Потенциометрия в исследовании антиоксидантной активности биологических объектов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Герасимова, Елена Леонидовна

• Герасимова, Елена Леонидовна
• кандидат химических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат химических наук Герасимова, Елена Леонидовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Литературный обзор.

1.1. Активные формы кислорода и их двойственная роль в организме.

1.2. Антиоксидантная защита организма.

1.3. Роль окислительного стресса в патогенезе различных заболеваний.

1.3.1. Болезни системы кровообращения и сахарный диабет.

1.3.2. Нарушения репродуктивной функции мужчин.

1.3.3. Нарушения репродуктивной функции женщин.

1.4. Мониторинг оксидант/антиоксидантного состояния (окислительного стресса) организма.

1.4.1. Определение радикальной активности.

1.4.2. Определение продуктов перекисного окисления макромолекул.

1.4.3. Оценка антиоксидантной активности.

1.4.3.1. Методы определения антиоксидантной активности ферментов.

1.4.3.2. Методы определения суммарной активности неферментативных антиоксидантов

1.5. Постановка задачи.

Глава 2. Экспериментальная часть.

2.1. Аппаратура.

2.2. Реактивы.

2.3. Объекты исследования.

2.4. Методы исследования.

2.4.1. Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности с использованием медиаторной системы.

2.4.2. Спектрофотометрический метод определения антиоксидантной активности TAS Randox.

2.4.3. Гемиглобинцианидный метод определения содержания гемоглобина

2.4.4. Метод определения гематокрита.

2.4.5. Спермиологический анализ.

Глава 3. Исследование взаимодействия медиаторной системы с цельной кровью и ее фракциями, семенной и фолликулярной жидкостями и разработка алгоритмов определения АОА этих жидкостей потенциометрическим методом с медиаторной системой.

3.1. Выбор сенсора.

3.2. Исследование и анализ крови и ее фракций.

3.2.1. Исследование растворов индивидуальных антиоксидантов и раствора, моделирующего состав плазмы крови.

3.2.2. Выбор состава медиаторной системы и условий разбавления пробы

3.2.3. Исследование влияния способа подготовки крови и ее фракций на результаты анализа.

3.2.4. Выделение клеточной составляющей антиоксидантной активности крови и эритроцитарной массы.

3.3. Исследование и анализ семенной и фолликулярной жидкостей.

3.3.1. Выбор состава медиаторной системы и условий разбавления пробы

3.3.2. Выбор фракции и способа подготовки семенной жидкости к анализу

3.3.3. Выбор способа подготовки фолликулярной жидкости к анализу.

3.3.4. Корреляция результатов определения АОА фолликулярной жидкости и сыворотки крови.

Глава 4. Исследование взаимодействия медиаторной системы с пероксидными радикалами и разработка потенциометрического метода определения антиоксидантной активности с использованием радикального инициатора 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин) дигидрохлорида (ААРН)

4.1. Исследование реакции взаимодействия пероксидных радикалов с восстановленным компонентом медиаторной системы.

4.2. Разработка метода исследования кинетики генерирования пероксидных радикалов, определение скорости и константы генерирования.

4.3. Разработка потенциометрического метода определения антиоксидантной активности с использованием реакции генерирования радикалов инициатором ААРН.

4.4. Определение АОА растворов индивидуальных антиоксидантов потенциометрическим методом с использованием взаимодействия с пероксидными радикалами, генерируемыми ААРН.

Глава 5. Сравнительные исследования антиоксидантных свойств биологических жидкостей методами, включающим стадию генерирования свободных радикалов и не включающим указанную реакцию. Обоснование использования последнего метода в анализе.

5.1. Сравнительные определения АОА плазмы крови спектрофотометрическим методом TAS Randox и потенциометрическим методом с медиаторной системой.

5.2. Определение TRA образцов эритроцитарной массы потенциометрическим методом с медиаторной системой с использованием взаимодействия с радикалами ААРН и без использования радикальных взаимодействий.

Глава 6. Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности в клинических исследованиях.

6.1. Исследование АОА плазмы крови пациентов с болезнями системы кровообращения и сахарным диабетом II типа.

6.2. Исследование АОА семенной жидкости при различных видах патологии репродуктивной функции, установление диагностических критериев.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Потенциометрия в исследовании антиоксидантной активности биологических объектов»

Актуальность темы. Активные формы кислорода (АФК) играют двойственную биологическую роль, в организме человека. АФК являются необходимым элементом фагоцитоза, при котором происходит разрушение поврежденных, старых, иммунологически несовместимых или злокачественных клеток и клеток, пораженных вирусами. Кроме того, благодаря высокой химической активности АФК выполняют функцию сигнальных внутриклеточных трансдьюсеров и межклеточных медиаторов. Однако, при воздействии ряда неблагоприятных факторов, наблюдается избыточное образование АФК. Его патологические последствия проявляются при чрезмерном накоплении АФК и продуктов окисления биомолекул -состоянии, называемом окислительным стрессом. Факторы, вызывающие окислительный стресс, различны, но все они приводят к окислительной модификации макромолекул, т.е. повреждению ДНК, белков, липидов и т.д.

В здоровом организме сохраняется равновесие в системе оксиданты-антиоксиданты. Поддержание окислительно-восстановительных реакций на стационарном уровне обеспечивается действием согласованной антиоксидантной системы. Для коррекции состояния антиоксидантной системы необходима информация о наличии и интенсивности окислительного стресса, что может быть сделано путем оценки антиоксидантной активности (АОА) различных биологических сред.

Существует ряд методов оценки состояния антиоксидантной системы. Основными из них являются: определение радикальной активности, продуктов перекисного окисления макромолекул, индивидуальных антиоксидантов (АО) (ферментативных и неферментативных) и оценка интегральной антиоксидантной активности. Сложность методик и аппаратуры, возможность использования только для анализа неокрашенных жидкостей, отсутствие единого терминологического подхода, неоднозначность данных препятствуют их применению в медицинской экспресс-диагностике.

Наиболее доступными и экспрессными методами оценки АОА являются электрохимические методы. Кроме преимуществ, связанных с доступностью, низкой стоимостью аппаратуры и реактивов, они позволяют напрямую оценить электронно-донорно-акцепторные свойства исследуемой системы, т.е. свойства, определяющие, антиоксидант/оксидантный баланс организма.

В представленной работе в качестве метода исследования антиоксидантной активности биологических объектов используется потенциометрический метод. Его использование позволяет существенно упростить и ускорить процесс получения информации об АОА в медицинской практике.

Цель работы: Развитие потенциометрического метода определения антиоксидантной активности и разработка новых алгоритмов определения АОА биологических объектов с использованием медиаторной системы и потенциометрической детекции.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Исследовать взаимодействие медиаторной системы К3[Ре(СЫ)б]/К4[Те(С]Ч)б] с отдельными антиоксидантами и биологическими объектами, разработать алгоритмы определения антиоксидантной активности крови и ее фракций, семенной и фолликулярной жидкостей.

2. Исследовать реакции взаимодействия радикального инициатора ААРН с медиаторной системой, оценить возможность использования потенциометрического метода для оценки скорости и константы генерирования пероксидных радикалов.

3. Разработать новый потенциометрический метод определения антиоксидантной активности с использованием реакции радикальной инициации и потенциометрической детекции.

4. Провести корреляционные исследования результатов определения антиоксидантной активности плазмы крови потенциометрическим методом и спектрофотометрическим методом TAS Randox.

5. Провести корреляционные исследования результатов определения антиоксидантной активности индивидуальных антиоксидантов и образцов эритроцитарной массы, полученных потенциометрическим методом с использованием радикальных взаимодействий и без использования радикального инициатора.

6. Провести клинические исследования АОА плазмы крови и семенной жидкости, выявить взаимосвязи величины АОА с наличием патологических состояний организма.

Научная новизна. Впервые показана возможность исследования радикальных реакций потенциометрическим методом с использованием медиаторной системы K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6]. Разработан новый потенциометрический метод исследования антиоксидантной активности с использованием радикального инициатора 2,2'-азобис(2-амидинопропан) дигидрохлорида (ААРН). Разработанным методом исследованы растворы индивидуальных антиоксидантов и эритроцитарной массы. Показана высокая степень корреляции результатов определения антиоксидантной активности потенциометрическим методом с реакцией радикальной инициации и без ее использования.

Разработаны новые алгоритмы анализа антиоксидантной активности крови и ее фракций, семенной и фолликулярной жидкостей. Получены новые знания в области исследования антиоксидантной активности биологических жидкостей. Проведены корреляционные исследования плазмы крови независимым спектрофотометрическим методом TAS Randox. Выявлены корреляционные зависимости между антиоксидантной активностью фолликулярной жидкости и сыворотки крови. Выделен вклад гемоглобина и клеточной составляющей антиоксидантной активности в суммарную восстановительную способность крови и эритроцитарной массы.

Предложенный метод использован в клинических исследованиях плазмы крови и семенной жидкости. Выявлена корреляционная зависимость АОА плазмы крови пациентов с болезнями системы кровообращения и сахарным диабетом II типа. Установлены различия в величине АОА семенной жидкости при различных видах патологии репродуктивной функции.

Практическая значимость.

Разработаны алгоритмы определения антиоксидантной активности биологических жидкостей. Предложена экспрессная и простая методика определения АОА крови и ее фракций, семенной и фолликулярной жидкостей. Методика определения антиоксидантной активности цельной крови, эритроцитарной массы, плазмы, сыворотки аттестована в ФГУП УНИИМ.

С использованием потенциометрического метода с медиаторной системой определены скорость генерирования пероксидных радикалов, константа генерирования.

Метод использован в клинических исследованиях. Высокая степень корреляции результатов антиоксидантной активности с наличием патологического состояния позволяет использовать данный параметр в медицинской практике.

Доступность и простота приборного оформления позволяет использовать потенциометрический метод для масштабных медицинских исследований.

На защиту выносятся:

1. Результаты исследования взаимодействия медиаторной системы К3[Ре(СЫ)б]/Ьм[Ре(СЫ)б] с индивидуальными антиоксидантами, цельной кровью и ее фракциями, семенной и фолликулярной жидкостями и алгоритмы определения АОА этих жидкостей потенциометрическим методом с медиаторной системой. и

2. Методики определения антиоксидантной активности крови и ее фракций, семенной и фолликулярной жидкостей.

3. Новый потенциометрический метод с медиаторной системой для исследования радикальных реакций.

4. Новый метод потенциометрической оценки антиоксидантной активности с использованием взаимодействия пероксидных радикалов с исследуемым объектом.

5. Результаты корреляционных исследований плазмы крови предложенным и спектрофотометрическим методом TAS Randox.

6. Результаты корреляционных исследований индивидуальных антиоксидантов и образцов эритроцитарной массы потенциометрическим методом с использованием радикальных реакций и без ее использования.

7. Результаты исследования антиоксидантной активности плазмы крови пациентов с болезнями системы кровообращения и сахарным диабетом II типа.

8. Результаты исследования антиоксидантной активности семенной жидкости при различных видах патологии репродуктивной функции.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, 2007), Международном семинаре «Загрязнение ртутью окружающей среды: эмиссия в атмосферу, восстановление территорий, влияние на здоровье» (Астана, 2007), Научно-практической конференции «Электрохимические методы анализа в контроле и производстве» (Томск, 2007), 11-й Международной семинар-ярмарке «Российские технологии для индустрии» «Нанотехнологии в электронике, энергетике, экологии и медицине» (Санкт-Петербург, 2007), 3rd International Symposium on Recent advances in food analysis (Prague, Czech Republic, 2007), VII Всероссийской конференции по электрохимическим метода анализа с международным участием (Уфа-Абзаково, 2008), ISTC Science Workshop at the International Conference on Contamination Soil (Center-Fiera Milano, Italy, 2008), 12th International Conference on Electroanalysis

Prague, Czech Republic, 2008), Международном конгрессе "Репродуктивное здоровье населения Урала и Сибири" (Екатеринбург, 2008), II Международном форуме "Аналитика и аналитики" (Воронеж, 2008), Всероссийской конференции молодых ученых и III школы им. академика Н.М. Эммануэля «Окисление, окислительный стресс, антиоксиданты» (Москва, 2008), Ninth workshop on (Bio)sensors and bioanalytical microtechniques in environmental and clinical analysis (Montreal, Canada, 2009), XV Symposium «Euroanalysis 2009» (Innsbruck, Austria, 2009), III Всероссийской конференции с международным участием «Аналитика России-2009» (Туапсе, 2009), Съезд аналитиков России (Москва (пансионат «Клязьма»), 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 1 статья в издании, рекомендованном ВАК, 1 глава в книге и тезисы 18 докладов.

Диссертация выполнена при поддержке гранта Российского Фонда Фундаментальных Исследований № 07-03-96071-р^урала «Исследование антиоксидантной активности биологических объектов, природных и вновь синтезированных соединений с использованием потенциометрического метода анализа» (2007-2009 гг.).

Автор выражает благодарность доценту Уральского государственного технического университета - УПИ, к.х.н. A.B. Ивановой за обсуждение результатов; к.х.н. JI.B. Алешиной за помощь в экспериментальной работе; профессору Института химической физики им. H.H. Семенова РАН, д.х.н. О.Т. Касаикиной за ценные советы и полезные обсуждения; директору ЗАО «Центр семейной медицины», к.м.н. И.Г. Портнову и руководителю лаборатории клинической эмбриологии, врачу-эмбриологу, к.м.н. C.JI. Балезину, а также к.м.н. Я.Е. Казакову за предоставленные образцы биологических объектов и данные о клиническом заключении.

Личный вклад автора состоял в постановке и решении основных задач, проведении экспериментальных исследований в области потенциометрического определения антиоксидантной активности биологических жидкостей, интерпретации и анализе полученных результатов.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, шести глав, обсуждения результатов, выводов, списка литературы из 121 наименования и приложений. Содержит 151 страницы, 30 таблиц, 26 рисунков, 2 приложения.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Герасимова, Елена Леонидовна

ВЫВОДЫ

1. Установлены стехиометрические коэффициенты реакции взаимодействия медиаторной системы K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6] с отдельными антиоксидантами, входящими в состав биологических жидкостей.

2. Разработаны алгоритмы определения антиоксидантной активности крови и ее фракций, семенной и фолликулярной жидкостей.

3. Разработан метод определения скорости и константы скорости генерирования радикалов с использованием медиаторной системы K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6] и потенциометрической детекции. Константа скорости генерирования радикалов, определенная потенциометрическим методом с медиаторной системой, составляет kjCpT06= 0,94±0,04 с"1.

4. Разработан новый потенциометрический метод оценки антиоксидантной активности с использованием реакции радикальной инициации, заключающийся во взаимодействии изучаемого образца с генерируемыми пероксидными радикалами и определении периода индукции, за который принято время от введения антиоксиданта в раствор инициатора до его практически полного расходования.

5. Достоверность результатов, получаемых потенциометрическим методом с медиаторной системой, подтверждена: а) высокой степенью корреляции результатов определения АОА плазмы крови, полученных спектрофотометрическим методом TAS Randox и потенциометрическим методом при 25°С (R2=0,87) и 37°С (R2=0,81); б) высокой степенью корреляции результатов определения АОА потенциометрических измерений с использованием радикальных взаимодействий и без их использования для индивидуальных антиоксидантов л 2

R =0,93) и образцов эритроцитарной массы (R =0,98).

6. Проведены клинические исследования АОА плазмы крови и семенной жидкости, выявлена взаимосвязь АОА с наличием патологий сердечно-сосудистой и репродуктивной систем.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Герасимова, Елена Леонидовна, 2010 год

1. Зенков H.K. Окислительный стресс / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова // М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.

2. Singh S. Nitric oxide, the biological mediator of the decade: fact or fiction? /

3. Singh, T.W. Evans //Eur. Respir. J. 1997. - V. 10. - P.699-707.

4. Янковский О.Ю. Токсичность кислорода и биологические системы (эволюционные, экологические и медико-биологические аспекты) / О.Ю. Янковский // СПб.: «Игра», 2000. 294 с.

5. Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита / В.И. Кулинский // Соросов, образов, журн. 1999. - Т. 1, № 2. - С. 2-7.

6. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах / Ю.А. Владимиров // Соросов, образов, журн. 2000. - Т. 6, № 12. - С. 1319.

7. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и ^запрограммированная смерть клетки / Ю.А. Владимиров // Соросов, образов, журн. 2000. - Т.6.№9.-С. 2-9.

8. Беляков H.A. Антиоксидантная активность биологических жидкостей человека: методология и клиническое значение / H.A. Беляков, С.Г. Семесько // Эфферентная терапия. 2005. - Т. 11, № 1. - С. 5-21.

9. Будников Г.К. Антиоксиданты как объекты биоаналитической химии / Г.К. Будников, Г.К. Зиятдинова // Журн. аналит. химии. 2005. - Т. 60, № 7.-С. 678-691.

10. Болдырев A.A. Окислительный стресс и мозг / A.A. Болдырев // Соросов, образов, журн. 2001. - Т. 7, № 4. - С. 21-28.

11. Клячко Н.Л. Ферменты биологические катализаторы: основные принципы действия / Н.Л. Клячко // Соросов, образов, журн. - 1997. - № 3. -С. 58-63.

12. Polidori M.C. Profiles of antioxidants in human plasma / M.C. Polidori, W. Stahl, О. Eichler, I. Niestroj, H. Sies // Free Radic. Biol. Med. 2001. - V. 30, №5.-P. 456-462.

13. Takahashi T. Antioxidant roles of cellular ubiquinone and related redox cycles / T. Takahashi, T. Honda, N. Sugimoto, S. Misobuchi, T. Okamoto // Biol. Pharm. Bull. 1999. - V. 22, № 11. - p. 1226 - 1233.

14. Shao H. Primary antioxidant free radical scavenging and redox signaling pathways in higher plant cells / H. Shao, L. Chu, Z. Lu, C. Kang // Int. J. Biol. Sei. 2008. - V. 4, № 1. - P. 8 - 14.

15. Reiter RJ. Melatonin as an antioxidant: biochemical mechanisms and pathophysiological implications in humans / RJ. Reiter, D. Tan, J.C. Mayo, R.M. Sainz, J. Leon, Z. Czarnocki // Biol. Pharm. Bull. 2003. - V. 50, № 4. -P. 1129- 1146.

16. Voss P. Ferritin oxidation and proteasomal degradation: protection by antioxidants / P. Voss, L. Horakova, M. Jakstadt, D. Kiekebusch, T. Grune // Free Rad. Res. 2006. - V. 40, № 7. - P. 673 - 683.

17. Verma V.K. Role bilirubin, vitamin С and ceruloplasmin as antioxidant in coronary artery disease / V.K. Verma, V. Ramesh, S. Tewari, R.K. Gupta, N. Sinha, C.M. Pandey // Indian J. of Clin. Biochem. 2005. - V. 20, № 2. - P. 6874.

18. Воробьева E.H. Роль свободнорадикального окисления в патогенезе болезней системы кровообращения / E.H. Воробьева, Р.И. Воробьев // Бюлл. СО РАМН 2005. - Т. 118, № 4. - С. 24-30.

19. Crimia Е. The role of oxidative stress in adult critical care / E. Crimia, V. Sica, S. Williams-Ignarro, H. Zhang, A.S. Slutsky, L.J. Ignarro, C. Napoli // Free Radic. Biol. Med. 2006. - V. 40, № 3. - P. 398 - 406.

20. Ляхович В.В. Активированные кислородные метаболиты в монооксигеназных реакциях / В.В. Ляхович, В.А. Вавилин, Н.К. Зенков, Е.Б. Меныцикова // Бюлл. СО РАМН 2005. - Т. 118, № 4. - С. 7-12.

21. Di Filippo С. Oxidative stress as the leading cause of acute myocardial infarction in diabetics / C. Di Filippo, S. Cuzzocrea, F. Rossi, R. Marfella, M. DAmico // Cardiovasc. Drug Rev. 2006. - V. 24, № 2. - P. 77 - 78.

22. Laight D.W. Antioxidants, diabetes and endothelial dysfunction / D.W. Laight, M.J. Carrier, E.E. Anggard // Cardiovasc. Res. 2000. - V. 47, № 3. -P. 457-464.

23. De Jonge C.J. The sperm cells: production, maturation, fertilization, regeneration / C.J. De Jonge, C.L.R. Barratt // UK: «Cambridge University Press», 2006. 345 p.

24. Быкова M.B. Про/антиоксидантный статус в сперматозоидах и семенной плазме мужчин при патоспермии / М.В. Быкова, Н.М. Титова, Е.В. Маркова, А.В. Светлаков // Пробл. Репрод. 2008. - № 3. - С. 63-67.

25. Yadav S.B. Effect of antioxidants and antibiotics on levels of seminal oxidative stress in leukocytospermic infertile men /S.B. Yadav, A.N. Suryakar, A.D. Huddedar, P.S. Shukla // Indian J. Clin. Biochem. 2006. - V. 21, № 1. -P. 152-156.

26. Cocuzza M. Clinical relevance of oxidative stress and sperm chromatin damage in male infertility: an evidence based analysis / M. Cocuzza, S.C. Sikka, K.S. Athayde, A. Agarwal // Int. Braz. J. Urol. 2007. - V. 33, № 5. -P. 603-621.

27. Khosrowbeygi A. Levels of oxidative stress biomarkers in seminal plasma and their relationship with seminal parameters / A. Khosrowbeygi, N. Zarghami // BMC Clinical Pathology 2007. - V. 7, № 6. - P. 31-37.

28. Pasqualotto F.F. Reactive oxygen species and oocyte fertilization / F.F. Pasqualotto, E.B. Pasqualotto // Hum. Reprod.- 2007. V. 22, № 3. - P. 901908.

29. Goud A.P. Reactive oxygen species and oocyte aging: Role of superoxide, hydrogen peroxide, and hypochlorous acid / A.P. Goud, P.T. Goud, M.P. Diamond, B. Gonik, H.M. Abu-Sou // Free Radic. Biol. Med. 2008. - V. 44, №7.-P. 1295-1304.

30. Адамян JI.B. Окислительный стресс и генитальный эндометриоз (обзор литературы) / JI.B. Адамян, Е.Н. Бургова, М.М. Сонова, А.А. Осипова, К.Н. Арсланян, О.Н. Поддубная // Пробл. Репрод. 2008. - № 4.- С. 42-47.

31. Agarwal A. Role of free radicals in female reproductive diseases and assisted reproduction / A. Agarwal, S.S. Allamaneni // Reprod. Biomed. Online- 2004. V. 9, №5. - P. 338-347.

32. Agarwal A. Oxidative stress and its implications in female infertility a clinician's perspective / A. Agarwal, S. Gupta, R. Sharma // Reprod. Biomed. Online - 2004. - V.l 1 № 5. - P. 641-650.

33. Valgimigli L. Mesasurement of antioxidative stress by EPR radical-probe technique / L. Valgimigli, G.F. Pedulli, M. Paolini // Free Radic. Biol. Med. -2001.- V. 31.-P. 708-716.

34. Castro J.A. Hydroxyl and 1-hydroxyethyl radical detection by spin trapping and GC-MS / J.A. Castro, G.D.Castro // Meth. Molecular Biol. 2002. - V. 186.-P. 89-99.

35. Владимиров Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции / Ю.А. Владимиров // Соросов, образов, журн. 1999. - № 6. - С. 25-32.

36. Арутюнян А.В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы / А.В. Арутюнян, Е.Е. Дубинина, Н.Н. Зыбина // СПб.: «Фолиант», 2000. -104 с.

37. Cao G. Oxygen radical absorbing capacity assay for antioxidants / G. Cao, H.M. Alessio, R.G. Cutler // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 14, № 1. - p. 303-311.

38. Хасанов В.В. Методы исследования антиоксидантов / В.В. Хасанов, Г.Л. Рыжова, Е.В. Мальцева // Химия раст. сырья. 2004. -№ 3. - С. 63-75.

39. Журавлев А.И. Свободнорадикальная биология / А.И. Журавлев, В.Т. Пантюшенко //М.: «Московская ветеринарная академия», 1989. 60 с.

40. Стальная И.Д. Современные методы в биохимии / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // М.: «Медицина», 1997. 117 с.

41. El-Saadani М. A spectrophotometric assay for lipid peroxides in serum lipoproteins using a commercially available reagen / M. El-Saadani, H.

42. Esterbauer, M. Sayed, M. Goher, A.Y. Nassar, G. Jurgens // J. Lipid Res. -1989. V. 30, № 4. - P. 627-630.

43. Гаврилов В.Б. Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой / В.Б. Гаврилов, А.Р. Гаврилова, М.М. Мажуль // Вопр. мед. химии. 1987.- №1. - С. 118-121.

44. Karatas F. Determination of free malondialdehyde in human serum by highperformance liquid chromatography // F. Karatas, M. Karatepe, A. Baysar // Anal. Biochem. 1989.- V. 311, № 1.-P. 76-79.

45. Flercher B.L. Measurement of fluorescent lipid peroxidation products in biological systems and tissues / B.L. Flercher, C.J. Dillard, A.Y. Tappel // Anal. Biochem. 1973. - V. 52, № 1. - P. 1-9.

46. Levine R.L. Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins / R.L. Levine, D. Garland, C.N. Oliver, A. Amici, I. Climent, A.G. Lenz, B.W. Ahn, S. Shaltiel, E.R. Stadtman // Meth. Enzymol. 1990. - V. 186, № l.-P. 464-478.

47. Ozawa T. Genetic and functional changes in mitochondria associated with aging / T. Ozawa // Physiol. Rev. 1997. - V. 77, № 2. - P. 425-464.

48. Lodovici M. Levels of 8-hydroxy-2-deoxyguanosine, a marker of oxidative DNA damage, in human leukocytes / M. Lodovici, C. Casalini, R. Cariaggi, L. Michelucci, P. Dolara // Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 28, № 1. - P. 1317.

49. Pratico D. F2-isoprostanes as indices of lipid peroxidation in inflammatory diseases / D. Pratico, J. Rokach, J. Lawson, G.A. Fitzgerald // Chem. Phys. Lipids.-2004.- V. 128, №2.-P. 165-171.

50. Cracowski J.L. Human internal mammary artery contraction by isoprostaglandin F2alpha type III (8-iso-prostaglandin F2 alpha) // J.L. Cracowski, F. Stanke-Labesque, C. Souvignet, G. Bessard // Eur. J. Pharmacol. -2000.- V. 397, №4.-P. 161-168.

51. Roberts L.J. Measurement of F(2)-isoprostanes as an index of oxidative stress in vivo / L.J. Roberts, J.D. Morrow // Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 28,№4.-P. 505-513.

52. Veltsistas P.G. All-Solid-State Potentiometric Sensors for Ascorbic Acid by Using a Screen-Printed Compatible Solid Contact / P.G. Veltsistas, M.I. Prodromidis, C.E. Efstathiou // Anal. Chim. Acta 2000. - V. 502. - P. 15-22.

53. Ghiselli A. New approaches for measuring plasma or serum antioxidant capacity: a methodological note / A. Ghiselli, M. Serafini, A. Ferro-Luzzi // Free Radic. Biol. Med. 1994. - V. 16, № 1. - P. 135-137.

54. Cao G. Measurement of oxygen radical absorbance capacity in biological samples / G. Cao, R.L. Prior // Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 28, № 3. -P. 1795-1805.

55. McCord J.M. Superoxide dismutase: an enzymic function for erythrocuprein (hemocuprein) / J.M. McCord, I. Fridovich // J. Biol. Chem. -1969. V. 244, № 2. - P. 6049-6055.

56. Сирота T.B. Новый подход в исследовании аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т.В. Сирота//Вопр. мед. химии 1999. - Т. 45, № 3. - С. 109-116.

57. Tho L.L. Superoxide dismutase and glutathione peroxidase activities in erythrocytes as indices of oxygen loading in disease: a survey of one hundred cases / L.L. Tho, J.K. Candlish // Biochem. Med. Metab. Biol. 1987. - V. 38, № 1. - P. 74-80.

58. Костюк В.А. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцетина / В.А. Костюк, А.И. Потапович, Ж.В. Ковалева // Вопр. мед. химии 1990.-Т. 36,№2.-С. 88-91.

59. Nishikimi M. The occurrence of superoxide anion in the reaction of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen / M. Nishikimi, N. Appaji, K. Yagi // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. - V. 46, № 2. - P. 849-854.

60. Hyland K. Superoxide dismutase assay using alkaline dimethylsulfoxide as superoxide anion-generating system / K. Hyland, E. Voisin, M. Banoun, C. Auclair // Anal. Biochem. 1983. - V. 135, № 2. - P. 280-287.

61. Магин Д.В. Фотохемилюминесценция как метод изучения антиоксидантной активности в биологических системах. Математическое моделирование / Д.В. Магин, Д.Ю. Измайлов, И.Н. Попов, Г. Левин, Ю.А. Владимиров // Вопр. мед. химии 2000. — Т. 4, № 2. - С. 62-68.

62. Aebi Н. Catalase in vitro / Н. Aebi // Methods Enzymol. 1984. - V. 105.-P. 121-126.

63. Бах A.H. Сборник избранных трудов // A.H. Бах, С.А. Зубкова // СПб.: «Наука» 1997. 415 с.

64. Handler J.A. Catalase-dependent ethanol metabolism in vivo in deermice lacking alcohol dehydrogenase / J.A. Handler, B.U. Bradford, E. Glassman, J.K. Ladine, R.G. Thurman // Biochem. Pharmacol. 1986. - V. 35, № 24. -P. 4487-4492.

65. Карнаухова B.H. Люминесцентный спектральный анализ клетки / В.Н. Карнаухова // М.: «Наука», 1978 240 с.

66. Ellman L. Tissue sulfhydryl groups / L. Ellman // Arch. Biochem. Biophys. -1959.- V. 82.-P. 70-77.

67. Paglia D.E. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase / D.E. Paglia, W.N. Valentine // J. Lab. Clin. Med. 1967. - V. 70. - P. 159-168.

68. Карпищенко А.И. Медицинские лабораторные технологии. Справочник / А.И. Карпищенко // СПб.: «Интермедика», 1999 656 с.

69. Magalhaes L.M. Automatic method for determination of total antioxidant capacity using 2,2-diphenyl-l-picrylhydrazyl assay / L.M. Magalhaes, M.A.

70. Segundo, S. Reis, J.L.F.C. Lima // Analyt. Chim. Acta 1986. - V. 558, № 2. -P. 310-318.

71. Pellegrini N. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay / N. Pellegrini, A. Proteggente, A. Pannala, M. Yang, C. Rice-Evans // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 26, № 9. - P. 12311237.

72. Ghiselli A. A fluorescence-based method for measuring total plasma antioxidant capability / A. Ghiselli, M. Serafini, G. Maiani, E. Azzini, A. Ferro-Luzzi // Free Radic. Biol. Med. 1987. - V. 18, № 1. - P. 29-36.

73. Krasovska A. Chemiluminescence detection of peroxyl radicals and comparison of antioxydant activity of phenolic compounds / A. Krasovska, D. Rosiak, K. Czkapiak, M. Lukaszewicz // Cur. Topics Biophys. 2000. - V. 24. -P. 89-95.

74. Benzie I.F. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of "antioxidant power": the FRAP assay / I.F. Benzie, J.J. Strain // Anal. Biochem. 1996. - V. 239, № 1. -P. 70-76.

75. Korotkova E.I. Investigation of antioxidant and catalytic properties of some biologically active substances by voltammetry / E.I. Korotkova, Y.A. Karbainov, O.A. Avramchik // Anal. Bioanal. Chem. 2003. - V. 375, № 1-3. -P. 465-468.

76. Бурлакова Е.Б. Связь физико-химических характеристик ингибиторов с их строением. Теория и практика жидкофазного окисления / Е.Б. Бурлакова, Н.Г. Храпова // М.: «Наука», 1975. 240 с.

77. Kasaikina О.Т. The inhibitory activity of natural phenolic antioxidants in the oxidation of lipid substrates / O.T. Kasaikina, V.D. Kortenska, E.M. Marinova, I.F. Rusina, N.V. Yanishlieva // Russ. Chem. Bull. 1997. - V. 46, №6. -P. 1070-1073.

78. Хасанов В.В. Исследование антиокислительных свойств соединений с использованием реакции окисления сульфита натрия / В.В. Хасанов, Г.Л. Рыжова, Е.В. Мальцева // Химия раст. сырья 2004. -№ 3. - С. 77-85.

79. Valkonen М. Spectrophotometric assay for total peroxyl radical-trappingantioxidant potential in human serum / M. Valkonen, T. Kuusi // J. Lipid Res. -1997.- V. 38. -P. 823-833.

80. Владимиров Ю.А. Активированная кумарином хемилюминосценция липопротеидов низкой плотности в присутствии ионов двухвалентного железа / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев, Т.К. Азимбаев // Биофизика -1992.-№37.-С. 1041-1047.

81. Владимиров Ю.А. Активированная хемилюминесценция и биолюминесценция как инструмент в медико-биологических исследованиях / Ю.А. Владимиров // Соросов, образов, журн. 2001. - Т. 7, № 1. - С. 16-23.

82. Лозовская Е.Л. Сравнительная эффективность некоторых медицинских препаратов как акцепторов супероксид-радикала / Е.Л. Лозовская, И.И. Сапежинский // Биофизика 1993. - Т.38. - С. 31-36.

83. Ozyurt D. Determination of total antioxidant capacity by a new spectrophotometric method based on Ce(IV) reducing capacity measurement / D. Ozyurt, B. Demirata, R. Apak // Talanta 2007. - V. 71, № 3. - P. 11551165.

84. Mayer B. High-Throughput Fluorescence Screening of Antioxidative Capacity in Human Serum / B. Mayer, M. Schumacher, H. Brandstatter, F.S. Wagner and A. Hermetter // Anal. Biochem. 2001. - V. 297, № 2. - P. 144153.

85. Hu Y.-L. A simple electrochemical method for the determination of hydroxyl free radicals without separation process / Y.-L. Hu, Y. Lu, G.-J. Zhou, X.-H. Xia // Talanta 2007. - V. 74, № 4. - P. 760-765.

86. Blasco A.J. Direct electrochemical sensing and detection of natural antioxidant capacity in vitro systems / A.J. Blasco, A.G. Crevillen, M.C. Gonzalez, A. Escarpa // Electroanalysis 2007. - V. 19, № 2. - P. 2275-2286.

87. Ziyatdinova G.K. The application of coulometry for total antioxidant capacity determination of human blood / G.K. Ziyatdinova, H.C. Budnikov, V.I. Pogorel'tzev, T.S. Ganeev // Talanta 2006. - V. 68, Jte 3. - P. 800-805.

88. Korotkova E.I. Study of antioxidant properties by voltammetry / E.I. Korotkova, Yu.A. Karbainov, A.V. Shevchuk //J. Electroanal. Chem. 2002. -V. 508, № l.-P. 56-60.

89. Queiroz Ferreira R. Electrochemical determination of the antioxidant capacity: The Ceric Reducing/Antioxidant Capacity (CRAC) Assay / R. Queiroz Ferreira, L.A. Avaca // Electroanalysis 20078. - V. 20, № 12. - P. 1323-1329.

90. Mello L.D. Biosensors as a tool for the antioxidant status evaluation / L.D. Mello, L.T. Kubota // Talanta 2007. - V. 72, № 22. - P. 335-348.

91. Brainina Kh.Z. Potentiometry as a method of antioxidant activity investigation / Kh.Z. Brainina, A.V. Ivanova, E.N. Sharafutdinova, E.L. Lozovskaya, E. Shkarina // Talanta 2007. - V. 71, № 1. - P. 13-18.

92. Re R. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay / R. Re, N. Pellegrini, A. Proteggente, A. Pannala, M. Yang, C. Rice-Evans // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 26, № 9-10. - P. 1231-1237.

93. Randox. Total Antioxidant Status. Cat No. 2332.

94. Drabkin D.L. Spectrophotometric constants for common hemoglobin derivatives in human, dog and rabbit blood / D.L. Drabkin, J.H. Austin // J. Biol. Chem. 1932.-V. 98 -P. 719-723.

95. Allen R.N. A theoretical study of the structure and properties of uric acid: A potent antioxidant / R.N. Allen, M.K. Shukla, J. Leszczynski // Int. J. Quantum Chem. 2004. - V. 100, № 5. -P. 801-809.

96. Zinellu A. Pre-analytical factors affecting ascorbic and uric acid quantification in human plasma / A. Zinellu, S. Sotgia, L. Deiaria, C. Carru // J. Biochem. Biophys. Methods 2006. - V. 67, № 2-3. - P. 95-105.

97. Колесниченко JI.С. Глутатионовая антиоксидантная система у больных сахарным диабетом / JI.C. Колесниченко, Т.П. Бардымова, Н.В. Верлан, Е.С. Сергеева, М.П. Сергеева // Сиб. мед. журн. 2009. -№ 1. - С. 31-33.

98. Баранова Е.И. Клиническое значение гомоцистеинемии // Е.И. Баранова, О.О. Большакова // Артер. гиперт. 2004. - Т.10, № 1. - С. 12-15.

99. Усс A.JI. Криоконсервирование клеток человека / A.JI. Усс, П.Б. Мицкевич, И.Л. Завгородняя // Мед. панорама 2003. - Т.27, № 2. - С. 3841.

100. Giulivi С. A novel antioxidant role for hemoglobin. The comproportionation of ferrylhemoglobin with oxyhemoglobin / C. Giulivi, K.J. Davies // J. Biol. Chem. 1990. — V. 265, № 32. -P. 19453-19460.

101. Craine J.E. Effect of hemoglobin on ferricyanide-dependent assays / J.E. Craine, J.L. Connelly // Anal. Biochem. 1970. - V. 38, № 2. - P. 539-546.

102. Справочник биохимика / Пер. с англ. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. // М.: «Мир», 1991. 544 с.

103. May J.M. Mechanisms of ascorbic acid recycling in human erythrocytes / J.M. May, Z. Qu, J.D. Morrow // Biochim. Biophys. Acta 2001. - V. 1528, № 2-3. -P. 159-166.

104. Naik R.M. The kinetics and mechanism of oxidation of hexacyanoferrate(II) by periodate ion in highly alkaline aqueous medium / R.M. Naik, A. Srivastava, A. Asthana // J. Iran. Chem. Soc. 2008. - V. 5, № 1. - P. 29-36.

105. Betigeri S. Use of 2,2-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride as a reagent tool for evaluation of oxidative stability of drugs / S. Betigeri, A. Thakur, K. Raghavan // Pharm. Res. 2005. - V. 22, № 2. - P. 310-317.