Создание высокоспецифичных амплификационных тест-систем для детекции возбудителей туберкулеза, чумы, холеры, герпеса и гепатита A тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Альтшулер, Михаил Львович

• Альтшулер, Михаил Львович
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Альтшулер, Михаил Львович

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ.

1.1.1. ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПЦР.

1.1.1.1. Структура и совместимость праймеров.

1.1.1.2. Денатурация ДНК-матрицы.

1.1.1.3. Температура отжига праймеров.

1.1.1.4. Количество циклов амплификации.

1.1.2. ЗНАЧЕНИЕ ПЦР ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ МУТАЦИЙ И АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ.

1.1.2.1. Обзор методов детекции мутаций в ПЦР фрагментах.

1.1.2.1.1. Полный анализ нуклеотндной последовательности, проводимый с помощью ссквснированпн.

1.1.2.1.1.1. Определение нуклеотндной последовательности методом секвенирования по Сеигеру.

1.1.2.1.1.2. Секвеиироваиие, основанное на гибридизации.24 1.1.2.1.2. Методы, направленные на идентификацию огличий в нуклсотидпой последовательности или па определение избранных мутаций.

1.1.2.1.2.1. Конформационные методы.

1.1.2.1.2.1.1. Метод, основанный на локальном плавлениии ДНК.

1.1.2.1.2.1.2. Гетеродуплексный анализ.

1.1.2.1.2.1.3. Конформационно-чувствительньш электрофорез в агарозе.

1.1.2.1.2.1.4. Конформациопиый полиморфизм однонитевых фрагментов ДНК.

1.1.2.1.2.2. Лигазная цепная реакция.

1.1.2.1.2.3. Гибридизация и микрочипы.

1.1.2.1.2.4. Использование рестрикции для детекции мутаций.

1.1.2.1.2.5. Микросиквенс.

1.1.2.1.2.6. Использование белков, узнающих иекомплемеитариости.

1.1.2.1.2.7. Химическое расщепление некомтемеитариостеи.

1.1.2.1.2.8. Метод "молекулярныхмаяков" (Molecular beacons).

1.1.2.1.2.9. Агчель-специфическая амплификация.

1.1.3. ПРЕИМУЩЕСТВА «ГНЕЗДОВОГО» МЕТОДА ПРОВЕДЕНИЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ.

1.2. АНАЛИЗ ГЕНА RPOB КАК МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ К РИФАМПИЦИНУ У MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS.

1.3. ОПАСНОСТЬ ИНФИЦИРОВАНИЯ ВИРУСОМ ГЕРПЕСА И ЗНАЧЕНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ МЕТОДОВ В ЕГО ДИАГНОСТИКЕ.

1.4. ПРИМЕНЕНИЕ ПЦР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ.

1.4.1. АКТУАЛЬНОСТЬ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ В УСЛОВИЯХ СОВРЕМЕННОГО ОБЩЕСТВА.

1.4.2. ВЫБОР ГЕНЕТИЧЕСКОЙ МИШЕНИ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ YERSINIA PESTIS.

1.5. ХОЛЕРНЫЙ ЭНТЕРОТОКСИН КАК ФАКТОР ВИРУЛЕНТНОСТИ И МИШЕНЬ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ

1.6. РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ГЕПАТИТА А И ЗНАЧЕНИЕ ПЦР В ЕГО ДИАГНОСТИКЕ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ И ВИРУСНЫЕ ШТАММЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ, ИСТОЧНИКИ КЛИНИЧЕСКИХ ОБРАЗЦОВ.

2.2. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК И РНК.

2.1.2.1. Выделение ДНК из м. tuberculosis.

2.1.2.2. Выделение РНК вируса гепатита А.

2.1.2.3. Выделение ДНК У. Pestis, V. choleraew вируса герпеса.

2.3. ПРАЙМЕРЫ ДЛЯ ПЦР.

2.4. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР И СОВМЕЩЕННЫХ РЕАКЦИЙ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ С ПЦР.

2.5. СЕКВЕНИРОВАНИЕ ГЕНА RPOB MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS.

2.6. АЛЛЕЛЬ-СПЕЦИФИЧЕСКАЯ АМПЛИФИКАЦИЯ.

2.7. АНАЛИЗ КОНФОРМАЦИОННОГО ПОЛИМОРФИЗМА (SSCP).

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ К РИФАМПИЦИНУ У MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

3.1.1. ХАРАКТЕРИСТИКА СПЕКТРА МУТАЦИЙ, ОБУСЛАВЛИВАЮЩИХ УСТОЙЧИВОСТЬ К РИФАМПИЦИНУ.

3.1.2. РАЗРАБОТКА УПРОЩЕННОЙ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАЦИЙ УСТОЙЧИВОСТИ К РИФАМПИЦИНУ НА ОСНОВЕ КОНФОРМАЦИОННОГО ПОЛИМОРФИЗМА И АЛЛЕЛЬ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АМПЛИФИКАЦИИ.

3.1.3. ВЫЯВЛЕНИЕ ЗНАЧИМОСТИ РЕДКИХ МУТАЦИЙ.

3.1.4. ВОЗМОЖНЫЕ ПУТИ РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАЦИЙ В ПЦР-ПРОДУКТАХ.

3.2. РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЙ ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ И ИСПЫТАНИЕ СОЗДАННОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА КОЛЛЕКЦИОННЫХ ШТАММАХ.

3.3. СОЗДАНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ ГНЕЗДОВОЙ ПЦР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ ДНК VIBRIO CHOLERAE И ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ АНАЛИЗА ВИРУЛЕНТНОСТИ ВИБРИОНОВ.

3.4. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГНЕЗДОВОЙ ПЦР ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА ПРОСТОГО ГЕРПЕСА ЧЕЛОВЕКА I И II ТИПА (HSV И HSV2).

3.5. ИСПЫТАНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ ПЦР ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ РНК ВИРУСА ГЕПАТИТА А. ВЫВОДЫ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ Русскиа АТФ (англ. АТР) —аденозиптрифосфорная кислота ИФА иммуноферментный анализ МКК мопононуклеарные клетки крови ПЦР (англ. PCR)- полимеразная цепная реакция А иглийскис А аденин АТР аденозиптрифосфорная кислота BLAST Basic Local Alignment Search Tool (Базовый инструмент поиска сходства последовательностей, основанный на принципе локального сопоставления) bp пуклеотидпая пара-пара комплементарных пуклеотидов, находящихся напротив друг друга в двух цепях ДНК С цитозип CMV цитомегаловнрус ü АТР дезоксиаденозинтрнфосфорпая кислота üCTP дезокснцитиднитрнфосфориая кислота ÜGTP — дезоксигуанозннтрнфосфорная кислота ÜTTP дезокситнмндинтрнфосфорная кислота EBV вирус Эшитейпа-Барра G гуанин HAV вирус гепатита А HBV вирус гепатита В I1HV6 вирус герпеса типа VI HI V-1 — вирус иммунодефицита человека типа I HSV1 вирус простого герпеса человека I типа HSV2 вирус простого герпеса человека II типа HTLV-1 -Т-лимфотропный вирус человека типа I HZV вирус герпеса зостср NCBI National Center for Biotechnology Information (Государственный Центр Биотехнологической Информации, США) RT-PCR совмещенная реакция обратной транскрипции (ЯТ)и ПЦР (PCR) SDS додецплсульфат натрия SSCP single-strand conformation polymorphism (конформационный полиморфизм однонитевых фрагментов ДИК) Т-тимин

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание высокоспецифичных амплификационных тест-систем для детекции возбудителей туберкулеза, чумы, холеры, герпеса и гепатита A»

1. Актуальность проблемы.

Важнейшим элементом диагностики инфекционных болезней, бактерионосительства, санитарного контроля, экологического мониторинга окружающей среды является детекция инфекционного агента. Среди способов определения возбудителей главенствуют классический микробиологический и иммуноферментный методы. В последнее время в диагностике микрорганизмов применяют выявление специфического фрагмента нуклеотидной последовательности возбудителя, который можно идентифицировать, используя как индикатор его наличия, способность к воспроизведению in vitro в присутствии ДНК-полимеразы, праймеров и дезоксирибонуклеотидов. Этот процесс, подобный процессу естественной репликации хромосом и отличающийся от него исключительно быстрым экспоненциальным накоплением короткого фрагмента ДНК, называется полимеразной цепной реакцией (ПЦР) [104].

По чувствительности, быстроте, простоте и дешевизне ПЦР сопоставима с иммуноферментным анализом или даже превосходит его. В некоторых, случаях ПЦР оказывается предпочтительным пли единственно возможным методом детекции возбудителя.

Актуальность представленной диссертационной работы обусловлена необходимостью повышения достоверности, чувствительности и скорости выявления возбудителей. Вариант метода ПЦР, называемый nested или гнездовой ПЦР, нацелен на исключение ошибочных реультатов и обладает повышенной чувствительностью. Суть гнездовой ПЦР заключается в проведениии двух последовательных реакций, при которых исходным материалом для второй реакции является продукт (ампликон) первой [166]. Так обеспечивается двойной контроль результата анализа, практически исключающий вероятность ошибки. Кроме этого, гнездовая ПЦР обладает дополнительным преимуществом. Оно состоит в том, что при использовании аплель-специфических праймеров во время второй реакции гнездовой ПЦР, благодаря структурной простоте матрицы,становится возможным определение мутаций, удаленных от З'-конца праймера [114].

Создание новых методов тестирования, на наш взгляд, прежде всего необходимо для возбудителей пяти особо опасных или социально значимых инфекций - чумы, холеры, гепатита А, простого герпеса I и II типа (HSVI и HSVII), а также устойчивого к рифампицину Mycobacterium tuberculosis.

Например, выявление с помощью гнездовой ПЦР возбудителя чумы в тестируемом материале позволит своевременно применить экстренные меры профилактики и терапии [90].

Трудоемкость, длительность и относительно высокий риск ошибок при использовании на практике традиционного двухэтапного подхода, применяемого для обнаружения вирулентных штаммов Vibrio cholerae у больных, вибрионосителей, в объектах окружающей среды также делает гнездовую ПЦР предпочтительным методом анализа. В данном случае ПЦР позволяет идентифицировать возбудителя непосредственно в клиническом материале, прошедшем бактерицидную обработку, минуя стадию подращивания и клонирования этого опасного микроорганизма.

Нужно отметить, что для Mycobacterium tuberculosis характерен медленный рост на питательных средах. Это не позволяет своевременно выявить у пациентов лекарственноустойчивые штаммы, в частности, штаммы, устойчивые к рифампицину - одному из ведущих противотуберкулезных препаратов [173]. Возможной альтернативой остается определение мутаций, вызывающих устойчивость к лекарству. [8, 70, 146] Для определения таких мутаций необходим быстрый, недорогой и нетрудоемкий метод. В этом случае также может быть применена гнездовая ПЦР с использованием аллель-специфических праймеров, перекрывающих несколько мутантпых сайтов, дополненная методом конформационного полиморфизма ДНК (single-strand conformation polymorphism, SSCP).

Герпетическая инфекция человека — болезнь, дающая серьезные осложнения. При этом, патологические состояния, вызванные HSV I иHSV И, неодинаковы по своим проявлениям и последствиям [2]. ПЦР позволяет проводить дифференциальную диагностику HSV I и IISV II, а ее гнездовой вариант - исключить ошибки при анализах.

Результаты, полученные при детекции вируса гепатита А в крови пациентов с помощью ИФА, требуют подтверждающего теста, который также может быть выполнен методом ПЦР.

Цель работы. Разработка и испытание методов гнездовой ПЦР и конформационного полиморфизма ДНК (SSCP) как инструментов детекции генов, специфичных для пяти возбудителей инфекционных болезней человека: чумы, холеры, туберкулеза, герпеса и вирусного гепатита А.

Задачи исследования.

1. Определить спектр мутаций устойчивости к рифампицину у штаммов Mycobacterium tuberculosis, циркулирующих в России, и разработать упрощенный метод определения данных мутаций на основе сочетания аллель-специфической амплификации и SSCP.

2. Разработать чувствительный и специфичный метод комбинированной гнездовой ПЦР и обратной транскрипции для детекции РНК вируса гепатита А. Сопоставить результаты, полученные методами ИФА и гнездовой ПЦР при анализе форменных элементов крови и сывороток у больных гепатитом А или смешанными формами гепатита.

3. Создать метод гнездовой ПЦР для дифференциальной диагностики вируса простого герпеса I и II типа и проверить его чувствительность и специфичность. Получить данные о распределении I и II типа вируса между различными клиническими группами больных и между различными типами материала, полученного от больных и носителей.

4. Разработать гнездовую ПЦР, направленную на непосредственную идентификацию гена, кодирующего факторвирулентности (энтеротоксин) V. cholerae, у больных, вибрионосителей и в окружающей среде.

5. Разработать метод гнездовой ПЦР для определения У. pestis, не дающий перекрестных реакций с У. enterocolitica и У. pseudotuberculosis.

Научная новизна. Научно обоснованы и апробированы методы гнездовой ПЦР с коллекционными штаммами yersinia pestis, Vibrio cholerae, рифампицин-резистентного Mycobacterium tuberculosis, IISV I и HSV II и вируса гепатита А, а также с образцами материала, инфицированного этими микроорганизмами.

Впервые определен спектр мутаций устойчивости к рифампицину в российских штаммах М tuberculosis. При этом было зарегистрировано необычно высокое относительное количество мутаций в кодоне 516 гена гроВ и была открыта новая, не описанная в литературе двойная мутация.

Показано, что при идентификации точечных мутаций с помощью аллель-специфического праймера возможно определение единичных нуклеотидных замен, удаленных от 3'-конца праймера.

Создан оригинальный метод комбинированной аплель-специфической амплификации и SSCP, при котором единственный аллель-специфический праймер в одном эксперименте способен выявлять любую из шести мутаций, а в едином опыте SSCP можно выявлять любую из пяти других мутаций. Аналогичные подходы могут найти применение на других моделях.

Методом гнездовой ПЦР с обратной транскрипцией получены экспериментальные данные, касающиеся ассоциации вируса гепатита А с мононуклеарными клетками крови, что расширяет возможности выявления этого вируса у человека в случае отрицательного результата при анализе сыворотки пациента.

Выявлена более высокая способность HSVI проникать в различные органы и ткани, сравнительно с HSVII.

Практическая значимость работы. Разработка быстрого,экономичного метода определения устойчивости к рифампицину в культурах M.tuberculosis, выделенных от больных, позволяет применять адекватные подходы к лечению больных. Метод обеспечивает значительное сокращение срока анализа, если в качестве исходного материала используют чистые культуры возбудителя, выращенные на питательной среде, поскольку отпадает необходимость пересева этих культур на среду, содержащую рифампицин, и последующего ожидания результата в течение нескольких недель или месяцев.

Созданные методы гнездовой ГТЦР позволяют повысить достоверность и чувствительность выявления Y. pestis, V. cholerae, HSV! и HSVII, вируса гепатита А в инфицированном материале различного происхождения. Этот метод позволяет проводить анализы с ипактивированпьиш возбудителями, не представляющими угрозы для здоровья человека, что очень важно при работе с возбудителями особо опасных инфекций. При этом сокращаются сроки выполнения анализов.

В случае V. cholerae выбор непосредственного фактора вирулентности как мишени для амплификации выгодно отличает разработанный нами подход от применяемых в настоящее время иммуноферментных и микробиологических тестов, имеющих косвенный характер.

Обнаружено, что, в отличие от мазков из урогенитального тракта и клеточного материала мочи, соскобы из урогенитального тракта дают наиболее полную и объективную информацию о совместном присутствии вирусов HSV I и HSV II у больных с диагнозом «герпетическая инфекция».

Высокая чувствительность метода гнездовой ПЦР позволяет проводить поиск возможной аккумуляции вируса гепатита А во фракции мононуклеарных клеток крови при отсутствии возбудителя в сыворотках.

В случае гепатита А и герпеса практическая ценность разработанных методов, в значительной мере, заключается в возможности использовать их как дополнительный тест, подтверждающий результаты ИФА.

Положения, выносимые на защиту.

1. Разработан оригинальный метод детекции мутаций устойчивости к рифампицину у Mycobacterium tuberculosis с применением подходов, не предполагающих секвенирования ДНК.

2. Созданы методы гнездовой ПЦР, имеющие преимущества сравнительно с одноступенчатой ПЦР, для тестирования возбудителей простого герпеса I и II типа, холеры, чумы и гепатита А.

3. Гнездовая ПЦР может быть использована при лабораторной диагностике для обнаружения в клиническом материале РНК вируса гепатита А, ДНК вирусов герпеса и возбудителя холеры.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Альтшулер, Михаил Львович

ВЫВОДЫ

1. Определен спектр мутаций устойчивости к рпфамницину в штаммах Л/. tuberculosis, циркулирующих у больных в России. Разработан упрошенный вариант метода детекции мутаций устойчивости к рифампицину путем комбинированного применения аллель-специфичной амплификации и SSCP.

2. Показана возможность применения аллель-специфической амплификации для определения нуклеотидных замен, удаленных от З'-конца праймера.

3. Продемонстрирована высокая чувствительность и специфичность гнездового метода ПЦР при детекции возбудителей простого герпеса человека I и II типа, холеры, чумы и гепатита А. Показаны его преимущества по сравнению с одноступенчатой ПЦР.

4. Показана эффективность применения гнездовой ПЦР для обнаружения ДНК вирусов герпеса и бактерий холеры, а также PIIK вируса гепатита А в клиническом материале, что свидетельствует о целесообразности использования гнездовой ПЦР в лабораторной диагностике.

5. Установлена способность вируса гепатита А накапливаться во фракции монопуклеарных клеток крови, что позволяет расширить возможности его обнаружения в крови.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Альтшулер, Михаил Львович, 2005 год

1. Баринский И.Ф., Шубладзс А.К., Каспаров А.А., Гребешок В.Н. Герпес: этиология,диагностика, лечение// 1986, Медицина, Москва.

2. Бочаров А.Ф., Кицак В.Я., Бочаров Е.Ф., Трухачсв А.А. Вирус простого герпеса // 1982, Наука, Новосибирск.

3. Генерозов Э.В., Альтшулср М.Л., Говорун В.М., Лопухин Ю.М., Голышевская

4. B.И., Черноусова Л.Н., Хоменко А.Г. Детекция и характеристика мутаций в гене гроВ резистентных к рифампицину клинических штаммов М. tuberculosis // 1999, Проблемы туберкулеза, 7:39-42.

5. Лакина Е.И., Куш А.А. РНК вируса гепатита С у пациентов с диагнозом «вирусный гепатит С» // 2002, Вопросы вирусологии, 47:4-11.

6. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // 1984, Мир, Москва.

7. Покровский В.И., Поздеев O.K. (ред.). Медицинская микробиология // 1999, ГЭОТАР-МЕД, Москва.

8. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия // 2001, ГЭОТАР-МЕД, Москва.

9. Стент Г., Кэлиндер Р. Молекулярная генетика //1981, Мир, Москва.

10. Шаханнпа И.Л., Радуто О.И. Вирусные гепатиты в России: официальная статистика и экономические потерн//2001, Вакцинация. Новости вакцинопрофплактпкп, №6 (18):5-10.

11. Amor M, Parker KL, Globcrman H, New Ml, White PC. Mutation in the CYP21B gene (iIel72-to-asn) causes steroid 21-hydroxylase deficiency // 1988, PNAS, 85:1600-1604.

12. Applied Biosystems. 3730/3730x1 DNA analyzers//2004,http:/AvAvw.wtcrf.ed.ac./genetics/4331467b.pdf

13. Baklouti F, Giraud Y, Francina A, Richard G, Perier C, Geyssant A, Jaubert J, Brizard

14. C, Dclaunay J. Hemoglobin Grange-Blanche beta 27(B9) Ala—Val., a new variant with normal expression and increased affinity for oxygen // 1987, FEBS Lett, 223:5962.

15. Babon JJ, McKcnzie M, Cotton RG. The use of resolvascs T4 cndonuclease VII and T7 endonuclease I in mutation detection // 2003, Mol Biotechnol, 23:73-81.

16. Barany F. The Ligase chain reaction in a PCR world //1991, PCR Methods and Applic, 1:5-16.

17. Barbosa GHTS, Santanal EM, Almeida AMP, Araujo AM, Fatibcllo-Filho O, Carvalho LB, Jr. The use of filter paper plasticized with polyvinyl alcohol-glutaraldchyde in ELISA II2000, Braz J Med Biol Res, 33: 823-827.

18. Bassam BJ, Caetano-Anolles G, GressholTPM. Fast and sensitive silver staining of DNA in Polyacrylamide gels//1991, Anal Biochem, 198:217-220.

19. Bi LJ, Zhou YF, Zhang XE, Deng JY, Zhang ZP, Xie B, Zhang CG. A MutS-based protein chip for detection of DNA mutations // 2003, Anal Chem, 75:4113-4119.

20. Blouquit Y, Bardakdjian J, Lena-Russo D, Arous N, Pcrrimond II, Orsini A, Rosa J, Galacteros F. HB Bruxellcs: beta-41 or 42(C7 or CDl)phe deleted // 1989, Hemoglobin, 13:465-474.

21. Boom R, Sol CJ, Salimans MM, Jansen CL, Wortheim-van Dillen PM, van der Noordaa J. Rapid and simple method for purification of nucleic acids // 1990, J Clin Microbiol, 28:495-503.

22. Bottaro M, Berti E, Biondi A, Migone N, Crosti L. Hctcroduplex analysis of T-ccll receptor y gene rearrangements for diagnosis and monitoring of cutaneous T-cell lymphomas // 1994, Blood, 83:3271-3278.

23. Bradley RD, Ilillis DM. Recombinant DNA sequences generated by PCR amplification //1997, Mol Biol Evol, 14:592-593.

24. Brcnnan SO, Williamson D, Symmans WA, Carrell RW. Two unstable hemoglobins in one individual: Hb Atlanta (beta 75 Leu leads to Pro) and Hb Coventry (beta 141 Leu deleted)// 1983, Hemoglobin, 7:303-312.

25. Bunce M, Young NT, Welsh KI. Molecular HLA typing the brave new world // 1997, Transplantation, 64:1505-1513.

26. Burke JF (ed.). PCR: Essential techniques // 1996, Wiley, New York-London-Amstcrdam-Sydney.

27. Butler T. Plague and other Yersinia infections // 1983, In "Current Topics in Infectious Diseases", W.B. Greenough and T.S. Mcrigan (eds), Plenum Press, New York.

28. Canetti G, Froman S, Grossctt A. Mycobacteria: Methods for testing drug sensitivity and resistance // 1963, J Bull Wld Health Org, 29:565-579.

29. Caugant DA, Sandven P, Eng J, Jeque JT, Tonjum T. Detection of rifampin resistance among isolates of Mycobacterium tuberculosis from Mozambique // 1995, Microb Drug Resist, 1:321-326.

30. Cha RS, Zarbi H, Keohavong P, Thilly WG. Mismatch amplification mutation assay (MAMA) // 1992, PCR methods applic, 2:14-20.

31. Chang HL, Zaroukian MH, Esselman WJ. T200 alternate exon use in murine lymphoid cells determined by reverse transcription-polymerase chain reaction // 1989, J Immunol, 143:315-321.

32. Chantcau S, Rahalison L, Ralafiarisoa L, Foulon J, Ratsitorahina M, Ratsifasoamanana L, Carniel E, Nato F. Development and testing of a rapid diagnostic test for bubonic and pneumonic plague// 2003, Lancet, 361:211-216.

33. Chiou S-H, Hu M-C, Chung B. A misscnse mutation at ilcl72-to-asn or arg356-to-trp causes steroid 21-hydroxylase deficiency // 1990, J Biol Chem, 265:3549-3552.

34. Chomszynski P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanatc-phcnol-cloroform extraction// 1987, Anal Biochem, 162:156-159.

35. Chung H, Jaykus L-A, Sobsey MD. Detection of human enteric viruses in oysters by in vivo and in vitro amplification of nucleic acids // 1996, Appl Environment Microbiol, 62:3772-3778.

36. Cooksley G. Hepatitis disease management-integrating prevention, diagnostics and therapeutics // 2002, Proceedings of the 10th International Congress on Infectious Diseases, Singapore, CTp. 34.

37. Cooper KL, Gocring RV. Development of a universal probe for electronic microarray and its application in characterization of the Staphylococcus aureus polC gene // 2003, J Mol Diagn, 5:28-33.

38. Corso D, Cognata B, Ciaccio C, Piazza T, Dibcncdctto SP, Samperi P, Russo Mancuso G, Schiliro G. Hb Agenogi beta 90(F6)Glu—Lys. and beta zero-thalassemia in a Sicilian family // 1990, Hemoglobin, 14:549-553.

39. Costa-Mattioli M, Di Napoli A, Fcrre V, Billaudel S, Perez-BercolTR, Cristina J. Genetic variability of hepatitis A virus//2003, J Gen Virol, 84:3191-3201.

40. Cotton RG, Rodrigues NR, Campbell RD. Reactivity of cytosine and thymine in singlc-base-pair mismatches with hydroxylamine and osmium tetroxide and its application to the study of mutations // 1988, PNAS, 85:4397-4401.

41. Coyle PV, Jain S, Wyatt D, McCaughey C, O'Neill HJ. Description of a nonlcthal herpes simplex virus type 1 glycoprotein D deletion mutant affecting a site frequently used for PCR // 2000, Clin Diagn Lab Immunol, 7:322-324.

42. Covne VE, James MD, Reid SJ, Rybicki EP. Molecular Biology Tcchniqucs Manual (3T ed). Polymerase chain reaction //1998, http://www.mcb.uct.ac.za/manual/MolBiolManual.htm

43. Cuthbcrt JA. Hepatitis A: old and new//2001, Clinical Microbiol Rev, 14:38-58.

44. Dallas WS,, Falkow S. Amino acid sequence homology between cholera toxin and Escherichia coli heat-labile toxin // 1980, Nature, 288:499-501.

45. Di Pinto A, Fortev T, Tantillo GM, Terio V, Buonavoglia C. Detection of hepatitis A virus in shellfish (Mytilus galloprovincialis) with RT-PCR // 2003, Food Prot, 66:1681-1685.

46. Dutton C, Sommer SS. Simultaneous detection of multiple single-base alleles at a polymorphic site//1991, Biotechniques, 11:700-702.

47. Feodorova VA, Devdariani ZL. Development, characterisation and diagnostic application of monoclonal antibodies against Yersinia pestis fibrinolysin and coagulase // 2000, J Med Microbiol, 49:261-269.

48. Genes and Disease. Nutritional and metabolic diseases. Diabetes, type 1 // 2004,http://www.ncbi.nIm.nih.gov/books/

49. Gill P. Application of low copy number DNA profiling // 2001, Croat Med J, 42:22932.

50. Globerman II, Amor H, Parker KL, New MI, White PC. A nonsense mutation causing steroid 21-hydroxylase deficiency // 1988, J Clin Invest, 82:139-144.

51. Gurgey A, Sipahioglu M, Aksoy M. Compound heterozygosity for Hb E-Saskatoon or bcta22(B4)glu-to-lys and bcta-thalassemia type IVS-I-6 (T-to-C) // 1990, Hemoglobin, 14:449-451.

52. Helmberg A, Tusie-Luna MT, Tabarelli M, Koller R, White PC. R339H and P453S: CYP21 mutations associated with nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency that are not apparent gene conversions // 1992, Molec Endocr, 6:1318-1322.

53. Henegarin O. PCR and Multiplex PCR Guide//1997,http://info.med.yale.edu/genetics/ward/tavi/guide.html

54. Higashi Y, Tanae A, Inoue II, Fujii-Kuriyama Y. Evidence for frequent gene conversion in the steroid 21-hydroxylase P-450(C21) gene: implications for steroid 21-hydroxylase deficiency // 1988, Am J Hum Genet, 42:17-25.

55. Higashi Y, Tanac A, Inoue 11, Iliromasa T, Fujii-Kuriyama Y. Aberrant splicing and niissense mutations cause steroid 21-hydroxylase (P-450C21.) deficiency in humans: possible gene conversion products // 1988, PNAS, 85:7486-7490.

56. Higgins JA, Ezzell J, Hinnebusch BJ, Shipley M, Ilenchal EA, Ibrahim MS. 5' nuclease PCR assay to detect Yersinia pestis // 1998, J Clin Microbiol, 36:2284-2288.

57. Ho SK, Chan TM. An overview of assays for serum HBV DNA // 2000, Clin Lab, 46:609-614.

58. Hongyo T, Buzard GS, Calvert RJ, Weghorst CM. 'Cold SSCP': a simple, rapid and non-radioactive method for optimized single-strand conformation polymorphism analyses // 1993, Nucleic Acids Res, 21:3637-42.

59. Hopmeier P, Binder C, Gadner H, Fischer M. A case of the unstable Hb Genova (beta 28 Leu—Pro) in an Arab child associated with severe haemolytic anaemia and growth retardation // 1990, Acta Haematol, 83:39-41.

60. Hovig E, Smith-Sorensen B, Brogger A, Börresen A-L. Constant denaturant gel electrophoresis, a modificatuion of denaturing gel electrophoresis, in mutation detection //1991, Mutat Res, 262:63-71.

61. Hunt M. Real-time PCR// 2004, http://www.med.sc.edu:85/pcr/realtimc-homc.html.

62. Hunt JM, Roberts GD, Stockman L, Felmlee TA, Persing DH. Detection of a genetic locus encoding resistance to rifampin in mycobacterial cultures and in clinical specimens // 1994, Diagn Microbiol Infcct Dis, 18:219-227.

63. Igbal SS, Chambers JP, Goodc MT, Valdes JJ, Brubaker RR. Detection of Yersinia pestis by pesticin fluorogenic probe-couplcd PCR// 2000, Mol Cell Probes, 14:109114.

64. Inganas M, Byding S, Eckersten A, Eriksson S, Hultman T, Jorsback A, Lofman E, Sabounchi F, Kressner U, Lindmark G, Tooke N. Enzymatic mutation detection in the P53 gene // 2000, Clin Chem., 46:1562-1573.

65. Innogcnctics, Inno-Lipa Rif.TB // 2004,http://www.innogenetics.bc/site/diagnostics.html

66. Isolation of genomic DNA from bacteria// 1998, http://lyco-lycoming.edu/-newman

67. Jenkins FJ. Basic methods for the detection of PCR products // 1994, PCR Methods Applic, 3:S77-S82.

68. Judo MSB, Wedel AB, Wilson C. Stimulation and suppression of PCR-mediated recombination// 1998, Nucl Acids Res, 26:1819-1825.

69. Kahn SM, Jiang TA, Culbertson IB, Weistein GM, Tomita N, Ronai Z. Rapid and sensitive nonradioactive detection of mutant K-ras genes via "enriched" PCR amplification//1991, Oncogene, 6:1079-1083.

70. Kirby-Keyser L, Porter CC, Donohoue PA. E380D: a novel point mutation of CYP21 in an HLA-homozygous patient with salt-losing congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency// 1997, Hum Mutat, 9:181-182.

71. Kobayashi S, Nara T, Nakano Y, Fukazawa H, Kawamura G, Kitajima II, Sugita M, Joh K, Ohba Y, Hattori Y. Hemoglobin Burke: an unstable hemoglobin rarely associated with hemolytic episodes// 1986, Hemoglobin, 10:661-666.

72. Koos RD, Seidel RH. Detection of acidic fibroblast growth factor mRNA in the rat ovary using reverse transcription-polymerase chain reaction amplification // 1989, Biochem Biophys Res Commun, 165:82-88.

73. Kosaki R, Nakamura T, Higaki S, Yamamoto S, Inoue Y, Hayashi K, Shimomura Y, Tano Y. The use of competitive PCR for quantitation of HSV-1 DNA // 2003, Jpn J Ophthalmol, 47:240-245.

74. Kulichenko AN, Norkina OV, Gintsburg AL, Popov Iu.A, Ddrozdov IG. Improvement of a method for detecting of strains of the plague microbe using polymerase chain reaction // 1994, Genetica, 30:167-171.

75. Kuppuswamy MN, Hoffmann JW, Kasper CK, Spitzer SG, Groce SL, Bajaj SP. Single nucleotide primer extension to detect genetic diseases: Experimental application to hemophilia B (factor IX) and cystic fibrosis genes //1991, PNAS, 88:1143-1147.

76. Kwok S, Sheng-Yung C, Sninsky JJ, Wang A. A guide to the design and use of mismatched and degenerate primers //1994, PCR methods and applic, manual supplement, 3:S39-S47.

77. Lajic S, Clauin S, Robins T, Vcxiau P, Blanche H, Bcllanne-Chantelot C, Wedell A. Novel mutations in CYP21 detected in individuals with hyperandrogenism II2002, J Clin Endocr Metab, 87:2824-2829.

78. Landin B, Berglund S, Wallman K. Two different mutations in codon 97 of the bcta-globin gene cause Hb Malmo in Sweden // 1996, Am J Hematol, 51:32-36.

79. Lederberg J, Shope RE, Oaks SC, Jr. (eds). Emerging Infections // 1992, National Academy Press, Washington, D.C.

80. Lee HH. Ligase chain reaction // 1996, Biologicals, 24:197-199.

81. Maniatis A, Bousios T, Nagcl RL, Balazs T, Ucda Y, Bookchin RM, Maniatis GM. Hemoglobin Crete (beta 129 ala leads to pro): a new high-affinity variant interacting with beta o -and delta beta o -thalassemia // 1979, Blood, 54:54-63.

82. Maniatis T, Fritsch EE, Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual // 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor.

83. Marinucci M, Giuliani A, Maffi D, Massa A, Giampaolo A, Mavilio F, Zannotti M, Tentori L. Hemoglobin bologna (alpha 2 beta 2 61 (E5) lys replaced by met). An abnormal human hemoglobin with low oxygen affinity // 1981, Biochim Biophys Acta, 668:209-15.

84. Marras SA, Kramer FR, Tyagi S. Multiplex detection of single nucleotide variations using molecular beacons//1999, Genet Anal, 14:151-156.

85. Matsiota-Bemard P, Vrioni G, Marinis EJ. Characterization of rpoB mutations in rifampin-resistant clinical Mycobacterium tuberculosis isolates from Greece // 1998, J Clin Microbiol, 36:20-23.

86. Mekalanos JJ. Cholera toxin: genetic analysis, regulation, and role in pathogenesis // 1985, Curr Top Microbiol Immunol, 118:97-118.

87. Melanitou E, Fain P, Eisenbarth GS. Genetics of type 1A (immune mediated) diabetes // 2003, J Autoimmun, 21:93-98.

88. Meyerhans A, Vartanian JP, Wain-Hobson S. DNA recombination during PCR // 1990, Nucleic Acids Res, 18:1687-1691.

89. Miller DR, Wilson JB, Kutlar A, Huisman TH. Hb Bicctre or alpha 2 beta(2)63(E7)His—Pro in a white male: clinical observations over a period of 25 years// 1986, Am J Hematol, 21:209-214.

90. Monteiro L, Bonnemaison D, Vekris A. Complex polysaccharides as PCR inhibitors in feces: Helycobacter pylori model // 1997, J Clin Microbiol, 35:995-998.

91. Mullis KB, Ferre F, Gibbs RA (eds). The Polymerase Chain Reaction // 1994, Birkhauser, Boston.

92. Mullis KB, Faloona FA. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction //1987, Methods Enzymol, 155:335-350.

93. Nachamkin I, Kang C, Weinstein MP. Detection of resistance to isoniazid, rifampin, and streptomycin in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis by molecular methods // 1997, Clin Infect Dis, 24:894-900.

94. Nash KA, Gaytan A, lnderlied CD. Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis by use of a rapid, simple, and specific RNA/RNA mismatch assay // 1997, J Infect Dis, 176:533-536.

95. Negri Aijona S, Maldonado Eloy-Garcia J, Molchanova TP, Wilson JB, Gu L-H, Huisman THJ. Hb Brockton (beta-138 (HI6) ala-to-pro) observed in a Spanish girl // 1992, Hemoglobin, 16:511-514.

96. Newton CR, Graham A, Heptinstall LE. Analysis of any point mutation in DNA. The amplification refractory mutation system (ARMS) // 1989, Nucleic Acids Res, 17:2503-2516.

97. Ohlsson G, Muller J, Schwartz M. Gcnetic diagnosis of 21-hydroxylase deficiency: DGGE based mutation scanning of Cyp21 // 1999, Human Mutation, 13:385-389.

98. Orita M, Iwahana H, Kanazawa H, Hayashi K, Sekiya T. Detection of polymorphisms of human DNA by gel electrophoresis as single-strand conformation polymorphism // 1989, PNAS, 86:2766-2770.

99. Owerbach D, Sherman L, Ballard A-L, Azziz R. Pro453-to-ser mutation in CYP21 is associated with nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency // 1992, Molec Endocr, 6:1211-1215.

100. Pastinen T, Partanen J, Syvanen AC. Multiplex, fluorescent, solid-phase minisequencing for efficient screening of DNA sequence variation// 1996, Clin Chem, 42:1391-1397.

101. Patrushev LI, Zykova ES, Kayushin AL, Korosteleva MD, Miroshnikov AI, Bokarew IN, Leont'ev SG, Koshkin VM, Severin ES. New DNA diagnostic system for detection of factor V Leiden // 1998, Thromb Res, 92:251-259.

102. Pease AC, Soles D, Sullivan EJ, Cronin MT, Holmes CP, Fodor SP. Lightgenerated oligonucleotide arrays for rapid DNA sequence analysis // 1994, PNAS, 91:5022-5026.

103. Prctorius GS, Sirgel FA, Schaaf IIS, van Ilelden PD, Victor TC. Rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis — rapid detection and implications in chemotherapy// 1996, S Afr Med J, 86:50-55.

104. Prevention of Hepatitis A through Active or Passive Immunization // 1999, Morbidity and Mortality Weekly Report, Centers for Desease Control and Prevention, Atlanta, USA, 48:1-12.

105. Prezioso VR. General Notes on Primer Design in PCR // 2004,http://www.brinkmann.com/PCRapplprimer.asp

106. Rahalison L, Vololonirina E, Ratsitorahina M, Chanteau S. Diagnosis of bubonic plague by PCR in Madagascar under field conditions // 2000, J Clin Microbiol, 38:260-263.

107. Rahbar S, Feagler RJ, Beutler E. Hemoglobin Hammersmith (beta 42 (CD1) Phe replaced by Ser) associated with severe hemolytic anemia//1981, Hemoglobin, 5:97-105.

108. Rappuoli R, Pizza M, Douce G, Dougan G. Structure and mucosal adjuvanticity of cholera and Escherichia coli heat-labile enterotoxin // 1999, Immunol Today, 20:493-500.

109. Ridanpaa M, Burvall K, Zhang LH, Husgafvcl-Pursiaincn K, Onfclt A. Comparison of DGGE and CDGE in detecton of single base changes in the hamster hprt and human N-ras genes // 1995, Mutat Res, 334:357-364.

110. Rinder H, Dobner P, Fcldmann K, Rifai M, Bretzel G, Rusch-Gcrdes S, Löscher T. Disequilibria in the distribution of rpoB alleles in rifampicin-resistant M. tuberculosis isolates from Germany and Sierra Leone. // 1997, Microb Drug Resist, 3:195-7.

111. Romero C, Fernandez Fuertes I, Quintana A, Blanco L, Navarro JL, Wilson JB, Huisman TH. Hb G-Szuhu or alpha 2 beta 2(80)(EF4)Asn-—Lys, in combination with beta zero-thalassemia in a Spanish family // 1985, Hemoglobin, 9:535-539.

112. Safrin S, Shaw H, Bolan G, Cuan J, Chiang CS. Comparison of virus culture and the polymerase chain reaction for diagnosis of mucocutaneous herpes simplex virus infection // 1997, Sex Transm Dis, 24:176-80.

113. Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn GT, Erlich HA, Arnheim N. Enzymatic amplificatioon of ß-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia// 1985, Science, 230:1350-1354.

114. Sanger F, Nicklcn S, Coulson AR. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // 1977, PN AS, 74:5463-5467.

115. Sanguinetti CJ, Neto ED, Simpson AJG. Rapid silver stainining and recovery of PCR products separated on Polyacrylamide gels // 1994, Biotechniques, 17:915918.

116. Schachter J. DFA, E1A, PCR, LCR and other technologies: what tests should be used for diagnosis of chlamydia infections? // 1997, Immunol Invest, 26:157-161.

117. Schlör S, Riedl S, Blaß J, Reidl J. Genetic Rearrangements of the Regions Adjacent to Genes Encoding Heat-Labile Enterotoxins (eltAB) of Enterotoxigenic Escherichia coli Strains // 2000, Appl Environ Microbiol, 66:352-358.

118. Sheorey H, Waters MJ. Viral hepatitis? Which test should I order? // 2001, Aust Fam Physician, 30:433-437.

119. Sherman DR, Mdluli K, Hickey MJ. // 1996, Science, 272:1641-1643.

120. Speiser PW, New MI, White PC. Molecular genetic analysis of nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency associated with HLA-B14,DR1 // 1988, New Eng J Med, 319:19-23.

121. Stickney HL, Schmutz J, Woods IG, Holtzer CC, Dickson MC, Kelly PD, Myers RM, Talbot WS. Rapid mapping of zebrafish mutations w ith SNPs and oligonucleotide microarrays // 2002, Genome Res, 12:1929-1934.

122. Savov A, Angelicheva D, Jordanova A, Eigel A, Kalaydjieva L. High percentage acrylamide gels improve resolution in SSCP analysis // 1992, Nucleic Acids Res, 20:6741-6742.

123. Stamm WE, Handsfield IUI. The association between genital ulcer disesase and acquisition of HIV infection in homosexual men // 1988, JAMA, 260:1429-1433.

124. Su X, Röbelek R, Wu Y, Wang G, Knoll W. Detection of point mutation and insertion mutations in DNA using a quartz crystal microbalance and MutS, a mismatch binding protein // 2004, Anal Chem, 76:489-494.

125. Suzuki Y, Katsukawa C, Inoue K, Yin Y, Tasaka H, Ueba N, Makino M. Mutations in rpoB gene of rifampicin resistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis in Japan // 1995, Kansenshogaku Zasshi, 69:413-419.

126. Tanaka Y, Yazawa K, Dabbs ER, Nishikawa K, Komaki H, Mikami Y, Miyaji M, Morisaki N, Ivvasaki S. Different rifampicin inactivation mechanisms in Nocardia and related taxa //1996, Microbiol Immunol, 40:1-4.

127. Taniguchi H, Aramaki H, Nikaido Y, Mizuguchi Y, Nakamura M, Koga T, Yoshida S. Rifampicin resistance and mutation of the rpoB gene in Mycobacterium tuberculosis// 1996, FEMS Microbiol Lett, 144:103-108.

128. Taylor GR (ed.). Laboratory methods for the detection of mutations and polymorphisms in DNA // 1997, CRC Press, New-York London.

129. Tclenti A, Imboden P, Marchesi F, Lowrie D, Cole S, Colston MJ, Matter L, Schopfer K, Bodmer T. Detection of rifampicin-resistant mutations in Mycobacterium tuberculosis// 1993, Lancet, 341:647-650.

130. Tiesman J, Rizzino A. Expression and developmental regulation of the k-FGF oncogene in human and murine embryonal carcinoma cells // 1989, In Vitro Cell Dev Biol, 25:1193-1198.

131. Trebesius K, Harmsen D, Rakin A, Schmelz J, Heesemann J. Development of rRNA-targeted PCR and in situ hybridization with fluorescently labelled oligonucleotides for detection of Yersinia species // 1998, J Clin Microbiol, 36:25572564.

132. Tusie-Luna M-T, Speiser PW, Dumic M, New MI, White PC. A mutation (pro30-to-leu) in CYP21 represents a potential nonclassic steroid 21-hydroxylase deficiency allele //1991, Molec Endocr, 5:685-692.

133. Tusie-Luna M-T, Traktman P, White PC. Determination of functional effects of mutations in the steroid 21-hydroxylase gene (CYP21) using recombinant vaccinia virus // 1990, J Biol Chem, 265:20916-20922.

134. UgozzoH L, Wallace RB. Allele-specific polymerase chain reaction //1991, Methods: A companion to methods in enzymol, 2:42-48.

135. Waldor MK, Mekalanos JJ. Lysogenic Conversion by a Filamentous Phage Encoding Cholera Toxin// 1996, Science, 272:1910-1914.

136. Walker L, McFarlanc A, Patterson M, Eng B, Wayc JS. Hb Castilla bcta-32(B14)leu-to-arg. caused by a de novo mutation // 2003, Hemoglobin, 27:253-256.

137. Walsh PS, Erlich HA, Iliguchi R. Preferential PCR amplification of alleles: Mechanisms and solutions // 1992, PCR Methods Applic, 1:241-250.

138. Wang NY, Liaw GJ, Weng LC, Chiu YY, Huang FY, Yang DL, Chiang CS. Rapid detection of herpes simplex virus by polymerase chain reaction // 1999, J Microbiol Immunol Infect, 32:99-104.

139. Wang LF, Rakela Y, Laskus T. Head-to-tail primer tandem repeats // 1997, Mol Cell Probes, 5:385-387.

140. Wawcr K, Ruggebcrg H, Meyer G, Muyzer G. A simple and rapid electrophoresis method to detect sequence variation in PCR-amplified DNA fragments // 1995, Nucleic Acids Res, 23:4928-4929.

141. Wedell A, Luthman H. Steroid 21-hydroxylase deficiency: two additional mutations in salt-wasting disease and rapid screening of disease-causing mutations // 1993, Hum Molec Genet, 2:499-504.

142. Wedell A, Ritzen EM, Haglund-Stengler B, Luthman II. Steroid 21-hydroxylase deficiency: three additional mutated alleles and establishment of phenotype-genotype relationships of common mutations // 1992, PNAS, 89:72327236.

143. Welkos SL, Friedlander AM, Davis KJ. Studies on the role of plasminogen activator in systemic infection by virulent Yersinia pestis strain C092 // 1997, Microb Pathog, 23:211-223.

144. Wells D, Sherlock JK. Strategies for preimplantation genetic diagnosis of single gene disorders by DNA amplification //1998, Prcnat Diagn, 18:1389-1401.

145. Wen SY, Wang H, Sun OJ, Wang SQ. Rapid detection of the known SNPs of C YP2C9 using oligonucleotide microarray // 2003, World J Gastroenterol, 9:13421346.

146. Whiley DM, Mackay IM, Syrmis MW, Witt MJ, Sloots TP. Detection and differentiation of herpes simplex virus types 1 and 2 by a duplex LightCycIer PCR that incorporates an internal control PCR reaction // 2004, J Clin Virol, 30:32-38.

147. White PC, Vitek A, Dupont B, New Ml. Characterization of frequent deletions causing steroid 21-hydroxylase deficiency// 1988, PNAS, 85:4436-4440.

148. World Health Organization:Hepatitis:Background information on hepatitis A // 2001, httpi/Awvw.vvho.int/vaccincs/cn/hcpatitisa.shtml.

149. Widjojoatmodjo MN, Fluit AC, Torenma R. The magnetic immuno polymerase chain reaction assay for direct detection of salmonellae in fecal samples // 1992, J Clin Microbiol, 30:3195-3199.

150. Wiedmann M, Wilson WJ, Czajka J, Luo J, Barany F, Batt CA. Ligase chain reaction (LCR)--overview and applications // 1994, PCR Methods Appl, 3:S51-S64.

151. Wilde J, Eiden J, Yolken R. Removal of inhibitory substances from human fecal specimens for detection of group A rotaviruses by reverse transcriptase and polymerase chain reactions // 1990, J Clin Microbiol, 28:1300-1307.

152. Williams DL, Waguespack C, Eisenach K, Crawford JT, Portacls F, Salfingcr M, Nolan CM, Abe C, Sticht-Groh V, Gillis TP. Characterization of rifampin-resistance in pathogenic mycobacteria // 1994, Antimicrob Agents Chemother, 38:2380-2386.

153. Williams DL, Wagnespack C, Eisenach K. WHO/IUATLD global project on anti-tubcrculosis drug resistance surveillance. Antituberculosis drug resistance in the world // 1997, World Hcalh Organization Publication WIIO/TB 97.229, Geneva.

154. Williamson D, Brennan SO, Carrell RW. Hb Brisbane (beta 68 (E12) Leu replaced by His) is unstable// 1983, Hemoglobin, 7:473-475.

155. Williamson D, Nutkins J, Rosthoj S, Brennan SO, Williams DH, Carrell RW. Characterization of Hb Aalborg, a new unstable hemoglobin variant, by fast atom bombardment mass spectrometry// 1990, Hemoglobin, 14:137-145.

156. Xie J, Wehner TC, Conkling MA. PCR-bascd single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis to clone nine aquaporin genes in cucumbcr // 2002, J Amer Soc Hort Sci, 127:925-930.

157. Yang YL, Wang G, Dorman K, Kaplan AI I. Long polymerase chain reaction amplification of heterogeneous HIV type 1 templates produces recombination at a relatively high frequency//1996, AIDS Res Hum Retroviruses, 12:303-306.

158. Yeager AM, Zinkham WH, Jue DL, Winslow RM, Johnson Mil, McGuffey JE, Moo-Penn WF. Hemoglobin Cheverly: an unstable hemoglobin associated with chronic mild anemia// 1983, Pediat Res, 17:503-507.