Картирование генов на хромосомах крупного рогатого скота методом гибридизации соматических клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Стрельченко, Николай Степанович

• Стрельченко, Николай Степанович
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Стрельченко, Николай Степанович

ВВЕДЕНИЕ

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

IЛ.Методы картирования генов

1.2.Гибридизация соматических клеток

1.3.Селективные и полуселективные методы выделения гибридных клеток 16 1.4.Элиминация хромосом в межвидовых гибридных клетках

1.5.Идентификация хромосом в кариотипах гибридных клеток

1.6.Идентификация продуктов действия генов

1.7.Статистические методы анализа хромосом в гибридных клетках 37 Часть 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 39 2Л.Материалы и оборудование 39 2.1 Л.Биологический материал 39 2 Л. 2. Посуда

2.1.3.Среды и реактивы

2.1.4.Г1рибрры и оборудование 41 2.2.Методики выполнения работы

2.2.1.Получение первичных культур клеток

2.2.2.Выделение лимфоцитов

2.2.3.Культивирование клеток

2.2.4.Слияние клеток 46 2.2.5.Окрашивание и анализ гибридных кариотипов 48 2.2.6.Электрофоретический анализ гибридных клонов 49 2.2.7.Статистический анализ гибридных клонов 51 Часть 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 54 ЗЛ.Кариотипы родительских клеток

3.1.1.Характеристика кариотипа крупного рогатого скота

3.1.2.Характеристика перевиваемой линии клеток

3.2.Поиск наилучших вариантов слияния клеток

3.3.Кариологический анализ гибридных клонов

3.4.Картирование полигенного признака про+ методами прямой и обратной селекции гибридных клонов

3.5.Анализ данных электрофоретического разделения экстрактов клеток гибридных клонов 85 3. б Локализация генов ЛДГ,-А,ЛДГ-В,Г6ФД и обсуждение полученных результатов по картированию генов 91 ВЫВОДЫ 100 Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Картирование генов на хромосомах крупного рогатого скота методом гибридизации соматических клеток»

В современной генетике под термином картирование генов принято понимать локализацию участка ДНК,кодирующего синтез определенной полипептидной цепи, на метафазных хромосомах. Создание таких генетических карт может стать ключом для понимания процессов дифференцировки клеток, уточнения процессов видообразования и в решении ряда важных задач целенаправленной селекции.

Методическое решение проблемы картирования представляет большую сложность, несмотря на обилие различных подходов. К классическому методу картирования, с помощью которого была построена первая генетическая карта плодовой клушки дрозофилы, относится статистический анализ мейотических рекомбинантов(91) С дальнейшим развитием генетики появились другие методы, с помощью которых создавались генетические карты различных видов животных и человека. Биологические особенности живых существ различных видов, классов и типов накладывают ограничения на возможность широкого применения какого-либо одного метода. Особую сложность в этом плане вызывала работа с сельскохозяйственными животными. Об этом свидетельствуют весьма скудные сведения о локализации генов на их хромосомах (39).С уверенностью можно сказать, что в настоящее время не существует универсального метода,применяя который можно построить полные генетические карты всех многоклеточных организмов.

Открытие явления гибридизации соматических клеток(21) дало возможность исследователям освоить новый метод картирования генов, в т.ч. и у сельскохозяйственных животных. Смысл нового метода сводится к получению in vitro нового типа клеток, анализ которых позволяет установить связь "ген-хромосома". При слиянии соматических клеток отдаленных видов в культуре образуются гибридные клетки с суммарным геномом исходных родительских клеток. Элиминация хромосом в последующих генерациях гибридных клеток приводит к тому,что генетический материал, преимущественно одной из родительских форм, частично редуцируется. Этот процесс носит спонтанный характер и дает возможность получения гибридных клонов с различным составом хромосом.

Сопоставление фенотипического проявления маркерных генов с кариологическим анализом клонов позволяет установить связь "маркер-хромосома". Здесь возможны два пути локализации. Первый сводится к выявлению определенной хромосомы, а второй к поиску синтенных групп генов, т.е. генов, локализованных в одной хромосоме.

Целью настоящей работы является изучение вопросов частной генетики крупного рогатого скота с использованием современных достижений в области цитогенетики и электрофоретичес-ких методов разделения ферментов в анализе гибридных клонов соматических клеток.

Задача, обусловленная постановкой цели в данной работе, сводится к следующему положению: используя экспериментальный подход в области гибридизации соматических клеток картировать группу генов крупного рогатого скота. Для решения поставленной задачи было решено картировать гены, кодирующие синтез ферментов ЛДГ, Г6ФД и полигенный признак про+, который кодирует гены коровы, компенсирующие при гибридизации проли-новую недостаточность в клетках перевиваемой линии CH0-KI про". Выбор этих генов был продиктован следующими сообра

- б -жениями:

1. Лактатдегидрогеназа состоит из двух типов субъединиц, кодируемых двумя независимыми генами.

2. Ген глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФД) у многих млекопитающих локализован в Х-хромосоме (96) .Поэтому с нашей стороны было логично предположение о локализации его у крупного рогатого скота тоже в Х-хромосоме, что позже было подтверждено литературными данными (62).В связи с этим, правильность локализации этого гена могла послужить одним из ориентиров достоверности полученных данных.

3. При электрофорезе вышеупомянутые ферменты у клеток китайского хомячка и коровы имеют различную электрофорети-ческую подвижность,что упрощает их видовую принадлежность.

4. Группа генов про+ может использоваться как селективный маркер при отборе гибридных клеток

5. Таким образом в случае присутствия в гибридных клетках хромосом коровы,детерминирующих эти гены их фенотипи-ческое проявление будет всегда обнаружено.

Основное положение выдвигаемое на защиту состоит в обосновании возможности локализации вышеупомянутых маркерных генов с использованием следующих методических приемов:

-гибридизации соматических клеток

-прямая и обратная селекция гибридных клонов соматических клеток

-кариологический и электрофоретический анализы гибридных клонов.

- 7

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Генетика соматических клеток, как самостоятельная отрасль генетики, определилась сравнительно недавно.Она возникла на основе работ по культивированию соматических клеток in vitrp3^a4eii этого нового направления является изучение механизмов и законов наследственности на клеточном уровне. Одной из частных проблем генетики соматических клеток является создание генетических карт.

I.I. МЕТОда КАРТИРОВАНИЯ ГЕНОВ.

В I960 году Понтекорво (102) высказал предположение,что ошибки,возникающие при мейозе,могут стать источником информации о рекомбинациях генов у человека,аналогично тому, как митотические рекомбинанты были использованы в генетическом анализе Aspergillus nid . При совместном культивировании различных мицеллиев Aspergillus образовывались спонтанные гетерокарионы.Такие многоядерные мицелии,содержащие гаплоидные ядра могут существовать без дальнейших изменений. Однако, иногда два типа гаплоидных ядер внутри гетерокариона сливались в одно,и диплоидный мицеллий продуцировал вегетативные диплоидные споры.Необходимо отметить крайне малую вероятность этого события.В отдельных случаях хромосомы таких диплоидных ядер элиминируются и иногда имеют перестройки образованные митотическим кроссинговером.Подобные генетические изменения в единичных ядрах могут регистрироваться при отделении от мицеллия вегетативных спор.Сегрегация целых хромосом позволила установить группы локусов в соответствующих хромосомах и изучая частоту кроссинговерных перестроек определить линейный порядок генов на хромосоме.Данные полученные этим путем послужили основой для построения генетической карты Aspergillus nidulans.

Подобный путь создания генетических карт неприемлем для генетики высших позвоночных.Это обусловлено низкой жизнеспособностью актантов.Наиболее просто картировать гены,сцепленные с Х-хромосомой.Это было проиллюстрировано на примере нескольких локусов,известных как Х-сцепленных (84).

Установление локализации генов,находящихся в аутосомах, требует иного подхода.Первая генетическая карта плодовой мушки Drosophila была составлена Морганом (91) .Создание этой карты базировалось на изучении частот мейотического кроссинговера.Использование статистического метода семейного анализа Никифоров (10) показал сцепленность трех казеиновых генов крупного рогатого скота и указал на относительное расстояние между ними.

Применение метода дозы генов позволило локализовать на хромосомной карте человека некоторые гены.Этот метод основан на том,что активность генов при трисомии достигает 150%, а при делециях - 50%.Вследствие ошибок,возникающих при мей-озе,возникают различные варианты моносомиков и трисомиков, вызывающие различного рода генетические заболевания.Сюда можно отнести синдром Дауна (74),17-трисомию (40),синдром Тернера (46).

Фергюсон-Смит и его сотрудники описали метод картирования генов,который включает в себя тестирование гетерози-готности у пациентов с моносомией или делециями.Однако этот метод позволяет скорее исключить исследуемые гены из определенной хромосомы,чем гарантировать их наличие.Хотя такое исключение может дать и полезную информацию.Так например локализация локуса группы крови Kb. в коротком плече хромосомы I, лактатдегидрогеназы-В (ДЦГ-В) на коротком плече хромосомы 12 (112), а также локализация гена кислой фосфатазы эритроцитов в коротком плече хромосомы 2 (44) установлены именно этим путем.

К чисто визуальному картированию по праву можно отнести метод гибридизации in situ .Его суть сводится к прямой гибридизации на метафазных хромосомах копии меченной изотопами ДНК,полученной при обратной транскрипции определенного вида РНК Локализация ДНК на хромосомах устанавливается с помощью авторадиографии.Этим методом была показана возможность локализации единичных копий ДНК человеческого генома (60).

Открытие метода гибридизации соматических клеток (21) открыло новую эру в составлении генетических карт различных видов животного мира.Первым геном картированным с помощью этого метода был ген человеческой тимидинкиназы (тк~) (126). Последующее развитие методов дифференциальной окраски хромосом, дало возможность точно идентифицировать видовую принадлежность хромосом в гибридных клетках, а также различного рода транслокации и делеции хромосомного материала,что позволило более точно локализовать картируемые гены (52,68).

- 10

Заключение диссертации по теме «Генетика», Стрельченко, Николай Степанович

выводы

1. Показана возможность картирования генов крупного рогатого скота с помощью метода гибридизации соматических клеток.

2. При слиянии клеток китайского хомячка линии CHO-KI11?0"" с лимфоцитами или фибробластами легкого эмбриона коровы образуются жизнеспособные гибридные клоны.

3. Подтверждены данные о том, что в гибридных клонах "СНО х корова" происходит элиминация хромосом коровы.

4. Ген, кодирующий синтез фермента лактатдегидрогеназы А у крупного рогатого скота находится в шестой хромосоме (vp=0,87 /2=21,0; 0Р=7,12)

5. Ген, кодирующий синтез субъединицы В фермента лактатдегидрогеназы у крупного рогатого скота локализован в двадцать первой хромосоме =0,87; У2=21,0; 0Р=8,23)

6. Подтвержден факт локализации гена глюкозо-6-фосфатде-гидрогеназы у крупного рогатого скота в Х-хромосоме=1,0; /2=28,0; 0Р=6,58)

7. Методом прямой и обратной селекции шести гибридных клонов установлено, что гены признака про4" локализованы в седьмой и двадцатой хромосомах крупного рогатого скота.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Стрельченко, Николай Степанович, 1984 год

1. Волкова Л.В.,Какпакова Е.С. 1972 Получение и характеристика гибридов соматических клеток мыши и китайского хомячка. Ж.Генетика,8, №12, стр.120-127.

2. Евграфов 0.В.,Макаров В.Б. 1980 Определение эффективности слияния клеток китайского хомячка в монослое.,Ж.Цитология ,22, №3 , стр . 338-342 .

3. Жданова И.С.,Керкис А.Ю. 1978 Электронно-микроскопическое исследование слияния соматических клеток млекопитающих под действием полиэтиленгликоля.,Ж.Цитология,20,№11,стр.1317 -1319.

4. Игнатова Т.Н.,Абрамян Д.С. 1976 Получение новых генетических вариантов соматических клеток высших животных с помощью полиэтиленгликоля., В сб. III Всесоюзн.симп."Молекулярные механизмы генетических процессов".,Москва,1976.

5. Исследование хромосом сельскохозяйственных животных.1976 Кн.,ред.Яковлев А.Ф.,ВАСХНИЛ,ВНИИ разведения и генетики сельскохозяйственных животных,Ленинград,1976.

6. Лакин Г.Ф. 1980 Биометрия.,Кн./'Высшая школа",Москва.

7. Маурер 1970 Диск-электрофорез.,Кн.,"Мир",Москва.

8. Корочкин Л.И.,Серов 0.Л.,Пудовкин А.И.,Аронштам А.А., Боркин Л.Я.,Малецкий С.И.,Полякова Е.В.,Манченко Г.П.1977 Генетика изоферментов.,Кн.,Ред.акад.Беляев Д.К.,"Наука" Москва.

9. Новые методы культуры животных тканей 1976 Кн.,Ред.Васлей Г.Д.,0ленов Ю.М.,"Мир",Москва,1976.

10. Никифоров В.С.,Матюков B.C. 1982 Использование данных зоотехнического учета для построения генетических карт. Препринт"Научные доклады"Вып.84 (Коми филиал АН СССР),Сыктывкар,1982.

11. Носач А.К.,Яковлев А.Ф. 1977 Идентификация хромосом в кариотипе коровы методом дифференциального окрашивания по Гимза с последующей денситометрией.,Ж.Цитология и генетика, .П, №2, стр.128-131.

12. Раджабли С.И.Крюкова Л.В. 1973 Сравнительный анализ дифференциальной окраски двух видов хомячков:даурского и китайского .Д.Цитология,15,№12,стр.1527-1531.

13. Эфрусси Б.1976 Гибридизация соматических клеток Кн., "Мир",Москва.1.« Alderdice P.W.,Miller О.J*,Pearson P«L«,Klein G.Harris H. 1973 Human chromosomes in 18 man-mouse somatic cell lines analised "by quinacrine fluorescence.,J.Cell CSci.,12, pp.809&830.

14. Andersen E. 1966 Linkage between the К blood group locus and Hp locus for hematinbinding globuling in pigs.,Genet.,pp. 805*812.

15. Arrighi F.,Hsu Т.О. I97I Localization of heterochromatin- 103 in human chromosomes.,CytogenEt.,10,pp.81-86.

16. Barker R.M.,Brunette D.M.,Mahkovitz R.,Tompson L.N., Whitmore G.F.,Siminovich L and Till J.E. 1974 Oubain-resis-tant mutants of mouse and hamster cell in culture.,Cell,I, PP.9-21.

17. Barski G.,Sourieul S.and Cornefert F. I960 Production dans des cultures in vitro de deux souches cellulaires en association,de catactere 2"Hybride".,C.E.Hebd.Seances Acad. Sci.,2^I,pp.I825-l827.

18. Casperson T.,Farber S.,Foley G.E.,Kudynowski J.,Modest E.J.,Simonsson E.,Wagh U.,Zech L. 1968 Chemical differentiation along metaphase chromosomes.,Exp.Сell Res.pp.219-222.

19. Cassingena R.,Chany C.,Vignal B!.,Suaes H«,Estrade S.,bazar P. 1971 Use of monkey-mouse hybrid cells for the study of the cellular regulation of interferon production and action. Proc.Nat.Acad.Sci.(USA).,68,pp.580-584.

20. Chan Т.,Long C.,Green H. 1975 A human-mouse somatic hybrid line selected for human deoxycytidine deaminase.,Somat. Cell Genet.,I,pp.8I-90.

21. Cowmeadow M.P.,Ruddle F.H. 1978 Computer assisted statistical procedures for somatic cell gene assignment.,Cyto-genet.Qell Genet.,22,pp.649-697»

22. Cramp F.C.,Lucy J.A. 1974 Glycerol monooleate as fusogenfor the formation of heterokaryons and interspecific hybrid cells.,Exp.Cell Res.,8£,pp.I07-II0.

23. Creagam R.В.,Ruddle F.H. I975 The clone panel.A systematic approach to gene mapping using interspecific somatic cell hybrids.,Rotterdam Conf1974,Birth.Defects Orig.Artie.Ser.II.

24. Croce C.M. ,Koprowski H. 1974 Somatic cell hybrids between mouse peritoneal macrophages and SV-40 transformed human cells.J.Exp.Med.,140,pp.1221-1229»

25. Daipra L.,Fuhrman C.A.M.,Sacci N. ,De Carly L 1976 Uso di mezzi ipermotici per la selezione di ibidi cellulari atti.Assoc.Genet.Ital.,21,pp.64-65.

26. Davidson R.L. ,Ephrussi B. I965 A selective system for isolation of hybrids between L cells and normal cells.,Nature (London),205.PP II7O-II7I.

27. Davidson R.L.,0'Malley K.A.,Wheller T.B. I976 PEG induced mammalian cell hybridization: effect of polyethylene glycol molecular weight and concentration.,Somat.Cell Genet.2,pp.271-280.

28. Deaven L.L.,Petersen D.F. 1973 The chromosomes of CHO an aneuploid chine hamster cell lines G-band,C-band and autoradiographic. , Ohroiao soma > 41, pp. 129-144.

29. Deys B.F. 1972 Demonstration of X-linkage of G6PD,HGPRT and PGK in the horse by means by mule-mouse somatic cell hybridization.,Ph.D.Thesis,Leiden University,Leiden.

30. Diacumacos E.G.,latum E.L. 1972 Fusion of mammalian somatic cell by microsurgery.,Proc.Nat.Acad.Sci.(USA),69, pp. 2959-2962.

31. Dutrilaux B.,Leoune J. 1971 Sur une nouvelle technique- 105 d*analyse du caiyotype human.,C.R.Acad.Sci.(Paris),2£2, pp.2738-2640.

32. Echard G.,Gillois M. 19/9 Rabbit gene mapping G6pd-Gal-PGK-HGPRT synteny. ,Y-th Int.Workshop on Human Gene mapping,Edinburg,p.157•

33. Edward J.N.,Harnden D.G.,Cameron A.N.,Crosse V.M.,Wolf O.N.I960 in Goss S.J.1978.

34. Propagation in tissue 1954- Propagation in tissue cultures of cytopathogenetic agents from patient with measles. ,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,86,pp.277-286.

35. Evans H.J. ,Buchland R.A.,Samner A.T. 1973 Chromosome homology and heterochromatin in goat,sheep and ox stadied by banding techniques.,Chromosoma,42,pp.383-402.- 106

36. Ferguson-Smith M.A.,Newman В .F.,Ellis P.M.,Thompson P. M.G.and Riley I»D. 1973 Assignment by deletion of human red cell acid phosphatase gene locus to the short aim of chromosome 2.,Nature (London) New Biol.245«pp.271-274»

37. Fisher P.B.,Sisskin E.,Goldstein N.I.,1978 Selecting somatic cell hybrids with HAT media and nystatine methyl ester.,J.Cell Sci.,22,pp.433-439•

38. Ford C.E.,Jones K.W.,Polani P.E.,De Almeida J.O.,Brigs J.N. I959 in: Goss S.J.,1978.

39. Friend K.K.,Dorman B.P.,Kucherlapati R.S.,Ruddle F.N. 1976 Detection of interspecific translocations in mouse-human Hybrides by alkaline Giemsa staining.,Exp.Cell Res., 22,pp.31-36.

40. Jacob H.,Ruiz F.I970 Preferential loss of kangaroo rat chromosomes in hybrids between Chinese Hamster and kangaroo rat somatic cells.,Exp.Cell Res.,62,pp.310-314.

41. Johnson R.T.,Rao P.N.,Huhes H.D. 1970 Mammalian cell fusion III.A HeLa cell induced of premature chromosome condensation active in cell from a variety of animal species. J.Cell Physiol.,26,pp.I5I-I57

42. Gellin J. ,Benne F.,Hors-Cayla M.C.,Gillois M. 1980 Carte de genetique du pore (Sus scrofa i).Etude de deux gro-upes synteniques G6PD,PGK,HGPRT et PKM2,MPI.,Ann.Genet., 21, pp.15-21.

43. Goldstein S.,Lin C.C. 1972 Somatic cell hybrids between cultured fibroblasts from the Galapagos tortoise and the golden hamster.,Exp.Cell Res.,73*PP.266-269.

44. J?4. Gustavsson I. 1973 Appearance and persisted of the 1/29 translocation in cattle.Ins bes assidents chromosomiques de la reproduction. ,Ed.A.Boue et O.Thibault,Inst.Nat.de la San-te et de la recherche Medicale,pp.147-153*

45. Hainan C.R.E. 1976 A working idiogram and description of the G-banded chromosomes of the Bos Taurus on the hereford based breed. ,Theriogenology,£,pp. 155-164.

46. Hainan C.R.E. 1976 Chromosome banded G-banding in cattle,horse and buffaloes.,Vet.Res.,28,pp.138-142.

47. Hainan C.R.E.,Wason J.I. 1982 Y-chromosome variants in cattle.,Anim.Blood Group,I4,pp.l-I6.

48. Harris H.,Watkins J.F.,Ford C.E.,Schoefl G.I. 1966 Ar-tifical heterokaxyons of animal cells from different species., J.Cell Sci.I,pp.I-30.59 • Harris H., I97O Cell Fusion.,Oxford Univ.Press (Clarendon) London and New-York.

49. Harper M.E.,Grady F.Saunders 1981 Localization of Single copy ША sequences on G-banded human chromosomes by in sity Hybridization.,Chromosoma.85,PP.451-439.

50. Hensen K.M. 1972 Bovine chromo somes identified by quin-acrine mustard and fluorescence microscopy. ,Hereditas,70, pp.225-234.

51. Heyertz S.,Hors-Cayla M.C. 1978 Carte genetique des bo-vins la technique d'hybridation cellulaire sur chromosome X- 108 de la G6PD,PGK,Gal A,HGPRT.,Ann.genet.,21,pp.197-202.

52. Hors-Cayla M.C.,Heuertz S.,Van Cong N.,Benne F. 1979 Cattle gene mapping by somatic cell hybridization. ,Cytoge-net.Cell Genet.,25,pp.165-166.

53. Kao K.N. ,Michayluk M.R. I974 A method for high-friqu-ency intergenetic fusion of plant protoplast.,PIanta,115, PP.555-367.

54. Klein R. 1961 In: Goss S.J.,1978

55. Kusano Т.,Long C.,Green N. 1971 A new reduced human mouse somatic cell hybrids containing the human gene for adenine phosphoribosyltranferase.,Proc.Nat.Acad.Sci.(USA), 68,pp.82-86.

56. Lanfrachi G.,Marin G. 1981 Evidence for the derivation of mammalian somatic cell hybrids from polykariocytes* Exp.Cell Res.,153,pp.255-260.

57. Lauvergne J.J.,Howell W.E. 1979 Genetics of cattle.A paraitre dans: R.Robinson's Handbook of mammalian genetics.1. Garland, 1979.

58. Lauvergne J.J.,I968 Catalogue des anomalies heredita-ires des bovins (Bos Taurus) .,Bull.Tech.Dep.Genet.Anim., 1968.

59. Lejeune J.,Gautier M.,Turpin R. 1959 Ins Goss S.J.1978

60. Iiin C.C.,Newton D.R»,Smink N.K.,Church R.B. 1976 A rapid and simply method of the isolation and culture of leukocytes for chromosome analysis in domestic animals.,Can»J. Anim. Sci. , pp. 27-3* •

61. Lin C.C.,Newton D.R.,Church R.B. 1977 Identification and nomenclature for G-Banded bovine chromosomes.,Can. J. Genet.Cytol.,1$,pp.271-282.

62. Littlefield J.W. 1964 Selection of hybrids from mating of fibroblasts in vitro and their presumed recombinants., Sci.,145,pp.709-710.

63. Littlefield J.W. 1969 Hybridization of hamster cells with high iow folate reductase activity.,Proc.Nat.Acad.Sci.1. USA),62,pp.88-95.

64. Ma N.S.F. 1983 Comparative gene mapping of the owl monkey,Aotus with karyotypes V (2n=46) and VI(2n+49>50). Cyt.Cell Genetpp.II7-I23.

65. Makino S. 1944 Karyotypes of domestic cattle,zebu and domestic buffalo (Chromosome studies in domestic mammalian, 4),Cytologia,12,pp.247-264.

66. Marsh W.L.,Chaganti R.S.K.,Cardner F.N.,Mayer K.,Now-ell P.O.,German J. 1974 Mapping human autosomes: evidence supporting assignment of Rh to the short arm of chromosome I.,Sci.,I8£,PP•966-968.

67. De Mars R.,Hooper J.L. I960 A method selecting for au- но xotrophic mutants of HeLa cells.«J.Exp.Med.,111,pp«559-573»

68. Matsuya Y.,Green H.,Basilico 0. 1968 Properties and uses of human-mouse hubrid cell lines.,Nature (London),220, pp.1199-1202.

69. McKusiek V.A. 1975 Men.Inherit.in Man.,4th ed.,Jons Hopkins Univ.Press,Baltimore,Maryland.

70. McKusick V.A.,Klinger N.P.,Bootsma D.,Ruddle F.H. 1976 ins Goss S.J.,1978

71. Minna D.R.,Marshall T.H.,Shaffer-Berman P. 1976 in; Goss S.J.,1978.

72. Minor P.D.,Roscoe D.H. 1975 Colchicine resistance in mammalian cell lines.,J.Cell Sci.,17»PP.381-596.

73. Moorhead P.S.,Howell P.O. 1964 Chromosome cytology., Meth.Med.Res.,10,pp.310-522.

74. Morgan Т.Н. 1926 The theory of the Gene.,Yale Univer. Press,New Naven Conn.,1926.

75. Nabholz M.,Miggiano V.,Bodmer W.F. 1969 Genetic analysis with human-mouse somatic cell hybrids.,Nature (London), £21,pp.358-365.

76. Naha P.M. 1969 Temperature sensetive conditional mutants of monkey kidney cells.,Nature (London),223,РР. 13801381.

77. Nessbitt M.,Prance U. 1975 A system of nomenclaturefor band pattern of mouse chromosomes.,Chromosoma|4I,pp. 145-158

78. O'Brien S.J.,Nash W.G. 1982 Genetic Mapping in Mammals. Chromosome Map of Domestic C>at. Sci., 216, pp. 257-265

79. Ohno S. 1969 Chromosomes sexuels et genes lies au se-xe.,Gauthiera-Villars, Paris.

80. Okada Y. 1958 The fusion of Ehrech's tumoe cells caused by HVJ virus in vitro.,Biken J.,I,pp.I03-II0.

81. Paris Conference 1971 Standardization in cytogenetics., Birth Defects Orig.Art.Ser.,8,(7).

82. Peters J.H. 1975 Preparation of large quaatatics of pure bovine lymphocytes and a monolaer technique for lymphocyte cultivation.,ins Ed. Prescott D.M.,Method in Cell Biology., Ac ad. Pr e ss, N ew-Yo rk, % pp. I-II.

83. Peters J.H.,Wille W. 1977 High yield mammalian cell fusion induced by polyethylene glycol. Pseudopodia are involved in the initiation of the fusion process.,Cytobiolo-gie,15,pp.250-258.

84. Phillips T.,Fraisse J.,Guidbaud P.,Lauras В.,Phillips I.,Godet J.,Robert J.M. 1979 Etat actuel de la carte chro-mosomiques l'homme (Premiere parties les moyens d'etudes)., J.Genet.Hum.,27.pp.5-19.

85. Pontecorvo G. I960 In: Goss S.J.1978

86. Pontecorvo G. 1971 Induction of directional chromosome elimination in somatic cell hybrids.,Nature (London),230» pp.367-369.

87. Pontecorvo G. 1976 Production of indefinitely multipe ling mammalian somatic cell hybrids by polyethylene glucol (PEG) treatment.,Somat.Cell Genet.,I,pp.397-400,- 112

88. Poole A.R.,Howell J.Т.,Lucy J.A. 1970 Lysolectin in cell fusion.,Nature (London), 227«PP.810-814.

89. Proceedings of the First Internationale Conference for the Standardisation of Banded Karyotypes of Domestic Animals., Ed.Ford C.E.,et al.,Hereditas,£2,pp. 145-162»

90. Proceeding Cytogenetic Symposium 1983 American Dairy Science Association,June 26-29»1983,Madison, Wisconsin

91. Puck Т.Т.Дао F. I967 Genetic of somatic mammalianс ells .V. Treatment with 5-bromdeoxyuridine and visible light for the isolation of nutritionally deficient mutants^, Proc. Nat.Acad.Sc i.(USA),£8,pp.1227-1234.

92. Rao P.N.,Johnson R.T. 1972 Premature chromosome condensation: A mechanism for the elimination of chromosomes in virus fused cells.,J.Cell Sci.,10,pp.495-513.

93. Ray M.,Mohondas T. 1976 Ins Goss S.J. 1978

94. Reeve P.,Hewlett G.,Watkins H.,Alexander D.J.,Poste G.1974 Virus induced cell fusion by phytohaemagglutinin., Nature (London),249,pp.355-356•

95. Ruddle F.H.,Chapman V.M.,Chen T.R.,Klebe R.T. 1970 Linkage between human LDH-A and LDH-B and peptidase B., Nature (London), 222, pp.251-257.

96. Sabban E.,Loyter A. 1974 Fusion of chicken erytrocy-tes by phospholipase С (Clostridium perfringens).The requirement for hemolitic and hydrolitic and factor fusion.,Bio- из chem. Biophy s. Act a, j562, pp. 100-109.

97. SaicLi N.,Hors-Cayla M.C.,Van Cong N.,Benne F. 1979 Sheep gene mapping by somatic cell hybridization Ill.Syn-teny between PKM2 and NP in domestic sheep.,Ann.Genet.24, pp.148-151.

98. Scaletta L.J.,Ephrussi B. 1965 Hybridization of normal and neoplastic cells in vitro.,Nature (London),205»Р. 1169.

99. Scaletta L.J.,Rushforth N.В.,Ephrussi B. 1967 Isolation and properties of hybrids between somatic cell mouse and Chinese hamster cell.Genetics»57*PP.107-124.

100. Schwartz A.G.,Cook P.R.,Harris H. 1971 Correction of a genetic defect in mammalian cell.,Nature (London),2301 pp.5-8.

101. Siciliano M.,Stalling R.L.,Adiar G.,Humphrey R.,Sicili-ano J. 1983 Provisional assignment of TPItGPI and Pep D to Chinese Hamster autosomes 8 and 9.,Cyt.Cell Gen.35tpp«I5-20

102. Smith C.W.,Goldman A.S. I97I Macrophages from colos-trum.Multinucleated giant cell formation by phytohaemagglu-tinin,concavalin A.,Exp.Cell Res.,66,pp.317-320.

103. Steplewski Z.,Koprowski H.,Leibovitz A. 1976 Polyethylene glycol mediated fusion of human tumor cells with mouse cells.,Somat.Cell Genet.,2,pp.559-564.

104. Szybalski W.,Szybalska N.,Regnie G. 1962 Genetic studies with human cell lines.,Nat.Cancer Inst.,Monogr.£,pp. 75-82.

105. Teplitz R.L.,Gustavsson P.E.,Pellet O.L. 1968 Chromosomal distribution in interspecific in vitro hybrid cells., Exp.Cell Res.,pp.379-391.- 114

106. Thompson L.N.,Mankovitz R.,Baker R.M.,0}ill J.E.,Simi-novitch L.,Whitmore G.3?. 1970 Isolation of temperature-sensitive mutants of L cells.,Proc.Nat.Acad.Sci«,(USA),66,pp. 377-384.

107. Vaugan V.L.,Hansen D.,Stadler J. 1976 Parametrs of polyethylene glycol induced cell and hybridization in lymphoid cell lines.,Somat.Cell Genet.,2,pp.557-544-•

108. Yoshida M .C., Ephrussi B. 1967 Isolation and karyolo-gical characteristics of seven hybrids between somatic mouse cell in vitro.,J.Cell Physiol.»691PP.33-44.

109. Zepp H.D.,Conover J.H.,Hirschhorn K.,Hodes H.L. 1971 Human mosquito somatic cell hybrids induced UV-inactiva-ted Sedai virus., Nature (London), New Biol., 2291 PP. II9-I2I.

110. Kato H.,Yosida Т.Н. 1970 Banding pattern of Chinese hamster chromosomes revealed by new technique.,Chromosome, 36,pp.272-280.