Клинико-прогностическое значение иммунофенотипического профиля инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток в меланоме кожи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат наук Божченко, Яна Анатольевна

• Божченко, Яна Анатольевна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Божченко, Яна Анатольевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Факторы прогноза течения и исхода заболевания меланомой кожи

1.2. Субпопуляции иммунных клеток в микроокружении меланомы кожи

1.3. Прогностическое значение FoxP3+ Т-лимфоцитов в инфильтрате опухоли

1.4. Прогностическое значение Т-регуляторных лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли у больных меланомой кожи

1.5. Прогностическое значение соотношений субпопуляций лимфоцитов в

лимфоидном инфильтрате опухоли

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика больных меланомой кожи

2.2. Критерии отбора клинических случаев для анализа

2.3. Подготовка гистологических препаратов

2.4. Подготовка иммуногистохимических препаратов

2.5.Оценка экспрессии иммуногистохимических маркеров интра- и перитуморальной инфильтрации

2.6. Методы статистического анализа данных

ГЛАВА III. ДАННЫЕ СОБСТВЕННЫХ НАБЛЮДЕНИЙ

3.1.Общая характеристика субпопуляций пери- и интратуморальных иммунокомпетентных клеток в лимфоидном инфильтрате опухоли

3.2. Показатели содержания CD3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.3. Показатели содержания CD8+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.4. Показатели содержания CD4+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.5. Показатели содержания CD20+ B-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.6. Показатели содержания FoxP3+ T-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.7. Показатели содержания TIA 1+ T-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.8. Показатели содержания СD68+ макрофагов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.9. Показатели индекса соотношения субпопуляций CD4+/CD8+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.10. Показатели индексов соотношения CD3+/CD20+ субпопуляций Т- и В-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.11. Показатели индексов соотношения CD8+/FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.12. Показатели индексов соотношения субпопуляций CD4+/FoxP3+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.13. Показатели индекса соотношения CD8+/TIA1+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате меланомы кожи

3.14. Субпопуляций перитуморальных ИКК и индексы их соотношения в лимфоидном инфильтрате опухоли больных меланомой кожи в 3-х группах наблюдения

3.15. Субпопуляций интратуморальных ИКК и индексы их соотношения в лимфоидном инфильтрате опухоли больных меланомой кожи в 3-х группах наблюдения

3.16. Роль клинико-морфологических факторов в прогнозе 5-летней общей выживаемости больных меланомой кожи

3.17. Влияние субпопуляций перитуморальных ИКК и индексов их соотношений

на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи

3.10. Влияние субпопуляций интратуморальных ИКК и индексов их соотношений на 5-летнюю общую выживаемость больных меланомой кожи

3.18. Многофакторный анализ влияния клинических, морфологических факторов и субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК на 5-летнюю общую

выживаемость больных меланомой кожи

3.19. Роль клинико-морфологических факторов в прогнозе 5-летней безрецидивной выживаемости больных меланомой кожи

3.20. Влияние субпопуляций ИКК и индексов их соотношений на 5-летнюю

безрецидивную выживаемость больных меланомой кожи

3.24. Многофакторный анализ влияния клинических, морфологических факторов и субпопуляций пери- и интратуморальных ИКК на 5-летнюю безрецидивную

выживаемость больных меланомой кожи

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

МК- меланома кожи

ПМК-первичная меланомак кожи

БРВ - безрецидивная выживаемость

ОВ - общая выживаемость

TILs - туморинфильтрирующие лимфоциты

СЛУ - сторожевой лимфатический узел

МИ-митотический индекс

Т-рег-Т-регуляторные клетки

TCR-T-клеточный рецептор

iT-рег - индуцибельные Т- регуляторные клетки

FoxP3- внутриклеточный фактор транскрипции

APC- антиген презентирующие клетки

ИГХ - иммуногистохимия

CD3+ лимфоциты - зрелые Т-лимфоциты

CD8+ лимфоциты - цитотоксические Т-лимфоциты

CD4+ лимфоциты - Т-хелперы

CD20+ лимфоциты - В-лимфоциты

TIA1+ лимфоциты - активированные цитотоксические Т-лимфоциты

CD68+ клетки - макрофаги

ИКК- иммунокомпетентные клетки

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-прогностическое значение иммунофенотипического профиля инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток в меланоме кожи»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ И СТЕПЕНЬ ЕЕ РАЗРАБОТАННОСТИ

Меланома кожи (МК) - злокачественная опухоль из клеток меланоцитарной системы и одно из наиболее агрессивно протекающих злокачественных новообразований человека, обладающее высоким метастатическим потенциалом [13, 15].

Современные эпидемиологические исследования четко установили стремительный рост заболеваемости МК в разных странах, в том числе и в России, что позволяет рассматривать этот факт, как общемировую тенденцию [1].

В 2015 году онкопатология кожи с МК составила 14% и явилась ведущей локализацией в общей структуре онкологической заболеваемости [11].

Заболеваемость МК в России за последние 10 лет (2005-2015гг.) выросла в 1,5 раза и составила 6,99 на 100000 тысяч населения, прирост заболеваемости составил 34,8%. Ежегодно в России МК заболевают свыше 3976 человек и более 1668 человек умирают от нее. Стандартизованный показатель смертности в 2015году был равен 2,55 на 100 000 населения. Прирост смертности за период с 2005 по 2015 год составил 17,9% [11].

Однако, удельный вес больных МК с запущенными стадиями (Ш-1У стадии) опухолевого процесса, от числа больных с впервые установленным диагнозом, имеет тенденцию к понижению, и если в 2006 году он составил 31,8%, то к 2016 году - 18,2% [12].

Опережение роста числа, заболевших над ростом числа умерших, а также снижение показателей диагностики заболевания в запущенной стадии опухолевого процесса возможно связано с тем, что за прошедшие годы в изучении патогенеза заболевания, стадировании, прогнозе и тактике лечения больных МК сделано очень многое [1, 5].

Выявлены прогностически значимые факторы, такие как стадия заболевания, толщина опухоли по Бреслоу, наличие изъязвления, пол больного, митотический индекс [25]. Определены тенденции оптимальной тактики лечения

и наблюдения больных [5]. Многие исследователи пришли к выводу, что больные с МК не являются абсолютно безнадежными, особенно в случаях раннего выявления, адекватного лечения первичной опухоли и последующего наблюдения больного [2].

Таким образом, пристальное изучение различных аспектов МК имеет важное практическое значение, поскольку может помочь в выборе оптимальной тактики лечения, наблюдения больного, а также в оценке прогноза течения и исхода заболевания [1, 5].

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

С помощью гистологических и иммуногистохимических методов изучить состав и соотношение субпопуляций иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих первичную первичную меланому кожи (ПМК) и выявить их взаимосвязи с клинико-морфологическими характеристиками опухоли, с прогрессированием заболевания и выживаемостью больных.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить состав и соотношение субпопуляций пери- и интратуморальных иммунокомпетентных клеток, инфильтрирующих ПМК с помощью иммуногистохимических маркеров (СБ3+, СБ4+, СБ8+, СБ20+, СБ68+, БохР3+, Т1А1+)

2. Определить корелляцию показателей субпопуляций пери- и интратуморальных иммунокомпетентных клеток в ПМК с такими клиническими характеристиками как пол, возраст больного, стадия заболевания.

3. Определить корелляцию показателей субпопуляций пери- и интратуморальных лимфоцитов и макрофагов, инфильтрирующих ПМК с такими морфологическими характеристиками опухоли, как тип роста, наличие изъязвления, сосудистой инвазии, участков периневрального роста, частичной спонтанной регрессии, с толщиной опухоли по Бреслоу и глубиной инвазии по Кларку.

4. Провести сравнительный анализ показателей субпопуляций пери- и

интратуморальных иммунокомпетентных клеток и индексов их соотношения у больных 1-11 стадии заболевания без прогрессирования (1-ая группа наблюдения), у больных МК со 11-ой стадией заболевания с последующим прогрессированием заболевания (2-ая группа наблюдения) и у больных МК с Ш-1У стадиями заболевания (3-я группа наблюдения).

5. Определить прогностическое значение и пороговые значения субпопуляций пери- и интратуморальных иммунокомпетентных клеток и индексов их соотношения для общей и безрецидивной выживаемости больных МК.

6. Выявить параметры локального иммунитета, имеющие наибольшую клинико-прогностическую значимость с целью возможности использования ИГХ исследований для выявления больных с неблагоприятным прогнозом, подлежащих диспансеризации и более тщательному наблюдению.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые проведено комплексное иммунофенотипирование и количественная оценка показателей пери- и интратуморальных лимфоцитов и макрофагов, как параметров тканевого (местного) противоопухолевого иммунитета, с выявлением их взаимосвязи с клинико-морфологическими особенностями ПМК и течением заболевания.

На основе этого анализа впервые создан алгоритм иммуногистохимической и морфологической диагностики, уточняющей прогноз течения МК и ее исход.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Практическое значение полученных в настоящем исследовании результатов заключается в том, что они могут быть применены в качестве дополнительных факторов прогноза у больных с МК. Изучение состава субпопуляций лимфоцитарного инфильтрата первичных МК с использованием панели диагностических молекулярно-биологических ИГХ маркеров позволит улучшить точность определения метастатического потенциала опухоли, исхода заболевания и будет способствовать выбору адекватной тактики наблюдения и лечения

пациентов. Данные характеристики микроокружения МК при изучении молекулярно-биологических маркеров имеют фундаментальное значение для рассмотрения новых механизмов канцерогенеза, и создания новых терапевтических подходов к лечению МК на рациональной основе.

СТЕПЕНЬ ДОСТОВЕРНОСТИ И АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Представленные в работе теоретические положения, выводы и методические подходы основаны на глубокой и тщательной проработке значительного ретроспективного и проспективного материала с применением комплекса современных статистических методов, адекватных поставленным задачам. Представленныйобъем материала и его качество являются достаточными для решения поставленных задач, обеспечивают достоверность результатов исследования, сформулированных выводов.

Результаты исследования были представлены, доложены и обсуждены на ученом совете ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина » Минздрава Росии 9 июня 2017г

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. У больных меланомой кожи с более поздними стадиями заболевания (III-IV) отмечаются более низкие показатели содержания в лимфоидном инфильтрате CD8+ и ТА1+ Т-лимфоцитов и более высокие показатели индекса их соотношения CD8+/TIA1+.

2. Высокие показатели интратуморально расположенных субпопуляций иммунокомпетентных клеток в первичной меланоме кожи коррелируют с большей толщиной опухоли по Бреслоу, а также такими факторами прогноза как стадия заболевания, наличие изъязвления опухоли, прогрессирование заболевания, наличием синхронных с первичной меланомой кожи метастазов в лимфатических узлах.

3. Низкие показатели индексов соотношения CD3+/CD20+, CD4+/FoxP3+, CD8+/FoxP+3 интратуморальных лимфоцитов коррелируют с более поздними стадиями заболевания (Ш-ГУ).

4. У больных меланомой кожи на благоприятный прогноз 5-летней общей выживаемости влияют такие показатели местного (тканевого) иммунитета, как индекс соотношения субпопуляций CD8+/FoxP3+ перитуморальных Т-лимфоцитов.

5. У больных меланомой кожи неблагоприятный прогноз 5-летней общей и 5-летней безрецидивной выживаемости связан с увеличением содержания в лимфоидном инфильтрате первичной опухоли субпопуляций интратуморальных FoxP3+ и CD20+ лимфоцитов.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Факторы прогноза течения и исхода заболевания меланомой кожи.

Морфологические характеристики первичной МК во многом определяют прогноз течения заболевания. Наиболее значимыми морфологическими факторами прогноза течения МК являются: толщина опухоли по Бреслоу, уровень инвазии по Кларку, наличие или отсутствие изъязвления, опухолевых эмболов в лимфатических и/или кровеносных сосудах, участков периневрального роста. Для метастатической меланомы важными прогностическими факторами также являются наличие и локализация отдаленных метастазов, уровень сывороточной лактатдегидрогеназы [25, 26, 92].

Исследования последних 10 лет добавили к выше перечисленным факторам прогноза еще и такие потенциально значимые факторы как: лимфоцитарная инфильтрация опухоли или tumor-infiltrating lymphosytes (TILs) [28, 29, 34, 62, 107, 116, 128], митотический индекс [38, 71], регрессию первичной опухоли [32, 69, 73, 83]. Многие из этих факторов взаимосвязаны друг с другом. Данные их исследования довольно противоречивы и до сих пор ученые не пришли к единому мнению об их прогностической значимости для течения заболевания. [26].

Наличие в ПМК TILs, является одной из ее характерных особенностей и отражением состояния локального иммунитета организма [62, 107]. Большинство последних исследований, посвященных TILs у больных МК, связано с оценкой

степени ее выраженности [28, 29, 34, 62, 107, 116, 128]. Были выделены 3 степени выраженности TILs: отсутствующая «absent», невыраженная «non-brisk» и выраженная «brisk» [33].

По данным исследования C. Clemente et al. [34] степень выраженности TILs является значимым прогностическим фактором при МК. Так, 5- и 10-летняя общая выживаемость (ОВ) больных с МК в вертикальной фазе роста составила 77% и 55% соответственно при выраженной TILs (brisk), 53% и 45% соответственно при умеренной (non-brisk) TILs и 37% и27% соответственно, для опухолей с отсутствующей (absent) TILs.

В тоже время, по данным другого исследования, проведенном на гистологическом материале 156 больных МК, степень выраженности TILs не влияла на ОВ и безрецидивную выживаемостью (БРВ) больных. Статистически значимых различий для ОВ и БРВ в группах наблюдения с выраженной и невыраженной TILs (выживаемость составила 55% в каждой группе, р=0,26) найдено не было. Однако, наблюдались статистически достоверные различия между группами наблюдения с выраженной и отсутствующей TILs (ОВ 73,5% и 55% соответственно, р=0,02). Данные показали, что у больных МК с толщиной первичной опухоли более 4 мм наличие выраженной TILs коррелирует с более высокой БРВ [29].

По данным R. Taylor et al. [116] выраженность TILs коррелирует с вероятностью метастазирования МК в сторожевые лимфатические узлы (СЛУ). У пациентов с выраженной TILs в ПМК поражение СЛУ имело место в 3,9% случаев, а у пациентов с отсутствующей TILs, поражение СЛУ имело место в 26,2% случаев. У пациентов с МК и с метастазами в региональных лимфатических узлах, имеющих выраженную TILs наблюдалась более высокая 30-месячная БРВ (81,3%) по сравнению с пациентами с невыраженной TILs (46,8%) и пациентов с отсутствующей TILs (29,3%).

Данные ряда исследований, также подтвердили положительную корреляцию степени выраженности TILs в ПМК с выживаемостью больных и отсутствием метастазирования в СЛУ [23, 57, 117, 118].

В тоже время результаты ряда других исследований не показали связи Т1Ь8 с выживаемостью больных МК [40, 49, 62, 116].

Стоит отметить, что Т1Ь8 включает множество субпопуляций лимфоцитов, выполняющих различные, а подчас и противоположные функции [87]. В том, какие свойства и функции приобретают клетки иммунной системы в микроокружении опухоли и в динамике опухолевого процесса остается много неясного.

Трудность изучения этого вопроса связана со многими обстоятельствами: неоднородностью популяционного и субпопуляционного состава клеток системы иммунитета, многообразием продуктов их синтеза, способностью каждой из клеток в зависимости от степени зрелости и этапа роста опухоли оказывать диаметрально противоположное действие, способностью опухолевых клеток не только изменять функции клеток системы иммунитета, но и их фенотип [87].

1.2. Субпопуляции иммунных клеток в микроокружении меланомы кожи.

Среди инфильтрирующих опухоль иммунокомпетентных клеток встречаются многочисленные клеточные фенотипы, такие как: Т- и В-лимфоциты, макрофаги, дендритные клетки, супрессирующие клетки миелоидного происхождения, гранулоциты.

Несмотря на то, что многие клетки морфологически похожи, они функционально гетерогенны и по-разному влияют на рост опухоли и ее метастазирование [87].

Ряд исследований показал, что клетки, инфильтрирующие опухоль, экспрессируют на своей мембране СБ45+, СБ3+, СБ4+, СБ8+. СБ25+, СБ56+, СБ20+, СБ68+ и многие другие кластеры дифференцировки, что подтверждает гетерогенность состава лимфоидного инфильтрата и говорит о сложности клеточных взаимодействий в строме опухоли [22, 34, 39, 95].

Исследования состава Т1Ь8 в МК показали, что в его состав входят преимущественно Т-клетки, экспрессирующие на своей мембране СБ45+, СБ3+, СБ4+, СБ8+, CD25+ кластеры дифференцировки [34, 95]. Отмечается наличие В-

лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток [62, 100].

В исследовании субпопуляций лимфоцитов и их соотношений в образцах ткани, взятых от больных как с доброкачественными, так и со злокачественными новообразованиями кожи было выявлено, нарастание инфильтрации лимфоцитами от здоровой кожи (3,9%), доброкачественного невуса (26,8%), диспластического невуса (39%) до ПМК в фазе радиального роста (67,1%) и вертикального роста (87,9%) как в паренхиме, так и в строме опухоли. ТЬб в метастатической меланоме была достоверно ниже, чем в МК без метастазов и отмечалась только в паренхиме опухоли. Данная тенденция была характерной для всех исследуемых маркеров [62].

Корреляция выраженности Т^ с переходом от здоровой кожи и доброкачественных поражений до МК говорит об иммуногенности последней. Достоверно значимой корреляции Т^ с размером, локализацией и прогрессированием заболевания найдено не было [40; 6262].

Увеличение числа цитотоксических СD8+ Т-лимфоцитов в опухолевой ткани при раке яичников, тела матки, толстой кишки, поджелудочной железы связаны с лучшей выживаемостью больных [52, 98, 109].

Значение CD4+ Т-лимфоцитов в противоопухолевом ответе весьма противоречиво. С одной стороны, CD4+ Т-лимфоциты за счет способности связываться с антигенпрезентирующей клеткой и последующей секреции !Ь-2 активируют CD8+ цитотоксические Т-лимфоциты. С другой стороны, часть из них, называемая, Т-регуляторными клетками, способна подавлять функции CD8+ цитотоксических лимфоцитов, способствуя подавлению противоопухолевого иммунитета [59, 86].

В-лимфоциты как правило присутствуют в строме солидных опухолей в относительно небольшом количестве. Вопрос о роли В-лимфоцитов в противоопухолевом иммунном ответе организма до сих пор остается открытым. Некоторые исследования показали усиление роста опухоли ее прогрессирование при высоких показателях В-лимфоцитов в ее микроокружении [68].

Данные, о про- и противоопухолевом влиянии В-лимфоцитов, возможно связаны с многообразием их функций. С одной стороны, В-лимфоциты могут функционировать в качестве антигенпрезентирующих клеток повышая противоопухолевый Т-клеточный ответ. С другой стороны, они способны стимулировать рост опухоли с помощью антител или иммунных комплексов, секреции иммунных подавляющих факторов. Так, продуцируемый В-лимфоцитами IgG4 способен конкурентно связываться с Fcy-рецептором на цитотоксических Т-лимфоцитах и препятствовать связыванию данного рецептора с иммуноглобулином IgG1, который при связывании с последним активирует эффекторные клетки, то есть опосредует противоопухолевый иммунитет [68]. В исследовании M. Neagu et al., [89], была выявлена корреляциия более высоких показателей субпопуляции CD20 B-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате ПМК с IV стадией заболевания и наличием изъязвления первичной опухоли.

Большинство CD3+ клеток экспрессировали маркер цитотоксических Т-лимфоцитов TIA1+, экспрессия которого постепенно снижалась по мере прогрессии опухоли. Экспрессия TIA1+ положительно коррелировала с благоприятным исходом течения заболевания [8262].

TIA-1 (T-Cell Intracellular Antigen-1) является эффекторным белком мембран цитоплазматических гранул активированных цитотоксических клеток. Чем выше доля TIA1 Т-лимфоцитов в субпопуляции CD8+ цитотоксических Т-лимфоцитов, тем более эффективно работает эффекторное звено иммунитета. По данным исследования S. Lyle et al. [82] процент TIA1+ Т-лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате МК уменьшался при прогрессировании заболевания.

Недавние исследования показали наличие в инфильтрате опухоли так называемых Т-регуляторных клеток (Т-рег), экспрессирующих на своей мембране такие маркеры как CTLA-4 и FoxP3 и оказывающих иммуносупрессивный эффект на цитотоксические клетки [105].

Известно, что иммунокомпетентные клетки участвуют в распознавании и уничтожении раковых клеток, то есть осуществляют иммунологический надзор. Однако опухолевые клетки способны уходить из-под иммунного контроля,

посредством специфических механизмов. Работа иммунной системы призвана защитить организм от развития опухоли, но нередко возникающие в ней нарушения, такие как хроническое воспаление, могут предрасполагать к развитию опухоли и ее росту [4].

В последние годы получены многочисленные сведения о роли субпопуляции регуляторных иммунокомпетентных клеток с супрессорной активностью в патогенезе патологических состояний иммунной системы [96, 119, 122, 130]. Ряд исследований показал, что Т-рег клетки играют активную и значительную роль в опухолевой прогрессии и подавлении противоопухолевого иммунитета [30, 78, 120].

Впервые они были охарактеризованы S. Sakaguchi et al. в 1995 году [105] как CD4+CD25+Т-клетки при исследовании аутоиммунных заболеваний у мышей. Позднее, в 2001 г., супрессорные свойства CD4+CD25+ T-клеток были найдены и у человека. В 2003 г. описан ген, локализованный в хромосоме X, FOXP3 (forkheadbox P3), который контролирует развитие и функционирование T-рег клеток у мышей, затем это было показано и для T-рег клеток человека.

Многочисленные исследования показали, что Т-рег клетки экспрессируют такие маркеры как: CD25 (а-цепь рецептора^-2, IL-2Ra), CTLA-4 (CD152, cytotoxic T lymphocyte antigen 4), GITR (glucocorticoid induced TNF-receptor-relate d protein), CD95(Fas), CD127lo (IL-7Ra) GITR, CTLA_4 (CD152), galectin-1, CD38, CD62L, 0X_40L, CD103, TNF_R2, TGF_pR1, CD5, l_selectin, CD45RO, CD45RA, LAG_3, neuropilin_1 (Nrp1) [58, 61, 88,114, 125].

Однако следует иметь в виду, что эти молекулы, используемые как поверхностные маркеры T-рег клеток, могут экспрессироваться и другими Т-клетками на определенных стадиях жизненного цикла. Например, молекулы CD25, CD69, CD127, CD45RO обнаруживаются и на Т-цитотоксических клетках [105].

Наиболее достоверным маркером Т-рег клеток, необходимым как для их дифференцировки, так и для функциональной активности является FoxP3 [48, 58, 61, 105, 114, 125]. Именно FoxP3+ T-рег клетки, или FoxP3+ Т-лимфоциты,

подавляя противоопухолевый иммунитет, способствуют опухолевой прогрессии [105].

Исследования содержания FoxP3+ Т-лимфоцитов у онкологических больных выявили увеличение их уровня в периферической крови, опухолевом микроокружении, регионарных лимфатических узлах. Большое число данных указывает на то, что присутствие FoxP3+ Т-лимфоцитов в микроокружении опухоли связано с уменьшением опухолеспецифического иммунного ответа, и что увеличение их количества коррелирует со снижением выживаемости онкологических больных. Идентифицированы различные субпопуляции FoxP3+ Т-лимфоцитов, которые действуют через сходные или отличающиеся механизмы супрессии опухолеспецифических эффекторных клеток [6].

Активация T-рег клеток антиген специфична, что предполагает антиген зависимую супрессорную активность. Опухолевые клетки способны привлекать и активизировать Т-рег клетки [81, 106].

Мишенями для супрессорной активности T-рег клеток могут быть СБ4+и CD8+ Т-лимфоциты, В-лимфоциты, дендритные клетки, макрофаги, тучные клетки, NK- и NKT-клетки [36, 94, 125].

Механизмы, посредством которых T-рег клетки подавляют активацию и пролиферацию антиген специфических хелперных CD4+ и цитотоксических CD8+ T-лимфоцитов, а также продукцию ими цитокинов, исследованы недостаточно [14].

Широкий спектр супрессорных механизмов, используемых T-рег клетками, включает в себя две основные группы: способы супрессии, направленные на Т-лимфоциты (супрессорные цитокины, потребление IL-2, цитолиз), и способы супрессии, направленные на антигенпрезентирующие клетки (APC) (понижение костимуляции или снижение антигенной презентации)[114].

Конкуренция за IL-2 является механизмом опосредованной T-рег клетками иммунной супрессии. IL-2 - фактор роста всех популяций Т-лимфоцитов, необходимый для их нормального функционирования. IL-2 требуется для дифференцировки Т-рег клеток в тимусе и для поддержания субпопуляции

натуральных T-рег клеток на периферии, а также для индукции индуцибельных Т-рег клеток. Поскольку T-рег клетки, не способны сами продуцировать IL-2, но экспрессируют CD25, а также еще два высоко аффинных компонента рецептора IL-2 (CD122 и CD132), это позволяет им преобладать в потреблении данного цитокина над наивными Т-клетками, которые экспрессируют CD25 только после TCR стимуляции. T-рег клетки, потребляя IL-2 и конкурируя с Foxp3- Т-клетками, ингибируют тем самым их пролиферацию, что приводит к апоптозу CD4+CD25-клеток, индуцированному недостатком цитокина IL-2 [93].

Важным моментом является то, что опухоль сама активно участвует в накоплении T-рег клеток в местах ее локализации. Так, например, опухолевые В-клетки (при фолликулярной лимфоме В-клеток) индуцировали Т-клетки к экспрессии FOXP3 и к приобретению регуляторной функции, тогда как нормальные В-клетки не проявляли таких свойств [6].

Привлечение T-рег клеток вызывается продукцией опухолевыми клетками и опухоль-инфильтрующими макрофагами хемокинов, таких как CCL22 и CCL5. Накопление опухоль-инфильтрующих T-рег клеток возможно благодаря генерации de novo и путем конверсии их из CD4+CD25-эффекторныхТ-клеток или из наивных Т-клеток [110].

Опухолевые клетки способны стимулировать пролиферацию Т-регуляторных клеток как с помощью клеточно-контактных, так и клеточно-контакт-независимых механизмов. TGF-в, продуцируемый опухолевыми клетками вызывает пролиферацию T-рег клеток и преобразование наивных CD4+CD25- клеток в T-рег клетки. Опухолевые клетки способны экспрессировать на своей мембране костимулирующие молекулы CD80 и CD86, при взаимодействии с которыми наивные Т-клетки способны преобразовываться в T-рег клетки. В свою очередь увеличивающееся количество T-рег клеток подавляет функции CD8+ Т-цитотоксических, NK- и CD4+ и других клеток, приводя к прогрессии опухоли [2, 48]. Экспрессия эффекторными клетками молекул адгезии и рецепторов хемокинов также подавляется T-рег, в результате чего происходит снижение миграции эффекторных клеток в орган-мишень [103].

О том, как функционируют Т-рег клетки в местах локализации опухоли, известно немного. Так как опухолевые клетки способны индуцировать развитие Т-рег клеток, можно предположить, что Т-рег клетки могут распознавать опухолевые антигены и поэтому могут быть опухоль-специфичными [50].

Необходимость изучения Т-рег клеток в опухолях различного гистологического типа непременное условие нахождения новых специфических путей противоопухолевой иммунотерапии [50].

1.3. Прогностическое значение FoxP3+ Т-лимфоцитов в инфильтрате опухоли.

Большинство исследований БохР3+ Т-лимфоцитов, посвящено изучению данной субпопуляции клеток в периферической крови онкологических больных [70, 108]. Однако не эти данные отражают состояние местного «тканевого» иммунного ответа [87].

Исследования Т-рег лимфоцитов с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+ в инфильтрате опухоли начали появляться в работах зарубежных исследователей лишь последние годы [37, 43, 90, 101, 129]. Подобные работы отечественных авторов единичны [6, 14,17,18]. Исследования показали, что количество Бохр3+ Т-лимфоцитов достоверно выше, у больных раком мочевого пузыря, желудка, пищевода, поджелудочной железы, щитовидной и молочной железы, простаты, яичников, шейки матки, с опухолями головы и шеи, как в периферической крови, так и в инфильтрате опухоли, по сравнению со здоровыми донорами [66, 70, 77, 79, 104, 108, 110,].

По данным других исследований маркер Т-рег лимфоцитов - БохРЗ также экспрессируется в здоровых тканях молочной, предстательной желез, в эпителии яичников с более низкой экспрессией, чем в опухолях соответствующих локализаций [109, 115,121, 126].

Данные результатов исследования противоречивы, что позволяет предположить про-или антионкогенную роль БохР3+ Т-лимфоцитов в зависимости от типа опухоли [70].

Оценка количества Foxp3+ Т лимфоцитов в лимфоидном инфильтрате опухоли у больных раком молочной железы выявила отрицательную корреляцию с ОВ и БРВ больных. Повышение количества Бохр3+ Т- лимфоцитов коррелировало с высоким индексом пролиферации Ю67, степенью злокачественности, метастазированием опухоли в регионарные лимфатические узлы, что позволило рассматривать данный маркер как новый независимый фактор прогноза течения рака молочной железы [72, 115].

По результатам мета-анализа 13 исследований гепатоцеллюлярного рака и рака желудка, которые проводились последние годы, было выявлено, что для гепатоцеллюлярного рака и рака желудка 1 -3-5-летняя ОВ была выше в группе больных с низкой экспрессией Бохр3, чем в группе с высокой экспрессией БохрЗ. Соответствующие 1-3-5-летние рецидивы заболевания были выше в группе больных с высокой экспрессией Бохр3, чем в группе с низкой экспрессией БохрЗ. Таким образом, высокая экспрессия БохрЗ в лимфоцитах, инфильтрирующих опухоль является неблагоприятным прогностическим фактором течения гепатоцеллюлярного рака и рака желудка [131].

В тоже время мета-анализ 10 исследований колоректального рака, включающих 2756 пациентов показал, что у больных с колоректальным раком общая 1-3-5 летняя выживаемость была высокой в группе наблюдения с высокой экспрессией Бохр3, чем в группе с низкой экспрессией Бохр3. Авторы не нашли достоверных различий в прогрессировании болезни в обоих группах, но предположили, что так как колоректальный рак развивается в бактериальной микросреде, то благоприятный прогностический эффект FoxP3+ Т-лимфоцитов возможно связан с их способностью подавления воспалительных реакций, вызванных кишечными бактериями [131].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Божченко, Яна Анатольевна, 2018 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алиев, М.Д. Клинические рекомендаци по диагностике и лечению больных меланомой кожи / М.Д. Алиев, Б.Ю. Бохян, Л.В. Демидов и др. // Москва, 2014. - С. 3.

2. Анисимов, В.В. Актуальные вопросы хирургического лечения больных первичной меланомой кожи / В.В. Анисимов, Ю.В. Семилетова, А.С. Барчук и др. // Сибирскиий онкологический журнал. - 2010. - Т. 2, N 38. - С. 54.

3. Безнос, О.А. Взаимосвязь субпопуляций интратуморальных лимфоцитов с клиническими и патоморфологическими особенностями рака молочной железы / О.А. Безнос, Д.А. Буров, В.Ю. Сельчук и др. // Опухоли женской репродуктивной системы. - 2016. - № 12. - C. 13-15.

4. Бережная, Н.М. Роль клеток системы иммунитета в микроокружении опухоли. Клетки и цитокины - участники воспаления / Н.М. Бережная // Онкология. - 2009. - Т.11, №1 - С. 6.

5. Демидов, Л.В. Совершенствование методов диагностики меланомы кожи / Л.В. Демидов, Д.В. Соколов, И.В. Булычева // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. - 2007. - Т.18, №1. - С. 36-41.

6. Жулай, Г.А. Регуляторные Т-лимфоциты СD4+CD25+FOXP3+. Перспективы применения в иммунотерапии / Г.А. Жулай, Е.К. Олейник // Труды Карельского научного центра РАН. - 2012. - № 2. - С. 3-17

7. Златник, Е.Ю. Факторы локального иммунитета у больных раком слизистой оболочки рта и языка с отсутствием и наличием регионарных метастазов и рецидивов / Е.Ю. Златник, В.П. Светицкий // Фундаментальные исследования. - 2015. - № 3. - С. 1953-1957.

8. Златник, Е.Ю. Прогностическое значение лимфоцитарной инфильтрации у больных раком вульвы / Е.Ю. Златник, Г.А. Неродо, А.В. Бахтин и др. // Научный журнал Куб ГАУ. - 2017. - T. 125, № 1. - C. 132-135.

9. Златник, Е.Ю. Характеристика общего и локального клеточного иммунитета у больных раком яичника / Е.Ю. Златник, Г.А. Неродо, А.В. Бахтин и

др. // Международный журнал экспериментального образования. - 2014. - №1 - С. 72-75

10. Кабановская, И.Н. Характеристика действия инфильтрирующих опухоль иммунных клеток / И.Н. Кабановская // Международный журнал экспериментального образования. - 2010. - №. 8. - С 37-39.

11. Злокачественные новообразования в России в 2015 году (заболеваемость и смертность) / под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России, 2017. - 250 с.: ил.

12. Состояние онкологической помощи в России в 2016 году / под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России, 2017. - 27 с.: ил.

13. Константинова, М.М. Ингибиторы внутриклеточной передачи сигнала при меланоме: перспективы и разочарования таргетной терапии / М.М. Константинова // Современная онкология. - 2007. - Т.9, №3. - С.46.

14. Кравченко, П.Н. Система регуляторных Т-клеток и аутоиммунные процессы / П.Н. Кравченко, Е.К. Олейник // Труды Карельского научного центра РАН. - 2013. - №.3. -С 18-30.

15. Малышев, А.С. Применение дерматоскопии для оптимизации ранней диагностики меланомы кожи / А.С. Малышев, Т.Г. Рукша // Сибирский онкологический журнал. - 2009. - № 1. - С.80.

16. Сакагучи, Ш. Стражи иммунной системы. Ш.Сакагучи, З. Фегервари // В мире науки. - 2006. - №. 12. - С 28-33.

17. Фильчаков, Ф.В. Локальный иммунный ответ у больных меланомой кожи: связь с эффективностью интерферонотерапии / Ф.В. Фильчаков, А.Н. Грабовой, А.Д. Лён // Опухоли кожи, мягких тканей, костей. - 2014. - ^ 4, №16. -С12-16.

18. Черных, Е.Р. Взаимосвязь регуляторных т-клеток с уровнем са-125 и объемом опухолевой массы у больных раком яичников / Е.Р. Черных, Е.В.

Курганова, М.А. Тихонова и др. // Медицинская иммунология. - 2010. - T. 12, № (4-5). - P. 311-318.

19. Чуров, А.В. TGF-1 и регуляторные Т-клетки в формировании иммунной супрессии у онкологических больных / А.В. Чуров, Е.К. Олейник, В.М. Олейник // Журнал 'Цитокины и воспаление'. - 2009. - № 2. - C. 11-15.

20. Шамилев, Ф.Э. Изучение субпопуляций интратуморальных лимфоцитов у больных раком молочной железы / Ф.Э. Шамилев // Онкогинекология. - 2012. - №4. - C. 53-55.

21. Ahmadzadeh, M. FOXP3 expression accurately defines the population of intratumoral regulatory T cells that selectively accumulate in metastatic melanoma lesions / M. Ahmadzadeh, A. Felipe-Silva, B. Heemskerk et al. // Blood. - 2008. - Vol. 112(13). - P. 4953-4960.

22. Anraku, M. Impact of tumor-infiltrating T cells on survival in patients with malignant pleural mesothelioma / M. Anraku, S. K. Cunningham, Z. Yun et al. // J. Thorac Cardiovasc Surg. - 2008. - Vol.135. - P. 823-829.

23. Azimi, F. Tumor-infiltrating lymphocyte grade is an independent predictor of sentinel lymph node status and survival in patients with cutaneous melanoma / F. Azimi, R.A. Scolyer, P. Rumcheva et al. // J. Clin. Oncol. - 2012. - Vol. 30(21). - P. 2678-2683.

24. Azzimonti, B. Foxp3+ CD25+ regulatory T-cell infiltration is associated with high-grade cutaneous squamous cell carcinoma and counterbalanced by CD8+/Foxp3+ CD25+ ratio / B. Azzimonti, E. Zavattaro, M. Provasi et al. // J. Dermatol. - 2015. - Vol. 172(1). - P. 64-73.

25. Balch, C.M. Final version of 2009 AJCC melanoma staging and classification / C.M. Balch, J.E. Gershenwald, S.J. Soong et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. - Vol. 27(36). - P. 6199-6206.

26. Balch, C.M. Prognostic factors analysis of 17,600 melanoma patients: validation of the American Joint Committee on Cancer melanoma staging system / C.M. Balch, S.J. Soong, J.E. Gershenwald et al. // J. Clin. Oncol. - 2001. - Vol. 19. - P. 3622-3634.

27. Burton, A.L Prognostic factors in young women with cutaneous melanoma / A.L. Burton, M.E. Egger, A.R. Quillo et al. // Am. J. Surg. - 2014. - Vol. 207(1). - P. 102-108.

28. Busam, K.J. Histologic classification of tumor-infiltrating lymphocytes in primary cutaneous malignant melanoma. A study of interobserver agreement / K.J. Busam, C.R. Antonescu, A.A. Marghoob et al. // Am. J. Clin. Pathol. - 2001. - 2014. -Vol. 115(6) - P. 856-860.

29. Camisaschi, C. Immune cells in the melanoma microenvironment hold information for prediction of the risk of recurrence and response to treatment / C. Camisaschi, V. Vallacchi, C. Castelli et al. // Expert Rev. Mol. Diagn. - 2014. - Vol. 14(6). - P.643-646.

30. Carreras, J. High numbers of tumor-infiltrating programmed cell death 1-positive regulatory lymphocytes are associated with improved overall survival in follicular lymphoma / J. Carreras, A. Lopez-Guillermo, G. Roncador et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. - Vol. 27. - P.1470-1476.

31. Chen, K.J. Intratumoral regulatory T cells alone or in combination with cytotoxic T cells predict prognosis of hepatocellular carcinoma after resection / K.J. Chen, L. Zhou, H.Y. Xie et al. // Med. Oncol. - 2012. - Vol. 29(3) - P.1817-1826.

32. Cintolo, J.A. Local immune response predicts survival in patients with thick (t4) melanomas / J.A. Cintolo, P. Gimotty, A. Blair et al. // Ann. Surg. Oncol. -2013. - Vol. 20(11) - P.3610-3617.

33. Clark, W.H. Model predicting survival in stage I melanoma based on tumor progression / W.H. Clark, D.E. Elder // J. Natl. Cancer. Inst. - 1989. - Vol. 81(24). - P. 1893-1904.

34. Clemente, C.G. Prognostic value of tumor infiltrating lymphocytes in the vertical growth phase of primary cutaneous melanoma // C.G. Clemente, M.C. Mihm, R.Bufalino et al. // Cancer. - 1996. -Vol.77 -P.1303-1310.

35. Correll, A. Increased regulatory T-cell frequencies in patients with advanced melanoma correlate with a generally impaired T-cell responsiveness and are

restored after dendritic cell-based vaccination / A. Correll, A. Tuettenberg, C. Becker et al. // Jonuleit H. Exp. Dermatol. - 2010. - Vol. 19(8). - P. 213-221.

36. Corthay, A. How do Regulatory T Cells Work? / A. Corthay // Scand. J. Immunol. - 2009. - Vol. 70(4). - P. 326-336.

37. Cunha, L.L. Foxp3 expression is associated with aggressiveness in differentiated thyroid carcinomas / L.L. Cunha, E.C. Morari, S. Nonogaki et al. // Clinics (Sao Paulo). - 2012. - Vol. 67(5). - P.483-438.

38. Deinlein, T. Dermoscopic characteristics of melanoma according to the criteria "ulceration" and "mitotic rate" of the AJCC 2009 staging system for melanoma / T. Deinlein, E. Arzberger, I. Zalaudek et al. // PLoS One. - 2017. - Vol. 12(4). P. 346350.

39. Deschoolmeester, V. Tumor infiltrating lymphocytes: an intriguing player in the survival of colorectal cancer patients / V. Deschoolmeester, M. Baay, E. Van Marck et al. // BMC Immunology. - 2010. - Vol.12. -P. 11-19

40. Dobrzanski, M.J. CD8-mediated Type 1 antitumor responses selectively modulate endogenous differentiated and nondifferentiated T cell localization, activation and function in progressive breast cancer / M.J. Dobrzanski, J.B. Reome, J.C. Hylind et al. // J. Immunol. - 2006 - Vol. 177 - P. 8191-8201.

41. Donizy, P. Contrary effect of two types of spatial distribution (diffuse versus marginal) of CD8-positive lymphocytes on clinical outcome in melanoma patients / P. Donizy, P. Biecek, M. Kaczorowski et al. // Int. J. Clin. Exp. Pathol. -2016. - Vol. 9(8). - P.8415-8423.

42. Duman, N. Nevus-Associated versus de novo Melanoma: Do They Have Different Characteristics and Prognoses? / N. Duman, G. Erkin, S. Karahan et al. // Dermatopathology (Basel). - 2015. - Vol. 2(1). - P.46-51.

43. Ebert, L.M. The regulatory T cell-associated transcription factor FoxP3 is expressed by tumor cells / L.M. Ebert, B.S.Tan, J. Browning et al/ // Cancer Res. -2008. - Vol. 68(8). - P.3001-3009.

44. Erfani, N. FoxP3+ regulatory T cells in peripheral blood of patients with epithelial ovarian cancer / N. Erfani, M. Hamedi-Shahraki, S. Rezaeifard et al. // Iran. J. Immunol. - 2014. - Vol. 11(2). - P.105-112.

45. Fehervari, Z. CD4 (+) Tregs and immune control / Z. Fehervari, S. Sakaguchi // J. Clin. Invest. - 2004. - Vol. 114 (9). - P. 1209-1217.

46. Feng, Z. Multispectral imaging of formalin-fixed tissue predicts ability to generate tumor-infiltrating lymphocytes from melanoma / Z. Feng, S. Puri, T. Moudgil et al. // Journal for ImmunoTherapy of Cancer. - 2015. - Vol.3. - P.47.

47. Flammiger, A. High tissue density of FOXP3+ T cells is associated with clinical outcome in prostate cancer / A. Flammiger, L. Weisbach, H. Huland et al. // Eur. J. Cancer.- 2013. - Vol. 49(6). -P. 1273-1279.

48. Fontenot, J.D. Regulatory T cell lineage specification by the forkhead transcription factor foxp3 / J.D. Fontenot, J.P. Rasmussen, L.M. Williams et al. // Immunity. - 2005. - Vol. 22. - P.329-341.

49. Fortes, C. Tumor-infiltrating lymphocytes predict cutaneous melanoma survival / C. Fortes, S. Mastroeni, T.J. Mannooranparampil et al. // Melanoma Res. -2015. Vol. 25(4). - P.306-311.

50. Forward, N.A. Signaling through TLR7 enhances the immunosuppressive activity of murine CD4+CD25+ T regulatory cells / N.A. Forward, S.J. Furlong, Y. Yang et al. // J. Leukoc. Biol. - 2010. - Vol. 87(1). - P.117-125.

51. Fujii, H. Perturbations of both nonregulatory and regulatory FOXP3+ T cells in patients with malignant melanoma / H. Fujii, A. Arakawa, A. Kitoh et al. // J. Dermatol. - 2011. - Vol. 164(5). - P.1052-1560.

52. Fukunaga, A. CD8 tumor-infiltrating lymphocytes together with CD4 tumor-infiltrating lymphocytes and dendritic cells improve the prognosis of patients with pancreatic adenocarcinoma / A. Fukunaga, M. Miyamoto, Y. Cho et al. // Pancreas. - 2004. - Vol. 28(1). -P. 26-31.

53. Garin, M.I. Galectin-1: a key effector of regulation mediated by CD4+CD25+ T cells / M.I. Garin, C.C. Chu, D. Golshayan et al. // Blood. - 2007. -Vol. 109(5) - P. 2058-2065.

54. Gerber, A.L. High expression of FOXP3 in primary melanoma is associated with tumour progression / A.L. Gerber, A. Münst, C. Schlapbach et al. // Br. J. Dermatol. - 2014. - Vol. 170(1). - P.103-109.

55. Giusca, S.E. Comparative analysis of CD4 and CD8 lymphocytes — evidences for different distribution in primary and secondary liver tumors / S.E. Giusca, P.M. Wierzbicki, C.Amalinei et al. // Folla histochemica et cytobiologia. - 2015. -Vol. 53 (3). - P. 272-281.

56. Goeppert, B. Prognostic impact of tumour-infiltrating immune cells on biliary tract cancer / B. Goeppert, L. Frauenschuh, M. Zucknick et al. // Br. J. Cancer. -2013. - Vol. 109(10). - P. 2665-2674.

57. Grotz, T.E. Tumor-infiltrating lymphocyte response in cutaneous melanoma in the elderly predicts clinical outcomes / T.E. Grotz, F. Vaince, T.J. Hieken // Melanoma Res. - 2013. - Vol. 23(2). - P. 132-137.

58. Ha, T.Y. The Role of Regulatory T Cells in Cancer / T.Y. Ha. // J. Clin. Oncol. - 2009. - Vol. 27. - P.186-192.

59. Hadrup, S.R. Effector CD4 and CD8 T Cells and Their Role in the Tumor Microenvironment / S.R. Hadrup, D. Marco, P. Straten. // Cancer Microenviron. -2013. - Vol. 6(2). - P. 123-133.

60. Hanakawa, H. Regulatory T-cell infiltration in tongue squamous cell carcinoma / H. Hanakawa, Y.Orita, Y. Sato et al. // Acta Otolaryngol. - 2014. - Vol. 134(8). - P. 859-864.

61. Huen, J. Epigenetic control of FOXP3 expression: the key to a stable regulatory T-cell lineage? / J. Huen, J.K. Polansky, A. Hamann // Nat. Rev. Immunol. -2009. - Vol. 9. - P. 83-89.

62. Hussein, M.R. Immunohistological characterisation of tumour infiltrating lymphocytes in melanocytic skin lesions / M.R. Hussein, D.A.H. Elsers, S.A. Fadel et al. // J. Clin. Pathol. - 2006. - Vol. 59 (3). - P. 316-324.

63. Inge, H.G. Different Subsets of Tumor-Infiltrating Lymphocytes Correlate with Macrophage Influx and onosomy 3 in Uveal Melanoma. Anatomy and Pathology / H.G. Inge, T.H. Bronkhors, V.Khanh // Oncology. - 2012. - Vol. 53. - P. 5370-5378.

64. Jarnicki, AG. Suppression of antitumor immunity by IL-10 and TGF-beta-producing T cells infiltrating the growing tumor: influence of tumor environment on the induction of CD4+ and CD8+ regulatory T cells / AG. Jarnicki, J. Lysaght, S. Todryk et al. // J. Immunol. - 2006. - Vol. 177(2). - P. 896-904.

65. Javia, L.R. CD4+CD25+ suppressor lymphocytes in the circulation of patients immunized against melanoma antigens / L.R. Javia, R. Rosenberg // J. Immunother. - 2003. - Vol. 26(1). - P. 85-93.

66. Jensen, H.K. Increased intratumoral FOXP3-positive regulatory immune cells during interleukin-2 treatment in metastatic renal cell carcinoma / H.K. Jensen, F. Donskov, M. Nordsmark et al. // Clin. Cancer. Res. - 2009. - Vol.15. -P. 1052-1058.

67. Joosse, A. Gender differences in melanoma survival: female patients have a decreased risk of metastasis / A. Joosse, E. de Vries, R. Eckel et al. // J. Invest. Dermatol. - 2011. - Vol. 131(3). - P. 719-726.

68. Karagiannis, P. IgG4 subclass antibodies impair antitumor immunity in melanoma / P. Karagiannis, A.E. Gilbert, D.H. Josephs / J. Clin Invest. - 2013. - Vol. 123(4). - P. 1457-1474.

69. Kaur, C. The correlation of regression in primary melanoma with sentinel lymph node status / C. Kaur, R.J. Thomas, N. Desai et al. // Clin. Pathol. - 2008. - Vol. 61(3). - P.297-300.

70. Kawaida, H. Distribution of CD4+CD25high regulatory T-cells in tumor-draining lymph nodes in patients with gastric cancer / H. Kawaida, K. Kono, A. Takahashi et al. // J. Surg. Res. - 2005. - Vol. 124. - P. 151-157.

71. Kesmodel, S.B. Mitotic rate as a predictor of sentinel lymph node positivity in patients with thin melanomas / S.B. Kesmodel, G.C. Karakousis, J.D. Botbyl // Ann. Surg. Oncol. - 2005. - Vol. 12(6). - P.449-458.

72. Kim, C.S. Regulatory T cells and TGF-01 in clinically localized renal cell carcinoma: Comparison with age-matched healthy controls / C.S. Kim, Y. Kim, T. Kwon et al. // Urol. Oncol. - 2015. - Vol. 33(3). - P. 19-25.

73. King, R. Recurrent nevus phenomenon: a clinicopathologic study of 357 cases and histologic comparison with melanoma with regression / R. King, , B.A. Hayzen, R.N. Page et al. // Modern Pathology. - 2009. - Vol. 22. - P. 611-617.

74. Knol, A.C. Prognostic value of tumor-infiltrating Foxp3+ T-cell subpopulations in metastatic melanoma / A.C. Knol, J.M. Nguyen, G. Quereux et al. // Exp. Dermatol. - 2011. - Vol. 20(5). - P. 430-434.

75. Ladanyi, A. FOXP3+ cell density in primary tumor has no prognostic impact in patients with cutaneous malignant melanoma / A. Ladanyi, A. Mohos, B. Somlai et al. // Pathol. Oncol. Res. - 2010. - Vol. 16(3). - P.303-309.

76. Lazarski, C.A. Regulating T reg cells at sites of inflammation / C.A. Lazarski, A. Hughson, D.K. Sojka et al. // Immunity. - 2008. - Vol. 29(4). - P. 511.

77. Leffers, N. Prognostic significance of tumor-infiltrating T-lymphocytes in primary and metastatic lesion of advanced stage ovarian cancer / N. Leffers, M.J.M. Gooden, R.A. de Jong et al. // Cancer Immunol. Immunother. - 2009. - Vol. 58. - P. 449-459.

78. Leon, K. How regulatory CD25+CD4+ T cells impinge on tumor immunobiology: The differential response of tumors to therapies / K. Leon, K. Carcia, J. Carneiro et al. // J. Immunol. - 2007. - Vol. 179. - P. 5659-5668.

79. Li, X. Proportion of CD4CD25 regulatory T cell is increased in the patients with ovarian carcinoma / X. Li, D.F. Ye, X. Xie et al. Cancer Invest. - 2005. - Vol. 23. - P.399-403.

80. Liu, K. Tumor-Infiltrating Immune Cells Are Associated With Prognosis of Gastric Cancer / K. Liu, K. Yang, B. Wu et al. // Medicine (Baltimore). - 2015. - Vol. 94(39). -P. 1631.

81. Liu, Z. Tumor regulatory T cells potently abrogate antitimor immunity / Z. Liu, J.H. Kim, L.D. Falo et al. // J. Immunol. - 2009. - Vol. 182. - P.6160-6167.

82. Lyle, S. TIA-1 positive tumor-infiltrating lymphocytes in nevi and melanomas / S. Lyle, K.E. Salhany, D.E. Elder et al. // Mod. Pathol. - 2000. - Vol. 13(1). - P.52-55.

83. Maurichi, A. Prediction of survival in patients with thin melanoma: results

from a multi-institution study / A. Maurichi, R. Miceli, T. Camerini et al. // J. Clin. Oncol. - 2014. - Vol. 32(23). -P. 2479-2485.

84. Merio, A. FOXP3 expression and overall survival in breast cancer / A. Merio, P. Casalini, M.L. Carcangiu et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. - Vol. 27. - P. 17461752.

85. Miller, A.M. CD4+CD25high T cells are enriched in the tumor and peripheral blood of prostate cancer patients / A.M. Miller, K. Lundberg, V. Ozenci et al. // J. Immunol. - 2006 - Vol. 177. - P. 7398-7405.

86. Matsuzaki, J. Direct tumor recognition by a human CD4+ T-cell subset potently mediates tumor growth inhibition and orchestrates anti-tumor immune responses / J. Matsuzaki, T. Tsuji, F. Immanuel et al. // Sci Rep. - 2015. - Vol. 8. - P. 5.

87. Miracco, C. Utility of tumour-infiltrating CD25FOXP3+ regulatory T cell evaluation in predicting local recurrence in vertical growth phase cutaneous melanoma. C. Miracco, V. Mourmouras, M. Biagioli et al. // Oncology Reports. - 2007. - Vol.18. - P.1115-1122.

88. Miyara, M. Therapeutic approaches to allergy and autoimmunity based on FoxP3+ regulatory T-cell activation and expansion / M. Miyara, K.Wing, S. Sakaguchi // J. Allergy Clin. Immunol. - 2009. - Vol. 123(4). - P. 749-755.

89. Neagu, M. Immune Parameters in The Prognosis and Therapy Monitoring of Cutaneous Melanoma Patients: Experience, Role, and Limitations. Hindawi Publishing Corporation / M. Neagu, C.Constantin, S. Zurac // BioMed Research International. - 2013. - Vol. 25 - P.13.

90. Niu, J. Foxp3 expression in melanoma cells as a possible mechanism of resistance to immune destruction / J. Niu, C. Jiang, C. Li et al. // Cancer Immunol. Immunother. - 2011. - Vol. 60(8). - P. 1109-1118.

91. Nosho, K. Tumour-infiltrating T-cell subsets, molecular changes in colorectal cancer and prognosis: cohort study and literature review / K. Nosho, Y. Baba, N. Tanaka et al. // J. Pathol. - 2011. - Vol. 222(4). - P. 350-366.

92. Paek, S.C. The impact of factors beyond Breslow depth on predicting sentinel lymph node positivity in melanoma / S.C. Paek, K.A. Griffith, T.M. Johnson et

al. // Cancer. - 2007. - Vol. 109(1). P. 100-108.

93. Pandiyan P. The molecular mechanisms of regulatory T cell immunosuppression / P. Pandiyan, L. Zheng, M.J. Lenardo // Front. Immunol. - 2011. -Vol. 24 (2). - P. 60.

94. Park, C.K. Clinicopathological significance of intratumoral and peritumoral lymphocytes and lymphocyte score based on the histologic subtypes of cutaneous melanoma / C.K. Park, S.K. Kim // Oncotarget. - 2017. - Vol. 8(9). -P.14759-14769.

95. Piepkorn, M. Prognostic factors in cutaneous malignant melanoma. In: Pathology of Melanocytic Nevi and Malignant Melanoma / M. Piepkorn, R.L. Barnhill // Springer-Verlag, New York, NY. - 2004. - P.372-394.

96. Pohlers, D. Constitutive upregulation of the transforming growth factor-ß pathway in rheumatoid arthritis synovial fibroblasts / D. Pohlers, A. Beyer, D. Koczan et al. // Arthritis. Res. Ther. - 2007. - Vol. 9 (3). - P. 59-65.

97. Prescott, S.L. Immune dysregulation in allergic respiratory disease: the role of T regulatory cells / S.L. P rescott, J.A. Dunstan // Pulm. Pharmacol. - 2005. - Vol.18 (3). - P. 217-228.

98. Prall, F. Prognostic role of CD8 tumor-infiltrating lymphocytes in stage III colorectal cancer with and without microsatellite instability / F. Prall, T.Duhrkop, V. Weirich et al. // Hum. Pathol. - 2004. - Vol. 35. -P. 808-816.

99. Preston, C.C. The ratios of CD8+ T cells to CD4+CD25+ FOXP3+ and FOXP3- T cells correlate with poor clinical outcome in human serous ovarian cancer / C.C. Preston, M.J Maurer, A.L. Oberg // PLoS One. - 2013. - Vol. 8(11). - P. 258-276.

100. Preynat-Seauve, O. Melanoma-infiltrating dendritic cells induce protective antitumor responses mediated by T cells / O. Preynat-Seauve, E. Contassot, P. Schuler et al. // Melanoma Res. - 2007. - Vol. 17(3). -P. 169-176.

101. Quaglino, P. FoxP3 expression on melanoma cells is related to early visceral spreading in melanoma patients treated by electrochemotherapy / P. Quaglino, S. Osella-Abate, F. Marenco et al. // Pigment Cell Melanoma Res. - 2011. - Vol. 24(4). - P. 734-736.

102. Riazi, F. Comparative Analysis of CD4+ and CD8+ T Cells in Tumor Tissues, Lymph Nodes and the Peripheral Blood from Patients with Breast Cancer / F. Riazi, S. Ajdary, R. Omranipour et al. // Iranian Biomedical Journal. - 2015. - Vol. 19(1). - P. 35-44.

103. Roncarolo, M.G. Type 1 T regulatory cells / M.G. Roncarolo, R. Bacchetta, C. Bordignon et al. // Immunol. Rev. - 2001. - Vol. 182. - P. 68-79.

104. Rozkova, D. FOCUS on FOCIS: combined chemo-immunotherapy for the treatment of hormonerefractory metastatic prostate cancer / D. Rozkova, , H. Tiserova, J. Fucikova et al. // Clin. Immunol. - 2009. - Vol. 131. - P.1-10.

105. Sakaguchi, S. FOXP3+ regulatory T cells in the human immune system / S. Sakaguchi, M. Miyara, C.M. Costantino et al. // Nat. Rev. Immunol. - 2010. - Vol. 10(7). P. 490-500.

106. Salama, P. Tumor-infiltrating FOXP3+ T regulatory cells show strong prognostic significance in colorectal cancer / P. Salama, M. Phillips, F. Grieu et al. // J. Clin. Oncol. - 2009. -Vol. 27. - P. 186-192.

107. Saldanha, G. Novel Numerical Scoring System for Melanoma Tumor-infiltrating Lymphocytes Has Better Prognostic Value Than Standard Scoring / G. Saldanha, K. Flatman, K.W. Teo. et al. // Am. J. Surg. Pathol. - 2017. - Vol.41 (7). - P. 906-914.

108. Sasada, T. CD4+CD25+ regulatory Tcells in patients with gastrointestinal malignancies: possible involvement of regulatory T cells in disease progression / T. Sasada, M. Kimura, U. Yoshida et al. // Cancer. - 2003. -Vol. 98. - P. 1089-1099.

109. Sato, E. Intraepithelial CD8 tumor infiltrating lymphocytes and a high CD8/regulatory T cell ratio are associated with favorable prognosis in ovarian cancer / E. Sato, S.H. Olson, J. Ahn et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2005. - Vol. 102. - P. 18538-18543.

110. Shafer-Weaver, K.A. Tumor-specific CD8+ T cells infiltrating prostatic tumors are induced to become suppressor cells / K.A. Shafer-Weaver, M.J. Anderson, K. Stagliano et al. J. Immunol. - 2009. - Vol. 183(8). - P. 4848-4852.

111. Shah, W. A reversed CD4/CD8 ratio of tumor-infiltrating lymphocytes and a high percentage of CD4+FOXP3+ regulatory T cells are significantly associated with clinical outcome in squamous cell carcinoma of the cervix / W. Shah, X. Yan, J. Li et al. // Cellular & Molecular Immunology. - 2011. -Vol.8. - P. 59-66.

112. Shang, B. Prognostic value of tumor-infiltrating FoxP3+ regulatory T cells in cancers: a systematic review and meta-analysis / B. Shang, Y. Liu, S.J. Jiang et al. // Sci Rep. - 2015. - Vol.14 (5). - P.1-9.

113. Shen, Z. Higher intratumoral infiltrated Foxp3+ Treg numbers and Foxp3+/CD8+ ratio are associated with adverse prognosis in resectable gastric cancer / Z. Shen, S. Zhou, Y. Wang et al. // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 2010. - Vol. 136(10). -P. 1585-1595.

114. Shevach, E.M. Mechanisms of foxp3+ T regulatory cell-mediated suppression. Mmunity / E.M. Shevach. - 2009. - Vol. 30(5). - P. 636-45.

115. Takenaka, M. FOXP3 expression in tumor cells and tumor-infiltrating lymphocytes is associated with breast cancer prognosis / M. Takenaka, N. Seki, U. Toh et al. // Mol. Clin. Oncol. - 2013. - Vol. 1(4). - P.625-632.

116. Taylor, R.C. Tumor-infiltrating lymphocytes predict sentinel lymph node positivity in patients with cutaneous melanoma / R.C. Taylor, A. Patel, K.S. Panageas et al. // J. Clin Oncol. - 2007 - Vol. 1(25). - P.869-875.

117. Teixeira, V. Prediction of sentinel node status and clinical outcome in a melanoma centre / V. Teixeira, R. Vieira, I. Coutinho et al. // J. Skin Cancer. - 2013. -Vol. 23. -P.1-7.

118. Thomas, N.E. Tumor-infiltrating lymphocyte grade in primary melanomas is independently associated with melanoma-specific survival in the population-based genes, environment and melanoma study / N.E. Thomas, K.J. Busam, L. From et al. // J Clin Oncol. - 2013. - Vol. 31(33). P. 4252-4259.

119. Toda, M. Polarized in vivo expression of IL-11 and IL-17 between acute and chronic skin lesions / M. Toda, D.Y. Leung, S. Molet et al. // J. Allergy Clin. Immunol. - 2003. - Vol. 111 (4). - P. 875-881.

120. Tokuno, K. Increased prevalence of regulatory T-cells in the peripheral

blood of patients with gastrointestinal cancer / A. Tokuno, K. Hazama S. Yoshino et al. // Res. - 2009. - Vol. 29. - P.1527-1532.

121. Valdman, A. Distribution of Foxp3-, CD4- and CD8-positive lymphocytic cells in benign and malignant prostate tissue / A. Valdman, S.J. Jaraj, E. Compérat et al. // APMIS. - 2010. - Vol. 118(5). -P. 360-365.

122. Verhagen, J. Absence of T-regulatory cell expression and function in atopic dermatitis skin / J. Verhagen, M. Akdis, C. Traidl-Hoffmann et al. // J. Allergy Clin. Immunol. - 2006. - Vol. 117(1). - P. 176-183.

123. Viguier, M. Foxp3 expressing CD4+CD25(high) regulatory T cells are overrepresented in human metastatic melanoma lymph nodes and inhibit the function of infiltrating T cells / M. Viguier, F. Lemaître, O. Verola et al. // J. Immunol. - 2004. -Vol. 173(2). - P. 1444-1453.

124. Voinea, S. Impact of gender and primary tumor location on outcome of patients with cutaneous melanoma / S. Voinea, A.Blidaru, E. Panaitescu et al. // A.J. Med Life. - 2016. - Vol. 9(4). - P. 444-448.

125. Walker, M.R. Induction of FoxP3 and acquisition of T regulatory activity by stimulated human CD4+CD25-T cells / M.R. Walker, D.J. Kasprowicz, V.H. Gersuk et al. // J. Clin. Invest. - 2003. - Vol. 112. - P. 1437-1443.

126. Wang, W.H. FOXP3 expression and clinical characteristics of hepatocellular carcinoma / W.H. Wang, C.L. Jiang, W. Yan et al. // World J. Gastroenterol. - 2010. - Vol. 16(43). - P. 5502-559.

127. Weatherhead, S.C. Melanomas arising from naevi and de novo melanomas-does origin matter? / S.C. Weatherhead, M. Haniffa, C.M. Lawrence. // J. Dermatol. -2007. - Vol. 156(1). - P.72-76.

128. Weiss, S.A Immunologic heterogeneity of tumor-infiltrating lymphocyte composition in primary melanoma / S.A. Weiss, S.W. Han., K. Lui et al. // Hum Pathol. - 2016. - Vol.57. -P.116-125.

129. Wu, M. Changes in regulatory T cells in patients with ovarian cancer undergoing surgery: Preliminary results / M. Wu, X.Chen, J. Lou et al. // Int Immunopharmacol. - 2017. - Vol. 47. - P. 244-250.

130. Xie, Y. Tumor apoptotic bodies inhibit CTL responses and antitumor immunity via membrane-bound transforming growth factor-beta1 inducing CD8+ T-cell anergy and CD4+ Tr1 cell responses / Y. Xie, O.Bai, J. Yuan et al. // Cancer Res. -2009. - Vol. 69 (19). - P. 7756-7766.

131. Yoon, H.H. Prognostic impact of FoxP3+ regulatory T cells in relation to CD8+ T lymphocyte density in human colon carcinomas / H.H. Yoon, J.M. Orrock, N.R. Foster et al. // PLoS One. - 2012. - Vol. 7(8). - P. 422 -434.

132. Zeestraten, E. FoxP3- and CD8-positive Infiltrating Immune Cells Together Determine Clinical Outcome in Colorectal Cancer / E. Zeestraten, A. Van Hoesel, F.M. Speetjens et al. // Cancer Microenvironment. - 2013. - Vol.6. - P.31-39.