Картирование хромосом свиньи (Sus scrofa Dom. L. ) на основе межвидовых гибридов соматических клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, доктор биологических наук Жданова, Наталья Сергеевна

• Жданова, Наталья Сергеевна
• доктор биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации доктор биологических наук Жданова, Наталья Сергеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Геномные карты и способы картирования хромосом

1.1.1. Генетические карты

1.1.2. Физические карты генома

1.1.2.1. Цито генетические карты

1.1.2.2. Радиационные карты

1.1.2.3. Карты контиг

1.1.3. Сравнительные карты геномов

1.2. Генетические маркеры 27 1.2.1. Типы генетических маркеров 27 1.2.1.1. Маркеры первого типа

1.2.1.1.1. Биохимические маркеры

1.2.1.1.2. Рестрикционный полиморфизм

1.2.1.1.3. ПЦР маркеры

1.2.1.1.3.1. CATS праймеры

1.2.1.1.3.2. TOAST праймеры

1.2.1.1.3.3. STS

1.2.1.1.3.4. EST

1.2. L2. Маркеры второго типа

1.2.1.3. Маркеры третьего типа

1.2.1.4. RAPD маркеры

1.3. Картирование маркеров с помощью гибридов соматических клеток

1.3.1. Гибриды соматических клеток

1.3.1.1. Спонтанное и индуцированное слияние клеток

1.3.1.2. Хромосомный состав гибридов соматических клеток

1.3.1.3. Способы идентификации интактных и перестроенных хромосом в клеточных гибридах

1.3.2. Принципы картирования маркеров с помощью гибридов соматических клеток

1.3.3. Картирование с помощью радиационных межвидовых клеточных гибридов

1,3.3,1. Принципы радиационного картирования

1.3.3.2. Радиационное картирование отдельных хромосом

1.3.3.3. Радиационное картирование всего генома

1.3.3.4. Радиационное картирование генома человека

1.3.3.5. Современные методы обработки данных радиационного картирования

1.3.3.6. Проблемы радиационного картирования

1.4. Сравнительный структуры геномов млекопитающих

1.4.1. ZOO-FISH.

1.4.2. Сравнительный анализ карт геномов млекопитающих

1.4.2.1. Сравнительный анализ цитогенетических и генетических карт 69 1.4.2.1. Сравнительный анализ радиационных карт.

1.4.3. Попытки реконструкции предковых кариотипов

1.4.4. Сравнительное позиционное клонирование

1.5. Картирование генома свиньи

1.5.1. Генетическая карта свиньи

1.5.2. Локализация QTL в геноме свиньи

1.5.3. Физическое картирование генома свиньи

1.5.3.1. Цитогенетическая карта

1.5.3.2. Радиационное картирование генома свиньи

1.5.4. Сравнительная карта генома свиньи

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 84 2.1. Методы работы с культурами клеток 84 2.1.1 Список использованных линий 84 2.1.2. Получение первичных культур клеток

2.1.2.1. Кратковременная культура лейкоцитов периферической крови свиньи

2.1.2.2. Получение первичных культур фибробластов животных

2.1.3. Манипуляции с перевиваемыми культурами клеток

2.1.4. Получение гибридов соматических клеток

2.1.5. Сбор образцов клеток для Саузерн блот гибридизации, ПЦР анализа и электрофоретического анализа белков

2.2 Методы работы с ДНК

2.2.1. Выделение ДНК

2.2.1.1. Выделение суммарной ДНК

2.2.1.2. Получение Cot 1 ДНК

2.2.1.3. Выделение плазмидной ДНК

2.2.2. Обработка ДНК эндонуклеазами

2.2.3. Электрофорез ДНК в агарозном геле

2.2.4. Блот гибридизации по Саузерну

2.2.4.1. Пробы

2.2.4.2. Мечение плазмидной ДНК методом статистической затравки

2.2.4.3. Процедура блот гибридизации по Саузерну

2.2.5. ПЦР анализ 91 2.2.5.1. Гетеродуплексный анализ 93 2.3. Методы цитогенетического анализа

2.3.1. Получение препаратов метафазных хромосом

2.3.2. G дифференциальное окрашивание хромосом

2.3.3. Подготовка препаратов для микродиссекции

2.3.4. In situ гибридизация

2.3.4.1. Мечение проб

2.3.4.1.1. Мечение проб биотином (био-11-дУТФ) или дигоксигенином (диг-11-дУТФ) методом ник-трансляции

2.3.4.1.2. Мечение проб биотином с помощью inter-SINE ПЦР

2.3.4.1.3. Изотопное мечение проб методом статистической затравки

2.3.4.2. Нерадиоактивная гибридизация in situ

2.3.4.2.1. Подготовка пробы

2.3.4.2.2. Подготовка препаратов

2.3.4.2.3. Процедура ш situ гибридизации

2.3.4.2.4. Отмывка препаратов после гибридизации

2.3.4.2.5. Детекция сигнала на препаратах

2.3.4.2.5.1. Детекция сигнала с помощью флуоресцентных красителей

2.3.4.2.5.2. Детекция сигнала с помощью пероксидазы и красителей NBT BCIP

2.3.4.2.6. Анализ изображения

2.3.4.3. Изотопная гибридизация in situ

2.4, Электрофоретический анализ белков

2.5. Статистический анализ данных радиационного картирования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Получение и характеристика клеточной линии американской норки MVTK", устойчивой к 5БДУ

3.1.1. Селекция устойчивого клона

3.1.2. Кариотип линии MVTK

3.1.3. Получение межвидовых гибридов с клетками MVTK-. Генный состав района 2pter-p22, транспонированного в MVTK- на хромосому

3.2. Гибриды соматических клеток свинья - американская норка

3.2.1. Получение гибридных клонов и общая характеристика

3.2.2. Идентификация перестроенных хромосом свиньи в гибридном клоне SV36 с помощью микродиссекциионных библиотек

3.2.3. Получение и характеристика монохромосомных гибридных клеточных линий свиньи

3.3. Картирование генов свиньи с помощью межвидовых гибридов соматических клеток

3.3.1. Картирование генов свиньи с помощью гибридных клеточных линий, содержащих хромосомы 2, 5 и 8 свиньи

3.3.2. Картирование у свиньи генов из синтенной группы, локализованной на хромосоме 17 человека

3.3.2.1. Картирование генов ТК1 и UMPH2 с использованием биохимических маркеров

3.3.2.2. Картирование генов NF1, PRKCA, RARA и ERBB2 с помощью клонированных проб

3.3.2.3. Картирование генов HLR1, THRA1, EN03, CRYB1, Р4НВ, MYL4, LIS 1, GAS, BRCA1, МСР1, TOP2A, STAT5B, H3F3B и

NF1 с помощью ПЦР анализа со специфическими праймерами

3.3.2.3.1. Тестирование праймеров разного типа

3.3.2.3.2. Хромосомное и региональное картирование генов с помощью гибридов соматических клеток

3.3.3. Определение порядка генов H3F3B, HLR1, MYL4, ТОР2А, STAT5B, THRA1, МРО, МСР1, NF1 с помощью радиационной панели всего генома (IMpRH)

3.3.4. Сравнение порядка генов в хромосоме 12 свиньи с порядком генов в районах хромосомной гомеологии других видов млекопитающих

3.4. Изучение структуры хромосомы 12 свиньи с помощью гетерологичных региональных микробиблиотек

3.4.1. Структура консервативного района, представленного в геноме человека хромосомой 17, в геномах других видов млекопитающих

3.5 Радиационное картирование р плеча хромосомы 2 свиньи

3.5.1. Получение и характеристика радиационной панели 171 3.5.1.1. Характеристика панели с помощью маркеров

3.5.2. Цитогенетическая характеристика панели

3.5.3. Радиационная карта короткого плеча хромосомы 2 свиньи

3.5.3.1. Порядок микросателлитов

3.5.3.2. Порядок генов LDHA, MYOD1, FSHB, РТН и CAPN

3.5.4. Сравнение полученной радиационной карты р плеча хромосомы 2 и радиационных геномных карт этого района

3.5.5. Итоговая карта короткого плеча хромосомы 2 свиньи

3.5.6. Сравнение структуры р плеча хромосомы 2 и гомеологичного ему района в геноме человека

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Картирование хромосом свиньи (Sus scrofa Dom. L. ) на основе межвидовых гибридов соматических клеток»

Актуальность проблемы. Карты геномов видов - это та база, на которую опирается вся современная генетика. Изучение наследования признаков, выделение генов, определение первичной структуры генов и их роли в нормальном и патологическом развитии организмов, выяснение законов взаимодействия генов и их продуктов, изучение структуры геномов и закономерностей эволюции кариотипов, развитие оптимальных стратегий селекционного процесса и медико-генетического консультирования - вот неполный перечень проблем, решение которых опирается на знание локализации генов в хромосомах. Особенно важны подробные карты геномов человека и видов, которые используются как модельные объекты при разрешении теоретических и прикладных проблем генетики, а также видов важных в практической деятельности человека. Насколько подробна в настоящее время геномная карта человека, можно судить хотя бы по тому, что она содержит большинство известных генов, причем часть генов представлена на ней несколькими генными маркерами, STSs или ESTs. Наличие у человека высоко разрешающей карты генома сыграло настолько важную роль при секвенировании генома человека: выстраивании секвенированных фрагментов ДНК и в верификации результатов секвенирования, - что в настоящее время результаты картирования и секвенирования можно рассматривать как единую виртуальную карту генома человека.

Первоначально геномные карты представляли собой генетические карты, построенные на основании данных гибридологического анализа. Главными причинами того, что до последнего времени подробные генетические карты были у ограниченного числа видов млекопитающих, были длительность генерационного периода, небольшое число потомков в семьях и отсутствие достаточного числа полиморфных маркеров. В настоящее время геномные карты представляют собой результат объединения нескольких типов карт: генетических, цитогенетических, физических и радиационных. Важно подчеркнуть, что достижения последних лет в картировании геномов видов напрямую связаны с развитием методов биоинформатики, позволяющих проводить поиск и сравнение нуклеотидных и аминокислотных последовательностей разных видов.

Буквально до последнего времени геномные карты высокого уровня разрешения были построены только для генома человека. За последние 2-3 года они были созданы для более чем десятка видов из разных отрядов млекопитающих. Это позволило приступить к сравнительному анализу структуры геномов и созданию сравнительных карт геномов. В результате были подтверждены во многом прогностические представления 70-80-х годов о том, что геномы млекопитающих содержат протяженные районы, имеющие аналогичное генетическое содержание. Кроме того, за последние годы с высокой степенью достоверности было установлено, что в геномах животных существуют также истинно консервативные районы, т.е. районы не только с аналогичным генным содержанием, но и с одинаковым порядком генов. Появилась возможность проведения сравнительного анализа структуры геномов разных видов и количественно оценить число меж- и внутрихромосомных перестроек, позволяющих конвертировать кариотип одного вида в кариотип другого вида. Такого рода данные важны как для понимания того, по каким законам эволюционировали геномы и кариотипы видов, так и для использования позиционного клонирования для идентификации и выделения генов, контролирующих биомедицинские и ценные хозяйственные признаки.

Создание, по крайней мере, двух типов карт, цитогенетических и радиационных, обязано открытию в 1964 г. возможности образования жизнеспособных гибридов между соматическими клетками разных видов млекопитающих. В дальнейшем стало ясно, что гибриды можно получить между клетками млекопитающих и других позвоночных, например, птиц и даже рыб. В 70-80 г.г. - это был основной способ картирования генов млекопитающих, в том числе и человека. Использование определенных наборов межвидовых гибридов соматических клеток позволяет локализовать маркеры в хромосомы, районы хромосом и определять их порядок с точностью до 100 п.н. С помощью клеточных гибридов можно картировать широкий спектр маркеров, обладающих межвидовым полиморфизмом. Это биохимические маркеры, гены, а также любые нуклеотидные последовательности. Карты, полученные на основе анализа маркеров в межвидовых гибридах, легли в основу цито генетических карт, которые в дальнейшем стали насыщаться генными и другими типами маркеров, локализованными методом in situ гибридизации.

Несмотря на то, что за последнее десятилетие был развит целый арсенал других методов картирования и фантастически расширен спектр маркеров, которые могут быть картированы, межвидовые клеточные гибриды не сдали, а укрепили свои позиции в изучении структуры генома. Буквально прорыв в картировании за последние несколько лет был осуществлен в результате создания радиационных карт. Эти карты являются результатом анализа маркеров в особых межвидовых гибридах соматических клеток, образованных после слияния облученных диплоидных клеток с интактными. В силу того, что на радиационные карты можно наносить маркеры практически любого типа, они сыграли своеобразную роль моста при объединении генетических и физических карт, содержащих в основном либо высоко, либо низко полиморфные маркеры, а также карт контиг, содержащих болыперазмерные клонированные последовательности. В настоящее время лишь радиационные карты позволяют провести сравнительный анализ геномов разных видов на должном уровне разрешения.

Таким образом, в настоящее время в руках исследователей имеется целый арсенал методов построения геномных карт высокого уровня разрешения и изучения структуры геномов видов. Среди них способы построения карт с помощью разного рода гибридов соматических клеток занимают если не лидирующее, то вполне весомое положение. Какой способ выбрать для создания карт того или иного вида зависит от многих причин, в том числе от того, для чего в основном планируется использовать карты у вида, особенностей физиологии вида, от характеристик клеточных гибридов, от степени развития молекулярной биологии вида и т.д.

Свинья домашняя является одним из первых доместицированных видов млекопитающих, источником мясных продуктов для человека. Последнее время в силу физиологического сходства с человеком свинья все чаще рассматривается как модельный объект для биомедицинских исследований, источником органов в трансплантологии. Все это делает необходимым создание подробной геномной карты этого вида и изучение структуры его генома, включая секвенирование. Не только свинья, но и другие представители отрядов парно- и непарнокопытных являются сельскохозяйственными видами, и поэтому претендентами на создание подробных геномных карт. Это позволит в перспективе провести сравнение геномных карт близких и удаленных в эволюционном отношении видов и приблизиться к ответу на вопрос о роли хромосомных перестроек в эволюции и того, каковы причины сохранения консервативных районов в геномах видов, разделенных сотнями миллионов лет.

Несмотря на достаточное число причин, обуславливающих необходимость картирования хромосом свиньи, существенный прогресс в этой области наметился только в середине 90-х годов после открытия микросателлитов и привлечения их в качестве гипервариабельных маркеров для создания генетической карты. Построение цитогенетической карты свиньи существенно отставало. Одной из главных причин такого отставания являлось то, что межвидовые гибриды соматических клеток свиньи с клетками мыши или китайского хомячка имели нестабильный хромосомный состав и содержали высокое число хромосомных перестроек, а имевшиеся к тому времени цитогенетические методы не позволяли идентифицировать большую их часть. В результате гибриды соматических клеток свиньи практически не использовались в картировании. В результате к началу 90-х годов на хромосомы свиньи было локализовано всего несколько десятков генов. Это делало карту генома этого вида мало пригодной, как для использования в целях селекции, так и для сравнительного анализа структуры геномов млекопитающих. Кроме того, не было получено монохромосомных гибридных клеточных линий свиньи, которые служат источником для получения хромосомоспецифичных библиотек и базой, на основе которой проводят картирование отдельных хромосом. В связи с этим на повестку дня встал вопрос о получении пригодных для картирования клеточных гибридов свиньи с нетрадиционным партнером и использовании их для локализации генов свиньи. Опыт работы с гибридами соматических клеток американской норки позволил предположить, что это могут быть клеточные гибриды свинья - американская норка.

Актуальность данного исследования обусловлена необходимостью расширения генной карты хромосом свиньи и выявления генетических ресурсов этого ценного в экономическом отношении вида млекопитающих. Исследование направлено на разрешение фундаментальных проблем генетики, связанных со сравнительным анализом структуры геномов млекопитающих, изучением кариотипических преобразований и стабильности генных ассоциаций в ходе эволюции.

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследования было локализовать на хромосомы свиньи несколько десятков генов, используя для этого методические возможности картирования на основе межвидовых гибридов соматических клеток; изучить структуру 2-х крупных консервативных районов, характерных для большинства видов млекопитающих, представленных в геноме свиньи хромосомой 12 и р плечом хромосомы 2, и выявить в них эволюционные перестройки.

Конкретные задачи исследования могут быть сформулированы следующим образом:

1. Получить перевиваемую культуру фибробластов американской норки (Mustela visori), пригодную для выделения качественных клеточных гибридов свиньи;

2. Получить и охарактеризовать с помощью традиционных и молекулярных методов цитогенетики гибриды соматических клеток свинья-норка, в том числе, гибридные линии, содержащие на фоне набора хромосом норки отдельные хромосомы свиньи;

3. Расширить методическую базу для идентификации хромосомных перестроек в межвидовых гибридах соматических клеток, используя для этого возможности микроизоляции хромосом;

4. Провести хромосомное картирование генов свиньи с помощью набора монохромосомных клеточных линий свиньи;

5. Провести субхромосомное картирование хромосомы 12 свиньи с помощью специальной минипанели для картирования этой хромосомы, используя для этого генные маркеры разного типа;

6. Построить радиационную генную карту хромосомы 12 свиньи;

7. Провести сравнительный анализ структуры одного из наиболее консервативных районов, локализованных у свиньи в хромосоме 12, у человека в хромосоме 17, а у американской норки в q плече хромосомы 5, с помощью региональных микробиблиотек к 5q американской норки;

8. Создать хромосомоспецифичную радиационную панель (6000 рад) на основе полученной нами монохромосомной гибридной линии с хромосомой 2 свиньи. Построить радиационную карту короткого плеча хромосомы 2;

9. Выяснить каким образом проходила в геноме свиньи реорганизация двух консервативных районов, локализованных у свиньи в хромосоме 12 и в коротком плече хромосомы 2, а у человека в хромосоме 17 и llpter-ql.3 районе, соответственно. Выявить внутрихромосомные перестройки, в результате которых эволюционировали эти консервативные районы.

Научная новизна результатов исследования. Впервые проведено исследование, в котором для картирования генов на хромосомы одного из видов млекопитающих, использовался комплекс методов, основанных на применении межвидовых гибридов соматических клеток и разнообразных генных маркеров: биохимических, клонированных последовательностей ДНК и ПЦР продуктов амплификации ДНК с гомологичными и разного типа гетерологичными праймерами. Впервые для картирования хромосом млекопитающих была использована новая экспериментальная модель, клеточные гибриды с нетрадиционным партнером, американской норкой, что позволило получить клеточные гибриды свиньи, которые от других клеточных гибридов свиньи отличал стабильный хромосомный состав, небольшое число хромосомных перестроек и возможность получения на их основе монохромосомных гибридных клеточных линий. Эта их особенность позволила использовать полученные гибриды для хромосомного, субхромосомного и радиационного картирования. В результате цитогенетическая карта свиньи была пополнена 28 генами, были созданы радиационные генные карты двух консервативных районов геномов млекопитающих, представленных у свиньи хромосомой 12 и коротким плечом хромосомы 2. В ходе проведенного исследования была расширена методическая база для идентификации сложных хромосомных перестроек в клеточных гибридах и область применения метода микродиссекции хромосом и их районов. В сочетании с обратной in situ гибридизацией микробиблиотеки были использованы для идентификации хромосомных перестроек, которые невозможно идентифицировать использованными ранее для этой цели методами. Кроме того, региональные микробиблиотеки были впервые использованы для изучения структуры хромосом видов, относящихся к разным отрядам. Использование комплексного подхода для изучения структуры хромосомных районов позволило выявить конкретные внутрихромосомные перестройки и типы внутрихромосомных перестроек, участвовавшие в формировании двух консервативных районов геномов свиньи, человека и американской норки в ходе эволюции.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты работы дают качественно новую информацию о структуре генома одного из видов млекопитающих, ценного для практической деятельности человека, свиньи. Насыщение геномной карты свиньи генными маркерами, определение у свиньи региональной локализации и порядка генов в консервативных районах, а также выявление у нескольких видов млекопитающих районов хромосомной гомеологии внутри этих консервативных районов позволило прийти к выводу, что большую роль в кариотипической эволюции млекопитающих играют, по-видимому, перестройки, связанные с разрывами в теломерных районах хромосом, и сдвигом центромеры.

Практическая ценность работы определяется значимостью для человека объекта исследования. Развитие частной генетики свиньи и наличие данных по сравнительному анализу структуры консервативных районов генома этого вида открывает возможности для генетического анализа признаков, ценных в экономическом отношении, для позиционного клонирования важных генов, для создания оптимальных схем селекции. Данные, полученные в ходе исследования, используются при чтении лекций по цитогенетике в Новосибирском Государственном Университете и по генетике в Новосибирском Аграрном Университете.

Аппробация работы. Материалы диссертации доложены на: 1 Всесоюзной конференции по цитогенетике сельскохозяйственных животных, Москва, 1985; Vll European Colloquium on Cytogenetics of Domestic Animal, Warsaw, 1986; 3-ей школе-семинаре по генетике и селекции животных. Бийск, 1989; Первой всесоюзной конференции «Геном человека», Москва, 1990; Colloquium on Cytogenetics of Domestic Animals. Netherlands, 1992; 10 Symposium Genetische

Grundlagen und ihre Umsetzung in der Tierzucht, Leipzig, Germany, 1992; Seventeen

International Congress of Genetics, Birmingham, UK, 1993; 1 съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, Саратов, 1994; XXIV International Conference on Animal Genetics, Prague, Czechoslovakia, 1994; 2nd European Congress of th

Mammology, Sauthampton, UK, 1995; 12 European Colloquium on Cytogenetics of til

Domestic Animals, Zaragosa, Spain, 1996; 10 North American Colloquium on Gene Mapping and Cytogenetics in Human and Domestic Species, Apalachicola, FL, USA, 1997; 5th International Congress on Isozymes, Island Kos, Greece; 1986; 13th International Chromosome Conference, Ancona, Italy, 1998; Plant and Animal Genome VI Conference, San Diego, USA, 1998; 6th World Congress on Genetic Applied to Livestock Production, Armidale, NSW, Australia, 1998; II съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, Санкт-Петербург, 2000; Plant and Animal Genome VI11 Conference, San Diego, USA, 2000; Medgen 12, Lubeck, Germany, 2000; 27th International Conference on Animal Genetics, Minnesota, USA; отчетных сессиях Института цитологии и генетики СО РАН.

Список работ по теме диссертации, опубликованных в журналах и периодических изданиях:

1. Керкис А.Ю, Жданова Н.С. Электронно-микроскопическое исследование слияния соматических клеток млекопитающих под действием полиэтиленгликоля (ПЭГ) //Цитология. 1978. Т.20. С. 1203-1205.

2. Керкис А.Ю., Жданова Н.С. Электронно-микроскопический анализ процесса гибридизации соматических клеток под действием полиэтиленгликоля // Тезисы международного генетического конгресса. М. 1978. С.75.

3. Жданова Н.С., Урженко А.В., Градов А.А. Клональная культура клеток американской норки (Mustela visori) устойчивая к 5-бром-дезоксиуридину // Успехи теоретической и прикладной генетики. Новосибирск. 1978. С.39-46.

4. Жданова Н.С., Урженко А.В., Градов А.А. Получение и хромосомный анализ устойчивых к 5-бром-дезоксиуридину клеток клональной культуры американской норки (.Mustela visori) II Цитология. 1983. Т.25. С. 177-181.

5. Zhdanova N.S., Gradov А.А., Rubtsov N.B., Pack S.D., Serov O.L. Regional assignments of eight genes on chromosome 2 in the American mink // Cytogenet. Cell Genet. 1985. V.39. P.296-298.

6. Жданова Ы.С., Градов А.А., Рубцов Н.Б., Серов O.J1. Субхромосомное картирование восьми генов на 2-й хромосоме американской норки {Mustela vis on) II ДАН СССР. 1985. Т.280. С. 1250-1253.

7. Serov O.L., Gradov А.А., Rubtsov N.B., Zhdanova N.S., Pack S.D., Sukoyan M.A., Mullakandov M.R., Zakian S.M. Genetic map of the American mink: gene conservation and organization of chromosomes // Isozymes: Current Topics in Biological and Medical Research. 1987. V.15. P. 179-215.

8. Матяхина Л.Д., Жданова H.C., Матвеева H.M., Сукоян М.А., Жданова Н.С., Пак С.Д. Использование метода гибридизации in situ для выявления хромосомного материала в гибридных и трансформированных клонах // Известия СО АН СССР. 1989. Т.2. С. 11-12.

9. Kerkis A.Ju., Zhdanova N.S. Formation and ultrustructure of somatic cell hybrids // Electron. Microsc. Rev. 1992. V.5. P. 1-24.

Ю.Жданова H.C., Пак С.Д., Астахова Н.М., Матяхина Л.Д., Серов О.Л. Линия клеток китайского хомячка с хромосомой 18 человека // Генетика. 1992. Т.28. С.171-173.

11. Astachova N.M., Zhdanova N.S., Serov O.L. Preliminary data on gene mapping in the pig by use of pig-mink cell hybrids // Leipzigen Tierzuchtsymposien. 1992. V.10. P. 1-7.

12. Астахова H.M., Жданова H.C. Картирование генома свиньи с помощью клеточных гибридов // Генетика. 1994. Т.29. С.50.

13. Астахова Н.М., Жданова Н.С., Кафтановская Е.М., Кузнецов С.Б., Серов ОЛ. Предварительная локализация генов ТК1 и UMPH2 на хромосому 12 свиньи//Генетика. 1994. Т.30. С.832-838.

14. Zhdanova N.S, Astakhova N.M., Kuznetsov SB., Serov O.L. Assignment of TK1 and UMPH2 genes to pig chromosome 12 // Animal Genetics. Suppl. 1994. V.12. P.31.

15. Astakhova N.M., Zhdanova N.S., Kuznetsov S.B., Schuler L., Serov O.L. Characterization of pig-mink cell hybrids: assignments of the TK1 and UMPH2 genes to pig chromosome 12 // Mamm. Genome. 1994. V.5. P.781-784.

16.Thomsen P.D., Zhdanova N.S. Reverse painting for identification of pig chromosomes in hybrid cell lines: assignment of the HOXB and TK1 genes to pig chromosome 12p // Mamm. Genome. 1995. V.5. P.670-672.

17. Zhdanova N.S., Astakhova N.M., Kuznetsov S.B., Serov O.L. 1995. Porcine region of synteny homology in human chr 17 and mouse chr 11. 2nd European Congress of Mammalogy. P. 14.

18. Zhdanova N. S., P.D.Thomsen, Astakhovan.N.M., Kuznetsov S.B., Plyusnina E.V., Jorgensen C.B., O.L.Serov. Production of pig-mink cell hybrids with single pig chromosome 2, 5, 12 or t( 1.13)//Mamm. Genome. 1966. V.7. P.613-615.

19. Zhdanova N. S., P.D.Thomsen, Plyusnina E.V., Astakhova N.M., Kuznetsov S.B., Jorgensen C.B., Serov O.L. Partial collection of pig-mink cell hybrids with single pig chromosome // Arch. Zootec. 1996. V.45. P.367-370.

20. Zhdanova N.S., Kuznetsov S.B., Rurtsov N.B., Ivanova E.V., Larkin D.M.,

Serdukova N.A., Graphodatsky A.S. Regional localization of three genes on th porcine chromosome 12 // 10 North American Colloquium on Gene Mapping and Cytogenetics of Human and Domestic Species. Pro mega. 1997. P.35.

21. Hameister H. Dixkens C., Bruch J., Volleth M., Zhdanova N., Serov O., Vogel W. Comparative gene mapping as a tool to reconstruct the mammalian founder karyotype // Cytogenet. Cell Genet. 1998. V.81. P. 104.

22. Рубцов Н.Б., Птоснина E.B., Сердюкова H.B., Астахова Н.М., Кузнецов С.Б., Жданова Н.С. Новые возможности анализа сложных хромосомных перестроек в клеточных гибридах // Генетика. 1998. Т.34. С.240-247.

23. Koroleva I.V., Malcenko S., Shukril N.M., Zhdanova N.S., Bendixen C. Assignment of porcine genes by pig-mink hybrids with single pig chromosomes 2, 5, 8, 12 // Proceedings of the 6th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production. 1998. V.23. P.104-108.

24. Koroleva I.V., Malcenko S., Shukril N.M. Kuznetsov S.B., Ivanova E.V., Zhdanova N.S., Bendixen C. Assignment of 5 porcine genes by pig-mink hybrids with single pig chromosomes 2, 5, 8, 12 // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.913-915.

25. Larkin D.M., Kuznetsov S.B., Kaftanovskaya H., Ivanova H., Zhdanova N.S. Mapping of several HSA17 genes in pigs, cattle, and sheep // Plant and Animal Genome. 1998. V.l. P. 109.

26. Кузнецов С.Б., Ларкин Д.М., Кафтановская Е.В., Иванова Е.В., Астахова Н.М., Черяукене О.В., Жданова Н.С. Хромосомная локализация и анализ синтении у свиньи, крупного рогатого скота и овцы (.Artiodactyla) II Генетика. 1998. Т.34. С. 1009-1013.

27. Larkin D.M., Serov O.L., Borodin Р.М, Zhdanova N.S., Searle J.В. Comparative genome mapping in mammals: the shrew map // Acta Theriologica. Suppl. 2000. V.45. P.131-141.

28. Жданова H.C., Иванова E.B., Кузнецов С.Б., Аксенович Т.И., Свищова Г., Астахова Н.М. Картирование хромосомы свиньи 2 // 11 съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. 2000. Тезисы докладов. Т.2. С.37.

29. Rubtsov N.B., Karamisheva T.V., Astakhova N.M., Liehr Th., Claussen U., Zhdanova N.S. Zoo-FISH with region specific paints for MVI5q // Cytogenet. Cell Genet. 2000. V.90. P.268-270.

30. Zhdanova N.S., Larkin D.M., Kuznetsov S.B., Rubtsov N.B., Astakhova N.M. The order of genes on porcine chromosome 12 // Animal Genomics: Synthesis of Past, Present, and Future Directions. 2000. P.52.

31. Rubtsov N., Karamysheva Т., Babochkina Т., Zhdanova N., Trifonov V., Starke H., Heller A., Junker K., Liehr Т., Claussen U. A new simple version of chromosome microdissection tested by probe generation for 24-multi-color FISH, multi-color banding (MCB), ZOO-FISH and clinical diagnostics // Medizinische Genetik. 2000. P.65.

32. Ларкин Д.М., Кузнецов С.Б., Астахова Н.М., Жданова Н.С. Использование ПЦР-маркеров для картирования хромосомы 12 свиньи // Генетика. 2001. Т.37. С.358-364.

33. Иванова Е.В., Королева И.В., Кузнецов С.Б., Аксенович Т.И., Свшцева Г.Р., Мальченко С.Н., Бендиксен К., Жданова Н.С. Радиационная карта короткого плеча хромосомы 2 свиньи // Генетика. 2001. Т.37. С.230-237.

34. Жданова Н.С. Радиационное картирование геномов. Настоящее и будущее // Генетика. 2002. Т.38. С.581-595.

Объем и структура работы. Работа изложена на 245 страницах и состоит из введения, 1 главы литературного обзора, описания использованных методов, и 1 главы экспериментальных результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, включающей 388 наименования. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 36 рисунками. Фактический материал получен автором лично, а также в ходе работ с сотрудниками Института цитологии и генетики СО РАН.

Работа выполнена в лаборатории генетических основ онтогенеза Института цитологии и генетики СО РАН, и в разные периоды была поддержана отечественными и зарубежными грантами: «Приоритетные направления генетики» в 1993-1995 г.г. и 1996-1997 г г.; РФФИ №№ 95-04-12401а, 98-04-49575, 01-0448859; а также грантом «Danish Scientific National Foundation» в 1997-1998 г.г., в которых соискатель была либо руководителем, либо соруководителем с российской стороны. Проект РФФИ № 98-04-49575 был отмечен среди лучших за период 19951997 г.г. (Вестник РФФИ №3 (13), 1998). Кроме того, работа была поддержана грантами: NATO, HTECH.LG 931407 в 1993-1994 г.г., Министерства науки России в поддержку международных проектов в 1994-1995 г.г. и Конкурса международных научных проектов СО РАН в 1994-1995 г.г., в которых соискатель была исполнителем.

Автор выражает благодарность заведующему лабораторией генетических основ онтогенеза д.б.н. Серову O.JI. за предоставленную возможность и помощь в выполнении данной работы. Автор выражает крайнюю признательность сотрудникам лаборатории генетических основ онтогенеза, сотрудникам Института цитологии и генетики СО РАН Рубцову Николаю Борисовичу, Графодатскому Александру Сергеевичу, Аксенович Татьяне Иосифовне, Свищевой Гульнаре Рустамовне, Горелову Ивану Григорьевичу, а также Христиану Бендиксену, Пребену Томсену и Люцу Шулеру, которые на разных этапах исследования принимали участие либо в выполнении ряда экспериментов, либо обсуждении полученных данных, что отражено в совместных публикациях.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Жданова, Наталья Сергеевна

212 ВЫВОДЫ

1. Получена перевиваемая устойчивая к 5-бромдезоксиуридину культура фибробластов американской норки MVTK" со стабильным кариотипом, пригодная для получения межвидовых гибридов соматичесских клеток.

2. Получен набор гибридов между клетками норки MVTK" и лейкоцитами периферической крови свиньи. Гибриды проанализированы методами традиционной и молекулярной цитогенетики. Гибриды свинья - норка теряли хромосомы свиньи, имели стабильный хромосомный состав и невысокое число хромосомных перестроек.

3. Развит метод идентификации сложных хромосомных перестроек в клеточных гибридах, включающий микроизоляцию и обратную гибридизацию и позволяющий выявлять фрагменты размером около трети средней G полосы в геноме свиньи среднего уровня разрешения.

4. Используя гибриды с небольшим числом хромосом, получены гибридные клеточные линии, содержащие отдельные хромосомы свиньи 2, 5, 8, 9 и 12. Клоны проанализированы методами традиционной и молекулярной цитогенетики и использованы для локализации генов FGFR4, ADRBK1, ADRB2, CSF2, CSF1R, НЕХВ, и PCSK1 на хромосому 2 свиньи, гена RAD52 -на хромосому 5 и MLR - на хромосому 8.

5. С помощью мини панели из гибридов соматических клеток на хромосому 12 свиньи были впервые регионально картированы 19 генов, относящихся к синтенной группе хромосомы 17 человека: ТК1, Р4НВ и UMPH2 - были локализованы в 12pter-pl.5; MYL4, HLR1, PRKCA, ТОР2А, BRCA1, ERBB2, GAS и THRA1 - в 12pl.4-cen; H3F3B, RARA, STAT5B - в 12р; МСР1, NF1, CRYB1, LIS1 и EN03 - в 12q. Показано, что синтенная группа генов, локализованная в хромосоме 17 человека, у свиньи локализована в хромосоме 12.

6. Построена генная радиационная карта (IMpRH) хромосомы 12 свиньи. Впервые определен наиболее вероятный порядок 9 генов: pter-.-H3F3B-HLRl-MYL4-STAT5B-THRA1-ТОР2 A-cen-MPO-MCP 1-NF1 -. qter. Показано, что за исключением положения одного гена, МРО, порядок остальных изученных генов в геномах свиньи и человека одинаков.

7. Использование диссекционных региональных микробиблиотек 5q американской норки, гомео логичного хромосоме 17 человека, позволило выявить внутрихромосомные перестройки в гомеологичных районах геномов человека и свиньи, приведших к тому, что 5q норки в хромосомах свиньи и человека представлено тремя различными блоками.

8. Получена радиационная панель 6000 рад на основе монохромосомной клеточной линии, содержащей хромосому 2 свиньи и построена радиационная карта р плеча этой хромосомы, содержащая 15 микр о сателлитов свиньи и 5 генов: CAPN1, FSHB, LDHA, MYOD1 и РТН. Панель охарактеризована с помощью прямой, двуцветной и обратной гибридизации.

9. В результате проведенного исследования: а) были существенно пополнены цитогенетическая и радиационные карты свиньи; б) продемонстрирована возможность картирования отдельных хромосом с помощью ограниченного набора межвидовых гибридных клонов; в) расширена область применения метода микродиссекции хромосом и их районов для идентификации хромосомных перестроек в клеточных гибридах и анализа районов хромосомной гомеологии у удаленных в эволюционном отношении видов; г) проведен анализ структуры двух консервативных районов, представленных, очевидно, в кариотипе гипотетического предка млекопитающих. Выявлены внутрихромосомные перестройки в этих районах генома свиньи по сравнению с человеком и американской норкой. Показано, что одним из распостраненных видов эволюционных перестроек в консервативных районах геномов млекопитающих являются перестройки в терминальных районах хромосом, а также изменение положения центромеры, которое может проходить без изменения порядка окружающих генов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Задача картирования генома/хромосом вида относится к задачам классической генетики и возникла одновременно с возникновением генетики. Долгое время практически единственным методом картирования был гибридологический анализ. Из-за отсутствия достаточного числа полиморфных маркеров и длительного по сравнению с такими классическими генетическими объектами как мышь и Dr. melanogaster генерационного периода свинья домашняя относилась к видам, чьи хромосомы долгое время были некартир о ванными, а затем слабо картированными. Открытие возможности картирования хромосом с помощью межвидовых гибридов соматических клеток во многом преодолевало эти ограничения и явилось стимулом к картированию хромосом млекопитающих. Однако применительно к свинье и этот метод первоначально не нашел широкого применения. Причина была связана с нестабильностью хромосомного состава гибридов клеток свиньи с клетками традиционных парнеров, мышью и китайским хомячком, и высокой частотой в них хромосомных перестроек.

Параллельно с развитием генетики соматических клеток интенсивно развивались методы молекулярной цитогенетики и ресурсная база для картирования, включающая в себя создание высоко полиморфных, видоспецифичных и генных маркеров. В результате стало возможным создание не только подробных генетических карт видов с достаточно длительным генерационным циклом и создание карт нуклеотидных последовательностей, но и идентификация в клеточных гибридах суммарно генетического материала картируемого вида, отдельных хромосом и их фрагментов. Все это вместе взятое привело к бурному развитию области за последнее пятилетие.

К моменту начала нашего исследования цитогенетическая и генетическая карты свиньи содержали по несколько десятков маркеров и считалось, что межвидовые гибриды соматических клеток свиньи мало пригодны для картирования хромосом свиньи. Вместе с тем опыт картирования генома человека показал, что межвидовые клеточные гибриды имеют большие потенциальные возможности для картирования хромосом и изучения структуры генома вида. В связи с этим мы поставили перед собой задачу развить базу для картирования генома свиньи с помощью методов генетики соматических клеток и использовать открывшиеся возможности для картирования и изучения структуры генома этого вида, в частности двух протяженных районов, которые практически в неизменном виде присутствуют в геномах многих млекопитающих, в том числе, по-видимому, в геноме гипотетического предка млекопитающих.

Полученные результаты можно представить в виде четырех разделов.

1. Получение и анализ пригодных для картирования генов межвидовых гибридов соматических клеток свиньи.

Когда мы начинали эту работу, подходящих мутантных клеточных линий для получения такого рода гибридов не было, поэтому мы сами получили устойчивую к 5 БДУ культуру фибробластов американской норки, MVTK", из обработанных этилметансульфонатом перевиваемых эмбриональных фибробластов. Американская норка как партнер для получения клеточных гибридов свиньи была выбрана потому, что наш опыт по картированию хромосом норки свидетельствовал о том, что гибриды соматических клеток норки с клетками разного типа и разной видовой принадлежности имеют стабильный хромосомный состав и минимальное число хромосомных перестроек. Хотя природа устойчивасти к аналогу тимидина в данной линии не выяснена, мы не наблюдали реверсий к дикому фенотипу при манипуляциях с этой линией в течение более десяти лет. По многим параметрам полученная линия отличается от известных длительно перевиваемых мутантных линий в сторону фенотипа нормальных диплоидных клеток. Изучение ростовых параметров линии показало, что, несмотря на способность к неограниченному росту, она обладает слабо трансформированным фенотипом и довольно высокой для такого рода линий эффективностью клонирования. Наличие нестабильного гипотетраплоидного перестроенного хромосомного набора у длительно перевиваемых мутантных линий считается правилом. Однако данная линия имела стабильный около диплоидный набор хромосом, содержащих несколько хромосомных перестроек: 28, X, del 2(:p22-qter), t(2;7)(7pter-7q22::2p22-2pter), i(14q), -(7q22-7qter), -14, -X. Использование клеточных гибридов линии MVTK- с клетками мыши BWTG3 позволило определить генный состав транслоцироанного на хромосому 7 района хромосомы 2. Все это делало линию чрезвычайно удобной для получения межвидовых гибридов и анализа в них генетического материала картируемого вида. То, что линия являлась слобо трансформированной, позволяло надеяться на минимальное число в гибридах хромомных перестроек. Получение гибридов соматических клеток между клетками линии клетками MVTK" и лейкоцитами свиньи подтвердило это предположение.

Гибриды свинья - норка имели на удивление стабильный хромосомный состав и содержали значительно меньше хромосомных перестроек, чем гибриды свинья - мышь/китайский хомячок, которые в каждом гибридном клоне содержали несколько хромосомных перестроек (Yerle et al., 1996). Было показано, что в полученных гибридах идет сегрегация хромосом свиньи. По числу сохранившихся хромосом свиньи гибриды распадались на 2 класса: содержащие небольшое число хромосом и близкое к диплоидному. В силу этого составить из полученных гибридов картирующую панель было достаточно сложно. Однако из гибридов, содержащих несколько хромосом свиньи, мы смогли получили гибридные клеточные линии, стабильно содержащие на фоне одного или двух наборов хромосом норки линии MVTK" отдельные хромосомы свиньи 2, 5, 8, 9, 12. Мы использовали эти линии для картирования соответствующих хромосом свиньи, в том числе для получения радиационной панели (6000 рад) для картирования короткого плеча хромосомы 2. Следует заметить, что потенциально монохромосомные клеточные линии, в том числе и гибридные, имеют более широкое применение. На их основе получают хромосомоспецифичные библиотеки, хромосомоспецифичные пробы, они используются для изучения эффекта дозы гена, включая импринтинг, для выделения рецессивных соматических мутаций. Несмотря на высокую изученность генома человека и обширные молекулярно-генетические ресурсы у этого вида, до сих пор предпринимают попытки получить монохромосомные линии человека (Clark et al., 1998). Поскольку в отличие от полученных нами линий монохромосомные гибридные линии человека теряют хромосомы человека по мере культивирования, то чтобы удержать в гибриде нужную хромосому человека проводят трансформацию родительской линии доминантным маркером, что существенно повышает вероятность нарушения целостности хромосомы.

Использованные для картирования гибридные клеточные линии свиньи были проанализированы традиционными и молекулярными методами цитогенетики, в том числе методом, предложенным нами для идентификации сложных хромосомных перестроек в гибридах, и сочетающим микроизоляцию перестроенных хромосом и обратную FISH. Он позволил определить состав маркерной и псевдохромосомы свиньи и выявить в них фрагменты размером около трети средней G полосы в кариотипе свиньи среднего уровня разрешения. По-видимому, в данном случае это предельное разрешение, обусловленное разрешением FISH. Хочется подчеркнуть, что в совместном с д-ром Томсеном исследовании мы в 1995 г. впервые применили обратную FISH для анализа хромосомного состава клеточных гибридов других млекопитающих, а не человека (Thosen and Zhdanova, 1995). Со временем этот метод стал обычным для анализа клеточных гибридов, мы использовали его также для выявления генетического материала свиньи в радиационных гибридах.

2. Картирование генов свиньи.

В нашем исследовании хромосомное и субхромосомное картирование хромосом свиньи основано на использовании ограниченного специально подобранного набора хорошо проанализированных гибридных клеточных линий, содержащих единичные интактные и перестроенные хромосомы. В основе этого подход лежат данные по сравнительному картированию геномов млекопитающих, позволивших сначала предположить, а потом убедительно доказать, что геномы, по крайней мере, млекопитающих, содержат крупные районы с одинаковым генным содержанием. Знание генного состава такого района у одного или нескольких видов позволяет использовать эти данные как прогностические при картировании хромосом слабо картированных видов. Полученные результаты подтвердили возможность такого «экономичного» подхода.

Для картирования генов использовались биохимические маркеры, клонированные последовательности и ПЦР маркеры разного типа, праймеры к последовательностям свиньи, к последовательностям других видов млекопитающих и консенсусные праймеры. Поскольку большинство используемых для картирования маркеров были развиты для классических генетических объектов, а консенсусные для выявления генных последовательностей у многих видов, то при анализе их в межвидовых клеточных гибридах встает проблема идентификации ортологичных генов по подвижности белкового продукта, по наличию сайтов рестрикции в генной последовательности (RLFP), по подвижности ПЦР продуктов. Особенно остро она встает при идентификации орто логов у удаленных видов, таких как человек и курица, человек и Danio rerio. В общем случае эта проблема решения не имеет. Даже при секвенировании ПЦР продуктов предполагаемых ортологов не всегда удается отличить гены, псевдогены и члены генных семейств. Однако именно на выявлении ортологичных генов и их продуктов основано картирование с помощью межвидовых клеточных гибридов. Картирование генов FGRF4, ADRBK1, ADRB2, CSF2, CSF1R, НЕХВ, PCSK1 и MLR проводилось с помощью CATS праймеров. Поскольку это было первое исследование, в котором предложенные Лайонс с соавторами CATS праймеры (Lyons et al., 1997) использовались уже непосредственно для картирования (Koroleva et al., 1998), то ПЦР продукты картированных генов свиньи были секвенированы. Во всех случаях была выявлена высокая степень идентичности с соответствующими мРНК других видов. В настоящее время требование к секвенированию ПЦР продуктов картируемого вида предъявляется в тех случаях, когда ген ложится не в ту позицию, которая может быть предсказана на основании данных сравнительного картирования и сравнительной геномики.

В результате проведенного исследования гены FGRF4, ADRBK1, ADRB2, CSF2, CSF1R, НЕХВ, и PCSK1 были локализованы на хромосому 2 свиньи, ген Rad52 - на хромосому 5 и MLR - на хромосому 8. На хромосому 12 регионально были картированы 19 генов. ТК1, Р4НВ и UMPH2 - в 12pter-pl.5; MYL4, HLR1, PRKCA, ТОР2А, BRCA1, ERBB2, GAS и THRA1- в 12pl.4-cen; H3F3B, RARA, STAT5B - в 12р; МСР1, NF1, CRYB1, LIS1 и EN03 - в 12q. Из локализованных нами генов ранее на цитогенетическую карту свиньи был нанесен только ген GAS в позицию 12р1.2. Остальные гены были картированы впервые. Полученные данные окончательно подтвердили сохранность в геноме свиньи консервативного района, локализованного в хромосоме 17 человека, и позволили приступить к определению порядка генов в этом консервативном районе генома свиньи с помощью радиационного картирования, выстраивающего маркеры более точно (Жданова,

2002),

3. Изучение структуры двух консервативных районов в геноме свиньи с помощью радиационного картирования и региональных микробиблиотек.

Консервативные районы, локализованные в хромосоме человека 17 и в 1 lpter-ql.3 по всей вероятности были представлены в кариотипе предка млекопитающих. В той или иной степени они сохранены и в геномах практически всех изученных современных млекопитающих. Как показали полученные нами данные, а также имеющиеся к настоящему времен данные сравнительного картирования и гетерологичного FISH, в геноме свиньи, эти консервативные районы представлены хромосомой 12 и районом 2р, соответственно. Сейчас стало ясно, что консерватизм генного состава не во всех случаях сопряжен с консерватизмом порядка генов. Полученные в ходе исследования данные способствовали формированию этого представления.

Сравнение цитогенетических карт хромосомы 17 человека и 12 свиньи позволило предположить, что за исключением позиции гена GAS, а также положения центромеры порядок остальных нанесенных на цито генетическую карту этих видов генов может быть одинаковым. Изменение положения гена GAS и центромеры в этих гомеологичных хромосомах может быть связано с перемещением района, который грубо можно определить как 17ql0-q23 из одного плеча в другой. Не исключено, что в этом районе из локализованных нами генов находятся гены МСР1, NF1 и CRYB1. На цитогенетической карте гены в лучшем случае локализованы с точностью до G полосы. Такая точность нанесения маркера не позволяла выстроить гены в определенной последовательности и определить в результате каких хромосомных перестроек можно конвертировать хромосому 12 свиньи в хромосому 17 человека. В настоящее время лучшим методом для определения порядка генов в хромосоме является радиационное картирование (Жданова, 2002). Для определения порядка 9 генов на хромосоме 12 свиньи мы использовали образцы ДНК клонов радиационной панели всего генома свиньи IMpRH, любезно предоставленных нам владельцами панели (Hawken et al, 1999; Yerle et al.,1998). 8 из 9 генов, нанесенных на радиационную карту хромосомы 12, были нанесены нами и на цитогенетическую карту этой хромосомы. Противоречий в локализациях выявлено не было. Порядок генов: pter-.-H3F3B-HLRl-GH-MYL4-STAT5B-THRAl-TOP2A-cen-MPO-MCPl-NFl-.qter определен нами как наиболее вероятный. Позиции не всех генов относительно референтных маркеров определены с высокой степенью достоверности. Не исключено, что по мере насыщения радиационной карты этой хромосомы маркерами порядок генов внутри групппы STAT5B-TOP2A-THRA1 может измениться. Изменение порядка близлежащих маркеров по мере насыщения карты относится к одной из проблем радиационного картирования. Следует подчеркнуть, что ни один способ картирования в настоящее время не дает достоверной информации об истинной локализации генов в геноме, особенно на небольших расстояниях. Это было убедительно продемонстрировано при секвенировании генома человека и сравнении данных секвенирования с данными радиационных, цитогенетических и генетических карт, о чем подробно изложено в соответствующем разделе литературного обзора. До сих пор данные по локализации генов, полученные одним методом или одним коллективом авторов, до сих пор считаются предварительными. Информация о реальном положении генов в геноме может быть выведена на основании анализа локализаций на разных типах карт и представлена на интегральной карте хромосомы/района.

Результаты проведенного исследования позволяют предположить, что за исключением положения гена МРО, порядок остальных изученных генов одинаков в хромосоме 17 человека и 12 свиньи. Обращает на себя внимание изменение положения центромеры в этих гомеологичных хромосомах без изменения порядка окружающих генов, что позволяет предположить возможность сдвига центромеры. Однако при такой трактовке данных следует иметь в виду, что генный порядок в этом консервативном районе у общего предка человека и свиньи не известен и что такая же картина может наблюдаться при дивергенции кариотипов этих видов в случае множественных внутрихромосомных перестроек, следы которых можно углядеть в измененном положении у свиньи и человека генов МРО и GAS.

В целом, данные, полученные по радиационному картированию хромосомы 12 свиньи, расширили радиационную карту этой хромосомы, превратили ее из микросателлитной в генную и уменьшили число отнесенных к ней синтенных групп.

Дополнительные внутрихромосомные перестройки в изучаемом консервативном районе у свиньи по сравнению с человеком были выявлены нами при использовании диссекционных микробиблиотек q плеча хромосомы 5 американской норки, которое также как хромосома 12 свиньи гомеологично хромосоме 17 человека. Использование библиотек третьего вида (Graphodatsky et al., 2000b), особенно региональных, для построения сравнительных карт двух видов представляется полезным и перспективным (Rubtsov et al., 2000), поскольку позволяет выявлять значительно большее число эволюционных хромосомных перестроек, чем это удавалось сделать даже при двунаправленной гетерологичной гибридизации. Однако до последнего времени предствительность региональных микробиблиотек не позволяла выявить четкий сигнал при межотрядной гибридизации. Гибридизация региональных микробиблиотек американской норки на хромосомы человека, свиньи, лисы и бурозубки обыкновенной показала, что эта трудность может быть преодолена (Rubtsov et al., 2000). В результате оказалось, что генетический материал 5q плеча американской норки разбитый на 2 района районом ядрышкового организатора и представленный в эксперименте отдельными пробами, в хромосоме человека представлен тремя блоками, в хромосоме свиньи тоже тремя блоками, но другими, а генетический материал хромосомы человека представлен в хромосоме свиньи четырьмя блоками. Причем выявленные точки разрывов были локализованы в теломерных районах хромосом. Следует отметить, что в ранних работах по Zoo-FISH перестройки в теломерных районах не выявлялись. Несомненно, что используемые сейчас пробы следует считать уже пробами следующего поколения и, вероятно, при переисследованиях этот тип хромосомных перестроек будет выявляться чаще.

О повышенной частоте эволюционных разрывов в теломерных районах хромосом свидетельствуют также результаты, полученные нами при радиационном картировании р плеча хромосомы 2. Эти данные (Иванова и др., 2001) и аналогичные (Rattink et al., 2001) указывают на то, что различия в структуре консервативного района, локализованного в р плече хромосомы 2 свиньи и 1 Ipter-ql.3 человека, связаны с инверсией практически всего этого блока относительно р терминального района. При этом наблюдается существенный сдвиг центромеры без изменения порядка окружающих генов. В данном случае нет никаких оснований предполагать множественные хромосомные перестройки, в результате которых могла бы произойти конвергенция генного порядка в инвертированном районе.

Полученная нами хромосом специфичная панель (6000 рад) для картирования короткого плеча хромосомы 2 свиньи содержала 61 информативный клон. Панель была проанализирована с помощью прямой, двуцветной и обратной гибридизации in situ. Это позволило проследить за судьбой фрагментов хромосомы свиньи и хромосом норки в радиационных гибридах. Фрагменты хромосомы свиньи, как правило, были транслоцированы на хромосомы китайского хомячка или норки. В общем случае при использовании радиационной панели для картирования хромосом ее цитогенетический анализ не является обязательным. Однако он дает представление о характере сегрегации фрагментов в гибридах. В данном случае он свидетельствует о том, что в радиационных гибридах процессы преобразования хромосомного набора, выражающиеся как в потере части фрагментов, так и в их слиянии, и в результате приводящие к неслучайной сегрегации маркеров, продолжаются и после образования гибридного генома. Это еще раз подчеркивает, что постулаты, положенные в основу большинства методов, использующихся при обработке данных радиационного картирования не совсем верны и требуют доработки. Использование панели позволило нам локализовать 15 микросателлитов и 5 генов на радиационную карту короткого плеча хромосомы 2 свиньи.

В заключение хочется обратить внимание на то, что структура генома вида несомненно формируется в результате длительного отбора «подходящих» вариантов и что совсем не безразлично в каком районе генома будет находиться

211 тот или иной ген, особенно это важно иметь в виду при проведении биоинженерных работ. В пользу этого свидетельствует хотя бы наличие дифференциальной исчерченности хромосом. Взгляд на геном как на мозаичный, состоящий из длинных гомогенных сегментов ДНК, изохор, позволил выявить в геноме человека районы с повышенной плотностью генов, как НЗ+ бенды, средним размером около четырех тысяч т.н.п. (Saccone et al., 1999). Развиваются представления, согласно которым гены, расположенные на хромосоме в непосредственной близости друг от друга, имеют сходную скорость эволюции и объединены в эволюционные единицы (Matassi et al., 1999; Hurst and Eyre-Walker, 2000). Недавно были получены доказательства того, что гены, экспрессирующиеся в некоторых тканях и на определенных стадиях онтогенеза, имеют тенденцию к не случайной локализации в геноме и формируют нечто напоминающее кластеры (Ко et al., 2000; Bortoluzzi et al., 1998). Все это вместе взятое придает проблеме картирования сложных геномов функциональное и дополнительное эволюционное звучание.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Жданова, Наталья Сергеевна, 2002 год

1. Астахова Н.М., Жданова Н.С., Кафтановская Е.М. и др. Предварительнаялокализация генов ТК1 и UMPH2 на хромосому 12 свиньи // Генетика. 1994. Т. 30. С.832-838.

2. Большева Н.Л., Лупатов А.Ю., Егоров Е.Е. и др. Скорость сегрегации хромосом в соматических гибридах человек-мышь контролируется геномом мыши//ДАН СССР. 1993. Т.330. С.516-519.

3. Горлова О.Ю., Горлов И.П. Изменчивость относительных длин хромосом в кариотипах млекопитающих, гипотеза выравнивающего отбора // Генетика. 2000. Т.36. С.725-739.

4. Жданова Н.С., Урженко А.В., Градов А.А. Получение и хромосомный анализ устойчивых к 5-бром-дезоксиуридину клеток клональной культуры американской норки {Mustela vison) // Цитология. 1983. Т.25 С. 177-181.

5. Жданова Н.С., Градов А.А., Рубцов Н.Б. и др. Субхромосомное картирование восьми генов на 2-й хромосоме американской норки (Mustela vison) // ДАН СССР. 1985. Т.280. С. 1250-1253.

6. Жданова Н.С., Пак С.Д., Астахова Н.М. и др. Линия клеток китайского хомячка с хромосомой 18 человека // Генетика. 1992. Т.28. С. 171-173.

7. Жданова Н.С. Радиационное картирование геномов. Настоящее и будущее // Генетика. 2002. Т.38. С.581-595.

8. Захаров И.А., Никифоров B.C., Стефанюк Е.В. Гомология и эволюция генных порядков: комбинаторная мера сходства групп сцепления и моделирование эволюционного процесса// Генетика. 1992. Т.28, С.77-81.

9. Иванова Е.В., Королева И.В., Кузнецов С.Б. и др. Радиационная карта короткого плеча хромосомы 2 свиньи // Генетика. 2001. Т.37. С.230-237.

10. Кузнецов С.Б., Ларкин Д.М., Кафтановская Е.М. и др. Хромосомная локализация и анализ синтении некоторых генов у свиньи, коровы и овцы (отряд Artiodactyla) II Генетика. 1998. Т.34 С. 1200-1204.

11. Ларкин Д.М., Кузнецов С Б., Астахова Н.М. и др. Использование ПЦР-маркеров для картирования хромосомы 12 свиньи // Генетика. 2001.Т.37. С.358-364.

12. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование. М., 1984.1. С. 1-263.

13. Матяхина Л.Д., Жданова Н.С., Матвеева Н.М. и др. Использование метода гибридизации in situ для выявления хромосомного материала в гибридных и трансформированных клонах // Известия СО АН СССР. Сер. Биол. науки. 1989. Вып.2. С. 11-12.

14. Резник Л.Г., Решетникова Г.Ф., Раджабли С.И. Получение и хромосомный анализ новой клеточной культуры американской норки (Mustela vision) // Генетика. 1980. Т. 16. С. 1020-1025.

15. Рингерц Н., Сэвидж Р. Гибридные клетки. М. «Мир», 1979.

16. Рубцов Н.Б., Плюснина Е.В., Сердюкова Н.А. и др. Новые возможности анализа сложных хромосомных перестроек в клеточных гибридах // Генетика. 1998. Т.34. С.46-53.

17. Рубцов Н.Б. Системы идентификации гомологичных районов хромосом: сравнительная цитогенетика млекопитающих и хромосомные патологии человека // Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук. Новосибирск, 1996.

18. Эфрусси Б. Гибридизация соматичесских клеток // М. «Мир», 1976.

19. Abel R.J., Boehnke М., Prahalad М. et al. A radiation hybrid map of the BRCA1 region of chromosome 17ql2-q21 // Genomics. 1993. V.17. P.632-641.

20. Aebersold P. Mutagenic mechanism of 5-bromo deoxyuridine in Chinese hamster cells // Mut. Res. 1976. V.36. P.357-362.

21. Agarwala R., Applegate D., Maglott D. et al. A fast and scalable radiation hybrid map construction and integration strategy// Genome Res. 2000. V.10. P.350-364.

22. Alexander L.J., Smith T.P.L., Beattie C.W. et al. Construction and characterization of a large insert porcine YAC library // Mamm. Genome. 1997. V.8. P.50-51.

23. Alvarez L., Evans J.W., Wilks R. et al. Chromosomal radiosensitivity at intrachromosomal telomeric sites // Genes Chromosomes Cancer. 1993. V.8. P.8-14.

24. Amarante M.T.V., Yang Y.-P., Kata S.R. et al. RH maps of bovine chromosome 15 and 29: conservation of human chromosome 11 and 5 // Mamm. Genome. 2000. V.ll. P.364-368.

25. Anders son L., Haley Ch.S., Ellegren H. et al. A genetic mapping of quantitative loci for growth and fatness in pigs // Sci. 1994. V.263. P. 1771-1774.

26. Andersson-Erklund L., Marklund L., Lundstrom K. et al. Mapping quantitative trait loci for carcass and meat quality traits in a wild boar x Large White intercross // J. Anim. Sci. 1998. V.76. P.694-700.

27. Antonacci R., Marzella R., Finelli P. et al. A panel of subchromosomal painting libraries representing over 300 regions of the human genome // Cytogenet. Cell Genet 1995. V.68. P.25-32.

28. Archibald A.L., Haley C.S., Brown J.F. et al. The PiGMAP consortium linkage map of the pig (Sus scrofa) // Mamra. Genome. 1995. V.6. P. 157-175.

29. Arnold A.; Kim H.G.; Gaz R.D. et al. Molecular cloning and chromosomal mapping of DNA rearranged with the parathyroid hormone gene in a parathyroid adenoma // J. Clin. Invest. 1989. V.83. P.2034-2040.

30. Ashworth L.K., Batzer M.A., Brandriff B. et al. An integrated metric physical map of human chromosome 19 // Nature Genet. 1995. V.l 1. V.422-427.

31. Astachova N.M., Zhdanova N.S., Serov O.L. Preliminary data on gene mapping in the pig by use of pig-mink cell hybrids // Leipzigen Tierzuchtsymposien. 1992. V. 10. P.1-7.

32. Avarello R., Pedicini A., Caiulo A. et al. Evidence for an ancestral alphoid domain on the long arm of human chromosome 2 // Hum. Genet. 1992. V.82. P.247-249.

33. Avner D., Arnaud D., Amar L. et al. Characterization of panel of somatic cell hybrids for regional mapping of the mouse chromosome // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. V.84. P.5330-5334.

34. Azzalin C.M., Mucciolo E., Bertoni L. et al. Fluorescence in situ hybridization with a synthetic (T2AG3)n polynucleotide detects several intrachromosomal telomere-like repeats on human chromosomes // Cytogenet. Cell Genet. 1997. V.78. P. 112-115.

35. Bailey E., Graves K.T., Gothran E.G. et al. Synteny mapping horse microsatellite markers using a heterohybridoma panel// Anim. Genet. 1995. V.26 P. 177-180.

36. Balloux F., Ecoffey E., Fumagalli L. et al. Microsatellite conservation, polymorphism, and GC content in shrews of the genus Sorex ('Insectivora, Mammalia) // Mol. Biol. Evol. 1998. V.15. P.473 475.

37. Band M.R., Larson J.Y., Rebeiz M. et al. An ordered comparative map of the cattle and human genomes // Genome Res. 2000. V.10 P. 1359-1368.

38. Barbazuk W.B., Korf L, Kadavi C. et al. The syntenic relationship of the zebrafish and human genomes // Genome Res. 2000. V.10. P. 1351-1360.

39. Barendse W., Armitage S. M., Aleyasin A. et al. Differences between the radiation hybrid and genetic linkage maps of bovine chromosome 5 resolved with a quasi-phylogenetic method of analysis // Mamm. Genome. 2000. V. 11. P.369-372.

40. Barski G., Sorieul S., Cornefert F. Production dans des cultures in vitro de deux souches cellulaires en association, de cellules de caractere 'hybride' // C. R. Hebd. Seances. Acad. Sci. 1960. V.251. P. 1825-1827.

41. Barut В., Zone L. Realizing the potential of zebrafish as a model for human disease // Physiol. Genomics. 2000. V.2 P.49-51.

42. Bendixen C., Sunjevaric I., Bauchwith R. et al. Identification of a mouse homoloque of the Saccharomyces cereviae recombination and reparation gene, RAD52 // Genomics. 1994. V.23. P.300-303.

43. Ben-Dor A., Chor B. On constructing radiation hybrid maps // J. Сотр. Biol. 1997. V.4. P.517-533.

44. Benham F., Yart K., Crolla J. et al. A method for generation of hybrids containing nonselected fragments of human chromosomes // Genomics. 1989. V.4. P.509-517.

45. Bentley D R. The Human Genome Project // Med. Res. Rev. 2000. V.20. P. 189196.

46. Bentley D.R., Deloukas P., Dunham A. et al. The physical map for sequencing human chromosomes 1, 6, 9, 10, 13, 20, and X // Nature. 2001. V.409. P.942-943.

47. Bernardi G. The human genome evolution: organization and evolutionary histoiy // Ann. Rev. Genet. 1995. V.29. P. 445-476.

48. Bielec P. E., Gallagher D. S., Womack J. E. et al. Homologies between human and dolphin chromosomes detected by heterologous chromosome painting // Cytogenet. Cell Genet. 1998. V.81. P. 18-25.

49. Bishop M.D., Kappes St., Keele J.W. et al. A genetic linkage map for cattle // Genetics. 1994. V.136. P.619-639.

50. Boehnke M., Lange K, Cox D.R. Statistical methods for multipoint radiation hybrid mapping//Am. J. Hum. Genet. 1991. V.49. P. 1174-1188.

51. Boehnke M., Hauser E., Lange K. et al. RHMAP6 statistical package for multipoint radiation hybrid mapping. 1995 // Available at http://www.hgmp.mrc.ac.uk/Registered/Help/rhmap.

52. Bortolouzzi S., Rampoldi L., Simionati B. et al. A comprehensive, high-resolution genomic transcript map of human sceletal muscle // Genome Res. 1998. V.8. P.817-825.

53. Botstein D., White R. L., Skolnick M. et al. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms // Am. J. Hum. Genet. 1980. V.32. P.314-331.

54. Boutouil M., Fetni R., Qu J. et al. Fragile site and interstitial telomere repeat sequences at the fusion point of a de novo (Y;13) translocation // Hum. Genet. 1996. V.98. P.323-327.

55. Broad T.E H. D., Maddox J.B., Montgomery G.W. The sheep gene map // ILAR J. 1998. V.39. P.160-170.

56. Broman K.W., Murray J.C., Sheffield V.C. et al. Comprehensive human genetic maps: individual and sex-specific variation in recombination // Am. J. Hum. Genet. 1998. V.63. P.861-869.

57. Burgerhout W.G. A standard procedure for gene assignment by use of somatic cell hybrids // Cytogenet. Cell Genet. 1978. V.22. P.689-693.

58. Burt D.W., Bruley Ch., Dunn I.C. et al. The dynamics of chromosome evolution in birds and mammals // Nature. 1999. V.402. P.411-413.

59. Caetano A.R., Shiue Y.-L., Lyons L.A. et al. A comparative gene map of the horse (Equus Caballus) II Genome. 1999. V.9. P. 1239-1249.

60. Caetano-Anolles G., Bassam В., Gresshoff P.M. DNA amplification fingerprinting using very short arbitrary oligonucleotide primers // Biotechnology. 1991. V.9. P.553-557.

61. Call K.M and Thilly W.G. 5-azacytidine inhibits the induction of transient TK-deficient cells by 5-bromodeoxyuridine. A novel hypothesis for the facilitation of hypermethylation by 5-bromodeoxyuridine. // Mut. Res. 1991. V.248. P.101-114.

62. Caspersson Т., Farber S., Foley G. et al. Chemical differentiation along metaphase chromosomes // Exp. Cell Res. 1968. V.49. P.219-222.

63. Caspersson Т., Zech L., Harris H. et al. Identification of human chromosomes in a mouse-human hybrid by fluorescent techniques // Exp. Cell Res. 1971. V.65. P.475478.

64. Cepica S., Yerle M., Strati! A. et al. Regional localization of porcine MYOD1, MYF5, LEP, UCP3, and LCN1 genes // Animal Genet. 1999. V.30. P.476-478.

65. Chatterjee A., Faust G., Molinary-Storey L. Et al. A 2.3Mb yeast artificial chromosome contig spanning from Gabra 3 to G6pd on the mouse X chromosome // Genomics. 1994. V.21. P.49-57.

66. Chaudhary R., Kijas J., Raudsepp T. et al. Microdissection of pig chromosomes: dissection of whole chromosomes, arms and bands for construction of paints and libraries // Hereditas. 1988a. V.128. P.265-271.

67. Chaudhary R., Raudsepp Т., X-Y Guan. et al. Zoo-FISH with microdissected arm specific paints for HSA2, 5, 6, 16, and 19 refines known homology with pig and horse chromosomes. // Mamm. Genome. 1988b. V.9. P.44-49.

68. Chen H. C., Kung H. J., Robinson D. Digital cloning: identification of human cDNAs homologous to novel kinases through expressed sequence tag database searching // J. Biomed. Sci. 1998. V.5. P.86 92.

69. Cheng H.S., Levin I., Vallejo R.J. et al. Development of a genetic map of the chicken with marker of high utility // Poultry Sci. 1995. V.74. P. 1855-1874.

70. Choo K.H. Centromerization // Trends Cell Biol. 2000. V.10. P. 182-188.

71. Chowdhary B.P., de la Sena C., Harbitz I. et al. FISH on metaphase and interphase chromosomes demonstrates the physical order of the genes for GPI, CRC, and LIPE in pigs // Cytogenet. Cell Genet. 1995. V.71. P. 175-178.

72. Chowdhary B.P., Fronike L., Gustavsson I. et al. Comparative analysis of the cattle and human genomes: Detection of ZOO-FISH and gene mapping-based chromosomal homologies // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.297-302.

73. Chowdhary Bh., Raudsepp Т., Fronicke L. et al. Emerging pattern of comparative genome organization in some mammalian species as revealed by Zoo-FISH // Genome Res. 1998. V.8. P.577-589.

74. Chowdhary B.P., Raudsepp T. Remarkable conservation despite 300-Myr divergence // Genomics. 2000. V.64. P. 102-105.

75. Chumakov I., Rigualt P., Guillou S. et al. Continuum of overlapping clones spanning the entire human chromosome 2lq //Nature. 1992. V.359. P.380-387.

76. Cieplinsli W., Reardon P., Testa M.A. Non-random human chromosome distribution in human-mouse myeloma somatic cell hybrids // Cytogenet. Cell Genet. 1983. V.35. P.93-99.

77. Clark M. Comparative genomics: the key to understanding the Human Genome // Project. BioEssay. 1999. V.21 P. 121-130.

78. Clark D.J., Gimenez-Abian J.F., Tonnies H. et al. Creation of monosomic derivatives of human cultured cell lines // Proc. Natl. Acad. Sci. UAS. 1998. V.95. P.167-171.

79. Clive D., Flamm W., Mashenko M. et al. A mutation assay system using the thymidine kinase locus in mouse lymphoma cells // Mut. Res. 1972. V.16. P.77-87.

80. Claverie J.-M. That is there are only 30000 human genes? // Sci. 2001. V.291. P.1255-1257.

81. Comings D.E., Avelino E., Okada T.A. et al. The mechanism of С and G banding of chromosomes // Exp. Cell Res. 1973. V.77. P.469-483.

82. Cornforth M.N. Analyzing radiation-induced complex chromosome rearrangements by combinatorial painting // Radiat. Res. 2001. V. 155. P.643-659.

83. Cox D., Pritchard C.F., Uglum E. et al. Segregation of the Huntington disease region of human chromosome 4 in a somatic cell hybrids // Genomics. 1989. V.4. P.397-407.

84. Cox D., Burmeister M., Price E.R. et al. Radiation hybrid mapping: A somatic genetic method for constructing high-resolution maps of human chromosomes // Sci. 1990. V.250. P.245-250

85. Crane M.S. Mutagenesis and cell transformation in cell culture // Methods Cell Sci. 1999. V.21. P.245-253.

86. Creagan R.P., Ruddle F.H. The clonal panel: A systematic approach to gene mapping using inter specific somatic cell hybrids // Cytogenet. Cell Genet. 1975. V.14. P. 112-116.

87. Cremer Т., Lichter P., Borden J. et al. Detection of chromosome aberrations in metaphase and interphase tumor cells by in hybridization using chromosome-specific library probes // Hum. Genet. 1988. Y.80. P.235-246.

88. Cuthbert A.P., Trott D.A., Ekong R.M. et al. Construction and characterization of a highly stable human: rodent monochromosomal hybrid panel for genetic complementation and genome mapping studies // Cytogenet. Cell Genet. 1995. Y.71. P.68-76.

89. Davidson R.L., Ephrussi B. A selective system for the isolation of hybrids between L cells and normal cells//Nature. 1965. Y.205. P. 1170-1171.

90. Davidson R.L., Ephrussi В., Yamamoto K. Regulation of pigment synthesis in mammalian cells as studied by somatic hybridization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1966. V.56. P. 1437-1440.

91. Davidson R.L., Gerald P.S. Improved techniques for the induction of mammalian cell hybridization by polyethylene glycol // Som. Cell Genet. 1976. V.2. P. 165-176.

92. DeBray R.W., Seldin M.F. Human/mouse homology relationships // Genomics. 1996. V.33. P.337-351.

93. DeGortani M.J., Freking B.A., Cuthberson R.P. et al. A second generation linkage map of the sheep genome // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.204-209.

94. DeKoning D.J., Janss L.L., Rattink A.P. et al. Detection of quantitative trait loci for backfat thickness and intramuscular fat content in pigs (Sus scrofa) // Genetics. 1999. Y. 152. P. 1679-1690.

95. Deloukas P., Xhuler G.D., Gyapay G. et al. A physical map of 30000 human genes //Sci. 1998. Y.282. P.744-746.

96. Dib C., Faure C., Fizames C. et al. A comprehensive genetic map of the human genome based on 5264 microsatellites //Nature. 1996. V.380. P. 152-154.

97. Dinesh K. R., Lim Т. M., Chua K. L. et al. RAPD analysis: an efficient method of DNA fingerprinting in fishes // Zoolog. Sci. 1994. Y. 10. P.849-854.

98. Dixkens C., Klett C., Bruch J. et al. ZOO-FISH analysis in insectivores: "Evolution extols the virtue of the status quo" // Cytogenet. Cell Genet. 1998. Y.80. P.61-67.

99. Dodd A., Curtis P.M., Willians L.C. et al. Zebrafish: bridging the gap between developmental and disease // Hum. Mol. Genet. 2000. V.9. P.2443-2449.

100. Dodt G., Braverman N., Valle D. et al. From expressed sequence tags to peroxisome biogenesis disorder genes // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1997. V.804. P. 516523.

101. Doggett N.A., Goodwin L.A., Tesmer J.G. et al. An integrated physical map of human chromosome 16 //Nature. 1995. V.377. P.355-365.

102. Ehrlich J., Sankoff D., Nadeau J.H. Synteny conservation and chromosomal rearrangements during mammalian evolution // Genetics. 1997. V. 147. P.289-296.

103. Ellegren H., Chowdhary В., Johansson M. et al. Integrating the porcine physical and linkage map using cosmid-derived markers // Animal Genet. 1994a. V.25. P. 155-164.

104. Ellegren H., Chowdhary B.P., Johansson M. et al. A primary linkage map of the porcine genome reveals a low rate of genetic recombination // Genetics. 1994b. V.137. P. 1080-1100.

105. Evans G.A. Physical mapping of the human genome by pulsed field gel analysis // Current Opinion in Genetics and Development. 1991. V. 1. P.75-81.

106. Fahrenkrug S.C., Rohrer G.A., Freking B.A. et al. A porcine ВАС library with tenfold genome coverage: a resource for physical and genetic map integration // Mamm. Genome. 2001. V.12. P.472-474.

107. Ferguson-Smith M.A., O'Brien P.C. et al. Comparative chromosome painting // Chromosomes Today. 2000. V.13. P.259-265.

108. Flaherty L., Herron B. The new kid on the block a whole genome mouse radiation panel // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.417-418.

109. Franke U., Chang E., Comeau K. et al. A radiation hybrid map of human chromosome 18 // Cytogenet. Cell Genet. 1994. V.66. P. 196-213.

110. Freed J. J., Mezger-Freed L. Origin of thymidine kinase deficient (TK-) haploid frog cells via an intermediate thymidine transport deficient (TT-) phenotype // J. Cell Physiol. 1973. V.82. P. 199-212.

111. Fridolfsson A.K., Hori Т., Wintero A.K. et al. Expansion of the pig comparative map by expressed sequence tags (EST) mapping // Mamm. Genome. 1997. V.8. P.907-912.

112. Fronicke L., Chowdhary B.P., Scherthan H. et al. A comparative map of the porcine and human genomes demonstrates ZOO-FISH and gene mapping based chromosomal homologies // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.285-290.

113. Fronicke L., Muller-Navia J., Romanakis K. et al. Chromosomal homeologies between human, harbor seal (Phoca vitulina) and the putative ancestral carnivore karyotype revealed by Zoo-FISH // Chromosoma. 1997. V.106. P. 108-113.

114. Fronicke L., Wienberg J. Comparative chromosome painting defines the high rate of karyotype changes between pigs and bovides // Mamm. Genome. 2001. V.12 p.442-449.

115. Geisler R., Rauch G.-L., Baier H., van Bebber F. et al. A radiation hybrid map of the zebrafish genome // Nature Genet. 1999. V.23. P.86-89.

116. Gellin J., Brown S., Graves M.J.A. et al. Comparative gene mapping workshop: progress in agriculturally important animals // Mamm. Genome. 2000. V.ll. P. 140144.

117. Genet C., Renard Ch., Cabau C. et al. In the QTL region surrounding porcine MHC, gene order is conserved with human genome // Mamm. Genome. 2001. V.12. P.246-249.

118. Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome // Nature. 2001. V.409. P.860-921.

119. Gerhold D., Caskey C.T. It's the genes! EST access to human genome content // Bioessays. 1996. V.18. P.973-981.

120. Gianfrancesco F., Esposito Т., Ruini L. et al. Mapping of 59 EST gene markers in 31 intervals spanning the human X chromosome // Gene. 1997. V. 187. P. 179-84.

121. Goss S.J., Harris H. New methods for mapping genes in human chromosomes // Nature. 1975. V.255. P.680-684.

122. Goss S.J., Harris H. Gene transfer by means of cell fusion 1. Statistical mapping of the human X-chromosome by analysis of radiation-induced gene segregation // J. Cell Sci. 1977a. V.215. P. 17-37.

123. Goss S.J., Harris H. Gene transfer by means of gene fusion. 11. The mapping of 8 loci on human chromosome 1 by statistical analysis of gene assortment in somatic cell hybrid // J. Cell Sci. 1977b. V.25. P. 39-57.

124. Goureau, A., Yerle, M., Schmitz, A. et al. Human and porcine correspondence of chromosome segments using bidirectional chromosome painting // Genomics. 1996. V.36. P.252-262.

125. Gradov A.A., RubtsovN.B., Shilov A.G. et al. Chromosome localization of the genes for ENOl, HK1, ADK, ACP2, ITPA, ACON1 and a-GAL in the American mink (Mustela vison) // Theoret. Appl. Genet. 1983. V.67. P.59-65.

126. Graphodatsky A., Filippov V., Biltueva L. et al. Localization of the pig gene ESD to chromosome 13 by in situ hybridization // Mamm. Genome. 1992. V.4. P. 187-192.

127. Graphodatsky A.S. Yang F., O'Brien P.C.M. et al. A comparative chromosome map of the Arctic fox, Red fox and dog defined by chromosome painting and high resolution G-banding // Chrom. Res. 2000a. V.8. P.253-263.

128. Graphodatsky A.S., Yang F., Serdukova N. et al. Dog chromosome specific paints reveal evolutionary inter- and intrachromosomal rearrangements in the American mink and human // Cytogenet. Cell Genet. 2000b. V.90. P.275-278.

129. Graves M.J.A., Wrigley J.M. Chromosome segregation from cell hybrids. 11. Do differences in parental cell growth rates and phase times determine direction of loss? //Can. J. Genet. Cytol. 1986. V.28. P.735-743.

130. Graves M.J.F., Zelesco P.A. Chromosome segregation from cell hybrids. V. Does segregation results from asynchronous centromere separation? // Genome. 1988. Y.30. P. 124-128.

131. Graves M.J.F., Barbieri I. Chromosome segregation from cell hybrids. VI1. Reverse segregation from karyoplast hybrids suggests control by cytoplasmic factors //Genome. 1992. V.35. P.537-540.

132. Green E.D., Olson M.V. Chromosomal region of the cystic fibrosis gene in yeast artificial chromosomes: a model for human genome mapping // Sci. 1990. V.250. P.94-98.

133. Groenen M.A.M., de Vries B.J., van der Poel J.J. Alignment of the PiGMaP and USDA linkage maps of porcine chromosome 3 and 9 // Animal Genet. 1996. V.27. P.355-357.

134. Guilly M.N., Fouchet P., de Chamisso P. Comparative karyotype of rat and mouse using bi-directional chromosome painting //. Chrom. Res. 1996. V.7. P.213-221.

135. Gustavsson I. Standard karyotype of the domestique pigs. Committee for the standardized karyotype of the Domestic pig // Hereditas. 1988. V. 109. P. 151-157.

136. Gyapay G., Schmitt K., Fizames C. et al. A radiation hybrid map of the human genome //Hum. Mol. Genet. 1996. V.5. P.339-346.

137. Hadrys H., Balic M., Schierwater B. Application of random amplified polymorphic DNA (RAPD) in molecular ecology // Mol. Ecol. 1992. V.l. P.55-63.

138. Hadrys H., Schierwater В., Dellaporta S.L. et al. Determination of paternity in dragonflies by random amplified polymorphic DNA fingerprinting // Mol. Ecol. 1993. V.2. P.79-87.

139. Hameister H., Klett Ch, Bruch J. et al. Zoo-FISH analysis: the American mink (Mustela vison) closely resembles the cat karyotype // Chrom. Res. 1997. V.5. P.5-11.

140. Harris M., Collier K. Phenotypic evolution of cells resistant to bromodeoxyuridine // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. V.77. P.4206-4210.

141. Harris H., Klein G. Malignancy of somatic cell hybrids // Nature. 1969. V.224. P.1315-1316.

142. Hasler-Rapacz J., Ellegren H., Fridolfsson A. K. et al. Identification of a mutation in the low density lipoprotein receptor gene associated with recessive familial hypercholesterolemia in swine // Am. J. Med. Genet. 1998. V.76. P.379-386.

143. Hawken R. J., Murtaugh J., Flickinger G. H. et al. A first-generation porcine whole-genome radiation hybrid map // Mamm. Genome. 1999. V. 10. P.824-830.

144. Heng H.H., Tsui L.C. Free chromatin mapping by FISH // Methods Mol. Biol. 1994. V.33. P. 109-122.1996a.

145. Henikoff S., Kami A., Harmit S.M. The centromere paradox: stable inheritance with rapidly evolving DNA. // Sci. 2001. V.293. P. 1098-1102.

146. Heuertz S., Hors-Cayla M.C. Cattle gene mapping by somatic cell hybridization study of 17 enzyme markers // Cytogenet. Cell Genet. 1981. V.30. P. 137-145.

147. Hieter F., Connelly C., Shero J. et al. Yeast artificial Chromosomes: promises kept and pending. Genome analysis, 1. Genetic and physical mapping. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1990. P.83-120.

148. Holmquist G.P. Chromosome band, their chromatin flavors, and their functional features //Am. J. Hum. Genet. 1992. V.51. P. 17-37.

149. Hosoda F, Arai Y, Kitamura E. et al. A complete NotI restriction map covering the entire long arm of human chromosome 11 // Genes Cells. 1997. V.2. P.345-57.

150. Hudson T.J., Stein L.D., Gerety S.S. et al. An STS-based map of the human genome // Sci. 1995. V.270. P. 1945-1954.

151. Hukriede N.A., Joly L., Tsang M. et al. Radiation hybrid mapping of the zebrafish genome // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. P.9745-9750.

152. Hurst L.D., Eyre-Walker A. Evolutionary genomics: reading bands // BiOEssays. 2000. V.22. P. 105-107.

153. Hwu H.R, Roberts J.W, Davidson E.H. et al. Insertion and/or deletion of many repeated DNA sequences in human and higher ape evolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V.83. P.3875-3879.

154. Iannuzzi L., Di Meo G.P., Perucatti A. et al. Comparison of the human with the sheep genomes by use of human chromosome-specific painting probes // Mamm. Genome. 1998a. V.10. P.719-723.

155. Iannuzzi L., DiMeo G.P., Perucatti A. ZOO-FISH and R-banding reveal extensive conservation of human chromosome regions in euchromatic region of river buffalo chromosomes // Cytogenet. Cell Genet. 1998b. V.82. P.210-214.

156. Ijdo J.W., Baldini A., Ward D.C. et al. Origin of human chromosome 2: an ancestral telomere-telomere fusion // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. P.9051-9055.

157. Ikeuchi T. Inhibitory effect of ethidium bromide on mitotic chromosome condensation and its application to high-resolution chromosome banding // Cytogenet. Cell Genet. 1984. V.39. P.56-61.

158. Imlah P. Evidence for the TF locus being associated with an early lethal factor in a strain of pigs // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1970. V.l. P. 5-13.

159. Jami J., Grandchamp S., Ephrussi B. The karyologic behavior of human x mouse cellular hybrids IIC. R. Hebd. Seances. Acad. Sci. 1971. V.272. P.323-326.

160. Jauch A., Wienberg J., Stanyon R. et al. 1992. Reconstruction of genomic rearrangements in great apes and gibbons by chromosome painting. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1971. V.89. P.8611-8615.

161. Jelinek W.R., Schmid C.W. Repetitive sequences in eukaiyotic DNA and their expression//Annu. Rev. Biochem. 1982. V.51. P.813-844.

162. Jiang Z., Priat C., Galibert F. Traced orthologous amplified sequence tags (TOASTs) and mammalian comparative maps // Mamm. Genome. 1998. V. 9. P. 577587.

163. Kami A., Henikoff S. Centromere are specialized replication domain in heterochromatin//J. Cell Biol. 2001. V.153. P.101-110.

164. Kao F.T., Puck T.T. Linkage studies with human-Chinese hamster cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1970. V.60. P. 1275-1281.

165. Kappes S.M., Keele J.W., Stone R.T. et al. A second generation linkage map of the bovine genome // Genome Res. 1997. V.7 P.235-249.

166. Karnuah A.B., Uenishi H., Kiuchi S. et al. Assignment of 64 genes expressed in 28-day-old pig embryo to radiation hybrid map // Mamm. Genome. 2001. V.12. P.518-523.

167. Kerkis A.Ju., Zhdanova N.S. Formation and ultrastructure of somatic cell hybrids // Electron. Microsc. Rev. 1992. V.5. P. 1-24.

168. Ко M.S.H., Kitchen J.R., Wang X. et al. Large scale cDNA analysis revealed phased gene expression pattern during preimplantation mouse development // Development. 2000. V.127. P. 1737-1749.

169. Koch J.Т., Kolvraa S., Pedersen K.B. et al. Oligonucleotide-priming methods for chromosome-specific labeling of alpha satellite DNA in silu II Chromosoma. 1989. V.98. P.259-265.

170. Koehler U., Bigoni F., Wienberg J. et al. Genomic reorganization in the Concolor Gibbon (Hylobates concolor) revealed by chromosomal painting // Genomics. 1995. V.30. P.287-292.

171. Korenberg J.R., Rykowski M.C. Human genome organization: Alu, lines, and the molecular structure of metaphase chromosome bands // Cell. 1988. V.53. P.391-400.

172. Koroleva I., Malcenko S.N., Shukri N.M. et al. Assignment of five porcine genes by pig-mink cell hybrids to pig chromosome 2, 5, 8, 12 // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.913-914.

173. Korstanje R., O'Brien P.C., Yang F. et al. Complete homology maps of the rabbit (Oryctolagus cuniculus) and human by reciprocal chromosome painting // Cytogenet. Cell Genet. 1999. V.86. P.317-322.

174. Kryglyak L. The use of genetic map of biallelic markers in linkage studies // Nat. Genet 1997. V.17. P.21-24.

175. Kumlien I., Grigoriev A., Roest C.H. et al. RH map spanning the entire human X chromosome, integrating YACs, genes, and STS markers // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.758-766.

176. Kwok C., Korn R.M., Davis M.E. et al. Characterization of whole genome radiation hybrid mapping resources for non-mammalian vertebrates // Nucleic Acids Res. 1998. V.26. P.3562-3566.

177. Labella T.T., Amati P., Marin G. Relationship between the rao of the parental chromosomes and parental doubling times in Chinese hamster-mouse somatic cell hybrid // J. Cell Physiol. 1973. V.81. P.347-354.

178. Lahbib-Mansais Y., Dalias G., Milan D. et al. A successful strategy for comparative mapping with human ESTs: 65 new regional assignment in the pig // Mamm. Genome. 1999. V.10. P.145-153.

179. Lahbib-Mansais Y., Leroux S., Milan D. et al. Comparative mapping between human and pigs: localization of 58 anchorage markers (TOASTs) by use of porcine somatic cell and radiation hybrid panel // Mamm. Genome. 2000. V. 11. P. 1098-1106.

180. Lange K., Boehnke M., Cox D.R. et al. Statistical methods for polyploid radiation hybrid mapping // Genome Res. 1995. V.5. P. 136-150.

181. Langford C. F., Telenius H., Miller N. G. et al. Preparation of chromosome-specific paints and complete assignment of chromosomes in the pig flow karyotype // Animal Genet. 1993. V.24.P. 261-267.

182. Larkin D.M., Serov O.L., Borodin P. et al. Comparative genome mapping in mammals: the shrew map //Acta Theriologica. 2000a. V.45. Suppl. 1. P. 131-141.

183. Larkin D.M., Serov O.L., Zhdanova N.S. Mapping of five genes from human chromosome 17 to chromosome hn of the common shrew Sorex araneus // Acta Theriologica. 2000b. V.45. Suppl. 1. P. 143-146.

184. Larsen N.J., Marklund St., Kelly A. et al. New insights into porcine-human synteny conservation//Mamm. Genome. 1999. V.10. P.488-491.

185. Leach R.J., O'Connel P. Mapping of mammalian genomes with radiation (Goss and Harris) hybrids // Adv. Genetics. 1995. V.33. P.63-99.

186. Ledbetter S.A., Garcia-Heras I, Ledbetter D.H. "PCR-karyotype" of human chromosomes in somatic cell hybrids // Genomics. 1990. V.8. P.614-622.

187. Littlefield J.W. Selection of hybrids from mating of fibroblasts in vitro and their presumed recombinants // Sci. 1964. V.145. P.709-710.

188. Love J. M., Knight A. M., McAleer M.A. et al. Towards construction of a high resolution map of the mouse genome using PCR-analysed microsatellites // Nucleic Acids Res. 1990. V.18. P.4123-4130.

189. Ludecke H.J., Senger G., Claussen U. et al. Construction and characterization of band-specific DNA libraries // Hum. Genet. 1990. V.84. P.512-516.

190. Lyons L.F., Laughlin T.F., Copeland N.G. et al. Comparative anchor tagged sequences (CATS) for integrative mapping of mammalian genomes // Nature Genet. 1997. V.15. P.46-56.

191. Ma R. Z., van Eijk M.L., Beever J. E. et al. Comparative analysis of 82 expressed sequence tags from a cattle ovary cDNA library // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.545-549.

192. Maccarone P., Watson J., Francis D. et al. The evolution of human chromosome 21: Evidence from in situ hybridization in Marsupials and a Monotreme // Genomics. 1992. V.13. P. 1119-1124.

193. Madhav R., Coetzee N., Ove P. Purification of thymidine kinase by affinity chromatography with enzyme inhibitor as a ligand // Arch. Biochem. Biophys. 1980. V.299. P.99-107.

194. Mancenko G.P. Handbook of detection of enzymes on electrophoresis gels. CRC Press. Inc. Florida. 1994.

195. Mandahl N., Fredga K. Q, G and C-patterns of the mink chromosomes // Hereditas. 1975. V.81. P.211-220.

196. Manly R.F., Olson J.M. Overview of QTL mapping software and introduction to Map Manager QT // Mamm. Genome. 1999. V.10. P.327-334.

197. Mariani P., Lundstrom K., Gustavsson U. A major locus (RN) affecting muscle glycogen content is located on pig chromosome 15 // Mamm. Genome. 1996. V.7.1. P.47-56.

198. Marin G. Selection of chromosomal segrerants in a 'hybrid' of Syrian hamster fibroblasts // Exp. Cell Res. 1969. Y.57. P.29-36.

199. Marin G., Pugliatti-Crippa D. Preferential segregation of homospecific groups of chromosomes in heterospecific somatic cell hybrids // Exp. Cell Res. 1972. Y.70. P.253-256.

200. Marklund L., Johansson M. M., Hoyheim B. et al. A comprehensive linkage map of the pig based on wild pig-Large White intercross // Animal Genet. 1996. V.27. P.255-269.

201. Marklund L., Jeon J.Т., Andersson L. Xenoduplex analysis a method for comparative mapping using hybrid panels // Genome Res. 1998. V.8. P.399-403.

202. Marzella R., Viggiano L., Ricco A.S. et al. A panel of radiation hybrids and YAC clones specific for human chromosome 5 // Cytogenet Cell Genet. 1997. V.77. P.232-237.

203. Matassi G., Sharp P.M., Gautier C. Chromosomal localization effects on gene sequence evolution in mammals // Curr. Biol. 1999. V.9. P.786-791.

204. Matsuya Y. Green H., Basilico C. Properties and uses of human mouse hybrid cell lines //Nature. 1968. V.220. P. 1199-1202.

205. McCarthy L. Whole genome radiation hybrid mapping // TIG. 1996. V.12. P.491-493.

206. McCarthy L.C., Terrett J., Davis M.E. et al. A first-generation whole genome-radiation hybrid map spanning the mouse genome // Genome Res. 1997. V.7. P. 115361.

207. McCarthy L., Soderlund C. Radiation hybrid mapping // Guide to human genome computing. 2nd edition. Ed. Bishop M.J. Academic press. 1998. P. 113-149.

208. Meera K. P., Westerveld A., Grzeschik K.H. et al. X-linked of human phosphoglycerate kinase confirmed in man-mouse and man-Chinese hamster somatic cell hybrids//Am. J. Hum. Genet. 1971. V.23. P.614-623.

209. Mellersh C.S., Hitte С., Richman M. et al. An integrated linkage-radiation hybrid map of the canine genome // Mamm. Genome. 2000. V. 11. P. 120-130.

210. Mellink, C.H.M., Lahbib-Mansais, Y., Yerle, M. et al. Mapping of the regulatory type I alpha and catalytic beta subunits of cAMP-dependent protein kinase and interleukin 1 alpha and 1 beta in the pig // Mamm. Genome. 1994. V.5. P.298-302.

211. Mellink C., Lahbib-Mansais Y., Yerle M. et al. PCR amplification and physical localization of the genes for pig FSHB and LHB // Cytogenet. Cell Genet. 1995. V.70. P.224-227.

212. Menotti-Raymonds M., David V.A., Lyons L.A. et al. A genomic linkage map of microsatellites in the domestic cat (Felis catus) // Genomics. 1999. V.57. P.9-23.

213. Meyne J., Baker R.J., Hobart H.H. et al. Distribution of non-telomeric sites of the (TTTGGG)n telomeric sequence in vertebrate chromosomes // Chromosoma. 1990. V.99. P.3-10.

214. Miesfeld R., Krystal M., Arnheim T. A member of a new repeated sequence family which is conserved throughout eucaryotic evolution found between the human delta and beta globin genes // Nucleic Acids Res. 1981. V.9. P.5931-5947.

215. Milan D., Woloszyn N., Yerle M. et al. Accurate mapping of the "acid meat" RN gene on genetic and physical maps of pig chromosome 15 // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.47-51.

216. Milan D., Jeon J.Т., Loofit C. et al. A mutation in PRKCAG3 associated with excess glycogen content in pig skeletal muscle // Sci. 2000. V.288. P. 1248-1251

217. Miller O.J., Allderdice P.W., Miller D.A. et al. Human thymidine kinase gene locus: Assignment to chromosome 17 in a hybrid of man and mouse cells // Sci. 1971. V.173. P.244-245.

218. Minna J.D., Coon H.G. Human x mouse hybrid cells segregating mouse chromosomes and izozymes //Nature. 1974. V.252. P.401-404.

219. Minna J.D., Marshall T.N., Shaffer-Berman P.V. Chinese hamster x mouse hybrid cells segregating mouse chromosomes and isozymes // Somat. Cell Genet. 1975. V.l. P.355-369.

220. Monako A.P., Larin Z. YACs, BACs, PACs and MACs: artificial chromosomes as research tools//TIBTECH. 1994. V.12. P.280-286.

221. Muller S., Stanyon R., Finelli P. et al. Molecular cytogenetic dissection of human chromosomes 3 and 21 evolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V.97. P.206211.

222. Murphy T.D., Karpen G.H. Centromeres take flight: alpha satellite and the quest for the human centromere // Cell. 1998. Y.93. P.317-320.

223. Murphy W.J., Menotti-Raymonds M., Lyons L.A. et al. Development of a feline whole genome radiation hybrid panel and comparative mapping of human chromosome 12 and 22 loci // Genomics. 1999. V.57. P. 1-8.

224. Murphy W.J., Sun. Sh., Xhen Z.-Q. et al. A radiation hybrid map of the cat genome: implications for comparative mapping // Genome Res. 2000. V. 10. P.691-702

225. Murphy W.J., Stanyon R., O'Brien S.J. Evolution of mammalian genome organization inferred from comparative gene mapping // Genome Biology. 2001. V.2 reviews. P.0005.1-0005.8.

226. Nabholz M., Miggiano V., Bodmer W. Genetic analysis of with human-mouse somatic cell hybrids // Nature. 1969. Y.223. P.358-363.

227. Nadeau J.H. Maps of linkage and synteny homologies between mouse and man // Trends Genetics. 1989. V.5. P.82-86.

228. Nadeau J.H., Taylor B.A. Lengths of chromosomal segments conserved since divergence of man and mouse // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V.81. P.814-818.

229. Nadeau J.H., Sankoff D. The lengths of undiscovered conserved segments in comparative maps // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.491-495.

230. Nederlof P.M., van der Flier S., Wiegant J. Multiple fluorescence in situ hybridization // Cytometry. 1990. Y. 11. P. 126-131.

231. Nesbit N.N., Franke U. A system of nomenclature for band patterns of mouse chromosomes // Chromosoma. 1973. V.41. P. 145-158.

232. Newton C.R., Graham G.A. PGR // Second edition. BIOS Scientific Publisher1.mited. 1997.

233. O'Brien S. J., Graves J. A. Report of the committee on comparative gene mapping // Cytogenet. Cell Genet. 1991. V.55. P.406-433.

234. O'Brien S.J., Peters J., Searl A. Report of Committee on Comparative Gene Mapping// Genome Prior. Report. 1993a. V.l. P.758-809.

235. O'Brien S.J., Womack I.E., Lyons L.A. et al. Anchored reference loci for comparative genome mapping in mammals // Nature Genet. 1993b. V.3. P. 103-112.

236. O'Brien S., Menotti-Raymond M., Murphy W. et al. The promise of comparative genomics in mammals // Sci. 1999. V.286. P.458-481.

237. Okada Y. The fusion of Erlich's tumor cells caused by HVJ virus in vitro // Biken's J. 1958. V.l. P.103-110.

238. Okada Y. Analysis of giant polynuclear cell formation caused by HVJ vims from Erlich's ascites tumor cells. 1. Microscopic observation of giant polynuclear cell formation // Exp. Cell Res. 1962. V.26. P.98-107.

239. Oliver M., Aggarwal A., Allen J. et al. A high-resolution radiation hybrid map of the human genome draft sequence // Sci. 2001. V.291. P. 1298-1302.

240. Olson M., Hood L., Cantor Ch. et al. A common language for physical mapping of the human//. Sci. 1989. V.245. P.1434-1435.

241. Orphanos V., Greaves M., Santibanez-Koref M. et al. A radiation hybrid panel for human chromosome 6q // Mamm. Genome. 1995. V.6. P.285-290.

242. Osoegawa K., Mammoser A.G., Wu Ch. et al. A bacterial artificial chromosome library for sequencing the complete human genome // Genome. 2001. V.ll. P.483-496.

243. Ozawa A., Band M.R., Larson J.H. Comparative organization of cattle chromosome 5 revealed by comparative mapping by annotation and sequence similarity and radiation hybrid mapping // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. V.97. P.4150-4155.

244. Pack S.D., Zhdanova N.S., Sukoyan M.A. et al. Chromosomal and regional localization of genes for UMPH2, APRT, PEPD, PEPS, PSP, and PGP in mink: comparison with man and mouse // Cytogenet. Cell Genet. 1989. V.50. P. 127-131.

245. Pack S.D., Bedanov V.M., Sokolova O.V. et al. Characterization of a new hybrid mink-mouse clone panel: Chromosomal and regional assignment of a the GLO, ACY,

246. NP, CKBB, ADH2, and MT1 loci in mink (Mustela vison) II Mamm. Genome. 1992. V.3. P. 112-118.

247. Paszek A.A., Schook L.B., Louis C.F. et al. First international workshop on porcine chromosome 6 // Animal Genet. 1995. V.26. P.377-401.

248. Paszek A.A., Wilkie P.J., Flickinger G.H. et al. Interval mapping of growth in divergent swine cross // Mamm. Genome. 1999. V. 10. P. 117-122.

249. Philippe C., Nguyen V.C., Slim R. Et al. Rearrangements between irradiated chromosomes in three-species radiation hybrid cell lines revealed by two-color in situ hybridization//Hum. Genet. 1993. V.92. P. 11-17.

250. Pinkel D., Straume Т., Gray J.W. Cytogenetic analysis using quantitative, high-sensitivity, fluorescence hybridization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V.83 P.2934-2938.

251. Pinton, P., Schibler, L., Cribiu, E. et al. Localization of 113 anchor loci in pigs: improvement of the comparative map for humans, pigs, and goats // Mamm. Genome. 2000. V.ll. P.306-315.

252. Pontekorvo G. Production of indefinitely multiplying mammalian cell hybrids by polyethylene glycol (PEG) treatment // Somat. Cell Genet. 1976. V.l P.397-400.

253. Postlethwait J.Y., Wood I.G., Ngo-Hazelett Ph. et al. Zebrafish comparative genomics and the origins of vertebrate chromosomes // Genome Res. 2000. V. 10. P.1890-1902.

254. Pravtcheva D.D., Ruddle F.Y. X chromosome induced reversion of chromosome segregation in mouse/Chinese hamster somatic cell hybrids. Cellular recognition of native and foreign X chromosomes // Exp. Cell Res. 1983b. V.146. P.401-416.

255. Pravtcheva D.D., Ruddle F.Y. Normal X chromosome induced reversion of chromosome segregation in mouse-Chinese hamster somatic cell hybrids // Exp. Cell Res. 1983a. V.148. P.265-272.

256. Priat C., Hitte C., Vignaux F. et al. A whole-genome radiation hybrid map of the dog genome // Genomics. 1998. V.54. P.361-378.

257. Raeymaekers P., Zand K.V., Jun L. et al. A radiation hybrid map with 60 loci covering the entire short arm of chromosome 12 // Genomics. 1995. V.29. P. 170-178.

258. Rao P.N., Johnson R.T. Mammalian cell fusion: Studies on the regulation of DNA synthesis and mitosis // Nature. 1970. V.225. P. 159-164.

259. Rao P.N., Johnson R.T. Premature chromosome condensation: A mechanism for the elimination of chromosomes in virus fused cells // J. Cell Sci. 1972. V.10. P.495-513.

260. Rappold G.A., Cremer Т., Cremer C. et al. Chromosome assignment of two cloned DNA probes hybridizing predominantly to human sex chromosomes // Hum. Genet. 1984. V.65. P.257-261.

261. Rattink A. Faivre M., Jungerius B. et al. A high-resolution comparative RH map of porcine chromosome (SSC 2) // Mamm. Genome. 2001. V.12. P.366-370.

262. Raudsepp Т., Fronicke L., Scherthan H. et al. Zoo-FISH delineates conserved chromosomal segments in horse and man // Chrom. Res. 1996. V.4. P.218-225.

263. Raudsepp Т., Chowdhary B.P. Construction of chromosome-specific paints for meta- and submetacentric autosomes and sex chromosomes in the horse and their use to detect homologous chromosomal segments in the donkey // Chrom. Res. 1999. V.6. P.103-114.

264. Rebeiz M., Lewin H.A. Compass of 47,787 cattle ESTs // Animal Biotechnology. 2000. V.ll. P.75-242.

265. Reiter R.S., Williams J.G., Feldmann K.A. et al. Global and local genome mapping in Arabidopsis thaliana by using recombinant inbred lines and random amplified polymorphic DNAs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. V.89. P. 1477-1481.

266. Rettenberger G., Klett C., Hameister H. Localisation of the tumor protein, TP53, on porcine chromosome 12ql2-ql4 //Animal Genet. 1993. V.24. P.307-309.

267. Rettenberger, G., Klett, C., Zechner, U. et al. ZOO-FISH analysis: Cat and human karyotypes closely resemble the putative ancestral mammalian karyotype // Chrom. Res. 1995a. V.3. P.479-486.

268. Rettenberger, G., Klett, C., Zechner. et al. Visualization of the conservation of synteny between humans and pigs by heterologous chromosomal painting // Genomics. 1995b. V.26. P.372-378.

269. Rettenberger G., Bruch J., Fries R. et al. Assignment of 19 porcine type I loci by somatic cell hybrid analysis detects new regions of conserved synteny between human and pig // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.275-279.

270. Richard F. Dutrillaux B. Origin of human chromosome 21 and its consequences: a 50-million-year-old-story // Chrom. Res. 1998. V.6. P.263-268.

271. Ricciuti F., Ruddle F. Biochemical and cytological evidence for triple hybrid cell line formed from of three different cells. Sci. 1971. V.172. P.470-472.

272. Riley JH, Allan CJ, Lai E, Roses A. The use of single nucleotide polymorphism in the isolation of common disease genes // Pharmacogenomics. 2000.V.1. P.39-47

273. Robic A., Riquest M., Yerle M. et al. Porcine linkage and cytogenetic maps integrated by regional mapping of 100 microsatellites on somatic cell hybrid panel // Mamm. Genom. 1996. V.7. P.438-445.

274. Robic A., Seroude. V. Jeon J.-T. et al. A radiation hybrid map of the RH region in pig demonstrates conserved gene order compared with the human and mouse genome // Mamm. Genome. 1999. V.10. P.565-568.

275. Robic A., Jeon J.-T., Rey V. et al. Construction of a high-resolution RH map of the human 2q35 region on TNG panel and comparison with a physical map of the porcine homologous region 15q25 // Mamm. Genome. 2001. V.12. P.380-386.

276. Rohrer G.A., Alexander L.J., Beattie C.W. Mapping of beta subunits of follicle stimulated hormone (FSHB) in the porcine genome //Mamm. Genome. 1994. V.5. P.315-317.

277. Rohrer G.A., Alexander L.J., Hu Zh. et. Al. A comprehensive map of the porcine genome//Genome Res. 1996. V.5. P.371-391.

278. Rohrer G.A., Alexander L.J., Beattie C.W. et al. A consensus linkage map for swine chromosome 7 //Animal Genet. 1997. V.28. P.223-229.

279. Roime M., Stefanova V., Di Bernardino D. et al. The R-banded karyotype of the domestic pig (Sus scrofa domestica L.) // Hereditas. 1987. V. 106. P.219-231.

280. Rothschild M., Jacobson С., Vaske D. et al. The estrogen receptor locus is associated with a major gene influencing litter size in pigs // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. P.201-205.

281. Rowe B.L., Barter M.E., Eppig J.T. Cross-referencing radiation hybrid data to the recombination map: lessons from mouse chromosome 18 // Genomics. 2000. V.69. P.27-36.

282. Rubtsov N.B., Gradov A.A., Serov O.L. Chromosome localization of the three syntenic gene pairs in the American mink {Mustela visori) II Theoret. Appl. Genet. 1982. V.63 P. 331-336.

283. Rubtsov N., Serdyukova N., Kaftanovskaya E. et al. Visialisation of the cattle Xp homologous regions on the X chromosome of some pecorans by chromosome microdissection and heterologous painting // Cytologia. 1997. V.62. P.203-208.

284. Rubtsov N.B., Karamisheva T.V., Astakhova N.M. et al. Zoo-FISH with region specific paints for MVI5q// Cytogenet. Cell Genet. 2000. V.90. P.268-270.

285. Ryttmatn H., Trebo P., Gustavsson I. et al. Further data on chromosomal assignments of pig enzyme loci LDNA, LDHB, MPI, PEPB, and PGM1, using somatic cell hybrids // Animal Genet. 1986. V. 17. P.323-333.

286. Sabile A., Poras I., Cherif D. et al. Isolation of monochromosomal hybrids for mouse chromosomes 3, 6, 10, 12, 14, and 18 // Mamm. Genome. 1997. V.8. P.81-85.

287. Saccone S., Federico C., Solovei I. et al. Identification of the gene rich bands in human prometaphase chromosomes // Chrom. Res. 1999. V.7. P.379-386.

288. Saffery R., Irvine D.V., Griffiths B. et al. Human centromeres and neocentromeres show identical distribution patterns of > 20 functionally important kinetochore-associated proteins // Hum. Mol. Genet. 2000. V.9. P. 175-185.

289. Saitoh Y., Laemmli U. Metaphase chromosome structure: bands arise from a differential folding path of the highly AT-rich scaffold // Cell. 1994. V.76. P.609-622.

290. Sankoff D., Nadeau J.H. Conserved synteny as a measure of genomic distance // Disc. Appl. Math. 1996. V.71. P.247-257.

291. Sapru M., Gu J., Gu X. et al. A panel of radiation hybrids from human chromosome 8 // Genomics. 1994. V.21. P.208-216.

292. Sarker N., Hawken R.J., Takahashi S. et al. Directed isolated and mapping of microsatellites from swine chromosome lq telomeric region through microdissection and RH mapping // Mamm. Genome. 2001. V. 12. P.524-527.

293. Shaw S.H., Farr J.E.F., Thiel B.A. et al. A radiation hybrid map of 95 STSs spanning human chromosome 13q // Genomics. 1995. V.27. P.502-510.

294. Scalenghe F., Turco E., Edstrom J.E. et al. Microdissection and cloning of DNA from a specific region of Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Chromosoma. 1981.8V.2. P.205-216.

295. Schlapfer J., Yang Y., Rexroad C. 3rd. et al. A radiation hybrid framework map of bovine chromosome 13 // Chrom. Res. 1997. V.5. P.511-519.

296. Schmid M., Nanda I., Guttenbach M. et al. First report on chicken genes and chromosomes // Cytogenet. Cell Genet. 2000. V.90. P. 169-218.

297. Schmitz A., Chaput В., Fouchet P. et al. Swine chromosomal DNA quantification by bivariate flow karyotyping and karyotype interpretation // Cytometry. 1992. V.13. P.703-710.

298. Schoen D.J. Comparative genomics, marker density and statistical analysis of chromosomal rearrangements // Genetics. 2000. V. 154. P.943-952.

299. Schuler G.D., Boguski M.S., Hudson T.J. et al. Genome maps 7. The human transcript map. Wall chart // Sci. 1996. V.25. P.547-562.

300. Scott M. P., Haymes К. M., Williams S. M. Parentage analysis using RAPD PCR // Nucleic Acids Res. 1992. V. 20. P. 5493.

301. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes // Lancet. 1971. V.2. P.971-972.

302. Serov O.L. The American mink gene map // ILAR. 1998. V.39. P. 189-194.

303. Show T.B., Brown J.A. An (Xq-; 9p+) translocation suggest the assignments of G6PD, HPRT and PGK1 to the long arm of the X-chromosome in somatic cell hybrids // Cytogenet. Cell Genet. 1974. V.13. P. 146-149.

304. Siden T.C., Kumlien J., Schwartz C.E. Radiation fusion hybrids for human chromosome 3 and X generated at various irradiation doses // Somatic. Cell Mol. Genet. 1992. V.18. P.33-44.

305. Simmler M.C., Cox R.D., Avner P. Adaptation of the interspersed repetitive sequence polymerase chain reaction to the isolation of mouse DNA probes from somatic cell hybrids on a hamster background // Genomics. 1991. V.10. P.77Q-778.

306. Slonim D., Kruglak L., Stein L. et al. Building human genome maps with radiation hybrids // J. Сотр. Biol. 1996. V.4. P.487-504

307. Solinas-Toldo S., Lengauer C., Fries R. Comparative genome map of human and cattle // Genomics. 1995. V.27. P.489-496.

308. Soumillion A., Rettenberger G., Vergouwe M.N. et al. Assignment of the porcine loci for MYOD1 to chromosome 2 and MYF5 to chromosome 5 // Animal Genet. 1997. V.28. P.37-38.

309. Spandidos A., Siminovitch L. The relationship and somatic mutation in human and hamster cells // Cell. 1978. V.13. P.651-662.

310. Stallings R.L. Conservation and evolution of (CT)n/(GA)n microsatellite sequences at orthologous positions in diverse mammalian genomes // Genomics. 1995. V.25. P.107-113.

311. Stanyon R., Yang F., Cavagna P. et al. Reciprocal chromosomal painting shows that genomic rearrangement between rat and mouse proceeds ten times faster than between humans and cats // Cytogenet. Cell Genet. 1999. 1999. V.84. P. 150-155.

312. Steen R.G., Kwitek-Black A.E., Glenn Ch. et al. A high-density integrated genetic linkage and radiation hybrid map of the laboratory rat // Genome Res. 1999. V.9. P.l-8.

313. Stewart E.A., McKusick K.B., Aggarwal A. et al. An STS-based radiation hybrid map of the human genome // Genome Res. 1997. V.7. P.422-433.

314. Sun H.S., Cai L., Davis S.K. et al. Comparative linkage mapping of human chromosome 13 and bovine chromosome 12 // Genomics. 1997. V.39. P.47-54.

315. Sun Y.-F.S. Erbst C.W., Yerle M. et al. Human chromosome 3 and pig chromosome 13 show complete synteny conservation but extensive gene-order differences // Cytogenet. Cell Genet. 1999. V.85 P.273-278.

316. Sutherland G.R., Richards R.I. Simple tandem DNA repeats and human genetic disease // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V.92. P.3636-3641.

317. Szpirer C., Szpirer J. A mouse hepatoma cell line, which secretes several serum proteins including albumin and a-protein // Differentiation. 1975. V.4. P.85-91.

318. Szybalski W., Szybalska E.H., Ragnu G. Genetic studies with human cell lines // Natl. Cancer Inst. Monogr. 1962. V.7. P.75-89.

319. Tabet-Aoul K., Schibler L., Vaiman D. et al. Regional characterization of hamster-sheep somatic cell hybrid panel // Mamm. Genome. 2000. V.l 1. P.37-40.

320. Tautz D., Renz M. Simple sequences are ubiquitous repetitive components of eukaryotic genomes // Nucleic Acids Res. 1984. V.12. P.4127-4138.

321. Teague J.W., Collins A., Morton N.E. Studies on locus content mapping // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. P. 11814-11818.

322. Telenius H., Carter N.P., Bebb C.E. Degenerate oligonucleotide-primed PCR: general amplification of target DNA by single degenerate primer // Genomics. 1992. V.13. P.718-725

323. The International Human Genome Mapping Consortium. A physical map of the human genome //Nature. 2001. V.409. P.934-941.

324. The International SNP Map Working Group. A map of human genome sequence variation containing 1.42 million single nucleotide polymorphism // Nature. 2001. V.409. P.928-933.

325. Thomsen P.D., Fredholm D., Christensen K. et al. Assignment of the porcine growth hormone gene to chromosome 12 // Cytogenet. Cell Genet. 1990. V.54. P.92-94.

326. Thomsen P.D., Miller J.R. Pig genome analysis: differential distribution of SINE and LINE sequences is less pronounced than in the human and mouse genomes // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.42-46.

327. Thomsen P.D., Zhdanova N.S. Reverse painting for identification of pig chromosomes in hybrid eel llines: Assignment of the HOX gene cluster and the TK1 gene to pig chromosome 12p // Mamm. Genome. 1995. V.6. P.670-672.

328. Troyer D.L., Goad D.W., Xie H. et al. Use of direct in situ single-copy (DISC) PCR to physically map five porcine microsatellites // Cytogenet. Cell Genet. 1994. V.67. P. 199-204.

329. Ueda Т., Sakamaki K., Kuroki T. et al. Molecular cloning and characterization of the chromosomal gene for human lactoperoxidase // Eur. J. Biochem. 1997. V.243. P.32-41.

330. Van der Noordaa J., van Haagen A., Waloomers J.M. et al. Properties of somatic cell hybrids between mouse cells and Simian virus 40-transformed rat cells // J. Virol. 1972. V.10. P.67-72.

331. Van Dilla M.A., Diaven L.L., Albright K.L. et al. Human chromosome-specific DNA libraries: Construction and availability // Biotechnology. 1986. V.4. P.537-552.

332. Venter J.C., Adams M.D., Myers E.W. et al. The sequence of the human genome // Sci. 2001. V.291. P. 1304-1350.

333. Volleth M., Klett C., Kollak A. et al. ZOO-FISH analysis in a species of the order Chiroptera: Glossophaga soricina (Phyllostomidae) // Chrom. Res. 1999. V.7. P. 5764.

334. Wada Y., Akita Т., Awata T. et al. Quantitative trait loci (QTL) analysis in a Meishan x Gottingen cross population // Animal Genet. 2000. V.31. P.376-384.

335. Waddington D., Springbett A.J., Burt D.W. A chromosomes-based model for estimation the number of conserved segments between pairs of species from comparative genetic maps // Genetics. 2000. V. 154. P.323-332.

336. Walter M.A., Spillett D.J., Thomas P. et al. A method for constructing radiation hybrid map of whole genomes //Nat. Genet. 1994. V.7. P.22-28.

337. Wang G., Whittam T. S., Berg С. M. et al. RAPD (arbitrary primer) PCR is more sensitive than multilocus enzyme electrophoresis for distinguishing related bacterial strains // Nucleic Acids Res. 1994. V.21. P.5930 5933.

338. Watanabe Т.К., Bihoreau M.-Th., McCarthyL.C. et al. A radiation hybrid map of the rat genome containing 5,255 markers // Nature Genet. 1999. V.22. P.27-36.

339. Weber I.L. Informativeness of human (dC-dA)n.(dG-dT)n polymorphisms // Genomics. 1990. V.7. P.524-30.

340. Weimer J., Kiechle M., Senger G. et al. An essay and reliable procedure of microdissection technique for the analysis of chromosomal breakpoints and marker chromosomes // Chrom. Res. 1999. V.7. P.355-362.

341. Weimer J., Kiechle M., Arnold N. FISH-microdissection (FISH-MD) analysis of complex chromosomal rearrangements // Cytogenet. Cell Genet. 2000. V.88. P. 114118.

342. Weiss M.C., Green H. Human-mouse hybrid cell lines containing partial complements of human chromosomes and functioning human genes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1967. V.58. P. 1104-1 111.

343. Wells R.A., Germino G.G., Krishna S. et al. Telomere related sequences at interstitial sites in the human genome // Genomics. 1990. V.8. P. 699-704.

344. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PGR with arbitrary primers //Nucleic Acids Res. 1991. V.18. P.7213-7218.

345. Werner P., Raducha M. G., Prociuk U. Physical and linkage mapping of human chromosome 17 loci to dog chromosomes 9 and 5 // Genomics. 1997. V.42. P.74-82.

346. Wiblin C.N., MacPherson I. Reversion in hybrid between SV40-transformed hamster and mouse cells // Int. J. Cancer. 1973. Y.12. P.148-161.

347. Wienberg J., Jauch A., Stanyon R. et al. Molecular cytotaxonomy of primates by chromosomal in situ suppression hybridization // Genomics. 1990. V.8. P.347-350.

348. Wienberg J., Stanyon R., Jauch A. et al. Homologies in human and Maccaca fuscata chromosomes reveals by in situ suppression hybridization with human chromosome specific DNA libraries // Chromosoma. 1992. V.101. P.265-270.

349. Wienberg J., Stanyon R, Nash W.G. et al. Conservation vs. feline genome organization revealed by reciprocal chromosome painting // Cytogenet. Cell Genet. 1997. V.77. P.211-217.

350. Wijnen L.M.M., Grzeschik K.Y., Pearson P.L. et al. The human PGM2 and its chromosomal localization in man-mouse hybrids // Hum. Genet. 1977. V.37. P.271-278.

351. Wilkie P.J., Paszek A.A., Beattie C.W. et al. A genomic scan of porcine reproductive traits revealed possible quantitative trait loci (QTLs) for number of corpora lutea//Mamm. Genome. 1999. V.10. P.573-578.

352. Wilson D., Smallow D., Povey S. Assignment of the human gene for uridine 5' monophosphate phosphohydrolase (UMPH2) to the long arm of chromosome 17 // Ann. Human Genet. 1986. V.50 P.223-227.

353. Wintero A.K., Jorgensen C.B., Robic A. et al. Improvement of the porcine transcription map: localization of 33 genes, of which 24 are orthologous // Mamm. Genome. 1998. V.9. P.366-372.

354. Womack J.E., Moll Y.D. Gene map of the cow: conservation of linkage with mouse and man // J. Hered. 1986. V.77. P.2-7.

355. Womack J.E., Kata S.R. Bovine genome mapping: evolutionary inference and the power of comparative genomics // Curr. Opin. Genet. Dev. 1995. V.5. P.725-733.

356. Womack J.E., Johnson J.S., Owens E.K. A whole-genome radiation hybrid panel for bovine gene mapping // Mamm. Genome. 1997. V.8. P.854-856.

357. Yang Y.-P., Womack J.E. Human chromosome 17 comparative anchor loci are conserved on bovine chromosome 19 // Genomics. 1995. V.27. P.293-297.

358. Yang F., O'Brien P., Wienberg J. et al. A reappraisal of the tandem fusion theory of karyotype evolution in Indian Muntjac using chromosome painting // Chrom. Res. 1997. V.5. P.109-117.

359. Yang Y.-P., Rexroad 111 C.E., Schlapfer J. An integrated radiation hybrid map of bovine chromosome 19 and ordered comparative mapping with human chromosome 17// Genomics. 1998. V.48. P.93-99.

360. Yang Y.-P., Womack J. E. Parallel radiation hybrid mapping: a powerful tool for high-resolution genomic comparison // Genome Res. 1998. V.8. P.731-736.

361. Yang F., O'Brien P., Milne B. et al A complete comparative chromosome map of the dog, Red fox, and human and its integration with canine genetic maps // Genomics. 1999. V.62. P. 189-202.

362. Yerle M., Galman O., Echard G. The high-resolution GTG-banding pattern of pig chromosomes // Cytogenet. Cell Genet. 1991. V.56. P.45-47.

363. Yerle M., Lahbib-Mansais Y., Mellink C. et al. The PiGMaP consortium cytogenetic map of the domestic pig (Sus scrofa Domes tied) // Mamm. Genome.1995. V.6. P. 176-186.

364. Yerle M., Echard G., Robic A. et al. A somatic cell hybrid panel for pig regional gene mapping characterized by molecular cytogenetics // Cytogenet. Cell Genet.1996, V.73. P. 194-202.

365. Yerle M., Lahbib-Mansais Y., Pinton P. et al. The cytogenetic map of the domestic pig (Sus scrofa Domestica) II Mamm. Genome. 1997. V.8. P.592-607.

366. Yerle M., Pinton P., Robic A. et al. Construction of a whole-genome radiation panel for high-resolution gene mapping in pigs // Cytogenet. Cell Genet. 1998. V.82. P. 182188.

367. Yu A., Zhao Y., Fan Y. et al. Comparison of human genetic and sequence based physical maps // Nature. 2001. V.409. P.951-953.

368. Yunis J.J. High resolution human chromosomes // Sci. 1976. V.191. P. 1268-1270.

369. Zang L., Velculescu V.E., Kern S.E. et al. Gene expression profiles in normal and cancer cells // Sci. 1997. V.276. P. 1268-1272.

370. Zelesco P.A., Graves J.A. Chromosome segregation from cell hybrids. 111. Segregation is independent of spindle constitution // Genome. 1987. V.29. P.528-531.

371. Zhao L.P., Agaraki C., Hsu L. et al. Mapping of complex traits by single nucleotide polymorphisms. Am. J. Hum. Genet. 1998. V.63. P.225-240.

372. Zhdanova N.S., Gradov A.A., Rubtsov N.B. et al. Regional assignments of eight genes on chromosome 2 in the American mink // Cytogenet. Cell Genet. 1985. V.39. P.296-298.

373. Zhdanova N.S., Pack S.D., Mazurok N.A. et al. Subchromosomal localization and order of GLA, PGK1, HPRT, and G6PD loci on X chromosome of the American mink (Mustela vison) //Cytogenet. Cell Genet. 1988. V.48. P.2-5.

374. Zhdanova N.S., Astakhova N.M., Kuznetsov S.B. et al. Characterization of pig-mink cell hybrids: Assignment of the TK1 and UMPH2 genes to pig chromosome 12 // Mamm. Genome. 1994. V.5. P.781-784.

375. Zhdanova N.S., Thomsen P.D., Astakhova N.M. et al. Production of pig-mink cell hybrids with single pig chromosomes 2, 5, 12, or t(l,13) // Mamm. Genome. 1996a. V.7. P.613-615.245

376. Zhdanova N.S., Thomsen P.D., Plyusnina E.V. et al. Partial collection of pig-mink cell hybrids with single pig chromosomes // Arch. Zootec. 1996b V.45. P. 267370.

377. Zhdanova N.S., Larkin D.M., Kuznetsov S.B. et al. The order of genes on porcine chromosome 12 // Animal Genomics: Synthesis of Past, Present, and Future Directions. 2000. P.52.

378. Zhdanova N.S., Larkin D.M., Fokina V.M. et al. Gene map of the common shrew, Sorex araneus L // Mammalia. 2003. (accepted).

379. Zijlstra C., Bosma A.A., de Haan N.A. et al. Characterization of pig-rodent somatic cell hybrids // Proc. 10th Europ Colloquim on Cytogenetics of Domestic Animal. Utrecht Univ. The Netherlands 1992. Augl8-21. P.290-294.

380. Zijlstra C., Bosma A.A., de Haan N.A. et al. Construction of a cytogenetically characterized porcine somatic cell hybrid panel and its use as a mapping tool // Mamm. Genome. 1996. V.7. P.280-284.