N-амидино-аминокислоты и их использование в синтезе полипептидов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат химических наук Москаленко, Юлия Евгеньевна

• Москаленко, Юлия Евгеньевна
• кандидат химических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат химических наук Москаленко, Юлия Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Неприродные аминокислоты.

1.2. Природные соединения, содержащие гуанидиновую группу.

1.3. Методы синтеза гуанидинов.

1.4. Особенности получения и применения полимеров на основе производных гуанидина.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Выбор объектов исследования.

2.2. N-амидино-пролин.

2.2.1. Синтез защищённых производных N-амидино-пролина

2.2.2. Твердофазный синтез пептидов, содержащих УУ-амидино-пролин.

2.3. N-амидино-пироглутаминовая кислота.

2.3.1. Гуанидилирование эфира пироглутаминовой кислоты.

2.3.2. Окисление УУ-амидино-пролина.

2.3.3. Модификация глутаминовой кислоты.

2.4. 2-имино-1-имидазолидин уксусная кислота (циклокреатин).

ГЛАВА 3. СИНТЕЗ ПЕПТИДОВ, СОДЕРЖАЩИХ TV-АМИДИНО-АМИНОКИСЛОТЫ.

3.1. Получение аналогов RGD-пептидов.

3.2. Синтез аналогов люлиберина.

3.3. Использование производных N-амидино-пролина при синтезе полимеров.

ГЛАВА 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

4.1. Материалы и методы исследования.

4.2. Синтез N-амидино-пролина и его производных.

4.3. Синтез пептидов твердофазным методом.

4.4. Синтез поли|>[а-(ЪГ-амидино-пролил)орнитина].

4.5. Изучение стабильности RGD-пептидов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «N-амидино-аминокислоты и их использование в синтезе полипептидов»

Природные полипептиды и белки применяются при диагностике инфекционных заболеваний, разработке лекарственных препаратов и* систем адресной доставки биологически активных соединений в клетки-мишени. Однако использование природных соединений в качестве лекарственных препаратов зачастую ограничено из-за широкого спектра действия, недостаточной энзиматической стабильности и невозможности перорального введения. Одним из способов преодоления таких проблем является получение синтетических аналогов, лишенных перечисленных недостатков или создание пептидомиметиков — органических молекул, моделирующих особенности строения активных центров пептидов и белков. При синтезе рассматриваемых соединений широко используются так называемые неприродные аминокислоты. Проведение структурно-функционального анализа позволяет модифицировать первичную структуру пептида или белка таким образом, чтобы способствовать образованию наиболее выгодной для биологического эффекта конформации.

Таким образом, получение новых аминокислот и разработка методов их введения в полипептидную цепь представляется актуальной задачей.

Среди неприродных аминокислот особую роль играют соединения, содержащие гуанидиновую группу, поскольку она входит в состав многих биологически активных веществ: антибиотиков, ингибиторов ферментов, алкалоидов и т. п. Уникальность физико-химических свойств гуанидинов, заключающаяся в сохранении положительного заряда при физиологическом значении рН, обусловливает их важную роль во многих биологических процессах. В современной литературе представлены многочисленные методы, используемые при синтезе замещенных гуанидинов. Вместе с тем, их практическое применение не всегда приводит к положительным результатам, что свидетельствует о необходимости оптимизации способов получения конкретных объектов. Для моделирования ключевых особенностей TV-концевой последовательности аргинил-пролин, входящей, в состав многих природных пептидов, нами был выбран TV-амидино-пролин и его аналоги: TV-амидино-пироглутаминовая кислота и 2-имино-1-имидазолидин-уксусная кислота (циклокреатин).

Целью данного исследования является* разработка методов синтеза TV-амид ино-аминокисл от и их защищённых производных для получения на- их основе биологически активных, пептидов, пептидомиметиков и полимеров медицинского назначения.

При этом были поставлены следующие задачи:

1. Синтезировать TV-амидино-пролин и его производные, защищенные по амидиновой группе;

2. Разработать методы синтеза пептидов, содержащих TV-амидино-пролин, 2-имино-1-имидазолидин-уксусную кислоту (циклокреатин) и N-амидино-пироглутаминовую кислоту;

3. На примере аналогов люлиберина и RGD-пептидов изучить особенности применения N-амидино-аминокислот в пептидном синтезе и исследовать их влияние на строение и свойства полученных соединений;

4. Разработать методы синтеза полимеров на основе TV-амидино-пролина.

Методы исследования. Для подтверждения индивидуальности и доказательства химической структуры синтезированных соединений использовали методы электрофореза, тонкослойной хроматографии, обращённо-фазовой ВЭЖХ, масс-спектрометрии (ESI MS) и спектроскопии ЯМР. Пространственное строение полученных олигопептидов изучали методом двумерной корреляционной спектроскопии ЯМР.

Объектами исследования являлись. TV-амидино-аминокислоты, их защищенные производные, а также полученные при их использовании пептиды и полимеры.

Особенности применения TV-амидино-аминокислот в классическом и твердофазном пептидном синтезе определены на примере аналогов люлиберина и RGD-пептидов. Возможности получения гуанидин-содержащих полимеров исследованы при проведении полимеризации амидино-пролил)-орнитина.

Научная новизна:

- V

- разработаны методы синтеза олигопептидов, содержащих тУ-амидино-пролин, основанные на использовании мезитиленсульфонильного производного или проведении реакции гуанидилирования на полимерном носителе;

- выявлено образование бициклического побочного продукта при активации карбоксильной группы свободного TV-амидино-пролина;

- разработан способ получения пептидов, содержащих тУ-амидино-пироглутаминовую кислоту, и получены данные об особенностях их поведения в растворе при различных рН;

- предложен простой и эффективный метод синтеза олигопептидов, содержащих 2-имино-1-имидазолидин-уксусную кислоту (циклокреатин);

- установлено, что замена аргинина на TV-амидино-пролин приводит к значительному повышению устойчивости RGD-пептидов к энзиматическому расщеплению;

- проведен синтез двадцати новых химических соединений, включая производные TV-амидино-аминокислот, олигопептиды и продукты побочных химических реакций, структуры которых подтверждены методами физико-химического анализа.

Практическая значимость работы. Разработанные методы синтеза N-амидино-аминокислот и их защищенных производных могут быть использованы при получении биологически активных полипептидов, пептидомиметиков и полимеров, содержащих TV-амидино-пролин, циклокреатин и тУ-амидино-пироглутаминовую кислоту. На основе последовательности RGDF, модифицированной циклокреатином, синтезирован высокоактивный аналог, перспективный при разработке систем направленной доставки противоопухолевых препаратов.

Положения, выносимые на защиту:

- при получении олигопептидов, содержащих W-амидино-пролин, наиболее эффективным является метод гуанидилирования на полимерном носителе;

- замена- аргинина на TV-амидино-пролин позволяет значительно повысить устойчивость аналогов RGD-пептидов к энзиматическому расщеплению;

- проведение реакции внутримолекулярной* циклизации является предпочтительным вариантом при синтезе пептидов, содержащих N-амидино-пироглутаминовую кислоту.

Апробация работы и публикации. По теме диссертации опубликовано 3 статьи. Результаты исследований докладывались на 29-м Европейском пептидном симпозиуме (Гданьск, 2006), III российском симпозиуме «Белки и пептиды» (Пущино, 2007) и конкурсе молодых ученых ИВС РАН (2006).

Работа выполнена в ИВС РАН в Лаборатории синтеза пептидов и полимерных микросфер в соответствии с планом научно-исследовательских работ по теме: «Биологически активные полимерные системы: синтез, структура, свойства».

Личный вклад автора состоял в проведении экспериментальных работ по синтезу производных TV-амидино-аминокислот и исследованию особенностей получения пептидов и полимеров на основе таких соединений.

Структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка цитируемой литературы и приложений. Работа изложена на 140 страницах, содержит 4 таблицы, 56 рисунков и 11 приложений, список литературы включает 165 наименований.

Заключение диссертации по теме «Высокомолекулярные соединения», Москаленко, Юлия Евгеньевна

ВЫВОДЫ

1. Разработаны методы синтеза олигопептидов, содержащих iV-амидино-пролин, iV-амидино-пироглутаминовую кислоту и 2-имино-1-имидазолидин-уксусную кислоту (циклокреатин), основанные на использовании защищенных производных или реакции гуанидилирования на полимерном носителе.

2. Исследование особенностей применения производных TV-амидино-пролина показывает, что активация карбоксильной группы свободной аминокислоты сопровождается образованием бициклического побочного продукта.

3. В ходе оптимизации методов твердофазного синтеза олигопептидов, содержащих iV-амидино-аминокислоты, установлено, что предпочтительным вариантом является гуанидилирование на полимерном носителе.

4. Впервые разработан метод синтеза пептидов, содержащих iV-амидино-пироглутаминовую кислоту, основанный на реакции внутримолекулярной циклизации на полимерном носителе. Показано, что такие соединения устойчивы в диапазоне рН 2-7.4, в то время как при рН 9 наблюдается быстрое раскрытие цикла с образованием производных гуанидино-глутаминовой кислоты.

5. Показано, что включение N-амидино-аминокислот в последовательность RGD-пептидов путем замены остатка аргинина или присоединения по TV-концевой аминогруппе повышает устойчивость аналогов к ферментативному расщеплению в плазме крови человека.

6. Разработан способ получения полимеров, содержащих в боковой цепи N-амидино-пролин, путём полимеризации активированного эфира N^-fN-амидино-пролил)-орнитина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе выполнения настоящего исследования синтезировано двадцать новых химических соединений, включая производные TV-амидино-аминокислот, олигопептиды и продукты побочных химических реакций, структуры которых подтверждены методами физико-химического анализа.

В результате исследования двух различных схем синтеза защищённого производного TV-амидино-пролина разработана методика, позволяющая получить оптически чистое производное. Количественная оценка оптической чистоты соединений проведена методом ОФ ВЭЖХ для диастереомерных пар L- и £>-7У-амидино-пролил-/,-аланина.

В ходе исследования было установлено, что активация карбоксильной группы свободного TV-амидино-пролина в присутствии водоотнимающих агентов сопровождается побочной реакцией циклизации с образованием выгодного пятичленного цикла.

Особенности применения защищённых производных TV-амидино-пролина были исследованы на примере широко используемых на практике классического пептидного синтеза в растворе и твердофазного метода, основанного на применении полимерных носителей. При этом показано, что в последнем случае предпочтительным вариантом синтеза пептидов, содержащих TV-амидино-пролин является гуанидилирование пептидил-полимера.

В ходе выполнения исследования предложен оригинальный и простой метод получения защищённого производного циклокреатина для синтеза олигопептидов. Показано, что защита протонированием с помощью пара-толуолсульфокислоты позволяет добиться хорошей растворимости циклокреатина в органических растворителях.

При разработке методики синтеза TV-амидино-пироглутаминовой кислоты исследованы три различные схемы и показана высокая эффективность метода внутримолекулярной циклизации гуанидино-глутаминовой кислоты на полимерном носителе. В результате варьирования длины синтезируемой аминокислотной последовательности установлено, что для получения полипептидов, содержащих более десяти аминокислотных остатков, может быть рекомендован метод фрагментной конденсации. В ходе исследования обнаружено, что методика удаления трет-бутилоксикарбонильной защиты с помощью триметилсилил-трифлата на полимере Ванга, описанная в литературе, сопровождается побочной реакцией алкилирования триэтиламина фрагментом линкерной группировки полимерного носителя.

При разработке метода синтеза полимеров, содержащих в боковой цепи TV-амидино-пролин, проведено сравнительное изучение эффективности двух схем получения мономеров. Показано, что при проведении полимеризации Д^-(Лг-амидино-пролил)-орнитина может быть использован метод активированных эфиров.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Москаленко, Юлия Евгеньевна, 2008 год

1. Watanabe К., Nakazawa М., Izawa К., Yokozeki К. Novel and efficient technologies for the production of unnatural amino acids and peptides // Suppl. Chimica Oggi/ Chemistry Today. 2005. V. 23. N. 3. P. 29-32.

2. Madau A., Porzi G., Sandri S. Stereoselective synthesis of unnatural amino acids m-4-hydroxyproline and bulgecinine // Tetrahedron: Asymmetry. 1996. V. 7. N. 3.P. 825-830.

3. Gude M., Piarulli U., Potenza D., Salom В., Gennari C. A new method for the solution and solid phase synthesis of chiral P-sulfonopeptides under mild conditions // Tetrahedron Lett. 1996. V. 37. N. 47. P. 8589-8592.

4. Carloni A., Porzi G., Sandri S. Stereoselective synthesis of uncommon a,a'-dialkyl-a-aminoacids. Part 1 // Tetrahedron: Asymmetry. 1998. V. 9. P. 29872998.

5. Ma J.S. Unnatural amino acids in drug discovery // Chimica Oggi/ Chemistry Today. 2003. V. 21. N. 6. P. 65-68.

6. Anthony-Cahill S.J., Magliery T.J. Expanding the natural repertoire of protein structure and function // Curr. Pharm. Biotech. 2002. V. 3. P. 299-315.

7. Hodgson D.R.W., Sanderson J.M. The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids // Chem. Soc. Rev. 2004. V. 33. P. 422-430.

8. Forster A.C., Tan Z., Nalam M.N.L., Lin H., Qu #., Cornish V.W., Blacklow S.C. Programming peptidomimetic syntheses by translating genetic codes designed de novo И Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. V. 100. N. 11. P. 63536357.

9. Beene D.L., Dougherty D.A., Lester H.A. Unnatural amino acids mutagenesis in mapping ion channel function // Curr. Opin. Neurobiol. 2003. V. 13. P. 264270.

10. Santagada V., Fiorino F., Perissutti E., Severino В., De Filippis V., Vivenzo В., Caliendo G. Microwave-enhanced solution coupling of the a,a-dialkyl amino acid, Aib // Tetrahedron Lett. 2001. V. 42. P. 5171-5173.

11. Sia S.K., Carr P.A., Cochran A.G., Malashkevich V.N., Kim P.S. Short constrained peptides that inhibit HIV-1 entry // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V. 99. N. 23. P. 14664-14669.

12. Wang Q., Sasaki N.A., Potier P. Asymmetric synthesis of 4-substituted prolines as conformationally constrained amino acid analogues // Tetrahedron. 1998. V. 54. P. 15759-15780.

13. Gunther R., Thust S., Hofmann H.-J. Trypsin-specific acyl-4-guanidinophenyl esters for a-chymotrypsin-catalized reactions // Eur. J. Biochem. 2000. V. 267. N. 12. P. 3496-3501.

14. Zhang Z., Aerschot A.V., Hendrix c., Busson C., Busson R., David F., Sandra P., Herdewijn P. Synthesis of alanine and proline amino acids with amino or guanidinium substitution on the side chain // Tetrahedron. 2000. V. 56. P. 25132522.

15. Wen K., Han H., Hoffman T.Z., Janda K.D., Orgel L.E. The synthesis of p-peptides containing guanidine groups // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001. V. 11. N. 5.P. 689-691.

16. Barbul A. Arginine: biochemistry, physiology, and therapeutic implications // J. Parenter. Enteral Nutr. 1986. V. 10. P. 227-238.

17. Nitric oxide donors. Edited by Wang P. G., Cai T.B., Taniguchi N. Wiley-VCH: Weinheim. 2005. 390 p.

18. Jia O., Jannuk A. J, Cai Т., Xian M., Wen Z., Wang P.G. NO donors with anticancer activity // Expert Opin. Ther. Patents. 2002. V. 12. N. 6. P. 819-826.

19. Shiraki K., Kudou M., Fujiwara S., Imanaka Т., Takagi M. Biophysical effect of amino acids on the prevention of protein aggregation. // J. Biochem. 2002. V. 132. P. 591-595.

20. Shiraki K., Kudou M., Nishikori S., Kitagawa H., Imanaka Т., Takagi M. Arginine ethylester prevents thermal inactivation and aggregation of lyzozyme // Eur. J. Biochem. 2004. V. 271. P. 3242-3247.

21. Histones and other basic nuclear proteins. Hnilica L.S., Stein G.S., Stein J.L. (Eds.) (CRC series in the biochemistry and molecular biology of the cell nucleus.) CRC Press, Inc. 1989. 424 p.

22. Кокряков B.H. Биология антибиотиков животного происхождения. СПб.: Наука, 1999. 162 с.

23. Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф. Антимикробные полимеры. СПб.: Гиппократ, 1993. 264 с.

24. Nishikawa М., Ogawa К. Antimicrobial activity of a chelatable poly(arginyl-histidine) produced by the ergot fungus Verticillium kibiense // Antimicrob. Agents Chemother. 2004. V. 48. N. 1. P. 229-235.

25. Frankel A.D., Pabo C.O. Cellular uptake of the Tat protein from human immunodeficiency virus // Cell. 1988. V. 55. P. 1189-1193.

26. Vives E., Brodin P., Lebleu B. A truncated HIV-l Tat protein basic domein rapidly translocates through the plasma membrane and accumulates in the cell nucleus // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 16010-16017.

27. Berlinck R.G.S. Natural guanidine derivatives // Nat. Prod. Rep. 1999. V. 16. P. 339-365.

28. Kim K.S., Qian L. Improved method for the preparation of guanidines // Tetrahedron Lett. 1993. V. 34. N. 48. P. 7677-7680.

29. Poss M.A., Iwanowicz E., Reid J.A., Lin J., Gu Z. A mild and efficient method for the preparation of guanidines // Tetrahedron Lett. 1992. V. 33. N. 40. P. 5933-5936.

30. Li J., Zhang G., Zhang Z., Fan E. TFA-sensitive arylsulfonyl-assisted synthesis of N,N''-substituted guanidines // J. Org. Chem. 2003. V. 68. P. 1611-1614.

31. Manimala J.C., Anslyn E.V. Highly efficient method for the synthesis of guanidinium derivatives. // Tetrahedron Lett. 2002. V. 43. P. 565-567.

32. Yong Y.F., Kowalski J.A., Lipton M.A. Facile and efficient guanylation of amines using thioureas and Mukaiyama's reagent // J. Org. Chem. 1997. V. 62. P. 1540-1542.

33. Kent D.R., Cody W.L., Doherty A.M. Two new reagents for the guanilation of primary, secondary and aryl amines // Tetrahedron Lett. 1996. V. 37. N. 48. P. 8711-8714.

34. Lai В., Gangopadhyay A.K. A practical synthesis of free and protected guanidino acids from amino acids // Tetrahedron Lett. 1996. V. 37. N. 14. P. 2483-2486.

35. Cunha S., de Lima B.R., de Souza A.R: Bismuth nitrate pentahydrate: a new and environmentally benign reagent for guanidilation of iV-benzylthioureas // Tetrahedron Lett. 2002. V. 43. P. 49-52.

36. Yong Y.F., Kowalski J.A., Thoen J.C., Lipton M.A. A new reagent for solid and solution phase synthesis of protected guanidines from amines // Tetrahedron Lett. 1999. V. 40. P. 53-56

37. Wu Y.-Q., Hamilton S., Wilkinson D.E., Hamilton G.S. Direct synthesis of guanidines using di(imidazole-l-yl)methanimine // J. Org. Chem. 2002. V. 67. P. 7553-7556.

38. Katritzky A.R., Rogovoy B.V., Chassaing C., Vvedensky V. Di(benzotriazole-l-yl)methanimine: a new reagent for the synthesis of tri- and tetrasubstituted guanidines // J. Org. Chem. 2000. V. 65. P. 8080-8082.

39. Musiol H.-J., Moroder L. iV,iV'-Di-ter^-butoxycarbonyl-l//-benzotriazole-l-carboxamidine derivatives are highly reactive guanidinylating reagents // Org. Lett. 2001. V. 3. N. 24. P. 3859-3861.

40. Zahariev S., Guarnaccia C., Lamba D., Cemazar M., Pongor S. One pot synthesis of azole carboxamidines and guanidinylation of amines // Proc. 28th Eur. Pept. Symp. 2004. P. 370-371.

41. Guisado О., Marti'nez S., Pastor J. A novel, facile methodology for the synthesis of Ar,Ar-bis(/er^-butoxycarbonyl)-protected guanidines using polymer-supported carbodiimide // Tetrahedron Lett. 2002. V. 43. P. 7105-7109.

42. Ho K.-C., Sun C.-M. Liquid phase parallel synthesis of guanidines // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999. V. 9. P. 1517-1520.

43. Honda Т., Yoshida S., Arai M., Masuda Т., Yamashita M. Synthesis and anti-influenza evaluation of polyvalent sialidase inhibitors bearing 4-guanidino-Neu5Ac2en derivatives // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002. V. 12. P. 1929-1932.

44. Reddy P.M., Bruice T.C. Solid-phase synthesis of positively charged deoxynucleic guanidine (DNG) oligonucleotide mixed sequences // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. V. 13. P. 1281-1285.

45. Jermakowicz-Bartkowiak D., Kolarz B.N., Tylus W. Sorption of aurocyanide and tetrachloroaurate onto resin with guanidine ligand — an XPS approach // Polymer. 2003. V. 44. P. 5797-5802.

46. Fernandez-Carneado J., Van Gool M., Martos V., Castel S., Prados P., De Mendoza J., Giralt E. Highly efficient, nonpeptidic oligoguanidinium vectors that selectively internalize into mitichondria // J. Am. Chem. Soc. 2005. V. 127. P. 869-874.

47. Funhojf A.M., Van Nostrum C.F., Lok M.C., Fretz MM, Crommelin D.J., Hennink W.E. Poly(3-guanidinopropyl methacrylate): a novel cationic polymer for gene delivery // Bioconjug. Chem. 2004. V. 15. P. 1212-1220.

48. Структура и функции низкомолекулярных пептидов. Чипенс Г.И., Полевая JI.K., Веретенникова Н.И., Крикис А.Ю. Рига. Зинатне. 1980. 328 с.

49. Kaddurah-Daoyk R. Creatine Analogues for Treatment of Obesity // U.S. Pat. 5998457. 1999.

50. Slepokuraa K., Gawlowska M. /V-Amidino-4-hydroxy-L-proline monohydrate and iV-amidino-L-methionine monohydrate // Acta Crist. 2005. V. C61. P. 2528.

51. Якубке Х.-Д., Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды, белки: Пер. с нем. М.: Мир, 1985. 465 с.

52. Solid-phase peptide synthesis. Abelson J.N., Simon M.I., Fields G. B. (Eds) // Methods in Enzymology. V. 289. Acad. Press: San Diego. 1997. 780 p.

53. Девени Т., Гергей Я. Аминокислоты, пептиды и белки: Пер. с англ. М.: Мир, 1976. 364 с.

54. Bartoli S., Jensen К.В., Kilburn J.D. Trifluoroacetyl as an orthogonal protecting group for guanidines //J. Org. Chem. 2003. V. 68. P. 9416-9422.

55. Nissim I., Yudkoff M., Terwilliger Т., Segal S. Rapid determination of guanidino-15N.arginine in plasma with gas chromatography — mass spectrometry: application to human metabolic studies // Anal. Biochem. 1983. V. 131. P. 75-82.

56. Alexander J., Higuchi T. Pyroglutamic acid esters used as dermal penetration'enhancers for drugs //U.S. Pat. 4762851.1989.

57. Rennie P. J., King S.P., Biedermann K.A., Morgan J.M. Compositions for preventing and treatment of cold and influenza-like symptoms and their methods of use // Int. Pat. WO/2001/028556.2001.

58. Rubenstein E. Methods for the use of nonprotein amino acids as therapeutic agents // U.S. Pat. 6191168.2001.

59. Lever Brother Company. Pyroglutamic acid esters, their synthesis and use in topical products // U.S. Pat. 4774255.1988.

60. Burman A.C., Mukherjee R., Jaggi M., Singh A.T., Kapoor K.K., Prasad S., Ray M. Anticancer activity of imino acid conjugates or methylglyoxal // U.S. Pat. 6613793. 2003.

61. Paul P.K.C., Osguthorpe D.J., Campbell MM. Design requiiments for pyroglutamic acid substitotions in peptides // J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1. 1990. N. 12. P. 33633365.

62. Abraham G.N., Podell D.N. Pyroglutamic acid // Mol. Cell. Biochem. 1981. V. 38. N. l.P. 181-190.

63. Awade A.C., Cleuziat Ph., Gonzales Th., Robert-Baudouy J. Pyrrolidone carboxyl peptidase (Pep): An enzyme that removes pyroglutamic acid (pGlu) from pGlu -peptides and pGlu proteins // Prot. Struct. Funct. Gen. 1994. V. 20. N. 1. P. 34-51.

64. Mozdzanowski J. Deblocking of proteins containing TV-terminal pyroglutamic acid // Protein sequencing protocols. Smith B.J. (Ed.) Methods in molecular biology. V. 211. 2nd edition. HumanaPr. Inc. 2003. P. 365-369.

65. Goswami R., Moloney M.G. Novel peptidomimetic structures: enantioselective synthesis of conformationally constrained lysine, ornithine and alanine analogues from pyroglutamic acid// Chem. Commun. 1999. N. 23. P. 2333-2334.

66. Najera C., Yus M. Pyroglutamic acid: a versatile building block in asymmetric synthesis // Tetrahedron: Asymm. 1999. V. 10. P. 2245-2303.

67. Bernardi К, Garavelli М., Scatizzi M, Tomasini С., Trigari V., Grisma M., Formaggio F., Peggion C., Toniolo C. Pseudoproline foldamers: the homo-oligomers ofpyroglutamic acid // Chemistry. 2002. V. 8. N. 11. P. 2516-2525.

68. Feinberg R.S., Merrifield R.B. Modification of peptides containing glutamic acid by hydrogen fluoride — anisole mixture. y-Acylation of anisole or the glutamyl nitrogen // J. Am. Chem. Soc. 1975. V. 97. P. 3485-3496.

69. Tomasini C., Villa M. Pyroglutamic acid as a pseudoproline moiety: a facile method for its introduction into polypeptide chains // Tetrahedron Lett. 2001. V. 42. P. 52115214.

70. Sheehan J.C., Tulis R.W. Oxidation of cyclic amines with ruthenium tetroxide // J. Org. Chem. 1974. V. 39. N. 15. P. 2264-2267.

71. Chulin A.N., RodionovI.L., Ivanov V.T. Synthesis of 10- and 9-membered dilactams derived from aspartic and glutamic acids // J. Peptide Res. 2005. V. 65. P. 292-297.

72. Methods for the oxidation of organic compounds; alkanes, alkenes, alkynes, and arenes. Haines A.H. I I Academic Press: London. 1985. P. 192-195.

73. Subra G., Amblard M, Martinez J. Glutamic acid as a new linker for attachment of alcohols to solid support // Tetrahedron Lett. 2002. V. 43. P. 9221-9223.

74. Sabatino G., Alcaro M.C., Pozo-Carrero M.C., Chelli M., Rovero P., Papini A.M. Assesment of 6Cl-HOBt-based coupling reagents in solid-phase cyclopeptidesynthesis // J. Pept. Sci. 2003. V. 71. N. 3. P. 304-336.

75. One-bead one-compound combinatorial library method. Liu G., Lam KS. И Combinatorial chemistiy (Ed. by Fenniri H.). Oxford: Oxford University Press. 2000. P. 33-49.

76. Lejeune V., Martinez J., Cavelier F. Towards a selective Boc deprotection on acid cleavable Wang resin // Tetrahedron Lett. 2003. V. 44. P. 4757-4759.

77. Zhang A. J., Russell D.H., Zhu J., Burgess K. A method for removal of iV-Boc protecting group from substrates on TFA-sensitive resins // Tetrahedron Lett. 1998. V. 39. P. 7439-7442.

78. Sakaguchi S. Uber die bindungsweise und quantitative bestimmung des arginins im proteinmolekule // J. Biochem. (Tokyo). 1925. V. 5. N. 25. P. 133-142.

79. Wang S.-S. /?-Alkoxybenzyl alcohol resin and p-alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide resin for solid phase synthesis of protected peptide fragments // J. Am. Chem. Soc. 1973. V. 95. N. 4. P. 1328-1333.

80. Griffiths G.R., Walker J.B. Accumulation of analog of phosphocreatine in muscle of chicks fed l-carboxymethyl-2-iminoimidazolidine (cyclocreatine) // J. Biol. Chem.1976. V. 251. N. 7. P. 2049-2054.

81. Kaddurah-Daouk R., LillieJ.M., Widlanski T.S., Burbaum J.J., Forsyth C.J. Creatine analogs having antiviral activity // U.S. Pat. 5321030.1994.

82. Martin К J., Winslow E.R., Kaddurah-Daouk R. Cell cycle studies of cyclocreatine, a new anticancer agent// Cancer Res. 1994. V. 54. N. 19. P. 5160-5165.

83. Schimmel L., Khandekar V.S., Martin K.J., Riera Т., Honan C., Shaw D.G., Kaddurah-Daouk R. The synthetic phosphagen cyclocreatine phosphate inhibits the growth of a broad spectrum of solid tumors // Anticancer Res. 1996. V. 16. N. 1. P. 375-380.

84. Ml. Bennett J.S, Vilaire G. Exposure of platelet fibrinogen receptors by ADP and epinephrine // J. Clin. Invest. 1979. V. 64. N. 5. P. 1393-1401.

85. Marguerie GA, Plow EF, Edgington TS. Human platelets possess an inducible and saturable receptor specific for fibrinogen // J. Biol. Chem. 1979. V. 254. N. 12. P. 5357-5363.

86. ШитиковаА.С. Тромбоцитарный гемостаз. СПб.: СпбГМУ, 2000.227 с.

87. Ruoslahti Е, Pierschbacher MD. New perspectives in cell adhesion: RGD and integrins // Science. 1987. V. 238. N. 4826. P. 491-497.

88. Pollina E. Design and synthesis of RGD mimetics as potent inhibitors of platelet aggregation // J. Undergrad. Sci. 1996. V. 3. P. 119-126.

89. Rubin B.G., McGraw D.J., Sicard G.A., Santoro S.A. New RGD analogue inhibits human platelet adhesion and aggregation and eliminates platelet deposition on canine vascular grafts //J. Vase. Res. 1992. V. 15. N. 4. P. 683-691.

90. Nichols A. J., Rujfolo R.Jr., Huffman W.F., Poste G., Samanen J. Development of GP Ilb/IIIa antagonists as antithrombotic drugs // Trends Pharmacol. Sci. 1992. V. 13. N. 11. P. 413-417.

91. Ugen K.E., Mahalingan M., Klein P.A., Kao K.J. Inhibition of tumor cell-induced platelet aggregation and experimental tumor metastasis by synthetic Gly-Arg-Gly-Asp-Ser peptide // J. Natl. Cancer Inst. 1988. V. 80. N. 18. P. 1461-1466.

92. Hersel U., Dahmen С., Kessler H. RGD modified polymers: biomaterials for stimulated cell adhesion and beyond //Biomaterials. 2003. V. 24. P. 4385-4415.

93. Bettelheim F.R., Bailey K. The products of the action of thrombin on fibrinogen // Biochim. Biophys. Acta. 1952. V. 9. N. 5. P. 578-579.

94. Lor and L., Middlebrook W.R. Studies on fibrino-peptide // Biochim. Biophys. Acta. 1952. Y. 9. N. 5. P. 581-582.

95. Labouesse B. L'Hydrolyse du glucagon par la clostripaine // Bull. Soc. Chim. Biol. 1960. V. 42. N. 11. P. 1293-1304.

96. Hypothalamic and other peptide hormones. Schally A. V., Comaru-Schally A.M. // Cancer Medicine 5th edition. Ontario.: B.C. Dekker Publishers, 2000. Ch. 53. P. 715-729.

97. Zompra A.A., Spyroulias G.A., Magafa V., Cordopatis P. Synthesis and structuralinvestigation of a synthetic LHRH analogue in solution. // Chemlnform. 2005. V. 36. N. 13. P. (March 29,2005)

98. Ferland L., Labrie F., Savary M., Beaulieu M., Coy D.H., Coy E.J., Schally A V. Inhibitory activity of analogues of luteinizing hormone-releasing hormone (LH-RH) in vitro and in vivo // Clin. Endocrinol. (Oxford). i976. N. 5. Suppl. P. 279S-289S.

99. Fujino M., Fukuda Т., Shinagawa S., Kobayashi S., Yamazaki I. Synthetic analogs of luteinizing hormone releasing hormone (LH-RH) substituted in position 6 and 10 // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1974. V. 60. N. 1. P. 406-413.

100. Stewart D.E., Sarkar A., Wampler J.E. Occurrence and role of cis peptide bonds in protein structures //J. Mol. Biol. 1990. V. 214. P. 253-260.

101. Mac Arthur M.W., Thornton J.M. Influence of proline residues on protein conformation//J. Mol. Biol. 1991. V. 218. P. 397-412.

102. Henderson D.E., Horvath Cz. Low-temperature HPLC of cis trans proline dipeptides //J. Chromatogr. 1986. V. 368. P. 203-213.

103. Kalman A., Thunecke F., Schmidt R., Schiller P., Horvath Cz. Isolation andidentification of peptide conformers by reversed-phase high-performance liquid chromatography and NMR at low temperature // J. Chromatogr. A. 1996. V. 729. N. 1-2. P. 155-171.

104. Misicka A., Verheyden P.M.F., Van Binst G. Equilibrium of the cis-trans isomerisation of the peptide bond with 7V-alkyl amino acids measured by 2D NMR // Lett. Pept. Sci. 1998. V. 5. P. 375-377.

105. Reimer U., Scherer G., Drewello M, Kruber S., Schutkowski M., Fischer G. Side-chain effects on peptidyl-prolyl cis/trans isomerisation // J. Mol. Biol. 1998. V. 279. p. 449-460.

106. Sanclimens G., ShenH., Giralt K, Albericio F., Saltzman M.W., Royo M. Synthesis and screening of a small library of proline-based biodendrimers for use as delivery agents //Biopolymers (Pept. Sci.). 2005. V. 800. P. 800-814.

107. Fernandez-Carneado J., Kogan M.J., Castel S., Giralt E. Potential peptide carriers: amphipatic proline-rich peptides derived from the TV-terminal domain of gamma-zein // Angew. Chem. Int. Ed. Eng. 2004. V. 43. P. 1811-1814.

108. Farrera-Sinfreu J., Giralt E., Castel S., Albericio F., Royo M. Cell-penetrating cis-y-amino-L-proline-derived peptides // J. Am. Chem. Soc. 2005. V. 127. P. 9459-9468.

109. WiejakS., Masiukiewicz E, Rzeszotarska B. Improved scalable synthesis of mono-and bis-urethane derivatives of ornithine I I Chem. Pharm. Bull. 2001. V. 49. N. 9. P. 1189-1191.

110. Bodanszky M. Peptide chemistry (A practical textbook). Springer-Verlag: New1. York, 1988.200 р.

111. The Peptides: analysis, synthesis, biology. Vol. 3. Protection of functional groups in peptide synthesis. (Eds. Gross E., Meienhofer J.). Academic Press: New York, 1981. 435 p.

112. Daly W.H., Poche D. The preparation ofiV-carboxyanhydrides of a-amino acids using bis(trichloromethyl)carbonate // Tetrahedron Lett. 1988. V. 29. N. 46. P. 5859-5862.

113. Okamura A., Hirai Т., Tanihara M., Yamaoka T. Synthesis and properties of novel biodegradable polyamides containing a-amino acids // Polymer. 2002. V. 43. P. 35493554.

114. Ai H., Ikeda A., Matsuoka Y. Polyamide preparation from polycarboxylic acid and polyamine with carbodiimide condensing agent // U.S. Pat. 4645823. 1987.

115. Kohn J.В., Fiordeliso J. J. Polyarylates containing derivatives of the natural amino acid Z-tyrosine//U.S. Pat. 5317077.1994.

116. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. Под ред. Хеншен А., Хупе К.-Л., Лотшпайхф Ф., и др. Пер с англ. М.: Мир, 1988.476 с.

117. IzdebskiJ., WitkowskaE., KunceD., Oriowska A., Baranowska В., Radzikowska M., Smoluch M. New potent hGn-RH analogues with increased resistance to enzymatic degradation //J. Pept. Sci. 2002. V. 8. N. 7. P. 289-296.

118. Introduction to cleavage techniques // Applied Biosystems. Strategies in peptide synthesis. 2nd ed. Foster City, 1995.71 p.