Определение суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека в норме и при патологии методом вольтамперометрии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Плотников, Евгений Владимирович

• Плотников, Евгений Владимирович
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Плотников, Евгений Владимирович

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНА ЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1 Активные формы кислорода и их биологическая роль.

1.2. Свободно-радикальные процессы в живом организме.

1.3. Система антиоксидантной защиты организма.

1.3.1. Состав крови.

1.3.2. Антиоксидантная система крови.

1.4. Роль оксидантного стресса в патогенезе различных заболеваний человека.

1.4.1. Оксидантный стресс в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний.

1.4.2. Оксидантный стресс при психических заболеваниях.

1.4.3. Антиоксидантные препараты для коррекции оксидантного стресса.

1.5. Методы определения антиоксидантной активности.

1.5.1. Хемилюминесцентные методы.

1.5.2. Кинетические методы.

1.5.3. Оптические методы.

1.5.4. Электрохимические методы.

1.5.5. Методы, основанные на взаимодействии антиоксидантов с кислородом и его активными радикалами.

1.5.6. Методы определения антиоксидантной активности сыворотки крови человека

1.6. Обоснование использования метода вольтамперометрии и процесса электровосстановления кислорода как модельного для оценки антиоксидантной активности сыворотки крови человека.

1.7. Обоснование разработки новых психотропных соединений с антиоксидантной активностью.

ГЛАВА 2. АППАРАТУРА И МЕТОДИКА ЭКСПЕРИМЕНТА.

2.1. Приборы, ячейки, электроды,реактивы ирастворы.

2.2. Объекты исследования.

2.3. Критерии оценки суммарной антиоксидантной активности.

2.4. Методика эксперимента.

2.5. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ СУММАРНОЙ АКТИВНОСТИ АНТИОКСИДАНТОВ И КОЛИЧЕСТВА ОН РАДИКАЛОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ И ПРИ ПСИХИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ.

3.1. Определение суммарной активности антиоксидантов в сывороткие крови человека в норме вольтамперометрическим методом.

3.1.1. Закономерности влияния антиоксидантов сыворотки крови на процесс электровосстановления кислорода.

3.2. Оценка суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека при психических заболеваниях методом вольтамперометрии.

3.2.1. Оценка суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека при алкоголизме.

3.2.2. Оценка суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови больных шизофренией.

3.3. Определение активных ОН* радикалов в сыворотке крови человека флуориметрическим методом в норме и при психическом заболевании.

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА И ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ ПСИХОТРОПНЫХ АНТИОКСИДАНТОВ МЕТОДОМ КАТОДНОЙ ВОЛЬТАМПЕРОМЕТРИИ.

4.1. Исследование антиоксидантной активности некоторых стандартных антиоксидантов в смесях методом катодной вольтамперометрии.

4.2. Исследование антиоксидантной активности перспективных соединений лития, как основы для создания новых антиоксидантов для лечения психических заболеваний.

4.2.1. Исследование антиоксидантной активности органических соединений лития методом катодной вольтамперометрии.

4.2.2. Исследование суммарной антиоксидантной активности композиций органических соединений лития и дигидрокверцетина методом катодной вольтамперометрии.

4.3. Исследование иммуномодулирующих свойств перспективных соединений лития.

ГЛАВА 5. МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММАРНОЙ АКТИВНОСТИ АНТИОКСИДАНТОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА.

5.1. Определение оптимальных условий для оценки антиоксидантной активности с использованием методов планирования эксперимента.

5.2. Разработка и подготовка вольтамперометрического способа определения суммарного количества антиоксидантов в биологических объектах к аттестации.

5.3. Вольтамперометрический, спектрофотометрический методы и имунноферментный анализ суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови. Сравнительные определения.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека в норме и при патологии методом вольтамперометрии»

Актуальность темы. Исследование состава и свойств биообъектов является приоритетной задачей аналитической химии. Особенно актуальными являются вопросы кислородного метаболизма в организме человека, когда стало очевидно, что избыточное содержание активных радикалов кислорода вызывают радикально-цепные процессы окисления в клетках организма, приводя к значительным нарушениям. Дисфункции в регуляции свободнорадикальных процессов являются важным звеном при таких тяжелых патологиях как атеросклероз, диабет и ряд психических заболеваний. В последнее время особую актуальность приобрели аддиктивные заболевания (в первую очередь алкоголизм), создавая угрозу генофонду всей нации, не говоря уже о связанных с алкоголизмом негативных социальных последствиях. Малоизученными остаются вопросы, связанные с изучением нарушений антиоксидантной системы при алкоголизме и их корреляции с показателями крови, поэтому наши исследования были сосредоточены на изучении антиоксидантной активности крови при аддиктивных состояниях (алкоголизм) и наиболее распространенном психозе (шизофрения), а также поиске путей коррекции антиоксидантного статуса организма. Психические заболевания, как правило, предполагают длительную лекарственную терапию, часто пожизненную, при этом психотропные средства имеют серьезные побочные эффекты (например, злокачественный нейролептический синдром - летальное осложнение), поэтому очень важной задачей является поиск путей снижения токсической нагрузки на организм пациента. Создание психотропных антиоксидантов является одним из путей решения этой проблемы.

Интерес к исследованию соединений, способных предотвращать процессы свободнорадикального окисления в клетках, возник уже много лет назад. В настоящее время препараты с ярко выраженными антиоксидантными свойствами широко используются в пищевой, фармацевтической и косметической промышленности. Фармакологическая коррекция оксидантного стресса также осуществляется с помощью антиоксидантов (АО). Они прерывают быстрорастущие процессы окисления, образуя малоактивные радикалы, легко выводящиеся из организма. В целом можно резюмировать, что проблема продления активной человеческой жизни напрямую связаны с созданием новых высокоэффективных антиоксидантов.

Терапия с включением АО находит все большее применение при лечении различных заболеваний и коррекции антиоксидантного статуса организма. В связи с вышесказанным возникает проблема быстрого экспрессного определения суммарной антиоксидантной активности биологических объектов с целью ранней диагностики и контроля за эффективностью лечения. В настоящее время существуют методы для определения антиоксидантной активности, емкости биологических объектов. Однако, эти методы используют разные модельные системы, в которых зачастую используются искуственные радикалы и антиоксиданты несуществующие в живой природе. Полученные результаты имеют разные размерности и плохо сопоставимы. Достаточно мало сертифицированных приборов, способных быстро и на качественном уровне определить антиоксидантную активность биологических объектов. Поэтому поиск новых подходов к определению активности антиоксидантов в биологических объектах на данном этапе является весьма актуальной задачей. Поскольку окислительно-восстановительные реакции, определяющие антиоксидант/оксидантный баланс организма, имеют электрохимическую природу, естественно рассматривать именно эти методы для оценки указанного параметра. Среди электрохимических методов стоит особо отметить вольтамперометрические методы, обладающие низкой себестоимостью, высокой чувствительностью к кислороду и его активным радикалам, простотой в аппаратурном оформлении.

Цель работы: Разработка вольтамперометрического способа определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека на основе модельной системы электровосстановления кислорода для изучения антиоксидантного статуса организма и препаратов для его коррекции.

В соответствии с этим в работе были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать влияние антиоксидантов сыворотки крови человека на процесс электровосстановления кислорода. Оптимизировать способ пробоподготовки сыворотки крови с учетом особенностей вольтамперометрического метода в анализе биообъектов.

2. Провести оценку суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека вольтамперометрическим методом в норме и при психических патологиях.

3. Провести определение гидроксильных радикалов в сыворотке крови человека в норме и при психических патологиях методом флуориметрии.

4. Исследовать влияние солей лития на процесс электровосстановления кислорода, для выявления соединений имеющих большой потенциал практического применения в психиатрии.

5. Разработать вольтамперометрическую методику определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека. Провести сравнительные испытания суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови с другими аналитическими методами определения активности антиоксидантов.

Научная новизна.

• Впервые исследованы закономерности суммарного влияния антиоксидантов сыворотки крови человека на процесс электровосстановления кислорода. Выявлено, что взаимодействие антиоксидантов сыворотки крови с продуктами восстановления кислорода проходит преимущественно по ЕС механизму.

• Впервые предложен вольтамперометрический подход для оценки суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека в пересчете на глутатион. Оптимизированы этапы пробоподготовки сыворотки крови человека Выявлена низкая суммарная активность антиоксидантов в сыворотке крови при патологии и ее положительная динамика в ходе медикаментозной терапии.

• Разработан новый подход к оценке количества гидроксильных радикалов в сыворотке крови методом флуориметрии, используя терефталиевую кислоту в качестве «ловушки» радикалов. Установлена обратная зависимость между концентрацией гидроксильных радикалов и суммарной активностью антиоксидантов в сыворотке крови.

• Впервые определена антиоксидантная активность психотропных соединений лития методом вольтамперометрии по отношению к процессу электровосстановления кислорода.

• Показана взаимосвязь результатов определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека между вольтамперометрическим, спектрофотометрическим и иммуноферментным методами анализа.

Практическая значимость.

• Разработана методика определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека методом вольтамперометрии на основе процесса электровосстановления кислорода в пересчете на глутатион для оценки и мониторинга антиоксидантного статуса организма в норме и при патологии.

• На основе полученных экспериментальных данных предложено использовать показатель суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови как критерий эффективности лечения психических заболеваний.

• Выявлены наиболее активные соединения на основе солей лития, композиции на их основе для корректировки антиоксидантного статуса организма. Установлено, что наибольшую антоксидантную активность проявляет аскорбат лития. При оценке совместимости компонентов в смесях антиоксидантов предложена наиболее эффективная композиция из аскорбата лития и дигидрокверцетина в соотношении 5:1. Даны рекомендации для их дальнейшего использования в психиатрии в качестве психостабилизаторов с антиоксидантными свойствами.

• На основе аскорбата лития разработан и зарегистрирован лечебно-профилактический комплекс «Нормотим» для коррекции аддиктивных состояний.

• На основе разработанной методики создан модифицированный прибор «Антиоксидант» со встроенным программным обеспечением для анализа антиоксидантной активности.

На защиту выносятся:

1. Результаты определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека по отношению к процессу электровосстановления кислорода в норме и при психических патологиях.

2. Результаты определения гидроксильных радикалов в сыворотке крови человека в норме и при психических патологиях методом флуориметрии.

3. Результаты определения антиоксидантной активности соединений лития и композиций на их основе, имеющие фармацевтическое значение, по отношению к процессу электровосстановления кислорода.

4. Методика определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека по отношению к процессу электровосстановления кислорода.

5. Результаты сравнительных определений суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека с использованием метода вольтамперометрии и независимых аналитических методов анализа (спектроскопический и имунноферментный).

Апробация работы. Основные результаты работы представлены в докладах на Второй Всероссийской конференции с международным участием «Современные проблемы биологической психиатрии и наркологии» (Томск, 2008); Научно-практической конференции с международным участием «Охрана психического здоровья в демографической политике страны», (Томск, 2008); XI всероссийской конференции студентов и аспирантов «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2010); Симпозиуме: «Теория и практика электроаналитической химии» (Томск, 2010); Научно-практической конференции, посвященной 70-летию со дня рождения профессора Ю.А. Карбаинова «Электрохимические методы анализа. Теория и практика» (Томск, 2010); 7th Aegean Analytical Chemistry Days (Lesvos, Greece, 2010); Второй международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине», (Санкт-Петербург, 2011), VIII всероссийской конференции по электрохимическим методам анализа «ЭМА 2012» (Уфа-Абзаково, 2012).

По материалам диссертации опубликовано 5 статей в журналах ВАК и 13 тезисов докладов, получено 5 патентов РФ на изобретение.

Диссертация выполнена при поддержке гранта РФФИ № 10-08-00306-а «Исследование антиоксидантной активности сыворотки крови человека в норме и патологии методом вольтамперометрии»,. программы «УМНИК» Фонда содействия развитию МП НТС «Разработка новых психотропных антиоксидантов как основа для создания лекарственных препаратов для профилактики и лечения алкоголизма» и программ ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы (ГК № 14.740.11.1440 «Разработка психотропных соединений, обладающих антиоксидантной и иммуностимулирующей активностью» и ГК 14.740.11.1369 «Разработка высокочувствительных методик определения и исследование биологически активных веществ с антиоксидантными свойствами в объектах природного и искусственного происхождения с целью совершенствования профилактики и лечения социально-значимых заболеваний».

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 140 страницах, содержит 29 таблиц, 27 рисунков и библиографию из 142 наименований. Работа состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы и приложения.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Плотников, Евгений Владимирович

ВЫВОДЫ

1. Исследованы закономерности влияния антиоксидантов сыворотки крови человека на процесс электровосстановления кислорода. Обосновано предположение о ЕС-механизме взаимодействия антиоксидантов сыворотки крови с активными формами кислорода.

2. Найдены оптимальные параметры пробоподготовки сыворотки крови методами планирования эксперимента для оценки показателя суммарной активности антиоксидантов в ней методом вольтамперометрии путем выбора оптимальных режимов центрифугирования.

3. Проведена оценка суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека в норме и при психических патологиях по отношению к процессу ЭВ 02. Выявлено значительное снижение суммарной активности антиоксидантов при психических патологиях.

4. Разработана методика выполнения измерений показателя суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови человека в пересчете на концентрацию глутатиона. В соответствии с регламентируемой процедурой аттестации методики выполнения измерений рассчитаны основные метрологические характеристики анализа.

5. Проведены сравнительные определения суммарной активности антиоксидантов в сыворотке крови вольтамперометрическим методом и стандартными методами определения антиоксидантной активности. Установлена взаимосвязь между результатами вольтамперометрического, спектрофотометрического и иммуноферментного метода.

6. Разработан способ оценки концентрации гидроксильных радикалов в сыворотке крови человека методом флуориметрии, используя терефталиевую кислоту в качестве «ловушки» радикалов. Установлено повышение концентрации гидроксильных радикалов в сыворотке крови при алкоголизме. Выявлена обратная зависимость между концентрацией гидроксильных радикалов и суммарной активностью антиоксидантов в сыворотке крови.

7. Проведено определение антиоксидантной активности соединений лития и композиций на их основе методом вольтамперометрии по отношению к процессу электровосстановления кислорода. Выявлено, что среди изученных соединений наибольшую антиоксидантную активность проявляет аскорбат лития. При оценке совместимости компонентов в смесях антиоксидантов (соединений лития с дигидрокверцетином) предложена наиболее эффективная композиция на основе аскорбата лития и дигидрокверцетина в соотношении 5:1 соответственно.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Плотников, Евгений Владимирович, 2012 год

1. Розанцев Э.Г., Шолле В Д. Органическая химия свободных радикалов. М., 1979.

2. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effectors action in biological systems. J Lipid Res 1998; 39: 1529-1542.

3. Zhao Y., Wang Z.B., Xu J.X. Effect of cytochrome с on the generation and elimination of 02' and H202 in mitochondria. J Biol Chem 2003; 278: 23562360.

4. Droge W.Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol Rev 2002; 82: 47-95.

5. Hoidal J.R. Reactive oxygen species and cell signaling. Am J Respir Cell Mol Biol 2001; 25: 661-663.

6. Griendling K.K., Sorescu D, Ushio-Fukai M. NAD(P)H oxidase. Role in cardiovascular biology and disease. Circ Res 2000; 86: 494-501.

7. Sanders S.A., Eisenthal R., Harrison R. NADH oxidase activity of human xanthine oxidoreductase generation of superoxide anion. Eur J Biochem 1997; 245: 541-548.

8. Mc Hugh J., Cheek D.J. Nitric oxide and regulation of vascular tone: pharmacological and physiological considerations. Am J Critical Care 1998; 7: 131-140.

9. Pou S., Pou W.S., Bredt D.S. et al. Generation of superoxide by purified brain nitric oxide synthase. J Biol Chem 1992; 267: 24173-24176.

10. Kuhn H. Biosynthesis, metabolization and biological importance of the primary 15-lipoxygenase matabolites 15-hydro(pe-ro)xy-5Z,8Z,l 1Z,13E-eicosatetraenoic acid and 13-hydro(pero)xy-9Z,l lE-octadecadienoic acid. Prog Lipid Res 1997;35:203-206.

11. СаенкоЮ. В., ШутовА. М. Роль оксидативного стресса в патологии сердечно-сосудистой системы у больных с заболеваниями почек // Нефрология и диализ. Т. 6, 2004 г., №1

12. Beckman К.В., Ames B.N. Oxidative decay of DNA. J Biol Chem 1997; 272: 19633-19636.

13. Nielsen F., Mikkelsen B.B., Nielsen J.B. et al. Plasma malondialdehyde as biomarker for oxidative stress: reference interval and effects of life-style factors. Clin Chem 1997; 43: 1209-1214.

14. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., Козлов А.В., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. // Итоги науки и техники. Сер. биофизика / ВИНИТИ.- 1991. Т.29, №1. - С. 1-252.

15. Rice-Evance С.A., Diplock А.Т, Symons M.C.R. Thechniques in free radical research. Elsevier, Amsterdam, 1991

16. Halliwell B. Antioxidant defence mechanisms: from the beginning to the end (of the beginning). Free Radic Res 1999; 1: 261-272.

17. Halliwell В., Gutteridge J.M. The antioxidants of human extracellular fluids. Arch Biochem Biophys 1990; 280: 1-8.

18. Зенков H.K. Окислительный стресс / H.K. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова // М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. 343 с.

19. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine. -Oxford.: Clarendon Press, 1989. 793 p.

20. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита / В.И. Кулинский // Соросов, образов, журн. 1999. - Т. 1, № 2. - С. 2-7.

21. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и незапрограммированная смерть клетки / Ю.А. Владимиров // Соросов, образов, журн. 2000. - Т. 6, № 9. - С. 2-9.

22. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (эволюционные, экологические и медико-биологические аспекты) / О.Ю. Янковский // СПб.: «Игра», 2000. 294 с.

23. Droge W.Free radicals in the physiological control of cell function. Physiol Rev 2002; 82: 47-95.

24. Koshi J.K. (ed). Free radicals. NY, 1980

25. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

26. Thannickal V.J., Fanburg B.L. Reactive oxygen species in cell signaling. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2000; 279: L1005-L1028.

27. Панкин B.3., Тихазе A.K., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях. Пособие для врачей. -М.: Медицина, 2001. 78 с.

28. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. JL: Наука, 1985. - 230 с.

29. Bourdon Е., Blache D. The importance of proteins in defense against oxidation. Antioxid Redox Signal 2001; 3: 293-311.

30. Журавлев А.И. Свободнорадикальная биология / А.И. Журавлев, В.Т. Пантюшенко // М.: «Московская ветеринарная академия», 1989. 60 с.

31. May M.J., Cobb С.Е., Mendiratta S. et al. Reduction of the Ascorbyl free radical to ascorbate by thioredoxin reductase. J Biol Chem 1998; 273: 2203923045.

32. Brigelius-Flohe R., Traber M.G Vitamin E: function and metabolism. FASEB J 1999; 13: 1145-1155.

33. Будников Г.К. Антиоксиданты как объекты биоаналитической химии / Г.К. Будников, Г.К. Зиятдинова // Журн. аналит. химии. 2005. - Т. 60, № 7. -С. 678-691.

34. Wolfler A., Abujia P.M., Schauenstein K., Liebmann P.M. N-acetylserotonin is a better extra- and intracellular antioxidant than melatonin. FEBS Letters 1999; 449: 206-210

35. Halliwell B. Antioxidant characterization. Methodology and mechanism. // Biochemical Pharmacology. 1995. - V.49, №10. - P. 1341-1348.

36. Reiter R.J. Melatonin as an antioxidant: biochemical mechanisms and pathophysiological implications in humans / R.J. Reiter, D. Tan, J.C. Mayo, R.M. Sainz, J. Leon, Z. Czarnocki // Biol. Pharm. Bull. 2003. - V. 50, № 4. -P. 1129- 1146.

37. Воробьева E.H. Роль свободнорадикального окисления в патогенезе болезней системы кровообращения / Е.Н. Воробьева, Р.И. Воробьев // Бюлл. СО РАМН 2005. - Т. 118, № 4. - С. 24-30.

38. Тарасов Н.И., Тепляков А. Т., Малахович Е.В. и др. Состояние перекисного оксиления липидов, антиоксидантной защиты крови у больных инфарктом миокарда, отягощенным недостаточностью кровообращения // Тер. архив. 2002. № 12. С. 12-15.

39. Шмидт Е. В., Лунев Д. К., Верещагин Н. В. Сосудистые заболевания головного и спинного мозга. М.: Медицина, 1976. 283 с.

40. Курашвили Л.В., Косой Г.А., Захарова И.Р. Современное представление о перекисном окислении липидов и антиоксидантной системе при патологических состояниях // Методическое пособие. Пенза: Инс-т усоверш. врачей МЗ РФ, 2003. 32 с.

41. Окислительный стресс, апоптоз и повреждение мозга //Нейрохимия.-1996,- Т.13, Вып.1.-С.61-64.

42. Никушкин Е.В. Перекисное окисление липидов в ЦНС в норме и при патологии // Нейрохимия.-1989.-Т.8, N1.-С. 124-145.

43. Покровский A.A., Абраров A.A. К вопросу о перекисной резистентности эритроцитов // Вопр. питания. 1964- N6.- С.44-49.

44. Болдырев A.A., Куклей M.J1. Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге. // Нейрохимия.- 1996. Т. 13. - С. 25 - 29.

45. Шакаришвили P.P. Свободнорадикальная патология у больных эпилепсией. Клиника и лечение эпилепсии: Сб. науч. тр.- Тбилиси, 1986.-С.131-145.

46. Collaborative Group of the Primary Prevention Project. Low-dose aspirin and vitamin E in people at cardiovascular risk: a randomized trial in general practice // Lancet.- 2001.- Vol.357.- P.89-95.

47. Goodman; Gilman's. The Pharmacological basis of therapeutics 9th ed. / Ed by J.G. Hardman et al. New York et al.: McGraw-Hill, 1996.- 1905 p.

48. Зарубина И.В. Принципы фармакотерапии гипоксических состояний антигипоксантами быстродействующими корректорами метаболизма // Обзоры по клин, фармакол. и лек. терапия. - 2002. - Т.1. - № I.e. 19-28.

49. Афанасьев В.В. Цитофлавин в интенсивной терапии: Пособие для врачей. СПб. - 2005.- 36 с. - с. 9-30.

50. Дунаев В.В., Тишкин B.C., Евдокимов Е.И. К механизму действия рибоксина. //Фармакология и токсикология. 1998. - С. 52, 56-58.

51. Чеснокова Н.П., Понукалина Е.В., Бизенкова М.Н., Афанасьева Г.А. Возможности эффектиного использования антиоксидантов и антигипоксантов в экспериментальной и клинической медицине // Успехи современного естествознания. 2006. - № 8 - С. 18-25

52. Аронов Д.М. Применение Коэнзима Q10 в кардиологической практике // РМЖ. -2004. 12(15). - с. 905-909.

53. Захарова И.Н., Обыночная Е.Г., Скоробогатова Е.В., Малашина О.А. Влияние антиоксиданта на основе убихинона Кудесана на активность перекисного окисления липидов и антиоксидантную защиту при пиелонефрите у детей // Педиатрия.-2005.-№4.

54. Ланкин В.З., Капелько В.И., Рууге Э.К., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Коэнзим Q: физиологическая функция и перспективы использования в комплексной терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы / Пособие для врачей. М: Медпрактика - М, 2008. - с.22

55. Капелько В.И., Рууге Э.К. Исследования действия Кудесана при повреждении сердечной мышцы, вызванной стрессом. Применение антиоксидантного препарата кудесан (коэнзим Q10 с витамином Е) в кардиологии. М. 2002. - с. 15-22.

56. Биохемилюминесценция / Под ред. А.И. Журавлева. М.: Наука, 1983. -345 с.

57. Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo / Сборник науч. статей М.: Наука, 1992. - 110 с.

58. Беляков В.А., Васильев Р.Ф., Федорова Г.Ф. Кинетика жидкофазного окисления дифенилметана при умеренных температурах // Кинетика и катализ. 1996. - Т.37, №4. - С. 542-552.

59. Шарипов Г.Л., Казаков В.П., Толстиков Г. А. Химия и хемилюминесценция 1,2-диоксикетанов. -М.: Наука, 1990. 288 с.

60. Письменский А.В., Психа Б.Л., Харитонов В.В. Кинетическая модель окисляемости метиллинолеата // Нефтехимия. 2000. - Т.40, №2. - С. 123129.

61. Письменский А.В., Психа Б. Л., Харитонов В.В. Механизм и эффективность ингибирующего действия 1,3-ди(4-фениламинофенокси)-2-пропанола и 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола при окислении метиллинолеата // Нефтехимия. 2001. - Т.41, №5. - С. 377-383.

62. Хасанов В.В., Дычко К.А., Рыжова Г.Л. Кинетический метод свободно-радикального окисления сульфит-иона для определения антиоксидантов в биообъектах // Химико-фармацевтический журнал. 2001. - Т.35, №12. -С. 36-37.

63. Афанасьев В.А., Заиков Г.Е. Физические методы в химии. М.: Наука, 1984,- 174 с

64. Сизова Н.В., Веретникова О.Ю., Ефремов А.А. Оценка антиоксидантной активности эфирных масел методом микрокалориметрии // Химия растительного сырья. 2002. - №3. - С. 57-60.

65. Fogliano V., Verde V., Randazzo G., Ritieni A. Method for measuring antioxidant activity and its application to monitoring the antioxidant capacity of wines // Journal Agricultural and Food Chemistry. 1999. - V.47, №3. -P. 1035-1040.

66. Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения / Сборник докладов. -М.: Изд-во РУДН, 2005. 221 с.

67. Benzie I.F., Strain J.J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP)as a measure of bantioxidant powerQ: the FRAP assay // Analytical Biochemistry. -1996. V.239, №1. - P. 70-76.

68. Moyer R.A., Hummer K.E., Finn C.E., Frei В., Wrolstad R.E. Anthocyanins, phenolics, and antioxidant capacity in diverse small fruits: vaccinium, rubus, and ribes // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002. - V.50, №3. -P. 519-525.

69. Абдуллин И.Ф., Турова E.H., Будников Г.К., Зиятдинова Г.К., ГайсинаГ.Х. Электрогенерированный бром реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов // Заводская лаборатория. - 2002. - Т.68, №9. - С. 12-15.

70. Абдуллин И.Ф., Зиятдинова Г.К., Будников Г.К. Интегральная антиоксидантная емкость крови по данными метода гальваностатической кулонометрии // Вестник Татаского отделения Российской экологической академии. 2003. - №3. - С. 35-39.

71. Ziyatdinova G.K., Budnikov Н.С., Pogorel'tzev V.I. Electrochemical determination of the total antioxidant capacity of human plasma // Analytical and Bioanalytical Chemistry. -2005. -V.381, №8. P. 1546-1551.

72. Зиятдинова Г.К. Электрохимические методы оценки интегральной антиоксидантной емкости медико-биологических объектов. Дисс. канд. хим. наук. - Казань, 2005. - 187с.

73. Reiter R.J. Melatonin: Lowering the High Price of Free Radicals. News Physiol Sci 2000; 15: 246-250.

74. Шарафутдинова E.H. Потенциометрия в исследовании антиоксидантной активности объектов растительного происхождения. Автореф. дис. канд. хим. наук. Екатеринбург, 2007. - 24с.

75. Chevion S., Berry Е.М., Kitrossky N., Kohen R. Evaluation of plasma low molecular weight antioxidant capacity by cyclic voltammetry // Free Radical Biology And Medicine 1997.- V.22, №6. -P. 411-421.

76. Chevion S., Roberts M.A., Chevion M. The use of cyclic voltammetry for the evaluation of antioxidant capacity // Free Radical Biology And Medicine. -2000. V.28, №6. - P. 860-870

77. Kohen R., Vellaichamy E., Hrbac J., Gati I., Nirosh O., Quantification of the overall reactive oxygen species scavenging capacity of biological fluids and tissues // Free Radical Biology And Medicine 2000. - V.28, №6. - P. 871879.

78. Яшин А.Я., Яшин Я.И., Новый прибор для определения антиоксидантной активности пищевых продуктов, биологическиактивных добавок, растительных лекарственных экстрактов и напитков // Приборы и автоматизация. 2004. - №11. - С. 45-48.

79. Яшин А.Я., Яшин Я.И., Черноусова Н.И., Пахомов В.П., Экспрессный электрохимический метод определения антиоксидантной ативности пищевых продуктов // Пиво и напитки. 2004. - №6. - С. 44-46.

80. Ge В., Lisdat F. Superoxide sensor based on cytochrome С immobilized on mixed-thiol SAM with a new calibration method // Analytica Chimica Acta. -2002. V.454, № 1. - P. 53-64.

81. Бумбер А.А., Корниенко И.В., Профатилова И.А., Внуков В.В., Корниенко И.Е., Гарновский А.Д. Полярографический метод в изучении антиоксидантной активности аминокислот и белков. // Журнал общей химии. 2001. - Т.71, №8. - С. 1387-1390.

82. Громовая В.Ф., Шаповал Г.С., Мионюк И.Е., Луйк А.И. Электрохимическое исследование антиоксидантной активности крови // Журнал обшей химии. 1997. - т.67, № 3. - С. 510-513.

83. Stocks J., Gutteridje J.H., Sharp R., Dormandy T. Assay using brain homogenate for measuring the antioxidant activity of biological fluids// Clin. Sci. Mol. Med. 1974. V.47, (3) .P. 215-222.

84. Г.И. Клебанов, И.В. Бабенкова, Ю.О. Теселкин,/ Оценка антиокислительных свойств плазмы крови с применением желточных липопротеидов// Лабораторное дело.- 1988 №3 - С. 59-62.

85. Blasco A.J. Direct electrochemical sensing and detection of natural antioxidant capacity in vitro systems / A.J. Blasco, A.G. Crevillen, M.C. Gonzalez, A. Escarpa // Electroanalysis 2007. - V. 19, № 2. - P. 2275-2286.

86. Ziyatdinova G.K. The application of coulometry for total antioxidant capacity determination of human blood / G.K. Ziyatdinova, H.C. Budnikov, V.I. Pogorel'tzev, T.S. Ganeev // Talanta 2006. - V. 68, № 3. - P. 800-805.

87. Queiroz Ferreira R. Electrochemical determination of the antioxidant capacity: The Ceric Reducing/Antioxidant Capacity (CRAC) Assay / R. Queiroz Ferreira, L.A. Avaca // Electroanalysis 20078. - V. 20, № 12. - P. 1323-1329.

88. Антропов Л.И. Теоретическая электрохимия. М.: Высшая шлола, 1969.-510 с.

89. Дамьянович А.А. Современные проблемы электрохимии. М.: Мир, 1971.-450 с.

90. Lai М.Е., Bergel A. Electrochemical reduction of oxygen on glassy carbon: catalysis by catalase // Journal of Electroanalytical Chemistry. 2000. - V.494, № 1. - P. 30-40.

91. Дамаскин Б.Б., Петрий О.А., Цирлина Г.А. Электрохимия. М.: Химия, 2006. - 670с.

92. Короткова Е.И. Закономерности процесса электровосстановления кислорода, осложненного адсорбцией ПАОВ, и их использование в аналитической практике.: Дисс.к-та хим. наук. Томск, 1995. - 242 с.

93. Kuta J., Koryta J. Reduction of oxygen at the mercury electrode // Collect, of Czechoslovak Communications. 1965. - V.30, №12. -P. 4095 - 4110.

94. Тарасевич M.P., Хрущева С.И., Филиновский В.Ю. Вращающийся дисковый электрод с кольцом. М.: Наука, 1987. - 247 с.

95. Замощина Т.А 35 лет изучения фармакологии солей лития // Бюллетень сибирской медицины, Томск (2006). Приложение 2

96. Tamba М., O'Neil P. Redox reactions of thiol free radicals with the antioxidants ascorbate and chlorpromazine: Role in radioprotection // J. Chem. Soc. Perkins Trans. 2.- 1991.-Vol. 11.-P. 1681-1685.

97. Niki E. Action of ascorbic acid as a scavenger of active and stable oxygen radicals // Am. J. Klin. Nutr.-1991.- Vol. 54.- P. 1119-1124.

98. Методы и средства определения антиоксидантной активности препаратов. Материалы I семинара. / Под ред. Е.Б. Бурлаковой. Москва: ИБХФ, 2005. - 250с.

99. Аврамчик О.А. Закономерности процесса электровосстановления кислорода в присутствии антиоксидантов и их применение в аналитической практике. Дисс. канд. хим. наук. Томск, 2006. - 176 с.

100. Вторушина A.H. Метод вольтамперометрии в определении антиоксидантных свойств некоторых биологически активных соединений. Дисс. канд. хим. наук. Томск, 2008. - 200 с.

101. Bartoli G.M., Bartoli S., Galeotti Т., Bertoli E. Spectrophotometric study of oxygen radical species generation // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - Vol. G20. - P.205 -211.

102. Turyan Y.I., Gorenbein P., Kohen R. Theory of the oxygen voltammetric electroreduction process in the presence of an antioxidant for estimation of antioxidant activity // J. Electroanalytical Chem. 2004. - Vol. 571, №571. - P. 183-188

103. Галюс 3. Теоретические основы электрохимического анализа, пер. с польск. М.: Мир, 1974. - 552 с.

104. Шольц Ф. Электроаналитические методы: теория и практика: пер. с англ.; под ред. В.Н. Майстренко. — М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. —326 с.

105. Тарасевич М.Р. Обобщенное кинетическое уравнение электровосстановления молекулярного кислорода // Электрохимия. 1981. - Т.17, №8. - С. 1208-1212.

106. Тарасевич М.Р., Бурштейн Р.Х., Радюшкина К.А. Исследование параллельно-последовательных стадий реакций кислорода и перекиси водорода. Восстановление кислорода на платиновом электроде // Электрохимия. 1970. - Т.6, №3. - С. 372-375.

107. Зиятдинова Г.К., Гильметдинова Д.М., Будников Г.К. Реакции супероксиданион-радикала с антиоксидантами и их применение в вольтамерометрии / Журнал аналитической химии, 2005, том 60, №1, с.56-59

108. Эммануэль Н.М. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе. М, 1965.

109. Fridovich I. Superoxide anion radical (02-), superoxide dis-mutases, and related matters. J Biol Chem 1997; 272: 18515-18517.

110. Wolin M.S. Interactions of oxidants with vascular signaling systems. Arterioscler Thromb Vase Biol 2000; 20: 1430-1442.

111. Yang Y., Cheng J.Z., Singhal S.S. et al. Role of glutathione S-trans-ferases in protection against lipid peroxidation. J Biol Chem 2001; 276: 19220-19230.

112. Zhao Y., Wang Z.B., Xu J.X. Effect of cytochrome с on the generation and elimination of 02' and H202 in mitochondria. J Biol Chem 2003; 278: 23562360.

113. Меныцикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибирование радикальных окислительных процессов // Успехи совр. Биологии. 1993. Т. 113. Вып. 4. С 442-455

114. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2 томах. Tl. М.: Медицина, 1986, 624 с.

115. О.A. Avramchik, E.I. Korotkova, E.V. Plotnikov, A.N. Lukina, Y.A. Karbainov. Antioxidant and electrochemical properties of calcium and lithium ascorbates.// J. Pharmaceutical and biomedical analysis, v.37, 2005, p. 11491154.

116. Вредные химические вещества. Неорганические соединения элементов I-IV групп: справ. Изд. /Под. ред. В.А. Филова и др. JL: Химия, 1988, 512 с.

117. Новиков Д.К., Новикова В.А. Оценка иммунного статуса // Д.К. Новиков, В.А. Новикова, Москва, 1992.

118. Ghiselli A. A fluorescence-based method for measuring total plasma antioxidant capability / A. Ghiselli, M. Serafmi, G. Maiani, E. Azzini, A. Ferro-Luzzi // Free Radic. Biol. Med. 1987. - V. 18, № 1. - P. 29-36.

119. Antolovich M., Prenzler P.D., Patsalides E., McDonald S., Robards K. Methods for testing antioxidant activity // Analyst. 2002. - V.127, №. - P. 183-198.

120. M. Б. Фиалко, В. H. Кумок Лекции по планированию эксперимента. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1977.- 131с.

121. С. Н. Саутин Планирование эксперимента в химии и химической технологии.- Л.: Наука, 1975. 48с.

122. Е.И. Короткова. Практикум по планированию и организации эксперимента. Томск: Изд-во ТПУ, 1984.- 97с.

123. Красовский Г.И., Филаретов Г.Ф. Планирование эксперимента. Минск: Изд-во Белорусского ГУ, 1982. - 302 с

124. Bockris J.O'M., Abdu R. A theoretical study of the electrochemical reduction of oxygen // Journal of Electroanalytical Chemistry. 1998. - V.448, №2-P. 189-204.

125. Мельников В.И. Влияние поверхносто-активных веществ на кинетику катодного восстановления кислорода и коррозию железа в 1н. растворе серной кислоты.: Дисс. .к-та хим. наук. Киев. 1970. - 210с.

126. Schafer F.Q., Buettner R.G. Redox environment of the cell as viewed through the redox state of the glutathion disulfide/glutathione couple. Free Radic Biol Med 2001; 30: 1191-1212.

127. Багоцкий B.C., Яблокова И.Е. Механизм электрохимического восстановления перекиси водорода и кислорода на ртутном электроде // Журнал физической химии. 1953. - Т.27, №12. - С. 1663-1667.

128. Радюшкина К.А., Зонина Е.О., Тарасевич М.Р. Электровосстановление кислорода на пирографите в ацетонитрильных растворах // Электрохимия.- 1984. Т.20, №7. - С. 977-980.

129. Cofre P., Sawyer D.T. Electrochemical reduction of dioxigen to perhidroxil (HO 2) in aprotonic solvents that contain Bronsted acids // Analytical Chemistry.- 1986. V.58, №6. - P. 1057-1062.

130. Артемова B.M., Деркулова B.C., Макарова Jl.E. О влиянии некоторых добавок на электровосстановление кислорода в среде ДМФА на твердых электродах // Вопросы химии и химической технологии. 1984. - Т.74, №1. - С. 13-17.

131. Gootsby A.D., Sawyer D.T. Electrochemical reduction of superoxide ion and oxidation of hydroxide ion in dimethyl sulfoxide// Analytical Chemistry. 1968.- V.40, №1. P. 83-86.