Структура и функции протимозина альфа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, доктор химических наук Евстафьева, Александра Георгиевна

• Евстафьева, Александра Георгиевна
• доктор химических наук
• 2006

Оглавление диссертации доктор химических наук Евстафьева, Александра Георгиевна

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ Ю

ГЛАВА 1. ПРОТИМОЗИН АЛЬФА. МЕТОДЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ

ИССЛЕДОВАНИЯ МЕХАНИЗМОВ ЕГО ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ обзор литературы)

1.1. СТРУКТУРА ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА

1.1.1. Первичная структура ПроТа

1.1.2. ПроТа как природный неструктурированный белок

1.1.3. Пост-трансляционные химические модификации ПроТа

1.2. ГЕН ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА И ЕГО ЭКСПРЕССИЯ

1.2.1. Гены и псевдогепы ПроТа

1.2.2. Регуляция экспрессии гена прогимозипа а

1.2.2.1. Е-бокс и регуляция белком Мус

1.2.2.2. Роль фактора А Р

1.2.2.3. Потенциальная регуляция фактором Е2Р

1.2.2.4. Эстрогеновыйрецептор и фактор 8Р-!

1.2.2.5. Опухолевый супрессорр

1.2.2.6. Онкобелок Е6 вируса папилломы человека

1.3. ВНУТРИКЛЕТОЧНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА

1.4. ПРОТИМОЗИН АЛЬФА, КЛЕТОЧНОЕ ДЕЛЕНИЕ И ДИФФЕРЕНЦИРОВКА

1.4.1. Корреляция уровня ПроТа с пролиферативным статусом клетки

1.4.2. ПроТа и клеточный цикл

1.4.3. Корреляция уровня мРНК ПроТа с экспрессией с-тус

1.4.4. Прямые доказательства участия ПроТа в процессах, связанных с делением клеток

1.4.5. ПроТа и клеточная днфферепцнровка

1.5. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ИРОТИМОЗИНА АЛЬФА С ГИСТОНОМ HI. ВЛИЯНИЕ НА СТРУКТУРУ ХРОМАТИНА

1.6. ПОИСК НОВЫХ БЕЛОК-БЕЛКОВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ. ДРОЖЖЕВАЯ ДВУХГИБРИДНАЯ СИСТЕМА

1.6.1. Что такое дрожжевая двухгпбрндпая система

1.6.2. Преимущества дрожжевой двухгпбрндпой системы

1.6.3. Недостатки двухгпбрндпой системы и методы их преодоления

1.6.4. Поиск новых белок-белковых взаимодействий с помощью дрожжевой двухгпбрндпой системы

1.7. ПОИСК НОВЫХ БЕЛОК-БЕЛКОВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С УЧАСТИЕМ ПРОТИМОЗИИА АЛЬФА

1.7.1. Взаимодействие ПроТа с репрессором эстрогенового рецептора REA

1.7.2. Взаимодействие ПроТа с белком EBNA3C вируса Эпштейиа-Барр п гпстоиовымн ацетплтрансферазамп рЗОО/СВР

1.7.2.1. Взаимодействие ПроТа с белком EBNA3C вируса Эпштейна-Барр

1.7.2.2. Взаимодействие ПроТа с гистоповыми ацетилтрансферазами

1.7.2.3. Функциональная значимость взаимодействий ПроТа /СВР и

ПроТа/рЗОО / EBNA3C

1.7.3. Взаимодействие ПроТа с транскрипционным фактором STAT в ответ па действие ннтерферопа

1.7.4. Взаимодействие ПроТа с опкобелком SET

1.7.5. Другие белок-белковые взаимодействия с участием ПроТа

1.7.6. Заключительные замечания

1.8. МЕТОД ИНТЕРФЕРЕНЦИИ РНК И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ

ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИЙ БЕЛКОВ

1.8.1. Механизм ннтерфсрспцнп РНК

1.8.2. Особеппост.терференцин РНК в клетках млекопитающих

1.8.3. Системы практического осуществления нптерферепцип РНК в клетках высших эукарпот

1.9. ПРОТИМОЗИН АЛЬФА И АПОПТОЗ

1.10. ПРОТИМОЗИН АЛЬФА И ОПУХОЛЕВАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ

1.10.1. Протнмозпн а - предполагаемый опкобелок

1.10.2. Протпмознп а активирует экспрессию р53-завнсимых генов

ГЛАВА II. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА обсуждение результатов)

II.1. РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПРОТИМОЗИН АЛЬФА ЧЕЛОВЕКА: ПРОДУКЦИЯ В БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ, ВЫДЕЛЕНИЕ,

СВОЙСТВА

11.1.1. Оптимизация продукции ПроТа человека в клетках E.coli

11.1.2. Разработка метода выделения биологически активного рекомбннаптиого ПроТа из бактериальных клеток

11.1.3. Получение ПроТа-сиецнфпчпых моноклоиальпых антител, их свойства и антигенная специфичность

11.1.4. Исследование металл-связывающпх свойств ПроТа 110 II. 1.4.1. ПроТа связывается с ионообменной смолой, заряженной двухвалентными катионами 110 II. 1.4.2. Анализ взаимодействия ПроТа с ионами Zn2+ и Са2+ методом равновесного диализа 111 II. 1.4.3. Влияние ионов металлов на взаимодействие ПроТа с другими белками

II.2. СТРУКТУРНО - ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ ЭКСПРЕСИИ В КЛЕТКАХ ДРОЖЖЕЙ

Н.2.1. Эктопическая экспрессия ПроТа человека в клетках Saccharomyces cerevisiae

11.2.2. Возможность использования ПроТа в качестве репортера в клетках Saccharomyces cerevisiae

11.2.3. Идентификация функционально значимых мутаций в ПроТа

11.2.4. Обнаружение двухчастного NLS в ПроТа

ИЗ. ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ ПРОТИМОЗИПА АЛЬФА В

КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

11.3.1. Оптимизации эктопической экспрессии ПроТа в клетках IleLa

11.3.2. Снижение внутриклеточной концентрации ПроТа методом интерференции РНК

11.3.2.1. Подбор оптимального фрагмента-мишени для ПроТа-специфической интерференции РНК

113.2.2. Создание интерференционных плазмид и введение их в клетки Не La

113.2.3. Снижение уровня мРНКПроТа в клетках HeLa, экспрессирующих siRNA, и исследование специфичности этого эффекта

113.2.4. Снижения уровня ПроТа в клетках HeLa, экспрессирующих siRNA, и исследование специфичности этого эффекта

113.2.5. Сравнение эффективности siRNA к разным фрагментам- мишеням на мРНК ПроТа, транскрибируемых с HI и U6 промоторов

11.4. ПРОТИМОЗИН АЛЬФА В АПОПТОТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ

11.4.1. Фрагментация ПроТа в анонтотических клетках

11.4.2. Гидролиз ПроТа каспазами-3 и -7 ш viíro

11.4.3. Участки каспазпого гидролиза ПроТа in vivo

11.4.4. Изменение внутриклеточной локализации ПроТа в апоитотических клетках

11.4.5. Суперпродукцня ПроТа и его мутантов защищает клетки от анонтоза

11.5. ПОИСК БЕЛКОВ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХ С ПРОТИМОЗИНОМ АЛЬФА, С ПОМОЩЬЮ ДРОЖЖЕВОЙ ДВУХГИБРИДНОЙ СИСТЕМЫ 165 II.5.1. Принцип работы дрожжевой двухгнбридной системы

11.5.2. Дрожжевая двухгибридная система на основе LexA

11.5.3. ПроТа человека не является автоактиватором транскрипции

11.5.4. Скрининг библиотек кДНК с помощью дрожжевой двухгибридной системы

11.5.5. Определение участков белков, ответственных за взаимодействие ПроТа и Keapl

11.5.6. Получение моноклональных антител к Keapl

11.5.7. Взаимодействие ПроТа-Keapl in vitro

II.6. РОЛЬ ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА В ЗАЩИТЕ КЛЕТОК ОТ

ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА

11.6.1. Модель регуляции клеточного ответа на окислительный стресс

11.6.2. Как ПроТа может встретиться с Keapl в клетке?

11.6.3. ПроТа конкурирует с Nrf2 за связывание с Keapl

11.6.4. ПроТа влияет на 1ЧгО-зависимую генную экспрессию

III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

IV. ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структура и функции протимозина альфа»

Одна из актуальных и наиболее сложных проблем молекулярной биологии во времена геномики и протеомики - поиск новых функций и определение механизмов функционирования белков в клетках. Успешное завершение секвеиировапия генома человека привело к тому, что прочитаны практически все гены, становится известной структура большинства их белковых продуктов. Но даже если о структуре белка известно все или почти все, часто бывает очень непросто понять, что этот белок делает в клетке, особенно если учесть тот факт, что большинство белков выполняют в клетке не одну, а несколько функций. Чтобы понять, как работает живая система в целом, необходимо разобраться в сложной взаимосвязи этих функций.

Протимозин альфа (ПроТа) - это мультикопийный ядерный белок млекопитающих, состоящий из 109-110 аминокислотных остатков, относящийся к интереснейшему классу природных неструктурированных белков (naturally unfolded proteins). Оказалось, что даже такой относительно простой белок является многофункциональным, способным участвовать в самых разнообразных процессах в жизни и смерти клеток. Структурно-функциональное исследование протимозина альфа актуально, как в связи с необходимостью разработки методов изучения механизмов функционирования белков, так и вследствие того, что функции ПроТа сами по себе имеют существенное значение для протекания весьма важных клеточных процессов, таких как деление, опухолевая трансформация, апоптоз, защита от окислительного стресса.

Несмотря на то, что ПроТа является жизненно важным белком, механизм его действия до сих пор не ясен. Многочисленные экспериментальные данные свидетельствуют об его участии в пролиферации клеток. Он ускоряет клеточное деление, клетки с повышенным содержанием ПроТа приобретают фенотип трансформированных клеток. Снижение уровня ПроТа приводит к остановке деления клеток. Таким образом, изучение механизмов функционирования ПроТа актуально для понимания закономерностей клеточного деления.

Активация экспрессии гена ПроТа обнаружена в клетках многих раковых опухолей, в частности рака толстой кишки, тонкой кишки, печени, легких и молочной железы. Было показано, что суперпродукция ПроТа не только влияет на пролиферацию, но и позволяет клеткам расти в среде с пониженным содержанием сыворотки, приводит к отсутствию контактного торможения и росту не прикрепленных к подложке клеток. Следовательно, ПроТа обладает свойствами, аналогичными свойствам онкобелков, а исследование механизмов его функционирования актуально для создания новых антираковых препаратов.

Регуляция экспрессии генов является фундаментальной научной проблемой, от решения которой зависит возможность влиять на важнейшие биологические процессы на уровне клетки и всего организма. Показано, что ПроТа взаимодействует с гистонами, в частности с гистоном HI, и способен индуцировать структурные перестройки хроматина. Кроме того, обнаружен еще ряд взаимодействующих с ПроТа белков: репрессор рецептора эстрогенов REA, коактиватор транскрипции СВР и гистоновая ацетилтрапсфераза рЗОО, транскрипционный фактор STAT3, ядерный антиген вируса Эпштейна-Барр EBNA3C, белок Rev вируса иммунодефицита человека типа 1, онкобелок SET. Перечисленные взаимодействия свидетельствуют о вероятном участии ПроТа в регуляции экспрессии генов, например, посредством структурной перестройки хроматина, модуляции активности транскрипционных факторов, а также возможного участия в процессе ядерно-цитоплазматического транспорта.

В процессе выполнения данной работы мы показали, что ПроТа гидролизуется каспазой-3 в апоптотических клетках и это приводит к инактивации его сигнала ядерной локализации. Кроме того, высокий уровень ПроТа защищает клетки человека от апоптоза. Программируемая клеточная смерть (апоптоз) является фундаментальным процессом, позволяющим многоклеточным организмам избавляться от избыточных и поврежденных (в том числе, раковых) клеток. Кроме того, мы обнаружили, что ПроТа за счет взаимодействия с ингибитором транскрипционного фактора Nrf2 принимает участие в ответе клеток на окислительный стресс, способствуя активации экспрессии защитных генов. Это свидетельствует о несомненной актуальности систематического структурно-функционального исследования ПроТа.

Целыо настоящей работы явилось изучение механизмов функционирования ядерного многофункционального белка млекопитающих ПроТа, определение взаимосвязи между структурными элементами этого белка и его функциональными активностями.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Евстафьева, Александра Георгиевна

IV. выводы

1. Созданы системы эффективной экспрессии ПроТа человека, его точечных и делеционных мутантов, а также содержащих ПроТа составных белков, в клетках бактерий, дрожжей и культуре клеток человека. Разработаны методы выделения и очистки этих белков. Получены препараты высокоочищенного ПроТа, обладающие иммуностимулирующей активностью. Получены высокоспецифичные моноклональные антитела к двум разным эпитопам ПроТа, пригодные для иммуноблотиига, иммунопреципитации, иммуноферментного и гистохимического анализа. Показано, что ПроТа является Хп2+ и Са2+-связывающим белком.

2. Обнаружено, что продукция ПроТа человека в клетках Басскаготусез сегеугягае приводит к ингибированию клеточного деления. На основе этого феномена создана система селекции функционально значимых мутаций в протимозине альфа, ряд таких мутаций идентифицирован и охарактеризован. С их помощью показано, что сигнал ядерной локализации ПроТа состоит из двух блоков положительно заряженных аминокислот КЯ88 и ККОК104, разделенных спейсером.

3. Показано, что протимозин альфа является природным субстратом каспаз. Он гидролизуется в апоптотических клетках человека в трех местах: мажорное

99 расщепление происходит после остатка Э в аминокислотнои последовательности ООУО , а два минорных - после последовательностей ААУБ и Ш1Ш31. За это ответственна, в основном, каспаза-3.

4. Расщепление каспазой-3 по мажорному сайту после остатка О99 приводит к инактивации сигнала ядерной локализации ПроТа и изменению его субклеточной локализации: из ядерного белок становится ядерно-цитоплазматическим. Кроме того, ПроТа (или его фрагменты) экспонируются на поверхности апоптотических (но не нормальных) клеток.

5. Суперпродукция протимозина альфа и ряда его мутантов с ядерной или ядерно-цитоплазматической локализацией в клетках НеЬа ингибирует активацию каспаз и защищает клетки от апоптоза.

6. Обнаружен белок, взаимодействующий с протимозииом альфа. Им оказался Кеар1, репрессор транскрипционного фактора ответственного за индукцию генов клеточного ответа на окислительный стресс. ПроТа взаимодействует с Кеар1 прямо и специфично. Избыток ПроТа способен вытеснять из комплекса с Кеар1.

7. Показано, что Кеар1 не заякорен в цитоплазме благодаря взаимодействию с актиновыми элементами цитоскелета, как считали ранее, а является белком-челноком, постоянно мигрирующим между ядром и цитоплазмой. В связи с этим предложена модель участия ПроТа в регуляции ответа клетки на окислительный стресс, согласно которой ПроТа играет роль внутриядерного фактора диссоциации комплекса Мг£2-Кеар1. При окислительном стрессе происходит дестабилизация комплекса, усиление его диссоциации протимозином а, увеличение концентрации свободного №£2, способного связаться с ДНК, и возрастание экспрессии А11Е-зависимых генов.

8. Суперэкспрессия протимозина альфа дикого типа (но не мутанта с нарушенной способностью взаимодействовать с Кеар1) приводит к усилению, а снижение концентрации протимозина в клетке с помощью интерференции РНК - к подавлению экспрессии гена гемоксигеназы-1. Эти данные подтверждают предложенную модель ответа клетки на окислительный стресс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ПроТа - мультифункциональный белок. Как уже упоминалось выше, отсутствие жесткой глобулярной структуры природных неструктурированных белков может служить значительным функциональным преимуществом, так как высокая пластичность позволяет им эффективно взаимодействовать с многочисленными разнородными партнерами. Структурные переходы, индуцированные в таких белках при связывании со специфическими партнерами, могут служить механизмом регуляции различных клеточных процессов.

Когда мы начинали эту работу (1990 г.), основной функцией ПроТа считалась иммуностимуляторная. Не было данных о его взаимодействии с другими белками и ионами металлов. Не было получено точечных мутантов ПроТа, влияющих на его функционирование. Не было высоко-специфичных моноклональных антител к этому белку. Не был идентифицирован двухчастный сигнал ядерной локализации ПроТа. Не было данных о фрагментации этого белка в апоптотических клетках, об изменении его внутриклеточной локализации при апоптозе, а также о роли ПроТа в защите клеток от апоптоза и о его функциях онкобелка. Не было также данных о связи ПроТа с защитой клетки от окислительного стресса.

В сложившуюся в настоящее время картину многочисленных функциональных активностей ПроТа внесли свой вклад как наши работы, так и работы наших коллег, цитированные в настоящем обзоре. Многочисленность этих работ и полученные в них интересные результаты свидетельствует о важности и актуальности структурно-функционального исследования протимозина альфа.

ГЛАВА II. СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ПРОТИМОЗИНА а (обсуждение результатов)

Целью настоящей работы явилось изучение механизмов функционирования ядерного многофункционального белка млекопитающих ПроТа, определение взаимосвязи между структурными элементами этого белка и его функциональными активностями.

Для достижения поставленной цели были поставлены и решались следующие задачи:

1. Оптимизация эктопической экспрессии ПроТа человека в бактериальных клетках и в культуре клеток человека. Создание бактериальных и дрожжевых штаммов-продуцентов ПроТа человека, его производных и мутантов.

2. Разработка эффективных методов выделения ПроТа человека из бактериальных, дрожжевых и человеческих клеток. Исследование рекомбинантного белка: посттрансляционной модификации, биологической активности, антигенных и металл-связывающих свойств.

3. Получение моноклональные антител к разным эпитопам ПроТа. Определение антигенной специфичности полученных антител. Разработка системы иммунофермеитного анализа на основе этих антител.

4. Разработка системы селекции функционально значимых мутаций в ПроТа. Поиск функционально важных доменов этого белка. В связи с обнаружением предполагаемого двухчастного ЫГД изучение ядерно-цитоплазматического транспорта ПроТа и его делеционных мутантов в клетках дрожжей и человека.

5. Разработка системы подавления экспрессии гена ПроТа в культуре клеток человека методом интерференции РНК.

6. Исследование фрагментации, внутриклеточной локализации и защитного действия ПроТа в апоптотических клетках.

7. Поиск молекулярных партнеров ПроТа с помощью дрожжевой двухгибридной системы. Исследование возможности и специфичности взаимодействия ПроТа с найденным белком Кеар1. Анализ биологической значимости этого взаимодействия.

8. Создание и экспериментальная проверка модели участия ПроТа в ответе клетки на окислительный стресс.

11.1. РЕКОМБИНАНТНЫЙ ПРОТИМОЗИН АЛЬФА ЧЕЛОВЕКА: ПРОДУКЦИЯ В БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТКАХ, ВЫДЕЛЕНИЕ, СВОЙСТВА

ПроТа человека - мультикопийный ядерный белок, маленький (12.6 кДа), гидрофильный и очень кислый (р1 = 3.5) (рис. 11.1). Для структурно-функциональных исследований ПроТа и его возможного применения в медицине, а также для получения высоко-специфичных антител к этому белку, необходимо было иметь доступный источник препаративных количеств ПроТа человека, его мутантов и производных, состоящих из разнородных структурных доменов. Наиболее надежным способом достижения перечисленных целей стало создание бактериальных штаммов-продуцентов ПроТа человека и его производных и разработка эффективного метода выделения этого белка из бактериальных клеток. Следует подчеркнуть, что эта задача оказалась не совсем тривиальной. ПроТа - достаточно маленький белок с весьма необычными свойствами, поэтому для ряда стоящих перед нами целей присоединение к нему какого-либо тэга, позволяющего выделить белок с помощью аффинной хроматографии, было нежелательно.

Ас-БР А А УРТБ БЕ10 I Т Т К О ЬК Е К К20 Е V V Е Е А ЕЫ О Я30Р А Р АЫ в Тимозин а1

ЫАЫЕ40ЕЫОЕдЕАРЫЕ50УРЕЕЕЕЕООЕ60ЕЕЕЕЕЕЕОРО70ЕЕЕР ОРЕРЕЕ80АЕ8АТОК11А А90 ЕРРЕРРРУР Т100 КК(}КТРЕР Р109

Рис. Н.1. Первичная структура ПроТа человека. Ы-концевой 28-членный пептид, представляющий собой тимозин а1, подчеркнут.

Н.1.1. Оптимизация продукции ПроТа человека в клетках Е.соИ

Для продукции ПроТа и оптимизации эффективности его синтеза в бактериальных клетках, кДНК, соответствующая белок-кодирующей части ПроТа человека (ранее полученная А. Б. Вартапетяном), была встроена в вектор рЕТЗс (Коуа£еп) под контроль промотора и участка связывания рибосом гена 10 бактериофага Т7. Полученная таким образом плазмида кодировала ПроТа, содержащий на Ы-копце 11-членный пептид продукта гена 10 бактериофага Т7. Для получения ПроТа, идентичного нативному человеческому белку, было решено удалить фрагмент ДНК, кодирующий чужеродный довесок, получив при этом разные варианты стыковки последовательности Шайн

99

Дальгарно (БО) и инициаторного кодона ПроТа с целью экспериментального подбора оптимального рибосом-связывающего участка. Как известно, для инициации трансляции оптимальным является расстояние между последовательностью 80 и инициаторным кодоном в 5-7-9 нуклеотидных остатков [270], однако на эффективность этого процесса может влиять вовлеченность участка связывания рибосомы во вторичные и третичные взаимодействия с другими районами мРНК, плохо предсказуемая теоретически, несмотря на обилие программ анализа вторичной структуры РНК.

Для осуществления данного плана фрагмент ДНК между последовательностью БО и инициаторным кодоном ПроТа был вырезан с помощью эндонуклеаз рестрикции и удален, а образовавшиеся липкие концы экспрессионной плазмиды были либо достроены с помощью фрагмента Кленова ДНК-полимеразы I Е.соИ, либо затуплены обработкой нуклеазой с разной степенью жесткости. При их лигировании получился набор вариантов (клонов), в которых расстояние между последовательностью БО и инициаторным кодоном ПроТа варьировало от 0 до 16 нуклеотидных остатков (табл. И.1).

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Евстафьева, Александра Георгиевна, 2006 год

1. Haritos A.A., Goodall G.J., Horecker B.L. Prothymosin alpha: isolation and properties of the major immunoreactive form of thymosin alpha 1 in rat thymus.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V. 81. P. 1008-1111.

2. Pineiro A., Cordero O.J., Nogueira M. 2000. Fifteen years of prothymosin alpha: contradictory past and new horizons. Peptides. 21,1433.

3. Vartapetian A.B., Uversky V.N. 2003. Prothymosin alpha: a simple yet mysterious protein. In: Protein structures: kaleidoscope of structural properties andfunctions. India, Research Signpost.

4. Haritos A.A., Blacher R., Stein S., Caldarella J., Horecker B.L. Primary structure of rat thymus prothymosin alpha. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. P. 343-346.

5. Pan L.X., Haritos A.A., Wideman J., Komiyama T., Chang M., Stein S., Salvin S.B., Horecker B.L. Human prothymosin alpha: amino acid sequence and immunologic properties.//Arch. Biochem. Biophys. 1986. V. 250. P. 197-201.

6. Goodall G.J., Dominguez F., Horecker B.L. Molecular cloning of cDNA for human prothymosin alpha. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. P. 8926-8928.

7. Eschenfeldt W.H., Berger S.L. The human prothymosin alpha gene is polymorphic and induced upon growth stimulation: evidence using a cloned cDNA.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V.83.P. 9403-9407.

8. Frangou-Lazaridis M., Clinton M., Goodall G.J., Horecker B.L. Prothymosin alpha and parathymosin: amino acid sequences deduced from the cloned rat spleen cDNAs.// Arch Biochem Biophys. 1988. V. 263. P. 305-310.

9. Economou M., Seferiadis K., Frangou-Lazaridis M., Horecker B.L., Tsolas O. Isolation and partial characterization of prothymosin alpha from porcine tissues.//

10. FEBS Lett. 1988. V.20. P.342-346.

11. Panneerselvam C., Wellner D., Horecker B.L. The amino acid sequence of bovine thymus prothymosin alpha. //Arch. Biochem. Biophys. 1988 .V. 265. P. 454-457.

12. Clinton M, Frangou-Lazaridis M, Panneerselvam C, Horecker BL. The sequence of human parathymosin deduced from a cloned human kidney cDNA. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. V. 158. P. 855-862.

13. Frillingos S., Frangou-Lazaridis M., Seferiadis K., Hulmes JD., Pan Y.C., Tsolas O. Isolation and partial sequence of goat spleen prothymosin alpha. // Mol. Cell. Biochem. 1991. V. 108. P. 85-94.

14. Eschenfeldt W.H., Manrow R.E., Krug M.S., Berger S.L. Isolation and partial sequencing of the human prothymosin alpha gene family. Evidence against export of the gene products.//J. Biol. Chem. 1989. V. 264. P. 7546-7555.

15. Manrow R.E., Berger S.L. GAG triplets as splice acceptors of last resort. An unusual form of alternative splicing in prothymosin alpha pre-mRNA. // J. Mol. Biol. 1993. V. 234. P. 281-288.

16. Aniello F., Branno M., De Rienzo G., Ferrara D., Palmiero C., Minucci S. First evidence of prothymosin alpha in a non-mammalian vertebrate and its involvement in the spermatogenesis of the frog Rana esculenta.// Mech. Dev. 2002. V. 110. P. 213-217.

17. Makarova T., Grebenshikov N., Egorov C., Vartapetian A., Bogdanov A. Prothymosin alpha is an evolutionary conserved protein covalently linked to a small RNA. // FEBS Lett. 1989. V. 257. P. 247-250.

18. Trumbore M.W., Manrow R.E., Berger S.L. Prothymosin alpha is not found in yeast. Protein Expr. Purif. 1998. V. 13. P. 383-388.

19. Gast K., Damaschun H., Eckert K., Schulze-Forster K., Maurer H.R., Muller-Frohne M., Zirwer D., Czarnecki J., Damaschun G. Prothymosin alpha: a biologically active protein with random coil conformation.//Biochemistry. 1995. V.34. P. 3211-3218.

20. Uversky V.N., Gillespie J.R., Fink A.L. Why are "natively unfolded" proteins unstructured under physiologic conditions? // Proteins. 2000. V. 41. P. 415-427.

21. Haritos A.A., Yialouris P.P., Heimer E.P., Felix A.M., Hannappel E., Rosemeyer MA. Evidence for the monomeric nature of thymosins. // FEBS Lett. 1989. V. 244. P. 287290.

22. Cordero O.J., Sarandeses C.S., Lopez JL., Nogueira M. On the anomalous behaviour on gel-filtration and SDS-electrophoresis of prothymosin-alpha. // Biochem. Int. 1992. V. 28. P. 1117-1124.

23. Uversky V.N. Natively unfolded proteins: a point where biology waits for physics. // Protein. Sci. 2002. V. 11. P. 739-756.

24. Uversky V.N. What does it mean to be natively unfolded? // Eur J Biochem. 2002. V. 269. P. 2-12.

25. Uversky V.N., Gillespie J.R., Millett I.S., Khodyakova A.V., Vasilenko R.N., Vasiliev A.M., Rodionov I.L., Kozlovskaya G.D., Dolgikh D.A., Fink A.L., Doniach S.,

26. Permyakov E.A., Abramov V.M. Zn(2+)-mediated structure formation and compaction of the "natively unfolded" human prothymosin alpha. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. V. 267. P. 663-668.

27. Pavlov N.A., Cherny D.I., Heim G., Jovin T.M., Subramaniam V. Amyloid fibrils from the mammalian protein prothymosin alpha. // FEBS Lett. 2002 . V. 517. P. 37-40.

28. Abiko T., Sekino H. Synthesis of an immunologically active fragment analog of prothymosin alpha with enhanced enzymatic stability.//Chem Pharm Bull (Tokyo). 1991. V. 39. P. 752-756.

29. Bachmair A, Finley D, Varshavsky A. In vivo half-life of a protein is a function of its amino-terminal residue. // Science. 1986. V. 234. p. 179-186.

30. Sburlati A.R., De La Rosa A., Batey D.W., Kurys G.L., Manrow R.E., Pannell L.K., Martin B.M., Sheeley D.M, Berger SL. Phosphorylation of human and bovine prothymosin alpha in vivo.// Biochemistry. 1993. V.32. P.4587-4596.

31. Wang R.H., Tao L., Trumbore M.W., Berger S.L. Turnover of the acyl phosphates of human and murine prothymosin alpha in vivo. // J. Biol. Chem. 1997. V.272. P. 2640526412.

32. Trumbore M.W., Wang R.H., Enkemann S.A., Berger S.L. Prothymosin alpha in vivo contains phosphorylated glutamic acid residues.//! Biol. Chem. 1997. V.272. P. 2639426404.

33. Tao L., Wang R.H., Enkemann S.A., Trumbore M.W., Berger S.L. Metabolic regulation of protein-bound glutamyl phosphates: insights into the function of prothymosin alpha. // J. Cell. Physiol. 1999. V. 178. P. 154-163.

34. Barcia M.G., Castro J.M., Jullien C.D., Gonzalez C.G., Freire M. Prothymosin alpha is phosphorylated by casein kinase-2 .// FEBS Lett. 1992. V. 312. P. 152-156.

35. Barcia M.G., Castro J.M., Jullien C.D., Freire M. Prothymosin alpha is phosphorylated in proliferating stimulated cells.// J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 4704-4708.

36. Perez-Estevez A., Diaz-Jullien C., Covelo G., Salgueiro M.T., Freire M. A 180-kDa protein kinase seems to be responsible for the phosphorylation of prothymosin alpha observed in proliferating cells. // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 10506-10513.

37. Perez-Estevez A., Freire J., Sarandeses C., Covelo G., Diaz-Jullien C., Freire M. Properties of the protein kinase that phosphorylates prothymosin alpha. // Mol. Cell Biochem. 2000. V. 208. P. 111-118.

38. Vartapetian A.B., Makarova T.N., Koonin E.V., Agol V.I., Bogdanov A.A. Small cytoplasmic RNA from mouse cells covalently linked to a protein. // FEBS Lett. 1988. V. 232. P. 35-38.

39. Vartapetian A., Lukashev D., Lyakhov I., Belyaeva A., Chichkova N., Bogdanov A. Mammalian prothymosin alpha links to tRNA in Escherichia coli cells. // RNA. 1997. V. 3.P. 1173-1181.

40. Lukashev D.E., Chichkova N.V., Vartapetian A.B. Multiple tRNA attachment sites in prothymosin alpha. // FEBS Lett. 1999. V. 451. P. 118-124.

41. Manrow R.E., Leone A., Krug M.S., Eschenfeldt W.H., Berger S.L. The human prothymosin alpha gene family contains several processed pseudogenes lacking deleterious lesions.// Genomics. 1992. V. 13. P. 319-331.

42. Rubtsov Yu.P., Vartapetian A.B. New intronless members of human prothymosin alpha genes. Mol Biol (Mosk). 1995. V. 29. P. 1320-1325.

43. Eilers M., Schirm S., Bishop J.M. The MYC protein activates transcription of the alpha-prothymosin gene.//EMBO J. 1991. V. 10. P. 133-141.

44. Vareli K., Frangou-Lazaridis M., Tsolas O. Prothymosin alpha mRNA levels vary with c-myc expression during tissue proliferation, viral infection and heat shock. // FEBS Lett. 1995. V. 371. P. 337-340

45. Davis A.C., Wims M., Spotts G.D., Hann S.R., Bradley A. A null c-myc mutation causes lethality before 10.5 days of gestation in homozygotes and reduced fertility in heterozygous female mice.// Genes Dev. 1993. V. 7. P. 671-682.

46. Kelly K., Cochran B.H., Stiles C.D., Leder P. Cell-specific regulation of the c-myc gene by lymphocyte mitogens and platelet-derived growth factor. // .Cell. 1983. V. 35. P. 603610.

47. Keath E.J., Caimi P.G., Cole M.D. Fibroblast lines expressing activated c-myc oncogenes are tumorigenic in nude mice and syngeneic animals. // Cell. 1984. V. 39. P. 339-348.

48. Landschulz W.H., Johnson P.F., McKnight S.L. The leucine zipper: a hypothetical structure common to a new class of DNA binding proteins. // Science. 1988. V. 240. P. 1759-1764.

49. Blackwood E.M., Eisenman R.N. Max: a helix-loop-helix zipper protein that forms a sequence-specific DNA-binding complex with Myc. // Science. 1991. V. 251. P. 12111217.

50. Blackwell T.K., Kretzner L., Blackwood E.M., Eisenman R.N., Weintraub H. Sequence-specific DNA binding by the c-Myc protein. // Science. 1990. V. 250. P. 1149-1151.

51. Kerkhoff E., Bister K., Klempnauer K.H. Sequence-specific DNA binding by Myc proteins. //Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1991. V. 88. P. 4323-4327.

52. Amin C., Wagner A.J., Hay N. Sequence-specific transcriptional activation by Myc and repression by Max. // Mol. Cell. Biol. 1993. V.13. P. 383-390.

53. Amati B., Dalton S., Brooks M.W., Littlewood T.D., Evan G.I., Land H. Transcriptional activation by the human c-Myc oncoprotein in yeast requires interaction with Max. // Nature. 1992. V. 359. P. 423-426.

54. Gaubatz S., Meichle A., Eilers M. An E-box element localized in the first intron mediates regulation of the prothymosin alpha gene by c-myc. // Mol. Cell. Biol. 1994. V. 14. P. 3853-3862.

55. Tavtigian S.V., Zabludoff S.D., Wold B.J. Cloning of mid-Gl serum response genes and identification of a subject regulated by conditional myc expression.// Mol. Biol. Cell. 1994. V. .P. 375-388.

56. Mol P.C., Wang R.H., Batey D.W., Lee L.A., Dang C.V., Berger S.L. Do products of the myc proto-oncogene play a role in transcriptional regulation of the prothymosin alpha gene? // Mol Cell Biol. 1995. V. 15. P.6999-7009.

57. Desbarats L., Gaubatz S., Eilers M. Discrimination between different E-box-binding proteins at an endogenous target gene of c-myc. // Genes Dev. 1996. V. 10. P. 447-460.

58. Gaubatz S., Imhof A., Dosch R., Werner O., Mitcel P., Buettner R., Eilers M. Transcriptional activation by Myc is under negative control by the transcription factor AP-2. //EMBOJ. 1995. V. 14. P. 1508-1519.

59. Wagner A.J., Meyers C., Laimins L.A., Hay N. c-Myc induces the expression and activity of ornithine decarboxylase. // Cell Growth Differ. 1993. V. 4. P. 879-883.

60. Vareli K., Tsolas O., Frangou-Lazaridis M. Regulation of prothymosin alpha during the cell cycle.// Eur J Biochem. 1996. V. 238. P. 799-806.

61. Nevins J.R. E2F: a link between the Rb tumor suppressor protein and viral oncoproteins. // Science. 1992. V. 258. P. 424-429.

62. Attwooll C., Lazzerini Denchi E., Helin K. The E2F family: specific functions and overlapping interests. // EMBO J. 2004. V. 23. P. 4709-4716.

63. Gamier M., Di Lorenzo D., Albertini A., Maggi A. Identification of estrogen-responsive genes in neuroblastoma SK-ER3 cells. // J Neurosci. 1997. V. 17. P. 4591-4599.

64. Martini P.G., Katzenellenbogen B.S. Modulation of estrogen receptor activity by selective coregulators.// J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2003. V. 85. P. 117-122.

65. Zhao R., Gish K., Murphy M., Yin Y., Notterman D., Hoffman W.H., Tom E., Mack D.H., Levine A.J. Analysis of p53-regulated gene expression patterns using oligonucleotide arrays.//Genes Dev. 2000. V. 14. P. 981-993.

66. Копнин Б.П. Молекулярные механизмы канцерогенеза. «Энциклопедия клинической онкологии» под ред. М.М.Давыдова, Изд. РЛС, Москва, 2004, с. 3453.

67. Johnson R.A., Ince Т.А., Scotto K.W. Transcriptional repression by p53 through direct binding to a novel DNA element. // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 27716-27720.

68. Касаикина M.B. Исследование возможности применения протимозина альфа в качестве прогностического маркера при онкологических заболеваниях. Дипломная работа. Химический факультет МГУ. Москва 2005. с. 53, 92-93.

69. Kinoshita Т., Shirasawa Н., Shino Y., Moriya Н., Desbarats L., Eilers M., Simizu В. Transactivation of prothymosin alpha and c-myc promoters by human papillomavirus type 16 E6 protein. //Virology. 1997. V. 232. P. 53-61.

70. Scheffner M„ Wemess B.A., Huibregtse J.M., Levine A.J., Howley P.M. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53. // Cell. 1990. V. 63. p. 1129-1136.

71. Tsitsiloni O.E., Yialouris P.P., Sekeri-Pataryas K., Haritos A.A. Prothymosin alpha is not a nuclear polypeptide .// Experientia. 1989. V. 45. P. 332-334.

72. Gomez-Marquez J., Segade F. Prothymosin alpha is a nuclear protein. // FEBS Lett. 1988. V. 226. P. 217-19.

73. Watts J.D., Cary P.D., Crane-Robinson C. Prothymosin alpha is a nuclear protein. // FEBS Lett. 1989. V. 245. P. 17-20.

74. Watts J.D., Cary P.D., Sautiere P., Crane-Robinson C. Thymosins: both nuclear and cytoplasmic proteins. //Eur. J. Biochem. 1990. V. 192. P. 643-651.

75. Robbins J., Dilworth S.M., Laskey R.A., Dingwall C. Two interdependent basic domains in nucleoplasmin nuclear targeting sequence: identification of a class of bipartite nuclear targeting sequence. //Cell. 1991. V. 64. P. 615-623.

76. Palvimo J., Linnala-Kankkunen A. Identification of a low-Mr acidic nuclear protein as prothymosin alpha. //FEBS Lett. 1990. V. 277. P. 257-260.

77. Clinton M., Graeve L., el-Dorry H., Rodriguez-Boulan E., Horecker B.L. Evidence for nuclear targeting of prothymosin and parathymosin synthesized in situ. // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1991. V. 88. P. 6608-6612.

78. Manrow R.E., Sburlati A.R., Hanover J.A., Berger S.L. Nuclear targeting of prothymosin alpha. // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 3916-3924.

79. Nigg E.A. Nucleocytoplasmic transport: signals, mechanisms and regulation. //Nature. 1997. V.386. P. 779-787.

80. Enkemann S.A., Ward R.D., Berger S.L. Mobility within the nucleus and neighboring cytosol is a key feature of prothymosin-alpha. // J Histochem. Cytochem. 2000. V. 48. P. 1341-1355.

81. Castro J.M., Barcia M.G. Localization of prothymosin alpha in the nucleus. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V. 224. P. 140-146.

82. Gallego R., Roson E., Garcia-Caballero T., Fraga M., Forteza J., Dominguez F. Beiras A. Prothymosin alpha expression in lymph nodes and tonsils: an optical and ultrastructural study. // Acta. Anat. (Basel). 1992. V.143. P. 219-222.

83. Wang J., Shiels C., Sasieni P., Wu P.J., Islam S.A., Freemont P.S., Sheer D. Promyelocytic leukemia nuclear bodies associate with transcriptionally active genomic regions. //J. Cell. Biol. 2004. V. 164. P. 515-526.

84. Clinton M., Frangou-Lazaridis M., Panneerselvam C., Horecker B.L. Prothymosin alpha and parathymosin: mRNA and polypeptide levels in rodent tissues. // Arch. Biochem. Biophys. 1989. V. 269. P.256-263.

85. Frillingos S., Tsolas 0. Age- and sex-related differences in the content of prothymosin alpha in rat tissues. // Experientia. 1992. V. 48. P. 236-239.

86. Roson E., Garcia-Caballero G., Heimer E.P., Felix A.M., Dominguez F. Cellular distribution of prothymosin alpha and parathymosin in rat thymus and spleen. // J. Histochem. Cytochem. 1990. V. 38. P. 1889-1894.

87. Roson E., Gallego R., Garcia-Caballero T., Heimer E.P., Felix A.M., Dominguez F. Prothymosin alpha expression is associated to cell division in rat testis. // Histochemistry. 1990. V. 94. P. 597-599.

88. Garcia-Caballero T., Dominguez F., Roson E., Gallego R., Zalvide J., Forteza J., Beiras A. Distribution of prothymosin alpha in rat and human adrenal cortex. // Anat. Rec. 1994. V. 239. P. 88-94.

89. Gomez-Marquez J., Segade F., Dosil M., Pichel J.G., Bustelo X.R., Freire M. The expression of prothymosin alpha gene in T lymphocytes and leukemic lymphoid cells is tied to lymphocyte proliferation. // J. Biol. Chem. 1989. V. 264. P. 8451-8454.

90. Dosil M., Freire M., Gomez-Marquez J. Tissue-specific and differential expression of prothymosin alpha gene during rat development. // FEBS Lett. 1990. V. 269. P. 373-376.

91. Bustelo X.R., Otero A., Gomez-Marquez J., Freire M. Expression of the rat prothymosin alpha during T-Lymphocyte proliferation and liver regeneration. // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 1443-1447.

92. Mori M., Barnard G.F., Staniunas R.J., Jessup J.M., Steele G.D.Jr., Chen L.B. Prothymosin alpha mRNA expression correlates with that of c-myc in human colon cancer.// Oncogene. 1993. V.8. P. 2821-2826.

93. Magdalena C., Dominguez F., Loidi L., Puente J.L. Tumour prothymosin alpha content, a potential prognostic marker for primary breast cancer. //.Br. J. Cancer. 2000. V. 82. P. 584-590.

94. Mitani M., Kuwabara Y., Kawamura H., Sato A., Hattori K., Fujii Y. Significance of plasma thymosin alphal measurements in gastric cancer patients. // World J. Surg. //2000. V. 24. P. 455-458.

95. Wu C.G., Habib N.A., Mitry R.R., Reitsma P.H., van Deventer S.J., Chamuleau R.A. Overexpression of hepatic prothymosin alpha, a novel marker for human hepatocellular carcinoma. // Br. J. Cancer. 1997. V. 76. P. 1199-1204.

96. Sasaki H., Nonaka M., Fujii Y., Yamakawa Y., Fukai I., Kiriyama M., Sasaki M. Expression of the Prothymosin a as a Prognostic Factor in Lung Cancer // Surg. Today.2001. V. 31. P. 936-938.

97. Szabo P., Ehleiter D., Whittington E., Weksler M.E. Prothymosin alpha expression occurs during G1 in proliferating B or T lymphocytes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. v. 185. P. 953-959.

98. Zalvide J.B., Cancio E., Alvarez C.V., Regueiro B.J., Dominguez F. Prothymosin alpha mRNA levels are invariant throughout the cell cycle. // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 8692-8695.

99. Dean M., Levine R.A., Campisi J. c-myc regulation during retinoic acid-induced differentiation of F9 cells is posttranscriptional and associated with growth arrest. // Mol. Cell Biol. 1986. V. 6. P. 518-524.

100. Dosil M., Alvarez-Fernandez L., Gomez-Marquez J. Differentiation-linked expression of prothymosin alpha gene in human myeloid leukemic cells. // Exp. Cell Res. 1993. V. 204. P. 94-101.

101. Smith M.R., al-Katib A., Mohammad R., Silverman A., Szabo P., Khilnani S., Kohler W., Nath R., Mutchnick M.G. Prothymosin alpha gene expression correlates with proliferation, not differentiation, of HL-60 cells. // Blood. 1993. V. 82. P. 1127-1132.

102. Sburlati A.R., Manrow R.E., Berger S.L. Prothymosin alpha antisense oligomers inhibit myeloma cell division. // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1991. V. 88. P. 253-257.

103. Rodriguez P., Vinuela J.E., Alvarez-Fernandez L., Gomez-Marquez J. Prothymosin alpha antisense oligonucleotides induce apoptosis in HL-60 cells. // Cell Death Differ. 1999.V. 6. P.3-5.

104. Rodriguez P., Vinuela J.E., Alvarez-Fernandez L., Buceta M., Vidal A., Domínguez F., Gomez-Marquez J. Overcxpression of prothymosin alpha accelerates proliferation and retards differentiation in HL-60 cells. // Biochem. J. 1998. V. 331. P. 753-761.

105. Thoma F., Koller T., Klug A. Involvement of histone HI in the organization of the nucleosome and of the salt-dependent superstructures of chromatin. // J. Cell. Biol. 1979. V. 83. P. 403-427.

106. Lemon B., Tjian R. Orchestrated response: a symphony of transcription factors for gene control. // Genes. Dev. 2000. V. 14. P. 2551-2569.

107. Zlatanova J., Caiafa P., Van Holde K. Linker histone binding and displacement: versatile mechanism for transcriptional regulation. // FASEB J. 2000. V. 14. P. 16971704.

108. Hill D.A., Imbalzano A.N. Human SWI/SNF nucleosome remodeling activity is partially inhibited by linker histone HI. // Biochemistry. 2000. V. 39. P. 11649-11656.

109. Papamarcaki T., Tsolas O. Prothymosin alpha binds to histone HI in vitro. // FEBS Lett. 1994. V. 345. P. 71-75.

110. Diaz-Jullien C., Perez-Estevez A., Covelo G., Freire M. Prothymosin alpha binds histones in vitro and shows activity in nucleosome assembly assay. // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1296. P. 219-227.

111. Fields S., Song O. A novel genetic system to detect protein-protein interactions. // Nature. 1989. V. 340. P. 245-247.

112. Chien C.T., Bartel P.L., Sterglautz R., Fields S. The two-hybrid system: a method to identify and clone genes for proteins that interact with a protein of interest. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 88. P. 9578-9582.

113. Finley J.R., Brent R. In: Interaction trap cloning with yeast. 1995. Hames, Glover, eds Oxford Univ. Press. P. 169-203.

114. Keegan L., Gill G., Ptashne M. Separation of DNA binding from the transcriptionactivating function of a eukaryotic regulatory protein. // Science. 1986. V. 231. P. 699.

115. Hope I. A., Struhl K. Functional dissection of a eukaryotic transcriptional activatorprotein, GCN4 of yeast. // Cell. 1986. V. 46. P. 885.

116. Brent R., Ptashne M. A eukaryotic transcriptional activator bearing the DNAspecificity of a prokaryotic repressor. // Cell. 1985. V. 43. P. 729.

117. Fields S., Sternglanz R. The two-hybrid system: an assay for protein-proteininteractions. // Trends Genet. 1994. V. 10. P. 286-292.

118. Ma J., Ptashne M. A new class of yeast transcriptional activators. // Cell. 1987. V. 51. P.113-119.

119. Sadowski I., Ma J., Triezenberg S., Ptashne M. GAL4-VP16 is an unusually potent transcriptional activator. // Nature. 1988. V. 335. P. 563.

120. Chasman D.I., Leatherwood J., Carey M., Ptashne M., Kornberg R.D. Activation of yeast polymerase II transcription by herpesvirus VP 16 and GAL4 derivatives in vitro. // Mol. Cell. Biol. 1989. V. 9. P. 4776-4779.

121. ProQuest two-hybrid system. Instruction manual. GIBCO BRL Products.

122. Yocum R.R., Hanley S., West R.J., Ptashne M. Use of lacZ fusions to delimit regulatory elements of the inducible divergent GAL 1-GAL 10 promoter in Saccharomyces cerevisiae. Il Mol. Cell Biol. 1984. V. 4. P. 1985-1998.

123. Guarente L., Ptashne M. Fusion of Escherichia coli lacZ to the cytochrome c gene of Saccharomyces cerevisiae. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V. 78. P. 2199-2203.

124. Finley Jr.R.L., Brent R. Interaction mating reveals binary and ternary connections between Drosophila cell cycle regulators. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. V. 91. P. 12980-12984.

125. Yeast protocols handbook, CLONTECH laboratories.

126. Finkel T. Detection and modulation in vivo of helix-loop-helix protein-protein interactions. // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 5-8.

127. Beranger F., Aresta S., Jean de Gunzburg, Camonis J. Getting more from the two-hybrid system: N-terminal fusions to LexA are efficient and sensitive baits for two-hybrid studies. // Nucl. Acids Res. 1997. V. 25. P. 2035-2036.

128. Osborne M.A., Stephen D., Kochan J.P. The yeast tribrid system genetic detection of trans-phosphorylated ITAM-SH2-interactions. //Biotechnology. 1995. V. 13.

129. Hengen P.N. False positives from the yeast two-hybrid system. // Trends Biol. Sci. 1997. V. 22. P. 33-34.

130. James P., Halladay J., Craig E.A. Genomic libraries and a host strain designed for highly efficient two-hybrid selection in yeast. // Genetics. 1996. V. 144. P. 1425-1436.

131. Leanna C.A., Hannink M. The reverse two-hybrid system: a genetic scheme for selection against specific protein/protein interactions. // Nucl. Acids Res. 1996. V. 24. P. 3341-3347.

132. Vidal M., Brachmann R.K., Fattaey A., Harlow E., Boeke J.D. Reverse two-hybrid and one-hybrid systems to detect dissociation of protein-protein and DNA-protein interactions. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93. P. 10315-10320.

133. Serebriiskii I., Khazak V., Golemis E.A. A two-hybrid dual bait system to discriminate specifity of protein interactions. //J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 17080-17087.

134. Aroncheim A., Zandi E., Hennemann H., Elledge S.J., Karin M. Isolation of an AP-1 repressor by a novel method for detecting protein-protein interactions. // Mol. Cell. Biol., 1997. V.17. P. 3094-3102.

135. Zhang J., Lautar S. A yeast three-hybrid method to clone ternary protein complex components. // Analytical Biochem. 1996. V. 242. P. 68-72.

136. Ozenberger B.A., Young K.H. Functional interaction of ligands and receptors of the hematopoietic superfamily in yeast. // Mol. Endocrin. 1995. V. 9. P. 1321-1329.

137. Putz U., Skehel P., Kuhl D. A tri-hybrid system for the analisys and detection of RNA-protein interactions. //Nucleic Acids Res. 1996. V. 24. P. 4838-4040.

138. Gamier M., Di Lorenzo D., Albertini A., Maggi A. Identification of estrogen-responsive genes in neuroblastoma SK-ER3 cells. // J. Neurosci. 1997. V. 17. P. 45914599.

139. Cotter M.A, Robertson E.S. Modulation of histone acetyltransferase activity through interaction of epstein-barr nuclear antigen 3C with prothymosin alpha. // Mol. Cell. Biol. 2000. V. 20. P. 5722-5735.

140. Канцерогенез. Под ред. Заридзе Д.Г. Москва. Научный мир. 2000. С. 193-200.

141. Karetsou Z., Kretsovali A., Murphy C., Tsolas 0., Papamarcaki T. Prothymosin alpha interacts with the CREB-binding protein and potentiates transcription. // EMBO Rep.2002. V.3. p. 361-366.

142. Goodman R.H., Smolik S. CBP/p300 in cell growth, transformation, and development. //Genes. Dev. 2000. V. 14. P. 1553-1577

143. Hartzog G.A., Winston F. Nucleosomes and transcription: recent lessons from genetics. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1997. V. 7. P. 192-198.

144. Freedman S.J., Sun Z.Y., Poy F., Kung A.L., Livingston D.M., Wagner G., Eck M.J. Structural basis for recruitment of CBP/p300 by hypoxia-inducible factor-1 alpha. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V. 99. P. 5367-5372.

145. Knight J.S., Lan K., Subramanian C., Robertson E.S. Epstein-Barr virus nuclear antigen 3C recruits histone deacetylase activity and associates with the corepressors mSin3A and NCoR in human B-cell lines. // J. Virol. 2003. V. 77. P. 4261-4272.

146. Yang C.H., Murti A., Pfeffer L.M. STAT3 complements defects in an interferon-resistant cell line: evidence for an essential role for STAT3 in interferon signaling and biological activities. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V. 95. P. 5568-5572.

147. Vinkemeier U. Getting the message across, STAT! Design principles of a molecular signaling circuit. // J. Cell. Biol. 2004. V. 167. P. 197-201.

148. Ma J., Zhang T., Novotny-Diermayr V., Tan A.L., Cao X. A novel sequence in the coiled-coil domain of Stat3 essential for its nuclear translocation. // J. Biol. Chem.2003. V. 278. P. 29252-29260.

149. Seo S.B., McNamara P., Heo S., Turner A., Lane W.S., Chakravarti D. Regulation of histone acetylation and transcription by INHAT, a human cellular complex containing the set oncoprotein. // Cell. 2001. V. 104. P. 119-130.

150. Kubota S., Adachi Y., Copeland T.D., Oroszlan S. Binding of human prothymosin alpha to the leucine-motif/activation domains of HTLV-I Rex and HIV-1 Rev. // Eur. J. Biochem. 1995. V. 233. P. 48-54.

151. Chichkova N.V., Evstafieva A.G., Lyakhov I.G., Tsvetkov A.S., Smirnova T.A., Karapetian R.N., Karger E.M., Vartapetian A.B. Divalent metal cation binding properties of human prothymosin alpha. // Eur. J. Biochem. 2000. V. 267. P. 47454752.

152. Freire J., Covelo G., Sarandeses C., Diaz-Jullien C., Freire M. Identification of nuclear-import and cell-cycle regulatory proteins that bind to prothymosin alpha. // Biochem. Cell. Biol. 2001. V. 79. P. 123-131.

153. Gururaja T.L., Li W., Payan D.G., Anderson D.C. Utility of peptide-protein affinity complexes in proteomics: identification of interaction partners of a tumor suppressor peptide. // J Pept. Res. 2003. V. 61. P. 163-176.

154. Malicet C., Giroux V., Vasseur S., Dagorn J.C., Neira J.L., Iovanna J.L Regulation of apoptosis by the p8/prothymosin alpha complex. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V. 103. P.2671-2676.

155. Malicet C., Dagorn J.C., Neira J.L., Iovanna J.L. p8 and prothymosin alpha: unity is strength. // Cell Cycle. 2006. V. 5. P. 829-30.

156. Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. // Nature. 1998. V. 391. P. 806-811.

157. Tabara H., Sarkissian M., Kelly W.G., Fleenor J., Grishok A., Timmons L., Fire A., Mello C.C. The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans. // Cell. 1999. V. 99. P. 123-132.

158. Bertrand J.R., Pottier M., Vekris A., Opolon P., Maksimenko A., Malvy C. Comparison of antisense oligonucleotides and siRNAs in cell culture and in vivo. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V. 296. P. 1000-1004.

159. Miyagishi M., Hayashi M., Taira K. Comparison of the suppressive effects of antisense oligonucleotides and siRNAs directed against the same targets in mammalian cells. // Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 2003. V. 13. P. 1-7.

160. Vickers T.A., Koo S., Bennett C.F., Crooke S.T., Dean N.M., Baker B.F. Efficient reduction of target RNAs by small interfering RNA and RNase H-dependent antisense agents. A comparative analysis. //J. Biol. Chem. 2003. V. 278. P. 7108-7118.

161. Volpe T.A., Kidner C., Hall I.M., Teng G., Grewal S.I., and Martienssen R.A. Regulation of heterochromatie silencing and histone H3 lysine-9 methylation by RNAi. // Science. 2002. V. 297. P. 1833-1837.

162. Chan S.W., Zilberman D., Xie Z., Johansen L.K., Carrington J.C. RNA silencing genes control de novo DNA methylation. // Science. 2004. V. 303. P. 1336.

163. Verdel A., Jia S., Gerber S., Sugiyama T., Gygi S„ Grewal S.I., Moazed D. RNAi-Mediated Targeting of Heterochromatin by the RITS Complex. // Science. 2004. V. 303. P. 672-678.

164. Bartel D.P. MicroRNAs: genomics, biogenesis mechanism, and function. // Cell. 2004. V. 116. P. 281-297.

165. Bernstein E., Caudy A.A., Hammond S.M., Hannon G.J. Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference. // Nature. 2001. V. 409. P. 363-366.

166. Knight S.W., Bass B. L. A role for the RNase III enzyme DCR-1 in RNA interference and germ line development in Caenorhabditis elegans. // Science. 2001. V. 293. P. 2269-2271.

167. Lee Y.S., Nakahara K., Pham J.W., Kim K., He Z., Sontheimer E.J., Carthew R.W. Distinct roles for Drosophila Dicer-1 and Dicer-2 in the siRNA/miRNA silencing pathways. // Cell. 2004. V. 117. P. 69-81.

168. Kolb F.A., Zhang H., Jaronczyk K., Tahbaz N., Hobman T.C., Filipowicz W. Human Dicer: Purification, Properties, and Interaction with PAZ PIWI Domain Proteins. // Methods Enzymol. 2005. V. 392. P. 316-336.

169. Myers J.W., Jones J.T., Meyer T., Ferrell J.E. Recombinant Dicer efficiently converts large dsRNAs into siRNAs suitable for gene silencing. //Nat. Biotechnol. 2003. V. 21. P. 324-328.

170. Zamore P.D., Tuschl T., Sharp P.A., Bartel D.P. RNAi: double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. // Cell. 2000. V. 101. P. 25-33.

171. Elbashir S.M., Lendeckel W., Tuschl T. RNA interference is mediated by 21 and 22 nt RNAs. // Genes Dev. 2001. V. 15. P. 188-200.

172. Hammond S.M., Bernstein E., Beach D., Hannon G.J. An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. // Nature. 2000. V. 404. P. 293 296.

173. Hammond S.M., Boettcher S., Caudy A.A., Kobayashi R., Hannon G.J. Argonaute 2, a link between genetic and biochemical analyses of RNAi. // Science. 2001. V. 293. P. 1146-1150.

174. Caudy A.A., Hannon G.J. Induction and biochemical purification of RNA-induced silencing complex from Drosophila S2 cells. // Methods Mol. Biol. 2004. V. 265. P. 5972.

175. Schwarz D.S, Hutvagner G., Du T., Xu Z., Aronin N., Zamore P.D. Asymmetry in the assembly of the RNAi enzyme complex. // Cell. 2003. V.l 15. P. 199-208

176. Khvorova A., Reynolds A., Jayasena S.D. Functional siRNAs and miRNAs exhibit strand bias. // Cell. 2003. V.l 15. P. 209-216.

177. Elbashir S.M., Martinez J., Patkaniowska A., Lendeckel W., Tuschl T. Functional anatomy of siRNAs for mediating efficient RNAi in Drosophila melanogaster embryo lysate. // EMBO J. 2001. V. 20. P. 6877-6888.

178. Rand T.A., Ginalski K., Grishin N.V., Wang X. Biochemical identification of Argonaute 2 as the sole protein required for RNA-induced silencing complex activity. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. V. 101. P. 14385-14389.

179. Rivas F.V., Tolia N.H., Song J.J., Aragon J.P., Liu J., Hannon G.J., Joshua-Tor L. Purified Argonaute2 and an siRNA form recombinant human RISC. // Nat. Struct. Mol. Biol. 2005. V.12.P. 340-349.

180. Rand T.A., Petersen S., Du F., Wang X. Argonaute2 cleaves the anti-guide strand of siRNA during RISC activation. // Cell. 2005. V. 123. P. 621-629.

181. Grishok A., Tabara H., Mello C.C. Genetic requirements for inheritance of RNAi in C. elegans. // Science. 2000. V. 287. P. 2494-2497.

182. Winston N. Systemic RNAi in C. elegans requires the putative transmembrane protein SID-1. // Science. 2002. V. 295. P. 2456-2459.

183. Cogoni C., Macino G. Gene silencing in Neurospora crassa requires a protein homologous to RNA-dependent RNA polymerase. //Nature. 1999. V. 99. P. 166-169.

184. Dalmay T., Hamilton A., Rudd S., Angell S., Baulcombe D.C. An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. // Cell. 2000. V. 101. P. 543-553.

185. Smardon A., Spoerke J.M., Stacey S.C., Klein M.E., Mackin N., Maine E.M. EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in C. elegans. // Curr. Biol. 2000. V. 10. P. 169-178.

186. Schwarz D.S., Hutvagner G., Haley B. Evidence that siRNAs function as guides, not primers, in the Drosophila and human RNAi pathways. // Mol. Cell. 2002. V. 10. P. 537-548.

187. Stein P., Svoboda P., Anger M., Schultz R.M. RNAi: mammalian oocytes do it without RNA-dependent RNA polymerase. // RNA. 2003. V. 9. P. 187-192.

188. Samuel C.E. Antiviral actions of interferon. Interferon-regulated cellular proteins and their surprisingly selective antiviral activities. // Virology. 1991. V. 183. P. 1-11.

189. Staeheli P. Interferon-induced proteins and the antiviral state. // Adv. Virus Res. 1990. V. 38. P. 147-200.

190. Thomis D.C., Samuel C.E. Mechanism of interferon action: evidence for intermolecular autophosphorylation and autoactivation of the interferon-induced, RNA-dependent protein kinase PKR. // J Virol. 1993. V. 67, P. 7695-7700.

191. Samuel C.E. (1993) The eIF-2 alpha protein kinases, regulators of translation in eukaryotes from yeasts to humans. J. Biol. Chem., 268, 7603-7606.

192. Minks M.A., West D.K., Benvin S., Baglioni C. (1979) Structural requirements of double-stranded RNA for the activation of 2,5-oligo(A) polymerase and protein kinase of interferon-treated HeLa cells. J. Biol. Chem., 254,10180-10183.

193. Manche L., Green S.R., Schmedt C., Mathews M.B. (1992) Interactions between double-stranded RNA regulators and the protein kinase DAI. Mol. Cell Biol., 12, 52385248.

194. Caplen N.J., Parrish S., Imani F., Fire A., Morgan R.A. (2001) Specific inhibition of gene expression by small double-stranded RNAs in invertebrate and vertebrate systems. Proc. Natl. Acad. Sci., 98, 9742-9747.

195. Elbashir S.M., Harborth J., Lendeckel W, Yalcin A., Weber K„ Tuschl T. (2001b) Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature, 411, 494-498.

196. Persengiev S.P., Zhu X., Green M.R. (2004) Nonspecific, concentration-dependent stimulation and repression of mammalian gene expression by small interfering RNAs (siRNAs). RNA, 10, 12-18.

197. Sledz C.A., Holko M., Veer M.J., Silverman R.H., Williams B.R. (2003) Activation of the interferon system by short-interfering RNAs. Nat. Cell Biol., 5, 834-839.

198. Bridge A.J., Pebernard S., Ducraux A., Nicoulaz A.L., Iggo R. (2003) Induction of an interferon response by RNAi vectors in mammalian cells. Nat. Genet., 34, 263-264.

199. Semizarov D., Frost L., Sarthy A., Kroeger P., Halbert D.N., Fesik S.W. (2003) Specificity of short interfering RNA determined through gene expression signatures. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 100, 6347-6352.

200. Chiu Y.L., Rana T.M. (2002) siRNA function in RNAi: a chemical modification analysis. RNA, 9,1034-1048.

201. Elbashir S.M., Harborth J., Weber K., Tuschl T. (2002) Analysis of gene function in somatic mammalian cells using small interfering RNAs. Methods, 26,199-213.

202. Donze O., Picard D. (2002) RNA interference in mammalian cells using siRNAs synthesized with T7 RNA polymerase Nucleic Acids Res., 30, 46.

203. Yu J.Y., DeRuiter S.L., Turner D.L. (2002) RNA interference by expression of short-interfering RNAs and hairpin RNAs in mammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 99, 6047-6052.

204. Brummelkamp T.R., Bernards R., Agami R. (2002) A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells. Science, 296, 550- 553.

205. Paul C.P., Good P.D., Winer I., Engelke D.R. (2002) Effective expression of small interfering RNA in human cells. Nat. Biotechnol., 205,505-508.

206. Baer M., Nilsen T.W., Costigan C., Altman S. (1990) Structure and transcription of a human gene for HI RNA, the RNA component of human RNase P. Nucleic Acids Res., 18,97-103.

207. Brow D.A., Guthrie C. (1990) Transcription of a yeast U6 snRNA gene requires a polymerase III promoter element in a novel position. Genes Dev., 4, 1345-1356.

208. Kawasaki H., Taira K. (2003) Short hairpin type of dsRNAs that are controlled by tRNA(Val) promoter significantly induce RNAi-mediated gene silencing in the cytoplasm of human cells. Nucleic Acids Res., 31, 700-707.

209. Boden D., Pusch O., Lee F., Tucker L., Shank P.R., Ramratnam B. (2003) Promoter choice affects the potency of HIV-1 specific RNA interference. Nucleic Acids Res., 31, 5033-5038.

210. Liu CM, Liu DP, Dong WJ, Liang CC. Retrovirus vector-mediated stable gene silencing in human cell. // Biochem Biophys Res Commun. 2004 Jan 16;313(3):716-20

211. Negre D, Cosset FL Vectors derived from simian immunodeficiency virus (SIV). Biochimie. 2002 Nov;84(l 1):1161-71.

212. An DS, Xie Y, Mao SH, Morizono K, Kung SK, Chen IS. Efficient lentiviral vectors for short hairpin RNA delivery into human cells. // Hum Gene Ther. 2003 Aug 10;14(12):1207-12.

213. Nishitsuji H, Ikeda T, Miyoshi H, Ohashi T, Kannagi M, Masuda T Expression of small hairpin RNA by lentivirus-based vector confers efficient and stable gene-suppression of HIV-1 on human cells including primary non-dividing cells.

214. Microbes Infect. 2004 Jan;6(l):76-85.

215. Gupta S, Schoer RA, Egan JE, Hannon GJ, Mittal V. Inducible, reversible, and stable RNA interference in mammalian cells. // Proc Natl Acad Sci USA. 2004 Feb17;101 (7): 1927-32.

216. Amar L, Desclaux M, Faucon-Biguet N, Mallet J, Vogel R. Control of small inhibitory RNA levels and RNA interference by doxycycline induced activation of a minimal RNA polymerase III promoter. // Nucleic Acids Res. 2006 Mar 6;34(5):e37.

217. Ventura A, Meissner A, Dillon CP, McManus M, Sharp PA, Van Parijs L, Jaenisch R, Jacks T. Cre-lox-regulated conditional RNA interference from transgenes.

218. Proc Natl Acad Sci USA. 2004 Jul 13;101(28): 10380-5.

219. Evstafieva A.G., Belov G.A., Kalkum M., Chichkova N.V., Bogdanov A.A., Agol V.I., Vartapetian A.B. Prothymosin alpha fragmentation in apoptosis. // FEBS Lett. 2000. V. 467. P. 150-154.

220. Enkemann S.A., Wang R.H., Trumbore M.W., Berger S.L. Functional discontinuities in prothymosin alpha caused by caspase cleavage in apoptotic cells. // J. Cell. Physiol. 2000. V. 182. P. 256-268.

221. Jiang X., Kim H.E., Shu H., Zhao Y., Zhang H., Kofron J., Donnelly J., Burns D., Ng SC, Rosenberg S., Wang X. Distinctive roles of PHAP proteins and prothymosin-alpha in a death regulatory pathway. // Science. 2003. V. 299. P. 223-226.

222. Nicholson D.W., Thornberry N.A. Apoptosis. Life and death decisions. // Science. 2003. V. 299. P. 214-215.

223. Zou H., Henzel W.J., Liu X., Lutschg A., Wang X. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3. //Cell. 1997. V. 90. P. 405-413.

224. Li P., Nijhawan D., Budihardjo I., Srinivasula S.M., Ahmad M., Alnemri E.S., Wang X. Cytochrome c and dATP-dependent formation of Apaf-1/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade. // Cell. 1997. V. 91. P. 479-489.

225. Acehan D., Jiang X., Morgan D.G., Heuser J.E., Wang X., Akey C.W. Three-dimensional structure of the apoptosome: implications for assembly, procaspase-9 binding, and activation. // Mol. Cell. 2002. V. 9. P. 423-432.

226. Chakravarti D., Hong R. SET-ting the stage for life and death. // Cell. 2003. V. 112. P. 589-591.

227. Fan Z., Beresford P.J., Oh D.Y., Zhang D., Lieberman J. Tumor suppressor NM23-HI is a granzyme A-activated DNase during CTL-mediatcd apoptosis, and the nucleosome assembly protein SET is its inhibitor. // Cell. 2003. V. 112. P. 659-672.

228. Seo S.B., McNamara P., Heo S., Turner A., Lane W.S., Chakravarti D. Regulation of histone acetylation and transcription by INHAT, a human cellular complex containing the set oncoprotein. // Cell. 2001. V. 104. P. 119-130.

229. Letsas K.P, Frangou-Lazaridis M. Surfing on prothymosin alpha proliferation and anti-apoptotic properties. //Neoplasma. 2006. V. 53. P.92-96.

230. Letsas K.P., Frangou-Lazaridis M., Skyrlas A., Tsatsoulis A., Malamou-Mitsi V. Transcription factor-mediated proliferation and apoptosis in benign and malignant thyroid lesions. // Pathol. Int. 2005. V. 55. P. 694-702.

231. Kluck RM, Bossy-Wetzel E, Green DR, Newmeyer DD. The release of cytochrome c from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis. // Science. 1997. V. 275. P.1132-1136.

232. Lai A., Kawai T., Yang X., Mazan-Mamczarz K., Gorospe M. Antiapoptotic function of RNA-binding protein HuR effected through prothymosin alpha. // EMBO J. 2005. V. 24. P.1852-1862.

233. Piacentini M., Evangelisti C., Mastroberardino P.G., Nardacci R., Kroemer G. Does prothymosin-alpha act as molecular switch between apoptosis and autophagy? // Cell Death Differ. 2003. V. 10. P. 937-939.

234. Iannicola C., Moreno S., Oliverio S., Nardacci R., Ciofi-Luzzatto A., Piacentini M. Early alterations in gene expression and cell morphology in a mouse model of Huntington's disease. // J Neurochem. 2000. V. 75. P. 830-839.

235. Orre R.S., Cotter M.A., Subramanian C., Robertson E.S. Prothymosin alpha functions as a cellular oncoprotein by inducing transformation of rodent fibroblasts in vitro.// J. Biol. Chem. 2000, V. 17. P. 1794-1799.

236. Sasaki II., Sato Y., Kondo S., Fukai I., Kiriyama M., Yamakawa Y., Fujii Y. Expression of the prothymosin alpha mRNA correlated with that of N-myc in neuroblastoma. // Cancer Lett. 2001. V. 168. P. 191-195.

237. Li K.J, Shiau A.L, Chiou Y.Y, Yo Y.T, Wu C.L. Prothymosin a overexpression induces polycystic kidney disease. // Kidney Int. 2005. V. 67. P. 1710-1722.

238. Allison S.J., Milner J. Remodelling chromatin on a global scale: a novel protective function of p53. // Carcinogenesis. 2004. V. 25. P. 1551-15577.

239. Roninson I.B. Oncogenic functions of tumour suppressor p21(Wafl/Cipl/Sdil): association with cell senescence and tumour-promoting activities of stromal fibroblasts. //Cancer Lett. 2002. V. 179. P. 1-14.

240. Gartel A.L., Tyner A.L. The role of the cyclin-dependent kinase inhibitor p21 in apoptosis. // Mol. Cancer Ther. 2002. V. 1. P. 639-649.

241. Chen H., Bjerknes M., Kumar R., Jay E. Determination of the optimal aligned spacing between the Shine-Dalgamo sequence and the translation initiation codon of Escherichia coli mRNAs. //Nucleic Acids Res. 1994. V. 22. P. 4953-4957.

242. Sburlati A.R., Manrow R.E., Berger S.L. Human prothymosin alpha: purification of a highly acidic nuclear protein by means of a phenol extraction. // Protein Expr. Purif. 1990. V. l.P. 184-190.

243. Wu J., Chang S., Gong X., Liu D., Ma Q. Identification of N-terminal acetylation of recombinant human prothymosin alpha in Escherichia coli. // Biochim. Biophys. Acta. 2006. V. 1760. P. 1241-1247.

244. Evstafieva A.G., Chichkova N.V., Makarova T.N., Vartapetian A.B., Vasilenko A.V., Abramov V.M., Bogdanov A.A. Overproduction in Escherichia coli, purification and properties of human prothymosin alpha. // Eur. J. Biochem. 1995. V. 231. P. 639-643.

245. Chakrabarti P. Interaction of metal ions with carboxylic and carboxamide groups in protein structures. // Protein Eng. 1990. V. 4. P. 49-56.

246. Brand I.A., Heinickel A., Kratzin H., Soling H.D. Properties of a 19-kDa Zn2+-binding protein and sequence of the Zn2+-binding domains. // Eur. J. Biochem. 1988. V. 177. P. 561-568.

247. Cullin C., Pompon D. Synthesis of functional mouse cytochromes P-450 PI and chimeric P-450 P3-1 in the yeast Saccharomyces cerevisiae. // Gene. 1988. V. 65. P. 203-217.

248. Evstafieva A.G., Ugarova T.Y., Chernov B.K., Shatsky I.N. A complex RNA sequence determines the internal initiation of encephalomyocarditis virus RNA translation. Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 665-671.

249. Evstafieva A.G., Beletsky A.V., Borovjagin A.V., Bogdanov A.A. Internal ribosome entry site of encephalomyocarditis virus RNA is unable to direct translation in Saccharomyces cerevisiae. // FEBS Lett. 1993. V. 335. P. 273-276.

250. Kozak M. Point mutations define a sequence flanking the AUG initiator codon that modulates translation by eukaryotic ribosomes. // Cell. 1986. V. 44. P. 283-292.

251. Reynolds A., Leake D., Boese Q., Scaringe S., Marshall W.S., Khvorova A. Rational siRNA design for RNA interference. // Nat. Biotechnol. 2004. V. 22. P. 326-330.

252. Doench J.G., Petersen C.P., Sharp P.A. siRNAs can function as miRNAs. // Genes & Dev. 2003. V. 17. P. 438-442.

253. Fischer U., Janicke R.U., Schulze-Osthoff K. Many cuts to ruin: a comprehensive update of caspase substrates. // Cell Death Differ. 2003. V. 10. P. 76-100.

254. Piatt N., da Silva R.P., Gordon S. Recognizing death: the phagocytosis of apoptotic cells. // Trends Cell. Biol. 1998. V. 8. P. 365-372.

255. Asada M., Yamada T., Ichijo H., Delia D., Miyazono K., Fukumuro K., Mizutani S. Apoptosis inhibitory activity of cytoplasmic p21(Cipl/WAFl) in monocytic differentiation. // EMBO J. 1999. V. 18. P. 1223-1234.

256. Li F., Ackermann E.J., Bennett C.F., Rothermel A.L., Plescia J., Tognin S., Villa A., Marchisio P.C., Altieri D.C. Pleiotropic cell-division defects and apoptosis induced by interference with survivin function. //Nat. Cell. Biol. 1999. V. LP. 461-466.

257. Rossi F., Evstafieva A., Pedrali-Noy G., Gallina A., Milanesi G. HsN3 proteasomal subunit as a target for human immunodeficiency virus type 1 Nef protein. // Virology. 1997. V. 237. P. 33-45.

258. Itoh K., Wakabayashi N., Katoh Y., Ishii T., Igarashi K., Engel J.D., Yamamoto M. Keapl repress nuclear activation of antioxidant responsive elements by Nrf2 through binding to the amino-terminal Neh2 domain.// Genes & Develop. 1999. V. 13. P. 76-86.

259. Ishii T., Itoh K., Takahashi S., Sato H., Yanagawa T., Katoh Y., Bannai S., Yamamoto M. Transcription factor Nrf2 coordinataly regulates a groop of oxidative stress-inducible genes in macrophages. //J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 16023-16029.

260. Adams J., Kelso R., Cooley L. The kelch repeat superfamily of proteins: propellers of cell function. // Trends in Cell Biol. 2000. V. 10. P. 17-24.

261. Beamer L.J., Li X., Bottoms C.A., Hannink M. Conserved solvent and side-chain interactions in the 1.35 Angstrom structure of the Kelch domain of Keapl. // Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 2005. V. 61. P. 1335-1342.

262. Hayes J.D., McMahon M. Molecular basis for the contribution of the antioxidant response element to cancer chemoprevention. // Cancer Lett. 2001. V. 174. P. 103-113.

263. Rushmore T.N., Morton M.R., Pickett C.B. The antioxidant responsive element. Activation by oxidative stress and identification of the DNA consensus sequence required for functional activity. // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. P. 11632-11639.

264. Xue F. And Cooley L. Kelch encodes a component of intercellular bridges in Drosophila egg chambers. // Cell. 1993. V. 72. P. 681-693.

265. Kang M.L., Kobayashi A., Wakabayashi N., Kim S.G., Yamamoto M. Scaffolding of Keapl to the actin cytoskeleton controls the function of Nrf2 as key regulator ofcytoprotectivc phase 2 genes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. V. 101. P. 20462051.

266. Zhang D.D., Hannink M. Distinct cysteine residues in Keapl are required for Keapl-dependent ubiquitination of Nrf2 and for stabilization of Nrf2 by chemopreventive agents and oxidative stress. // Mol. Cell. Biol. 2003. V. 23. P. 8137-8151.

267. Kobayashi M, Yamamoto M Molecular mechanisms activating the Nrf2-Keapl pathway of antioxidant gene regulation. // Antioxid Redox Signal. 2005. V. 7. P. 385394.

268. Huang H.C., Nguyen T., Pickett C.B. Phosphorylation of Nrf2 at Ser-40 by protein kinase C regulates antioxidant response element-mediated transcription. // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 42769-42774.

269. Cullinan S.B., Zhang D.D., Hannink M., Arvisais E., Kaufman R.J., Diehl J.L. Nrf2 is a direct PERK substrate and effector of PERK-dependent cell survival. // Mol. Cell. Biol. 2003. V. 23. P. 7198-7209.

270. Alam J., Stewart D., Touchard C., Boinapally S., Choi A.M., Cook J.L. Nrf2, a Cap'n'Collar transcription factor, regulates induction of the geme oxygenase-1 gene. // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 26071-26078.

271. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. //Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.

272. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Москва, "Мир", 1984.

273. Harlow Е., Lane D. Coupling peptides to carrier proteins using glutaraldehyde. In: Antibodies. A Laboratory Manual. Harlow E., Lane D. (Eds.) 1988. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor. P. 78.

274. Fries J., Getrost H. Organic Reagents for Trace Analysis. Ed. Merk. Darmstadt. Germany. 1977. P. 412-413.

275. Hoffmann P.R., deCathelineau A.M., Ogden C.A., Leverrier Y., Bratton D.L., Daleke D.L., Ridley A.J., Fadok V.A., Henson P.M. Phosphatidylserine (PS) induces PS receptor-mediated macropinocytosis and promotes clearance of apoptotic cells.

276. J. Cell. Biol. 2001. V. 155. P. 649-659.

277. Dial R., Sun Z.Y., Freedman S.J. Three conformational states of the p300 CHI domain define its functional properties. // Biochemistry. 2003. V. 42. P. 9937-9945.1. БЛАГОДАРНОСТИ

278. Я хочу выразить глубокую благодарность моим коллегам, которые принимали участие в данной работе.

279. Работа по изучению взаимодействия ПроТа с цитохромом с была проведена совместно с сотрудниками В.П.Скулачева.