Молекулярно-биологические свойства изолятов вируса инфекционного ларинготрахеита птиц, выявленных на территории российской федерации в период с 2012 по 2017 гг. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Козлов Антон Александрович

• Козлов Антон Александрович
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Козлов Антон Александрович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика вируса ИЛТ

1.1.1. Классификация

1.1.2. Состав и морфология

1.1.3. Устойчивость к физико-химическим факторам

1.1.4. Структура генома

1.1.5. Репликация вируса

1.1.6. Биологические свойства вируса

1.1.7. Вакцинопрофилактика

1.1.8. Молекулярная эпидемиология

1.1.8.1. Диагностика и дифференциация

1.1.8.2. Полногеномное секвенирование

1.2. Заключение по обзору литературы

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Вирусы ИЛТ птиц

2.1.2. Нуклеотидные последовательности полных геномов изолятов и штаммов вируса ИЛТ опубликованные

в базе данных GenBank

2.1.3. Наборы реактивов

2.1.4. Растворы, буферные смеси, реактивы и ферменты

2.1.5. Праймеры

2.1.6. Оборудование

2.1.7. Куриные эмбрионы

2.1.8. Естественно восприимчивые животные

2.2. Методы

2.2.1. Дизайн праймеров для ПЦР

2.2.2. Выделение суммарной нуклеиновой кислоты

2.2.3. ПЦР в режиме реального времени

2.2.4. Классическая ПЦР

2.2.5. Очистка продуктов ПЦР

2.2.6. Секвенирование амплифицированных фрагментов

2.2.7. Очистка и концентрирование вируса ИЛТ

2.2.8. Секвенирование последовательности генома

2.2.9. Компьютерный анализ и сравнение первичных структур нуклеиновых кислот

2.2.10. Выделение и культивирование вируса ИЛТ

2.2.11. Определение титра инфекционной активности вируса

2.2.12. Экспериментальное заражение естественно восприимчивых животных

2.2.13. Серологические исследования

2.2.14. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Анализ нуклеотидных последовательностей областей генома изолятов и штаммов вируса ИЛТ, представленных в GenBank

3.1.1. Анализ области гена 1СР4 и полученных нуклеотидных последовательностей участка гена тимидинкиназы (ТК) и участка нетранслируемой области гена 1СР4 (UTRICP4) штаммов и изолятов вируса ИЛТ, циркулирующих на территории РФ

и представленных в GenBank

3.2. Определение и анализ нуклеотидных последовательностей полных геномов изолятов Rш/Ck/Tatarstan/2009/1643, Rus/Ck/Penza/2013/2701

и вакцинного штамма «О» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») вируса ИЛТ

3.2.1. Сравнительный анализ полученных последовательностей полных геномов и представленных в GenBank

3.2.2. Обнаружение и анализ наиболее вариабельного участка в полученных последовательностях полных геномов изолятов и

штаммов вируса ИЛТ

3.2.3. Разработка метода идентификации сайта инициации репликации генома вируса ИЛТ с помощью ПЦР

3.2.4. Разработка метода дифференциации полевых изолятов и штаммов вируса ИЛТ с использованием ПЦР и нуклеотидного

секвенирования

3.3. Изучение вирулентных свойств выделенных изолятов Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643 и Rus/Ck/Penza/2013/2701 вируса ИЛТ,

при экспериментальном заражении цыплят 4-недельного возраста

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

4.1. Выводы

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

7. ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-биологические свойства изолятов вируса инфекционного ларинготрахеита птиц, выявленных на территории российской федерации в период с 2012 по 2017 гг.»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ) - это экономически значимое респираторное заболевание сельскохозяйственных птиц, наносящее ущерб птицеводству во всём мире. Возбудителем является ДНК-содержащий вирус семейства Herpesviridae, подсемейства Alphaherpesvirinae, таксономически идентифицируется как Gallid herpesvirus 1 (GaHV-1) [3, 4, 81, 92, 100, 133].

ИЛТ характеризуется поражением слизистой верхних дыхательных путей и глаз у молодняка и взрослых кур, индеек, фазанов и павлинов. Болезнь протекает остро, подостро и хронически не имеет выраженной сезонности. Источником инфекции служит больная и переболевшая ИЛТ птица. Основной путь распространения вируса - аэрогенный. Кроме того, возбудитель болезни передается с сырыми продуктами убоя больной птицы, инфицированными кормами, водой, предметами ухода и одеждой обслуживающего персонала, оборудованием и т.п. Клинически выздоровевшая птица остаётся вирусоносителем в течение всей жизни. Реактивацию латентного вируса могут вызывать различные стрессовые факторы, приводя к развитию острой формы инфекции [4, 77, 109, 113, 124].

Заболеваемость и смертность варьируют в зависимости от вирулентности циркулирующего штамма и других респираторных инфекций домашней птицы. Острые формы инфекции приводят к высокой заболеваемости, уровень смертности может превышать 50% [109, 113, 124]. Большие экономические потери, как правило, наблюдаются в районах с высокой плотностью птицеводческих хозяйств [20].

Профилактика ИЛТ осуществляется главным образом путем применения живых аттенуированных вакцин, полученных последовательными пассажами в культуре клеток, либо в куриных эмбрионах, также разработан ряд рекомбинантных векторных вакцин [77, 109, 115].

Для дифференциации полевых изолятов и вакцинных штаммов широко используются полимеразная цепная реакция (ПЦР) областей генома с

последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов, полученных после обработки ампликонов специфическими рестриктазами (ПДРФ), и последующим секвенированием продуктов ПЦР [37, 109, 110]. Однако, технологии полногеномного секвенирования, позволяющие провести более полный анализ вакцинных штаммов и полевых изолятов вируса ИЛТ, постепенно становятся основным инструментом исследований [35, 42, 44, 67, 72]. Анализ полных геномов штаммов вируса ИЛТ стал отправной точкой для определения детерминантов вирулентности и аттенуации, а также сайтов рекомбинации, что может помочь в разработке более эффективных и безопасных живых аттенуированных вакцин [105]. Системы дифференциации полевых изолятов и вакцинных штаммов варьируют, в связи с тем, что набор участков-мишеней зависит от циркулирующих на данной территории штаммов и программ вакцинации. Таким образом, оптимальный набор участков-мишеней для дифференциации зависит от географического района мира [105].

Применение вакцин является эффективным способом профилактики ИЛТ, однако в мировой практике и на территории Российской Федерации данное заболевание продолжает наносить ущерб промышленному птицеводству. В связи с этим, актуальными задачами являются разработка и совершенствование методов диагностики и дифференциации полевых изолятов и вакцинных штаммов вируса ИЛТ, изучение их биологических свойств, а также определение и анализ нуклеотидных последовательностей их полных геномов.

Степень разработанности проблемы. На сегодняшний день с помощью ПЦР-ПДРФ анализа были дифференцированы полевые изоляты в США, Южной Америке, Тайване, Корее и Израиле (район Среднего Востока). Однако, более высокую эффективность показал метод секвенирования ДНК. Как и в ПЦР-ПДРФ анализе, для секвенирования выбор участков-мишеней для дифференциации изолятов зависит от географического района мира. Секвенирование гена ТК или гена 1СР4 с прилегающими нетранслируемыми

областями, часто использовали при дифференциации изолятов вируса ИЛТ из Южной Америки, Соединённого Королевства, Африки, Азии, Среднего Востока и Российской Федерации [19, 32, 54, 78, 105, 110, 122], любой из этих двух генов был основополагающим в разработке быстрых и экономичных методов идентификации и дифференциации изолятов. Совместное использование полилокусного ПЦР-ПДРФ анализа и секвенирования более двух генов давало высокую избирательную способность, необходимую для дифференциации изолятов [30, 36, 38, 57, 58, 63, 108, 119, 127].

На настоящий момент в базе данных GenBank опубликовано 26 нуклеотидных последовательностей полных геномов различных изолятов и штаммов вируса ИЛТ, при их сравнении с полными геномами отечественных изолятов и вакцинных штаммов открывается возможность проведения филогенетического анализа и выявления их генетических особенностей для определения оптимального набора участков-мишеней с целью разработки системы дифференциации полевых изолятов и штаммов вируса ИЛТ циркулирующих не только в мире, но и на территории Российской Федерации.

Цель и задачи исследований. Основная цель данных исследований заключалась в изучении молекулярно-биологических свойств изолятов вируса ИЛТ, выявленных на территории Российской Федерации в период с 2012 по 2017 гг. Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

а) провести исследования на наличие генома вируса ИЛТ методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) полевых образцов биоматериала, поступивших из птицефабрик Российской Федерации, и отбор выявленных полевых изолятов для дальнейших исследований;

б) провести сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей областей генома выявленных изолятов и штаммов вируса ИЛТ с представленными в GenBank;

в) оптимизировать метод очистки и концентрирования для получения препаратов вируса ИЛТ, пригодных для определения нуклеотидной последовательности полного генома методом высокопроизводительного секвенирования;

г) определить нуклеотидные последовательности полных геномов выделенных изолятов вируса ИЛТ и изучить их филогенетические отношения с актуальными вакцинными штаммами, которые применяются на территории Российской Федерации и с последовательностями штаммов, представленных в GenBank;

д) разработать метод дифференциации на основе ПЦР и нуклеотидного секвенирования оптимального набора участков-мишеней в геноме полевых изолятов и вакцинных штаммов вируса ИЛТ, циркулирующих как на территории Российской Федерации, так и в мире;

е) провести апробацию разработанного метода дифференциации при диагностических исследованиях вакцинных штаммов и изолятов вируса ИЛТ, выявленные в полевых образцах, собранных на территории РФ в 2009 г. и в период с 2012 по 2017 гг.;

ж) изучить вирулентные свойства генетически охарактеризованных изолятов вируса ИЛТ с использованием постановки биопробы на цыплятах.

Научная новизна исследований.

Впервые определены нуклеотидные последовательности полных геномов изолятов Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643, Rus/Ck/Penza/2013/2701 и вакцинного штамма «О» вируса ИЛТ. Проведено их полное картирование и депонирование в GenBank ^405079, MF405080, КШ28407), а также генетический анализ. Изучены их филогенетические отношения с другими штаммами, последовательности которых представлены в GenBank.

Впервые разработан метод, позволяющий провести идентификацию сайта инициации репликации (oriS сайт) генома вируса ИЛТ с помощью ПЦР.

Впервые разработан метод, позволяющий провести дифференциацию полевых изолятов и штаммов вируса ИЛТ с использованием ПЦР и нуклеотидного секвенирования.

Оптимизирован метод очистки и концентрирования, позволяющий получить препараты вируса ИЛТ для секвенирования нуклеотидной последовательности полного генома.

Изучены биологические свойства выделенных изолятов Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643 и Rus/Ck/Penza/2013/2701 вируса ИЛТ. Получены данные об их вирулентности, а также особенностям течения инфекционного процесса при заражении цыплят.

Теоретическая и практическая значимость исследований.

Определены нуклеотидные последовательности полных геномов Российских изолятов Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643, Rus/Ck/Penza/2013/2701 и вакцинного штамма «О». Последовательности картированы и депонированы в базу данных GenBank ^405079, MF405080, КШ28407) и могут быть использованы для изучения молекулярно-биологических свойств вируса ИЛТ.

Одобрены учёным советом и утверждены директором Федерального центра охраны здоровья животных ФГБУ «ВНИИЗЖ» следующие документы: «Методические рекомендации по очистке и концентрированию вируса ИЛТ», «Методические рекомендации по идентификации сайта инициации репликации генома вируса ИЛТ с помощью ПЦР», «Методические рекомендации по дифференциации полевых изолятов и штаммов вируса ИЛТ с использованием ПЦР и нуклеотидного секвенирования».

Штаммы ILTV/Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643 и

ILTV/Rus/Ck/Penza/2013/2701 вируса ИЛТ детально охарактеризованы и депонированы в КШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Методология и методы исследований. Методология проведенных исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно восприимчивых животных. В работе использовали молекулярно-биологические и вирусологические методы исследований, а также очистку и концентрирование вируса.

Положения, выносимые на защиту:

а) результаты анализа полученных нуклеотидных последовательностей полных геномов изолятов Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643, Rus/Ck/Penza/2013/2701 и вакцинного штамма «О» вируса ИЛТ;

б) результаты апробации разработанного метода дифференциации при диагностических исследованиях выявленных полевых изолятов и вакцинных штаммов вируса ИЛТ;

в) вирулентные свойства изолятов Rus/Ck/Tatarstan/2009/1643 и Rus/Ck/Penza/2013/2701 вируса ИЛТ.

Исследования по диссертационной работе выполнены в 2012-2017 гг. в референтной лаборатории вирусных болезней птиц («Федеральный центр охраны здоровья животных» ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Автор выражает искреннюю благодарность коллективу референтной лаборатории вирусных болезней птиц, научному руководителю - доктору биологических наук Мудрак Н.С., канд. вет. наук Чвала И.А, канд. биол. наук Зинякову Н.Г., канд. биол. наук Колосову С.Н., канд. биол. наук Андриясову А.В., канд. биол. наук Андрейчуку Д.Б., Зинковскому Ю.В. и канд. вет. наук Кулакову В.Ю.

Степень достоверности и апробации результатов. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета и методической комиссии ФГБУ «ВНИИЗЖ». Результаты

исследований были опубликованы в материалах II-й Международной научно-практической конференции молодых учёных «Инновационное развитие науки в обеспечении биологической безопасности» (Казахстан, 2014 г.), Международной научной конференции «Распространение и меры борьбы с особо опасными болезнями животных и птиц» (Узбекистан, 2016 г.), IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика» (Москва, 2017 г.), XX Всемирного конгресса ветеринарной птицеводческой ассоциации (Edinburgh, 2017 г.), Всероссийской научно-практической конференции молодых учёных «Наука и инновации в АПК XXI века» (Казань, 2018 г.). Достоверность результатов исследований подтверждена комиссионными испытаниями.

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 10 научных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, включенных в Перечень ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации для докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение, приложения; иллюстрирована 19 таблицами и 34 рисунками. Список использованной литературы включает 161 источников, из них 147 иностранный. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную новизну и практическую значимость.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Характеристика вируса ИЛТ

1.1.1. Классификация

На основании сходства морфологии, белкового состава, характеристик нуклеиновой кислоты и некоторых других свойств, вирус инфекционного ларинготрахеита птиц является представителем семейства Herpesviridae, подсемейства Alphaherpesvirinae, членом рода Iltovirus и таксономически идентифицируется как Gallid herpesvirus 1 (GaHV-1) [3, 81, 92, 100, 133].

1.1.2. Состав и морфология

Полная вирусная частица диаметром 195 - 250 нм состоит из нуклеокапсида и окружающей его неправильной формы оболочки, содержащей липиды. На поверхности оболочки имеются небольшие выступы, представляющие собой «шипы» (пепломеры) вирусных гликопротеинов. Нуклеокапсид вируса диаметром 80-100 нм имеет гексагональную форму и состоит из вирусного генома, упакованного в белок капсида. Капсидный белок состоит из 162 капсомеров, в которых 150 гексамерных и 12 пентамерных капсомеров образуют Т=16 икосаэдрическую симметрию капсида (рис. 1, 2) [3, 81, 104, 154].

Рис. 1. Модель строения вирусов семейства Herpesviridae. Стрелочками показаны: белки оболочки (envelope proteins), внешняя оболочка (outer

tegument), внутренняя оболочка (inner tegument), основной капсидный белок (major capsid protein), тройной капсидный белок (triplex), ворота верхней части (portal vertex) (http://viralzone.expasy.org/all by species/523.html)

Рис. 2. Электронная микрофотография вириона вируса ИЛТ, выходящего с помощью экзоцитоза из клетки-хозяина (культура клеток LMH) спустя 18 часов после инфицирования. Масштаб - 300 нм [104]

1.1.3. Устойчивость к физико-химическим факторам

В связи с тем, что вирус ИЛТ является оболочечным, он обладает чувствительностью к действию эфира и хлороформа, а также других липолитических растворителей [3, 102]. Инактивация вируса происходит при нагревании до 55°С в течение 10-15 минут или при 38°С в течение 48 часов [3, 137]. Тем не менее, различные штаммы вируса ИЛТ имеют разную устойчивость к воздействию тепла. Так Меи1еташ и др. в 1978 году показали, что бельгийский штамм данного вируса сохранял частичную инфекционную активность после нагревания при температуре 56°С в течение 1 часа [102]. Сover и др. отмечали, что в трахеальных тканях вирус ИЛТ разрушался в течение 44 часов при температуре 37°С, а в

хорионаллантоисной оболочке (ХАО) при 25°С в течение 5 часов [3, 46]. Также было показано, что при обработке раствором 3% крезола или 1%-ным раствором щелочи вирус инактивируется втечении 1 мин [3, 102]. Исследования, проведённые с аэрозолем 5% раствора перекиси водорода, показали, что при использовании его в качестве фумиганта, для оборудования в местах содержания птиц, может быть достигнута полная дезактивация вируса ИЛТ [3]. При низких температурах, вирус ИЛТ сохраняет инфекционную активность в течение длительного периода. Так при температуре 13-23°С вирус сохраняет инфекционную активность в трахеальном экссудате и теле кур в течение 10-100 дней [93]. При температуре хранения от -20°С до -60°С, вирус ИЛТ сохраняет активность в течении нескольких лет. [20, 137].

1.1.4. Структура генома

Геном вируса ИЛТ представлен линейной, двухцепочечной молекулой ДНК. В связи с наличием инвертированных повторов фланкирующих уникальную короткую (Ц3) область (рис. 3), последовательность генома образует два изомера, которые отличаются ориентацией Ш области относительно уникальной длинной области (ЦЬ) [71]. Такая структура генома обозначается как тип D геномов герпесвирусов [131, 160]. При анализе опубликованных в базе данных GenBank нуклеотидных последовательностей полных геномов штаммов вируса ИЛТ, с учётом единичных нуклеотидных замен, вставок и делеций, было показано, что длинна генома вируса ИЛТ составляет около 154 т.п.н., содержание G + С приблизительно составляет 48,16% [19, 41, 42, 67, 100, 148].

Рис. 3. Структура генома вируса ИЛТ, с обозначением UL и ^ областей, инвертированных повторов и сайтов инициации репликации вирусной ДНК (о^ и огГЬ); стрелочками выделена область внутренней инверсии (с UL22 по UL44 ген), а также отмечены специфические гены [44, 67, 148, 160]

По структуре геном состоит из уникальной длинной области (UL) и уникальной короткой области (US), окружённой короткими областями внутреннего инвертированного повтора (IRS) и концевого инвертированного повтора (TRS) (рис. 3) [1, 44, 67, 77].

Геном вируса ИЛТ содержит 79 открытых рамок считывания (ОРС) с межгенными участками [44, 67] (рис. 3), 63 из которых показывают гомологию с генами вируса простого герпеса (ЖУ-1) [104]. При этом ген ЦЬ3.5 отсутствует в геноме ЖУ-1, но содержится в геноме вируса ИЛТ (рис. 3) и других представителях подсемейства Alphaherpesvirinae, таких как вирус псевдобешенства свиней - Болезнь Ауески ^НУ-1) и вирус ветряной оспы (У2У) [104]. Геном вируса ИЛТ содержит множество уникальных геномных характеристик, что указывает на его филогенетическое расхождение с другими представителями Alphaherpesvirinae, начиная с отсутствия в геноме гомолога гена ЦЬ16 [68] (рис. 3). Геном данного вируса также содержит большую область внутренней инверсии (рис. 3), аналогичную той, что присутствуют в геноме SHV-1 и герпесвируса попугаев ^НУ-1), при этом отсутствует в геноме других представителей данного подсемейства таких как ШУ-1, У7У, и вирус герпеса лошадей (ЕНУ-1) [148, 161]. Данная область внутренней инверсии состоит из кластера генов от ЦЬ22 по ЦЬ44 в ЦЬ области (рис. 3) [161]. Ген ЦЬ47, типичный для ЦЬ области многих представителей Alphaherpesvirinae, отсутствует в данной области генома вируса ИЛТ и расположен между генами Ш3 и ^4 области ^ [146]. Также в геноме вируса ИЛТ была обнаружена пара паралогических генов, а именно ЦЬ0 и ЦЬ[-1], которые представляют собой уникальное дублирование [160]. Пять ОРС: ORFА, ORFВ, ORFС, ORFD, ОЯБЕ расположенных в ЦЬ области (рис. 3), являются уникальными для вируса ИЛТ и PsHV-1 [148]. В дополнение к этому, генетическое сходство в области с ЦЬ22 по ЦЬ44 ген, а также транслокация гена ЦЬ47 делает вирус ИЛТ и PsHV-1 единственными членами рода Шо"мгш [148].

1.1.5. Репликация вируса

Вирус ИЛТ обладает похожим механизмом репликации что и у других представителей рода Alphaherpesvirus [5, 14, 131] (рис. 4).

Рис. 4. Схема цикла репликации вируса простого герпеса (HSV-1). 1) Вирион связывается с рецепторами плазматической мембраны клетки и происходит слияние вирусной оболочки с плазматической, высвобождая нуклеокапсид в цитоплазму клетки. 2) Нуклеокапсид транспортируется к порам ядерной мембраны, затем вирусная ДНК выходит в нуклеоплазму. 3) Вирионный белок (virion host shut-off (vhs)) вызывает деградацию мРНК клетки хозяина. 4) VP16 локализуется в ядре. 5) ДНК вируса образует цикличную форму. 6) Вирусная ДНК транскрибируется клеточной РНК-полимеразой II, образуя альфа мРНК. Транскрипция а-генов стимулируется вирусным оболочечным белком VP16. 7) а-Белки индуцируют транскрипцию в генов. 8) в-Белки участвуют в репликации вирусной ДНК и индуцируют у-гены. 9) Синтез ДНК вируса стимулирует экспрессию у-генов. 10) у-Белки участвуют в сборке капсида в ядре и модификации мембран для формирования вириона. 11) Упаковка вирусной ДНК в капсид. 12) Формирование оболочечного вириона и его выход из клетки [14]

Цикл репликации начинается с прикрепления вируса к рецепторам клеток-мишеней. Вслед за этим происходит слияние вирусной оболочки с плазматической или эндосомной мембраной, а не фагоцитоз. Это согласуется

с обнаружением на клеточной поверхности Fc-рецепторов оболочки вириона, в том числе и в тех случаях, когда проникновение вируса не приводит к экспрессии вирусных генов [112, 131]. Основываясь на данных полученных по НБУ-1, белки, участвующие в прикреплении и слиянии включают структурные гликопротеины gC, gB, gD, gH, и gL. Процесс, начинается с взаимодействия gB и gC с гепарансульфат протеогликанами поверхности клеточной мембраны, с последующим взаимодействием gD, gB и gH-gL гетеродимерного комплекса для запуска слияние вирусной и клеточной мембран и высвобождения тегумента и нуклеокапсида в цитоплазму клетки-хозяина [17, 45, 97, 132, 148].

Нуклеокапсид проникая в цитоплазму клетки переносится к порам ядерной мембраны при участии цитоскилета, затем под контролем вирусных факторов вирусная ДНК выходит в нуклеоплазму. После того, как вирусная ДНК проникает в ядро клеток, транскрипция и репликация вирусной ДНК, формирование капсидов и их выход будут происходить в ядре инфицированной клетки-хозяина (рис. 5). Ремоделирование процессов клеточного ядра обеспечивает структурную основу для эффективной репликации вирусной ДНК и транскрипции его генов. [5, 22, 48, 77, 131].

Рис. 5. Микрофотография скопления частиц вируса ИЛТ формирующие тельца включения в ядре культуры клеток почек куриных эмбрионов. По окружности видны скопления хроматина и расположенный в центре аморфный материал, из которого частично формируются тельца включений (увеличение в 18500 раз.) [61, 154]

Вирусная ДНК транскрибируется в ходе репродуктивного цикла клеточной РНК-полимеразой II, при участии на всех стадиях цикла ряда вирусных факторов. Синтез продуктов вирусных генов строго регулируется. Экспрессия вирусных генов строго координирована и представляет собой последовательно развернутый по времени каскад реакций [89]. Эксперименты по трансфекции плазмидами, экспрессирующими белки 1СР4 и иЪ48 вируса ИЛТ показали, что эти два белка функционально гомологичные белку тегумента УР16 - активатор транскрипции а-генов ДНК НБУ-1 (рис. 4) [87, 144]. В настоящее время изучены по меньшей мере пять

групп генных продуктов, отличающихся друг от друга по характеру регуляции синтеза на транскрипционном и посттранскрипционном уровне. Указанные группы белков синтезируются последовательно одна за другой [83, 84, 95, 123]. Первыми экспрессируются а-гены. Синтез а-полипептидов достигает максимальной скорости приблизительно через 2-4 ч после инфицирования, затем скорость синтеза уменьшается [84]. Функционирование альфа-белков служит необходимым условием для синтеза последующих полипептидов. Продукты экспрессии 0-генов -полипептиды и достигают максимальной скорости синтеза примерно через 4-6 ч после инфицирования (рис. 6) [84, 89]. К Бета-полипептидам относятся ферменты, в том числе и ДНК-полимераза, и ДНК-связывающие белки, участвующие в репликации вирусной ДНК, а также в-полипептиды участвуют в отключении синтеза а-полипептидов, клеточных белков и в индукции у-генов [5, 84, 85]. у-Полипептиды также подразделяются на две группы - у1 и у2, различающиеся по условиям синтеза: если полипептиды-у1 могут образовываться в отсутствие синтеза вирусной ДНК, то для образования полипептидов-у2 необходима амплификация вирусной ДНК (рис. 6) [84, 106, 156]. Большинство идентифицированных к настоящему времени у-белков являются компонентами вириона и в значительной степени участвуют в сборке вирионов, а также участвуют в процессе отключения синтеза клеточных белков сразу после заражения и индуцируют экспрессию а-генов (рис. 6) [21, 66, 89].

Рис. 6. Схема экспрессии генов вируса ИЛТ, иллюстрирующая кинетику роста и репликации вируса в ходе его культивирования в клетках куриных

почек. С 4 часа после инфицирования (ч.п.и.), начинают экспрессироваться в и у1 гены, при этом экспрессия гена у2 начинается с 8 ч.п.и. Увеличение титра вируса между 11 и 24 ч.п.и., с пиком вирусной репликации в течение этого периода [89]

В результате экспрессия генов по принципу каскада сводиться к тому, что продукты а-генов вызывают индукцию в-генов, продукты в-генов выключают экспрессию а-генов и индуцируют экспрессию у-генов, а продукты у-генов в свою очередь выключают экспрессию в-генов и сразу же вслед за началом нового раунда инфицирования индуцируют экспрессию а-генов [21, 84, 85, 89].

Отличительной особенностью герпесвирусов, является необычно большое число кодируемых ими ферментов, вовлеченных в синтез молекулы ДНК. Хотя последовательность событий при репликации вирусной ДНК в общих чертах известна, многие детали этого процесса еще предстоит изучить [5]. Было показано, что в клетках, заражённых HSV-1, репликации подвергается лишь небольшая часть всей ДНК вируса. Импульсно-меченая ДНК не содержит свободных концов, так как образует либо кольцевую, либо конкатемерную («голова к хвосту») форму [5, 91]. Имеющиеся данные показывают, что ДНК герпесвирусов в ходе репродуктивного цикла реплицируется по механизму катящегося кольца, одновременно могут происходить изомеризация и упаковка ДНК [24]. ДНК вируса содержит три начальные точки репликации (рис. 3). Две из них - oriS находятся в инвертированных повторах фланкирующих US область генома, а третья в UL области (рис. 3) [44, 67, 148, 160]. Сайты инициации репликации ДНК - oriS и oriL (рис. 3) обладают палиндромной структурой и образуют конфигурацию шпилька-петля (stem-loop). В центре палиндромов находятся АТ-богатые регионы и сайты связывания полипептида UL9 (origin-binding protein), инициирующего репликацию ДНК вируса (рис. 7 и 8) [26, 39, 91, 96, 98, 103, 153].

Рис. 7. Двухсторонняя репликация генома с начальной фазой тета-репликации в oriS сайте и последующей циклизацией ДНК и репликация по механизму катящегося кольца [96]

Рис. 8. Схема репликации ДНК HSV-1. 1) Вирусная ДНК образует цикличную структуру при входе в ядро клетки. 2) Происходит связывание

полипептида ЦЬ9 (ген ЦЬ9) с сайтами опЬ и/или опБ и начинается формирование одноцепочечных участков в ДНК (оцДНК). Образование участков оцДНК индуцирует присоединение полипептида 1СР8. 3), 4) и 1СР8 образуют репликативную вилку и индуцируют присоединение хеликазно-праймазного комплекса и ДНК-полимеразы для начального этапа циклической формы репликации. 5) Репликации переключается с циклической формы с помощью неизвестного механизма. ЦЬ9 не является необходимым для циклической репликации. 6) Репликация ДНК по механизму катящегося кольца дает длинные конкатемеры вирусной ДНК, которые расщепляются на мономерные молекулы во время упаковки [96]

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Козлов Антон Александрович, 2018 год

6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Батченко, Г.В. Выделение, идентификация и характеристика изолятов вирусов инфекционного бронхита кур и инфекционного ларинготрахеита птиц: дис.... канд. биол. наук: 03.00.06 / Батченко Галина Владимировна. -Владимир, 2004. - 156 с.

2. Бирман, Б.Я. Инфекционный ларинготрахеит птиц / Б.Я. Бирман К.К. Дягилев, И.Н. Громов. - Минск, 2002. - 71 с.

3. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц: пер. с англ. / под. ред. Б.У. Кэлнека [и др.]. - М.: АКВАРИУМ БУК, 2003. - С. 608-622.

4. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьёв, Н.В. Фомина. - М.: ВНИТИБП, 1998. - С. 672- 683.

5. Вирусология: в 3-х т. Т. 3: пер. с англ. / под ред. Б. Филдса, Д. Найпа при участии Р. Ченока, Б. Ройзмана [и др.]. - М.: Мир, 1989. - 452 с.

6. Гринин, А.С. Очистка, концентрирование и фракционирование вирусов животных / А.С. Гринин, И.Н. Титов. - М.: Колос, 1971. - 240 с.

7. Данченко, Л.К. Изучение некоторых биологических свойств штаммов вируса инфекционного ларинготрахеита кур: автореф. дис. ... канд. вет. наук: / Данченко Леонид Кузьмич. - Персиановка, 1968. - 19 с.

8. Дудников, С.А. Количественная эпизоотология: основы прикладной эпидемиологии и биостатистики / С.А. Дудников. - Владимир: Демиург, 2004. - 460 с.

9. Зинковский, Ю.В. Программа построения профиля вариабельности гомологичных последовательностей биополимеров «SQ-MAX» / Ю.В. Зинковский, С.Н. Колосов, В.В. Дрыгин // Пробл. инфекц. патологии с.-х.

животных: тез. докл. конф., посвящ. 100-летию открытия вируса ящура. -Владимир, 1997. - С. 165.

10. Зуев, Ю.В. Культивирование изолята вируса ИЛТ на хорионаллантоисной оболочке куриных эмбрионов / Ю.В. Зуев, С.Н. Норкина // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзот. болезнями животных. - Покров, 1998. - С. 122-123.

11. Методические рекомендации по выделению, титрованию и идентификации вируса инфекционного ларинготрахеита птиц / В.Ю. Кулаков, Г.В. Батченко, А.В. Борисов [и др.]; ФГУ "ВНИИЗЖ". - Владимир, 2001. - 10 с.

12. Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных / под ред. В.П. Шишкова, Н.А. Налётова. - 2-е изд., испр. и доп. - М.: Колос, 1980. -440 с.

13. Трефилов, Б.Б. Разработка и внедрение средств диагностики и специфической профилактики наиболее опасных вирусных болезней птиц (инфекционный лиринготрахеит, вирусный энтерит гусей, реовирусный теносиновит): автореф. дис.... д-ра вет. наук: 16.00.03 / Трефилов Борис Борисович. - СПб, 2000. - 42 с.

14. Троценко, Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии / Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А Преображенская. - М.: Колос, 1999. - С. 114.

15. A micro RNA of infectious laryngotracheitis virus can down regulate and direct cleavage of ICP4 mRNA / L.A. Waidner, J. Burnside, A.S. Anderson [et. al.] // Virology. - 2011. - Vol. 411. - P. 25-31.

16. Adelman, K. Herpes simplex virus DNA packaging sequences adopt novel structures that are specifically recognized by component of the cleavage and packaging machinery / K. Adelman, B. Salmon, J.D. Baines // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2001. - Vol. 98. - P. 3086-3091.

17. Akhtar, J. Viral entry mechanisms: cellular and viral mediators of herpes simplex virus entry / J. Akhtar, D. Shukla // FEBS J. - 2009. - Vol. 276. - P. 72287236.

18. Assembly pathway of avian infectious laryngotracheitis virus / P. Guo, E. Scholz, J. Turek [et al.] // Amer. J. Vet. Res. - 1993. - Vol. 54. - P. 2031-2039.

19. Attenuated vaccines can recombine to form virulent field viruses / S.W. Lee, P.F. Markham, M.J. Coppo [et al.] // Science. - 2012. - Vol. 337, N 6091. - P. 188.

20. Bagust, T.J. Avian infectious laryngotracheitis / T.J. Bagust, R.C. Jones, J.S. Guy // Rev. Sci. Techn. OIE. - 2000. - Vol. 19. - P. 483-492.

21. Batterson, W. Molecular genetics of herpes simplex virus. 7. Further characterization of a ts mutant defective in release of viral DNA and in other stages of viral reproductive cycle / W. Batterson, D. Furlon, B. Roizman // J. Virol. -1983. - Vol. 45. - P. 397-407.

22. Baucke, R. B. Membrane proteins specified by herpes simplex virus. V. Identification of an Fc-bmdmg glycoprotein / R.B. Baucke, P. G. Spear // J. Virol. - 1979. - Vol. 32. - P. 779-789.

23. Beach, J.R. A filterable virus, the cause of infectious laryngotracheitis of chickens / J.R. Beach // J. Exp. Med. - 1931. - Vol. 54. - P. 809-816.

24. Ben-Porat, T. Replication of herpesvirus DNA. II. Sedimentation characteristics of newly synthesized DNA / T. Ben-Porat, S. Tokazewski // Virology. - 1977. - Vol. 79. - P. 292-301.

25. Benton W.J. The clinical and serological response of chickens to certain laryngotracheitis viruses / W.J. Benton, M.S. Cover, L.M. Greene // Avian Dis. -1958. - Vol. 2. - P. 383-396.

26. Boehmer, P.E. Herpes simplex virus DNA replication / P.E. Boehmer, I.R. Lehman // Ann. Rev. Biochem. - 1997. - Vol. 66. - P. 347-384.

27. Brandly, C.A. A report of some investigations of infectious laryngotracheitis / C.A. Brandly, L.D. Bushnell // Poultry Sci. - 1934. - Vol. 13. - P. 212-217.

28. Brandly, C.A. Some studies of infectious laryngotracheitis - the continued propagation of the virus upon the chorioallantoic membrane of the hen's egg / C.A. Brandly // J. Infect. Dis. - 1935. - Vol. 57. - P. 201-206.

29. Bubiefi-Waluszewska, A. The cranial nerves / A. Bubiefi-Waluszewska // Form and Function in Birds / ed. A. S. King, J. McLeUand. - London; New York, 1981. - P. 103-105.

30. Chacon, J.L. Characterization by restriction fragment length polymorphism and sequence analysis of field and vaccine strains of infectious laryngotracheitis virus involved in severe outbreaks / J.L. Chacon, M.Y. Mizuma, A.J. Piantion-Ferreira // Avian Pathology. - 2010. - Vol. 39. - P. 425-433.

31. Chacon, J.L. Development and validation of nested-PCR for the diagnosis of clinical and subclinical infectious laryngotracheitis / J.L. Chacon, A.J.P. Ferreira // J. Virol. Methods. - 2008. - Vol. 151. - P. 188-193.

32. Chacon, J.L. Differentiation of field isolates and vaccine strains of infectious laryngotracheitis virus by DNA sequencing / J.L. Chacon, A.J. Ferreira // Vaccine. - 2009. - Vol. 27. - P. 6731-6738.

33. Challberg, M.D. A method for identifying the viral genes required for herpesvirus DNA replication / M.D. Challberg // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1986. - Vol. 83. - P. 9094-9098.

34. Challenges and recent advancements in infectious laryngotracheitis virus vaccines / M.J.C. Coppo, A.H. Noormohammadi, G.F. Browning, J.M. Devlin // Avian Pathology. - 2013. - Vol. 42. - P. 195-205.

35. Chandra, Y.G. Genome sequence comparison of two United States live attenuated vaccines of infectious laryngotracheitis virus (ILTV) / Y.G. Chandra, J. Lee, B.W. Kong // Virus Genes. - 2012. - Vol. 44. - P. 470-474.

36. Characterization of field isolates of infectious laryngotracheitis virus from Ontario / D. Ojkic, J. Swinton, M. Vallieres [et al.] // Avian Pathology. - 2006. -Vol. 35. - P. 286-292.

37. Characterization of infectious laryngotracheitis virus (ILTV) isolates from commercial poultry by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) / I. Oldoni, A. Rodríguez-Avila, S. Riblet, M. García // Avian Dis. - 2008. - Vol. 52. - P. 59-63.

38. Chicken embryo origin-like strains are responsible for infectious laryngotracheitis virus outbreaks in Egyptian cross-breed chickens / A.A. Shehata, M.Y. Halami, H.H. Sultan [et al.] // Virus Genes. - 2013. - Vol. 46. - P. 423-430.

39. Cloning, sequencing, and functional analysis of oriL, a herpes simplex virus type 1 origin of DNA synthesis / S.K. Weller, A. Spadaro, J.E. Schaffer [et al.] // Mol. Cell. Biol. - 1985. - Vol. 5. - P. 930-942.

40. Coexpression of UL20p and gK inhibits cell-cell fusion mediated by herpes simplex virus glycoproteins gD, gH-gL, and wild-type gB or an endocytosis-defective gB mutant and downmodulates their cell surface expression / E. Avitabile, G. Lombardi, T. Gianni [et al.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 80158025.

41. Comparative analysis of the complete genome sequences of two Australian origin live attenuated vaccines of infectious laryngotracheitis virus / S.W. Lee, J.M. Devlin, J.F. Markham [et al.] // Vaccine. - 2011. - Vol. 29. - P. 9583-9587.

42. Comparative full genome analysis of four infectious laryngotracheitis virus (Gallid herpesvirus-1) virulent isolates from the United States / S.J. Spatz, J.D. Volkening, C.L. Keeler [et. al.] // Virus Genes. - 2012. - Vol. 44. - P. 273-285.

43. Comparison of the safety and protective efficacy of vaccination with glycoprotein-G-deficient infectious laryngotracheitis virus delivered via eye-drop, drinking water or aerosol / J.M. Devlin, G.F. Browning, J.R. Gilkerson [et al.] // Avian Pathology. - 2008. - Vol. 37. - P. 83-88.

44. Complete genome sequence of the first Chinese virulent infectious laryngotracheitis virus / C. Kong, Y. Zhao, X. Cui [et al.] // PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8, N 7. - Режим доступа: http://iournals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/iournal.pone.0070154

45. Construction and properties of a mutant of herpes simplex virus type 1 with glycoprotein H coding sequences deleted / A. Forrester, H. Farrell, G. Wilkinson [et. al.] // J. Virol. - 1992. - Vol. 66. - P. 341-348.

46. Cover, M.S. The biological variation of infectious laryngotracheitis virus / M.S. Cover, W.J. Benton // Avian Dis. - 1958. - Vol. 2. - P. 375-383.

47. Cover, M.S. The early history of infectious laryngotracheitis / M.S. Cover // Avian Dis. - 1996. - Vol. 40. - P. 494-500.

48. Dales, S. Early events in the interaction of adenoviruses with HeLa cells. IV. Association with raicrotubules and the nuclear pore complex during vectorial movement of the inoculum / S. Dales, Y. Chardonnet // Virology. - 1973. - Vol. 56. - P. 465-483.

49. Deiss, L.P. Functional domains within the a sequence involved in the cleavage-packaging of herpes simplex virus DNA / L.P. Deiss, J. Chou, N. Frenkel // J. Virol. - 1986. - Vol. 59. - P. 605-618.

50. Demonstration in live chickens of the carrier state infectious laryngotracheitis virus / C.S. Hughes, C. Jonesr, R.M. Gaskell [et al.] // Res.Vet. Sci. - 1987. - Vol. 42. - P. 407-410.

51. Demonstration of sites of latency of infectious laryngotracheitis virus using the polymerase chain reaction / R.A. Williams, M. Bennett, J.M. Bradbury [et al.] // J. Gen. Virol. - 1992. - Vol. 73, N 9. - P. 2415-2420.

52. Detection of infectious laryngotracheitis virus by realtime PCR in naturally and experimentally infected chickens / Y. Zhao, C. Kong, X. Cui [et al.] // PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8, N 6. - Режим доступа: https://iournals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/iournal.pone.0067598

53. Detection of infectious laryngotracheitis virus in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues by nested polymerase chain reaction / J. Humberd, M. Garcia, S.M. Riblet [et al.] // Avian Dis. - 2002. - Vol. 46. - P. 64-74.

54. Detection of wild-and vaccine-type infectious laryngotracheitis virus in clinical samples and feather shafts of commercial chickens / I. Davidson, S. Nagar, I. Ribshtein [et al.] // Avian Dis. - 2009. - Vol. 53. - P. 618-623.

55. Development and validation of a real-time Taqman PCR assay for the detection and quantitation of infectious laryngotracheitis virus in poultry / S.A. Callison, S.M. Riblet, I. Oldoni [et al.] // J. Virol. Methods. - 2007. - Vol. 139. -P. 31-38.

56. Development of a SYBR Green quantitative polymerase chain reaction assay for rapid detection and quantification of infectious laryngotracheitis virus / A. Mahmoudian, N.C. Kirkpatrick, M. Coppo [et al.] // Avian Pathology. - 2011. -Vol. 40. - P. 237-242.

57. Diagnosis of a naturally occurring dual infection of layer chickens with fowlpox virus and gallid herpesvirus 1 (infectious laryngotracheitis virus) / I.S. Diallo, J. Taylor, J. Gibson [et al.] // Avian Pathology. - 2010. - Vol. 39. - P. 2530.

58. Differentiation of field isolates and vaccine strains of infectious laryngotracheitis virus by DNA sequencing / M. Sadeghi, M.H. Bozorgemehrifard, H. Keyvanfar [et al.] // African J. Microbiol. Res. - 2011. - Vol. 5. - P. 41124117.

59. Differentiation of infectious laryngotracheitis virus isolates by restriction fragment length polymorphic analysis of polymerase chain reaction products amplified from multiple genes / N.C. Kirkpatrick, A. Mahmoudian, D. O'Rourke, A.H. Noormohammadi // Avian Dis. - 2006. - Vol. 50. - P. 28-34.

60. Effects of certain stress factors on the re-excretion of infectious laryngotracheitis virus from latently infected carrier birds / C.S. Hughes, R.M. Gaskell, R.C. Jones [et al.] // Res. Vet. Sci. - 1989. - Vol. 46. - P. 274-276.

61. Electron microscopic studies of the virus of infectious laryngotracheitis / A.M. Watrach, A.E. Vatter, L.E. Hanson [et al.] // Amer. J. Vet. Res. - 1959. -Vol. 20. - P. 537-544.

62. Elkin, N. Infectious laryngotracheitis live vaccines / N. Elkin // Poultry Med. Retrieved. - 2012. - Dec. 5. - Режим доступа: http://www.poultrymed.com/Poultry/Templates/showpage.asp?DBID=1 &LNGID= 1&TMID=652&FID=661& PID=2901.

63. Epidemic of infectious laryngotracheitis in Italy: characterization of virus isolates by PCR-restriction fragment length polymorphism and sequence analysis / A. Moreno, A. Piccirillo, A. Mondin [et al.] // Avian Dis. - 2010. - Vol. 54. - P. 1172-1177.

64. Epidemiology of recent outbreaks of infectious laryngotracheitis in poultry in Australia / H.P. Blacker, N.C. Kirkpatrick, A. Rubite [et al.] // Australian Vet. J.

- 2011. - Vol. 89. - P. 89-94.

65. Epstein, M.A. Observations on the mode of release of herpes virus from infected HeLa cells / M.A. Epstein // J. Cell. Biol. - 1962. - Vol. 12. - P. 589-597.

66. Fenwick, M. Anatomy of herpes simplex virus DNA. 11. Apparent clustering of functions effecting rapid inhibition of host DNA and protein synthesis / M. Fenwick, L.S. Morse, B. Roizman // J. Virol. - 1979. - Vol. 29. - P. 825-827.

67. First complete genome sequence of infectious laryngotracheitis virus / S.W. Lee, P.F. Markham, J.F. Markham [et al.] // BMC Genomics. - 2011. - Vol. 12. -Режим доступа: http://www.biomedcentral.com/1471-2164/12/197

68. Fuchs, W. DNA sequence of the UL6 to UL20 genes of infectious laryngotracheitis virus and characterization of the UL10 gene product as a nonglycosylated and nonessential virion protein / W. Fuchs, T.C. Mettenleiter // J. Gen. Virol. - 1999. - Vol. 80. - P. 2173-2182.

69. Full genome sequence-based comparative study of wild-type and vaccine strains of infectious laryngotracheitis virus from Italy / A. Piccirillo, E. Lavezzo, G. Niero [et al.] // PLoS ONE. - 2016. - Vol. 11, N 2. - Режим доступа: http://iournals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0149529

70. Gelenczei, E.F. Studies on a tissue-culture-modified infectious laryngotracheitis virus / E.F. Gelenczei, E.W. Marty // Avian Dis. - 1964. - Vol. 8.

- P. 105-122.

71. Genome isomerism in two alphaherpesviruses: herpesvirus saimiri-1 (herpesvirus tamarinus) and avian infectious laryngotracheitis virus / D.A. Leib, J.M. Bradburt, C.A. Hart, K. McCarthy // Arch. Virol. - 1987. - Vol. 93. - P. 287294.

72. Genomic sequence analysis of the United States infectious laryngotracheitis vaccine strains chicken embryo origin (CEO) and tissue culture origin (TCO) / M. Garcia, V. Volkening, S.M. Riblet, S. Spatz // Virology. - 2011. - Vol. 440. - P. 64-74.

73. Gibbs, C.S. Infectious laryngotracheitis vaccination / C.S. Gibbs // Massachusetts Agr. Experimental Station Bull. - 1934. - Vol. 311. - P. 1-20.

74. Gibbs, C.S. The immunology of infectious laryngotracheitis / C.S. Gibbs // Massachusetts Agr. Experimental Station Bull. - 1933. - Vol. 295. - P. 1-20.

75. Granzow, H. Egress of alphaherpesviruses: comparative ultrastructural study / H. Granzow, B.G. Klupp, W. Fuchs // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 3675-3684.

76. Guy, J S. Laryngotracheitis / J. S Guy, T. J. Bagust // Diseases of Poultry. -11th ed. /ed.Y. M. Saif, H. J. Barnes, J. R. Glissonlowa [et al.]. - Ames, 2003. -P. 121-134.

77. Guy, J.S. Laryngotracheitis / J.S. Guy, M. Garcia // Diseases of Poultry. -12th ed. / ed Y.M. Saif, A.M. Fadly, J.R. Glisson [et. al]. - Ames, 2008. - P.137-152.

78. Han, M.G. Analysis of Korean strains of infectious laryngotracheitis virus by nucleotide sequences and restriction fragment length polymorphism / M.G. Han, S.J. Kim // Vet. Microbiol. - 2001. - Vol. 83. - P. 321-331.

79. Herpes simplex virus 1 U(L)31 and U(L)34 gene products promote the late maturation of viral replication compartments to the nuclear periphery / M. Simpson-Holley, J. Baines, R. Roller [et al.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 5591-5600.

80. Herpes simplex virus nucleocapsids mature to progeny virions by an envelopment "deenvelopment" reenvelopment pathway / J.N. Skepper, A. Whiteley, H. Browne [et al.] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 5697-5702.

81. Herpesviridae / A.J.R. Davison, G.S. Eberle, D. Hayward [et al.] // Virus Taxonomy: Eighth Rep.Intern. Comm. on Taxonomy of Viruses / ed. C.M. Fauquet, M.A. Mayo, J. Maniloff [et al.]. - San Diego, 2005. - P. 193-212.

82. Hodge, P.D. Effects of mutations within the herpes simplex virus type 1 DNA encapsidation signal on packaging efficiency / P.D. Hodge, N.D. Stow // J. Virol. - 2001. -Vol. 75. - P. 8977-8986.

83. Honess, R.W. Proteins specified by herpes simplex virus. 11. Identification and relative molar rates of synthesis of structural and non-structural herpesvirus polypeptides in infected cells / R.W. Honess, B. Roizman // J. Virol. - 1973. - Vol. 12. - P. 1346-1365.

84. Honess, R.W. Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis. I. Cascade regulation of the synthesis of three group of viral proteins / R.W. Honess, B. Roizman // J. Virol. - 1974. - Vol. 14. - P. 8-19.

85. Honess, R.W. Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis: Sequential transition of polypeptide synthesis requires functional viral polypeptides / R.W. Honess, B. Roizman // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1975. -Vol. 72. - P. 1276-1280.

86. Hudson, C.B. United States Patent No. 3,444,293. / C.B Hudson; Vineland Poultry Laboratories. - Vineland, NJ, USA, 1969.

87. Identification of transcripts and protein products of the UL31, UL37, UL46, UL47, UL48, UL49 and US4 gene homologues of avian infectious laryngotracheitis virus / D. Helferich, J. Veits, T. C. Mettenleiter, W. Fuchs // J. Gen. Virol. - 2007. - Vol. 88. - P. 719-731.

88. Impairment of nuclear pores in bovine herpesvirus 1-infected MDBK cells / P. Wild, M. Engels, C. Senn [et al.] // J. Virol. - 2005. - Vol. 79. - P. 1071-1083.

89. Infectious laryngotracheitis virus growth, DNA replication, and protein synthesis / C.T. Prideaux, K. Kongsuwan, M. A. Johnson [et. al.] // Arch. Virol. -1992. - Vol. 123. - P. 181-192.

90. Intervention strategies for laryngotracheitis: impact of extended downtime / R.P. Chin, M. Garcia, C. Corsiglia [et al.] // Avian Dis. - 2009. - Vol. 53. - P. 574-577.

91. Jacob, R.J. Anatomy of herpes simplex virus DNA. 13. Accumulation of head to tail concatemers in nuclei of infected cells and their role in the generation of the four isomeric arrange ments of viral DNA / R.J. Jacob, L.S. Morse, B. Roizman // J. Virol. - 1979. - Vol. 29. - P. 448-457.

92. Johnson, M.A. Molecular evolution of infectious laryngotracheitis virus (ILTV; gallid herpesvirus 1): an ancient example of the Alphaherpesviridae / M.A. Johnson, S.G. Tyack // Vet. Microbiol. - 1995. - Vol. 46. - P. 221-231.

93. Jordan, F.T.W. A review of the literature on infectious laryngotracheitis / F.T.W. Jordan // Avian Dis. - 1966. - Vol. 10. - P. 1-26.

94. Keller, C.L. Identification of the thymidine kinase gene of infectious laryngotracheitis virus / C.L. Keller, D.H. Kingsley, B.C.R. Adams // Avian Dis. -1991. - Vol. 35. - P. 920-929.

95. Kozak, M. Regulation of herpesvirus macromolecular synthesis: nuclear retention of non-translated viral RNA sequences / M. Kozak, B. Roizman // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1974. - Vol. 71. - P. 4322-4326.

96. Lehman, I.R. Replication of Herpes Simplex Virus DNA / I.R. Lehman, P.E. Boehmer // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274, N. 40. - P. 28059-28062.

97. Ligas, M.W. A herpes simplex virus mutant in which glycoprotein D sequences are replaced by beta-galactosidase sequences binds to but is unable to penetrate into cells / M.W. Ligas, D.C. Johnson // J. Virol. - 1988. - Vol. 62. - P. 1486-1494.

98. Locker, H. Structure and expression of class II defective herpes simplex virus genomes encoding infected cell polypeptide number 8 / H. Locker, N. Frenkel, I. Halliburton // J. Virol. - 1982. - Vol. 43. - P. 574-593.

99. Loudovaris, T. Genetic resistance to infectious laryngotracheitis in inbred lines of white Leghorn chickens / T. Loudovaris, B.H. Yoo, K.J. Fahey // Avian Pathology. - 1991. - Vol. 20. - P. 357-361.

100. McGeoch, D.J. Toward a comprehensive phylogeny for mammalian and avian herpesviruses / D.J. McGeoch, A. Dolan, A.C. Ralph // J. Virol. - 2000. -Vol. 74. - P. 10401-10406.

101. Mettenleiter, T. Herpesvirus assembly and egress / T. Mettenleiter // J. Virol. - 2002. - Vol. 76. - P. 1537-1547.

102. Meulemans, G. Some physico-chemical and biological properties of a Belgian strain (U76/1035) of infectious laryngotracheitis virus / G. Meulemans, P. Halen // Avian Pathology. - 1978. - Vol. 7. - P. 311-315.

103. Mocarski, E.S. Structure and role of the herpes simplex virus DNA termini in inversion, circularization and generation of virion DNA / E.S. Mocarski, B. Roizman // Cell. - 1982. - Vol. 31. - P. 89-97.

104. Molecular biology of avian infectious laryngotracheitis virus / W. Fuchs, J. Veits, D. Helferich [et al.] // Vet. Res. - 2007. - Vol. 38. - P. 261-279.

105. Molecular epidemiology of infectious laryngotracheitis: a review / K.R. Menendez, M. Garcia, S. Spatz, N.L. Tablante // Avian Pathology. - 2014. - Vol. 43, N. 2. - P. 108-117.

106. Molecular genetics of herpes simplex virus. 7. Characterization of a temperature-sensitive mutants produced by in vitro mutagenesis and defective in DNA synthesis and accumulation of 4 polypeptides / A.F. Conley, D.M. Knipe, P.C. Jones, B. Roizman // J. Virol. - 1981. - Vol. 37. - P. 191-206.

107. Molecular genetics of herpes simplex virus. 7. Characterization of a temperature-sensitive mutant produced by in vitro mutagenesis and defective in DNA synthesis and accumulation of gamma polypeptides / A.J. Conley, D.M. Knipe, P.C. Jones [et al.] // J. Virol. - 1981. - Vol. 37. - P. 191-206.

108. Neff, C. Characterization of western European field isolates and vaccine strains of avian infectious laryngotracheitis virus by restriction fragment length polymorphism and sequence analysis/ C. Neff, C. Sudler, R.K. Hoop // Avian Dis.

- 2008. - Vol. 52. - P. 278-283.

109. Office International des Epizooties (OIE). Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. Chapter 2.3.3. Avian infectious laryngotracheitis.

- Paris, 2014. - P. 1-11. - Режим доступа: http ://www.oie.int/en/ international-standard-setting/terrestrial-manual/access-online/

110. Oldoni, I. Characterization of infectious laryngotracheitis virus isolates from the Unites States by polymerase chain reaction and restriction fragment length

polymorphism of multiple genome regions / I. Oldoni, M. Garcia // Avian Pathology. - 2007. - Vol. 36. - P. 167-176.

111. Ou, S.C. Comparison of a Taqman real-time polymerase chain reaction assay with a loop-mediated isothermal amplification for detection of Gallid herpesvirus 1 / S.C. Ou, J.J. Gaimbrone, K.S. Macklin // J. Vet. Diagn. Investigation. - 2012. - Vol. 21. - P. 138-141.

112. Para, M.F.G. IG-G (FG)-binding receptors on virions of HSV-1 and transfer of these receptors to cell surface by infection / M.F. Para, R.B. Baucke, P. G. Spear // J. Virol. - 1980. - Vol. 4. - P. 512-520.

113. Pathogenicity and growth characteristics of selected infectious laryngotracheitis virus strains from the United States / I. Oldoni, A. Rodriguez-Avila, S.M. Riblet [et al.] // Avian Pathology. - 2009. - Vol. 38. - P. 47-53.

114. Phylogenetic and molecular epidemiological studies reveal evidence of multiple past recombination events between infectious laryngotracheitis viruses / S.W. Lee, J. M. Devlin, J. F. Markham [et al.] // PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8, N 2.

- Режим доступа: http://iournals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0055121

115. Protection against infectious laryngotracheitis by in ovo vaccination with commercially available viral vector recombinant vaccines / D.I. Johnson, A. Vagnozzi, F. Dorea [et al.] // Avian Dis. - 2010. - Vol. 54. - P. 1251-1259.

116. Protection induced by commercially available live attenuated and recombinant viral vector vaccines against infectious laryngotracheitis virus in broiler chickens / A. Vagnozzi, G. Zavala, S.M. Riblet [et al.] // Avian Pathology.

- 2012. - Vol. 41. - P. 21-31.

117. Pulsford, M.F. Infectious laryngotracheitis in poultry / M.F. Pulsford // Veterinary Bull. - 1963. - Vol. 33. - P. 477-483.

118. Purifoy, D.J. Identification of the herpes simplex virus DNA polymerase gene / D.J. Purifoy, R.B. Lewis, K.L. Powell // Nature. - 1977. - Vol. 269. - P. 621-623.

119. Rapid detection and characterization from field cases of infectious laryngotracheitis virus by real-time polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism / J.L. Creelan, V.M. Calvert, D.A. Graham, S.J. McCullough // Avian Pathology. - 2006. - Vol. 35. - P. 173-179.

120. Rapid detection of infectious laryngotracheitis virus by standardization of polymerase chain reaction targeting a relatively conserved region of the thymidine kinase gene / S. Chakma, S. Sarker, S. Talukder [et al.] // University J. Zoology. -2010. - Vol. 29. - P. 61-64.

121. Rapid detection of infectious laryngotracheitis virus isolates by loopmediated isothermal amplification / Q.M. Xie, J. Ji, T.T. Pickens [et al.] // J. Virol. Methods. - 2010. - Vol. 165. - P. 71-75.

122. Rapid differentiation of vaccine strains and field isolates of infectious laryngotracheitis virus by restriction fragment length polymorphism of PCR products / P.C. Chang, Y.L. Lee, J.H. Shien, H.K. Shieh // J. Virol. Methods. -1997. - Vol. 66. - P. 179-186.

123. Regulation of herpesvirus synthesis. 5. Properties of a polypeptides specified by HSV-1 and HSV-2 / L. Pereira, M. Wolff, M. Fenwick, B. Roizman // Virology. - 1977. - Vol. 77. - P. 733-749.

124. Relationship between mortality, clinical signs and tracheal pathology in infectious laryngotracheitis / N.C. Kirkpatrick, A. Mahmoudian, C.A. Colson [et al.] // Avian Pathology. - 2006. - Vol. 35. - P. 449-453.

125. Replication and transmission of live attenuated infectious laryngotracheitis virus (ILTV) vaccines / A. Rodríguez-Avila, I. Oldoni, S. Riblet, M. García // Avian Dis. - 2007. - Vol. 51. - P. 905-911.

126. Restriction fragment length polymorphism analysis of multiple genome regions of Korean isolates of infectious laryngotracheitis virus collected from chickens / H.R. Kim, M.S. Kang, M.J. Kim [et al.] // Poultry Sci. - 2013. - Vol. 92. - P. 2053-2058.

127. Reverse restriction fragment length polymorphism (RRFLP): a novel technique for genotyping infectious laryngotracheitis virus (ILTV) live attenuated

vaccines / S.A. Callison, S.M. Riblet, A. Rodriguez-Avila, M. Garcia // J. Virol. Methods. - 2009. - Vol. 160. - P. 119-124.

128. Reynolds, A.E. Conformational changes in the nuclear lamina induced by herpes simplex virus type 1 require genes U (L) 31 and U (L) 34 / A.E. Reynolds, L. Liang, J.D. Baines // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 5564-5575.

129. RFLP analysis of recent Northern Ireland isolates of infectious laryngotracheitis virus: comparison with vaccine virus and field isolates from England / D.A. Graham, I.E. McLaren, V. Calvert [et al.] // Avian Pathology. -

2000. - Vol. 29. - P. 57-62.

130. Robertson, G.M. Replication of infectious laryngotracheitis virus in chickens following vaccination / G.M. Robertson, J.R. Egerto // Australian Vet. J. - 1981. -Vol. 57. - P. 119-123.

131. Roizman, B. Herpes simplex viruses and their replication / B. Roizman, D.M. Knipe // Fields Virology / ed. D.M. Knipe, P.M. Howley. - Philadephia,

2001. - P. 2399-2459.

132. Roizman, B. The family Herpesviridae: a brief introduction / B. Roizman, P.E. Pellett // Fields Virology / ed. D. M. Knipe, P. M. Howley. - Philadephia, 2001. - P. 2381-2397.

133. Roizman, B. The family herpesviridae: general description, taxonomy and classification / B Roizman // The Herpesviruses / ed. B. Roizman. - New York, 1982. - P. 1-23.

134. Role of the UL25 gene product in packaging DNA into the herpes simplex virus capsid: location of UL25 product in the capsid and demonstration that it binds DNA / M. Ogasawara, T. Suzutani, I. Yoshida [et al.] // J. Virol. - 2001. -Vol. 75. - P. 1427-1436.

135. Samberg, Y. The development of a vaccine against avian infectious laryngotracheitis. I. Modification of a laryngotracheitis virus / Y. Samberg, I. Aronovici // Refuah Veterinarith. - 1969. - Vol. 26. - P. 54-59.

136. Samberg, Y. The development of a vaccine against avian infectious laryngotracheitis. 3. Characteristics of a modified virus / Y. Samberg, I. Aronovici // Refuah Veterinarith. - 1969. - Vol. 26. - P. 158-167.

137. Schalm, O.W. The resistance of the virus of infectious laryngotracheitis to certain physical and chemical factors / O.W. Schalm, J.R. Beach // J. Infect. Dis. -1935. - Vol. 56. - P. 210-223.

138. Seddon, H.R. Infectivity experiments with the virus of laryngotracheitis of fowls / H.R. Seddon, L. Hart // Aust. Vet. J. - 1936. - Vol. 12. - P. 13-16.

139. Spread of the newly emerging infectious laryngotracheitis viruses in Australia / R. Agnew-Crumpton, P.K. Vaz, J.M. Devlin [et al.] // Infection, Genetics and Evolution. - 2016. - Vol. 43. - P. 67-73.

140. Stackpole, C.W. Herpes-type virus of the frog renal adenocarcinoma. I. Virus development in tumor transplants maintained at low temperature / C.W. Stackpole // J. Virol. - 1969. - Vol. 4. - P. 75-93.

141. Susceptibility of ducks to the virus of infectious laryngotracheitis / S. Yamada, K. Matsuo, T. Fukuda, Y. Uchinuno // Avian Dis. - 1980. - Vol. 24. - P. 930-938.

142. Taylor, T.J. Proteomics of herpes simplex virus replication compartments: association of cellular DNA replication, repair, recombination, and chromatin remodeling proteins with ICP8 / T.J. Taylor, D.M. Knipe // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - P. 5856-5866.

143. The development of a vaccine against avian infectious laryngotracheitis IV. Immunization of chickens with a modified laryngotracheitis vaccine in the drinking water / Y. Samberg, E. Cuperstein, U. Bendheim, I. Aronvici // Avian Dis. - 1971. - Vol. 15. - P. 413-417.

144. The non-essential UL50 gene of avian infectious laryngotracheitis virus encodes a functional dUTPase which is not a virulence factor / W. Fuchs, K. Ziemann, J. P. Teifke [et al.] // J. Gen. Virol. - 2000. - Vol. 81. - P. 627-638.

145. The product of the herpes simplex virus type 1 UL25 gene is required for encapsidation but not for cleavage of replicated viral DNA / A.R. McNab, P. Desai, S. Person [et al.] // J. Virol. - 1998. - Vol. 72. - P. 1060-1070.

146. The UL47 gene of avian infectious laryngotracheitis virus is not essential for in vitro replication but is relevant for virulence in chickens / D. Helferich, J. Veits, J.P. Teifke [et. al.] // J. Gen. Virol. - 2007. - Vol. 88. - P. 732-742.

147. The UL6 gene product forms the portal for entry of DNA into the herpes simplex virus capsid / W.W. Newcomb, R.M. Juhas, D.R. Thomsen [et al.] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. - P. 10923-10932.

148. Thureen, D.R. Psittacid herpesvirus 1 and infectious laryngotracheitis virus: Comparative genome sequence analysis of two avian alphaherpesviruses / D.R. Thureen, C.L. Keeler // J. Virol. - 2006. - Vol. 80. - P. 7863-7872.

149. UL31 and UL34 proteins of herpes simplex virus type 1 form a complex that accumulates at the nuclear rim and is required for envelopment of nucleocapsids / A.E. Reynolds, B.J. Ryckman, J.D. Baines [et al.] // J. Virol. - 2001. - Vol. 75. -P. 8803-8817.

150. Ultrastructural localization of the herpes simplex virus type 1 u(l)31, u(l)34, and u(s)3 proteins suggests specific roles in primary envelopment and egress of nucleocapsids / A.E. Reynolds, E.G. Wills, R.J. Roller [et al.] // J. Virol. - 2002. -Vol. 76. - P. 8939-8952.

151. Vaccinal laryngotracheitis—overview in the United States / S. Davison, L. Dufour-Zavala, M. García [et al.] // Proc. 109th Annu. Meet. United States Animal Health Assoc. - Hershey, PA, 2005- P. 580.

152. Varmuza, S.L. Signals for site-specific cleavage of HSV DNA: maturation involves two separate cleavage events at sites distal to the recognition sequences / S.L. Varmuza, J.R. Smiley // Cell. - 1985. - Vol. 41. - P. 793-802.

153. Vlazny, D.A. Site-specific cleavage/packaging of herpes simplex virus DNA and the selective maturation of nucleocapsids containing full-length viral DNA / D.A. Vlazny, A. Kwong, N. Frenkel // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1982. - Vol. 79. - P. 1423-1427.

154. Watrach, A.M. The structure of infectious laryngotracheitis virus / A.M Watrach, L.E. Hanson, M.A. Watrach // Virology. - 1963. - Vol. 21. - P. 601-608.

155. Winterfield, R.W. Susceptibility of turkeys to infectious laryngotracheitis / R.W. Winterfield, I.G. So // Avian Dis. - 1968. - Vol. 12. - P. 191-202.

156. Wolf, H. The regulation of у (structural) polypeptide synthesis in HSV types 1 and 2 infected cells / H. Wolf, B. Roizman // Oncogenesis and Herpesviruses / ed. G. de The [et al.]. - Lyon, France, 1978. - Vol. 3. - P. 327.

157. Wolontis, S. Correlation of herpes simplex virus types 1 and 2 with clinical features of infection / S. Wolontis, S. Jeansson // J. Infect. Dis. - 1977. - Vol. 135. - P. 28-33.

158. Zavala, G. The old and new landscapes of infectious laryngotracheitis virus / G. Zavala // The Poultry Informed Professional. - 2008. - Vol. 118. - P. 1-7.

159. Zhao ,Y. Multiple comparison analysis of two new genomic sequences of ILTV strains from china with other strains from different geographic regions / Y. Zhao, C. Kong, Y. Wang // PLoS ONE. - 2015. - Vol. 10, N 7. - Режим доступа:https://iournals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/iournal.pone.0132747

160. Ziemann, K. Infectious laryngotracheitis herpesvirus expresses a related pair of unique nuclear proteins, which are encoded by split genes, located at the right end of the UL genome region / K. Ziemann, T.C. Mettenleiter, W. Fuchs // J. Virol. - 1998. - Vol. 72. - P. 6867-6874.

161. Ziemann, K. Gene arrangement within the unique long genome region of infectious laryngotracheitis virus is distinct from that of other alphaherpesviruses / K. Ziemann, T.C. Mettenleiter, W. Fuchs // J. Virol. - 1998. - Vol. 72. - P. 847852.

7. ПРИЛОЖЕНИЯ