid leukemias. Blood. 2002; 100(6): 1965-1971.

61. Park J.P., Ladd S.L, Ely P. et al. Amplification of the MLL region in acute myeloid leukemia. Cancer Genet Cytogenet 2000,121:198-205.

62. Poirel H., Rack K., Delabesse E. et al. Incidence and characterization of MLL gene (11q23) rearrangements in acute myeloid leukemia M1 and M5. Blood. 1996;87:2496-2499.

63. Preti H.A., O'Brien S., Giralt S. et al. Philadelphia-chromosome-positive adult acute lymphocytic leukemia:characteristics, treatment resalts, and prognosis in 41 patients. Am J Med. 1994;97:60-65.

64. Preudhomme C., Henic N., Cazin В et al. Good correlation between RT-PCR analysis and relapse in Philadelphia (Phl)-positive acute lymphoblastic leukemia (ALL). Leukemia. 1997;11:294-298.

65. Pui C.H., Kane J. R., Crist W.M. Biology and treatment pf infant leukemias. Leukemia. 1995;9:762-764.

66. Pui C.H., Relling M.V., Rivera G.K. et al. Epipodophyllotoxin-related acute myeloid leukemia: a study of 35 cases. Leukemia. 1995;9:1990-1993.

67. Radich J.P. Molecular measurement of minimal residual disease in Philadelphia-positive acute lymphoblastic leukemia. Best Practice & Research Clinical Haematology. 2002;15(1):91-103.

68. Radich J.P., Kopecky K. J., Boldt D.H. et al. Detection of BCR-ABL fusion genes in adult acute lymphoblastic leukemia by polymerase chain reaction. Leukemia. 1994;8:1688-1695.

69. Radich J.P., Genly G., Lee A. et al. Detection of bcr-abl transcripts in Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia after marrow transplantation. Blood. 1997;89:2602-2609.

70. Rieder H., Ludwig W-D., Gassmann W. et al. Prognostic significance of additional chromosome abnormalities in adult patients with Philadelphia chromosome positive acute lymphoblastic leukemia. Br J Haematol. 1996;95:678-691.

71. Rogaia D., Grignani F., Carbone R. et al. The localization of the HRX/ALL1 protein to specific nuclear subdomains is altered by fusion with its eps15 translocation partner. Cancer Res. 1997;57:799-802.

72. Rowe D., Breese G.J.,Lennard A. et al. Late-appering MLL rearrangement arising as a secondary change in adult acute myeloid leukemia. Genes, Chromosomes and Cancer 2002, 34:126-128.

73. Sawyers C.L. Molecular consequences of the BCR-ABL translocation in chronic myelogenous leukemia. Leukemia and Lymphoma, 1993;11, Suppl 2:101-103.

74. Schichman S.A, Caligiuri M.A., Gu Y. et al. ALL-1 partial duplication in acute leukemia. Proc Natl Acad Sci USA. 1994;91:6236-6239.

75. Schichman S.A., Caligiuri M.A., Strout M.P. et at. ALL-1 tandem duplication in acute myeloid leukemia with a normal karyotype involves homologous recombination between Alu elements. Cancer Res. 1994;54:4277-4280.

76. Schnittger S., Kinkelin U., Heineske A et al. Screening for MLL tandem duplication in 387 unselected patients with AML identify a prognostically unfavorable subset of AML Leukemia. 2000;14:796-804.

77. Schrappe M., Arico M., Harbott J. et al. Philadelphia chromosome-positive (Ph+) childhood acute lymphoblastic leukemia: good initial steroid response allows early prediction of a favorable treatment outcome. Blood. 1988;92:2730-2741.

78. Seeker-Walker LM., Craig J.M., Hawkins J.M.,et al. Philadelphia positive acute lymphoblastic leukemia in adults: age distribution, BCR breakpoint and prognostic significance. Leukemia. 1991;5:196-199.

79. Seeker-Walker LM. General report on the European Union Concerted Action Workshop on 11q23, London, UK. May 1997. Leukemia. 1998;12:776-778.

80. Shiah H-S., Kuo Y-Y., Tang J-L. et al. Clinical and biologycal amplifications of partial tandem duplication of the MLL gene in acute myeloid leukemia without chromosomal abnormalities at 11q23. Leukemra.2002;16:196-202.

81. Shtivelman E., Lifshitz B.t Gale R.P. et al. Fused transcript of c-abl and bcr genes in chronic myeloid leukemia. Nature. 1985;315:550-554.

82. Sierra J., Storer В., Hansen J.A., et al. Transplantation of marrow cells from unrelated donors for treatment of high-risk acute leukemia: the effect of leukemic burden, donor HLA-matching, and marrow cells dose. Blood. 1997;89:4226-4235.

83. Sirard C., Laneuville P., Dick J. Expression of BCR/ABL abrogates factor-dependent growth of human hematopoietic M07E cells by an autocrine mechanism. Blood. 1994;83:1575-1585.

84. Slovak M.L., Traweek S.T., Willman C.L. et al. Trisomy 11: an association with stem/progenitor cell immunophenotype. Br J Haematol. 1995;90:266-273.

85. Smith M.A., McCaffrey R.P., Karp J.E. The secondary leukemias: challenges and research directions. J Natl Cancer Inst. 1996:88:407-408.

86. Strout M.P., Caligiuri M.A., Bloomfield C.D. Recent advances in the biology and management of primary acute myeloid leukemia with rearrangement of the MLL gene. Medscape Oncology J 2000,3(3):1-10.

87. Strout M.P., Margucci G., Bloomfield C. et al. The partial tandem duplication of ALL1 (MLL) is consistently generated by Alu-mediated homologous recombination in acute myeloid leukemia. Proc. Natl. Acad.Sci. USA 1998;95:2390-2395. Genetics

88. Thirman M.J., Gill H.J., Burnett R.C. et al. Rearrangement of MLL gene in lymphoblastic and acute myeloid leukemias with 11q23 chromosomal translocations. N Engl J Med. 1993;329:909-914.

89. Thomas D.A, Faderl S., Cortes J. et al. Update of the Hyper-CVAD and Imatinib Mesylate regimen in Philadelphia (Ph) positive acute lymphocytic leukemia (ALL). Blood. 2003; Vol 102, №11-suppl 1,abstr790.

90. Tkachuk D.C., Kohler S., Cleary M.L. Involvement of a homolog of Drosophila trithorax by 11q23 chromosomal translocations in acute leukemias. Cell. 1992;71:691-700.

91. Verfaille C.M., McCarthy J.B., McGlave P.B. Mechanisms underlying abnormal trafficking of malignant progenitors in chronic myelogenous leukemia, j Clin Invest.1992;90:1232-1249.

92. Watari K., Tojo A., Nagamura-lnoue T. et al. Identification of a melanoma antigen, PRAME, as a BCR/ABL-inducible gene. FEBS Letters. 2000;466:367-371.

93. Westbrook C.A., Hooberman A.L. Spino c., et al. Clinical significance of the bcr-abl fusion gene in adult acute lymphoblastic leukemia: a cancer and leukemia group В study. Blood. 1992;80:2983-2990.

94. Yu B.D., Hess J.L., Horning S. E. et al. Altered Hox expression and segmental identity in MLL-mutant mice. Nature. 1995;378:505-508.

95. Ziemin-van der Poel S., McCabe N.R., Gill H.J. et al. Identification of a gene, MLL, that the breakpoint in 11q23 translocations associated with human leukemias. Proc Natl Acad Sci USA. 1991;88:10735-10739.