Опухолевая контаминация аутотрансплантатов гемопоэтических тканей у больных раком молочной железы: прогностические факторы и клиническое значение тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Прилуцкая, Марина Осиповна

• Прилуцкая, Марина Осиповна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Прилуцкая, Марина Осиповна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Отбор пациенток для исследования

2.2. Сбор ПСК

2.3. Получение образцов КМ и ПСК от больных РМЖ

2.4. Получение образцов ПСК от доноров без онкопатологии

2.5. Проведение курсов ВХТ

2.6. Оценка реакции на проводимую терапию

2.7. Получение фракции мононуклеаров

2.8. Стандартный иммуноцитохимический анализ (ИЦА)

2.9. Селекция клеток, экспрессирующих CD

2.10. Иммуноцитохимический анализ с иммунным обогащением на магнитных микросферах (ИЦА-ОММ)

2.10.1. Построение стандартных кривых анализа

2.11. Исследование клоногенного роста резидуальных опухолевых клеток in vitro

2.11.1. Идентификация колоний опухолевых клеток

2.12. Статистический анализ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Исследование факторов, влияющих на контаминацию продуктов гемопоэтических стволовых клеток у больных метастатическим 51 раком молочной железы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Опухолевая контаминация гемопоэтических продуктов - важная проблема аутотрансплантации и высокодозной химиотерапии у онкологических больных

1.1. Высокодозная химиотерапия

1.2 Аутотрансплантация стволовых клеток крови

1.3. Мобилизация стволовых гемопоэтических клеток

1.4. Особенности протоколов мобилизации СГК при ВХТ

1.5. Определение СГК с помощью экспрессии CD

1.6. Резидуальные опухолевые клетки в костном мозге и периферической крови

1.7. Методы выявления резидуальных опухолевых клеток

1.8. Методы молекулярной биологии для выявления резидуальных опухолевых клеток

1.9. Иммунодиагностика опухолей человека

1.10. Характеристики МКАТ, предназначенных для очистки трансплантата

1.11. Очистка с помощью опосредованного комплементом лизиса

1.12. Очистка с помощью иммунотоксинов

1.13. Очистка с применением иммуномагнитных микросфер

1.14. Положительный отбор гемопоэтических клеток как альтернативный метод очистки

3.1.1. Частота контаминации образцов ПСК и костного мозга

3.1.2. Исследование ассоциации между контаминацией костного мозга и контаминацией образцов ПСК

3.1.3. Исследование влияния схемы мобилизационной терапии на контаминацию образцов ПСК

3.1.4. Исследование влияния количества процедур лейкафереза на частоту контаминации образцов ПСК

3.1.5 Исследование контаминации образцов ПСК в зависимости от типа мобилизации у больных РМЖ с частичной и полной ремиссией

3.2. Опухолевая контаминация ПСК как фактор прогноза выживаемости без прогрессирования болезни и полной выживаемости больных РМЖ

3.2.1. Мультивариантный анализ взаимозависимости факторов прогноза

3.3. Исследование клоногенного роста опухолевых клеток-контаминант

3.4. Характеристика нового метода детекции опухолевых клеток в образцах ПСК: иммуноцитохимического анализа с этапом иммунного обогащения на магнитных микросферах

3.4.1. Отработка и характеристика метода ИЦА с обогащением на магнитных микросферах (ИЦА-ОММ)

3.5. Исследование эффективности очистки продуктов ПСК от остаточных клеток рака молочной железы в результате позитивной селекции клеток на экспрессию CD

3.5.1. Определение контаминации продуктов лейкафереза клетками

РМЖ с помощью стандартного ИЦА

3.5.2. Определение контаминации продуктов лейкафереза клетками

РМЖ с помощью ИЦА-ОММ

3.5.3. Количество опухолевых клеток в продуктах лейкафереза до селекции на CD34 как фактор прогноза контаминации

С034-позитивных фракций

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Опухолевая контаминация аутотрансплантатов гемопоэтических тканей у больных раком молочной железы: прогностические факторы и клиническое значение»

Угнетение гемопоэза, обусловленное применением высоких доз цитостатиков, можно компенсировать инфузией аллогенных либо аутологичных клеток костного мозга (КМ) или стволовых клеток из периферической крови (периферических стволовых клеток, ПСК). Трансплантация аутологичных гемопоэтических клеток имеет несколько потенциальных преимуществ по сравнению с аллогенной трансплантацией: нет необходимости в наличии гистосовместимого донора, отсутствует риск развития реакции «трансплантат против хозяина». Таким образом, использование аутотрансплантатов более безопасно. Главным препятствием к применению аутотрансплантатов с целью восстановления гемопоэза после ВХТ является их частая контаминация опухолевыми клетками. Реинфузия таких клеток потенциально способна привести к возникновению рецидива заболевания. Чтобы минимизировать этот эффект, костный мозг либо ПСК стараются забирать у пациентки на стадии полной ремиссии, когда доказательства контаминации костного мозга или стволовых клеток из периферической крови отсутствуют. Другим возможным решением этой проблемы является удаление из трансплантатов злокачественных клеток-контаминант без нарушения функции клеток-предшественниц гемопоэза, так называемая «очистка». Для того чтобы выявить опухолевые клетки в гемопоэтических продуктах, а также оценить эффективность очистки аутотрансплантатов, необходимо иметь в распоряжении достаточно чувствительные методы детекции таких опухолевых клеток-контаминант. В настоящее время существует несколько методов выявления остаточных опухолевых клеток, у каждого из которых есть свои преимущества и недостатки (более подробно это будет описано в литературном обзоре). Необходимо подчеркнуть, однако, что целесообразность применения того или иного метода обнаружения остаточных опухолевых клеток напрямую связана с клиническими, морфологическими и молекулярно-генетическими особенностями конкретного новообразования и требует проведения тщательных исследований.

Другой важной проблемой, связанной с проведением аутотрансплантации гемопоэтических тканей онкобольных, является выбор источника аутотрансплантата: либо костный мозг, либо стволовые клетки из периферической крови (периферические стволовые клетки, ПСК). Если в начале 90-х годов прошлого века преимущество отдавалось аутотрансплантации костного мозга (КМ), то к концу 90-х годов в подавляющем большинстве случаев стали использовать только ПСК. Это обусловлено целым рядом преимуществ, которые имеют ПСК как источник стволовых клеток по сравнению с КМ. (Эти преимущества будут описаны в главе «Обзор литературы»). Однако, концентрация ПСК в периферической крови чрезвычайно низка. Существенно увеличить количество и качество ПСК в продуктах лейкафереза удалось благодаря введению в практику мобилизационной терапии. В настоящее время используют две принципиальные схемы мобилизации ПСК: или комбинацию миелосупрессивной химиотерапии с воздействием факторов роста гемопоэтических клеток, или мобилизацию только с помощью факторов роста. При этом ассоциация между применением той или иной схемы мобилизации и контаминацией продуктов ПСК исследована недостаточно.

Таким образом, исследование характера контаминации продуктов КМ и ПСК на разных этапах их подготовки к использованию в качестве аутотрансплантатов имеет большое значение для оптимизации этой процедуры. Эта оптимизация связана с необходимостью эффективного обнаружения опухолевых клеток и их последующего удаления из состава трансплантата. Данная процедура направлена на снижение возможного риска возникновения рецидива, обусловленного введением в организм больного в составе трансплантата остаточных опухолевых клеток.

Цель работы: исследование факторов, влияющих на опухолевую контаминацию аутотрансплантатов ПСК, а также клиническое значение этой контаминации при проведении высокодозной химиотерапии у больных раком молочной железы.

Были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ частоты и интенсивности контаминации опухолевыми клетками костного мозга и продуктов лейкафереза у больных РМЖ с помощью стандартного иммуноцитохимического анализа.

2. Выявить клинические и терапевтические факторы, способные влиять на контаминацию ПСК раковыми клетками.

3. Оценить жизнеспособность «остаточных» опухолевых клеток в составе образцов костного мозга и ПСК с помощью теста на клоногенный рост клеток in vitro.

4. Исследовать, ассоциируется ли фактор контаминации продуктов ПСК с выживаемостью больных РМЖ.

5. Исследовать, повышается ли чувствительность традиционного иммуноцитохимического анализа (ИЦА) благодаря проведению этапа предварительного иммунного обогащения пула опухолевых клеток на магнитных микросферах.

6. Провести сравнительное исследование эффективности очистки С034-позитивных фракций с помощью традиционного ИЦА и ИЦА с обогащением на магнитных микросферах (ИЦА-ОММ).

Научная новизна работы

Оценка контаминации гемопоэтических трансплантатов опухолевыми клетками как фактора, потенциально влияющего на возникновение рецидивов и выживаемость больных РМЖ, ранее проводилась на выборках небольшого размера (в основном, менее 90 пациенток). Объединить данные этих исследований для совокупного анализа не представляется возможным из-за методологических различий [Weather с соавт., Cooper с соавт., Stadtmauer с соавт.]. Кроме того, далеко не все пациентки в процитированных работах адекватно реагировали на проведение ВХТ. В нашей работе эти недостатки были учтены. Впервые проведено крупномасштабное исследование (535 больных РМЖ) возможной корреляции между контаминацией КМ и ПСК опухолевыми клетками и длительностью выживаемости больных на поздних стадиях РМЖ, адекватно реагирующих на проведение ВХТ. Было установлено, что пациентки с контаминацией КМ характеризуются менее длительной выживаемостью без прогрессирования болезни, чем пациентки без нее. Контаминация ПСК является фактором, ассоциирующимся с снижением выживаемости только у пациенток, проходивших мобилизацию по комбинированной схеме и находящихся в состоянии частичной (но не полной) ремиссии на момент проведения лейкафереза. Были впервые подробно исследованы клинические и терапевтические факторы, влияющие на частоту контаминации в ПСК. Так, контаминация опухолевыми клетками КМ пациентки с высокой вероятностью позволяет предположить и контаминацию ими продуктов ПСК. Снижение частоты контаминации ПСК раковыми клетками наблюдалось при проведении комбинированной мобилизации и уменьшении количества лейкаферезов.

В данной работе был апробирован новый высокочувствительный метод обнаружения опухолевых клеток — иммуноцитохимический анализ с предварительным этапом иммунного обогащения пула опухолевых клеток на магнитных микросферах. Благодаря использованию этого метода удалось установить, что частота контаминации трансплантируемого материала гораздо выше, чем считалось ранее. Применение более чувствительного метода детекции остаточных опухолевых клеток для анализа фракций ПСК после селекции на СОЭ4-позитивные клетки позволило определить, что такая селекция является достаточно эффективным методом очистки продуктов лейкафереза от остаточных клеток РМЖ.

Научно-практическая значимость

В ходе работы показано, что опухолевая контаминация гемопоэтических тканей, предназначенных для аутотрансплантации у больных РМЖ, является неблагоприятным прогностическим фактором. Кроме того, жизнеспособность опухолевых клетокконтаминант была нами показана в исследовании их клоногенного роста in vitro. В целом, полученные данные свидетельствуют о возможном участии содержащихся в трансплантате опухолевых клеток в возникновении рецидива заболевания. Таким образом, перед проведением трансплантации необходимо осуществить очистку гемопоэтических продуктов от злокачественных клеток-контаминант. Нами также выявлен ряд клинических и терапевтических факторов, которые позволяют спрогнозировать вероятность контаминации ПСК у конкретной пациентки. Благодаря учету некоторых из этих факторов, например, при проведении мобилизации, можно снизить вероятность контаминации ПСК еще до процедуры «очистки». Так, у больных без метастазов в КМ проведение мобилизации по комбинированной схеме позволяет снизить частоту контаминации ПСК опухолевыми клетками. Кроме того, благодаря комбинированной мобилизации удается собрать необходимое количество ПСК с помощью меньшего количества процедур лейкафереза. Эти данные позволяют рекомендовать комбинированную схему мобилизации как оптимальную в сравнении с мобилизацией только цитокинами.

Был разработан и апробирован новый высокочувствительный метод детекции остаточных опухолевых клеток, представляющий собой сочетание традиционного иммуноцитохимического анализа (ИЦА) с этапом предварительного иммунного обогащения пула опухолевых клеток на магнитных микросферах. Чувствительность этого усовершенствованного метода в 20 - 50 раз выше традиционного ИЦА. Применение нового метода позволило установить, что уровень контаминации образцов гематопоэтической ткани у больных РМЖ гораздо выше, чем это считалось ранее: если стандартный ИЦА позволяет выявить контаминацию ПСК у 7% больных РМЖ на II - IV стадиях заболевания, то новый метод - у 86% пациенток. Повышение чувствительности метода детекции остаточных опухолевых клеток в трансплантате может иметь большое значение для оценки эффективности его очистки. Примером могут служить полученные нами данные по оценке уровня контаминации ПСК после проведения позитивной селекции на клетки, экспрессирующие CD34. Если стандартный ИЦА не позволил выявить опухолевые клетки ни в одном из 36 образцов С034-позитивных фракций, то в ИЦА-ОММ опухолевые клетки обнаружены в 49% С034-позитивных фракций. Одновременно с этим у В пациенток (24%) при анализе с помощью ИЦА-ОММ опухолевые клетки были обнаружены только в С034-негативных фракциях, и не обнаруживались в С034-позитивных фракциях, то есть у этих пациенток благодаря позитивной селекции на CD34 удалось полностью очистить трансплантаты в пределах чувствительности ИЦА-ОМШ. Таким образом, благодаря более чувствительному методу детекции остаточных опухолевых клеток можно лучше оптимизировать процедуру очистки трансплантата. Другим возможным приложением высокочувствительного метода обнаружения опухолевых клеток может являться мониторинг за ходом лечения пациенток. Возникновение рецидива, по-видимому, должно сопровождаться повышением количества опухолевых клеток в периферической крови, и, вероятно, может быть зафиксировано с помощью этого метода. Возможность применения ИЦА-ОММ для мониторинга за возникновением рецидива РМЖ необходимо исследовать дополнительно.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Прилуцкая, Марина Осиповна

ВЫВОДЫ

1. В результате сравнительного иммуноцитохимического анализа клеток 535 больных РМЖ II - IV стадии обнаружена контаминация костного мозга в 26% случаев и ПСК - в 20.6% случаев, при этом установлена положительная корреляция между выявлением раковых клеток в костном мозге и образцах ПСК обследованных больных.

2. По результатам теста на клоногенный рост in vitro остаточные опухолевые клетки в составе аутотрансплантата жизнеспособны и потенциально могут участвовать в возникновении рецидива заболевания.

3. Вне зависимости от использованных цитокинов (Г-КСФ или ГМ-КСФ) и схем мобилизации (только цитокины или комбинированная схема) не отмечено изменения интенсивности контаминации продуктов цитафереза опухолевыми клетками за исключением больных, находящихся в состоянии частичной ремиссии, у которых мобилизация по комбинированной схеме позволяет снизить частоту контаминации продуктов лейкафереза. При этом комбинированная схема мобилизации позволяет снизить количество цитаферезов.

4. Отсутствие контаминации образцов ПСК ассоциируется с увеличением выживаемости без прогрессирования болезни и полной выживаемости только для пациенток, проходивших мобилизацию по комбинированной схеме.

5. Больные в состоянии полной ремиссии на момент проведения лейкафереза имеют одинаковые показатели выживаемости без прогрессирования ^болезни вне зависимости от статуса контаминации ПСК в отличие от пациенток в состоянии частичной ремиссии, у которых выживаемость без прогрессирования болезни и полная выживаемость выше при отсутствии опухолевых клеток в образцах ПСК.

6. Использование ИЦА-ОММ позволило выявить гораздо более высокую частоту контаминации продуктов ПСК (71%), чем удавалось установить ранее с помощью менее чувствительных методов (обычно менее 25%), а также обнаружить контаминацию примерно половины исследованных С034-позитивных фракций, которая не была определена с помощью стандартного ИЦА.

7. Позитивная селекция на экспрессию CD34 позволила в среднем на два порядка уменьшить количество опухолевых клеток в продуктах ПСК. По результатам ИЦА-ОММ у 24% пациенток удалось добиться полной очистки. Более точное определение частоты и интенсивности контаминации аутотрансплантатов с помощью ИЦА-ОММ является показанием к проведению дополнительной очистки.

8. Количество опухолевых клеток в продуктах лейкафереза до селекции на CD34 является фактором, который можно использовать для оценки вероятности контаминации CD34-позитивной фракции. При значении данного параметра, равном 2200 и более клеток, С034-позитивная фракция с высокой вероятностью будет контаминирована клетками РМЖ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Прилуцкая, Марина Осиповна, 2005 год

1. Абелев ГИ. Иммунология опухолей человека: в кн. Канцерогенез под ред. ДГ Заридзе // М., Медицина, 2004,474 482.

2. Гриббен ДГ, Нэдлер J1M. Очистка костного мозга: в кн. Биологические методы лечения онкологических заболеваний под ред. ДеВита ВТ мл., Хеллмана С, Розенберга С, пер. с англ. под ред. J1A Певницкого // М. Медицина, 2002, 612 623.

3. Зборовская ИБ. Молеклярно-биологические исследования онкогенов и генов-супрессоров опухолевого роста в клинической практике: в кн. Канцерогенез под ред. ДГ Заридзе // М., Медицина, 2004, 513 538.

4. Копнин БП Опухолевые супрессоры и мутаторные гены: в кн. Канцерогенез под ред. ДГ Заридзе // М., Медицина, 2004, 125 157.

5. Моисеенко ВМ, Семиглазов ВФ, Тюляндин СА. Современное лекарственное лечение местно-распространенного и метастатического рака молочной железы // С. Пб. Грифон, 1997, 5.

6. Птушкин ВВ, Усс AJ1, Демина ЕА. Сверхвысокодозная химиотерапия с трансплантцией клеток-предшественников гемопоэза у больных с прогностическинеблагоприятным рецидивом и резистентным течением ЛГМ // Тер Архив, 1997, 10:49-55.

7. Торубарова НА, Копыльцова ЕА. Гемопоэтические клетки фетальной печени // Гематология и трансфузиология, 1998, 3: 49 55.

8. Флейшман ЕВ. Практические выходы современной цитогенетики опухолей: в кн. Канцерогенез под ред. ДГ Заридзе, М., Медицина, 2004, с 483 512.

9. Чертков ИЛ Нормальное кроветворение: стволовая кроветворная клетка // Гематология и трансфузиология, 1993, 3: 3 10.

10. Andrews RD, Singer GV, Bernstein ID. Monoclonal antibody 8-12 recognized a 115-kD molecule present on both unipotent and multypotent haematopoietic coloni-forming cells and their precursors // Blood, 1986, 67: 842 844.

11. Auti A. The chemokin SDF-1 is a chemoattractant for human CD34+ haematopoietic progenitor cells and provides a new mechanism to explain the mobilization of CD34+ progenitors to peripheral blood // Exp Med, 1997, 185: 111 120.

12. Bast RC Jr, De Fabritiis P, Lipton J, Gelber R, Maver C, Nadler L, Sallan S, Ritz J. Elimination of malignant clonogenic cells from human bone marrow using multiple monoclonal antibodies and complement // Cancer Res, 1985,45: 499 503.

13. Bast RC Jr, Ritz J, Lipton JM, Feeney M, Sallan SE, Nathan DG, Schlossman SF. Elimination of leukemic cells from human bone marrow using monoclonal antibody and complement // Cancer Res, 1983, 43: 1389 1394.

14. Bender G, Unverzag L, Walker D. Identification and comparison of CD34-positive cells and their subpopulations from normal peripheral blood and bone marrow using multicolor flow cytometry//blood, 1991,77: 2591 -2596.

15. Benjamin D, Magrath IT, Douglass ES, Corash LM. Derivation of lymphoma cell lines from microscopically normal bone marrow in patients with undifferentiated lymphoma: evidence of occult bone marrow involvement // Blood, 1983, 61: 1017.

16. Blay JY et al. High-dose chemotherapy with autologous hematopoietic stem-cell transplantation for advanced soft tissue sarcoma in adults // J Clin Oncol, 2000, 18: 3643 -3650.

17. Borgen E, Naume B, Nesland JM. Standardization of the immunocytochemical detection of cancer cells in BM and blood: I, establishment of objective criteria for the evaluation of immunostained cells//Cytotherapy, 1999, 1:377-388.

18. Bourguin A, Tung R, Galili N, Sklar J. Rapid, non-radioactive detection of clonal T-cell receptor gene rearrangement in lymphoid malignancies // Proc Natl Acad Sci USA, 1990, 87: 8536.

19. Brenner MK, Rill DR, Moen RC, Krance RA, Heslop HE, Mirro J Jr, Anderson WF, Ihle JN. Gene marking and autologous bone marrow transplantation I I Ann NY Acad Sci, 1994, 716:204-214.

20. Brockstein BE, Ross AA, Moss TJ. Tumor cell contamination of bone marrow harvest products: clinical consequences in a cohort of advanced-stage breast cancer patients undergoing high dose-chemotherapy // J Hematother, 1996, 5: 617 624.

21. Civin CI, Strauss LC. Antigenic analysis of haematopoiesis III. A haematopoietic progenitor cell surface antigen defined by a monoclonal antibody reside against KG-1 cells И J Immunol, 1984,133: 157- 164.

22. Cleary ML, Chao J, Wanke R, Sklar J. Immunoglobulin gene rearrangement as a diagnostic criterion of В cell lymphoma // Proc Natl Acad Sci, 1984, 81: 593.

23. Cohen MC, Cohen S. Cytokine function. A study in biologic diversity // Clin Pathol, 1996, 105:589-593.

24. Combaret V, Favrot MC, Chauvin F, Bouffet E, Philip I, Philip T. Immunomagnetic depletion of malignant cells from autologous bone marrow graft: from experimental models to clinical trials // JImmunogenet, 1989, 16: 125 136.

25. Coombes RC. Response of circulating tumor cells to systemic therapy in patients with metastatic breast cancer: comparison of quantitative polymerase chain reaction and immunocytochemical techniques IIJ Clin Oncol, 2000,19: 1432 1439.

26. Datta YH, Adams PT, Drobyski WR, Ethier SP, Terry VH, Roth MS Sensitive detection of occult breast cancer by the reverse-transcriptase polymerase chain reaction // J Clin Oncol, 1994, 12:475-482.

27. Dinarello CA. Biology of interleukin-1 IIFASEB J, 1988,2:108 110.

28. Dunkel IJ et al. Successful treatment of metastatic retinoblastoma // Cancer, 2000, 89: 2117-2121.

29. Dunkel IJ. High-dose chemotherapy with autologous stem cell rescue for malignant brain tumors // Cancer Invest, 2000, 18: 492 493.

30. Elias AD, Pap SA, Bemal SD. Purging of small cell lung cancer-contaminated bone marrow by monoclonal antibodies and magnetic beads // Prog Clin Biol Res, 1990, 333: 263.

31. Favrot M, Philip I, Combaret V, Pavone E, Bouffet E, Biron P, Philip T. Monoclonal antibodies and complement purged autograft in Burkitt lymphoma and lymphoblastic leukemia // Bone Marrow Transplant, 1989,4: 202.

32. FitzGerald DJ, Willingham MC, Cardarelli CO, Hamada H, Tsuruo T, Gottesman MM, Pastan I. A monoclonal antibody-Pseudomonas toxin conjugate that specifically kills multidrug-resistant cells II Proc Natl Acad Sci USA, 1987, 84: 4288-4292.

33. Gee AP, Boyle MD. Purging tumor cells from bone marrow by use of antibody and complement: a critical appraisal // J Natl Cancer Inst, 1988, 80: 154 159.

34. Gee AP, Bruce KM, Morris TD, Boyle MD. Evidence for an anticomplementary factor associated with human bone marrow cells IIJ Natl Cancer Inst, 1985, 75: 441.

35. Gothot A, Pyatt R. Functional heterogeneity of human CD34+ cells isolated in subcompartment of the G0/G1 phase of the cell cycle // Blood, 1997, 90:4384 4393.

36. Hartmann O, Vassal G, Valteau D et al. Autologous bone marrow transplantation in pediatric solid tumors: phase II studies // Bone Marrow Transplant, 1991, 7: 106 108.

37. Henderson C. Chemotherapy for metastatic disease. In: Breast diseases Ed. By J. Harris, 2nd edition, 1991, Lippincott Company. 559 603.

38. Hertzberg H et al. Recurrent disseminated retinoblastoma in a 7-year-old girl treated successfully by high-dose chemotherapy and CD34-selected autologous peripheral blood stem cell transplantation // Bone Marrow Transplant, 2001, 27: 653 655.

39. Hryniuk W, Levine MN. Analysis of dose intensity for adjuvant chemotherapy trials in stage II breast cancer // J Clin Oncol., 1986,4(8):1162-1170.

40. Jagannath S, Vesole DH, Glenn L, Crowley J, Barlogie B. Low risk intensive therapy for-multiple myeloma with combined autologous bone marrow and blood stem cell support // Blood, 1992, 80: 1666.

41. Katz F, Tindle RW, Sutherland DR. Identification of a membrane glycoprotein associated with haematopoietic progenitor cells // LeukRes, 1985, 9: 191-194.

42. Korbling M, Dorken В, Ho AD, Pezzuto A, Hunstein W, Fliedner TM. Autologous transplantation of blood derived hemopoietic stem cells after myeloablative therapy in a patient with Burkett's lymphoma // Blood, 1986,67: 629.

43. Krause D, Fackler M. CD34: structure, biology and clinical utility // Blood, 1996, 87: 1-13.

44. Kvalheim G, Sorensen O, Fodstad O, Funderud S, Kiescl S, Dorken B, Nustad K, Jakobsen E, Ugelstad J, Pihl A. Immunomagnetic removal of B-lymphoma cells from human bone marrow: a procedure for clinical use // Bone Marrow Transplant, 1988, 3: 31 -41.

45. Lansdorp PM. Self-renewal of stem cells // Biol Bone Marrow Transplant, 1997, 3:171 -174.

46. Lee MS, Chang KS, Cabanillas F, Freireich EJ, Trujillo JM, Stass SA. Detection of minimal residual disease earring the t(14;18) by DNA sequence amplification // Science, 1987,237: 175.

47. Leminscka IR. Microenvironmental regulation of haematopoietic stem cells // Stem Cells, 1997,15:63-67.

48. Mahendra P, Johnson D, Hood IM, et al., High-dose chemotherapy and autologous stem cell resque for poor risk and refractory lymphoma: a single centre experience of 123 patients // Bone Marrow Transplant, 1996, 17: 973 978.

49. Mohle R, Haas R, Hunstein W. Expression of adhesion molecules and c-kit on CD34+ hematopoietic progenitor cells: comparison of cytokine mobilized blood stem cells with normal bone marrow and peripheral blood // JHematother, 1993, 21: 2483 2486.

50. Moos M. Evaluation of the kinetics of the bone marrow tumor load in the course of sequential high-dose therapy assessed by quantitative pCr as apredictive parameter in patients with multiple mieloma// Bone Marrow Transplant, 2000, 26: 851 858.

51. Nieto Y. The verdict is not in yet. Analysis of the randomized trials of high-dose chemotherapy for breast cancer // Hematologica, 2003, 88: 210 -211.

52. Park LS, Friend D. Characterization of the cell surface receptor for human granulocyte/macrophage colony stimulating factor IIJ Exp Med, 1986, 164: 251 255.

53. Pecora AL Impact of stem cell dose on hematopoietic recovery in autologous blood stem cell recipients // Bone Marrow Transplant, 1999,23 (Suppl. 2): S7 S12.

54. Pedrazzoli P, Battaglia M, Da Prada GA, Lanza A, Cuomo A, Bertolini F, Pavesi L, Robustelli della Cuna G. Role of tumor cells contaminating the graft in breast cancer recurrence after high-dose chemotherapy // Bone Marrow Transplant, 1997, 20: 167 169.

55. Pettengell R, Morgenstern GR, Woll PJ, Chang J, Rowlands M, Young R, Radford JA, Scarffe JH, Testa NG, Crowther D. Peripheral blood progenitor cell transplantation in lymphoma and leukaemia using a single leukapheresis // Blood, 1993, 82: 3770.

56. Quessenberry PJ, Ihle JN. The effect of interleukin-3 and GM-CSA-2 on megacariocyte and myeloid clonal colony formation // Blood, 1985,65: 214-217.

57. Raafi S, Mohle R. Regulation of haematopoiesis by microvascular endothelium. // Leukaemia Lymphoma, 1997, 27: 375 380.

58. Reiffers J, Bernard P, David B, Vezon G, Sarrat A, Marit G, Moulinier J, Broustet A. Successful autologous transplantation with peripheral blood hemopoietic cells in a patient with acute leukaemia // Exp Hematol, 1986,14: 312.

59. Roots-Weiss A, Papadimitriou C, Serve H, Hoppe B, Koenigsmann M, Reufi B, Oberberg D, Thiel E, Berdel WE. The efficiency of tumor cell purging using immunomagnetic CD34+ cell separation systems II Bone Marrow Transplant, 1997, 19: 1239 1246.

60. Ross AA, Loudovaris M, Hazelton B, Weaver CH, Schwartzberg L, Bender JG Immunocytochemical analysis of tumor cell in pre- and post-culture peripheral blood progenitor cell collections from breast cancer patients // Exp Hematol, 1995, 23: 1478 -1483.

61. Saleh RA, Gross S, Cassano W, Gee A. Metastatic retinoblastoma successfully treated with immunomagnetic purged autologous bone marrow transplantation // Cancer, 1988, 62: 2301 -2303.

62. Schlager SI, Boyle MDP, Ohanian SH, Borsos T. Effect of inhibiting DNA, RNA and protein synthesis of tumor cell on their susceptibility to killing by antibody and complement // Cancer Res, 1977, 37: 1432.

63. Schlager SI, Ohanian SH, Borsos T. Identification of lipidsassociated with the ability of tumor cells to resist humoral immune attack // Immunol, 1978, 120: 472.

64. Schulze R, Schulze M, Wischnik A, Ehnle S, Doukas K, Behr W, Ehret W, Schlimok G. Tumor cell contamination of peripheral blood stem cell transplants and bone marrow in high-risk breast cancer patients // Bone Marrow Transplant, 1997, 19: 1223 1228.

65. Shpall EJ, Bast RC Jr, Joines WT, Jones RB, Anderson I, Johnston C, Eggleston S, Tepperberg M, Edwards S, Peters WP. Immunomagnetic purging of breast cancer from bone marrow for autologous transplantation // Bone Marrow Transplant, 1991, 7: 145 — 151.

66. Sperling С, Buchner Т. Clinical, morphologic, cytogenetic and prognostic implication of Cd34 expression in childhood and adult de novo // Leukaemia Lymphoma, 1995, 17: 417 — 422.

67. Sprangrud CJ. Biological and clinical aspects of haematopoietic stem cells // Ann Rev Med, 1994,43: 93- 104.

68. Stiff PJ. et al. High-dose chemotherapy and autologous stem-cell transplantation for ovarian cancer: An autologous blood and marrow transplant registry report // Ann Intern Med, 2000, 133: 504-515.

69. Stong RC, Uckun F, Youle RJ, Kersey JH, Vallera DA. Use of multiple T cell-directed intact ricin immunotoxins for autologous bone marrow transplantation // Blood, 1985, 66: 627-635.

70. Stram DO, Matthay KK, O'Leary M et al. Myeloablative chemotherapy versus continued chemotherapy for high risk neuroblastoma // Prog Clin Biol Res, 1994, 385: 287 291.

71. Ten-year experience with CMF-based adjuvant chemotherapy in resectable breast cancer // Breast Cancer Res Treat, 1985, 5: 95-115.

72. To L, Haylock D, Simmons P et al. The biology and clinical uses of blood tern cells // Blood, 1997, 89:2233-2258.

73. To LB, Haylock DN, Kimber RJ, Juttner С A. High Levels of circulating hemopoietic stem cells in very early remission from acute non-lymphoblastic leukaemia and their collection; and cryopreservation // Br J Haematol, 1984, 58: 399.

74. Traverso G, Shuber A, Levin B, Johnson C, Olsson L, Schoetz DJ Jr, Hamilton SR, Boynton K, Kinzler KW, Vogelstein B. Detection of APC mutations in fecal DNA from patients with colorectal tumors // N Engl J Med, 2002, 346: 311 320.

75. Treleaven JG, Gibson FM, Ugelstad J, Rembaum A, Philip T, Caine GD, Kemshead JT. Removal of neuroblastoma cells from bone marrow with monoclonal antibodies conjugated to magnetic microspheres // Lancet, 1984, 8368: 70 73.

76. Trickett AE, Ford DJ, Lam-Po-Tang PR, Vowels MR. Immunomagnetic bone marrow purging of common acute lymphoblastic leukemia cells: suitability of BioMag particles // Bone Marrow Transplant, 1991, 7: 199 203.';

77. Vesole DH et al. High-Dose Melphalan With Autotransplantation for Refractory Multiple Myeloma: Results of a Southwest Oncology Group Phase II Trial IIJ Clin Oncol, 1999, 17:2173-2179.

78. Vredenburgh JJ, Ball ED. Elimination of small cell carcinoma of the lung from human bone marrow by monoclonal antibodies and immunomagnetic beads // Cancer Res, 1990, 50: 7216-7220.

79. Woodward ТА, McNeice IK. Further studies on growth factor production by the TC-1 stromal cell line: pre-B-stimulating activity // Blood, 75: 2130 2136.