Особенности показателей клеточного иммунитета у больных разными формами туберкулеза легких и влияние на эти показатели полиоксидония тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Комогорова, Екатерина Эдуардовна

• Комогорова, Екатерина Эдуардовна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Комогорова, Екатерина Эдуардовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Иммунология туберкулезного процесса.

Фагоцитоз макрофагами М. tuberculosis.

Судьба после М. tuberculosis фагоцитоза.

Возможные причины персистенции М. tuberculosis.

Нейтрофилы в защите против М. tuberculosis.

Участие лимфоцитов в иммунном ответе против М. tuberculosis.

С04+-лимфоциты.

CD8+-лимфоциты.

NK- клетки.

Роль цитокинов.

ФНОа.

ИФНу.

Интерлейкин-12.

Интерлейкин-10.

Отечественный иммуномодулятор полиоксидоний.

Взаимодействие с клетками.

Проникновение внутрь клеток.

Влияние полиоксидония на фагоцитарную активность клеток.

Влияние полиоксидония на продукцию цитокинов in vitro.

Области применения и клиническая эффективность.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Реактивы и оборудование.

Характеристика обследованных групп.

Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами.

Определение внутриклеточной бактерицидности нейтрофилами.

Определение продукции активных форм кислорода.

Выделение нейтрофилов и определение в них содержания ИФНу.

Выделение мононуклеаров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов.

Определение СБЗ+-лимфоцитов, содержащих ИФНу.

Определение ФНОа и ИФНу в супренатантах культуры мононуклеаров.

Постановка реакции бласт-трансформации.

Неспецифическая реакция бласт-трансформации.

Антигенспецифическая реакция бласт-трансформации.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Особенности показателей иммунного ответа у больных туберкулезом легких.

Особенности популяционного состава лимфоцитов.

Оценка фагоцитарной активности.

Нейтрофилы в защите против М. tuberculosis.

Содержание CD3+-лимфоцитов, содержащих ИФНу.

Продукция цитокинов.

Продукция ФНОа.

Продукция ИФНу.

Оценка реакции бласт-трансформации.

Пример сравнения клинических и иммунологических показателей.

Оценка изменений показателей иммунитета больных инфильтративным туберкулезом легких после лечения полиоксидонием, включенным в комплексную терапию больных.

Изменение процентного содержания различных популяций лимфоцитов.

Фагоцитарное звено.

Изменение количества CD3+-лимфоцитов, продуцирующих ИФНу.

Продукция цитокинов (ФНОа, ИФНу).

Реакция бласт-трансформации.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности показателей клеточного иммунитета у больных разными формами туберкулеза легких и влияние на эти показатели полиоксидония»

Актуальность темыСовременное положение с туберкулезом в России следует характеризовать, как серьезную и бурно нарастающую эпидемию. Это заболевание прочно и с большим отрывом заняло первое место среди всех инфекций и продолжает быстро распространяться. За последние 10 лет основные его эпидемиологические показатели возросли более чем в 2 раза и стали самыми высокими в Европе. В среднем по России за 2000 г. заболеваемость туберкулезом достигла 90,4 на 100 тыс., а смертность -20,4 на 100 тыс. населения. Особенно тяжелая ситуация сложилась на Дальнем Востоке, в Сибири, в районах Северного Кавказа, Калмыкии, среди народов Крайнего Севера. В отдельных регионах заболеваемость туберкулезом превышает средний по России уровень в 50 раз (2, 8, 21, 111, 106).

Нарастание эпидемии туберкулеза в нашей стране сопровождается не только количественными, но и выраженными качественными изменениями этого заболевания. Наиболее наглядным отражением этого сдвига является увеличение частоты тяжелых, распространенных и бурно прогрессирующих форм туберкулеза среди впервые заболевших. Это нарастание оказалось столь значительным, что вынудило восстановить в клинической классификации туберкулеза такие его формы, как казеозная пневмония и милиарный туберкулез, уже забывшиеся и ставшие редкостью в предшествовавшие эпидемии годы. Эпидемиологическая опасность в этих случаях особенно велика, поскольку такие больные в подавляющем большинстве случаев бывают массивными бактериовыделителями и становятся источником заражения, как окружающих больных, так и медперсонала (11, 38).

В патогенезе туберкулеза перестройка иммунной системы играет весьма значительную роль. В связи с этим, изучение иммунного статуса при туберкулезе, отдельных его характеристик у больных на различныхэтапах лечения имеет большое значение для решения вопроса о рациональной терапии, выборе направления лечебного воздействия, а также для оценки течения и прогнозирования туберкулезного процесса (13, 7). Сведения об иммунной системе, межклеточных взаимодействиях в организме, накопленные за последние десятилетия, позволяют по-новому подойти к разработке патогенеза туберкулеза. Формирование полирезистентных штаммов микобактерий туберкулеза и заметное увеличение числа больных с иммунодефицитами различной природы создают новые проблемы перед фтизиатрами всего мира. В настоящее время имеется насущная необходимость изучения иммунологии различных форм туберкулеза. Без продолжения таких исследований трудно понять причины современного патоморфоза туберкулеза, повышения уровня заболеваемости, терапевтических неудач и смертельных исходов (14, 6,15).

До сих пор отсутствуют четкие представления об иммунопатогенезе туберкулезной инфекции и, в частности, понимание того, каким образом микобакгериям туберкулеза удается преодолеть иммунный надзор (21, 16, 19). Многочисленными исследованиями показано, что наряду с признаками активации течение туберкулеза легких сопряжено с развитием Т-клеточной иммуносупрессии, выраженность которой во многом определяет риск неблагоприятного исхода заболевания. В этой связи изучение механизмов формирования иммунной недостаточности, в том числе нарушений антигенспецифического ответа, представляется важным аспектом, являясь основой для разработки новых методов прогноза течения и лечения туберкулеза (20, 1).

Ранее было убедительно показано, что для распространенных, прогрессирующих форм туберкулеза характерен выраженный дефицит Т-лимфоцитов, угнетение их функциональной активности (58, 77, 96). При ограниченных малоактивных формах туберкулеза нарушения иммунитета, как правило, минимальны. В меньшей степени изучены у больных разными формами туберкулеза изменения продукции цитокинов,принимающих участие в развитии воспаления и иммунного ответа (112, 114, 51).

Туберкулез - хроническое инфекционное заболевание, протекающее с преимущественным внутриклеточным (в макрофагах) паразитированием микобактерий. Несмотря на самую современную химиотерапию, лечение туберкулеза, как правило, бывает длительным и не всегда эффективным. Одной из причин безуспешного лечения, по общепринятому мнению, является недостаточная эффективность защитных механизмов. Другая причина этой грозной ситуации появление больных с первичной лекарственной устойчивостью. Данная ситуация требует внести коррективы в проведение противотуберкулезной терапии. Ориентация только на химиотерапию является ошибочной. У больных туберкулезом легких в процессе успешной химиотерапии нарядус уменьшением бактериальной нагрузки отмечается нормализация<нарушенных иммунологических показателей. Однако у части больных этого не происходит, что сопровождается замедленной регрессией туберкулезного процесса. Развитие процессов репарации, в частности, закрытие полостей распада, связано с состоянием макроорганизма, с состоянием системы иммунитета. Замедленная регрессия туберкулезного процесса и исходно измененная иммунологическая реактивность организма в современных условиях являются основанием для применения иммуномодуляторов (8, 3, 10). На вооружении фтизиатров имеется опыт сочетанного применения кортикостероидов и иммуностимуляторов, таких, как тактивин, тималин, тимактин, а также опыт использования иммуномодулятора кемантана. Препараты применялись только в комплексе с полноценным противотуберкулезным лечением. Клинический опыт свидетельствует о благоприятном влиянии на лечение туберкулеза таких препаратов, как спленин, левамизол, диуцифон, туберкулин, вакцина БЦЖ. Включение в комплексную терапию больных туберкулезом иммуномодуляторов способствует ускорению нормализации показателей иммунитета и более быстрой регрессии туберкулезного процесса. Актуальной задачей является поиск новыхотечественных иммунокоррегирующих препаратов и изучениемеханизмов их действия.

Характерными чертами туберкулезной инфекции является недостаточность собственных бактерицидных систем макрофагов для элиминации микобактерий (4, 9). В связи с этим эффективным может являться использование нового иммуномодулятора полиоксидония (per. №96/302/9, патент РФ №2073031, производитель - ООО «Иммафарма», Москва). Активация клеток моноцитарно - макрофакальной системы, которая происходит под влиянием полиоксидония, ведет к повышению миграции нейтрофилов в воспалительный очаг, усилению активности лизосомальных ферментов, повышению способности фагоцитов поглощать и убивать микробы. Параллельно с этим происходит и активация клеточного иммунитета - повышается способность естественных киллеров и антигенспецифических киллеров убивать клетки, зараженные внутриклеточными возбудетелями. Полиоксидоний способен удалять из организма различные кислородные радикалы, что существенно понижает их повреждающее действие на органы и ткани и снижает остроту воспалительного процесса. Данный препарат стабилизирует мембраны клеток, существенно снижает чувствительность клеток к повреждающему действию некоторых химиотерапевтических лекарственных средств (12, 8).

В литературе имеются данные о нормализации показателей иммунного статуса у больных туберкулезом легких при применении полиоксидония. Однако для более глубокого изучения характера воздействия полиоксидония на иммунную систему больных туберкулезом необходимо дальнейшее исследование его влияния на показатели иммунного статуса, в том числе, на антигенспецифическую пролиферативную активность лимфоцитов и продукцию цитокинов (2).

Цель работыЦелью данной работы было исследование показателей клеточного иммунитета больных различными формами туберкулеза легких, в том числе, определение СОЗ+-клеток, продуцирующих ИФНу, антигенспецифической пролиферативной активности лимфоцитов и оценка нарастания продукции ФНОа и ИФНу в ответ на специфическую и неспецифическую стимуляцию. Также целью работы было изучение влияния на эти показатели полиоксидония, включенного в комплексную терапию больных инфильтративиой формой туберкулеза легких.

Задачи исследования1. Изучить функциональную активность фагоцитарных клеток, в том числе, исследовать нейтрофилы на предмет содержания в них ИФНу.

2. Определить уровень С133 '-клеток, содержащих ИФНу, в комплексе с основными параметрами иммунного статуса у больных с различными формами туберкулеза легких.

3. Определить изменение нарастания продукции ФНОа и ИФНу мононуклеарами периферической крови больных различными формами туберкулеза легких после специфической и неспецифической стимуляции клеток.

4. Определить пролиферативную активность лимфоцитов у больных различными формами туберкулеза легких в ответ на неспецифическую и специфическую стимуляцию5. Изучить влияние полиоксидония, включенного в комплексную терапию больных инфильтративиой формой туберкулеза, на содержание СОЗ+-клеток, продуцирующих ИФНу.

6. Изучить влияние полиоксидония, включенного в комплексную терапию больных инфильтративным туберкулезом, на нарастание продукции ФНОа и ИФНу после специфической и неспецифической стимуляции мононуклеаров периферической крови больных.

7. Изучить влияние полиоксидония, включенного в комплексную терапию больных инфильтративным туберкулезом, на пролиферативный ответ лимфоцитов после специфической и неспецифической стимуляции клеток.

Научная новизна работыУстановлено наличие ИФНу в нейтрофилах, которые могут являться накопителями и первыми источниками этого цитокина в месте инфицирования.

Впервые определено содержание СБЗ+-клеток, продуцирующих ИФНу, у больных различными формами туберкулеза легких и выявлено значительное снижение их у больных по сравнению со здоровыми донорами.

Выявлено снижение нарастания продукции ФНОа и ИФНу в ответ на специфическую стимуляцию мононуклеаров у больных наиболее тяжелыми формами туберкулеза легких и сохранение нарастания продукции цитокинов в ответ на неспецифическую стимуляцию.

Впервые изучено влияние иммуномодулятора полиоксидония на антигенспецифический и неспецифический пролиферативный ответ лимфоцитов у больных инфильтративной формой туберкулеза легких. При этом выявлено повышение пролиферативной активности лимфоцитов в ответ на стимуляцию ФГА и РРБ.

Впервые выявлено повышение сниженной продукции ФНОа и некоторое снижение повышенной продукции ФНОа у больных инфильтративной формой туберкулеза легких, в комплексную терапию которых был включен полиоксидоний.

Также впервые выявлено повышение нарастания продукции ИФНу у больных при включении в терапию полиоксидония. При этом препарат не оказывал влияния на нормальную и высокую продукцию цитокина.

Практическая значимостьРанее было доказано, что для распространенных, прогрессирующих форм туберкулеза характерен выраженный дефицит Т-лимфоцитов, угнетение их функциональной активности. При ограниченных малоактивных формах туберкулеза нарушения иммунитета, как правило, минимальны. В меньшей степени изучены у больных разными формами туберкулеза изменения продукции цитокинов, принимающих участие в развитии воспаления и иммунного ответа.

В данной работе проведено исследование таких важных показателей иммунитета как продукция цитокинов, пролиферативный ответ, содержание СОЗ+-лимфоцитов, содержащих ИФНу, у больных разными формами туберкулеза легких.

Установлено, что включение полиоксидония в комплексную терапию больных инфильтративным туберкулезом легких, протекающем с выраженными явлениями деструкции, активируется клеточный иммунный ответ, что проявляется увеличением содержания СБ4+- и СБЗ+ИФНу+ клеток, усилением продукции ФНОа и ИФНу мононуклеарами периферической крови больных в ответ на специфический стимулятор РРЭ, увеличением пролиферативного ответа. В результате активность фагоцитарных клеток, осуществляющих киллинг и элиминацию микобактерий, а также нормализуются процессы формирования гранулемы и ограничения инфекционного процесса. Это в свою очередь повышает эффективность лечения и предотвращает переход заболевания в тяжелые хронические формы.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Комогорова, Екатерина Эдуардовна

выводы

1. Установлено, что нейтрофилы содержат внутриклеточно ИФНу и, возможно, являются накопителями и первыми источниками его в очаге инфекции.

2. При всех формах туберкулеза легких уровень СБЗ+ -лимфоцитов, содержащих ИФНу, ниже, чем у здоровых доноров. Самое низкое содержание чаще определялось у больных казеозной пневмонией и диссеминированным туберкулезом. Содержание СБЗ+-лимфоцитов, продуцирующих ИФНу, у больных инфильтративным туберкулезом без явлений деструкции было на уровне показателей доноров.

3. Слабый ФГА-индуцированный пролиферативный ответ характерен для больных фиброзно-кавернозным и диссеминированным туберкулезом. Наиболее выраженное угнетение РРБ-индуцированного пролиферативного ответа регистрировали у больных с казеозной пневмонией и диссеминированным туберкулезом.

4. Для фиброзно-кавернозной формы свойственно высокое содержание ФНОа и нормальное ИФНу. Для казеозной пневмонии, диссеминированного и инфильтративного с явлениями деструкции туберкулеза характерны низкие показатели и ФНОа, и ИФНу. При инфильтративном туберкулезе без явлений деструкции исследуемые показатели клеточного иммунитета были на достаточно высоком уровне.

5. Полиоксидоний оказывает положительное влияние на показатели клеточного иммунитета, способствует увеличению количества СБЗ+ лимфоцитов, содержащих ИФНу, усиливает специфический и неспецифический пролиферативный ответ.

6. Применение полиоксидония способствовало повышению нарастания продукции ИФНу. В отношении ФНОа полиоксидоний действовал двусторонне: повышал сниженную продукцию и несколько снижал повышенную продукцию цитокина.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Комогорова, Екатерина Эдуардовна, 2005 год

1. Аршинова С.С., Симонова A.B., Стаханов В.А., Пинегин Б.В. Информативность показателей иммунной системы при применении в комплексном лечении туберкулеза легких полиоксидония. Медицинская иммунология. 2001, Т. 3, №4, с. 567-575.

2. Аршинова С.С., Пинегин Б.В., Мазуров Д.В., Голубева Н.М., Стаханов В.А., Перевезенцева Е.О. Новый иммуномодулятор полиоксидоний в комплексной терапии больных туберкулезом легких. Иммунология. 2001, №3, с. 35-41.

3. Авербах М.М., Литвинов В.И. Иммунология и иммуногенетика туберкулеза: состояние и перспективы развития исследований. Проблемы туберкулеза. 1989, № 2, с. 65-69.

4. Визель A.A., Гурылева М.Э., Насретдинова Г.Р. Значение фактора некроза опухолей в патогенезе и лечении саркоидоза. Клиническая медицина. 2003, №9, с. 4-6.

5. Дамбаева C.B., Мазуров Д.В., Голубева Н.М., Пинегин Б.В. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность фагоцитарных клеток периферической крови доноров. Иммунология. 2000, №6, с. 15-20.

6. Добрица В.П., Ботерашвили Н.М., Добрица Е.В. Современные иммуномодуляторы для клинического применения. Руководство для врачей. 2001, СПб.

7. Ильина Н.И., Латышева Т.В., Пинегин Б.В., Сетдикова Н.Х. Синдром вторичной иммунной недостаточности (протоколы диагностики и лечения). Иммунология. 2000, №5, с. 8-9.

8. Еремеев В.В., Майоров К.Б. Взаимодействие макрофаг микобактерия в процессе реакции микроорганизма на туберкулезную инфекцию. Проблемы туберкулеза. 2002, №3, С. 54-58.

9. Карачунский М.А. Туберкулез в наши дни. Русский Медицинский журнал. 2001, Т. 9, №21, 951-953.

10. Ю.Мазуров Д.В., Хамидуллина К.Ф., Пинегин Б.В. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии. Иммунология. 2000, №1, с. 57-62.

11. П.Мишин В.Ю., Борисов С.Е., Соколова Г.Б., Васильева И.А., Дорожкова И.Р., Сафонова С.Г., Сидорова С.В. Разработка современных протоколов диагностики и лечения туберкулеза органов дыхания. Consilium medicum. 2002, Т. 3, №3, с. 148-154.

12. Мишин В.Ю. Лекарственно-устойчивый туберкулез легких: клиника, диагностика и лечение. Consilium Medicum. 2001. Т. 4. № 12. С. 645-650.

13. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Иммунорегуляция антимикробной активности нейтрофилов человека. Иммунология. 1994, №5, с. 4-6.

14. Пузик В.И. Современные представления о туберкулезном воспалении. Проблемы туберкулеза. 2003. №7. С. 11-21.

15. Салина Т.Ю., Худзик Л.Б. Иммунопатогенетические механизмы в течении туберкулезной инфекции. Проблемы туберкулеза. 2001, №8, с. 32-34.

16. Свистунова А.С., Пинегин Б.В., Симонова А.В. Применение иммуномолулятора ликопида в комплексном лечении туберкулеза легких. Проблемы туберкулеза. 2002, №5, с. 21-25.

17. Стаханов В.А., Леви Д.Т., Рухамина М.Л. Специфическая иммунокоррекция и некоторые характеристики иммунного статуса у больных активным туберкулезом легких. 2000, №3, с. 51-53.

18. Туберкулез. Под ред. Хоменко А.Г. 1996, М., Медицина.

19. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Андропова Т.М. Отечественные иммунотропные лекарственные средства последнего поколения и стратегияы их применения. «Лечащий врач». 1998, № 4, с. 46-51.

20. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их применения. Клин. мед. 1996, № 8, с. 7-12.

21. Черных Е.Р., Сахно Л.В., Останин А.А. Субпопуляционная принадлежность Т-клеток, подверженных анергии и апоптозу у больных туберкулезом легких. Иммунология. 2002, № 6, с. 43-48.

22. Чуканов В.И. Проблема излечения больных туберкулезом органов дыхания. Русский Медицинский журнал. 2001, Т.9, №21, с. 954-959.

23. Ярилин A.A. Основы иммунологии. Учебник, М., 1999.

24. Aleman M, Beigier-Bompadre M, Borghetti C, de la Barrera S, Abbate E, Isturiz M, Sasiain MC. Activation of peripheral blood neutrophils from patients with active advanced tuberculosis. Clin. Immunol. 2001, v. 100, N1, p. 87-95.

25. Alun C. Kirby, Ulf Yrlid, Mary Jo Wick. The innate immune response differs in primary and secondary salmonella infection. The Journ. of Immunol. 2002, N4, p. 4450-4459.

26. Arend SM, Breedveld FC, van Dissel JT., TNF-alpha blockade and tuberculosis: better look before you leap, Neth J Med., 2003, v. 61 (4), p 1119.

27. Arriaga AK., Orozco EN., Aguilar LD., Rook GA. Immunological and pathological comparative analysis between experimental latent tuberculosisinfection and progressive pulmonary tuberculosis. Clin. Exp. Immunol. 2002, v. 128, N2, p. 229-37.

28. Basu S., Fenton M.J. Toll-like receptors: function and roles in lung disease. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2004, v. 286, N5, p. 887-92.

29. Bowie A., O'Neill L.A. The interleukin-1 receptor/Toll-like receptor superfamily: signal generator for pro-inflammatory interleukins and microbial products. J. Leukoc. Biol. 2000, v. 67, p. 508-514.

30. Choi H.S., Rai P.R., Cool C., Chan E.D. Analysis of nitric oxide synthase and nitrotyrosine expression in human pulmonary tuberculosis. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002, v. 166, p. 178-186.

31. Condos R, Rom WN, Schluger NW., Treatment of multidrug-resistant pulmonary tuberculosis with interferon-gamma via aerosol. , Lancet. 1997 May 24; 349 (9064), p. 1513-5.

32. Cowley SC, Elkins KL. CD4+ T cells mediate IFN-gamma-independent control of mycobakterium tuberculosis infection both in vitro. / Immunol. 2003 Nov. 1; 171(9): 4689-99.

33. Crevel R., Ottenhoff TH., Der Meer JW. Innate immunity to mycobacterium tuberculosis. Clin. Microbiol. Rev. 2002, v. 15, N2, p. 294-309.

34. Ehlers S. Role of tumour necrosis factor in host defence against tuberculosis: implications for immunotherapies targeting TNF. Ann Rheum. Dis. 2003, v. 62, N11, p. 37-42.

35. Esper G. Kallas, David C. Gibbons, John J. Treanor, Thomas G. Evans. Detection of intracellular antigen-specific cytokines in human T-cell population. The Journal of Infect. Diseases. 1999, vol. 179, N5, p. 1124-31.

36. Estaquier J., Ameisen JC. A role for T-helper type-1 and type-2 cytokines in the regulation of human monocyte apoptosis. Blood. 1997, v. 90, N4, p. 161825.

37. Faldt J, Dahlgren C, Ridell M. Difference in neutrophil cytokine production induced by pathogenic and non-pathogenic mycobacteria. APMIS., 2002, v.l 1, N9, p. 593-600.

38. Faldt J, Dahlgren C, Ridell M, Karlsson A. Priming of neutrophils by mycobacterial lipoarabinomannans: role of granule mobilization. Microbes Infect. 2001, v.l3,N3,p. 1101-9.

39. Florian Kern, Peter Walden, Hartmut Radtke, Andreas Radbruch, HansDieter Volk. T-cell epitope mapping by flow cytometry. Nature Medicine. 1998, vol. 4, N8, p. 975-978.

40. Flynn JL, Bloom BR. Role of Thl and Th2 cytokines in the response to mycobacterium tuberculosis. Ann N Y Acad. Sci. 1996, v. 795, N10, p. 13746.

41. Flynn JL., Ernst JD. Immune responses in tuberculosis. Curr. Opin. Immunol. 2002, v. 12, N4, p. 432-6.

42. Frevert C.W., Wong V.A., Goodman R.B., Martin T.R. Rapid fluorescence -based measurement of neutrophil migration in vitro. Journ. of Immunological Methods. 1998, V. 213, p. 41-52.

43. Fu LM. The potential of human neutrophil peptides in tuberculosis therapy. Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2003, v. 7, N11, p. 1027-32.

44. Garcia M, Vargas J.A.,Castejon R., Navas E., Durantes A. Flow-cytometric assessment of lymphocyte cytokine production in tuberculosis. Tuberculosis. 2002, 82(1), p. 37-41.

45. Garybay-Escobar A, Estrada Garcia I, Estrada-Parra S. Integrated measurements by flow cytometry of the cytokines IL-2, INF-gamma, IL-12,

46. TNF-alpha and functional evaluation of their receptors in human blood. Immunol Methods. 2003, Sep; 280 (1-2): 73-88.

47. He X.S., Rehermann B., Boisvert J., Davis M.M., Greenberg H.B. Direct functional analisis of epitopespeciflc CD8+ T cells in peripheral blood. Viral Immunol. 2002, v. 14, p. 59-69.

48. Holden T. Maecker, Holli S. Dunn, Torsten Bunde, Vernon C. Miano, Louis J. Piscer. Use of overlapping peptide mixtures as antigens for cytokine flow cytometry. Journ. of Immunol. Methods. 2001, vol. 255, N 5, p. 27-40.

49. Jacobs M., Brown N., Alline N., Chretty K., Ryffel B. Tumor necrosis factor receptor 2 plays a minor role for mycobacterial immunity. Pathobiology. 2000, v. 68, N2, p. 68-75.

50. Janis E. Wigginton, Denise Kirschner. A model to predict cell-mediated immune regulatory mechanisms during human infection with mycobacterium tuberculosis. The Journ. of immunology. 2001, V. 166, p. 1951-1967.

51. Jo Anne L. Flynn, John Chan. Immunology of tuberculosis. Annu. Rev. Immunol. 2001, vol.19, N1, p. 93-129.

52. Jo EK, Park JK, Dockrell HM. Dynamics of cytokine generation in patients with active pulmonary tuberculosis. / Curr Opin Infect Dis. 2003 Jun; 16 (3): 205-10.

53. Johnson JL, Ssekasanvu E, Okwera A, Mayanja H et al. Randomized trial of adjunctive interleukin-2 in adult with pulmonary tuberculosis. / Am J Respir Crit Care Med. 2003 Jul 15; 168 (2): 185-91.

54. Jun Wang, Julia Wakeham, Zhou Xing. Macrophages are a significant sourse of type 1 cytokines during mycobacterial infection. The J. of Clin. Invest. 1999. Vol. 103. N7. P. 1023-1029.

55. Kawakami K. Promising immunotherapies with Thl-related cytokines against infectious diseasis. / J Infect Chemoter. 2003 Sep; 9 (3): 201-9.

56. Kidd P. Thl/Th2 balance: the hypothesis, its limitations, and implications for health and diseas. Altern. Med. Rev. 2003, v. 8, N3, p. 223-46.

57. Kisich KO., Higgins M., Diamond G., Heifets L. Tumor necrosis factor alpha stimulates killing of mycobacterium tuberculosis by human neutrophils. Infect. Immun. 2002, v. 70, N8, p. 4591-9.

58. Kurt A. Heldwein, Matthew J. Fenton. The role of toll-like receptors in immunity against mycobacterial infection. Microb. and Infect. 2002. Vol.4. N9. P. 937-944.

59. Lalvani R.R., Brookes R.J., Wilkinson A.S., Andersen H., Malin A.A., Dockrell G., Hill A.V.S. Human cytolytic and interferon gamma-secreting T lymphocytes specific for mycobacterium tuberculosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, p. 95-270.

60. Lee H.S., Oh J.Y., Kim Y.W., Han S.K., Shim Y.S., Yim J.J. Response of pulmonary tuberculomas to anti-tuberculous treatment. Eur. Respir. J. 2004, v. 23, N3, p. 452-5.

61. Lewinsohn D.A., Heinzel A.S., Gardner J.M., Zhu L., Alderson M.R., Lewinsohn D.M. Am. J. Respir Crit. Care Med. 2003, v. 168, N11, p. 134652.

62. Ma J., Chen T., Miller NE., Konttinen YT. Regulation of macrophage activation. Cell Mol. Life Sei. 2003, v. 60, N11, p. 2334-46.

63. Maecker H.T., Maino V.C., Picker L.J. Immunofluorescence analisis of T cell responses in health and disease. J. Clin. Immunol. 2000, v. 20, p. 391-399.

64. Marc Lipsitch. Historical intensity of natural selection for resistance to tuberculosis. Genetics. 2002. Vol. 161. P. 1599-1607.

65. Mogga SJ, Mustafa T, Sviland L, Nilsen R. In situ expression of CD40, CD40L (CD 154), IL-12, TNF-alpha, INF-gamma and TGF-betal in murine lungs during slowly progressive primary tuberculosis. / Scand J Immunol. 2003 Sep; 58 (3): 327-34.

66. Mori T., Sakatani M., Nagao K., Mitarai S., Mazurek G.H., Tsuyuguchi I. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2004, N4, p. 675-89.

67. Natalia V. Serbina, Jo Anne L. Flynn. CD8+T cells participate in the memory immune response to mycobacterium tuberculosis. Infection and Immunity. 2001, V. 69, N7, p. 4320-4328.

68. Neil W. Schluger. Recent advances in our understanding of human host responses to tuberculosis. Respir. Res. 2001. N.2. P. 157-163.

69. Neufert C, Pai RK, Noss EH, Berger M, Boom WH, Harding CV. Mycobacterium tuberculosis 19-kDa lipoprotein promotes neutrophil activation. J Immunol. 2001, v.167, N3, p. 1542-9.

70. Nigou J., Gilleron M., Thurnher M., Puzo G. Microb. And Infect. 2002, v. 4, N9, p. 945-953.

71. Pasquinelli V., Quiroga MF., Bracco MM., Sieling PA., Garcia VE. Expression of signaling lymphocytic activation molecule-associated protein interrupts INF-gamma production in human tuberculosis. J. Immunol. 2004, v. 172, N2, p. 1177-85.

72. Pedrosa J, Saunders BM, Appelberg R, Orme IM, Silva MT, Cooper AM. Neutrophils play a protective nonphagocytic role in systemic mycobacterium tuberculosis infection of mice. Infect Immun. 2000, v. 68, N2, p. 577-83.

73. Pereira CB., Palaci M., Leite OH., Benard G. Monocyte cytokine secretion in patients with pulmonary tuberculosis differs from that of healthy infected subjects and correlates with clinical manifestations. Microbes Infect. 2004, v. 6, N1, p. 25-33.

74. Pinxteren LA, Cassidy JP, Smedegaard BH, Agger EM, Andersen P. Control of latent Mycobacterium tuberculosis infection is dependent on CD8 T cells. Eur. J. Immunol. 2000, v. 30, N12, p. 3689-98.

75. Remoli M.E., Giacomini E., Lutfalla G., Pellegrini N., Coccia E.M. Selective expression of type I INF genes in human dendritic cells infected with mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 2002, v. 169, N1, p. 366-74.

76. Roach DR, Bean AG, Demangel C, France MP, Briscoe H, Britton WJ. TNF regulates chemokine induction essential for cell recruitment, granulomaformation, and clearance of mycobacterial infection. J. Immunol. 2002, v. 168, N9, p. 4620-7.

77. Schon T, Elias D, Moges F, Melese E, Tessema T. Arginine as an adjuvant to chemotherapy improves clinical outcome in active tuberculosis. / Eur Respir J. 2003 Mar; 21 (3): 483-8.

78. Seah Gt., Scott G.M., Rook G.A.W. Type 2 cytokine gene activation and its relationship to extent of diseas in patient with tuberculosis. J. Infect. Dis. 2000, v. 181, p. 385-389.

79. Seiler P, Aichele P, Raupach B, Odermatt B, Steinhoff U, Kaufmann SH. Rapid neutrophil response controls fast-replicating intracellular bacteria but not slow-replicating mycobacterium tuberculosis. J Infect. Dis. 2000, v. 181, N2, p.671-80.

80. Serbina N.V., Lazarevic V., Flynn J.L. CD4+ T cells are required for the development of cytotoxic CD8+ T cells during mycobacterium tuberculosis infection. The JI. 2001, v. 167, p. 6991-7000.

81. Seymour J. Klebanoff, Mathew A. Vadas, Ann M. Tersdorph. Stimulation of neutrophils by tumor necrosis factor. The J. of Immun. 1986. Vol. 136. P. 4220-4225.

82. Sharma S., Bose M. Role of cytokines in immune response to pulmonary tuberculosis. Asian Pac J Allergy Immunol. 2001, v. 19, N3, p. 213-9.

83. Sharma SK., Mitra DK., Balamurugan A., Pandey RM., Mehra NK. Cytokine polarization in military and pleural tuberculosis. Clin. Immunol. 2002, v. 22, N6, p. 345- 52.

84. Smith SM., Klein MR., Docklrell HM. Decreased INF-gamma and IL-4 production by human CD8+ T cells in response to mycobacterium tuberculosis in tuberculosis patients. Tuberculosis. 2002, v. 82, N1, p. 7-13.

85. Smith S, Liggitt D.s Jeromsky E., Tan X., Skerrett SJ, Wilson CB. Local role for tumor necrosis factor alpha in the pulmonary inflammatory responseto mycobacterium tuberculosis infection. Infect. Immun. 2002, v. 70, N4, p. 2082-9.

86. Sugawara I. Study on the roles of cytokines involved in mycobacterial infection. Kekkaku. 2002, v. 77, N8, p. 585-8.

87. Takatasu K., Kariyone A. The immunogenic peptide for Thl development. Int. Immunopharmacol. 2003, v. 3, N6, p. 783-800.

88. Talrejia J, Bhatnagar A, Jindal SK, Ganguly NK. Influence of mycobacterium tuberculosis on differential activation of helper T cells. Clin. Exp. Immunol. 2003, v. 131, N2, p. 292-8.

89. Tibayrenc M. A molecular biology approach to tuberculosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004, v. 101, N14, p.4721-2.

90. Toossi Z. The inflammatory response in mycobacterium tuberculosis infection. Arch. Immunol. Ther. Exp. 2000, v. 48, N6, p. 513-9.

91. Van Crevel R., Karyadi E., Preyers F. Increased production of interleukin 4 by CD4+ and CD8+ T-cells from patients with tuberculosis is related to the presence of pulmonary cavities. J. Infect. Dis. 2000, v. 181, p. 119*4-1197.

92. Vankayalapati R., Klucar P., Wizel B., Shams H., Barnes PF. NK cells regulate CD8+T- cell effector function in response to an intracellular pathogen. J. Immunol. 2004, v. 172, N1, p. 130-7.

93. Walker C., Sawicka E., Rook GA. Immunotherapy with mycobacteria. Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2003, v. 3, N6, p. 481-6.

94. Walker D„ Jason J., Wallace K., Dobbie H., Archibald L., Jarvis WR. Spontaneous cytokine production and its effect on induced production. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2002, v. 9, N5, p. 1049-56.

95. Wilsher ML., Hagan C., Prestidge R., Wells AU., Murison G. Human in vitro immune responses to mycobacterium tuberculosis. Tuber. Lung. Dis. 1999, v. 79, N6, p. 371-7.

96. Xing Z., Jordana M., Gauldie J., Wang J. Cytokines and pulmonary inflammatory and immune diseases. Histol. Histopathol. 1999, v. 17, p. 138