Роль шаперона Hsp70 в реакции опухолевых клеток с повышенной экспрессией протоонкогена Мус на действие противоопухолевых препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат биологических наук Комарова, Елена Юрьевна

• Комарова, Елена Юрьевна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Комарова, Елена Юрьевна

СОДЕРЖАНИЕ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 8 2.1. Апоптоз.

2.1.1. Основные морфологические черты апоптоза.

2.1.2. Биохимические механизмы апоптотической гибели.

2.1.3. Активация и регуляция каспазного каскада. 17 2.2 Участие онкобелка Мус в регуляции апоптоза.

2.3. Защитные системы опухолевых клеток.

2.4. Белки теплового шока.

2.4.1. Белки теплового шока и их классификация.

2.4.2. Семейство белков Hsp70 и его функции.

2.4.3. Роль Hsp70 в процессе апоптоза.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Клеточные линии и их культивирование.

3.2. Тепловое воздействие и индукция синтеза Hsp70.

3.3. Трансфекция клеток.

3.4. Анализ ядерной локализации MycER после индукции ОНТ.

3.5. Индукция и оценка апоптоза.

3.6. Анализ кинетики каспазной активности.

3.7. Антитела.

3.8. Анализ фрагментации клеточной ДНК.

3.9. Анализ транслокации цитохрома

3.10. Коиммунопреципитация и лиганд-блоттинг.

3.11. Выделение и очистка белков теплового шока семейства 70 кДа.

3.12. Статистическая обработка.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ. 57 4.1. Тепловой шок снижает чувствительность опухолевых клеток с высоким содержанием Мус к действию противоопухолевых препаратов.

4.2. Hsp70 повышает устойчивость клеток с высокой экспрессией

Мус к действию противоопухолевых препаратов.

4.3. Молекулярные механизмы подавления Мус-опосредованного апоптоза.

4.4. Процесс апоптоза, инициированный v-Myc, специфически подавляется ингибитором каспазы 9.

4.5. Hsp70 регулирует активность эффекторных каспаз, но не влияет на высвобождение цитохрома с из митохондрий.

4.6. Hsp70 физически взаимодействует с каспазой 3 и каспазой 7.

5. ОБСУЖДЕНИЕ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль шаперона Hsp70 в реакции опухолевых клеток с повышенной экспрессией протоонкогена Мус на действие противоопухолевых препаратов»

Изучение процессов инициации и прогрессии злокачественных новообразований является одной из важнейших задач современной клеточной биологии и медицины. Известно, что огромное разнообразие опухолевых клеток объединяет их повышенная способность к пролиферации. Эта способность обычно складывается из двух компонентов: из увеличенной способности к росту в конкретных условиях (уменьшенной потребности в ростовых факторах, сниженной зависимости от прикрепления и т.п.) и из способности расти неопределенно долгое время (клеточное бессмертие, иммортализация, способность к бесконечно долгой пролиферации).

В настоящее время онкологи применяют три основных, классических или традиционных метода лечения онкологических заболеваний: хирургический, лучевой и лекарственный (химиотерапия, гормонотерапия). Современная медицина, используя последние достижения науки, продолжает развивать наиболее значимые направления в лечении: гипертермия, гипергликемия, торможение роста опухоли, облегчение доставки лекарств, воздействие на мембраны опухолевых клеток. Существуют также экспериментальные методы, которые показали свою достаточную эффективность и готовы выйти из области научных исследований в широкую клиническую практику: аутопересадка красного костного мозга в сочетании с большими дозами цитостатиков, генная терапия, электрохимиотерапия, фокусированный ультразвук высоких энергий (выжигающая терапия опухолей), применение противоопухолевых вакцин. Разрабатываются и другие методы, которые находятся либо в начальной стадии изучения, либо эффективны лишь при лечении отдельных видов опухолей.

Целью противоопухолевой терапии является уничтожение раковых клеток без ущерба для окружающих нормальных тканей; поэтому большинство химиотерапевтических препаратов задумано так, чтобы остановить пролиферацию опухолевых клеток и запустить процесс программируемой клеточной смерти (апоптоз).

Для многих спонтанных опухолей имеются серьезные доказательства вовлеченности определенных клеточных генов, и, прежде всего онкогенов, генов-супрессоров и генов-регуляторов клеточного цикла в процесс канцерогенеза, но для подавляющего большинства опухолей молекулярные механизмы запуска "онкогенной" программы клетки остаются неизвестными. Интересно, что многие протоонкогены, в частности протоонкогены семейства Мус, запускающие клеточную пролиферацию, одновременно предрасполагают клетки к апоптозу (Reed, 2003). Генетические изменения протоонкогена Мус, ведущие к его нерегулируемой экспрессии, характерны для множества опухолей различного происхождения - лимфомы Беркитта, рака легкого и рака молочной железы (Amati et al., 2001). Белки семейства Мус являются транскрипционными факторами, и неизвестна ни одна мутация онкогенных представителей этого семейства (v-myc, c-myc, N-myc и L-myc), которая бы инактивировала проапоптотическую функцию, не затронув их способность стимулировать пролиферацию. Было сделано предположение, что Мус влияет на высвобождение цитохрома с из митохондрий, тем самым, предрасполагая клетки к митохондриальному пути реализации апоптоза (Juin et al., 1999).

В процессе канцерогенеза опухолевые клетки вырабатывают собственные защитные системы, вследствие чего они значительно отличаются от нормальных клеток организма, в том числе и по способности вступать в апоптоз. Одна из защитных систем основана на шапероне Hsp70. Этот белок обладает двумя очень важными свойствами: шаперонной активностью и способностью защищать клетки от разнообразных неблагоприятных факторов. Шаперонная активность — это способность белка связываться с поврежденными или вновь синтезированными полипептидами, транспортировать их через сеть внутриклеточных мембран и экспонировать их белок-модифицирующим системам (Morimoto et al., 1997). Данные огромного числа экспериментов in vitro и in vivo убедительно свидетельствуют о том, что Hsp70 представляет собой наиболее эффективную и консервативную защитную систему клеток и целого организма (Jaattela, 1999; Маргулис, Гужова, 2009).

Высокий уровень экспрессии Hsp70, обнаруженный в опухолевых клетках, по-видимому, является препятствием для противоопухолевой терапии, и свидетельствует о неблагоприятном прогнозе для больного при некоторых видах новообразований (Ciocca et al., 1993; Ricaniadis et al., 2001). Ранее было установлено, что Hsp70 спасает раковые клетки от действия многих факторов, вызывающих апоптоз, включая такие, как TNF-a, стауроспорин, жесткий тепловой стресс и многие другие. (Samali, Orrenius, 1998; Гужова и др., 2000). Более того, Hsp70 может тормозить процесс апоптоза на различных его фазах. Наиболее убедительное доказательство противоапоптозного действия Hsp70 было представлено в экспериментах на карциноме молочной железы МСН-7, в которых в клетки вводили анти-смысловую mRNA к Hsp70, в результате чего они погибали путем апоптоза (Nylandsted et al., 2000). Несмотря на интенсивные исследования, механизм защитной функции Hsp70 остается неясным. Однако большинство данных свидетельствует о превалирующей роли Hsp70 в ингибировании митохондриального пути апоптоза (Beere, Green, 2001). Исходя из вышеизложенных фактов, можно предположить, что Hsp70 также способен к кооперации с Мус в процессе канцерогенеза.

Цели и задачи исследования.

Целью настоящей работы является изучение функции шаперона Hsp70 на клеточном и молекулярном уровнях в процессе апоптоза, стимулированном действием противоопухолевых препаратов, в опухолевых клетках с нормальной и повышенной экспрессией протоонкогена Мус.

В работе были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

1. Выяснить, может ли повышенная экспрессия Hsp70 подавлять действие противоопухолевых препаратов, направленное на индукцию апоптоза в популяции опухолевых клеток.

2. Сравнить обусловленную Hsp70 устойчивость опухолевых клеток с нормальной и повышенной экспрессией Мус к действию противоопухолевых препаратов

3. Используя модель на основе клеток U937, выяснить механизм подавления Hsp70 апоптоза, управляемого v-Myc.

4. Выяснить, способен ли Hsp70 изменять кинетику активации эффекторных каспаз в клетках миелоидной лейкемии человека.

5. Проверить возможность взаимодействия Hsp70 с эффекторными каспазами в ходе апоптоза клеток миелоидной лейкемии человека, индуцированного противоопухолевыми препаратами.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Апоптоз.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Комарова, Елена Юрьевна

6. выводы.

1. Hsp70 обладает сильным противоапоптотическим эффектом при действии на раковые клетки противоопухолевыми препаратами - адриамицином, этопозидом и камптотецином.

2. Защитный эффект Hsp70 наиболее выражен в опухолевых клетках с повышенной экспрессии протоонкогена Мус. В клетках крысиных фибробластов RatlMycERHsp70, в которых можно дробно повышать экспрессию Hsp70, защитный эффект шаперона носит дозазависимый характер.

3. В клетках U-937 с постоянной экспрессией Мус апоптоз протекает преимущественно по прямому пути от каспазы 8 к эффекторным каспазам, в то время как в клетках с повышенной экспрессией Мус основным путем апоптоза является митохондриальный с вовлечением активации каспазы 9.

4.Антиапоптозное действие Hsp70 в клетках U-937 как с повышенной, так и с постоянной экспрессией протоонкогена Мус осуществляется после выброса цитохрома с из митохондрий.

5. Каспаза 3 и каспаза 7 - новые мишени для осуществления антиапоптозной функции Hsp70.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Комарова, Елена Юрьевна, 2010 год

1. Гужова И.В., Ласунская Е.Б., Нильссон К., Дариева З.А., Маргулис Б.А. 2000. Влияние теплового шока на процессы дифференцировки и апоптоза в клетках U-937. Цитология. 42(7): 653-658.

2. Гужова И.В., Маргулис Б.А. 2000. Индукция и накопление БТ1Н70 приводят к формированию его комплексов с другими клеточными белками. Цитология. 42(7): 647652.

3. Маргулис Б.А., Гужова И.В. 2000. Белки стресса в эукариотической клетке. Цитология. 42(4): 323-342.

4. Маргулис Б.А., Гужова И.В. 2009. Двойная роль шаперонов в ответе клетки и всего организма на стресс. Цитология. 51(3): 219-228.

5. Новоселов С.С., Вербова М.В., Васильева Е.В. , Воробьева Н.К., Маргулис Б.А., Гужова И.В. 2004. Анализ экспрессии белков-шаперонов Hsp70 и Hdjl в опухолевых клетках человека. Вопросы онкологии. 50: 174-178.

6. Певшщкий Л.А. 1996. Программированная гибель клеток и апоптоз: значение для развития и функционирования иммунной системы. Вестн. Акад. Мед. Наук. 6: 43-50.

7. Adrain С., Martin S.J. 2001. The mitochondrial apoptosome: a killer unleashed by the cytochrome seas. Trends. Biochem. Sci. 26: 390-396.

8. Alnemri E.S., Livingston D.J., Nicholson D. W., Salvesen G. Thornberry N.A., Wong W.W., Yuan.I 1996. Human ICE/CED-3 protease nomenclature . Cell. 87: 171-77.

9. Amanullah A., Liebermann D.A., Hoffman B. 2002. Deregulated c-Myc prematurely recruits both Type I and Type II CD95/Fas apoptotic pathways associated with terminal myeloid differentiation. Oncogene. 21: 1600 — 1610.

10. Amati В., Frank S.R., Donjerkovic D., Taubert S. 2001. Function of the c-Myc oncoprotein in chromatin remodeling and transcription. Biochim. Biophys. Acta. 1471: 135145.

11. Arango D., Mariadason J.M., Wilson A. J., Yang W., Corner G.A., Nicholas C., Aranes M.J., Augenlicht L.H. 2003. c-Myc overexpression sensitizes colon cancer cells to camptothecin-induced apoptosis. Br. J. Cancer. 89: 1757 1765.

12. Aravind /., Dixit V.M., Koonin E.V. 1999. The domains of death: evolution of the apoptosis machinery. TIBS. 24: 47-53.

13. Ashkenazi A., Herbst R.S. 2008. To kill a tumor cell: the potential of proapoptotic receptor agonists. J.Clin. Invest. 118: 1979-1990.

14. Aujame L., Firko H. 1988. The major inducible heat shock protein hsp68 is not required for acquisition of thermal resistance in mouse plasmacytoma cell lines. Mol. Cell Biol. 8:5486-5494.

15. Baker S.J., Reddy E.P. 1998. Modulation of life and death by the TNF receptor super!amily. Oncogene. 17: 3261-3270.

16. Barnett Т., Altschuler M., McDaniel C.N., Mascarenhas J. P. 1980. Heat shock induced proteins in plant cells. Dev. Genetics. 1: 331-344.

17. Barr R.K., Bogoyevitch M.A. 2001. The c-Jun N-terminal protein kinase family of mitogen-activated protein kinases (JNK MAPKs). Int. J. Biochem. Cell Biol. 33: 1047-1063.

18. Beere H.M., Green D.R. 2001. Stress management heat shock protein-70 and the regulation of apoptosis. Trends.Cell Biol. 11: 6-10.

19. Bellamy C.O.C., Malcomison R.D.G., Harrison D.J., Wyllie A.H. 1995. Cell death in health desease: the biology and regulation of apoptosis. Sem. Cancer Biol. 6: 3-16.

20. Bensaude O., Pinto M., Dubuis M.F., Nguyen V.T., Morange M. 1991. Protein denaturation during heat shock and related stress. Heat shock proteins. Berlin Springer-Verlag. 89-99.

21. Blachere N.E., Udono H., Janetzki S., Li Z., Heike M., Srivastava P.K. 1993. Heat shock protein vaccines against cancer. J. Immunother. Emphasis. Tumor. Immunol. 14(4): 352-356.

22. Boldin M.P., Goncharov T.M., Goltsev Y.V., Wallach D. 1996. Involvement of MACH, a novel MORTl/FADD-interacting protease, in Fas/APOl- and TNF receptor-induced cell death. Cell. 85: 803-815.

23. Borner C., Monney L. 1999. Apoptosis without caspase: an inefficient molecular guillotine. Cell Death Diff. 6: 497-507.

24. Bradford M. 1976. A rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248254.

25. Buchberger A., Schroder H., Buttner M., Valencia A., Bukau B. 1994. A conserved loop in the ATPase domain of the DnaK chaperone is essential for stable binding of GrpE. Structural. Biology. 1: 95-101.

26. Castedo M., Perfettinni J.-L., Roumier Т., Andreau K., Medema R., Kroemer G. 2004. Cell death by mitotic catastrophe: a molecular definition. Oncogene. 23: 2825 2837.

27. Chaudhary P.M., Eby M., Jasmin A. 1997. Death receptor 5, a new member of the TNFR family, and DR4 induce FADD-dependent apoptosis and activate the NF-кВ pathway. Immunity. 7: 821-830.

28. Chirico W.J., Waters M.G., Blobel G. 1988. 70K heat shock related protein stimulate protein translocation into microsomes. Nature. 333: 805-810.

29. Ciocca D.R., Clark G.M., Tandon A. K., Fuqua S.A., Welch W.J., McGuire W.L. 1993. Heat shock protein hsp70 in patients with axillary lymph node-negative breast cancer: prognostic implications. Natl. Cancer Inst. 85(7): 570-774.

30. Ciocca D.R., Clark G.M., Tandon A.K., Fuqua S.A., Welch W.J., McGuire W.L. 1993. Biological and clinical implications of heat shock protein 27,000 (Hsp27): a review. J. Natl. Cancer Inst. 85: 570-574.

31. Clemons N.J., Buzzard K., Steel R., Anderson R.L. 2005. Hsp72 inhibits Fas-mediated apoptosis upstream of the mitochondria in type II cells. J. Biol. Chem. 280: 9005-9012.

32. Cohen G.M., Sun X.-M., Showden R.T., Dinsdale D„ Skilleter D.N. 1992. Key morphological features of apoptosis may occur in the absence of internucleosomal DNA fragmentation. Biochem. 286: 331-334.

33. Coultas L„ Strasser A. 2003. The role of the Bcl-2 proteins un cancer. Semin. Cancer Biol. 13: 115-123.

34. Davie J.R. 1998. Covalent modification of histones: expression from chromatin templates. Curr. Opin. Genet. Dev. 8: 173-178.

35. Desagher S., Martinou J.C. 2000. Mitochondria as the central control point of apoptosis. Trends Cell Biol. 10(9): 369-377.

36. Dignam J., Lebovitz R., Roeder R. 1983. Accurate transcription initiation by RNA-polymerase II in a soluble extract from isolated mammalian nuclei. Nucl.Acids Res. 5: 14751489.

37. Dragovich Т., Rudin C.M, Thompson C.B. 1998. Signal transduction pathways that regulate cell survival and cell death. Oncogene. 17: 3207-3213.

38. Dubois M.F., Hovanessian A.G., Bensaude O. 1991. Heat-shock-induced denaturation of proteins. Characterization of the insolubilization of the interferone induced p68 kinase. J. Biol. Chem. 266: 9707-9711.

39. Dworniczak В., Mirault M.-E. 1987. Structure and expression of a human gene coding for a 71 kd heat shock "cognate" protein. Nucl. Acid Res. 15: 5181-5197.

40. Eilers M., Picard D., Yamamoto K.R., Bishop J.M. 1989. Chimaeras of myc oncoprotein and steroid receptors cause hormone-dependent transformation of cells. Nature. 340: 66-68.

41. Ellis R.J. 1987. Proteins as molecular chaperones. Nature. 328: 378-379.

42. Evan G., Littlewood T. 1998. A matter of life and cell death. Science. 281(5381): 1317-1322.

43. Fearnhead И.О., Rodrigues J., Govek E.E., Guo W., Kobayashi R., Hannon G., Lazebnik Y.A. 1998. Oncogene-dependent apoptosis is mediated by caspase-9. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95: 13664-13669.

44. Fehrenbacher N., Gyrd-Hansen M., Poulsen В., Felbor U., Kallunki Т., Boes M., Weber E., Leist M., Jaattela M. 2004. Sensitization to the lysosomal death pathway upon immortalization and transformation. Cancer Res. 64(15): 5301-5310.

45. Fest Т., Mougey V., Dalstein V., Hagerty M„ Milette D., Silva S„ Mai S. 2002. c-Myc overexpression in Ba/F3 cells simultaneously elicits genomic instability and apoptosis. Oncogene. 21: 2981 2990.

46. Flaherty K.M., DeLuca-Flaherty C., McKay D.B. 1990. Three- dimentional structure of the ATP-ase fragment of a 70k heat-shock cognate protein. Nature. 346: 623-628.

47. Flechtner J.B., Cohane K.P., Mehta S., Slusarewicz P., Leonard A.K., Barber B.H., Levey D.L., Andjelic S. 2006. High-affinity interactions between peptides and heat shock protein 70 augment CD8+ T lymphocyte immune responses. J. Immunol. 177: 1017-1027.

48. Frydman J., Honfeld J. 1997. Chaperones get in touch: the Hip-Hop connection. Trends Biocem. Sci. 22: 87-92.

49. Fulda S„ Debatin KM. 2006. Extrinsic versus intrinsic apoptosis pathways in anticancer chemotherapy. Oncogene. 25: 4798-4811.

50. Fulda S., Lutz JK. Schwab M, Debatin K.-M. 1999. MycN sensitizes neuroblastoma cells for drug-induced apoptosis. Oncogene. 18: 1479 1486.

51. Gabai V.L., Meriin А.В., Mosser D.D. 1997. Hsp70 prevents activation of stress kinases. A novel pathway of cellular thermotolerance. J. Biol. Chem. 272: 18033-18037.

52. Gartel A.L., Shchors K. 2003. Mechanisms of c-myc mediated transcriptional repression of growth arrest genes. Exp. Cell. Res. 283: 17-21.

53. Gastpar R., Gross C., Rossbacher L., Ellwart J., Riegger J., Multhoff G. 2004. The cell surface-localized heat shock protein 70 epitope TKD induces migration and cytolytic activity selectively in human NK cells. J. Immunol. 172: 972-980.

54. Ghobrial I.M., Witzig Т.Е., Adjei A.A. 2005. Targeting apoptosis pathways in cancer therapy. CA Cancer J. Clin. 55(3): 178-194.

55. Gotoh Т. Terada K., Oyadomari S., Mori M. 2004. Hsp70-DnaJ chaperone pair prevents nitric oxide- and CHOP-induced apoptosis by inhibiting translocation of Bax to mitochondria. Cell Death Differ. 11: 390-402.

56. Green D.R., Evan G.I. 2002. A matter of life and death. Cancer Cell. 2: 19-29.

57. Green D.R., ReedJ.C. 1998. Mitochondria and apoptosis. Science. 281: 1309-1312.

58. Guzhova I. V., Darieva Z.A., Rocha Melo A., Margulis B.A. 1997. Major stress protein 70kDa and subunits of NF-kB regulatory complex are associated in human T-lymphoma cells. Cell Stress Chap. 2: 132-139.

59. Heads R.J., Latchman D.S., Yellon D.M. 1994. Stable high level expression of a transfected human HSP70 gene protects a heart-derived muscle cell line against thermal stress. J. Mol. Cell. Cardiol. 26: 695-699.

60. Hengartner M.O., Horvitz H.R. 1994. C. elegans cell survival gene ced-9 encodes a functional homolog of the mammalian proto-oncogene bcl-2. Cell. 76: 665-676.

61. Hoffman В., Lieberman D.A. 1998. The protooncogene c-myc and apoptosis. Oncogene. 17: 3351-3357.

62. Hogarty M.D. 2003. The requirement for evasion of programmed cell death in neuroblastomas with MYCN amplification. Cancer Lett. 197: 173 179.

63. Hohfeld J., Jentsch S. 1997. GrpE-like regulation of the hsc70 chaperone by the anti-apoptotic protein BAG-1. EMBO J. 16: 6209-6216.

64. Hsu H., Huang J., Shu H.B. 1996. TNF-dependent recruitment of the protein kinase RIP to the TNFreceptor-1 signaling complex. Immunity. 4: 387-396.

65. Huang P., Oliff A. 2001. Signaling pathways in apoptosis as potential targets for cancer therapy. Trends Cell Biol. 11: 343-348.

66. Huang C., Yu Я, Wang Q., Ma W„ Xia D., Yi P., Zhang L., Cao X 2004. Potent antitumor effect elicited by superantigen-1 inked tumor cells transduced with heat shock protein 70 gene. Cancer Sci. 95: 160-167.

67. Hunt C., Morimoto R.I. 1985. Concerved features of eukaryotic hsp70 genes revealed by comparison with the nucleotide sequence of human hsp70. Proc. Natl. Ac. Sci. USA. 82: 6455-6459.

68. Jaattela M. 1999. Escaping cell death: survival proteins in cancer. Exp. Cell Res. 248(1): 30-43.

69. Jaattela M., Wissing D., Kokholm K. 1998. Hsp70 exerts its anti-apoptotic function downstream of caspase-3-like proteases. EMBO J. 17: 6124-6134.

70. Jiang M.-R., Li Y.-C., Yang Y., Wu J.-R. 2003. c-Myc degradation induced by DNA damage results in apoptosis of CHO cells . Oncogene. 22: 3252 3259.

71. Joza N., Kroemer G., Penninger M. 2002. Genetic analysis of the mammalian cell death machinery. Trends Genet. 18: 142-150.

72. Juin P., Hueber A.O., Littlewood Т., Evan G. 1999. c-Myc-induced sensitization to apoptosis is mediated through cytochrome с release. Genes Dev. 13: 1367-1381.

73. Juin P., Hunt A., Littlewood Т., Griffiths В., Swigart L.B., Korsmeyer S., Evan G. 2002. c-Myc functionally cooperates with Bax to induce apoptosis. Mol. Cell Biol. 22: 6158 -6169.

74. Kampinga H.H. 2006. Chaperones in preventing protein denaturation in living cells and protecting against cellular stress. Handb. Exp. Pharmacol. 172: 1-42.

75. Kampinga H.H., Brunsting J.F., Konings A.W.T. 1992. Acquisition of thermotolerance induced by heat and arsenite in HeLa S3 cells: multiple pathways to induce tolerance? J. Cell Physiol. 150: 406-415.

76. Kelley P.M., Schlesinger M.J. 1982. The effect of amino acid analogues and heat shock on gene expression in chicken fibroblasts. Cell. 15: 1277-1286.

77. Kerr J.F.R., Wyllie A.H., Currie A.R. 1972. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Brit. J. Cancer. 26: 239-257.

78. Kislin K.L., Marron M.T., Li G., Graner M.W., Katsanis E. 2007. Chaperone-rich cell lysate embedded with BCR-ABL peptide demonstrates enhanced anti-tumor activity against a murine BCR-ABL positive leukemia. FASEB J. 21: 2173-2184.

79. Klefstrom J., Verschuren E.W., Evan G. 2002. c-Myc augments the apoptotic activity of cytosolic death receptor signaling proteins by engaging the mitochondrial apoptotic pathway. J. Biol. Chem. 277(45): 43224-43232.

80. Klein S.D., Brune B. 2002. Heat shock protein attenuates nitric oxide-induced apoptosis inRAW macrophages by preventing cytochrome с release. Biochem. J. 362: 635641.

81. Kochevar D.T., Aucoin M.M., Cooper J. 1991. Mammalian heat shock proteins: an overview with a systems perspective. Toxicology Letters. 56: 243-267.

82. Kost S.L., Smith D.E, Sullivan W.P., Welch W.J., Toft D.O. 1989. Binding of heat shock proteins to the avian progesteron receptor. Mol. Cell Biol. 9: 3829-3838.

83. Kumar S., Colussi P.A. 1999. Prodomains-adaptors-oligomerization: the pursuit of caspase activation in apoptosis . TIBS. 24: 1-4.

84. C.Y., Lee J.S., Ко Y.G., Kim J.I., Seo J.S. 2000. Heat shock protein 70 inhibits apoptosis downstream of cytochrome с release and upstream of caspase-3 activation. J. Biol. Chem. 275: 25665-25671.

85. Maclean КН., Keller U.B., Rodrigues-Galindo C., Nilsson J.A., Cleveland J.L. 2003. c-Myc augments gamma irradiation-induced apoptosis by suppressing Bc1-Xl. Mol. Cell. Biol. 23: 4256-4270.

86. Ma kin G., Hickman J.A. 2000. Apoptosis and cancer chemotherapy. Cell Tissue Res. 301: 143-152.

87. McAllister L, Finkelstein D.B. 1980. Heat shock response and thermal resistance in Yeast. Biochemical and Biophysical Research Communications. 93: 819-824.

88. Meriin A.B., Gabai V.L. 1998. Proteasome inhibitors activate stress kinases and induce Hsp72. Diverse effects on apoptosis. J. Biol. Chem. 273: 6373-6379.

89. Mestril R., Dillmann W.H. 1995. Heat shock proteins and protection against myocardial ischemia. J. Mol. Cell Cardiol. 27: 45-52.

90. Mitchell K.O., Ricci S„ Myashita Т., Dicker D., Jin Z., Reed J., El-Deiry W.S. 2000. Bax is a transcriptional target and mediator of c-Myc-induced apoptosis. Cancer Res. 60: 6318-6325.

91. Moreno de Alboran I., Baena E., Martinez-A. C. 2004. c-Myc-deficient В lymphocytes are resistant to spontaneous and induced cell death . Cell Death Diff. 11: 61-68.

92. Morimoto R.I., Kline M.P., Bimston D.N., Cotto J.J. 1997. The heat-shock response: regulation and function of heat-shock proteins and molecular chaperones. Essays Biochem. 32: 17-29.

93. Morrish F., Giedi C, Hockenbery D. 2003. c-MYC apoptotic function is mediated by NRF-1 target genes. Genes Dev. 17(2): 240-255.

94. Mosser D.D., Caron A.W., Bourget L. 1997. Role of the human heat shock protein hsp70 in protection against stress-induced apoptosis. Mol. Cell. Biol. 17: 5317-5327.

95. Mosser D.D., Caron A.W., Bourget L., Meriin A.B., Sherman M.Y., Morimoto R.I., Massxe B. 2000. The chaperone function of hsp70 is required for protection against stress-induced apoptosis. Mol. Cell Biol. 20: 7146-7159.

96. Mailer P., Hrstka R., Coomber D„ Lane D.P., VojtesekB. 2008. Chaperone-dependent stabilization and degradation of p53 mutants. Oncogene. 27: 3371-3383.

97. Nagata S., Golshtein P. 1995. The Fas death factor. Science. 267: 1449-1456.

98. Nikiforov M.A., Popov N., Kotenko ./., Henriksson M„ Cole M.D. 2003. The Mad and Мус domains are fiintionally equivalent. J. Biol. Chem. 278: 11094-11099.

99. Nilsson J.A., Cleveland J.L. 2003. Мус pathways provoking cell suicide and cancer. Oncogene. 22: 9007 9021.

100. Pandey P., Farber R., Nakazawa A. 2000. Hsp27 functions as a negative regulator of cytochrome c-dependent activation of procaspase-3. Oncogene. 19: 1975-1981.

101. Park H.S., Lee J.S., Huh S., Seo J., Choi E. 2001. Hsp72 functions as a natural inhibitory protein of c-Jun N-terminal kinase . EMBO J. 20: 446-456.

102. Pelengaris S., Khan M. 2003. The many faces of c-Myc. Arch. Biochem. Biophys. 416: 129-136.

103. Pelham H.R.B. 1986. Speculations on the functions of the major heat shock and glucose-regulated proteins. Cell. 46: 956-961.

104. Perreault J., Lemieux R. 1993. Rapid apoptotic cell death of B-cell hybridomas in absence of gene expression. J. Cell Physiol. 156: 286-293.

105. Piura В., Rabinovich A. Yavelsky V., Wolfson M. 2002. Heat shock proteins and malignancies of the female genital tract. Harefuah. 141: 969-1010.

106. Polla B.S., Kantengwa S. 1996. Mitochondria are selective targets for the protective effects of heat shock against oxidative injury. PNAS. 93: 6458-6463.

107. Prendergast G.C. 1999. Mechanisms of apoptosis by c-Myc. Oncogene. 18: 29672987.

108. Rashmi R., Kumar S., Karunagaran D. 2004. Ectopic expression of HSP70 confers resistance, and silencing its expression sensitizes human colon cancer cells to curcumin-induced apoptosis. Carcinogenesis. 25: 179-187.

109. Ravagnan L., Gurbuxani S„ Susin S.A., Maisse C., Datigas E., Zamzami N., Мак Т. Jaattela M., Penninger J.M., Garrido C. Kroemer G. 2001. Heat-shock protein 70 antagonizes apoptosis-inducing factor. Nature Cell. 3: 839-843.

110. Reed J. C. 2003. Apoptosis-targeted therapies for cancer. Cancer Cell. 3: 17-22.

111. Reed J.C. 2006. Drug insight: cancer therapy strategies based on restoration of endogenous cell death mechanisms. NatClin. Pract. Oncol. 3: 388-398.

112. Ricaniadis Л7!, Kataki A., Agnantis N. Androulakis G., Karakousis C.P. 2001. Long-term prognostic significance of HSP-70, c-myc and HLA-DR expression in patients with malignant melanoma. Eur. J. Surg. Oncol. 27(1): 88-93.

113. Ritossa F. 1962. A new puffing pattern induced by heat shock and DNP in Drosophila melanogaster. Experientia. 18: 671-573.

114. Ruchalski К, Mao H., Li Z., Wang Z., Gillers S., Wang Y„ Mosser D.D., Gabai .V, Schwartz J.H., Borkan S.C. 2006. Distinct hsp70 domains mediate apoptosis-inducing factor release and nuclear accumulation. J. Biol. Chem. 281: 7873-7880.

115. Ruiz-Vela A., A/bar J.P., Martinez C.A. 2001. Apaf-1 localization is modulated indirectly by Bcl-2 expression. FEBS Lett. 501: 79-83.

116. Saleh A., Srinivasula S.M., Balkir L., Robbins P.D., Alnemri E.S. 2000. Negative regulation of the Apaf-1 apoptosome by Hsp70. Nat. Cell Biol. 2: 476-483.

117. Samali A., Cai J., Zhivotovsky В., Jones D.P., Orrenius S. 1999. Presence of a pre-apoptotic complex of pro-caspase-3, Hsp60 and HsplO in the mitochondrial fraction of Jurkat cells. EMBO J. 18(8): 2040-2048.

118. Samali A., Holmberg СЛ., Sistonen L„ Orrenius S. 1999. Thermo tolerance and cell death are distinct cellular responses to stress: dependence on heat shock protein. FEBS Letters. 461: 306-310.

119. Samali A., Orrenius S. 1998. Heat shock proteins: regulators of stress response and apoptosis. Cell Stress Chaperones. 3(4): 228-236.

120. Sanders E.J., Wride M.A. 1995. Programmed cell death in development.Int. Rev. Cytol. 163: 105-173.

121. Salon A., Taira Т., Iguchi- Ariga S., Ariga II. 2001. A novel transrepression pathway of c-Myc. J. Biol. Chem. 276: 46562-46567.

122. Scherer L.C., Dalman F.S., Massa E., Mechinchi S., Pratt W.B. 1990. Structural and functional reconstitution of the glucocorticoid receptor-hsp90 complex . J. Biol. Chem. 265: 21397-21400.

123. Schneider P., Thome M, Burns K. 1997. TRAIL Receptors 1 (DR4) and 2 (DR5) signal FADD-dependent apoptosis and activate NF-кВ. Immunity. 7: 831-836.

124. Simpson N.H., Milner A.N., Al-Rubeai M. 1997. Prevention of hybridoma cell death by bcl-2 during sub-optimal culture conditions. Biotechnol. Bioeng. 54: 1-16.

125. Soucek L., Nasi S., Evan G.I. 2004. Omomyc expression in skin prevents Myc-induced papillomatosis. Cell Death Dif. 33: 1-8.

126. Soucie E.L., Annis M.G., Sedivy J., Filmus J., Leber В., Andrews D.W., Penn L.Z. 2001. Мус potentiates apoptosis by stimulating Bax activity at the mitochondria. Mol. Cell. Biol. 21:4725-4736.

127. Sriram M., Osipiuk J., Freeman В., Morimoto R., Jochimiak A. 1997. Human Hsp70 molecular chaperone binds two calcium ions within the ATPase domain. Structure. 5: 403414.

128. Stankiewicz A.R., Lachapelle G., Foo C.P., Radicioni S.M., Mosser D.D. 2005. Hsp70 inhibits heat-induced apoptosis upstream of mitochondria by preventing Bax translocation. J. Biol. Chem. 280: 38729-38739.

129. Steel R., Doherty J.P., Buzzard K., Clemons N., Hawkins C.J., Anderson R.L. 2004. Hsp72 inhibits apoptosis upstream of the mitochondria and not through interactions with Apaf-1. J. Biol. Chem. 279: 51490-51499.

130. Stennicke H.R., Ryan C.A., Salvesen G.S. 2002. Reprieval from execution: the molecular basis of caspase inhibition. Trends Biochem. Sci. 27(2): 94-101.

131. Stevenson M.A., Calderwood S.K. 1990. Members of the 70-kilodalton heat shock protein family contain highly conserved calmodulin-binding domain. Mol. Cell Biol. 10: 1234-1238.

132. Slomberg P.W. 1991. Control cell lineage and cell fate during nematode development. Cuit. Top. Dev. Biol. 25: 177-225.

133. Sun Y., Ouyang Y.B., Xu L., Chow A.M., Anderson R., Hecker J.G., GiffardR.G. 2006. The carboxyl-terminal domain of inducible Hsp70 protects from ischemic injury in vivo and in vitro. J. Cereb. Blood Flow Metab. 26: 937-950.

134. Syrigos K.N., Harrington K.J., Karayiannakis A.J., Sekara E., Chatziyianni E., Syrigou E.I., and Waxman J. 2003. Clinical significance of heat shock protein-70 expression in bladder cancer. Urology. 61: 677-680.

135. Tavaria M., Gabriele Т., Kola /., Anderson R.L. 1996. A hitchhiker's guide to the human HSP70 family. Cell Stress Chap. 1(1): 23-28.

136. Thornberry N.A., Lazebnik Y. 1998. Caspases: enemies within. Science. 281(5381): 1312-1316.

137. Tissieres A., Mitchell H.K, Tracy U.M. 1974. Protein synthesis in salivary glands of Drosophila melongaster. J. Mol. Biol. 84: 389-398.

138. Towbin H., Staeheln Т., Gordon J. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. PNAS. 7: 4350-4354.

139. Towbin H, Gordon J. 1984. Immunoblotting and dot immunobinding--current status and outlook. J. Immunol. Methods. 72(2): 313-340.

140. Vaux D.L. 1999. Caspases and apoptosis biology and terminology. Cell Death Diff. 6: 493-494.

141. Vaux D.L., Strasser A. 1996. The molecular biology of apoptosis. PNAS USA. 93: 2239-2244.

142. Vermeulen K., Van Bockstaele D.R., Berneman Z.N. 2005. Apoptosis: mechanisms and relevance in cancer. Ann. Hematol. 84(10): 627-39.

143. Vol loch V, Gabai V.L., Rits S., Sherman M.Y. 1999. ATPase activity of the heat shock protein is dispensable for its effects on dephosphorilation of stress kinase JNK and on heat-induced apoptosis. FEBS Lett. 461: 73-76.

144. Volloch V., Gabai V.L. Rits S. Force Т., Sherman M.Y. 2000. HSP72 can protect cells from heat-induced apoptosis by accelerating the inactivation of stress kinase JNK. Cell Stress & Chap. 5(2): 139-147.

145. Vousden K.H., LuX., 2002. Live or let die: cell's response to p53. Nat. Rev. Cancer. 2: 594-604.

146. Welch W.J. 1990. The mammalian stress response: Cell physiology and biochemistry of stress proteins. Stress proteins in biology and medicine. New York CSH Press, p. 223-278.

147. Welch W.J., Feramisco J.R. 1985. Rapid purification of mammalian 70-kDa stress proteins: affinity of the proteins for nucleotides. Mol. Cell Biol. 5: 1229-1237.

148. Wu Y., Mehew J.A., Heckman C.A., Arcinas M., Boxer L.M. 2001. Negative regulation of bcl-2 expression by p53 in hemapoetric cells. Oncogene. 20: 240-251.

149. Xanthoudakis S., Roy S., Rasper D., Hennessey Т., Aubin Y., Cassady R., Tawa Т., Ruel R., Rosen A., Nicholson D.W. 1999. Hsp60 accelerates the maturation of pro-caspase-3 by upstream activator proteases during apoptosis. EMBO J. 18: 2049-2056.

150. Xia Z, Dickens M., Raingeaud J. 1995. Opposing effects of ERK and JNK-p38 MAP kinases on apoptosis. Science. 270: 1326-1331.

151. Yamamori Т., Ito K., Nakamura Y, Yura T. 1978. Transient regulation of protein synthesis in Escherichia coli upon shift-up of growth temperature. J. Bacteriol. 134: 11331140.

152. Yost H.J., Lindquist S. 1991. Heat shock proteins affect RNA processing during heat shock response. Mol. Cell Biol. 11: 1062-1068.

153. Zornig A., Hueber A.O., Baum W., Evan G. 2001. Apoptosis regulators and their role in tumorigenesis. Biochim. Biophys. Acta. 1551: 1-37.