Механизмы иммунотропного действия противотуберкулёзных препаратов основного ряда тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.16, кандидат медицинских наук Васильева, Ольга Александровна

• Васильева, Ольга Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Васильева, Ольга Александровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Иммунопатогенез туберкулёза лёгких

1.2. Цитокины и их роль при туберкулёзной инфекции

1.3. Апоптоз и его роль в развитии туберкулёза лёгких

1.4. Роль дегидрогеназ лимфоцитов в патологии

1.5. Противотуберкулёзные препараты основного ряда и их влияние на клетки макроорганизма

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Механизмы иммунотропного действия противотуберкулёзных препаратов основного ряда»

В настоящее время туберкулёз занимает ведущее место среди распространенных инфекционных заболеваний. Несмотря на то, что показатель заболеваемости населения в России в 2008 г. в среднем снизился на 9,2%, а показатель смертности по сравнению с 2000 г. - в 1,5 раза, в целом заболеваемость туберкулёзом продолжает удерживаться на высоком уровне [Перельман М.И., 2007; Мишин В.Ю., 2008]. В Томской области она составляет, по данным 2008 г., 101,3 случаев на 100 000 населения. При этом большая ее доля приходится на туберкулёз органов дыхания.

Основное место в лечении больных туберкулёзом заняла химиотерапия, требующая длительного применения противотуберкулёзных препаратов, которые могут вызывать напряжение ферментативных систем, нарушения обменных процессов и расстройства функционального состояния некоторых органов, что обусловливает развитие побочных реакций [Мишин В.Ю. и соавт., 2004]. Такие побочные эффекты как гепатит, диспепсия, экзантема и артральгия отмечаются у 23% туберкулёзных больных в течение интенсивной фазы лечения [Awofesoa N., 2008]. При этом иммунная система не является исключением, поскольку, выполняя основную функцию защиты, она является мишенью для действия повреждающих экзогенных и эндогенных факторов [Визель А.А., 2000; Фисенко В.А., 2006; Мишин В.Ю., 2007]. Развитие негативных лекарственно-индуцированных реакций повышает риск прекращения лечения, возникновения рецидива туберкулёзной инфекции и определяет увеличение продолжительности антимикобактериальной терапии [Schaberg Т. et al., 1996; Yee D. et al., 2003; Лысов A.B. и соавт., 2006; Филинюк O.B. и соавт., 2008].

В последние годы становится очевидным, что антибиотики в дополнение к антибактериальной активности способны модулировать продукцию цитокинов и воспалительных медиаторов, в связи с чем могут оказывать значительное влияние на реакции иммунитета и развитие воспаления [Pasquale Т. R., Tan J. S., 2005; Yuhas Y. et al., 2006].

Состояние факторов иммунологической защиты во многом определяет возможность заражения, а при развитии туберкулёзной инфекции - течение и исход заболевания. Важную роль в борьбе с болезнетворными бактериями играют альвеолярные макрофаги и различные субпопуляции Т-лимфоцитов, которые, как известно, осуществляют регуляцию фагоцитоза и лизиса микобактерий макрофагами, формирование специфического противотуберкулёзного иммунитета [Хонина Н.А. и соавт., 2000; Urdahl К.В. et al., 2003; Новицкий В.В. и соавт., 2006].

Однако, предполагая иммуносупрессорное действие химиопрепаратов в условиях характерного для туберкулёзного процесса вторичного иммунодефицита, без наличия соответствующих экспериментальных исследований нельзя с уверенностью судить об их вкладе в развитие данного состояния, так как работы, посвящённые изучению иммунотропной активности препаратов химиотерапии туберкулёза лёгких, практически отсутствуют. Необходимость использования для лечения одновременно нескольких противотуберкулёзных препаратов приводит к ситуации, в которой трудно определить, какой из используемых препаратов индуцирует нежелательный эффект. В то же время эксперименты in vitro позволяют, оценить влияние конкретного препарата на отдельные параметры жизнедеятельности клеток.

В связи с вышеизложенным, важным аспектом современных исследований представляется изучение особенностей и механизмов влияния противотуберкулёзных препаратов на клетки иммунной системы, поскольку именно от их структурно-функционального состояния зависит иммунологическая реактивность организма, направленная на распознавание возбудителя, формирование иммунного ответа и элиминацию инфектогена.

Цель исследования: выявить особенности и механизмы иммунотропного действия противотуберкулёзных препаратов основного (первого) ряда у больных туберкулёзом лёгких in vitro.

Задачи исследования:

1. Определить уровень секреции про- и противовоспалительных цитокинов мононуклеарными лейкоцитами in vitro при действии противотуберкулёзных препаратов первого ряда (изониазида, рифампицина, этамбутола) у здоровых доноров и больных с лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым инфильтративным туберкулёзом лёгких.

2. Изучить прямое действие основных противотуберкулёзных препаратов на пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов крови у здоровых доноров и больных инфильтративным туберкулёзом лёгких с лекарственной чувствительностью и устойчивостью возбудителя.

3. Оценить воздействие основных противотуберкулёзных препаратов на активность ферментов энергетического обмена (сукцинатдегидрогеназы, а-глицерофосфатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы) в лимфоцитах периферической крови у здоровых доноров и больных с лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым инфильтративным туберкулёзом лёгких.

4. Провести сравнительную оценку влияния изониазида, рифампицина и этамбутола на мононуклеарные лейкоциты периферической крови у здоровых доноров и больных инфильтративным туберкулёзом лёгких в зависимости от лекарственной чувствительности/резистентности возбудителя.

Научная новизна. Проведено комплексное изучение иммунотропных свойств препаратов базовой противотуберкулёзной терапии у больных с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких (до начала проведения им специфической терапии) и у здоровых доноров. Впервые показано, что противотуберкулёзные препараты способны in vitro оказывать стимулирующее и, напротив, подавляющее действие на функцию иммунокомпетентных клеток крови, выражающееся как активацией продукции мононуклеарными лейкоцитами про- и противовоспалительных цитокинов (IL-2 при действии рифампицина, IL-12 и IL-10 при действии изониазида), так и угнетением их секреции (IL-2 при действии изониазида, IL-12, IL-10, TGF-P под действием рифампицина и IFN-y под влиянием рифампицина и этамбутола) в сочетании с подавлением пролиферативной активности лимфоцитов (под влиянием этамбутола). Продемонстрировано, что у больных с лекарственно-резистентным туберкулёзом лёгких интенсивность базальной продукции IL-2 и IFN-y ниже, а уровень спонтанной секреции IL-12, а также индуцированное белковым микобактериальным антигеном образование IL-12, IL-10 (в присутствии изониазида) и TGF-(3 (в присутствии изониазида и рифампицина) выше, чем при лекарственно-чувствительной форме заболевания. Установлено, что противотуберкулёзные препараты основного ряда у здоровых доноров и больных туберкулёзом лёгких in vitro индуцируют апоптоз лимфоцитов крови и вызывают дисбаланс в активности внутриклеточных ферментов энергетического обмена. В частности обнаружено, что антимикобактериальные препараты первого ряда подавляют активность сукцинатдегидрогеназы на фоне компенсаторной активации а-глицерофосфатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в лимфоцитарных клетках. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что у больных туберкулёзом лёгких рифампицин оказывает более выраженное иммунодепрессивное действие по сравнению с изониазидом и этамбутолом, что проявляется более высокой степенью угнетения им продукции провоспалительных моно- и лимфокинов (IL-12, IFN-y) и активации апоптотической гибели лимфоцитарных клеток крови in vitro.

Практическое и теоретическое значение работы. Получены новые данные фундаментального характера о механизмах прямого супрессорного действия противотуберкулёзных препаратов основного ряда на мононуклеарные лейкоциты (лимфоциты и моноциты) крови у больных лекарственно-чувствительным и лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких. Результаты исследования теоретически обосновывают необходимость включения в стандартную программу лечения больных туберкулёзом лёгких иммуномодулирующих препаратов для профилактики и коррекции иммунодефицитных состояний, обусловленных влиянием не только возбудителя, но и противотуберкулёзной химиотерапии. Основные положения и выводы диссертации используются в учебном процессе в Сибирском государственном медицинском университете на кафедре патофизиологии в тематических разделах «Патофизиология клетки», «Патофизиология иммунитета» и кафедре фармакологии в лекционных и практических разделах по теме «Побочное действие антимикробных средств».

Положения, выносимые на защиту:

1. Противотуберкулёзные препараты основного ряда (изониазид, рифампицин, этамбутол) in vitro оказывают сходное влияние на ферментативную, пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов периферической крови у здоровых доноров и больных инфильтративным туберкулёзом лёгких. При этом их иммуносупрессорный эффект проявляется в большей степени на фоне туберкулёзной инфекции.

2. Иммунотропное действие препаратов базовой противотуберкулёзной терапии у больных туберкулёзом лёгких реализуется за счет индукции апоптоза лимфоцитов, подавления лимфопролиферации и секреции мононуклеарными лейкоцитами крови in vitro провоспалительных (IL-2, IL-12, IFN-y) и противовоспалительных (IL-10, TGF-P) цитокинов.

3. Цитохимический дисбаланс в лимфоцитах периферической крови при действии основных противотуберкулёзных препаратов у больных туберкулёзом лёгких характеризуется дефицитом активности фермента цикла трикарбоновых кислот (сукцинатдегидрогеназы) в сочетании с компенсаторной активацией ферментов глицерофосфатного шунта (митохондриальной а-глицерофосфатдегидрогеназы) и гликолиза (лактатдегидр огеназы).

4. У больных инфильтративным лекарственно-чувствительным туберкулёзом лёгких секреторная дисфункция мононуклеарных лейкоцитов, индуцированная противотуберкулёзными препаратами, более выражена, чем у больных с лекарственно-резистентным вариантом инфекции. При этом из противотуберкулёзных препаратов первого ряда наибольший отрицательный иммунотропный эффект оказывает рифампицин.

Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на межвузовской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2007), VIII, IX, X конгрессах молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2007, 2008, 2009), Российско-германской конференции Форума Коха-Мечникова «Туберкулёз, СПИД, вирусные гепатиты, проблемы безопасности крови и менеджмент в здравоохранении» (Томск, 2007), XV Российско-японском Симпозиуме медицинского обмена «Москва-2007» «Медицинская наука и здравоохранение России и Японии в начале XXI века. Пути развития и перспективы» (Благовещенск, 2007), XI Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007), XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов» (Новосибирск, 2009), Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии» (Томск, 2009), VIII международной Российско-германской конференции «Нозокомиальные инфекции. Управление здравоохранением» (Новосибирск, 2009), а также на научно-образовательных семинарах «Патофизиология системы крови и иммунитета» при Центре компетенции по проблеме инфекционных болезней им. И.И. Мечникова и Р. Коха ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (Томск, 2009).

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» (ГК №02.412.11.2040; ГК №02.512.11.2112; ГК №02.512.11.0013) и Совета по грантам при Президенте РФ для поддержки ведущих научных школ РФ (НШ-4153.2006.7; НШ-2334.2008.7).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 работ, 7 из которых (5 статей и 2 тезисов) в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объём и структура работы. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырёх глав, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 16 таблицами. Библиографический указатель включает 275 источников, из которых 141 отечественных и 134 зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Патологическая физиология», Васильева, Ольга Александровна

115 ВЫВОДЫ

1. Влияние противотуберкулёзных химиопрепаратов основного ряда (изониазида, рифампицина, этамбутола) на ферментативную, пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов крови у здоровых доноров и больных инфильтративным туберкулёзом легких является сходным, но в большей степени выраженным на фоне туберкулёзной инфекции.

2. Механизм иммуносупрессорного действия основных препаратов противотуберкулёзной химиотерапии in vitro связан с подавлением у больных туберкулёзом легких секреции мононуклеарными лейкоцитами IL-2 при действии изониазида (в случае лекарственной резистентности возбудителя), IFN-y под влиянием этамбутола и (как и у здоровых доноров) IL-12, IFN-y под действием рифампицина в сочетании со способностью изониазида индуцировать у здоровых доноров синтез IL-10.

3. Наряду с иммунодепрессивным действием in vitro рифампицин активирует продукцию мононуклеарными лейкоцитами крови IL-2 при одновременном угнетении секреции противовоспалительных цитокинов — IL-10 и TGF-P (у больных туберкулёзом легких вне связи с лекарственной чувствительностью возбудителя), а изониазид стимулирует секрецию IL-12 (у больных с лекарственно-устойчивым туберкулёзом легких).

4. При лекарственно-устойчивом туберкулёзе легких интенсивность базальной продукции мононуклеарными лейкоцитами крови IL-2 и IFN-y ниже, а уровень спонтанной секреции IL-12, а также антигениндуцированного образования IL-12, IL-10 (в присутствии изониазида) и TGF-P (в присутствии изониазида и рифампицина) выше, чем при лекарственно-чувствительном варианте заболевания.

5. Цитопатическое действие базовых препаратов противотуберкулёзной химиотерапии реализуется путём индукции апоптоза и подавления (под влиянием этамбутола) пролиферации лимфоцитарных клеток у здоровых доноров и больных туберкулёзом легких вне зависимости от варианта течения инфекции (лекарственно-чувствительный, лекарственно-устойчивый).

6. Ферментативный дисбаланс в лимфоцитах крови при действии противотуберкулёзных препаратов у больных туберкулёзом легких характеризуется подавлением активности сукцинатдегидрогеназы и активацией а-глицерофосфатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в условиях перераспределения популяции лимфоцитов периферической крови в направлении увеличения доли клеток с низкой или высокой ферментативной активностью.

7. Рифампицин обладает наиболее выраженным иммунодепрессивным действием, что у больных туберкулёзом легких проявляется более высокой степенью угнетения продукции IL-12, IFN-y мононуклеарными лейкоцитами и активации апоптотической гибели лимфоцитов крови in vitro, чем под влиянием изониазида и этамбутола.

117

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ данных литературы показал, что противотуберкулёзные химиопрепараты обладают достаточно широким спектром побочных и токсических реакций на организменном уровне. Однако данные о непосредственном влиянии противотуберкулёзных препаратов на иммунокомпетентные клетки немногочисленны, разрозненны и противоречивы.

Согласно исследованиям ряда авторов, первичные изменения, вызванные эндо- и экзогенными повреждающими (болезнетворными) факторами, чаще обнаруживаются в рециркулирующих лимфоцитах крови, функциональная активность которых в значительной степени зависит от интенсивности энергетических процессов [Труфакин В.А., Робинсон М.В., 1996; Саранчина Э.Б. и соавт., 2003; Чернышов В.Н., 2005]. Характер метаболизма иммунокомпетентных клеток, состояние их рецепторного аппарата и продукция цитокинов формируют основу иммунной реакции, изменяясь в ходе последней и обеспечивая её динамику в пространстве и во времени [Труфакин В.А. и соавт., 2005].

Таким образом, актуальность изучения молекулярных механизмов иммунотропного действия базовых препаратов химиотерапии туберкулёза, их влияния на секрецию биологически активных веществ мононуклеарными лейкоцитами, ферментативную, пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов не вызывает сомнений, поскольку исход туберкулёзной инфекции во многом определяется состоянием реактивности иммунокомпетентных клеток и тем, насколько четко организованно межклеточное взаимодействие в процессе развития иммунного ответа, основными медиаторами которого являются иммунорегуляторные биомолекулы — цитокины.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

В ходе работы было обследовано 60 впервые выявленных больных с инфильтративным туберкулёзом лёгких (ТЛ) в возрасте от 18 до 55 лет (47 мужчин и 13 женщин). Все обследованные пациенты находились на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулёзной больнице (гл. врач - к.м.н. Г.В. Янова) во фтизиотерапевтическом отделении №1 (зав. отд. - О.И. Новосельцева).

Клинический осмотр пациентов, сбор анамнеза, физикальные методы обследования больных и постановку диагноза осуществляли врачи-фтизиатры Томской областной туберкулёзной клинической больницы: чл.-корр. РАМН, профессор Стрелис А.К., к.м.н. Янова Г.В., к.м.н. Филинюк О.В., к.м.н. Лещев A.C., к.м.н. Петрова Л.Е., Мельникова Т.И., Янов A.A., Щегерцов Д. А.

Диагноз заболевания устанавливали на основании клинической картины заболевания, данных рентгенологического исследования лёгких, результатов микроскопического и бактериологического исследования мокроты.

Клиническая картина туберкулёза лёгких характеризовалась наличием синдрома воспалительной интоксикации (повышение температуры тела, ночные поты, озноб, повышенная утомляемость, слабость, снижение или отсутствие аппетита, потеря массы тела, тахикардия) и бронхолегочных симптомов (кашель более двух-трех недель, выделение мокроты, кровохарканье, одышка, боль в грудной клетке, связанная с дыханием). Бактериовыделение регистрировалось у 100% обследованных пациентов.

В зависимости от чувствительности возбудителя к основным противотуберкулёзным препаратам (ПТП) все больные были распределены на две группы. Первую группу составили 35 пациентов, выделяющих микобактерии туберкулёза (МБТ), чувствительные к основным ПТП, во вторую группу было включено 25 пациентов, выделяющих МБТ, устойчивые как минимум к трем препаратам - изониазиду, рифампицину, стрептомицину. Лекарственную чувствительность МБТ определяли традиционным методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Иенсена. Исследования проводились в бактериологических лабораториях Томской областной туберкулёзной клинической больницы и Томского областного противотуберкулёзного диспансера.

В исследование не включались пациенты моложе 18 и старше 55 лет, инфицированные вирусами гепатита и с ВИЧ-инфекцией, страдающие аллергическими, иммунологическими и иными инфекционными заболеваниями в стадии обострения.

Контрольную группу (группу сравнения) составили 25 практически здоровых доноров с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту.

2.2. Материал исследования

Материалом для иммунологического исследования служила периферическая кровь, взятая утром натощак из локтевой вены в количестве 10 мл.

Исследование иммунологических показателей у пациентов контрольной группы проводили однократно, у больных туберкулёзом лёгких - до начала проведения специфической противотуберкулёзной химиотерапии.

2.3. Методы исследования

2.3.1. Культивирование мононуклеарных лейкоцитов периферической крови in vitro

Культивирование мононуклеарных лейкоцитов проводили по методу Е.Д. Гольдберга и соавт. [1992].

Выделение мононуклеарных лейкоцитов периферической крови. Венозную гепаринизированную кровь (25 ЕД/мл) выдерживали при 37°С в течение 40-60 мин для отделения плазмы от эритроцитов. Полученную плазму наслаивали на среду для выделения лимфоцитов (Lymphocyte Séparation Médium) (р=1077 кг/м ) в соотношении 1:1 и центрифугировали при 1500 об/мин в течение 20 мин. Образовавшееся интерфазное кольцо из клеток осторожно, через верхний слой плазмы собирали пипеткой, трижды отмывали средой RPMI-1640 (ЗАО «Вектор Бест», Новосибирск) дополненной 100 мкг/мл гентамицина и 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (ООО «Биолот», Санкт-Петербург), последовательно ресуспендируя и центрифугируя каждый раз в течение 10 мин при 1500 об/мин.

Приготовление супернатантов. Для получения супернатантов выделенные лимфоциты ресуспендировали в полной питательной среде, состоящей из 90% RPMI-1640 (ЗАО «Вектор Бест», Новосибирск), 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (ООО «Биолот», Санкт-Петербург), 0,3 мг/мл L-глутамина, 100 мкг/мл гентамицина, 2 мМ/мл HEPES («Flow», Великобритания). Определение концентрации клеток в суспензии и их жизнеспособности проводили в счетной камере Горяева. Для этого 0,1 мл клеточной суспензии смешивали с равным объемом 0,5% раствора трипанового синего («Serva», США) и переносили в камеру. Жизнеспособность клеток оценивали по содержанию «мертвых» клеток, окрашенных в синий цвет (%). Количество клеток в суспензии стандартизировали до 2,5х106/мл.

Для индукции секреторной функции мононуклерных лейкоцитов и пролиферативной активности лимфоцитов в пробы вносили 20 мкг/мл белкового микобактериального антигена, выделенного из МБТ семейства «Beijing» (Институт им. Макса Планка, Берлин, Германия).

Изучение влияния ПТП (изониазида, рифампицина, этамбутола) на продукцию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами проводили на моделях спонтанной и индуцированной секреции. Для этого получали три вида супернатантов: от клеток, культивируемых в питательной среде (базальная); от клеток, культивируемых в питательной среде при добавлении белкового антигена МБТ (антигениндуцированная); от клеток, культивируемых в питательной среде в присутствии одновременно белкового антигена МБТ и препарата (антигениндуцированная в присутствии ПТП). Конечная концентрация исследуемых ПТП в культуральной среде составила 10 мкг/мл - для изониазида и рифампицина и 25 мкг/мл - для этамбутола. В контрольные пробы вносили полную среду RPMI-1640. Для количественного определения цитокинов клетки культивировали при 37°С и 5% С02 в течение 24 ч, а для оценки апоптоза - в течение 20 ч. После инкубации пробирки встряхивали, центрифугировали 10 мин при 1500 об/мин, супернатант собирали и использовали для определения концентрации цитокинов, а осадок клеток использовали в аннексиновом и лимфоцитотоксическом тестах.

Дозы химиопрепаратов рассчитывали, исходя из приемов перерасчета, принятых в токсикологии, принимая суточную дозу препарата на 1 кг массы тела за концентрацию в 1 л инкубационной среды. Так при стандартных режимах дозирования изониазид назначается в средней дозе 5-10 мг/кг, рифампицин — 8-10 мг/кг, этамбутол -15-25 мг/кг [Фрейдович А.И., 1999; Мишин В.Ю., 2007]. Мы использовали для тестирования концентрации по верхнему их пределу, поскольку распределение препаратов в жидкостных компартментах организма неодинаково. Субстанции химиопрепаратов («Sigma», США) были предоставлены бактериологической лабораторией Томского областного противотуберкулёзного диспансера.

2.3.2. Иммуноферментный анализ цитокинсекретирующей активности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови in vitro

Определение уровня продукции интерлейкина (IL) 2, IL-12, интерферона (IFN) у, IL-10 и трансформирующего фактора роста (TGF) ß в культуральных супернатантах осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа типа «сэндвич» согласно инструкциям, предлагаемым отечественными (ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург; ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск; ООО «Цитокин», Санкт-Петербург) и зарубежными («BioSource Europe S.A.», Бельгия; «Bender Medsystems», Австрия) производителями тест-систем.

Принцип метода заключается в конъюгации одного эпитопа молекулы цитокина с мышиными моноклональными антителами, сорбированными на твердой фазе микропланшета. Другой тип антител - кроличьи поликлональные биотилированные антитела, специфичные против человеческих цитокинов, соединяются с независимым эпитопом цитокина. После удаления избытка вторых антител добавляется стрептавидинпероксидаза, которая связывается с биотилированными антителами с формированием сэндвич-комплекса из 4-х реагентов. После второй инкубации и промывки удаляется несвязавшийся фермент, после чего добавляется субстратный раствор, который взаимодействует с ферментом с образованием цветного комплекса. Оптическая плотность раствора пропорциональна концентрации определяемого вещества и регистрируется колориметрически. Калибровочная кривая строится с использованием стандартных растворов цитокинов с известной концентрацией.

Оптическую плотность плашки регистрировали на микропланшетном фотометре Multiskan EX (Финляндия) при длине волны 450 нм. Концентрацию цитокинов вычисляли по калибровочной кривой. Результаты выражали в пг/мл.

2.3.3. МТТ-тест оценки пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови in vitro

Пролиферативную активность лимфоцитов крови оценивали по методу, предложенному J. Carmichael [1987].

Принцип метода. В культуральной среде лимфоциты под влиянием митогенов или антигенов трансформируются в бласты. Результаты пролиферативного ответа можно оценить с помощью МТТ-теста, основанного на способности митохондриальных ферментов живых клеток восстанавливать тетразолиевую соль - 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолиума бромида (МТТ, тиазолил синий) до МТТ-формазана. Число жизнеспособных клеток прямо пропорционально количеству восстановленного формазана, которое можно определить спектрофотометрически после растворения в органическом растворителе.

Ход работы. Лимфоциты, выделенные в стерильных условиях (см. 2.3.1), при концентрации клеточной взвеси 2,5x106/мл культивировали в 96-луночных круглодонных планшетах для иммунологических исследований в среде RPMI-1640 (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск), дополненной 0,3 мг/мл L-глутамина, 2 мМ/мл HEPES («Flow», Великобритания), 100 мкг/мл гентамицина и 10% инактивированной ЭТС («Sigma», США) при 37°С и 5%

С02 в течение 3 суток. Для стимуляции пролиферации лимфоцитов в пробы вносили белковый микобактериальный антиген в дозе 20 мкг/мл. В контрольные пробы добавляли политую среду КРМ1-1640. После инкубации в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора МТТ (2 мг/мл) и инкубировали при 37°С в С02-инкубаторе в течение 4 ч. Затем супернатант удаляли, к осадку добавляли по 100 мкл диметилсульфоксида, ресуспендировали, переносили пробы в плоскодонный планшет для иммунологических исследований и измеряли оптическую плотность на микропланшетном фотометре МиШвкап ЕХ (Финляндия) при длине волны 540 нм. В качестве контроля («нулевой» пробы) использовали физиологический раствор №С1 (0,9%). Результаты выражали в единицах оптической плотности.

По полученным результатам рассчитывали пролиферативный резерв лимфоцитов — отношение показателей пролиферации клеток в присутствии белкового антигена МВТ к значениям базальной лимфопролиферации.

2.3.4. Идентификация СВ95+лимфоцитов периферической крови

Определение СВ95+ клеток производили с помощью моноклональных антител фирмы «Сорбент» (Москва, Россия) в лимфоцитотоксическом тесте [Петров Р.В. и соавт., 1992].

Принцип метода основан на способности специфических моноклональных антител (1§М и ^в) в присутствии комплемента оказывать цитотоксическое воздействие на СБ95+ лимфоциты.

Ход работы. Полученный образец клеток (см. 2.3.1) дважды отмывали раствором Хенкса, ресуспендируя и центрифугируя каждый раз при 1500 об/мин в течение 5 мин. В пробирку типа «эппендорф» вносили 40 мкл клеточной суспензии, предварительно стандартизировав количество клеток до 2,5x106/мл, добавляли 5 мкл моноклональных антител, ресуспендировали и инкубировали в течение 40 мин при комнатной температуре. После инкубации эппендорфы центрифугировали в течение 5 мин при 1500 об/мин. Надосадок в количестве 40 мкл аккуратно убирали пипеткой. К осадку добавляли 25 мкл сыворотки кролика, содержащей комплемент, ресуспендировали и инкубировали в течение 90 мин при комнатной температуре. Далее вносили 0,2% раствор эозина и подсчитывали 100 лимфоцитов, дифференцируя среди них окрашенные. Результаты выражали в процентах (к 100 подсчитанным клеткам).

2.3.5. Детекция апоптотических лимфоцитов периферической крови Определение количества апоптотических лимфоцитов осуществляли с помощью набора ANNEXIN V FITC [«Beckman Coulter», Франция].

Принцип метода основан на способности аннексина V в присутствии

Л I ионов Ca специфически связываться с фосфатидилсерином (PS) мембран клеток, что позволяет детектировать клетки, находящиеся в раннем апоптозе.

Ход работы. Образец клеток, полученный в п. 2.3.1, отмывали раствором Хенкса, затем промывали охлажденным на льду фосфатно-солевым буфером, центрифугировали 5 мин при 4°С при 500 g. Удаляли супернатант и ресуспендировали остаток клеток в 100 мкл Ca -содержащего охлажденного на льду разбавленного буфера из набора. Пробирки хранили на льду. Добавляли 1 мкл ANNEXIN V FITC раствора, осторожно перемешивали. Инкубировали на льду в темноте в течение 10 мин. Далее добавляли 200 мкл охлажденного на льду разбавленного буфера, осторожно перемешивали. Анализировали образец клеток с „ - . , , г г Рис. 2. Микрофотография апоптотических использованием флуоресцентного ЛИМФОЦИТОВ периферической крови. т г Флуоресцентная микроскопия. Ув. х 1000 микроскопа Axiostar plus («Carl Zeiss»,

Германия). Подсчитывали процент лимфоцитов, находившихся в апоптозе (зеленая флуоресценция клеток) на 200 клеток (рис. 2).

2,3.6. Определение активности дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови

2.3.6.1. Определение активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в лимфоцитах (количество гранул на клетку) определяли цитохимическим методом Нахласа в модификации Р.П. Нарциссова [1969], основанным на подсчете образованных в клетке видимых гранул диформазана при использовании п-нитротетразолия фиолетового в 30-50 лимфоцитах (рис. 3).

Мазки периферической крови после инкубации её в течение 1 ч или 2 ч с изониазидом (10 мкг/мл), рифампицином (10 мкг/мл) и этамбутолом (25мкг/мл) фиксировали в насыщенном трилоном Б 60% ацетоне в течение 30 с, промывали в дистиллированной воде и инкубировали 1 ч при 37°С в среде следующего состава: 25 мл среды без субстрата (6,5 мг трилона Б, 6,5 мг паранитротетразолия фиолетового, 25 мл 1/15 М фосфатного буфера (рН 7,3)), 270 мг янтарнокислого натрия. После инкубации мазки промывали проточной водой, высушивали и докрашивали раствором азура II (30 мин).

Средний цитохимический коэффициент (СЦК) рассчитывали по формуле: количество гранул

СЦК = количество исследуемых клеток

Более детальный анализ популяции лимфоцитов производили путем изучения гистограммы распределения лимфоцитов с различной активностью дегидрогеназ у каждого обследованного. Было выделено 3 рис, з. Микрофотография лимфоцитов периферической крови. Цитохимическая популяции лимфоцитов в зависимости от реакция на сукцинатдегидрогеназу. Световая микроскопия. Ув. *900 активности фермента: клетки с высокой активностью (20 и более гранул диформазана на клетку), средней (10-19) и низкой (до 9 гранул).

2.3.6.2. Определение активности а-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ)

Выявление активности митохондриальной а-ГФДГ и оценку результатов реакции проводили аналогичным определению активности СДГ методом (см. 2.3.6.). Инкубационную среду готовили, добавляя к 25 мл среды без субстрата 315 мг а-глицерофосфата натрия (pH 7,3).

2.3.6.3. Определение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) Выявление активности ЛДГ и оценку результатов реакции проводили аналогичным определению активности СДГ методом (см. 2.3.6.). Инкубационную среду готовили, добавляя к 25 мл среды без субстрата 3 мл 0,2 М лактата лития, 1,5 мг феназинметасульфата и 6 мг НАД1".

2.4. Статистическая обработка результатов Статистический анализ полученных данных осуществляли с помощью стандартного пакета программ «Statistica for Windows» (Version 6.0) фирмы «StatSoft Inc.» и пакета программ «Microsoft Excel» (2003) корпорации «Microsoft». Результаты представляли в виде выборочных средних (М) и ошибки среднего (ш), а также в виде медианы, верхнего (75%-го) и нижнего (25%-го) квартилей (Me (Q1-Q2)). Проверку нормальности распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Колмогорова-Смирнова. При соответствии распределения признака в исследуемых выборках нормальному закону проверку гипотезы о равенстве генеральных средних проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Для оценки достоверности различий выборок, распределение которых не соответствовало нормальному закону, использовали непараметрический Mann Whitney U test для независимых выборок и Wilcoxon matched pairs test для зависимых выборок. Зависимость параметров в группах оценивали с помощью ранговой корреляции Спирмена (Spearman rank correlation). Различие двух сравниваемых величин считали достоверным при уровне значимости р<0,05.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Васильева, Ольга Александровна, 2009 год

1. Активация транскрипционных факторов STAT5 и STAT3 при запуске пролиферации Т-лимфоцитов человека различными митогенными агентами / И.А. Карицкая, Н.Д. Аксенов, В.В. Зенин и др. // Цитология. 2006. - Т. 48, № 1. - С. 42-49.

2. Активированные кислородные метаболиты при туберкулёзе / В.А. Краснов, Н.К. Зенков, А.Р. Колпаков и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. — 2005. № 9. — С. 9—17.

3. Активность ПОЛ и апоптоза при туберкулёзе лёгких / В. В. Новицкий, А. К. Стрелис, С. Б. Ткаченко и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - Т. 140, № 11. -С. 497—499.

4. Аленова, А.Х. Взаимовлияние типов лекарственной резистентности и иммунитета у больных туберкулёзом лёгких / А.Х. Аленова, А.Т. Исмаилова, Д.С. Дильмагамбетов // Проблемы туберкулёза. 2002. -№7.-С. 8-10.

5. Антибактериальная терапия. Практическое руководство / Под ред. Л.С. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова. — М.: «Фармединфо», 2000. 192 с.

6. Апоптоз лимфоцитов как возможный механизм нарушения антигенспецифического ответа при туберкулёзе лёгких / H.A. Хонина, Л.В. Сахно, М.Н. Норкин и др. // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3, № 1. - С.51-59.

7. Апоптоз, микро- и макроэлементный состав лимфоцитов крови у больных туберкулёзом лёгких / Т.А. Шилько, О.И. Уразова, В.В. Новицкий и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2008. -№8.-С. 24-26.

8. Белушкина, H.H. Молекулярные основы патологии апоптоза / Н. Н. Белушкина, С. Е. Северин // Архив патологии. 2001. - Т. 63, № 1. -С. 51-60.

9. Берестова, A.B. Туберкулёз: медико-социальные аспекты / A.B. Берестова // Архив патологии. 1999. - Т. 61, № 5. - С. 81-84.

10. Бойчук, C.B. Изучение механизмов апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных инфильтративным туберкулёзом лёгких / C.B. Бойчук, М.Ф. Яушев, И.Г. Мустафин // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2003. — № 6. - С. 36-39.

11. Булыгин, Г.В. Метаболические основы регуляции иммунного ответа / Г.В. Булыгин, Н.И. Камзалакова, A.B. Андрейчиков. -Новосибирск, СО РАМН, 1999. 346 с.

12. Ветра, Я.Я. Цитокины / Я.Я. Ветра, JI.B. Иванова, И.Э. Крейле // Гематология и трансфузиология. — 2000. — № 4. — С. 45-48.

13. Визель, A.A. Туберкулёз: Этиология, патогенез, клинические формы, диагностика, лечение / A.A. Визель, М.Э. Гурылева / Под ред. М.И. Перельмана. М: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2000. - 245 с.

14. Владимирская, Е.Б. Роль ростовых факторов в регуляции кроветворения / Е.Б. Владимирская, А.Г. Румянцев // Гематология и трансфузиология. 2000. - № 6. - С. 4-8.

15. Владимирская, Е.Б. Апоптоз и его роль в регуляции клеточного равновесия (лекция) / Е.Б. Владимирская // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - № 11. — С. 25-32.

16. Воронкова, О.В. Иммунопатология туберкулёза лёгких / О.В. Воронкова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий, А.К. Стрелис. Томск: Изд-во Том. ун-та, 2007. - 194 с.

17. Галицкий, В.А. Внутриклеточные и межклеточные пути передачи сигналов и возрастные изменения пролиферативной активности и интенсивности апоптоза клеток иммунной системы / В.А. Галицкий // Цитология. 2005. - Т. 47, №4. - С. 283-295.

18. Гольдберг, Е.Д. Методы культуры ткани в гематологии / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.П. Шахов. — Томск: Изд-во Том. ун-та, 1992.-264 с.

19. Гольев, С.С. Коррекция иммунных нарушений, вызываемых применением препаратов базисной химиотерапии туберкулёза лёгких: Автореф. дис. канд. мед. наук / С.С. Гольев. — Курск, 2000. — 22 с.

20. Долговременная регуляция Na^K4—насоса в лимфоцитах человека: роль JAK/STAT- и МАР-киназных сигнальных путей / И.А. Карицкая, Н.Д. Аксенов, И.О. Васильева и др. // Цитология. — 2008. -Т. 50, №4.-С. 329-337.

21. Еремеев, В.В. Взаимодействие макрофаг-микобактерия в процессе реакции микроорганизма на туберкулёзную инфекцию / В.В. Еремеев, К.Б. Майоров // Проблемы туберкулёза. 2002. - № 3. - С. 54-58.

22. Ерохин, В.В. Морфологические признаки недостаточно эффективной химиотерапии экспериментального деструктивного туберкулёза лёгких / В.В. Ерохин // Проблемы туберкулёза. 1998. — №3.-С. 61-66.

23. Ерохина, М.В. Белки-транспортеры соматических клеток организма и их влияние на эффективность противотуберкулёзной химиотерапии (обзор литературы) / М.В. Ерохина // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. —2004. № 8. - С. 11-15.

24. Ершов, Ф.И. Цитокины новое поколение биотерапевтических препаратов / Ф.И. Ершов // Вестник Российской АМН. - 2006. - № 9-10.-С. 45-50.

25. Залесский, В.Н. Современные терапевтические подходы для направленной регуляции апоптоза (обзор литературы) / В.Н. Залесский, О.Б. Дынник, A.A. Фильченков // Журнал АМН Укра'ши. 2006. - Т. 12, № 4. - С. 634-652.

26. Залесский, В.Н. Механизмы цитотоксических эффектов активных молекул кислорода и развитие апоптоза / В.Н. Залесский, Н.В. Великая // Сучасш проблеми токсикологи Электронный ресурс. —

27. Электрон, журн. — 2003. — № 1. — Режим доступа к журн.: http ://www.medved.kiev.ua/arhivmg/l2003 .htm

28. Зубова, С.Г. Молекулярные механизмы действия фактора некроза опухолей а и трансформирующего фактора роста ß в процессе ответа макрофага на активацию / С.Г. Зубова, В.Б. Окулов // Иммунология. 2001. - № 5. - С. 18-22.

29. Изменения в продукции интерлейкина—1 ß, фактора некроза опухоли а и интерлейкина-2 в зависимости от состояния иммунитета у больных туберкулёзом лёгких / В.Е. Кноринг, A.C. Симбирцев, И.Я. Сахарова и др. // Проблемы туберкулёза. 1999. — № 4. - С. 31-35.

30. Изучение модулирующего действия противотуберкулёзных препаратов in vitro в реакции розеткообразования у больных туберкулёзом лёгких / А.Б. Инсанов, Ф.М. Абдуллаев, A.A. Умняшкин, A.A. Магеррамов // Проблемы туберкулёза. 1998. - № 4.-С. 44-46.

31. Имангулова, М.М. Молекулярно-генетические аспекты туберкулёза лёгких / М.М. Имангулова, A.C. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. 2005. - Т. 4, № 11. - С. 505-511.

32. Иммунный статус больных инфильтративным лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких на фоне противотуберкулёзной химиотерапии / В.В. Новицкий, А.К. Стрелис, В.А. Серебрякова и др. // Иммунология. 2007. - Т.1, № 1. - С. 27-30.

33. Интерлейкин-2 в коррекции анергии Т-клеток у больных туберкулёзом лёгких / JT.B. Сахно, М.А. Тихонова, A.A. Останин и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. — 2006. № 1. — С. 48-52.

34. Каминская, Г.О. Оксид азота, его биологическая роль и участие в патологии органов дыхания / Г.О. Каминская // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. — 2004. — № 6 . — С. 3—11.

35. Каминская, Г.О. Применение биохимических методов исследования в противотуберкулёзных учреждениях / Г.О. Каминская, Б.А. Серебряная М.: Наука, 1993. - 29 с.

36. Карачунский, М.А. Туберкулёз в наши дни. / М.А. Карачунский // Русский медицинский журнал. 2001. - Т. 9, № 21. - С. 951-953.

37. Карицкая, И.А. Регулируемая интерлейкином—2 экспрессия Na^K."1"— АТФ—азы в активированных лимфоцитах человека / И.А. Карицкая, Н.Д. Аксенов, Т.А. Виноградова // Цитология. 2005. - Т.47, № 1. — С. 28-37.

38. Кашкин, К.П. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия / К.П. Кашкин, З.О. Караев Л.: Медицина, 1984. - 212 с.

39. Кашкин, К.П. Цитокины иммунной системы: основные свойства иммунобиологическая активность / К.П. Кашкин // Клиническая' лабораторная диагностика. 1998. — № 11. — С. 21-32.

40. Кетлинский, С.А. Роль гетеродимерных цитокинов семейства IL-12 в развитии и регуляции врожденного иммунитета и Thl иммунного ответа // Медицинский академический журнал. 2005. — Т. 5, № 3. -С. 13-27.

41. Краснов, В.А. Бактерицидная терапия больных туберкулёзом./ В.А. Краснов, И.Г. Урсов // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. — 2004. № 3. - С.21 - 27.

42. Кровь: клинический анализ. Диагностика анемий и лейкозов. Интерпретация результатов: практическое руководство / Г. И. Козинец, В.М. Погорелов, O.A. Дягилева, И.Н. Наумова М.: Медицина XXI век, 2006. - 256 с.

43. Кузнецов, В.П. Интерфероны. / В.П. Кузнецов // Антибиотики и химиотерапия 1998. - Т. 33, № 5. - С. 28^4.

44. Ленинджер, А.Л. Основы биохимии: в 3 т. Пер. с англ. / А.Л. Ленинджер. Т. 2. - М.: Мир, 1985. - 365 с.

45. Логинов, А.Г. Состояние энергетического метаболизма лимфоцитов регионарного лимфатического узла при имплантации никелида титана / А.Г. Логинов // БЮЛЛЕТЕНЬ СО РАМН. 2005. - Т. 116, №2.-С. 139-142.

46. Лушников, Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е.Ф. Лушников, А.Ю. Абросимов. — М.: Медицина, 2001. — 192 с.

47. Майорова, A.A. Микобактерии — общая характеристика и таксономия / A.A. Майорова, В.Н. Степаншина, И.Г. Шемякин // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2008. - № 11. - С. 3-7.

48. Манских, В.Н. Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза // Бюллетень сибирской медицины. 2004. -№ 1. - С. 63-69.

49. Манских, В.Н. Пути гибели клетки и их биологическое значение // Цитология. 2007. - Т. 49, № 11. - С. 909-915.

50. Маянский, А.Н. Туберкулёз (микробиологические и иммунопатогенетические аспекты) / А.Н. Маянский // Иммунология. -2001. -№ 2. -С. 53-63.

51. Медников, Б.Л Лекарственная устойчивость Mycobacterium Tuberculosis / Б.Л. Медников // Пульмонология. — 2005. — № 2. — С. 5-8.

52. Медуницын, Н.В. Цитокины и аллергия / Н.В. Медуницын // Иммунология. 1999. - № 5. - С. 5-9.

53. Меркурьева, Р.В. Медико-биологические исследования в гигиене / Р. В. Меркурьева, К.В. Судаков, Т.И. Бонашевская. М.: Медицина, 1986.-269 с.

54. Мишин, В.Ю. Побочное действие противотуберкулёзных препаратов при стандартных и индивидуализированных режимах химиотерапии / В. Ю. Мишин, В.И. Чуканов, Ю.Г Григорьев. М.: «Компьютербург», 2004. — 208 с.

55. Мишин, В.Ю. Химиотерапия туберкулёза лёгких / В. Ю. Мишин // Пульмонология. 2008. - № 3. - С. 5-14.

56. Мишин, В.Ю. К проблеме оптимизации и доказательности современных режимов химиотерапии туберкулёза лёгких / В.Ю. Мишин, В.И. Чуканов, И.А. Васильева // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2004. - № 8. - С. 7-11.

57. Мишин, В.Ю. Контролируемая химиотерапия туберкулёза органов дыхания в современных условиях. Проблема лекарственной устойчивости / В.Ю. Мишин, И.Э. Степанян // Русский медицинский журнал. 2000. - Т. 8, № 12. - С.496-500.

58. Мишин, В.Ю. Лекарственно-устойчивый туберкулёз лёгких: клиника, диагностика и лечение / В.Ю. Мишин // Consilium-medicum. 2002. -Т. 4, № 12. - С. 645-650.

59. Мишин, В.Ю. Современные режимы химиотерапии туберкулёза лёгких, вызванного лекарственно-чувствительными и лекарственно-резистентными микобактериями / В.Ю. Мишин // Русский медицинский журнал. 2003. - Т. 11, № 21. - С. 1163-1167.

60. Мишин, В.Ю. Ферменты лимфоцитов, активность процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у больных туберкулёзом лёгких / В.Ю. Мишин, Е.Г. Круглова // Проблемы туберкулёза. 1992. - № 9/10. - С. 38-41.

61. Мишин, В.Ю. Медикаментозные осложнения комбинированной химиотерапии туберкулёза лёгких. М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2007. — 248 с.

62. Множественно—лекарственно-устойчивый туберкулёз лёгких: медико-социальные особенности и эффективность стационарного этапа лечения / О.В. Филинюк, Г.В. Янова, А.К. Стрелис и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. — 2008. — № 8. — С. 23—28.

63. Мойбенко, А.А. Ферментативные механизмы апоптоза / А:А. Мойбенко, В.Е. Досенко, B.C. Нагибин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2005. — № 3. - С. 17—26.

64. Молекулярные механизмы устойчивости Mycobacterium tuberculosis к лекарственным препаратам / Степаншин Ю.Г., Степаншина В.Н., Шемякин И.Г. // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - №4. - С. 39—43.

65. Молекулярные механизмы устойчивости к рифампицину и изониазиду клинических штаммов Mycobacterium Tuberculosis / В.Н. Степаншина, Е.А. Панферцев, Г.Н. Митрофанова и др. // Проблемы туберкулёза. 2000. - №1. - С. 32-36.

66. Мононуклеарные клетки периферической крови у больных лекарственно—чувствительным и лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких / В.В. Новицкий, О.И. Уразова, А,К. Стрелис и др. // Вестник РАМН. 2006. - № 2. - С. 30-35.

67. Мордык, А.В. Влияние неблагоприятных побочных реакций химиотерапии на показатели качества жизни больных инфильтративным туберкулёзом лёгких / А.В. Мордык, В.В.

68. Антропова // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2008. - № 9.-С. 44-46.

69. Морфофункциональные изменения внутренних органов морских свинок при длительном введении противотуберкулёзных препаратов / С.Б. Вольф, Р.Е. Лис, Л.Е. Виноградова. О.Н. Шинкевич // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. — 2007. № 7. — С. 42-45.

70. Москалева, Е.Ю. Возможные механизмы адаптации клетки к повреждениям, индуцирующим программированную гибель. Связь с патологией / Е.Ю. Москалева, С.Е. Северин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2006. - № 2. - С. 2-16.

71. Нарциссов, Р.П. К методике цитохимического выявлений некоторых дегидрогеназ клеток крови человека / Р. П. Нарциссов // Цитология. 1968. - Т. 10, № 7. - с. 909-913.

72. Нарциссов, Р.П. Применение п-нитротетразолия фиолетового для количественной цитохимии дегидрогеназ лимфоцитов человека / Р.П. Нарциссов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1969.-№5.-С. 85-91.

73. Негативные воздействия полихимиотерапии у больных туберкулёзом и пути их коррекции / И.С. Гельберг, С.Б. Вольф, Н.И. Врублевская и др. // Проблемы туберкулёза. 2002. - № 4. - С. 1219.

74. Некоторые закономерности ответа у больных туберкулёзом лёгких с лекарственно-устойчивыми штаммами микобактерий / И.Я. Сахарова, Б.М. Ариэль, Б.Е. Кноринг и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2008. - № 12. — С. 22-27.

75. Новые возможности цитохимического анализа в оценке состояния здоровья ребенка и прогнозе его развития / В.М. Шищенко, C.B. Петричук, З.Н. Духова и др. // Педиатрия. 1998. - № 4. - С. 96-101.

76. О побочных нейротоксических реакциях при химиотерапии туберкулёза и их лечении / A.B. Лысов, A.B. Мордык, В.А. Затворницкий, A.B. Кондря // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2006. - № 9. - С. 45^8.

77. Особенности иммунитета у больных с различными формами туберкулёза лёгких / H.A. Хонина, С.Д. Никонов, C.B. Шпилевский и др. // Проблемы туберкулёза. — 2000. № 1. — С. 30-32.

78. Особенности иммунологических показателей у больных с различными формами туберкулёза лёгких / Е.Э. Комогорова, Е.В. Костенко, В.А. Стаханов и др. // Иммунология. — 2001. № 5. — С. 45-49.

79. Особенности поверхностного фенотипа лимфоцитов крови у больных туберкулёзом / В.В. Новицкий, А.К. Стрелис, О.И. Уразова и др. // Медицинская иммунология. — 2005. Т. 7, № 5-6. - С. 587592.

80. Особенности функциональной активности лимфоцитов крови у больных туберкулёзом лёгких / В.В. Новицкий, А.К. Стрелис, О.И. Уразова и др. // Иммунология. — 2006. № 2. - С. 76-79.

81. Оценка иммунологического статуса человека при массовых обследованиях. Методические рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин и др. // Иммунология. 1992. - № 6. - С.51.62.

82. Оценка эффективности препарата лимонар у детей с митохондриальными нарушениями на основе цитохимического анализа / С.Ц. Василев, C.B. Петричук, Р.П. Нарциссов и др. // Педиатрия. 1999. - № 4. - С. 76-78.

83. Певницкий, Л.А. Программированная гибель клеток и апоптоз: значение для развития и функционирования иммунной системы / Л. А. Певницкий // Вестник Российской АМН. — 1996. — № 6. С. 4350.

84. Перельман, М.И. Фтизиатрия. / М.И. Перельман, В.А. Корякин, И.В. Богадельникова. М.: Медицина, 2004. — 520 с.

85. Пинегин, Б.В. Физиология иммунной системы и иммунопатология / Б.В. Пинегин, А.Н. Ильинская // Физиология и патология иммунной системы. 2004. - Т. 8, № 11. - С. 13-18.

86. Пичугин, A.B. Апоптоз клеток иммунной системы при туберкулёзной инфекции / A.B. Пичугин, A.C. Апт // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2005. - № 12. — С. 3-7.

87. Пичугина, Л.В. Внутриклеточные цитокины: проблемы детекции и клиническое значение / Л.В. Пичугина, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2008. — № 1. — С. 55-63.

88. Показатели иммунитета и биологические свойства микобактерий при инфильтративном туберкулёзе лёгких / И .Я. Сахарова, Б.М. Ариэль, Л.А. Скворцова и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких.-2005.-№ 11.-С. 14-17.

89. Полиморфизм генов IL-2 и IL-4 при инфильтративном туберкулёзе лёгких / И.О. Наследникова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий и др. // Иммунология. 2009. - № 2. - С. 88-92.

90. Полунина, Т.Е. Лекарственные поражения печени / Т.Е. Полунина // Терапевт. 2005. - № 6. - С. 47-51.

91. Потапнев, М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами / М.П. Потапнев // Иммунология. 2002. — № 4. — С. 237-343.

92. Проблемы скрининга новых противотуберкулёзных антибиотиков.

93. Современные представления об особенностях биологии возбудителя туберкулёза человека Mycobacterium tuberculosis / В.М. Бибикова, Н.А. Борисова, С.Н. Орехов и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2006. - Т. 51, №1. - С. 22-27.

94. Проблемы скрининга новых противотуберкулёзных антибиотиков.

95. Особенности клеточной стенки возбудителя туберкулёза Mycobacterium tuberculosis / В.М. Бибикова, Н.А. Борисова, С.Н. Орехов и др. // Антибиотики и химиотерапия. — 2006. Т. 51, № 6. -С. 23—26.

96. Проблемы скрининга новых противотуберкулёзных антибиотиков.

97. Новые данные о механизме действия противотуберкулёзных препаратов / В.М. Бибикова, Н.А. Борисова, С.Н. Орехов и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2006. - Т. 51, № 7. - С. 34-40.

98. Робинсон, М.В. Морфоцитохимические особенности лимфоцитов в норме, при дестабилизирующих воздействиях и аутоиммунных процессах и заболеваниях: Автореф. дис. .д-ра мед. наук / М.В. Робинсон. — Новосибирск, 1994. 58 с.

99. Романова, Ю.М. Цитокины — возможные активаторы роста патогенных бактерий / Ю. М. Романова, A. JI. Гинцбург // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2000. - № 1. - С. 13-17.

100. Сакаева, Д.Д. Иммунотропные свойства рифампицина и их коррекция / Д.Д. Сакаева, Д.Н. Лазарева // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1998. - № 2. - С. 45-47.

101. Салина, Т.Ю. Иммунопатогенетические механизмы в течении туберкулёзной инфекции / Т.Ю. Салина, Л.Б. Худзик // Проблемы туберкулёза. 2001. - № 8. - С. 32-34.

102. Салина, Т.Ю. Некоторые клинико-иммунологические аспекты туберкулёза лёгких у женщин / Т.Ю. Салина, Т.И. Морозова // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2003. — № 9. - С. 21-23.

103. Саранчина, Э.Б. Энергетический метаболизм лимфоцитов крови при введении титановых имплантантов / Э.Б. Саранчина, А.Г. Логинов, В.Н. Горчаков // Морфология. 2003. - Т. 123, № 1. - С. 55-58.

104. Свирщевская, Е.В. Иммунитет при туберкулёзе и аспергиллезе (обзор) / Е.В. Свирщевская, B.C. Митрофанов, Р.И. Шендерова,

105. H.М. Чужова // Проблемы медицинской микологии. 2005. - Т. 7, №1.-С. 3-13.

106. Серебрякова, В.А. Реактивность лимфоцитов периферической крови при туберкулёзе лёгких: автореферат диссертации . кандидата медицинских наук: Автореф. дис. . канд. мед. наук / В. А. Серебрякова. — Томск, 2006. — 23 с.

107. Сидоренко, C.B. Современные проблемы диагностики и лечения туберкулёза / C.B. Сидоренко // Антибиотики и химиотерапия. -1999.-№8.-С. 3-5.

108. Симбирцев, A.C. Роль цитокинов в регуляции физиологических функций иммунной системы / A.C. Симбирцев // Физиология и патология иммунной системы. 2005. - Т. 8, № 10. - С. 3-10.

109. Симбирцев, A.C. Цитокины: классификация и биологические функции / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2004. — Т. 3, №2.-С. 16-21.

110. Соколов, В. В. Цитохимия ферментов в профпатологии / В. В. Соколов, Р. П. Нарциссов, JI. А. Иванова. — М.: Медицина, 1975. — 120 с.

111. Сравнительное исследование апоптоза лимфоцитов и вентиляционных нарушений у больных туберкулёзом лёгких / М.Ф. Яушев, C.B. Бойчук, A.A. Визель, Т.Н. Садыкова // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2004. — № 5. — С. 10—13.

112. Субпопуляционная принадлежность Т-клеток, подверженных анергии и апоптозу у больных туберкулёзом лёгких / Е.Р. Черных, JI.B. Сахно, М.А. Хонина и др. // Проблемы туберкулёза. 2002. - № 7.-С. 43-48.

113. Т-клеточная анергия в патогенезе иммунной недостаточности при туберкулёзе лёгких / JI.B. Сахно, М.А. Тихонова, Е.В. Курганова и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2004. — № 5. - С. 23-28.

114. Труфакин, В. А. Иммуноморфология вчера, сегодня, завтра / В. А. Труфакин, М. В. Робинсон // Вестник Российской АМН. - 1996. - № 6.-С. 38-42.

115. Труфакин, В. А. Функциональная морфология клеток иммунной системы в эксперименте и в клинике / В.А. Труфакин, А. В. Шурлыгина, М. В. Робинсон // Морфология. 2005. - Т. 128, № 4. -С. 20-24.

116. Туберкулёз сегодня: особенности возбудителя, клиника и лечение / JI.A. Скворцова, М.В. Павлова, Н.В. Сапожникова и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2005. - № 11. — С. 6-9.

117. Тюлькова, Т. Е. Особенности функционирования иммунной системы при туберкулёзной инфекции / Т. Е. Тюлькова, Ю.П. Чугаев, Э. А. Кашуба // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2008. - № 11. -С. 48-55.

118. Уровень СБЗ+-лимфоцитов, содержащих интерферону, у больных туберкулёзом лёгких и его изменение после включения в комплексную терапию полиоксидония / Е.Э. Комогорова, Е.В. Костенко, В.А. Стаханов и др. // Иммунология. — 2004. — №4. — С. 210-213.

119. Физиология лейкоцитов человека / В.А. Алмазов, Б.В. Афанасьев, А.Ю. Зарицкий и др. / Под ред. В.А. Алмазова. — Л.: Наука, 1979. — 232 с.

120. Фильченков, A.A. Апоптомодуляторы / A.A. Фильченков // Биомедицинская химия. 2003. — Т. 49, № 4. — С. 333-359.

121. Фильченков, A.A. Прижизненная неинвазивная визуализация апоптоза: состояние и перспективы исследований / A.A. Фильченков, В.Н. Залесский // Медицинская визуализация. — 2003. — № 3. — С. 126-131.

122. Фисенко, В.А. Противотуберкулёзные средства: принципы действия, побочные эффекты и перспективы создания новых лекарственных препаратов / В.А. Фисенко // Врач. 2006. - № 12. - С. 30-35.

123. Фонталин, Л.Н. Происхождение антигенраспознающей иммунной системы позвоночных. Молекулярно-биологические и иммунологические аспекты / Л. Н. Фонталин // Иммунология. — 1998.-№5. -С. 33-44.

124. Фрейдлин, И.С. Клетки иммунной системы / И.С.Фрейдлин, A.A. Тотолян. Т. 3-5. - СПб.: Наука, 2001. - 390 с.

125. Фрейдлин, И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. -2001.-№ 5-С. 4-7.

126. Фрейдлин, И.С. Регуляторные функции противовоспалительных цитокинов и острофазных белков / И.С. Фрейдлин, П.Г. Назаров // Вестник Российской Академии медицинских наук. 1999. - № 5. — С. 28-32.

127. Фрейдлин, И.С. Интерлейкин 12 - ключевой цитокин иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. - 1999. - № 4. -С. 5-9.

128. Фрейдлин, И.С. Регуляторные Т-клетки: происхождение и функции / И.С. Фрейдлин // Медицинская иммунология. — 2005. Т. 7, № 4. -С. 347-354.

129. Фрейдович, А.И. Интенсивное комбинированное лечение туберкулёза / А.И. Фрейдович. М.: «Триада-Х», 1999. — 87 с.

130. Фтизиатрия: Национальное руководство / Под ред. М.И. Перельмана. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 506 с.

131. Хаитов, P.M. Современные представления о защите организма от инфекции / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - № 1.-С. 61-64.

132. Характеристика механизмов защиты у больных с лекарственно-устойчивым туберкулёзом лёгких / Б.М. Малиев, Р.П. Селицкая, М.П. Грачева и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. -2005.-№6.-С. 33-35.

133. Хейфец, Л.Б. Микробиологические аспекты выявления больных туберкулёзом с лекарственной устойчивостью / Л.Б. Хейфец // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2004. - № 5. - С. 3-6.

134. Хейхоу, Ф.Г.Дж. Гематологическая цитохимия / Ф. Г. Дж. Хейхоу, Д. Кваглино. М.: Медицина, 1983. - 320 с.

135. Хоменко, А.Г. Современные представления о патогенезе туберкулёза / А.Г. Хоменко // Русский медицинский журнал Электронный ресурс. Электрон, журн. - 1998. - Т. 6, № 17. -Режим доступа к журн.: http://www.rmj.ru/numbers171.htm

136. Цитогенетический статус лимфоцитов периферической крови при туберкулёзе лёгких до лечения и на фоне химиотерапии / В.В. Новицкий, А.К. Стрелис, О.И. Уразова и др. // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2005. - № 5. - С. 43^4-6.

137. Черешнев, В.А. Иммунология воспаления: роль цитокинов. / В.А. Черешнев, Е.Ю. Гусев // Медицинская иммунология. 2001. — Т. 3. — №3.-С. 361-368.

138. Чернышов, В.Н. Дифференциальная диагностика специфических и неспецифических заболеваний лёгких по показателям ферментативных систем лейкоцитов / В.Н. Чернышов // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2005. — № 1. - С. 29-30.

139. Чучалин, А.Г. Новые данные иммунных реакций при туберкулёзе / А.Г. Чучалин // Русский медицинский журнал. 2004. - Т. 12, № 2. -С. 88-90.

140. Шкарин, А.В. Уровень цитокинов в плазме крови у больных активным инфильтративным туберкулёзом лёгких / А. В. Шкарин, С. С. Белоусов, О. А. Аникина // Проблемы туберкулёза и болезней лёгких. 2008. - № 8. - С. 34-38.

141. Ярилин, А.А. Межклеточная кооперация при иммунном ответе. Выбор клеткой формы ответа / А. А. Ярилин // Иммунология. — 1999. -№ 1.-С. 17-24.

142. A mutation in the interferon-gamma-receptor gene and susceptibility to mycobacterial infection / M.J. Newport, C.M Huxley, S. Huston et al. // The New England Journal of Medicine. 1996. - Vol. 335, № 26. - P. 1941-1949.

143. A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V / I. Vermes, C. Haanen, H. Steffens-Nakken, C.

144. Reutelingsperger // J. Immunol. Methods. 1995. - Vol. 184, № 1. - P. 39-51.

145. Acocella, G. Clinical pharmacokinetics of rifampicin / G. Acocella // Clin Pharmacokinet. 1978. Vol. 3, № 2. - P. 108-127.

146. Acocella, G. Pharmacokinetics and metabolism of rifampin in humans / G. Acocella // Rev Infect Dis. 1983. - Vol. 5, № 3. - P. 428^132.

147. Agranulocytosis due to anti-tuberculosis drugs including isoniazid (INH) and rifampicin (RFP)-a report of four cases and review of the literature / Shishido Y., Nagayama N., Masuda K. et al. // Kekkaku. 2003. - Vol. 78, № 11.-P. 683-689.

148. Antituberculosis treatment-induced hepatotoxicity: role of predictive factors / J. Singh, A. Arora, P.K. Garg et al. // Postgrad Med. J. 1995. -Vol. 71.-P. 359-362.

149. Association between embB Codon 306 Mutations and Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis / X. Shen, G.-m. Shen, J. Wu et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2007. - Vol. 51, № 7. - P. 2618-2620.

150. Autoschizis: a novel cell death / J.M. Jamison, J. Gilloteaux, H.S. Taper et al. // Biochem Pharmacol. 2002. -Vol. 63, № 10. - P. 1773-1783.

151. Awofesoa, N. Anti-tuberculosis medication side-effects constitute major factor for poor adherence to tuberculosis treatment / N. Awofesoa // Bulletin of the World Health Organization. 2008. - Vol. 86, № 3. - P. 3-5.

152. Bellahsene, A. Effect of rifampin on the immune response in mice / A. Bellahsene, A. Forsgren // Infection and immunity. 1980. - Vol. 27, № l.-P. 15-20.

153. Bendtzen, K. Cytokines and natural regulators of cytokines / K. Bendtzen // Immunology Letters. 1994. - Vol. 43, № 1-2. - P. 111-123.

154. Bhadauria, S. Isoniazid induces oxidative stress, mitochondrial dysfunction and apoptosis in Hep G2 cells / S. Bhadauria, G. Singh, N. Sinha, S. Srivastava // Cell Mol. Biol. (Noisy-le-grand). 2007. - Vol. 53, № l.-P. 102-114.

155. Biogenesis of the mycobacterial cell wall and the site of action of Ethambutol / K. Mikusova, R. A. Slay den, G. S. Besra, P. J. Brennan // Antimicrobial agents and chemotherapy. — 1995. — Vol. 39, № 11. P. 1484-1489.

156. Blanchard, J.S. Molecular mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis /J.S. Blanchard // Annu. Rev. Biochem. -1996. Vol. 65. - P. 215-239.

157. Blanchard, J.S. The ying and yang of rifampicin. / J.S. Blanchard // Nat. Med.-1998.-Vol. 4.-P. 14-15.

158. Bredesen, M.D. Key note lecture: toward a mechanistic taxonomy for cell death programs / M.D. Bredesen // Stroke. 2007. - Vol. 38. - P. 652660.

159. CD8+ T cells accumulate in the lungs of Mycobacterium tuberculosis-infected mice, but provide minimal protection / K. B. Urdahl, D. Liggitt, M. J. Bevan et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 170, № 2. - P. 19871994.

160. Characterization of human Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guerin-reactive CD8+ T cells / S.M. Smith, A.S. Malin, T. Pauline et al. // Infect Immun. 1999. - Vol. 67, № 10. - P. 5223-5230.

161. Characterization of Rifampin resistance in pathogenic Mycobacteria / D. L. Williams, C.Waguespack, K. Eisenach et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1994. - Vol. 38, № 10. - P. 2380-2386.

162. Chromosomal aberrations and micronuclei in lymphocytes of patients before and after exposure to anti-tuberculosis drugs / M.R. Masjedi, A.

163. Heidary, F. Mohammadi et al. // Mutagenesis. 2000. - Vol. 15, № 6. -P. 489^494.

164. Co, D.O. Mycobacterial granulomas: keys to a long-lasting host-pathogen relationship / D.O. Co, L.N. Hogan, S.I. Kim, N. Sandor // Clin. Immunol. 2004. - Vol. 113, № 2. - P. 130-136.

165. Concentration-dependent Mycobacterium tuberculosis killing and prevention of resistance by Rifampin / T. Gumbo, A. Louie, M. R. Deziel et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2007. — Vol. 51, № 11. -P. 3781-3788.

166. Cooper, A.M. The protective immune response to Mycobacterium tuberculosis / A.M. Cooper, J.L. Flynn // Curr. Opin. Immunol. 1995. -Vol. 7,№4-P. 512-516.

167. Crevel, R. Innate Immunity to Mycobacterium tuberculosis/ R. van Crevel, T.H.M. Ottenhoff, J.W.M. van der Meer / Clin. Microbiol. Rev. -2002. Vol. 15, № 2. - P. 294-309.

168. Curfs, J.H.A.J. A primer on cytokines: sources, receptors, effects, and inducers / J.H.A.J. Curfs, J.F.G.M. Meis, J.A.A. Hoogkamp-Korstanje // Clinical Microbiology Reviews. 1997. - Vol. 10, № 4. - P. 742-780.

169. De La Iglesia, A.I. Mechanisms of action of and resistance to rifampicin and isoniazid in Mycobacterium tuberculosis: new information on old friends / A.I De La Iglesia, H.R. Morbidoni // Rev. Argent Microbiol. -2006. Vol. 38, № 2. - P. 97-109.

170. Detection of in vitro interferon-y and serum tumour necrosis factor-a in multidrug-resistant tuberculosis patients / A. Fortes, K. Pereira, P. R. Z. Antas et al. // Clinical and Experimental Immunology. 2005. — Vol. 141.-P. 541-548.

171. Dinarello, C.A. Role of pro- and anti-inflammatory cytokines during inflammation: experimental and clinical findings / C.A. Dinarello // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. 1997. - Vol. 11, № 3. - P. 91-103.

172. Effect of antituberculous drugs on human polymorphonuclear leukocyte functions in vitro / Bettil Okuyana, Fikret Vehbi Izzettina, Mesut Sancara et al. // International Immunopharmacology. 2005. - Vol. 5, № 7-8. -P. 1337-1342.

173. Ellner, J.J. Regulation of the human immune response during tuberculosis / J.J. Ellner // J. Lab. Clin. Med. 1997. - Vol. 130, № 5. P. 469-475.

174. Ethambutol inhibition of glucose metabolism in Mycobacteria: a possible target of the drug / G. Silve, P. Valero-Gullen, A. Quemard et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1993. - Vol. 37, №. 7. - P. 1536-1538.

175. Ethambutol kinetics in patients with impaired renal function / A. Varughese, D. C. Brater, L. Z. Benet, C. S. Lee // Am. Rev. Respir. Dis. -1986.-Vol. 134.-P. 34-38.

176. Ethambutol resistance in Mycobacterium tuberculosis: critical role of embB mutations / S. Sreevatsan, K. E. Stockbauer, X. Pan et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1997. - Vol. 41, № 8. — P. 1677-1681.

177. Evaluation of tetrazoliumbased semiautomated colorimetric assay: assessment of chemosensitivity testing / J. Carmichael, W.Q. De Graff, A.F. Gazdar et al. // Canser research. 1987. - Vol. 47. - P. 936-942.

178. Familial disseminated atypical mycobacterial infection in childhood: a human mycobacterial susceptibility gene? / M. Levin, MJ. Newport, S. D'Souza et al. // Lancet. 1995. - Vol. 345. - P. 79-83.

179. Fas ligand-induced apoptosis of infected human macrophages reduces the viability of intracellular Mycobacterium tuberculosis / M. Oddo, T. Renno, A. Attinger et al. // J Immunology. 1998. - Vol. 160, № 11. - P. 5448-5454.

180. Flynn, J.L. Immunology of tuberculosis / J.L. Flynn, J. Chan // Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol. 19. - P. 93-129.

181. Flynn, J.L. Why is INF-7 insufficient to control tuberculosis? / J.L. Flynn // Trends Microbiol. 1999. - Vol. 7, № 7. - P. 477-478.

182. Forsgren, A. Effect of antibiotics on Chemotaxis of human polymorphonuclear leucocytes in vitro / A. Forsgren, D. Schmeling, G. Banck // Infection. 1978. - Vol. 6, № 1. - P. 102-106.

183. Forsgren, A. Lymphocyte stimulation by protein A of Staphylococcus aureus / A. Forsgren, A. Svedjelund, H. Wigzell // Eur. J. Immunol. -1976. Vol. 6. - P. 207-213.

184. Frisch, S.M. Anoikis mechanisms / S.M. Frisch, R.A. Screaton // Curr. Opin. Cell Biol. 2001. - Vol. 13, № 5. - P. 555-562.

185. From the Thl/Th2 paradigm towards a toll-like receptor/T-helper bias / M.G. Netea, J.W.M. Van der Meer, R.P. Sutmuller et al. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2005. - Vol. 45, № 10. - P. 3991-3996.

186. Gil, D. Modulation of macrophage apoptosis by antimycobacterial therapy: physiological role of apoptosis in the control of Mycobacterium tuberculosis / D. Gil, L.F. Garcia, M. Rojas // Toxicol. Appl. Pharmacol. -2003.-Vol. 190.-P. 111-119.

187. Girling, D.J. The hepatic toxicity of antituberculosis regimens containing isoniazid, rifampicin and pyrazinamide / D.J. Girling // Tubercle. — 1978. -Vol. 59,№ l.-P. 13-32.

188. Hampton, M.B. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing / M. B. Hampton A. J. Kettle, C. C. Winterbourn // Blood. 1998. - Vol. 92. - P. 3007-3017.

189. Hand, K. Tuberculosis-pharmacological management / K. Hand // Hospital pharmacist. 2006. - Vol. 13. - P. 81-85.

190. Harboe, M. The 38-kDa protein of Mycobacterium tuberculosis: a review / M. Harboe, H.G. Wiker // J Infect Dis. 1992. - Vol. 166, № 4. - P. 874-884.

191. Heldin, C.H. TGF-beta signalling from cell membrane to nucleus through SMAD proteins / C.H. Heldin, K. Miyazono, P. ten Dijke // Nature. 1997. -Vol. 390. -P. 465^171.

192. Holdiness, M.R. Clinical pharmacokinetics of the antituberculosis drugs / M.R. Holdiness // Clin Pharmacokinet. 1984. - Vol. 9, № 6. - P. 511544.

193. Human purified protein derivative-specific CD4+ T cells use both CD95-dependent and CD95-independent cytolytic mechanisms / D. M. Lewinsohn, T.T. Bement, J. Xu et al. // The Journal of Immunology. -1998. Vol. 160. - P. 2374-2379.

194. Hydrogen peroxide-mediated isoniazid activation catalyzed by Mycobacterium tuberculosis catalase-peroxidase (KatG) and Its S315T Mutant / X. Zhao, H. Yu, S. Yu et al. // Biochemistry. 2006. - Vol. 45, № 13.-P. 4131^1140.

195. IL-12 synthesis by human Langerhans cells / K. Kang, M. Kubin, K.D. Cooper et al. // J Immunol. 1996. - Vol. 156, № 4. - P. 1402-1407.

196. In vitro inhibition of the Mycobacterium tuberculosis P-ketoacyl-acyl carrier protein reductase MabA by isoniazid / S. Ducasse-Cabanot, M. Cohen-Gonsaud, H. Marrakchi et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2004. - Vol. 48, № 3. - P. 242-249.

197. Incidence of serious side effects from first-line antituberculosis drugs among patients treated for active tuberculosis / D. Yee, C. Valiquette, M. Pelletier et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2003. - Vol. 167. - P. 1472-1477.

198. Interaction between Smad7 and (3-Catenin: importance for transforming growth factor P induced apoptosis / S. Edlund, S. Y. Lee, S. Grimsby et al. // Molecular and cellular biology. - 2005. - Vol. 25, № 4. - P. 14751488.

199. Interleukin 12 at the site of disease in tuberculosis / M. Zhang, M.K. Gately, E. Wang et al. // J. Clin. Invest. 1994. - Vol. 93, № 4. -P. 1733-1739.

200. Kintzel, P. Recombinant interleukin-2: a biological response modifier / P. Kintzel, K. Calis // Clin. Pharm. 1991. - Vol. 10. - P. 110-128.

201. Labbe, K. Cell death in the host response to infection / K. Labbe, M. Saleh // Cell Death and Differentiation. 2008. - Vol. 15. - P. 13391349.

202. Lamont, A.G. IL-12: a key cytokine in immune regulation / A.G. Lamont, L. Adorini // Immunol. Today. 1996. - Vol. 17, № 5. - P. 214-217.

203. Lee, H.C. Mitochondrial role in life and death of the cell / H.C. Lee, Y.H. Wei // J. Biomed. Sci. 2000. - Vol. 7, № 1. - P. 2-15.

204. Leist, M. Four deaths and a funeral: from caspases to alternative mechanisms / M. Leist, M. Jaattela // Molecular cell biology. 2001. — Vol. 2.-P. 1-10.

205. Letterio, J J. Regulation of immune responses by TGF-beta / J.J. Letterio, A.B. Roberts // Annual Review of Immunology. 1998. — Vol. 16.-P. 137-161.

206. Leukopenia due to anti-tuberculous chemotherapy including rifampicin and isoniazid / N. Nagayama, Y. Shishido, K. Masuda et al. // Kekkaku. -2004. Vol. 79, № 5. - P. 341-348.

207. Liver injury during antituberculosis treatment: an 11-year study / M. Dossing, J.T. Wilcke, D.S. Askgaard, B. Nybo // Tuber. Lung Dis. -1996. Vol. 77, № 4. - P. 335-340.

208. Lovschall, H. Apoptosis: cellular and clinical aspects / H. Lovschall, L. Mosekilde // Nord Med. 1997. - Vol. 112, № 4. - P. 133-137.

209. Lucey, D.R. Evolution of the type-1 (Thl)-2 (Th2) cytokine paradigm / D.R. Lucey // Infect. Dis. Clin. N. Am. 1999. - Vol. 13, № 1. - P. 1-9.

210. Marrakchi, H. InhA, a target of the antituberculous drug isoniazid, is involved in a mycobacterial fatty acid elongation system, FAS-II / H. Marrakchi, G. Laneelle, A. Quemard // Microbiology. 2000. - Vol. 146. -P. 289-296.

211. Mechanisms for isoniazid action and resistance / L. Miesel, D. A. Rozwarski, J. C. Sacchettini, W. R. Jacobs // Novartis Found. Symp. — 1998. Vol. 217. - P. 209-220.

212. Mitchison, D.A. Antimicrobial therapy of tuberculosis: justification for currently recommended treatment regimens / D.A. Mitchison // Semin. Respir. Crit. Care Med. 2004. - Vol. 25, № 3. - P. 307-315.

213. Mitchison, D.A. The diagnosis and therapy of tuberculosis during the past 100 years / D. A. Mitchison // American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 2005. - Vol. 171. - P. 699-706.

214. Molecular characterization of isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis: identification of a novel mutation in inhA / E. T. Y. Leung, P. L. Ho, K. Y. Yuen et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. -2006. Vol. 50, № 3. - P. 1075-1078.

215. Moustakas, A. Non-Smad TGF-(3 signals / A. Moustakas, C.H. Heldin // Journal of Cell Science. -2005.-Vol. 118. P. 3573-3584.

216. Mutations at embB Codon 306 Are an Important Molecular Indicator of Ethambutol Resistance in Mycobacterium tuberculosis / A.M. Starks, A. Gumusboga, B.B. Plikaytis et al. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2009. - Vol. 53, № 3. - P. 1061-1066.

217. Mycolic acids: structure, biosynthesis and physiological functions / C.E. Barry, R.E. Lee, K. Mdluli et al. // Prog Lipid Res. 1998. - Vol. 37. -P. 143-179.

218. Navarro, V.J. Drag-related hepatotoxicity / V.J. Navarro, J.R. Senior // N. Engl. J. Med. 2006. - Vol. 354, № 7. - P. 731-739.

219. Nolt, D. Interleukin-12 therapy reduces the number of immune cells and pathology in lungs of mice infected with Mycobacterium tuberculosis / D. Nolt, J.L. Flynn / Infection and Immunity. 2004. - Vol. 72, № 5. -P. 2976-2988.

220. Orvedahl, A. Eating the enemy within: autophagy in infectious diseases / A. Orvedahl, B. Levine // Cell Death and Differentiation. 2009. - Vol. 16.-P. 57-69.

221. Pahlevan, A.A. Potential of rifamides to inhibit TNF-induced NF-kB activation / A.A. Pahlevan, DJ.M. Wright, L. Bradley // J. Antimicrob. Chemother. 2002. - Vol. 49. - P. 531-534.

222. Parijs, L.V. Homeostasis and self-tolerance in the immune system: turning lymphocytes off / L. V. Parijs, A. K. Abbas // Science. 1998. -Vol. 280.-P. 243-248.

223. Pasquale, T.R. Nonantimicrobial effects of antibacterial agents / T.R. Pasquale, J. S. Tan // Clin. Infect. Dis. 2005. - Vol. 40. - P. 127-135.

224. Peptide-specific T cell response to Mycobacterium tuberculosis: clinical spectrum, compartmentalization, and effect of chemotherapy / R.J. Wilkinson, H.M. Vordermeier, K.A. Wilkinson et al. // J. Infect. Dis. — 1998. Vol. 178, № 3. - P. 760-768.

225. Pharmacokinetics of Ethambutol under fasting conditions, with food, and with antacids / C.A. Peloquin, A.E. Bulpitt, G.S. Jaresko et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. — 1999. Vol. 43, № 3. - P. 568-572.

226. Ponticiello, A. Analysis of local T lymphocyte subsets upon stimulation with intravesical BCG: a model to study tuberculosis immunity / F. Perna, S. Maione // Respir. Med. 2004. - Vol. 98, № 6. - P. 509-514.

227. Recognition of multiple effects of Ethambutol on metabolism of mycobacterial cell envelope / L. Deng, K. Mikusova, K. G. Robuck et al. // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1995. - Vol. 39, № 3. - P. 694-701.

228. Regulation of the Mycobacterium tuberculosis hypoxic response gene encoding alpha-crystallin / D.R.Sherman, M. Voskuil, D. Schnappinger et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2001. - Vol. 98. - P. 7534-7539.

229. Rickert, M. The structure of Interleukin-2 complexed with its alpha receptor / M. Rickert, X. Wang, M. J. Boulanger // Science. 2005. -Vol. 310.-P. 1477-1480.

230. Rifampicin is not an activator of glucocorticoid receptor / A. S. Herr, G. M. Wochnik, M. C. Rosenhagen et al. // Molecular Pharmakology. -2000. Vol. 57. - P. 732-737.

231. Rifampicin: A glucocorticoid receptor ligand? / C. Calleja., J. M. Pascussi, J. C. Mani et al. // Nat. Med. 1998. - Vol. 4. - P. 1090-1091.

232. Rifampin augments cytokine-induced nitric oxide production in human alveolar epithelial cells / Y. Yuhas, E. Berent, H. Ovadiah et al. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2009. - Vol. 50, № 1. - P. 396-398.

233. Rifampin inhibits prostaglandin E2 production and arachidonic acid release in human alveolar epithelial cells / Y. Yuhas, I. Azoulay— Alfaguter, E. Berent, S. Ashkenazi // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2007. - Vol. 51, № 12. - P. 4225-4230.

234. Risk factors for hepatotoxicity from antituberculosis drugs: a case-control study / J.N. Pande, S.P.N. Singh, G.C. Khilnani et al. // Thorax. — 1996.-Vol. 51-P. 132-136.

235. Schaberg, T. Risk factors for side-effects of isoniazid, rifampin and pyrazinamide in patients hospitalized for pulmonary tuberculosis / T. Schaberg, K. Rebhan, H. Lode II European Respiratory Journal. 1996. — Vol. 9.-P. 2026-2030.

236. Schwab, C.E. In vitro studies on the toxicity of isoniazid in different cell lines / C.E. Schwab, H. Tuschl // Hum. Exp. Toxicol. 2003. - Vol. 22, № 11.-P. 607-615.

237. Sharma, S. Mycobacterium tuberculosis infection of human monocyte-derived macrophages leads to apoptosis of T cells / S. Sharma, M. Sharma, M. Bose // Immunology and Cell Biology. 2009. - Vol. 87, № 3.-P. 226-234.

238. Slayden, R. A. Isoniazid affects multiple components of the type II fatty acid synthase system of Mycobacterium tuberculosis / R. A. Slayden R. E. Lee, C. E. Barry // Molecular Microbiology. 2000. - Vol. 38. - P. 514-525.

239. Somoskovi, A. The molecular basis of resistance to isoniazid, rifampin, and pyrazinamide in Mycobacterium tuberculosis /A. Somoskovi, L. M. Parsons, M. Salfinger II Respir. Res. 2001. - Vol. 2. - P. 164-168.

240. Sperandio, S. An alternative, nonapoptotic form of programmed cell death / S. Sperandio, Ian de Belle, D.E. Bredesen // PNAS. 2000. - Vol. 97, №26.-P. 14376-14381.

241. Sutcliffe, I.A. Lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis: an abundant and functionally diverse class of cell envelope components / I.A. Sutcliffe D.J. Harrington // FEMS Microbiol. Rev. 2004. - Vol. 28, № 5. - P. 645-659.

242. Takayama, K. Inhibition of synthesis of arabinogalactan by ethambutol in Mycobacterium smegmatis / K. Takayama, J.O. Kilburn // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1989. - Vol. 33, № 3. - P. 1493-1499.

243. The antibiotic rifampicin is a nonsteroidal ligand and activator of the human glucocorticoid receptor / C. Calleja, J.M. Pascussi, J.C. Mani et al. // Nat. Med. 1998. - Vol. 4. - P. 92-96.

244. The catalase-peroxidase gene and isoniazid resistance of Mycobacterium tuberculosis / Y. Zhang, B. Heym, B. Allen et al. // Nature. 1992. -Vol. 358.-P. 591-593.

245. The EmbC arabinosyltransferase is inhibited by ethambutol in Mycobacterium tuberculosis / R. Goude, A. G. Amin, D. Chatteijee, T. Parish // Antimicrobial agents and chemotherapy. 2009. - Vol. 53, № 10-P. 4138^136.

246. Tomioka, H. Development of antituberculous drugs: current status and future prospects / H. Tomioka, K. Namba // Kekkaku. 2006. - Vol. 81, №12. -P. 753-774.

247. Transforming growth factor beta 1 null mutation in mice causes excessive inflammatory response and early death / A.B. Kulkarni, C.G. Huh, D.

248. Becker et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - Vol. 90, № 2. - P. 770-774.

249. Transforming growth factor-beta promotes 'death by neglect' in post-activated human T cells / H.K. Sillett, S.M. Cruickshank, J. Southgate , L.K. Trejdosiewicz // Immunology. 2001. - Vol. 102, № 3. - P. 310316.

250. Transforming growth factor-beta regulation of immune responses / M.O. Li, Y.Y. Wan, S. Sanjabi et al. // Annual Review of Immunology. 2006. -Vol. 24.-P. 99-146.

251. Trinchieri, G. Interleukin-12: a cytokine produced by antigen-presenting cells with immunoregulatory functions in the generation of T-helper cells type 1 and cytotoxic lymphocytes / G. Trinchieri // Blood. — 1994. Vol. 84. - P. 4008-4027.

252. Tsujimoto, Y. Another way to die: autophagic programmed cell death / Y. Tsujimoto, S. Shimizu // Cell Death and Differentiation. — 2005. — Vol. 12.-P. 1528-1534.

253. Wang, X. Structure of the quaternary complex of interleukin-2 with its a, P, and yc receptors / X. Wang, M. Rickert, K. C. Garcia // Science. -2005.-Vol. 310.-P. 1159-1163.

254. Waring, P. Cell death induced by the Fas/Fas ligand pathway and its role in pathology / P. Waring, A. Miillbacher // Immunology and Cell Biology. 1999. - Vol. 77. - P. 312-317.

255. Wengenack, N.L. Evidence for Isoniazid-dependent free radical generation catalyzed by Mycobacterium tuberculosis KatG and the isoniazid-resistant Mutant KatG(S315T) / N. L. Wengenack, F. Rusnak // Biochemistry. 2001. - Vol. 40, № 30. - P. 8990 -8996.

256. Yew, W.W. Antituberculosis drugs and hepatotoxicity / W.W. Yew, C.C. Leung // Respirology. 2006. - Vol. 11, № 6. - P. 699-707.

257. Zhang, Y. Molecular basis for the exquisite sensitivity of Mycobacterium tuberculosis to isoniazid / Y. Zhang, S. Dhandayuthapani, V. Deretic // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 13212-13216.