Оптимизация производства вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой, на новом клеточном субстрате перевиваемой линии клеток Vero B. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Бархалёва, Оксана Александровна

• Бархалёва, Оксана Александровна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бархалёва, Оксана Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Инфекции вызываемые вирусами герпеса простого.

1.2. Вакцины вирусные, профилактические и лечебные.

1.3.Стандартизация и методы контроля качества вирусных вакцин

Глава II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

3. Результаты исследования и обсуждение.

3.1. Получение рабочего банка клеток Vero В и его аттестация.

3.2. Восстановление культуры клеток Vero В после криоконсервации.

3.3. Адаптация ВГП типа 1 (штамм УС), ВГП типа 2 (штамм ВН) к перевиваемой линии клеток Vero В, получение штамм, запаса.

3.4. Исследование нуклеотидной последовательности ВГП типа 1 (шт. УС) и типа 2 (шт. ВН) ПЦР анализом с последующим сиквенсом продуктов амплификации.

3.5. Получение маточного и посевного запаса ВГП типа 1 (шт. УС) и типа 2 (шт. ВН) на перевиваемой культуре клеток Vero В.

3.6. Разработка технологии получения и контроль вакцины против вируса герпеса на перевиваемой линии клеток Vero В.

3.6.1. Определение содержания ДНК клеточного субстрата в герпетической вакцине.

3.6.2. Изучение специфической активности вакцины «Витагерпавак».

3.6.3. Определение специфической активности вакцин герпетических методом ИФА.

3.7. Сравнительное лабораторное изучение вакцин герпетических, полученных на разных клеточных субстратах.

3.7.1. Биохимические показатели качества вакцин.

3.7.2. Специфическая активность вакцин.

3.7.3. Содержание бактериальных эндотоксинов.

3.8. Сравнительное клиническое изучение вакцин против вируса герпеса простого.

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация производства вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой, на новом клеточном субстрате перевиваемой линии клеток Vero B.»

Актуальность проблемы.

В последние годы в инфекционной патологии все большее значение приобретают заболевания, вызываемые вирусами герпеса простого (от греч. ЬегреБ — ползучий). Внимание, которое вирусологи и клиницисты проявляют к герпес-вирусным заболеваниям человека, связано с значительной ролью ВГП в патологии человека и социальной значимостью в современном мире. Среди вирусных инфекций герпес-вирусные инфекции занимают одно из ведущих мест в силу повсеместного распространения, различных путей передачи этих вирусов, многообразия клинических проявлений заболевания, хронического латентного течения с периодическими рецидивами инфекции (9, 12, 93).

Герпес-вирусные инфекции входят в число наиболее распространенных и плохо контролируемых инфекций человека. Вирусы герпеса могут длительно, без клинических проявлений, циркулировать в организме человека с нормальной иммунной системой, но у людей с нарушениями иммунитета могут вызывать тяжелые заболевания, иногда со смертельным исходом.(14)

Хроническая рецидивирующая герпетическая инфекция, обусловленная вирусами простого герпеса 1 и 2 типов - это пожизненная персистенция вируса, как правило, в нервных ганглиях с периодическими обострениями клинических проявлений с локализацией, постоянной для каждого больного (глаза, слизистая ротовой полости, гениталий, кожа).(1, 8, 14)

Свыше 90% людей земного шара инфицированы вирусом герпеса простого и до 20% из них имеют те или иные клинические проявления инфекции. В России число госпитализированных с различными формами герпетической болезни превышает 2,5 млн. человек в год. В США, где в отличие от нашей страны, осуществляется регистрация больных герпетической инфекцией, зарегистрировано 20 млн. человек с герпесом гениталий.(12, 14)

Сероэпидемиологические исследования показывают, что более 95% взрослого населения имеют антитела к вирусу герпеса простого 1 или 2 типов и выявляют стойкую тенденцию к росту числа инфицированных. Так, количество носителей только ВГП типа 2 за последние 10 лет увеличилось примерно на 30 % .

По данным ВОЗ, смертность от герпетической инфекции среди вирусных заболеваний находится на втором месте (15,8%) после гриппа (35,8%). Общее число больных генитальным герпесом в РФ составляет около 8 млн.(14)

Все более возрастающий интерес к проблеме простого герпеса (ПГ) связан с крайне выраженным полиморфизмом заболевания - от ограниченных поражений кожи, слизистых глаз до системных, генерализованных форм с вовлечением в вирусный процесс жизненно важных внутренних органов, а также развитием на фоне хронической персистенции ВГП бесплодия, не вынашивания плода, новообразований и т.д. (41).

Герпесвирусы персистируют в нервных клетках (ганглиях), нарушая деятельность как вегетативной, так и ЦНС. Среди энцефалитов вирусной этиологии менингоэнцефалит, обусловленный ВГП, занимает по частоте первое место в Европе, обуславливает высокую смертность (80%). (13, 34).

Таким образом герпес-вирусная инфекция создает комплекс проблем медицинского, психологического и социального характера.

В связи с этим в настоящее время все большее распространение получает термин "герпетическая болезнь", который как нельзя лучше отражает системный характер негативного действия ВГП на организм в целом.

По прогнозам Всемирного банка информации, проблема герпетической инфекции на ближайшее будущее определяется как "глобальная проблема человечества", что обусловливает необходимость всестороннего изучения герпетической инфекции и разработки эффективных методов профилактики и лечения разнообразных форм этой инфекции.

Одним из путей лечения этого заболевания является вакцинотерапия, история которой насчитывает более 50 лет. Эта история складывалась из самых различных направлений и подходов к разработке технологий создания и методов применения герпетических вакцин. Фактически, история развития методов культивирования тканей и клеток животных или человека отражалась на истории развития и совершенствования герпетических вакцин.

В России первая культуральная вакцина против герпеса простого 1 и 2 типов была разработана на первично-трипсинизированной культуре клеток куриного эмбриона в Институте вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН группой авторов под руководством профессора А.К.Шубладзе и профессора И.Ф.Баринского, ими же была разработана и оригинальная схема применения вакцины с использованием внутрикожного метода введения вакцины. Многолетние наблюдения при вакцинотерапии этим препаратом большого количества больных с различными формами рецидивирующей герпетической инфекции показали выраженную лечебную эффективность и безопасность применения этого препарата. (10, 45)

Современный уровень развития вирусологии и методологии создания и ведения культур клеток различного происхождения создает серьезные предпосылки оптимизации и стандартизации технологий получения вирусных вакцин, в том числе и вакцины против вируса герпеса простого, с использованием в качестве субстрата для накопления вируса диплоидных и гетероплоидных линий клеток животных и человека.

Данные клеточные культуры обладают значительными преимуществами перед первично-трипсинизированными культурами клеток животных и человека, т.к. могут быть тщательно изучены по всем параметрам и в первую очередь на отсутствие различных контаминирующих агентов, в том числе и онкогенных (18, 25, 26).

ВОЗ в процессе отбора и изучения различных гетероплоидных клеточных линий рекомендовала для производства вирусных вакцин - клетки Vero (культура клеток почек африканской зеленой мартышки).

В России эта линия клеток аттестована как перевиваемая линия клеток Vero В для производства вирусных вакцин, однако вакцина против герпеса простого 1 и 2 типов - «ВИТАГЕРПАВАК» является, первой для производства которой были использованы клетки Vero В.

В связи с этим, перед нами была поставлена цель: научно обосновать, оптимизировать и стандартизировать технологию получения инактивированной культуральной вакцины против герпеса простого 1 и 2 типов при использовании нового субстрата - перевиваемой линии клеток Vero В, а так же разработать метод контроля специфической активности вакцины с применением иммуноферментного анализа (ИФА). Для выполнения вышеуказанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить морфологические и репродуктивные особенности культуры клеток Vero В применительно к созданию условий репродуцирования вируса герпеса простого 1 и 2 типов;

2. Создать и аттестовать рабочий банк культуры клеток Vero В;

3. Провести адаптацию ВГП типа 1 (штамм УС) и ВГП типа 2 (штамм ВН) к перевиваемой линии клеток Vero В, изучить инфекционную активность и специфичность (подлинность) штаммов ВГП после адаптации к новому субстрату, создать банк и систему посевных серий (штаммовый запас, маточный вирус, посевной вирус) для воспроизводства на новом субстрате штаммов ВГП 1 и 2 типов, а так же определить возможность использования их при производстве вакцины;

4. Провести изучение инфекционной активности вирусов ВГП 1 и 2 типов в культуре клеток Vero В в сравнении с показателями инфекционной активности в первично-трипсинизированной культуре клеток куриного эмбриона;

5. Методоми ГЩР-амплификации и анализа нуклеотидных последовательностей определить отсутствие значимых изменений в геномах ВГП 1 и 2 типов после адаптации вирусов к перевиваемым клеткам Vero В;

6. Разработать и аттестовать для вакцины против герпеса простого систему требований и методов контроля качества, при этом модифицировать и аттестовать метод оценки показателя «Специфическая активность» вакцины с применением ИФА;

7. В клинических испытаниях при вакцинотерапии различных форм рецидивирующей герпетической инфекции в сравнении с вакциной «Герповакс» (на культуре клеток куриных эмбрионов) подтвердить хорошую переносимость, безопасность и лечебную эффективность вакцины «Витагерпавак», приготовленной на новом клеточном субстрате -перевиваемой линии клеток Vero В.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

Впервые показана возможность применения аттестованной Национальным органом контроля МИБП - ГИСК им. Л.А.Тарасевича перевиваемой линии клеток Vero В в условиях отечественного вакцинного производства.

Получен и аттестован в соответствии с международными требованиями к субстратам для приготовления вирусных вакцин - рабочий (производственный) банк перевиваемой линии клеток Vero В.

Проведена адаптация (путем последовательного пассирования) штаммов ВГП к культуре перевиваемых клеток Vero В без потери основных свойств вируса.

В шифрованных сравнительных клинических испытаниях подтверждена хорошая переносимость, безопасность и лечебная эффективность вакцины «Витагерпавак», приготовленной на новом клеточном субстрате - клетках Vero В, не уступающая таковой вакцине, полученной на первично-трипсинизированных клетках куриного эмбриона.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Научно обоснована возможность применения гетероплоидных клеток Vero В для производства вирусных вакцин без изменения основных свойств вируса. Впервые в РФ, совместно со специалистами НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, проведено молекулярно-генетическое изучение производственных штаммов вируса герпеса простого типов 1 и 2, адаптированных к перевиваемой линии клеток Vero В.

Экспериментально доказана целесообразность применения метода ИФА для оценки специфической активности и стандартности вакцины против герпеса простого.

В условиях клинического шифрованного опыта впервые показана безопасность, хорошая переносимость и лечебная эффективность вакцины против ВГП 1 и 2 типов «Витагерпавак», полученной на перевиваемой линии клеток Vero В, не уступающая таковой вакцине производимой на культуре первично-трипсинизированных клеток куриного эмбриона.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Разработана и стандартизована технология производства вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой «Витагерпавак» на новом клеточном субстрате - перевиваемой линии клеток Vero В. На препарат оформлена и утверждена Росздравнадзором нормативная документация: Фармакопейная статья, Инструкция по применению. Получено Регистрационное удостоверение МЗ РФ, Аттестат производства. На предприятии - ЗАО «ФИРМА«ВИТАФАРМА» налажено серийное производство вакцины, к настоящему времени выпущено более 30 серий. Все разработки и результаты исследований, представленные в работе, послужили обоснованием для внедрения вакцины «Витагерпавак» в медицинскую практику.

ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА.

Работа выполнена на базе ЗАО «ФИРМА«ВИТАФАРМА» и в лаборатории арбовирусных инфекций, риккетсиозов и ВИЧ-инфекции ГИСК им. Л.А.Тарасевича при непосредственном участии автора диссертации: создание рабочего банка клеток Vero В, адаптация штаммов ВГП типа 1 (шт. УС) и типа 2 (шт. ВН) к культуре клеток Vero В, получение вирусной биомассы и серий вакцины. Формирование "Программы клинических испытаний", подготовка серий вакцины к клиническим испытаниям. Модификация метода определения специфической активности вакцины с использованием метода ИФА. Исследования нуклеотидной последовательности ВГП типа 1 шт. УС) и типа 2 (шт. ВН) ПЦР анализом с последующим сиквенсом продуктов амплификации, проводились совместно с сотрудниками лаборатории молекулярной биотехнологии Института вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН под руководством д.б.н., профессора М.М.Гараева.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Создание рабочего банка культуры клеток Vero В.

2. Адаптация производственных ВГП 1 и 2 типов (штамм УС) и (штамм ВН) к перевиваемой линии клеток Vero В, характеристика основных свойств штаммов после адаптации.

3. Изучение штаммов ВГП 1 и 2 типов методами ПЦР-анализа и сиквенса -определение возможных изменений в геноме вируса после адаптации.

4. Модернизация технологии, получение и аттестация серий вакцины, ' разработка и применение метода ИФА для оценки специфической активности вакцины.

5. Оценка и подтверждение переносимости, безопасности и лечебной эффективности вакцины «Витагерпавак» по результатам сравнительных клинических испытаний отечественных вакцин против герпеса простого.

Публикации: По теме диссертационной работы опубликовано 11 научных статей, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Структура и объём диссертационной работы.

Диссертационная работа изложена на 126 страницах машинописного текста. Состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы и собственных исследований которые включают разделы: материалы и методы и результаты исследований и обсуждение, выводов и указателя литературы, состоящего из 162 работ, из них 97 отечественных и 65 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Бархалёва, Оксана Александровна

ВЫВОДЫ:

1. Проведено изучение морфологических и репродуктивных особенностей перевиваемой линии клеток Vero В (культура клеток почек африканской зеленой мартышки) с целью определения возможностей накопления вирусной биомассы для производства культуральной герпетической вакцины. Впервые получен и аттестован Национальным органом контроля ГИСК им Л.А.Тарасевича рабочий банк клеток Vero В.

2. Впервые проведена адаптация производственных штаммов вируса герпеса простого типа 1 (штамм УС) и типа 2 (штамм ВН) к перевиваемой линии клеток Vero В.

Показано, что вышеуказанные штаммы после 5 серийных пассажей в культуре клеток Vero В не изменили своих биологических свойств и специфичности, при этом получены значения титров инфекционной активности вируса (в ТЦД so/мл) для адаптированных штаммов на 1,5 - 2,0 lg выше по сравнению с титрами при культивировании в культуре клеток куриного эмбриона.

3. Впервые, совместно, на базе лаборатории молекулярной биотехнологии ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского проведено сравнительное изучение методом ПЦР-амплификации и анализа нуклеотидных последовательностей ВГП типа 1 (штамм УС) и типа 2 (штамм ВН) до и после адаптации к перевиваемой линии клеток Vero В, полученные нуклеотидные последовательности депонированы в GenBank.

Показано наличие нуклеотидных и аминокислотных замен, что возможно, отражается в антигенных различиях штаммов ВПГ типа 1 и ВПГ типа 2 и более высокой инфекционной активности в культуре клеток Vero В.

4. Разработана и аттестована система посевных серий ведения производственных штаммов, технология производства и контроля вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой на новом субстрате -перевиваемой линии клеток Vero В. При разработке системы контроля

110 модифицирована и упрощена методика оценки «Специфической активности» вакцины с применением ИФА.

5. В сравнительных шифрованных клинических испытаниях при вакцинотерапии различных форм рецидивирующего хронического герпеса была подтверждена хорошая переносимость, безопасность и эффективность вакцины герпетической полученной на клетках Vero В не уступающие таковым при вакцинотерапии герпетической культуральной инактивированной вакцине «Герповакс».

6. На основании комплекса проведенных исследований организовано производство вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой «Витагерпавак» на предприятии ЗАО «ФИРМА»ВИТАФАРМА», на вакцину утверждены: ФСП 42-0107-4707-03, Инструкция по применению, выдано Регистрационное удостоверение № 003193/01.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бархалёва, Оксана Александровна, 2008 год

1. Абазова Ф.И., Безух С.М., Борисенко К.К., и др. Неизвестная эпидемия: герпес (патогенез, диагностика, клиника, лечение). // Смоленск: Фармаграфикс. 1997.

2. Акимов Г.А., Лобзин B.C., Иовлев В.И. и др. Пояснично-крестцовые радикулоганглионевриты герпетической этиологии // В кн.: Актуальные вопросы невропатологии и нейрохирургии.- М.-1976.-С. 139-141

3. Акимов Г.А., Лобзин B.C., Михайленко A.A. Клинические синдромы герпетических поражений периферической нервной системы // В кн.: Периферическая нервная система. М.-1980.-вып.З.-С. 102-106

4. Алкеева А.Б. Особенности иммунных нарушений при рецидивирующей вирусной инфекции Herpes Simplex и сравнительная оценка эффективности различных методов терапии // Автореф. дисс. канд. мед. наук.-М.-1992.-26 С.

5. Амвросьева Т.В., Вотяков В.И., Андреева О.Т. и др. Дислипедимия, повышенное содержание в клетках липидов при экспериментальной герпетической инфекции и их коррекция антивирусными химиопрепаратами // Вопр. вирусол. 1979.-№4- С.61-64.

6. Амосенко, Свиткин Ю.В., Попова В.Д. и др. Эффективная очистка препаратов полиомиелитных вакцин от субстратной ДНК. // Вопросы вирусологии 1991, №1, С.71-73.

7. Бабаянц A.A., Гутман Н.Р., Хесин Я.В. и др. Экспериментальная миокардиопатия, вызванная вирусом герпеса // Вопр. вирусол. 1979.-№4- С. 363-368.

8. Банченко Г.В., Терехова Н.В., Филоненко О.Ф. Вирусные заболевания слизистой оболочки полости рта (клиника, диагностика, лечение и профилактика) // Метод, реком. М. - 1986. - 12 С.

9. Баринский И.Ф. // Общая и частная вирусология. М. 01982. -Т.2. -с. 375-412.

10. Баринский И.Ф., Карпович Л.Г., Губанова Е.И. и др. Механизм лечебного эффекта герпетической поливакцины при хроническом офтальмогерпесе и герпесе гениталий.// Вопросы вирусологии. 2000,С.30-33.

11. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К., Каспаров A.A., Гребенюк Н.В. Герпес. Этиология, диагностика, лечение // М. 1986. - 272 С.

12. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К. Этиология хронических вирусных нейроинфекций // М. 1984. - 219 С.

13. Баринский И.Ф. Герпесвирусные инфекции иммунодефицитные заболевания XXI.// Сборник «Актуальные проблемы герпесвирусных инфекций», под редакц. Д.К.Львова и др., М.- 2004, - С. 5-7.

14. Белокриницкий Д.В., Карпович Л.Г., Баринский И.Ф. и др. Некоторые показатели иммунного статуса больных рецидивирующим герпесом при лечении герпетической вакциной // Вопр. вирусол. 1^87. - №2 -С. 229-233.

15. Бикбулатов P.M., Димидова С.А., Белкокина С.И. и др. Факторы гуморального иммунитета в патогенезе рецидивирующей хронической герпетической инфекции // Вопр. вирусол. 1982. №3.- С. 323-327.

16. Бочаров А.Ф., Кицак В.Я., Бочаров Е.Ф. и др. Вирус простого герпеса // Новосибирск. 1982. С. - 128-133.

17. Бочкова Н.Г., Погодина В.В., Левина Л.С.и др. Получение экспериментальных серий вакцин и диагоностикума японского энцефалита с использованием перевиваемой линии клеток почек эмбриона овцы 4184.// Биотехнология, 2003. №2.,С 54-58.

18. Виноградова Т.Ф., Земскова З.С., Мергембаев Х.С. Клинико-морфологические параллели при остром герпетическом стоматите у детей // Стоматология. 1975. №4. -С. 59-63.

19. Гаврилов В.И. Перививаемые клетки в вирусологии.//М., 1964,268 С.

20. Гайдамович С .Я. Общие сведения о лабораторной диагностике вирусных инфекций // Общая и частная вирусология под редакцией В.М.Жданова и С.Я.Гайдамович. М. - 1982. - Т.1. - С. 437-463.

21. Галегов Г.А. Биохимия вирусов и прогресс теории и практики химиотерапии вирусных инфекций // В кн.: Вопросы общей вирусологии. М. 1971. - ч.1. - С. 16-18.

22. Галегов Г.А., Кухарь Э.Б., Бикбулатов P.M. // Вопр. вирусол. 1970. -№3. - С.351-354.

23. Гранитов В.М. Герпесвирусная инфекция // Медицинская книга ., Н. Новгород, изд-во НГМА., 2001. 88 С.

24. Грачев В.П., Ханина М.К., Эльберт Л.Б., Миронова JI.JI. Гетероплоидная линия клеток почки зеленой мартышки как субстрат для размножения вируса клещевого энцефалита.// Вопросы вирусологии.- 1983, №4, С. 373-377.

25. Грачев В.П., Завальный М.А., Попова В.Д. и др. Линия клеток РАМТ как субстрат для размножения вакцинных штаммов вирусов // Вопр. вирусол. 1986. №6.-С. 718-723.

26. Гребенюк Н.В. Рецидивирующий генитальный герпес. Клиника, особенности иммунореактивности, лечение // Автореф. дисс. докт. мед. наук. -М.- 1983.-27 С.

27. Гринберг К.Н., Кухаренко В.И., Ляшко В.Н. // В кн.: Методы культивирования клеток. Л. - 1987. - С. 250-257.

28. Данченко О.В., Гуртовой Б.А., Зайцева З.С. и др. Применение иммуноглобулина для профилактики внутриутробной инфекции у беременных с генитальным герпесом. // IV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». 1997. - 217 С.

29. Деконенко Е.П., Мальцева Н.Н., Вавилов С.Б. и др. Герпетический энцефалит: К линико-виру со логический аспект диагностики // Ж. невропат, и психиатр. 1989. - Т. 89, №8. - С. 31-36.

30. Джумиго П.А. Интерферонообразование и продукция специфических антител в процессе комбинированной терапии реафероном и антиоксидантами у больных простым рецидивирующим герпесом // Автореферат дисс. канд. мед. наук,- М. 1990. - 16 С .

31. Диагностика герпесвирусных инфекций человека: меморандум совещания ВОЗ // Бюлл. ВОЗ. 1991. Т.69, №3. - 206 С .

32. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний передаваемых половым путем. Метод, мат. Под ред. К.К.Борисенко. М.: Ассоциация САНАМ, - 1998.- 188 С.

33. Доконенко Е.П. Герпетические поражения нервной системы.//Материалы национальной конференции «Нейроинфекции». М. -2007,-С. 31-34.

34. Дьяконов Л.П. Животная клетка в культуре. (Методы и применение в биотехнологии).//М., Спутник. 2000, С. 139-145.

35. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. и др. Теория и практика иммуноферментного анализа // М. Высшая школа. - 1991. - 288 С .

36. Жданов В.М., Баринский И.Ф., Галегов Г.А. и др. Герпетическая патология и современные методы лечения герпетических поражений // Сов. мед. 1983. -№10.-С. 65-69.

37. Зазимко JT.A., Кузенкова A.B., Иванова И.А. и др. Антитела к вирусу простого герпеса, относящиеся к IgM, IgG и подклассам IgG, у лиц разного возраста // Вопросы вирусологии. 2000. - №6. - С.28-30.

38. Игнатьев Г. М., Стрельцова М.А., Агафонов А.П. и др. Изучение комбинированного применения иммуномодуляторов с вакцинными препаратами // Молек. биол. и мед.: Всес. шк.-семин., Jl.-Тез. Докл. 1990 -113 С.

39. Иммунологические методы (под редакцией Г.Фримеля) // М. 1987. -472 С.

40. Исакова В.А., Архипова Е.И., Исков Д.В. Герпесвирусные инфекции человека. // С-Петербург, СпецЛит, 2006, 14 С.

41. Казанцев А.П., Попова Н.И. Внутриутробные инфекционные заболевания детей и их профилактика // JL 1980. - С. 74-85.

42. Каламкарян A.A., Гребнюк В.Н. Вирусные дерматозы // В кн.: Кожные и венерические болезни. Руководство. М. -Медицина.-1995.-483 С.

43. Караулов М.П. Инфекции и иммунодефициты-приоритеты сегодня.//Практикующий врач.-1997.-№9-С.З-4.

44. Карпович Л.Г., Блоха В.В., Калашникова Т.В. и др. Показатели функциональной активности лимфоцитов больных кожно-генитальным герпесом в процессе лечения герпетической вакциной // Вопр. вирусол. -1986. №2. - С.200-205.

45. Каспаров A.A. Классификация герпетической болезни глаз // Вест, офтальм. 1972. - №2. - С. 63-67.

46. Каспаров A.A. Офтальмогерпес. М. Медицина, 1994. 223 С.

47. Киселева И.В., Александрова Г.И., Науменко З.С. и др. Культура клеток MDCK возможный субстрат для производства живой гриппозной вакцины.- Сборник «Актуальные проблемы медицинской вирусологии», М.,1999, т. 1, 104 С.

48. Кищак В.Я. Вирус простого герпеса и канцерогенез.// Автореф. докт., дисс., М., 1984.

49. Коломиец Н.Д., Коломиец А.Г. и др. Изучение причинно-следственных отношений между невынашиванием беременности и герпетической инфекцией.//Минск.- Акушерство и гинекология. -1984. -№З.С. 62-64.

50. Коломиец А.Г., Малевич Ю.К. Коломиец Н.Д. и др. Вирус простого герпеса и его роль в патологии человека // Минск. 1986. - 262 С.

51. Коломиец А.Г., Вотяков В.И., Бикбулатов P.M. и др. Генерализованная герпетическая инфекция: Факты и концепция // Минск -1992.-351 С.

52. Косяков Н.П., Ровнова З.И. Противовирусный иммунитет // 1972. -М. 295 С.

53. Круглова А.И., Николаева Н.П., Нюхалова Ю.В. и др. Полиморфизм ДНК вируса простого герпеса типов 1 и 2 из лабораторных штаммов и клинического материала от пациентов с генитальным герпесом. // Вопросы вирусологии. 2004. №1. - С. 23-27.

54. Кудряшов Н.И., Озерова O.E., Львов Н.Д. и др. Тяжелые формы герпесвирусной инфекции у новорожденных // Педиатрия. 1990. - №1, - С. 38-43.

55. Кунгуров Н.В., Герасимова Н.М., Зудин А.Б., Кузовкина Т.В. Генитальный герпес. // Екатеринбург: Издательство Уральского университета. -2001.-7 С.

56. Лашкевич В.А. Пригодность перевиваемых клеточных линий для производства препаратов, вводимых людям. Сборник «Культивирование клеток животных и человека», Пущино, 1992, С. 88-89.

57. Лещинская Е.В., Мартыненко И.Н., Никулина В.Н. и др. Острые менингоэнцефалиты у детей, вызванные вирусом простого герпеса 1 типа // Ж. невропат, и психиатрии им. С.С.Корсакова 1981. - №4 - С 530-542.

58. Мавров И.И., Жигулин В.А., Шабалин А.Р. Проблемы генитальных поражений, вызванным вирусом простого герпеса. // 3111111. 1997. - №4. - С. 19-21.

59. Майданюк А.Г., Немцев Ю.В., Бондаренко Е.П. и др. Оптимизация условий получения инактивированной вакцины против гепатита А и ее характеристика.//Вопросы вирусологии, 1995, №5, С. 215-218.

60. Макарова О.П. Тенденции развития технологии культивирования животных клеток.// Сборник «Культивирование клеток животных и человека», Пущино,1992, С.90-96.

61. Максутова Э.Л., Семенова Т.Б. Неврологические нарушения при простом герпесе // Ж. Клин. мед. 1985. - №9. - С.62-66.

62. Марченко Л.А. Генитальная герпетическая инфекция у женщин (клиника, диагностика, лечение). // Афтореф. дисс. докт. мед. наук. 1997. -М.-32 С.

63. Машкиллейсон Л.Н. Инфекционные и паразитарные болезни кожи // М.- 1960. -С. 196-201.

64. Медуницын Н.В. // Вакцинология. М. «Триада X». 1999 . 272 С.

65. Миронова Л.Л., Попова В.Д., Конюшко О.И. и др. Опыт создания банка авторских линий перевиваемых клеток и их применение в вирусологической практике. // Биотехнология. 2000, (6), С.41-47.

66. Михайленко A.A. Вегетативные расстройства при герпетических заболеваниях нервной системы // В кн.: Патология вегетативной нервной системы. М. - 1976. - С. 208-209.

67. Михайленко A.A. Начальные проявления неврологических форм герпетических заболеваний // В кн.: 4-й Всерос. съезд невропатологов и психиатров. М. - 1980. - С. 438-440.

68. Муравьева Т.В. Значение иммуноглобулинов в оценке иммунологической реактивности больных с различным течением офтальмогерпеса // В кн.: Вирусные заболевания глаз. М. - 1977. - С. 14-18.

69. Мурзич A.B., Голубев М.А. Герпетическая инфекция. // ЮжноРоссийский мед. журнал. 1998. - №3. - С. 44-47.

70. Пак Н.В. Изучение интерфероногенных и противовирусных свойств бруцеллезной лечебной вакцины // Автореферат, дисс. канд.мед. наук. Алма-Ата. - 1989. - 24 С.

71. Панов А.Г., Зинченко А.П. Рассеянный склероз и рассеянный энцефаломиелит, вызванный вирусом простого герпеса // В кн.: Некоторые актуальные вопросы невропат. Курск. - 1967. - С.40-43.

72. Перадзе Т.В., Халонец П. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций. // М. Медицина. - 1985. - 301 С.

73. Подчерняева Р.Я., Хижнякова Т.М., Михайлова Г.Р. и др. Линия клеток Vero В для проготовления медико-биологических препаратов. //Вопросы вирусологии.-1996.- №4,- С. 183-185.

74. Посевая Т.А., Цукерман Б.Г., Шуваева Н.И. и др. Роль герпетической инфекции при эпителиальных дисплазиях шейки матки и опыт их лечения противогерпетическими препаратами. // Вопросы вирусологии. 1991. - №1. -С. 78-80.

75. Потекаев Н.С., Константинова A.B., Самгин М.А. Язвенная форма рецидивирующего герпеса с исходом в герпетический сепсис // ВД и В. -1971. №4.-С. 34-38.

76. Потекаев Н.С., Самгин М.А. Особенности клиники и течения простого рецидивирующего герпеса // Ж. Сов. мед. 1983. - №6 - С. 79-82.

77. Потекаев Н.С., Самгин М.А., Баринский И.Ф. Современная терапия рецидивирующего герпеса // Ж. Клин. мед. 1982. - №12 - С. 78-81.

78. Потекаев H.H., Хашиева Ф.Н., Кравченко A.B. Особенности клинического течения простого и опоясывающего герпеса у ВРИ -инфицированных лиц.// Российский журнал кожных и венерических болезней. Приложение герпес. 2006 №1. С. 40-42.

79. Профилактика герпесвирусных болезней и борьба с ними // Бюлл. ВОЗ. 1985. - Т. 63, № 2. - С. 1-16.

80. Самгин М.А. Клинические особенности и иммунологическая терапия рецидивирующего герпеса // Автореф. дисс. канд. мед. наук. М. -1969.-15 С.

81. Самгин М.А., Халдин A.A., Зуев A.B. Клинический полиморфизм дерматологического синдрома герпетической болезни.// Российский журнал кожных и венерических болезни. Приложение герпес. 2006. №1, С.60-66.

82. Скрипкин Ю.К., Мордовцев В.Н. Кожные и венерические болезни (руководство для врачей) // М. Медицина. - 1999. - Т.1 - С.443-451.

83. Скрипкин Ю.К., Хамаганова A.B., Богданов Н.С. К вопросу терапии вирусных заболеваний кожи отечественными противовирусными препаратами // ВдиВ. 1976. - №9. - С.11-14.

84. Сухих Г.Т., Ванько J1.B., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес // Н.-Новгород М. - 1997. - 221 С.

85. Сухубаевская Л.П. Усовершенствование способов получения клеточной и вирусной биомассы в целях разработки тканевых инактивированных гриппозных вакцин.// Сборник «Вирусы человека и животных» Рига, 1981, С 53-54.

86. Таточенко В.К., Озерцковский Н.А.Иммунопрофилактика. /М., 2001.-С.44-45.

87. Тихонова Л.И. О состоянии заболеваемости болезнями, передаваемыми половым путем (по итогам 1996 г.), и мерах по их предупреждению в России // Заболевания передаваемые половым путем. -1997.-№4.-С.22-26.

88. Хапчаев Ю.Х. Разработка методов получения и культивирования первичных и перевиваемых культур клеток животных для производства вирусных вакцин. Автореферат, д.б.н., Москва 2003, С.13-19.

89. Хахалин Л.Н., Соловьева Е.В. Герпесвирусные заболевания человека. // Клин. фрам. и тер. 1998. - С. 72-76.

90. Хороших Е.М. Оптимизация условий культивирования линий клеток различного происхождения для репродукции производственных штаммов вирусов. Автореферат, дисс. к.б.н., 1991, Томск.

91. Шульженко А.Е. Герпетические инфекции человека: перспективы диагностики и противовирусной терапии. // Российский журнал кожных и венерических болезней . 2006. №1. С. 51-56.

92. Цукер М.Б. Менингиты и менингоэнцефалиты у детей // М.-1975-344 С.

93. Щербо С.Н., Евсегнеева Ж.В., Мандрыкина Н.Е. Генодиагоностика герпесвирусных инфекций.// Мат. Национальной конференции «Нейроинфекции». М.- 2007. С.161-163.

94. Эльберт Л.Б., Ворович М.Ф., Тимофеев А.В. Сравнительный анализ тестов in vivo и in vitro количественной оценки иммуногенности вакцины клещевого энцефалита. Вопросы вирусологии - 1998, №5, С.236-238.

95. Эльберт Л.Б., Терлецкая Е.Н, Тимофеев А.В. и др. Очистка препаратов вируса клещевого энцефалита от клеточной ДНК. Вопросы вирусологии , 1990, №3, С.219-223.

96. Abzyd M.J., Beam А.С., Gyorkos Е.А. et al. Viral pneumonia in the first month of life //Periat. Infec.Dis.J. 1990.- Vol. 9, N 12.- P. 881-885.

97. Allen W.P., Rapp F. // J. Infect.Dis. 1982.- Vol. 10.- P.413-421.

98. Amortegui A.J., Macpherson T.A., Havger J.H. A cluster of neonatal herpes simplex infections without mucocutaneus manifestations // Pediatrics.-1984.-Vol. 73, N2,-P. 194-198.

99. Arditi M., Shulman S.T., Lanqman C.B. et al. Probable herpes simplex vims type 1-related acute parotitis, nephritis and erythema multiforme // Pediat.Infec.Dis.J.- 1988.- Vol.7, N 6.- P.427-429.

100. Baglin T.P., Gray J.J., Marcus R.E. et al. Antibiotic resistant fever associated with herpes simplex vims infection in neutropenic patients with haematological malignancy// J.Clin.Pathol.- 1989.- Vol.42, N 12.- P.1255-1258.

101. Barile F., Angarano G., Monno L. et al. Ulcero-necrotic herpes simplex in a male patient affected by AIDS // Ann.Ital.Dermatol.Clin.e sper.- 1988.- Vol.42, N 3.- P.263-268.

102. Becker T.M., Blount J.H., Guinan M.E. Genital herpes infection in privat practice in USA 1966 to 1981 //JAMA.- 1985.-Vol. 253, N 11,-P. 1601-1603.

103. Brookes J.L., Haywood S., GreenG. Adjustment to the psychological ans social sequelae of recurrent genital herpes simplex infection // Genitourin Med.-1993,- Vol.69, N5.- P.384-387.

104. Brown Z.A., Benedetti J; Ashley R. et al. Neonatal herpes simplex vims in relation to asymptomatic maternal infection at the time of labor // N.Engl. J.Med.-1991.- Vol.324, N 18.- P.1247-1252.

105. Dundarov S., Andonov P., Bakalov B. et al. Antiherpes vaccines // 9 Int.Congress of inf.& Parasit.Dis.- Munich, Juli.- 1986.- P. 115-121.

106. Dundarov S., Andonov P., Bakalov B. et al. Diagnostics and treatment of herpes virus diseases in Bulgaria // Probl.Infect.Parasit Dis.- 1983.- N 10.- P.70-73.

107. Fackelmann K.A. Herpesvirus may boost AIDS expession // Sci.News.-1989,- Vol.135, N 4.-P.55.

108. Frams B., Nahony J.B., Balachandian N. et al. Identification and typing of herpes virus by enzyme immunoassay with monoclonal antibodies // J.Clin.Microbiol.- 1984.- Vol.20, N 2.- P.162-166.

109. Furrer H., Meister F., Malinverni R. Herpes-simplex-Virus-Type-2-Pneumonitis bei einem AIDS-Patienten // Schweiz.med. Wochenschr.- 1989.-B.119,N 37.-S.1275-1278.

110. Gaffey V.J., Ben-Ezra J.M. Weisse L.M. Herpes simplex Lymphadenitis // Amer.J.Clin.Pathol.- 1991.- Vol.95, N 5.- P.709-714.

111. Glezen W.P. Acute respiratory lesions of university students with special reference to the etiologic role of herpesvirus hominis // Am.J.Epid.- 1975.-Vol.101.- P.ll 1-121.

112. Goetmann S., Decazes J.M. Aciclovir et ganciclovir propriétés et indications actuelles // Pathol.Biol.- 1989.- Vol.37, N 9.- P. 1003-1004.

113. Goldmeier D., Johnson A., Byrne M. et al. Psychosocial implications of recurrent genital herpes simplex virus infection // Genitourin.Med.- 1988.- Vol.64, N 5.- P.327-330.

114. Guemot C. Herpes et grossesse. EZISA cherche-moi des HSV-2 // J.Int.med.- 1992,- N 232,- P.21-23.

115. Hayashi M., Takeyama K., Takeyama J. et al. Severe herpes simplex virus hepatitis following autologous bone marrow transplantation // Jap.J.Clin.Oncol.-1991.- Vol.21, N 5.- P.372-376.

116. Hilfenhaus J., Moser H., Herrmann A. et al. Herpes simplex virus subunit vaccine: characterization of the virus strain used and testing of the vaccine // Develop. Biol. Stand.- 1982.- Vol.52.- P.321-331.

117. Hirata Т., Sekitani Т., Okinaka Y. et al. Serovirological study of vestibular neuronitis. // Acta oto-laryngol. Suppl.- 1989.- N 468.- P.371-373.

118. Hubbell C., Dominguez R., Kohl S. Neonatal herpes simplex pneumonitis // Rev.Infec.Dis.- 1988.- Vol.10, N 2,- P.431-438.

119. Hubl R.N., Peck F.B. // International Conference on vaccines Against ViraliLand Rickettsial Diseases of Man, 5 : Proceedings. Pull. N 147.- Washington. -1967.- P.266-275.

120. Jensenius M., Myrvang В., Storvold G. Seros meningitt assosiert til primaer genital herpesinfeksjon. // Tidsskr. Nor. Laegeforen.- 1997.- Vol.117, N 16.- P. 2316-2318.

121. Kavalclova L., Dundarov S., Andonov P. et al. Preparation and study on antiherpes vaccines 1 and 2 type free of DNA // Acta Virol.-1986.-Vol.30.-P.402-410.

122. Kitagawa K. Therapy of herpes simplex with heat inactivated herpes-virus hominis type 1 and 2 // Z. Hautkaukh.- 1973,- Vol.48.- S. 533-535.

123. Koid J., Yanagita N., Hondo R. et al. Serological and clinical study of herpes simplex virus infection in patients with sudden deafness. // Acta otolaryngol. Suppl.- 1988,-N456.-P.21-26.

124. Kuzushima K. Climical manifestations of primary herpes simplex virus type 1 infection in a closed community // Nagoya J.Med.Sci.- 1991.- Vol.53. N 4,- P.4.

125. Landry M.L., Mayo D.R., Hsiung C.D. The need for a rapid and accurate diagnosis//Pharmac.ther.- 1983.- Vol.18.- P.107-132.

126. Leprince E., Durous E., Franccois Y. et al. Ileo-colite herpetique a virus Herpes simplex de type 2 // Gastroenterol.Clin.Biol.- 1993.- Vol.17, N 11,- P.855-858.

127. Libikova H., Pogady J., Weidermann V. et al. Попытка определения герпетических антител в спинномозговой жидкости у лиц с сенильной деменцией и умственным недоразвитием // Acta virol. 1975.- Vol.19, N 6.-Р.493-495.

128. Lipson S.M., Schutzbann T.E., Szabok. Evaluation of three immunofluorescence assays for culture confirmation and typing of herpes simplex virus // J.Clin.Microbiol.- 1987.- Vol.7, N 2,- P.391-394

129. MacNab J.M. Association of the herpes genus with carcinogenesis and specifically herpes simplex virus type-2 with the tumourigenesis // European conference on Herpes viruses and genital pathology. 1996. - Paris.-P. 24.

130. Mancini J., Charbol B., Liver M.O., Pinsard N. Aspects evoluties des encephalitis herpetigues: a propes dix observations // Sem.hop.Paris.- 1991.-Vol.67,N 25.-P.l 139-1145.

131. Meignier B. // Herpesviruses.- N-York, 1985.- Vol.4- P.265-296.

132. Miller J.D., Ross C.A. Encephalitis: a four year survey. Lancer, 1968, v.l, N 7551, p.1121-1126.

133. Mindel A. Coutaneous herpes simplex infection: Symp.Herpesvirus Infec. // Scand.J.Infec.Dis.- 1991.- N 80, Suppl.- P.47-52.

134. Minick P., Fabricant C., Fabricant J. et al. Atheroarteriosclerosis induced by infection with herpes virus // Amer.J.Path.- 1979.- Vol.96, N 3.- p.673-684.

135. Nasemann N., Wassilew S.W. Vaccination for Herpes Simplex Genitalis // Brit.J.vener.Dis. 1975.- Vol.55, N 2.-P.121-122.

136. Notlcins A.L., Bankowski K.A., Barons et al. Workshop on the treatment and prevention of herpes simplex virus infection // J.Jnfect.Dis. -1973. Vol. 127, N 1 .P. 117-119.

137. Overall J.C. Herpes simplex virus infection of the fetus and newborn // Pediatr. Ann.- 1994,- Vol.23, N 3.- P.131-136.

138. Price R.W., Walz A., Wohlenberg Ch. et al. Latent Infection of Sensory Ganglia With Herpes Simplex Virus //Science.- 1975.-Vol. 188, N4191.-P.938-940.

139. Reeves W.C. et al. Risk of reccurence after first episodes of genital herpes: relation to HSV type and antibody response // N.Engl.J.Med.- 1981.- Vol.305.-P.315-319.

140. Ross C.A.C., Stevenson J. Herpes simplex meningoencephalitis // Lancer. -1961.-Vol.2.-P. 682-685.

141. R.Patel, Boselli F., Cairo I. et al. Негативное влияние рецидивирующего генитального герпеса с точки зрения пициента. // Российский журнал кожных и венерических болезней. Приложение герпес. 2006, №1, С.66-72.

142. Ruelle С. Laboratory au service de la chinigue. Herpes genital // Techn.Biol. 1981. - Vol.7, N 3. - P. 135-139.

143. Sahjos S., Munor N., Boseh F. et al. Sexually transmitted agens and cervical neoplasia in Colombia and Spain. // Int. J.Cancer. -1994. -Vol. 56, Nl.-P. 358-363.

144. Samarai A.M.A1., Shareef A.A., Kinghorn G.R. Seguential genital infections with herpes simplex virus types 1 and 2 // Genitourin.Med. 1988. - Vol. 65, N 1. -P. 39-41.

145. Schlesinger J. Tebas P., Buller R.S. et al. Herpes simplex virus type 2 meningitis in the absence of genital lesion // Clin.Infect.Dic. 1995. -V. 20, N 4. -P. 842-848.

146. Schmidt O.W., Fife K.H., Corey L. Reinfection in an uncommon occurrence in patients with symptomatic recurrent genital herpes // J.Infec.Dis. 1984. - Vol.149. N4.-P. 645-646.

147. Scriba M. Animal studies on the efficacy of vaccination against recurrent herpes // Med. Microbiol, and Immunol. 1982. - Vol.171. - P. 33-42.

148. Slichtova V., Kutinova L., Vonka V. Immunogenicity of subviral herpes simplex virus type I preparation. Protection of mice against intradermal challenge with type I and type 2 viruses // Arch. Virol. 1980. - Vol. 66. - P. 207-214.

149. Soltz-Szots J., Fanta D. Therapeutic Aspects of Herpes Genitalis. // Brit.J.Vener.Dis. 1979. - Vol. 55, N 2. - P. 123-124.

150. Spruance S.L., Hamill M.L., Höge W.S. Acyclovir prevents reactivation of herpes simplex labialis in skiers // JAMA.- 1988.- Vol.260, N 11.- P. 1597-1599.

151. Steuhl K.P., Zierhut M. Infectionen des Auges mit Herpes simplex-viren // Z.prakt.Augenheilk.- 1989.- B.10, N 3.- S.l 17-126.

152. Studd M., McCance D.J., Lehner T. Detection of HSV-1 DNA in patients with Behcent's syndrome and in patients with recurrent oral ulcers by the polymerase chain reaction // J.Med.Microbiol.- 1991. Vol.34, N 1.- P.39-43.

153. Sundmacher R., Althaus Chr. Die Herpes-simplex-virus Infectionen des Menschlichen Auges // Hautnah: Dermatologie. 1990.- B.6, N 3.- S.61-62.

154. Teler A., Bernal A., Ory F. de et al. Meningitis limfocitaria. Estudio virologica // Inferm.infec. y microbiol.clin.- 1989. Vol.7, N 2.- P.77-82.

155. Tomlinson A.H., Esiri M.M. Herpes simplex encephalitis: Immunological demonstration of spread of virus via olfactory pathways in mice // J.Neurol.Sei.-1983.- Vol.60, N 3.- P.473-484.

156. Trembay M., Gornitsky M., Wainberg M.A. Active replication of humanimmunodeficiency virus type 1 by peripheral blood mononuclear cells following coincubation with herpes viruses // J.Med.Virol.- 1989,- Vol.29, N 2.-P.109-114.

157. Visser M.R. Vercelotti G.M. Herpes simplex virus and atherosclerosis European Heart Journal.- 1993.- N 14.- P.39-42.

158. Wassilew S.W. Kombinierte Chemotherapie die Herpes-simplex-Infectionen der Haut // Z.Hautkr.- 1979.- B.54, N16.- S.726-731.

159. Выражаю благодарность руководству ЗАО «ФИРМА»ВИТАФАРМА» за предоставленную возможность выполнения научно-исследовательских работ связанных с темой диссертации.