Изучение свойств белков Survivin, Smac/Diablo, J-chain человека и возможности их использования в качестве диагностических и терапевтических средств тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Антипова, Надежда Викторовна

• Антипова, Надежда Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Антипова, Надежда Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Характеристика белка сурвивина.

2.1.1. Локализация сурвивина в клетке.

2.1.2. Изоформы сурвивина.

2.1.3. Посттрансляционные модификации сурвивина.

2.1.4. Регуляция экспрессии сурвивина.

2.2. Сурвивин в терапии и диагностике.

2.3. Механизм апоптоза в клетке.

2.3.1. Роль белков 1АР и белка БМАС в апоптозе.

2.3.2. Роль сурвивина в апоптозе.

2.4. Механизмы взаимодействия сурвивина с белком БМАС.

2.5. Роль сурвивина в регуляции клеточного цикла.

2.6. Комплекс белков пассажиров хромосом.

2.7. Роль сурвивина в регуляции роста микротрубочек.

2.7.1. Участие сурвивина в системе «чекпоинта» веретена деления.„

2.7. 2. Участие сурвивина в регуляции стабильности микротрубочек

2.8. Стратегии лечения опухолей основанные на ингибированиисурвивина.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение свойств белков Survivin, Smac/Diablo, J-chain человека и возможности их использования в качестве диагностических и терапевтических средств»

Универсальная технология дифференциальной протеомики является мощным инструментом для выявления различий в составе экспрессируемых генов, кодируемых ими транскриптов и белков, представленных в нормальных клетках и клетках, измененных вследствие различного рода наследственных и приобретенных патологий, включая опухолевую трансформацию. Полученные ранее библиотеки генов, дифференциально экспрессирующихся в нормальных и опухолевых тканях в виде набора упорядоченных дифференциальных клонов кДНК (более 2500 клонов), идентифицируют 179 генов с пониженной (примером может служить продукт экспрессии такого гена, белок 1-пептид, распределение которого изучается в данной работе) и 109 генов с повышенной экспрессией в опухолях, представителями которых являются кодируемые дифференциально экспрессирующимися генами белки сурвивин и 8тас/ТМаЫо[1].

Цель работы.

Целью диссертационной работы была оценка изменения уровня синтеза ряда белков, присущих опухолевым трансформациям, оценка их диагностического и терапевтического потенциала для выявления опухолей на ранних стадиях и прогноза течения опухолевого процесса.

В ходе работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить молекулярные основы взаимодействия сурвивина с Зтас/ТНаЫо, для этого:

- получить и очистить рекомбинантные белки сурвивин и 8тасЛ31аЫо;

- получить моноклональные антитела к рекомбинантным белкам сурвивин и 8тас/ТМаЫо.

2. Использовать полученные моноклональные антитела для определения содержания дифференциальных белковых продуктов (сурвивин и БтасЯМаЫо) в клеточных линиях и опухолевых образованиях различных тканей больных и здоровых индивидуумов.

3. Изучить аналитические характеристики полученной тест-системы для определения белка сурвивин в биологических образцах в варианте двустадийного иммунофлуоресцентного анализа, как наиболее простого и технологически приемлемого для клинического использования. Оценить диагностическую перспективность полученной тест-системы.

4. Оценить уровень белка 1-пептида в образцах из различных тканей здоровых индивидуумов, при этом, используя полученные ранее поликлональные антитела, оценить так же содержание белка 1-пептида в образцах из опухолевых образований различных тканей больных индивидуумов.

В данной работе нами были исследованы свойства белков-маркёров относящихся к совершенно разным группам. Однако их объединяет один очень важный с нашей точки зрения факт - моментальный отклик при перерождении здоровой ткани в злокачественную опухоль. Совершенно очевидно, при диагностике какого-либо заболевания достоверность самого факта увеличивается при выявлении как можно большего количества его признаков. Таковыми в современной медицинской практике являются характерные изменения в структуре, свойствах и жизненном цикле белков - маркёров и кодирующих их генов. Особенно чувствителен к таким изменениям ключевой момент в жизни клетки, называемый апоптозом-запрограмированной гибелью клетки.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Онкологические заболевания являются одними из главных причин смертности. Проблема борьбы с раком, несмотря на мобилизацию всех достижений современной биологической науки и медицинской техники, остается далекой от решения. В связи с недостаточной эффективностью традиционных методов лечения раковых заболеваний (химио- и радиотерапия, хирургия) необходима разработка т.н. таргетных препаратов (от англ. target - мишень) - препаратов целенаправленного действия, а так же создание генотерапевтических препаратов, и разработка сопутствующих диагностических систем.

Нарушение апоптоза, приводящее к накоплению клеток, содержащих поврежденную ДНК, а также дефекты митотического аппарата ведут к возникновению раковой опухоли и ее прогрессии [2]. В балансе между пролиферацией и программируемой смертью клетки большую роль играют белки семейства IAP (IAP - inhibitors of apoptosis) - белки - ингибиторы апоптоза [3]. Белок сурвивин - член семейства IAP белков, участвует в контроле клеточного деления, регуляции апоптоза, ангиогенезе [4]. Антиапоптотическая функция заключается в прямом или опосредованном ингибировании каспаз, например за счет связывания сурвивина с белком SMAC (Second Mitohondria-derived Activator of Caspase). SMAC= Smac/Diablo - митохондриальный белок, который выходит из митохондрий в цитозоль во время апоптоза, связываясь с белками семейства IAP, предотвращает их ингибирующее действие по отношению к каспазам, обеспечивая тем самым активацию каспаз и развитие апоптоза [5]. Сурвивин селективно образовывается в наиболее распространённых опухолях человека и вовлечён в резистентность опухолевых клеток к противоопухолевым агентам и ионизирующим излучениям [4]. Преклинические исследования показали, что выключение синтеза сурвивина с использованием антисенс-олигонуклеотидов, доминант-негативных мутаций, рибозимов и ингибиторов циклинзависимых киназ увеличивает уровень апоптоза, уменьшает потенциал роста опухоли и восстанавливает чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии с разными механизмами действия и гамма-излучению в различных типах опухолей человека. Высокий уровень синтеза сурвивина в опухолях коррелирует с их прогрессией и считается негативным прогностическим фактором для некоторых опухолей [6].

Например, было показано, что высокое содержание этого белка ассоциировано с более агрессивным фенотипическим проявлением различных опухолей и с меньшей вероятностью выживания пациента [7-11]. Клинические исследования выявили, что пациенты, раковые клетки которых имели повышенный уровень экспрессии гена BIRC5, были значительно устойчивее к химиотерапии [12]. В связи с этим снижение уровня экспрессии этого белка в раковых опухолях приводит к увеличению апоптоза и остановке роста опухоли. В силу ярко выраженного дифференциального образования сурвивина между нормой и опухолью, этот белок служит опухолевым маркером. Сурвивин можно детектировать в опухолевых тканях иммуногистохимическими методами, что служит быстрым и удобным методом диагностики характера развивающейся опухоли.

Существует несколько форм локализации белка сурвивина в клетке, эти формы локализации независимо регулируются, обладают различными пострансляционными модификациями. Подробно изучены 2 формы локализации белка сурвивина - ядерная и цитоплазматическая, но их иммуногистохимическая характеристика не дает необходимой и достаточной информации для диагностической характеристики клеток, определяющей их онкологическое перерождение. Существует так же еще мало изученная митохондриальная форма локализации сурвивина. Механизм перемещения сурвивина в митохондрию пока не изучен, но предположительно, что такое перемещение связано с участием шаперона Hsp90. Показано, что в опухолевых клетках наблюдается стократное увеличение аффинности этого шаперона к переносимым им белкам, в том числе и сурвивину[13]. Митохондриальный сурвивин под действием различных апоптозных стимулов быстро высвобождается из митохондрий и выходит в цитозоль[14]. Он подавляет активацию каспаз и усиливает образование опухолей in vivo. Сурвивин образуется не только в опухолевых, но и в некоторых нормальных клетках, однако ни в одной из нормальных тканей, сурвивин не был обнаружен в митохондриях [15]. Митохондриальный белок сурвивин локализуется вместе с белком Smac/Diablo в межмембранном пространстве митохондрий[16]. В ответ на стрессовые воздействия (гипоксию или обработку ДНК повреждающими агентами в концентрации не вызывающей апоптоз) увеличивается содержание митохондриальной формы локализации белка сурвивина, в то время как количество белка сурвивина в цитозоле остаётся примерно постоянным [17]. Возможно, таким образом клетка в ответ на стрессовые воздействия готовится противостоять апоптозу, усиливая свою защиту повышением количества митохондриального белка сурвивина [18].

Отмечено, что синтез изоформы сурвивина, участвующей в митотическом делении клетки не только не усиливает, но и наоборот в значительной мере замедляет образование опухолей, что может быть объяснено чрезмерной активностью сурвивина в митозе и образования таким образом большого количества ошибок при делении клеток [17].

Таким образом для наиболее корректной характеристики онкологических клеточных и тканевых образцов необходимо исследовать именно митохондриальную форму локализации белка сурвивина. А также для понимания процессов, происходящих с различными изоформами этого белка и их роли в клеточных нарушениях необходимо подробное изучение процесса димеризации белка сурвивина и его взаимодействия с природным антагонистом - белком 8тас/ТНаЬ1о.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Антипова, Надежда Викторовна

выводы.

1. Получены и очищены рекомбинантные белки сурвивин и Smac/Diablo. Получены моноклональные антитела к рекомбинантным белкам сурвивин и Smac/Diablo.

2. Изучив особенности взаимодействия сурвивина с белком Smac/Diablo, показано, что:

- сурвивинП01А/и02А в растворе существует в виде мономера.

-Мономер сурвивина in vitro и in vivo способен взаимодействовать с белком Smac/Diablo.

-Сурвивинр|0|А/и02А более эффективно защищает клетки фибросаркомы человека НТ1080 от каспаз-зависимого апоптоза, вызванного цисплатином, чем сурвивин дикого типа.

-Сурвивинп01А/и°2А более эффективно ингибирует Smac/Diablo, чем сурвивин дикого типа.

-Мономер сурвивина защищает клетки как от каспаз-зависимого, так и от каспаз-независимого апоптоза, вызванного цисплатином.

3. Определено содержание дифференциальных белковых продуктов (сурвивин и Smac/Diablo) в клеточных линиях и опухолевых образованиях различных тканей больных и здоровых индивидуумов. Оценена диагностическая перспективность дифференциальных белков сурвивина и Smac/Diablo.

4. Результат изучения образцов эндометрия 80 пациентов позволяет считать тест-систему для определения белка сурвивин в биологических образцах в варианте двустадийного иммунофлуоресцентного анализа наиболее простой и технологически приемлемой для клинического использования.

5. Определен уровень синтеза белка J-пептида в образцах из различных тканей здоровых индивидуумов, а также содержание J-пептида в образцах нормальных и опухолевых тканей 26 пациентов при плоскоклеточиом раке и аденокарциноме легкого, в результате чего определено снижение уровня синтеза J-пептида в опухоли у 61% пациентов.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Получены в клетках Е. coli и очищены рекомбинантные белки сурвивин и Smac/Diablo. Эти белки были использованы для иммунизации мышей BALB/C. С помощью гибридомной технологии получены и отобраны гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела, взаимодействующие с соответствующими белками в иммунологических реакциях (ИФА и иммуноблот). Показано, что моноклональные антитела к белку сурвивину распознают различные изоформы эндогенного клеточного белка. На основе полученных моноклональных антител создан диагностический набор «Пептосурвим» для определения уровня белка сурвивина в различных биологических образцах, основанный на методе ИФА и тест-система для определения уровня Smac/Diablo в различных биологических образцах, так же основанная на методе ИФА. С помощью полученных тест-систем были определены белки сурвивин и Smac/Diablo в лизатах клеточных линий, сыворотке крови и соскобах эндометрия.

Проведены исследования по количественной оценке содержания J-пептида. На основании полученных результатов, а также на литературных данных Vaerman J.P и соавт., 1995 и Gurevich Р и соавт., 2003 [112,114], мы предполагаем, что подобного рода анализ можно было бы использовать для характеристики и лечения различного рода легочных заболеваний и заболеваний ЖКТ. Примером тому служат фармакологические препараты National Jewish Center for Immunology and Respiratory Medicine (Denver, CO). United States Patent 5698679 с использованием J-пептида в составе секреторных полимерных иммуноглобулинов.

В рамках данной работы была исследована способность мономера сурвивина защищать клетки от апоптоза, через ингибирование проапоптозного белка Smac/Diablo. С помощью «pull-down assay», коиммунопреципитации и метода регистрации FRET мы показали, что in vitro и in vivo мутант сурвивина, не способный к димеризации, может взаимодействовать с белком Smac/Diablo. Кроме того, нами было показано, что для взаимодействия этих белков необходим участок димеризации сурвивина. Благодаря использованию клеточных линий, стабильно экспрессирующих различные мутанты сурвивина, а также с помощью РНК интерференции мы получили данные, говорящие в пользу того, что сурвивинп01А/и02А более эффективно ингибирует Smac/Diablo, чем сурвивин дикого типа. Исследуя участие мономера сурвивина в защите от апоптоза через увеличение стабильности антиапоптозного белка Х1АР, нами было показано, что с Х1АР способен взаимодействовать не только сурвивин дикого типа, но и его мутант, не образующий димеров.

Наконец, мы показали, что сурвивинр101А/Ы02А лучше, чем сурвивин дикого типа ингибирует каспазнезависимый путь апоптоза в клетках фибросаркомы человека НТ1080. Таким образом, по нашим данным, мономер сурвивина более эффективно защищает клетки от апоптоза идущего по митохондриальному пути. Поскольку в клетке сурвивин дикого типа существует как в виде димера так и в виде мономера, то на основании полученных результатов мы можем предположить, что в защите от апоптоза в живой клетке участвует именно мономер сурвивина.

Предложенная нами модель антиапоптозного действия сурвивина также даёт возможность объяснить каким образом сурвивин способен выполнять разные, во многом противоположные, функции в одном и том же процессе в клетке. Так например, можно предположить, что при делении часть сурвивина, находясь в виде мономера, входит в состав СРС и участвует в дестабилизировании неправильно прикреплённых к кинетохорам микротрубочек (Бе1асоиг-Ьагозш М. И соавторы, 2007), а димерная фракция сурвивина, взаимодействуя с микротрубочками веретена деления и, напротив, повышает их стабильность. Такая гипотеза кажется нам крайне вероятной, так как доказано, что в состав СРС входит именно мономер сурвивина.

В рамках данной работы показано, что только димер сурвивина влияет на стабильность микротрубочек, и вероятно только он, способен связыватся с полимеризованным тубулином, играя роль адаптора между микротрубочками и другими белками виш О.1., 2004. Таким образом, если предположить что часть своих функций сурвивин выполняет в виде димера, а часть в виде мономера, то регуляция равновесия димер-мономер может служить для «переключения» между различными функциями сурвивина.

Представленные исследования являются частью работы в рамках проекта «Создание технологии дифференциальной протеомики и ее использование для получения новых противораковых препаратов». Номер контракта: 02.467.11.3006.

Часть работы выполнена в рамках проекта 05-04-48954-а «.1-пептид секреторных полимерных иммуноглобулинов человека при плоскоклеточном раке легкого», поддержанного РФФИ

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Антипова, Надежда Викторовна, 2011 год

1. Свердлов Е.Д. Проект «Создание технологии дифференциальной протеомики и ее использование для получения новых противораковых препаратов». Номер контракта: 02.467.11.3006.2. .Van Cruchten S, Van Den Broeck W//. Anat Histol Embryol, 2002. 31:p.214-223.

2. Schimmer AD. // Cancer Res., 2004. 64:p.7183-7190.

3. Altieri DC. И Nat Rev Cancer, 2008. 8:p.61-70.

4. Du C, Fang M, Li Y, Li L, Wang X. // Cell, 2000. 102:p.33-42.

5. Altura R.A. II Br J Cancer, 2003. 89: p. 1743-9.

6. Kajiwara Y. // Cancer, 2003. 97: p. 1077-83.

7. Kleinschmidt DeMasters B.K. // Arch Pathol Lab Med, 2003, 127: p. 826-33.

8. Span P.N. // Clin Chem, 2004. 50: p. 1986-93.

9. Shariat S.F. // Cancer, 2004. 100: p. 751-7. 11. Krieg A.// Br J Cancer, 2002. 86: p. 737-43.

10. McNeish I.A., Lopes R., Bell S.J., McKay T.R., Fernandez M., Lockley M., Wheatley S.P., Lemoine N.R. // Experimental Cell Research, 2005. 302: p. 69- 82.

11. Dohi Т., Beltrami E., Wall N. R., Plescia J., Altieri D. С. II J. Clin. Invest, 2004. 114: p.l 117-1127.

12. Chiou SK, Jones MK, Tarnawski AS. // MedSci Monit 2003,9:p.25-29.

13. Li H, Zhu H, Xu CJ, Yuan J. // Cell 1998. 94:p.491-501

14. Marioni G, D'Alessandro E, Bertolin A, Staffieri A. // Acta Otolaryngol 2009:1-6.

15. Kang B.H, Altieri D.C. // The journal of biological chem. 2006. 281: p. 24721-24727.

16. Altieri, D.C. II Oncogene, 2003. 22: p. 85816.

17. Dipartimento di Oncologia Sperimentale, Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori, Via Venezian 1, 20133 Milan, Italy.

18. Zimmermann, K.C., C. Bonzon, and D.R. Green // Pharmacol Ther, 2001. 92: p. 57-70.

19. Jeyaprakash A.A., Klein U.R., Lindner D., Ebert J., Nigg E.A , Conti E. // Cell, 2007. 131 :p. 271-285.

20. O'Connor D.S., Schechner J.S., Adida C., Mesri M., Rothermel A.L., Li F. Am J Pathol, 2000, 156:p.393-398.

21. Duffy MJ, O'Donovan N, Brennan DJ, Gallagher WM, Ryan BM. // Cancer Lett, 2007, 249 p:49-60.

22. Caldas H, Honsey LE, Altura RA. // Mol Cance, 2005, 4: p 11.

23. Dieuwke Engelsma, Jose A. Rodriguez, Alexander Fish, Giuseppe Giaccone, Maarten Fornerod. // Traffic, 2007. 8, p:1495-1502.

24. Muchmore S.W.,Chen J., Jakob C., Zakula D., Matayoshi E. D., Wu W., Zhang H., Li F., Shi-Chung Ng, Altieri D.C. II Molecular Cell, 2000. 6: p.173-182.

25. Mahotka C., Liebmann J., Wenzel M., Suschek C.V., Schmitt M., Gabbert H.E., Gerharz C.D. II Cell Death and Differentiation, 2002. 9:p.l334-1342.

26. Stauber R. H., Mann W., Knauer S. K. // Cancer Res, 2007. 67: p. 59996002.

27. Fortugno. P, Wall N.R., Giodini A., O'Connor D. S., Plescia J., Padgett K.M., Tognin S., Marchisio P.C., Altieri D.C. II Journal of Cell Science, 2002. 115:p. 575-585.

28. Cell Signaling Technology, Inc. (2007) #2807. INCENP (P240) Antibody.

29. Noton E.A., Colnaghi R., Tate S., Starck C., Carvalho A., Ferrigno P. K, Wheatley S. P. // The journal of biological ehem.,2006. 281:p. 12861295.

30. Beauchamp L., Batten D.M., Magdaleno S., Krebs J.,Cheng A., Ford L. // TechNote, 2007.3(4).

31. Ogura A., WatanabeY., IizukaD., Yasui H., Amitani H., Kobayashi S., Kuwabara H. // Cancer Letters, 2008. 259, 71-81.

32. Marlene Delacour-Larose, My-Nhung Hoang Thi, Stefan Dimitrov, Annie Molla. // Cell Cycle,2007. 6, 1878-1885.

33. Fortugno P., Beltrami E.,Plescia Y., FontanY., Pradhan D., Marchisio

34. Р.С., Sessa S. // PNAS,2003. 100, 13791-13796.

35. Zhiyin Song, Shixin Liu, He He, Naser Hoti, Yi Wang, Shanshan Feng, Mian Wu. A II Molecular Biology of the Cell, 2004. 15:p.7-1296.37. .Sah N.K,.Khan Z, Bisen P.S. // Cancer Letters, 2006. 244: p. 164.

36. Fortugno, P.J/JCellSci, 2002. 115:p.575-85. 39. Dohi Т. II J. Clin. Invest.,200АЛ 14:p. 1117-1127

37. Zimmermann КС, Bonzon C, Green DR. // Pharmacol Ther.,2001. 92:p. 57-70.

38. Lorenzo H.K., Susin S.A., Penninger J., Kroemer G„ // Cell Death and

39. Differentiation, 1999. 6:p. 516-524. 42. Ченцов IO. С. «Введение в клеточную биологию». 2004, Академкнига, Москва, стр. 494.

40. Peter, М.Е. and Р.Н. Krammer. Т// Cell Death Differ, 2003. 10(1): p. 2635.

41. Tong Liu, Brook Brouha, Douglas Grossman. 11 Oncogene, 2004. 23: p. 39-48.

42. Budihardjo I. И Annu Rev CellDev Biol, 1999. 15: p. 269-90.

43. Scaffidi C. // EmboJ, 1998. 17(6): p. 1675-87.

44. Douglas J. Kominsky,l Ryan J. Bickel,l and Kenneth L. Tyler. // Journal of virology, 2002. 76: p.l 1414-11424.

45. Silke J, David L. Vaux. II Journal of Cell Science, 2000. 114: p. 1821-1827.

46. Shi-Ting Bao, Shui-Qing Gui and Mu-Sheng Lin. // Hepatobiliary PancreatDis Int. 2006.5: p 580-583.

47. Fu J, Jin Y, Arend LJ. IIJ Biol Chem. 2003.278:p. 52660-52672.

48. Zhiyin Song, Xuebiao Yao, Mian Wu. // The journal of biological chem.,2003. 278: p. 23130-23140

49. Июль-Август 2008, С. 652-661.

50. Obiol-Pardo С, Manuel Granadino-Rolda'n J., Rubio-Martinez J. II J. Mol. Recognit.2008. 21:p. 190-204.

51. Sun C., Nettesheim D., Liu Z., Olejniczak E.T. // Biochemistry, 2005. 44: p. 11-17.

52. Atsushi Suzuki, Midori Hayashida, Takeshi Ito, Iiirokazu Kawano, Takeshi Nakano, Masayuki Miura, Kouchi Akahane, Katsuya Shiraki. // Oncogene. 2000. 19: p. 3225-3234.

53. Margaret A. Bolton, Weijie Lan, Shannon E. Powers, Mark L. McCleland, Jian Kuang, P. Todd Stukenberg. // Molecular Biology of the Cell. 2002. 13, p 3064-3077.

54. Xiaomei Yan, Lihuan Cao, Qiang Li, Yanhua Wu, Haoxing Zhang, Hexige Saiyin, Xianghua Liu, Xuqing Zhang, Qinghua Shi, Long Yu. // Genes to Cells 2005.10: p 617-626.

55. Susanne M.A. Lens. Rene H. Medema. // Cell Cycle.2003. 2: p 507-510.

56. Keen N., Taylor S. II Nat Rev Cancer .200A. 4: p 927-936.

57. Jack Rosa, Pedro Canovas, Ashraful Islam, Dario C. Altieri, Stephen J. Doxsey. II Molecular Biology of the Cell 2006. 17: p 1483-1493.

58. Chun Hei Antonio Cheung, Huang-Hui Chen, Ching-Chuan Kuo, Chi-Yen Chang, Mohane S Coumar, Hsing-Pang Hsieh, Jang-Yang Chang. Molecular Cancer. 2009. 8: p 43.

59. Oliver J. Gruss, Isabelle Vernos. // The Journal of Cell Biology, 2004.V.166. 7:p 949-955.

60. Fang Xia, Pedro M. Canovas, Thomas M. Guadagno, Dario C. Altieri. A // Molecular and cellular biology. 2008. p. 5299-5311.

61. Altieri D.C. Current Opinion in Cell Biology. 2006. 18:609-615.

62. Srinivasa M. II Mol Cell. 2008. 25; 30(2): 123-135.

63. Altieri D.C. Oncogene. 2008. October 20; 27(48): 6276-6284.

64. Aki Ogura, Yasuko Watanabe, Daisuke Iizuka, Hironobu Yasui, Makoto Amitani, Saori Kobayashi, Mikinori Kuwabara, Osamu Inanami. Cancer Letters. 2008.259,71-81.

65. Grossman D, McNiff JM, Li F, Altieri D.C. II J Invest Dermatol. 1999. 113(6): 1076-81.

66. Ling X, Li F. // Biotechniques. 2004. 36(3):450-4, 456-60.

67. Marzia Pennati, Mara Binda, Michelandrea De Cesare, Graziella Pratesi, Marco Folini, Lorenzo Citti, Maria Grazia Daidone, Franco Zunino, Nadia Zaffaroni. // Carcinogenesis 2004.V. 25. 7: p.l 129-1136.

68. Mesri M, Wall NR, Li J, Kim RW, Altieri D.C. // J Clin Invest. 2001. 108(7):p 981-90.

69. Janet Plescia, Whitney Salz, Fang Xia, Marzia Pennati, Nadia Zaffaroni, Maria Grazia Daidone, Massimiliano Meli, Takehiko Dohi, Paola Fortugno, Yulia Nefedova, Dmitry I. Gabrilovich, Giorgio Colombo, D.C. Altieri. // Cancer cell. 2005. 7: 457-467.

70. Cristian Obiol-Pardo, Jose Manuel Granadino-Rolda'n, Jaime Rubio-Martinez. II J. Mol. Recognit.2008. 21, 190-204.

71. Laemmli U. K.//Nature. 1970. 227: p.680-685.

72. Bradford M. M.// Anal Biochem. 1976. 72: p 248-254.

73. Harlow E., Lane D. Antibodies: A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Laboratory. 1988.

74. Sali A., and Blundell T. L. J Mol Biol. 1993.234: p 779-815.

75. Hwang C. Y., Ryu Y. S., Chung M. S., Kim K. D., Park S. S., Chae S. K., Chae H. Z., and Kwon K. S. // Oncogene. 2004.23: p 8868-8875.

76. Pei Y., Xing D., Gao X., Liu L., and Chen // Apoptosis.2007. 12: p 16811690.

77. Rajalingam K., Oswald M„ Gottschalk K., and Rudel T. Apoptosis. 2007. 12:p 1503-1510

78. Zhu YY, Machleder EM, Chenchik A, Li R, Siebert PD. II Biotechniques. 2001. 30: p 892-897.

79. Amt CR, Chiorean MV, Heldebrant MP, Gores GJ, Kaufmann SH. II J Biol Chem. 2002. 277: p 44236-44243.

80. Checinska A, Hoogeland BS, Rodriguez JA, Giaccone G, Kruyt FA. II Exp Cell Res. 2007. 313: p 1215-1224.

81. Petrucci E, Pasquini L, Petronelli A, Saulle E, Mariani G, Riccioni R, et alJ/. Gynecol Oncol. 2007.105: p .481-492.

82. Mao H.L. Mao HL, Liu PS, Zheng JF, Zhang PH, Zhou LG, Xin G, Liu C.II Pharmacol Res. 2007. 56:483-492.

83. Chai J, Du C, Wu JW, Kyin S, Wang X, Shi Y. II Nature. 2000.406: p 855-862.

84. Asra Mirza, Marnie McGuirk, Tish N Hockenberry, QunWu, Hena Ashar, Stuart Black, Shu Fen Wen, Luquan Wang, Paul Kirschmeier, W Robert Bishop, Loretta L Nielsen, Cecil B Pickett, Suxing Liu. // Oncogene.2002. 21, 2613 2622.

85. Jian Zhao, Tencho Tenevl, Luis M. Martins, Julian Downward, Nicholas R. Lemoine. II Journal of Cell Science. 2000.113, 4363-4371.

86. Alan H. Lau. II Kidney International. 1999. 56. p. 1295-1298.

87. Karen M. Henkels, John J. Turchi. II Cancer research. 1999 59, 30773083.

88. X Yang, M Fräser, MR Abedini, T Bai, BK Tsang. // British Journal of Cancer. 2008. 98, 803-808.

89. Jin-Tang Chen, Chih-Yang Huang, Yung-Yen Chiang, Wen-Heng Chen, Shiow-Her Chiou,Chih-Yi Chen, Kuan-Chih Chow. Am J Respir II Cell Mol Biol. 2008. 38: p 559-565.

90. Song Z., Liu S., He H., Hoti N., Wang Y„ Feng S., and Wu M. II Mol Biol Cell. 2004. 15: p 1287-1296.

91. Wang H., Holloway M. P., Ma L., Cooper Z. A., Riolo M., Samkari A., Elenitoba-Johnson K. S., Chin Y. E., and Altura R. A. II JBiol Chem. 2010. 285: p 36129-36137.

92. Stavnezer J. II Curr. Opin. Immunol. 1996. 8: p. 199 -205.

93. Norderhaug I.N. Johansen F.E., Schjerven H., Brandtzaeg P.// Crit. Rev. Immunol. 1999. V19. P.481-508.

94. Brandtzaeg PЛ Nature. 1974. 252: p. 418-420.

95. Brandtzaeg ?.//Mol. Immunol. 1983. 20: p. 941-966.

96. Wycoff K.L. // Current Science Publishers. 2005. 11, 19: p 2429-2437(9).

97. Kirchner Т., Steininger H., Faller G.//Digestion.\991. 58 (Suppl 1): p 14-26.

98. Watanabe Т., Goto H., Arisawa T.II. J. Gastroenterol Hepatol. 1997. 12.: p 660-665.

99. Dail D.H., Hammar S.P.// Pulmonary pathology. 1993: p 1640 .

100. Stavnezer J.//. Curr. Opin. Immunol.1996. 8. p 199 -205.

101. Беляков И.М. II Иммунология. 1997. 4. p 7-12.

102. B.T. Иванов. Белки иммунной системы. М.:Полиграфический участок ИБХ РАН, 1997.

103. Jerry L.M., Kunkel H.G., Adams L Л J Immunol. 1972. 109. p 275.

104. Natvig I.B., Johansen F.-E., Nordeng T.W., Haraldsen G., Brandtzaeg P. II J. Immunol. 1997. 159: p 4330.

105. Song W., Vaerman J.P., Mostov K.E.IIJ Immunol. 1995.155 :p715.

106. Altamirano G.A., Barranco-Acosta C., Van Roost E., Vaerman S.?.II Mol Immunol. 1980. 17: p 1525.

107. Gurevich P. // International Journal of Molecular Medicine. 2003. 12: p 289-297.

108. Д.К.Слижикова, М.В.Зиновьева, Д.В.Кузьмин, Е.В.Снежков, М.И.Шахпаронов, Р.И.Дмитриев, Н.В.Антипова, Л.Л.Завалова, Е.Д.Свердлов Л Молекулярная биология. 2007. 41(4): р 659-665.

109. Vaerman J.P., Langendries A., Vander Maelen О.J ¡Immunol Invest. 1995. 24: p 631.

110. National Jewish Center for Immunology and Respiratory Medicine (Denver, CO). United States Patent 5698679.1. БЛАГОДАРНОСТИ.

111. Особенную благодарность автор приносит академику Евгению Давидовичу Свердлову, за участие в проекте и заданное направление в исследовании, а так же за ценные дополнения и примечания к выполненной работе.

112. Автор глубоко признателен Заваловой Людмиле Львовне за ценные советы, предоставляемые в процессе работы, за постоянное внимание и помощь в творческом осмыслении результатов на всех этапах работы.

113. Автор выражает благодарность своему научному руководителю Шахпаронову Михаилу Ивановичу за возможность работать в ГМБС, за незаменимые советы и поддержку во всех начинаниях.

114. Автор благодарен Галине Сергеевне Монастырской за организацию благоприятной рабочей обстановки и подаренную заботу, и хорошее настроение.

115. Погосяну Рудольфу Андреевичу за поддержку и заботу о диссертации.

116. Огромное спасибо моим студентам Павлюкову Марату, Михайловой Лиде и Фадеевой Юлии за замечательные часы, проведенные с ними в компании, идеи и свершения.

117. Благодарю сотрудников лаборатории Химии липидов за литры выпитого чая, незаменимые советы, внимание, терпение и плодотворное обсуждение полученных результатов.

118. Моим дорогим друзьям Болдыреву Ивану, Алексеевой Анечке, Кузнецовой Наталье, Алексею Богданову, Саше Мишину, Наташе Мишиной, Кате Серебровской, Дмитрию Дидычу, Леониду Асееву, Инне Курковой.

119. Благодарю Коваленко Елену Ивановну и Каневскому Леониду Михайловичу за разрешение поработать на проточном цитометре.

120. Также спасибо всем сострудникам Института за участие в обсуждении различных аспектов данной работы и прекрасную дружескую атмосферу, которая помогает и в работе, и в жизни.

121. ИБХ ДЛЯ АВТОРА ЭТО И ДОМ, И ДРУЗЬЯ, И СЕМЬЯ.

122. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

123. И. О. Макаров Т. В. Овсянникова Н. А. Шешукова А. С. Федотова Е. И. Боровкова М. И. Шахпаронов, Н. В. Антипова. Онкологические аспекты гиперпластических процессов в эндометрии. Российский вестник акушера-гинеколога, 2011. №1.14-16.

124. Н. В. Антипова, Е. В. Снежков, Л. Л. Завалова, М. И. Шахпаронов. Иммунологическое исследование тканевой специфичности J-пептида секреторных полимерных иммуноглобулинов человека. Биоорг.химия 2010, 36 (6): 774-778.

125. Н. В. Антипова. Диагностическая система «Пептосурвим» для определения белка сурвивина в биологических образцах. Вестник Российского Государственного Медицинского Университета. Спец. Выпуск №1. 2011. Стр.233234.1. Тезисы докладов:

126. Антипова Н.В., Завалова JI.JL, Копанцев Е.П., Свердлов Е.Д.

127. J-пептид секреторных полимерных иммуноглобулинов человека при плоскоклеточном раке и аденокарциноме легких. XIX зимняя молодежная научная школа «Перспективные направления физико-химической биологии», 2007. Москва. Стр.58.

128. Антипова H.B., Дмитриев Р.И., Шахпаронов М.И., Копанцев Е.П., Завалова JI.JI, Свердлов Е.Д. Regulation of human immunoglobulin J-peptide expression in non-small cell lung cancer (NSCLC). FEBS 2007, Вена, pp.158,

129. Павлюков М.С., Антипова Н.В., Завалова Л.Л., Шахпаронов М.И. Изучение взаимодействия рекомбинантных белков survivin и SMAC/DIABLO in vitro. Международная конференция ИБХ, посвященная 75-летию Ю.А.Овчинникова, Москва, ИБХ, 2009, тезисы докладов, стр.314.

130. Антипова Н.В., Шахпаронов М.И. ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА «ПЕПТОСУРВИМ». Школа-конференция молодых ученых "Фундаментальная наука для биотехнологии и медицины- 2010 ". стр4-6.

131. Павлюков М.С., Антипова Н.В., Шахпаронов М.И. СОЗДАНИЕ НОВЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ БЕЖА СУРВИВИН. Школа-конференция молодых ученых "Фундаментальная наука для биотехнологии и медицины- 2010. стр 67.

132. Павлюков М.С., Антипова Н.В., Завалова Л.Л., Шахпаронов М.И. Изучение механизмов ингибирования апоптоза белком Сурвивин. 14-ая Международная Пущинская школа конференция молодых ученых «Биология-Наука XXI века». 19-23 апреля 2010, тезисы, стр.314.

133. Антипова Н.В., А.С.Федотова, Л.Л.Завалова, М.И. Шахпаронов. Диагностический набор «Пептосурвим». Всероссийская школа-семинар студентов, аспирантов и молодых ученых по направлению «Нанобиотехнология». 2010, стр.14.

134. Антипова Н.В., Федотова A.C., Шахпаронов М.И. Определение белка сурвивина в эндометрии с помощью диагностического набора «Петосурвим». 12 зимняя молодежная научная школа, Москва, ИБХ, 2010, стр.67

135. Павлюков М.С., Антипова Н.В., Шахпаронов М.И. Участие мономера сурвивина в регуляции апоптоза .12 зимняя молодежная научная школа, Москва, ИБХ, 2010, стр.47.

136. Антипова Н.В., А.С.Федотова. Онкологические аспекты гиперпластических процессов эндометрия. XVI Российский национальний конгресса «Человек и лекарство». 2010. Москва