Молекулярно-генетическая идентификация и дифференциация герпесвирусов человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Круглова, Анна Игоревна

• Круглова, Анна Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Круглова, Анна Игоревна

Список сокращений.

Введение.

Глава !.Обзор литературы.

1.1 .Общая характеристика герпесвирусов.

1.2. Строение и вариабельность генома герпесвирусов человека.

1.3. Клиническая характеристика герпесвирусных инфекций.

1.4. Значение герпесвирусов в урогенитальной патологии.

1.5. Значение герпесвирусов в трансплантологии.

1.6. Латентность герпесвирусов.

1.7. Методы диагностики герпетических инфекций.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика клинических образцов.

2.2. Штаммы вирусов и контрольные ДНК.

2.3. Выделение ДНК.

2.4. Подбор праймеров.

2.5. Полимеразная цепная реакция.

2.6. Рестрикционный анализ.

2.7. Секвенирование.

2.8. Статистическая обработка данных.

Глава 3. Результаты исследований.

3.1. Конструирование диагностических систем для комплексной детекции герпесвирусов человека.

3.1.1. Выбор генетической мишени для комплексной детекции герпесвирусов.

3.1.2. Конструирование ПЦР-системы для комплексной детекции вируса простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ 1 и 2), цитомегаловируса (ЦМВ), вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) и вируса герпеса человека 8 типа (ВГЧ 8).

3.1.3. Проверка работоспособности праймеров и оптимизация условий проведения ПЦР.

3.1.4. Анализ рестрикционного полиморфизма амплифицируемого универсального фрагмента гена ДНК-полимеразы вирусов ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ-8.

3.1.5. Конструирование ПЦР-системы для комплексной детекции и дифференциации вирусов герпеса человека 6 и 7 типа (ВГЧ-6 и -7)

3.2. Изучение видового многообразия герпесвирусов человека, выявляемых в биоматериале медицинского значения.

3.2.1. Определение аналитической и диагностической чувствительности систем «Пентагерп» и «Герп 67».

3.2.2. Сравнение способов обработки клинического материала для ПЦР-анализа.

3.2.3. Значение комплексного выявления герпесвирусов в клиническом материале урологического и гинекологического профиля.

3.2.4. Определение частоты встречаемости герпесвирусов у доноров аллотрансплантанта почки. Изучение особенностей течения раннего посттрансплантационного периода у реципиентов, получивших органы от инфицированных доноров.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическая идентификация и дифференциация герпесвирусов человека»

В своей практической деятельности врачи многих специальностей встречаются с заболеваниями, вызванными вирусами группы герпеса. В настоящее время известно 8 видов герпесвирусов человека. Герпесвирусы являются у человека возбудителями таких заболеваний как оральный и генитальный герпес, ветряная оспа и опоясывающий лишай, цитомегалия, лимфома Беркита и инфекционный мононуклеоз. В последнее время с герпесвирусами связывают атеросклероз и ИБС, ревматоидный артрит, рассеянный склероз. По данным ВОЗ около 90% населения земного шара инфицировано одним или несколькими герпесвирусами. Первичное инфицирование, как правило, происходит в детском возрасте, после чего герпесвирус переходит в латентное состояние, которое характеризуется отсутствием вирусной репликации и экспрессией вирусных белков. Реактивация герпесвирусов из латентной формы происходит на фоне стрессов, эндокринных нарушений, у больных с первичными и вторичными иммунодефицитами, а также проходящих иммуносупрессорную терапию (например, после трансплантации органов). У больных с иммунными нарушениями не только высок риск развития герпетической инфекции и отмечается ее более тяжелое течение, но и показана более высокая частота появления резистентных штаммов, что затрудняет проведение противовирусной терапии.

На сегодняшний день существует ряд методов диагностики герпетической инфекции (выявление антигенов при помощи иммуноферментного анализа, серологическая диагностика или изоляция вируса в культуре клеток), но в последние годы все большее внимание уделяется молекулярно-генетическим способам диагностики. Большинство из них построено на принципе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Несовершенство таких способов диагностики отчасти связано с моноспецифическим характером систем детекции, которые не обеспечивают выявление всего многообразия видов герпесвирусов, вовлекаемых в развитие патологических состояний. Широкий спектр клинических проявлений, возникновение сочетанных герпесвирусных инфекций, увеличение частоты появления резистентных штаммов и штаммов с нетипичными клиническими проявлениями заставляет пересматривать традиционные способы диагностики и искать новые подходы. В связи с этим разработка новых методов комплексной детекции и дифференциации, основанных на современных знаниях генетического видового разнообразия герпесвирусов при различных патологических состояниях является актуальной задачей фундаментальной и практической вирусологии.

Цель и задачи исследования.

Целью работы явилась разработка молекулярно-генетических подходов для комплексной детекции и дифференциации герпесвирусов человека, позволяющих решать широкий круг научно-практических задач медицинской вирусологии.

Для достижения поставленной цели был определен ряд задач:

1. Проведение компьютерного анализа современных баз данных нуклеотидных последовательностей геномов герпесвирусов для выбора наиболее консервативной генетической области.

2. Подбор праймеров и конструирование диагностических системы для комплексной детекции вирусов герпеса человека, основанных на методе ПЦР.

3. Подбор методов межвидовой генетической дифференциации герпесвирусов, основанных на своеобразии нуклеотидных последовательностей выбраной генетической области.

4. Изучение генетической стабильности выбранной мишени в природной популяции герпесвирусов.

5. Клонирование амплифицируемой генетической области всех герпесвирусов и создание банка контрольных матриц.

6. Оределение специфичности и чувствительности разработанных диагностических систем.

7. Изучение роли комплексного выявления герпесвирусов при урогенитальной патологии.

8. Определение частоты встречаемости герпесвирусов у доноров аллотрансплантанта почки. Изучение особенностей течения раннего посттрансплантационного периода у реципиентов, получивших органы от инфицированных доноров.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Данные по изучению генетического полиморфизма гена ДНК-полимеразы герпесвирусов человека.

2. Разработка молекулярно-генетического метода комплексной детекции и дифференциации пяти видов герпесвирусов человека: ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ-8.

3. Разработка молекулярно-генетического метода одновременной детекции и дифференциации ВГЧ-6 и ВГЧ-7.

4. Целесообразность проведения комплексного обследования на герпесвирусы человека в гинекологии и трансплантологии.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Круглова, Анна Игоревна

Выводы.

1. По данным сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей гена ДНК-полимеразы восьми видов герпесвирусов выявлено три высоко консервативных региона для пяти видов герпесвирусов - ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ-8.

2. Разработан молекулярно-генетический метод для комплексной детекции и дифференциации пяти видов герпесвирусов человека: ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ и ВГЧ-8, основанный на амплификации фрагмента гена ДНК-полимеразы и последующем анализе полиморфизма длин рестрикционных фрагментов ампликонов.

3. Разработан молекулярно-генетический метод для комплексной детекции и дифференциации ВГЧ-6 и ВГЧ-7, основанный на мультиплексной амплификации фрагмента гена ДНК-полимеразы.

4. На основе разработанных методов сконструированы диагностические системы «Пентагерп» и «Герп 67» для детекции и дифференциации разных наборов герпесвирусов человека. Показана высокая чувствительность разработанных систем, превышающая чувствительность многих коммерческих диагностических систем.

5. По результатам анализа штаммов и клинических образцов от пациентов с различными проявлениями герпесвирусных инфекций показана популяционная генетическая стабильность маркерного фрагмента гена ДНК-полимеразы пяти видов герпесвирусов.

6. Обнаружена ранее неизвестная точечная мутация в нуклеотидной последовательности гена ДНК-полимеразы длительно перевиваемого штамма ВН (ВПГ-2). Данная мутация не обнаружена в природной популяции ВПГ2.

7. Показана высокая частота выявления в клиническом материале урологического и гинекологического профиля 6-ти видов герпесвирусов, включая ВПГ-1, ВПГ-2, ЦМВ, ВЭБ, ВГЧ-6 и ВГЧ-7, при этом значительную часть (27%) представляли сочетанные герпесвирусные инфекции.

8. Получены прямые эпидемиологические данные о распределении ВПГ-1 и ВПГ-2 среди пациентов с генитальным герпесом в г. Москве: ВПГ-1 определялся с частотой 24%, ВПГ-2 - 76%.

9. Показана высокая частота выявления различных видов герпесвирусов среди доноров органов (45,3%). В значительной части (до 45%) инфицированных органов выявляется более одного герпесвируса. Показано влияние герпесвирусной инфекции на течение раннего постгрансплантационного периода у реципиентов, получивших органы от инфицированных доноров.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Круглова, Анна Игоревна, 2004 год

1. Авакян А.А., Быковский А.Ф. Атлас анатомии и онтогенеза вирусов человека и животных.- М.: Медицина, 1970.

2. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К., Каспаров А.А., Грибенюк В.Н. Герпес: этиология, диагностика, лечение. М.: Медицина, 1986 -272 е.

3. Ведяков А. М., Долгих М. С. Детекция ДНК цитомегаловируса методом полимеразной цепной реакции в разных биологических материалах у больных с аллотрансплантантами органов// Клиническая лабораторная диагностика.-1998. № 11.- С. 19-20.

4. Войлокова Р.Я., Посевая Т.А., Мойсюк Я.Г. и соавт. Влияние герпесвирусной инфекции (цитомегаловируса и вируса простого герпеса) на результат аллаотрансплантации почки// Вопросы вирусологии.- 1992. №4.- С. 204-206.

5. Войлокова Р.Я., Николаева Н.П., Витязев Г.А., Круглова А.И., Абрамов

6. Гаранжа Т.А., Филатов Ф.П. Диагностика инфекций, вызванных вирусом Эпштейна-Барр и цитомегаловирусом, в гематологическом стационаре// Сборник «Актуальные проблемы герпесвирусных инфекций». М., 2004,1. C. 94-106.

7. Глинских Н.П. Герпесвирусы человека. В кн.: Неизвестная эпидемия: герпес. Смоленск, 1997, 32-57.

8. Гранитов В.М. Герпесвирусная инфекция,- Нижний Новгород:НГМА,2001,- 88 с.

9. Долгих М.С. Вирус герпеса 6 (HHV-6) у иммунодефицитных пациентов (часть 1 и 2)// Вестник трансплантологии и искусственных органов,- 2001, №1.- С. 51-55.- 2002, №2.- С. 50-55.

10. Исаков В.А., Борисова В.В., Исаков Д.В. Герпес: патогенез и лабораторная диагностика.- СПб.: Лань, 1999. -192 е.

11. Киселев Ф.Л., Павлиш О.А., Татосян А.Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека.- М.: Медицина, 1990. 320 с.

12. Козлова В.И., Пухнер А.Ф. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. Москва: «Триада-Х», 2003 - 440 с.

13. Сборник «Актуальные проблемы герпесвирусных инфекций». М., 2004 -С. 30-31.

14. Малашенкова И.К., Дидковский Н.А., Сарсания Ж.Ш., Жарова М.А. и др. Клинические формы хронической Эпштейн-Барр- вирусной инфекции: вопросы диагностики и лечения// Лечащий врач.-2003, №9.- С. 32-39.

15. Марченко Л.А. Генитальный герпес. Новые клинические аспекты// Проблемы репродукции.- 1996, №4.- С. 29-33.

16. Марков И.С. Диагностика и лечение герпетических инфекций и токсоплазмоза. Киев: АртЭк, 2002. - стр. 156-172.

17. Посевая Т.А., Баринский И.Ф. Григорьев В.В., Шуваева Н.И. Гуморальный иммунитет к вирусу простого герпеса 2 типа у пациентов с цервикальной карциномой// Вопр. Вирусологии,- 1982, №3 С. 327-330.

18. Сенкевич Т.Г., Гибадулин Р.А., Угрюмов Е.П., Посевая Т.А., Баринский И.Ф. Типирование штаммов вируса простого герпеса методом анализа вирусной ДНК с помощью рестрикционных эндонуклеаз// Вопросы вирусологии,- 1982, № 3,- С. 330-334.

19. Феннер Ф. Б. Мак-Ослен, С. Миме, Дж. Сэмбрук, Д.Уайт. Биология вирусов животных. М.: Мир, 1977.

20. Alba MM, Das R, Orengo С A, Kellam P. Genomewide function conservation and phylogeny in the Herpesviridae// Genome Res.-2001 .-Vol. 1 l(l).-P.43-54.

21. Agut. H, Calvez V., Fillet A. Huraux J. The discovery of the three human viruses: human herpesviruses 6, 7 and 8// Bull. Acad. Natle Med.-1997.- 181, n.6.-P. 1009-1022

22. Aono, Т., S. Murakami, N. Yanagihara, and K. Yamanishi. Detection of human alpha-herpesvirus DNA using consensus primers and specific probes// Acta Otolaryngol.- 1994.- Suppl. 514.-P.132-134.

23. Balthesen M, Dreher L, Lucin P, Reddehase MJ. The establishment of cytomegalovirus latency in organs is not linked to local virus production during primary infection// J Gen Virol.- 1994,- Sep;75 ( Pt 9).-P. 2329-36.

24. Borysiewicz L.K., Sissons J. G.P. Cytotoxic T cells and human herpes virus infections// Currrent topics in Microbiology and Immunology.- 1994,- Vol. 189,-P. 124-145

25. Brytting M, Sundqvist VA, Stalhandske P, Linde A, Wahren B. Cytomegalovirus DNA detection of an immediate early protein gene with nested primer oligonucleotides//! Virol Methods.-1991.-Vol.32(2-3).-P. 127-38.

26. Campadelli-Fiume G., Mirandola P., Menotti L. Human herpesvirus 6: An emerging patogen// Emerg Infect Dis.- 1999.-Vol.-5(3).-P. 353-66.

27. Cermelli C, Berti R, Soldan SS, Mayne M, D'ambrosia JM, Ludwin SK, Jacobson S. High frequency of human herpesvirus 6 DNA in multiple sclerosis plaques isolated by laser microdissection// J Infect Dis.- 2003.- Vol. 1;187(9).-P. 1377-87.

28. Cheong WK, Thirumoorthy T, Doraisingham S, Ling AE. Clinical and laboratory study of first episode genital herpes in Singapore// Int J STD AIDS.-1990.-Vol. l.-P. 195-8.

29. Chapenko S, Millers A, Nora Z, Logina I, Kukaine R, Murovska M. Correlation between HHV-6 reactivation and multiple sclerosis disease activity// J Med Virol.- 2003,- Vol. 69(1).- P.lll-7.

30. Davison,A.J. and Scott,J.E. The complete DNA sequence of varicella-zoster virus//J. Gen. Virol.- 1986.-Vol. 67 (Pt9).-P. 1759-1816.

31. Enbom M, Strand A, Falk KI, Linde A. Detection of Epstein-Barr virus, but not human herpesvirus 8, DNA in cervical secretions from Swedish women by real-time polymerase chain reaction//Sex Transm Dis.-2001.-Vol.28(5).-P. 300-6.

32. Enright H., Haake R., Weisdorf D. et al. Cytomegalovirus pneumania after bone marrow transplantation//Transplantation.- 1993.-Vol. 55.-P. 1339-1346.

33. Espy MJ, Patel R, Paya CV, Smith TF. Comparison of three methods for extraction of viral nucleic acids from blood cultures// J. of Clin. Microbiol.-1995,-P. 41-44.

34. Fish R.N., Soderberg-Naucler C., Mills L.K., Stenglein S., Nelson J.A. Human cytomegalovirus persistently infects aortic endothelial cells// J. Virol.-1998.-Vol. 72.-P. 5661-5668.

35. Griffiths P.D., Clark D.A., Emery V.C. Betaherpesviruses in transplantant recipients//J. Antimicrob. Chemotherapy.-2000.-Vol. 45.-P. 29-34.

36. Ho M. Advances in understanding cytomegalovirus infection after transplantation// Transplant. Proc. 1994.- V.26.- P. 7-10.

37. Hopwood P.A., Brooks L., Parratt R., Hunt B.J. at all. Persistent Epstein-Barr virus infection: unrestricted latent and lytic viral gene expression in healthy immunosuppressed transplant recipients// Transplantation.- 2000,- Vol.74,-P. 194-202.

38. Horvath J, Dummer S, Loyd J, Walker B, Merrill WH, Frist WH. Infection in the transplanted and native lung after single lung transplantation// Chest.1993.- Vol. 104(3).-P.681-5.

39. Huang T.S., Klipatrick B.A. et al. Detection of human cytomegalovirus and analysis of strain variation//J. Biol. Med.-1976.-Vol. 49.-P. 29-37.

40. Hudnall SD, Chen T, Rady P, Tyring S, Allison P. Human herpesvirus 8 seroprevalence and viral load in healthy adult blood donors// Transfusion. -2003,- Vol.43(l).-P.85-90.

41. Hudnall SD, Rady PL, Tyring SK, Fish JC. Serologic and molecular evidence of human herpesvirus 8 activation in renal transplant recipients// J Infect Dis.-1998.-Vol. 178(6).-P.1791-4.

42. John A.Z. Viral infections associated with bone marrow transplantation//Oncol. Clinics of North America.-1990.- Vol. 4, No. 3.- P. 603-623.

43. Kapranos N., Petrakou E., Anastasiadou C., Kotronias D. Detection of herpes simplex virus, cytomegalovirus, and Epstein-Barr virus in the semen of men attending an infertility clinic// Fertil. Steril.- 2003.- Vol. 79.-P. 1566-70.

44. Karlin S., Mocarski E.S., Schachtel G.A. Molecular evolution of herpesviruses: genomic and protein sequence comparisons// J. of Virology.1994.- Vol.4.-P. 1886-1902.

45. Katano H., Tetsutaro S. Human herpesviruses 8 virology, epidemiology and related diseases// Jpn. J. Infect. Dis.- 2000,-Vol. 53.-P. 137-155.

46. Kawasaki S, Oshitani H, Suzuki H, Arakawa M, Mizuta K, Imaizumi M, Tsuchiya S, Konno T. PCR-RFLP analysis of cytomegalovirus infectionsassociated with bone marrow transplantation in Japanese children// Microbiol Immunol.-1999.-Vol.43(4).-P.359-64.

47. Kinghorn GR. Epidemiology of genital herpes// J Int Med Res.- 1994.-Vol.22.- P.14A-23A.

48. Klipatrick B.A. et al. Analysis of cytomegalovirus genomes with restriction endonuclease Hind III and Eco Rl// J. Virol.-1976.-Vol. 18.-P. 1095-1099.

49. Kondo K, Mukai T, Yamanishi K. Detection of human herpesvirus 6 (HHV-6) DNA by polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) of HHV-6 DNA// Nippon Rinsho.- 1992,- Vol.50.-P. 176-82.

50. Kouzarides Т., Bankier А. Т., Satchwell S.C., Weston K., Tomlinson P., Barrell B.G. Large-scale rearrangement of homologous regions in the genomes of HCMV and EBV// J. of Virology.-1987.-Vol.157.-P. 397-413.

51. Lafferty WE, Downey L, Celum C, Wald A. Herpes simplex virus type 1 as a cause of genital herpes: impact on surveillance and prevention// J Infect Dis.-2000,- Vol. 181(4).-P. 1454-7.

52. Lanham S., Herbert A., Basarab A., Watt P. Detection of cervical infection in colposcopy clinic patients// J. of Clin Microbiol.-2001,- Vol.8.- P. 2946-2950.

53. Larder B.A., Kemp S.D., Darby G. Related functional domain in virus DNA polymerases//J. EMBO.-1987.-Vol.6(l).-P. 169-175

54. Lin К., Dai C.Y., Riccardi R.P. Cloning and functional analysis of Kaposi's Sarcoma-accociated herpesvirus DNA polymerase and its processivity factor// J. of Virology.- 1998.-Vol.7.-P. 6228-6232.

55. Lowhagen GB, Jansen E, Nordenfelt E, Lycke E. Epidemiology of genital herpes infections in Sweden// Acta Derm Venereol.- 1990.-Vol.70(4).-P.330-4

56. Madhavan HN, Priya K, Bagyalakshmi R. Phenotypic and genotypic methods for the detection of herpes simplex virus serotypes// J Virol Methods.- 2003,-Vol. 108(1 ).-P.97-l 02

57. Marshall DS, Linfert DR, Draghi A, McCarter YS, Tsongalis GJ. Identification of herpes simplex virus genital infection: comparison of a multiplex PCR assay and traditional viral isolation techniques// J. Mod Pathol.-2001,- Vol. 14(3).-P. 152-6

58. Minjolle S, Michelet C, Jusselin I, Joannes M, Carrier F, Colimon R. Amplification of the six major human herpesviruses from cerebrospinal fluid by a single PCRЛ J Clin Microbiol.- 1999.-Vol. 37(4).- P.950-953.

59. Moore P.S., Gao S.J., Domingues G. et al. Primary characterization of a herpesvirus agent associated with Kaposi's sarcoma// J. Virology.- 1996-Vol.70(l).-P.549-558.

60. Nicholas J. Determination and analysis of the complete nucleotide sequence of human herpesvirus 111 J. of Virology.-1996.-Vol.70(9).- P. 5975-5989.

61. Ohashi M, Yoshikawa T, Ihira M, Suzuki K, Suga S, Tada S, Udagawa Y, Sakui H, Iida K, Saito Y, Nisiyama Y, Asano Y. Reactivation of human herpesvirus 6 and 7 in pregnant women// J Med Virol.- 2002.- Vol.67(3).-P. 354-8.

62. Pozo F, Tenorio A.Detection and typing of lymphotropic herpesviruses by multiplex polymerase chain reaction.// J Virol Methods.- 1999,- Vol.79(1).-P.9-19.

63. Rozenberg, F., and P. Lebon. Amplification and characterization of herpesvirus DNA in cerebrospinal fluid from patients with acute encephalitis.//! Clin. Microbiol.- 1991.-Vol. 29,-P.2412-2417.

64. Sarisky RT, Nguyen TT, Duffy KE, Wittrock RJ, Leary JJ: Difference in incidence of spontaneous mutations distinct between herpes simplex virus types 1 and 2// Antimicrob. Agents Chemother.- 2000,-Vol. 44.-P. 1524-1529

65. Singh N. Human herpesviruses-6, -7 and -8 in organ transplant recipients// Clin. Microbiol. Infect.- 2000,-Vol. 6.-P. 453-459.

66. Sissons J.G.P., Bain M., Wills M.R., Sinclair J.H. Latency and reactivation of human cytomegalovirus// J. of Infection.- 2002.-Vol. 44.- P.73-77

67. Smith Jo R., Field H.J. Human herpesvirus vaccines// Herpes.- 1997.-Vol. 4 (3).- P. 55-62.

68. Schonian U, Maisch B. Cytomegalovirus associated diseases of the heart// Herz. 1992,- Vol.l7(2).-P.85-90.

69. Sweet C. The pathogenicity of cytomegalovirus// FEMS Microbiology Rewiews.- 1999.-Vol.23.- P. 457-482.

70. Tasaka T, Said JW, Morosetti R, Park D, Verbeek W, Nagai M, Takahara J, Koeffler HP. Is Kaposi's sarcoma—associated herpesvirus ubiquitous in urogenital and prostate tissues?// Blood.- 1997.- Vol.89(5).-P. 1686-9.

71. Telenti, A. PCR Detection and typing of Epstein-Barr virus// Diagnostic Molecular Microbiology. Principles and applications.-1993,- P. 344-349.

72. Tenorio, A., J. E. Echevarria, I. Casas, J. M. Echevarria, and E. Tabares. Detection and typing of human herpesviruses by multiplex polymerase// J.Virol. Methods.- 1993,-Vol. 44.- P.261-269.

73. Tong С. Y.W., Bacran A., Peiris J. S. M. et. al. The association of viral infection and chronic allograft nephropathy with graft dysfunction after renal transplantation// Transplantation.-2002.-Vol. 74(4).- P.576-578.

74. Toye В., Woods W., Bobrowska M., Ramotar K. Inhibition of PCR in genital and urine specimens submitted for Chlamydia trachomatis testing// J Clin. Microbiol.- 1998.- Vol. 36(8).- P. 2356-8.

75. Umene K, Inoue T, Inoue Y, Shimomura Y. Genotyping of herpes simplex virus type 1 strains isolated from ocular materials of patients with herpetic keratitis// J Med Virol.- 2003.- Vol.71(1).-P. 75-81.

76. Upton D. Allen. Human herpesvirus type 8 infections among solid organ transplantant recipients// Pediatr. Transpant.- 2002,-Vol. 6,- P. 187-192.

77. Wald, A., J. Zeh, S. Selke, R. L. Ashley, and L. Corey. Virologic characteristics of subclinical and symptomatic genital herpes infections// N. Engl. J. Med.-1995.- Vol.333.- P.770-775.

78. Yoshikawa T. Human herpesvirus-6 and -7 infections in transplantation// Pediatr. Transplant.- 2003.- Vol. 7(1).- P. 11-7.

79. Zweygberg Wirgart B, Brytting M, Linde A, Wahren B, Grillner L. Sequence variation within three important cytomegalovirus gene regions in isolates from four different patient populations// J. Clin Microbiol.- 1998-Vol.36(12).- P.3662-9.