Диагностическая значимость уровней экспрессии мРНК сурвивина, металлопротеиназы-7 и циклооксигеназы-2 при раке желудка тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Высоцкая, Ольга Владимировна

• Высоцкая, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Высоцкая, Ольга Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.4,

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Распространённость рака желудка.

1.2. Причины возникновения рака желудка.

1.3. Классификация рака желудка.

1.4. Диагностика рака желудка.

1.5. Сурвивин, СОХ-2 и ММР-7 как маркеры онкогенеза.

1.5.1.1. Структура и функции сурвивина.

1.5.1.2. Роль сурвивина в апоптозе.

1.5.1.3. Роль сурвивина в процессе деления клеток.

1.5.1.4. Регуляция экспрессии гена сурвивина.

1.5.1.5. Сурвивин и ангиогенез.

1.5.1.6. Экспрессия сурвивина в нормальных тканях.

1.5.1.7. Экспрессия сплайсинговых вариантов сурвивина.

1.5.1.8. Сурвивин - перспективный маркер опухолевого развития.

1.5.2.1. Циклооксигеназа СОХ-2.

1.5.2.2. СОХ-2 и рак желудка.

1.5.3 Металлопротеиназа ММР-7.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Реактивы.

2.1.2. Приборы и компьютерные программы.

2.1.3. Клеточные линии.

2.1.4. Клинический материал.

2.1.4.1. Опухолевые образцы надпочечников.

2.1.4.2. Образцы опухоли и слизистой оболочки желудка.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение РНК.

2.2.2. ОТ-ПЦР.

2.2.3. Статистическая обработка результатов.

2.2.4. БЮС-анализ диагностической ценности онкомаркеров.70'

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Оптимизацияусловий проведения ОТ-ПЦР с праймерами для анализа* мРНК вариантов альтернативного сплайсинга сурвивина.

3.1.1. Проведение оптимизации на клеточной линии.

3.1.2. Анализ экспрессии мРНК сурвивина и его сплайсинговых вариантов в . меланомах.

3.1.3. Экспрессия мРНК гена сурвивина в опухолях надпочечников.

3.2. Исследование экспрессии мРНК генов сурвивина, СОХ-2, ММР-7 и

3-актина у пациентов с РЖ.

3.2.1. Экспрессия конститутивных генов ОАРБН и ¡3-актина в ткани желудка.

3.2.2.1. Исследование экспрессии мРНК гена сурвивина в опухолях желудка.

3.2.2.2. Анализ экспрессии мРНК сплайсинговых вариантов сурвивина-^, -2В и -АЕхЗ.

3.2.2.3. Экспрессия сурвивина в окружающей опухоль слизистой желудка.

3.2.3.1. Исследование экспрессии мРНК гена ММР-7 в опухолях желудка.

3:2.3.2. Экспрессия ММР-7 в окружающей-опухоль слизистой желудка.

3.2.4.1. Исследование экспрессии мРНК гена СОХ-2 в опухолях желудка.

3.2.4.2. Экспрессия СОХ-2 в окружающей опухоль слизистой желудка.

3.2.5. Диагностическая значимость анализа экспрессии мРНК сурвивина,

ММР-7 и СОХ-2 для детекции РЖ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Диагностическая значимость уровней экспрессии мРНК сурвивина, металлопротеиназы-7 и циклооксигеназы-2 при раке желудка»

Актуальность проблемы.

В России рак желудка (РЖ) занимает одно из ведущих мест в общей структуре онкологической заболеваемости и второе место среди опухолей желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). В России ежегодно регистрируется 4050 тыс. новых случаев РЖ и около 45 тыс. больных умирает от этого заболевания. Только в Москве в настоящее время РЖ заболевает в год около 3,5 тыс. человек [12]. К сожалению, у 75% первично выявленных больных заболевание диагностируется в Ш-1У стадии, когда хирургическое лечение может быть малоэффективным. Частота обнаружения ранних форм РЖ не превышает 10-20%, а у 83% больных при первично выявленной злокачественной опухоли уже существуют регионарные метастазы [10]. Улучшение результатов лечения РЖ во многом связывают с диагностикой и лечением опухолей на ранних стадиях развития.

Основные трудности в своевременной диагностике обусловлены тем, что рак может длительное время существовать под видом или на фоне других заболеваний желудка. Кроме того, до сих пор остается нерешенным вопрос объективной трактовки морфологических изменений слизистой, особенно при тяжелой дисплазии в условиях хронического воспаления и при под слизистом росте опухоли [2]. Несмотря на это в настоящее время решающую роль в диагностике РЖ играет эндоскопическое исследование с гистологическим анализом биоптатов [3]. Различные исследования показали, что множественные биопсии в подозрительных участках слизистой оболочки желудка повышают вероятность постановки правильного диагноза. Например, при биопсии, выполненной только в одной точке малигнизированной язвы желудка, вероятность постановки правильного диагноза составляет 70%, а при биопсии, выполненной в восьми точках, эта вероятность повышается до 95-99%. В Японии выявляемость раннего РЖ наиболее высокая в мире (54-56%), поскольку там в обязательную диагностику введено исследование биоптатов, взятых не менее чем из шести точек пораженного опухолью желудка [4]. Но даже при таком высоком уровне диагностики количество пропущенных случаев раннего рака желудка составляет 19%. Таким образом, диагностика РЖ остается достаточно сложной и актуальной задачей, особенно в случае высокодифференцированных и ранних форм злокачественной опухоли. В этом случае большие надежды возлагают на молекулярно-биологические методы диагностики.

Эпителий желудка относится к тканям, которым свойственно непрерывное клеточное обновление: постоянство структуры эпителия обеспечивается только при координации фаз пролиферации, дифференцировки и апоптоза. В основе возникновения изменений в слизистой желудка, приводящих к развитию рака, лежит дисбаланс между апоптозом и пролиферацией клеток [8]. Среди белков, ингибирующих апоптоз, ключевую роль играет сурвивин. Экспрессия сурвивина обнаруживается в большинстве видов опухолей, в то время как в нормальных тканях она практически не детектируется. Экспрессия гена сурвивина, по разным данным, обнаруживается в 35 - 82% опухолей желудка [85, 67, 37] и ассоциирована с неблагоприятным прогнозом заболевания.

Известно, что в случае диффузного РЖ одним из ведущих событий в канцерогенезе считается мутация Е-кадгерина [7]. Металлопротеиназа ММР-7 инициирует эпителиально-мезенхимальный переход в ткани желудка путем протеолиза Е-кадгерина, что приводит к отдалённым метастазам [139]. Особенностью ММР-7 является то, что она экспрессируется самими опухолевыми клетками и участвует в развитии рака, начиная с его ранних стадий [56].

Замечено, что в ряде интестинальных опухолей желудка наблюдается повышенная экспрессия циклооксигеназы-2 (СОХ-2) [7]. Гиперэкспрессия мРНК СОХ-2 в карциномах желудка коррелирует с глубиной инвазии, с прорастанием лимфатических сосудов, с метастазами в лимфоузлы [109].

В настоящее время клиническая значимость выше указанных онкомаркеров для диагностики РЖ только начинает изучаться. Цель исследования. Цель данной работы оценить значимость определения экспрессии мРНК сурвивина, ММР-7 и СОХ-2 в различных областях слизистой желудка для диагностики РЖ и для установления границ распространения опухоли. Задачи исследования.

1. Оптимизировать условия проведения анализа экспрессии гена сурвивина методом совмещенных реакций обратной транскрипции и ПЦР (ОТ-ПЦР) на различном клеточном и клиническом материале.

2. Провести анализ относительной экспрессии мРНК генов сурвивина, СОХ-2 и ММР-7 методом ОТ-ПЦР в клинических образцах слизистой от пациентов с аденокарциномой желудка, взятых из опухоли и на расстоянии 2, 5 и 8 см от её видимой границы.

3. Сопоставить уровни экспрессии выбранных онкомаркеров с основными клиническими показателями и морфологическими характеристиками опухоли у больных РЖ.

4. Оценить с помощью ЖЭС-анализа значимость предложенных маркеров для диагностики РЖ и выбрать онкомаркеры, имеющие наилучшую диагностическую эффективность.

Научная новизна исследования.

Впервые проведено одновременное комплексное исследование относительных уровней экспрессии генов сурвивина, СОХ-2 и ММР-7 в опухолях и в прилегающих к ним трех участках слизистой желудка, полученных от больных с РЖ. Исследование позволило получить новые данные об участии этих факторов в развитии опухолевого процесса в данном органе. Комплексный подход к исследованию этих маркеров позволит в дальнейшем с высокой степенью достоверности осуществлять дифференциальную диагностику РЖ.

Показано, что в аденокарциномах наблюдаются достоверно' высокие уровни экспрессии маркеров по сравнению с интактной слизистой желудка как у пациентов с РЖ, так и у пациентов контрольной группы. В работе впервые установлено, что повышение экспрессии онкомаркеров в одном или двух участках слизистой за видимой границей опухоли может указывать .на распространение опухолевого процесса вдоль стенки желудка. Впервые показано, что в случае перстневидноклеточного рака (ПКР) наблюдается низкий уровень экспрессии маркеров в самой опухоли и высокий уровень в прилегающей к ней слизистой желудка. Кроме того, выявлена корреляция между повышенным уровнем экспрессии ММР-7 в слизистой желудка за границей опухоли и глубиной инвазии опухоли.

Впервые обнаружено, что уровень экспрессии сурвивина-2В повышается на поздних стадиях развития опухоли, а уровни экспрессии мРНК общего сурвивина и СОХ-2 в аденокарциномах кишечного типа достоверно выше таковых при раке диффузного типа.

Практическая значимость работы.

Исследование экспрессии мРНК генов СОХ-2, ММР-7 и сурвивина показало, что данные онкомаркеры обладают различной клинической ценностью для диагностики РЖ. Установлено, что наименьшей чувствительностью обладает анализ экспрессии СОХ-2, наибольшей — ММР-7. Анализ уровня экспрессии ММР-7 позволяет детектировать РЖ уже на I стадии его развития. Кроме того, уровень экспрессии мРНК СОХ-2 и сурвивина позволяет дифференцировать кишечный и диффузный типы РЖ. Анализ экспрессии генов СОХ-2, ММР-7 и сурвивина в их комбинации улучшает чувствительность диагностики РЖ, по сравнению с анализом экспрессии этих онкомаркеров в отдельности.

Анализ уровней экспрессий мРНК генов сурвивина, СОХ-2 и ММР-7 в зоне опухоли и в трех участках слизистой желудка, взятых на различном расстоянии от нее, позволяет повысить диагностику РЖ и установить истинные границы опухоли. Это дает возможность не только определять злокачественный потенциал опухоли, но и сократить количество рецидивов РЖ за счет коррекции объема оперативного вмешательства и показаний к послеоперационному курсу химиотерапии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Экспрессия СОХ-2 и сурвивина коррелирует с глубиной инвазии, с размером опухоли, но не зависит от степени поражения лимфоузлов и наличия отдаленных метастазов. Повышение уровня экспрессии ММР-7 в слизистой желудка за границей опухоли коррелирует с глубиной инвазии опухоли (г Спирмана равен 0,313, р=0,025).

2. Опухоли на I стадии развития имеют низкие уровни экспрессии мРНК СОХ-2 и сурвивина.

3. По уровню экспрессии ММР-7 можно достоверно верифицировать опухоли уже на I стадии их развития, на что указывает высокая чувствительность (80,4%) и специфичность (90,9%) теста.

4. Диффузный тип РЖ, в частности перстневидноклеточный рак, характеризуется более низким уровнем экспрессии сурвивина и СОХ-2 непосредственно в опухоли и повышением экспрессии этих маркеров в слизистой желудка за видимыми границами опухоли.

5. Применение метода скрининга слизистой желудка у раковых больных позволяет повысить чувствительность и специфичность диагностических тестов.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Высоцкая, Ольга Владимировна

выводы

1. Уровни экспрессии сурвивина, ММР-7 и СОХ-2 в аденокарциномах желудка достоверно выше, чем в интактной слизистой желудка пациентов контрольной группы (р<0,05).

2. У больных РЖ высокие уровни экспрессии сурвивина, ММР-7 и СОХ-2 детектируются не только в опухоли, но и в окружающей ее слизистой желудка.

3. Впервые обнаружено, что у большинства больных перстневидноклеточным раком желудка наблюдается низкий уровень экспрессии генов СОХ-2 и сурвивина в опухоли и высокий за видимыми границами опухоли.

4. Установлено, что эффективными онкомаркерами позволяющими дифференцировать перстневидноклеточный рак от аденокарциномы желудка являются сурвивин и СОХ-2.

5. Для диагностики ранних стадий РЖ наиболее чувствительным и специфичным онкомаркером является ММР-7.

6. Комплексное определение экспрессии генов сурвивина, ММР-7 и СОХ-2 в опухоли и в трех участках слизистой желудка на разном расстоянии от опухоли позволяет повысить чувствительность диагностических тестов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На сегодняшний день проблема диагностики онкологических заболеваний является одной из наиболее острых ввиду высокого- уровня* заболеваемости и смертности от данного типа патологий. Отсутствие высокоэффективных скрининговых программ для диагностики рака желудка заставляют искать специфичные онкомаркеры, позволяющие эффективно выявлять опухоли на ранних стадиях. Таким образом, совершенствование-подходов к дифференциальной диагностике рака желудка представляется-актуальной задачей для научной и практической медицины.

Злокачественная трансформация клеток сопровождается изменениями в экспрессии генов, отвечающих за регуляцию клеточного деления, дифференцировки и программированной гибели — апоптоза. С другой стороны злокачественный фенотип клетки является результатом нарушения-работы внутриклеточной сети сигнальной трансдукции. В данной работе мы исследовали экспрессию мРНК СОХ-2 - фермента, участвующего в образовании простагландинов, которые стимулируют ЕР-рецепторы и активируют пути сигнальной трансдукции, потенцирующие пролиферацию клеток, ангиогенез, инвазию и метастазирование, а также подавляющие апоптоз и реакции иммунного ответа. Более того, мы изучили экспрессию мРНК гена антиапоптотического белка сурвивина, который участвует не только в ингибировании апоптоза, но и в регуляции митоза.

Кроме того, современные исследования показали, что одним из ключевых этапов инвазии и метастазирования злокачественных новообразований, является активация металлопротеиназ в стромальных клетках вокруг опухоли. Одна из металлопротеиназ - матрилизин (ММР-7) может экспрессироваться непосредственно опухолевыми клетками, являясь опухолеассоциированным белком. В настоящее время показана ведущая роль этих онкомаркеров в патогенезе опухолей различной локализации.

Цель диссертационного исследования заключалась в оценке значимости определения экспрессии мРНК сурвивина, ММР-7 и СОХ-2 в различных областях слизистой желудка для диагностики РЖ и для установления границ и характера распространения опухоли.

Исследование уровней экспрессии мРНК сурвивина, СОХ-2 и ММР-7 в опухолях и в трёх участках нормальной слизистой желудка больного РЖ показало, что непосредственно в опухоли уровень экспрессии анализируемых маркеров значительно- превышал их уровень в окружающей! ее слизистой. Однако, приблизительно у 60% этих пациентов в одном из. образцов нормальной слизистой желудка всегда детектировалось превышение порогового уровня экспрессии этих маркеров. При этом уровень экспрессии мРНК сурвивина, СОХ-2 и ММР-7 в образцах слизистой желудка не зависел от их расстояния до опухоли. На основании* этого, можно предположить, что повышение экспрессии онкомаркеров в одном или двух участках слизистой за видимой границей опухоли указывает на распространение опухолевого процесса вдоль стенки желудка у каждого конкретного пациента. Нужно отметить, что повышенный уровень экспрессии ММР-7 в слизистой желудка за границей опухоли коррелировал с глубиной инвазии опухоли, а высокие уровни экспрессии мРНК сурвивина и СОХ-2 в нормальной слизистой желудка за границами опухоли коррелировали с диффузным типом опухоли. При этом у большинства больных диффузным ПКР в области опухоли наблюдались низкие уровни экспрессии СОХ-2 и сурвивина, тогда как у пациентов с аденокарциномами кишечного типа чаще детектировался высокий уровень экспрессии этих маркеров в опухоли. Это можно объяснить тем, что ПКР имеет низкий пролиферативный потенциал, по сравнению с быстро пролиферирующими аденокарциномами желудка. Таким образом при анализе уровней экспрессии сурвивина и СОХ-2 в опухоли и в прилежащей к ней слизистой желудка можно дифференцировать аденокарциномы кишечного типа от ПКР диффузного типа.

При исследовании связи уровней экспрессии онкомаркеров с основными клинико-морфологическими характеристиками опухоли мы обнаружили, что уровни экспрессии сурвивина и СОХ-2" коррелировали с' диаметром опухоли и,с глубиной её инвазиш в стенку желудка;.

Уровень экспрессии мРНК ММР-7 всегда был высоким в опухолях вне: зависимости от их степени дифференцировки и стадии, развития;. Таким; образом . для выявления ранних стадий РЖ. ММР-7 \ является* высокочувствительным и специфичным онкомаркером. Анализ относительного уровня экспрессии СОХ-2 на разных стадиях развития^ опухоли показал, что в опухолях поздних стадий (III, IV) уровень,экспрессии; достоверно выше, чем в опухолях ранних стадий (Г, II). Можно предположить, что СОХ-2 участвует в прогрессии опухоли, тогда как ММР-7 в инициации опухолевого роста. Более того, активация ММР-7 и сурвивина происходит уже в предраковых изменениях слизистой желудка, в ряду гастрит —> метаплазия —> дисплазия —> аденокарцинома наблюдается тенденция к снижению количества образцов с низким уровнем и повышению с высоким уровнем экспрессии этих маркеров в слизистой желудка;

В результате проведения ROC-анализа мы установили, что наименьшей чувствительностью обладает анализ экспрессии СОХ-2 (57%), средней -сурвивин (74|,5%) и наибольшей — ММР-7 (82%). Анализ уровня*экспрессии маркеров в клиническом материале, взятом из четырех участков слизистой желудка, включая опухоль (метод скрининга слизистой) позволяет повысить» чувствительность диагностических тестов на 10-12%.

Анализ экспрессии генов СОХ-2, ММР-7 и сурвивина в их комбинации улучшает чувствительность диагностики РЖ до 92%, по сравнению1 с анализом экспрессии этих маркеров в отдельности.

Мы надеемся, что результаты, полученные в настоящем исследовании, позволят уже на дооперационном этапе с высокой точностью диагностировать рак желудка и определять истинные границы опухолевой инфильтрации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Высоцкая, Ольга Владимировна, 2011 год

1. Алексеева М.Л., Гусарова Е.В., Муллабаева С.М., Понкратова Т.С. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования // Проблемы репродукции. 2005. - №3. -С. 65-79'.

2. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника // М.: Триада-Х. 1998. С. 80-85, 272.

3. Баранская Е.К., Ивашкин ВТ. Клинический спектр предраковой патологии желудка // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. -2002.-Т. 12, №3.-С. 7-14.

4. Бондарь Г.В., Думанский Ю.В., Попович А.Ю., Бондарь В.Г. Рак желудка: профилактика, диагностика и лечение на современном этапе // Онкология. 2006. - Т.8, №2. - С. 171-175.

5. Букин Ю.В., Драудин-Крыленко В.А. Молекулярно-биологические механизмы гастроканцерогенеза и подходы к профилактике рака желудка // Успехи биологической химии. 2000. - Т. 40. — С. 329-356.

6. Давыдов М.И., Тер-Ованесов М.Д., Абдихакимов А.Н., Марчук В.А. Рак желудка: предоперационное обследование и актуальные аспекты стадирования // Практическая онкология. 2001. - №3 (7). - С. 9-17.

7. Имянитов E.H. Эпидемиология и биология рака желудка // Практическая онкология. 2009. - Т.10, №1. - С. 1-7.

8. Маев И.В., Зайратьянц О.В., Кучерявый Ю.А. Кишечная метаплазия слизистой оболочки желудка в практике гастроэнтеролога: современный взгляд на проблему // Рос. Журн. гастроэнтерол, гепатол, колопроктол. -2006.-№4.-С. 38-48.

9. Марченко И.А. Исследование диагностической значимости теломеразы и других маркеров злокачественной трансформации при новообразованиях щитовидной железы человека // дис. .канд. биол. наук. — М., 2009.-С.84-86, 101-107, 123-125.

10. Симонов Н.Н., Мяукина JI.M., Филин А.В., Рыбалкин Ю.И. Проблемы1 диагностики и рационального лечения раннего рака желудка (TisNOMO и T1N0M0) // Практическая онкология. 2001. - №3 (7). - С. 25-30i

11. Справочник по онкологии. Под редакцией академика РАМН >Н.Н.*

12. Трапезникова и профессора ЖВ. Поддубной / Онкоцентр РАМН.' / М., КАППА. 1996: - Выпуск 4.

13. Статистика злокачественных новообразований в Россин и странах СНГ в 2006г. // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН Том 19,№2 (прил. 1), 2008 Под редакцией академика РАН и РАМН М.И. Давыдова, и дбн Е.М. Аксель, АНО «Усия» с. 53

14. Adrenocortical carcinoma. PDQ — NCI's comprehensive cancer database.

15. Ahmadi M., Emery D.C., Morgan DJ. Prevention of both direct and cross-priming of antitumor CD8+ T-cell responses following overproduction of prostaglandin E2 by tumor cells in vivo. Cancer Res. 2008. - V. 68. - P. 75207529.

16. Ajisaka H., Yonemura Y., Miwa K. Correlation of lymph node metastases and expression of matrix metalloproteinase-7 in patients with gastric cancer // Hepatogastroenterology. 2004. - V. 51 (57). - P. 900-905.

17. Alderazi Y., Yeh M.W. et al. Phaeochromocytoma: current concepts. MJA, 2005, 183(4):201-204.

18. Allen S.M., Florell S.R., Hanks A.N., et al. Survivin expression in mouse skin prevents papilloma regression and promotes chemical-induced tumor progression // Cancer Res. 2003. - V. 63(3). P. 567-572.

19. Altieri D.C. Survivin, cancer networks and pathway-directed drug discovery //Nat. Rev. Cancer. 2008. - V. 8. - P. 61-70.

20. Altieri D.C. The molecular basis and potential role of survivin in cancer diagnosis and therapy // Trends Mol Med. 2001. - V. 7. - P. 542-547.

21. Altznauer F., Martinelli S., Yousefi S., et al. Inflammation-associated cell cycle-independent block of apoptosis by survivin in terminally differentiated neutrophils // J Exp Med. 2004. - V. 199. - P. 1343-1354.

22. Asanuma K, Tsuji N, Endoh T, Yagihashi A, Watanabe N. Survivin Enhances Fas Ligand Expression via Up-Regulation. of Specificity Protein 1-Mediated1 Gene Transcription in Colon Cancer Cells // J. Immunol1. 2004. - V. 172.-P. 3922-3929.

23. Badran A., Yoshida A., Ishikawa K. et al. Identification of a nover, splice variant of the human anti-apoptopsis gene survivin // Biochem Biophys Res Commun. -2004. V. 314.-P. 902-907.

24. Barber R.D., Harmer D.W., Coleman R.A., Clark BJ. GAPDH as a housekeeping gene: analysis of GAPDH mRNA expression in a panel of 72 human tissues // Physiol Genomics. 2005. - V. 21(3). - P. 389-395.

25. Caldas H., Fangusaro J.R., Boue D.R., Holloway M.P., Altura R.A. Dissecting the role of endothelial SURVIVIN DeltaEx3 in angiogenesis // Blood. -2007.-V. 109.-P. 1479-1489.

26. Caldas H., Honsey L.E., Altura R.A. Survivin 2a: a novel survivin splice variant expressed in human malignancies // Mol Cancer. 2005. - V. 4. - P. 11.

27. Castellone M.D., Teramoto H., Williams B.O., et al. Prostaglandin E2 promotes colon cancer cell growth through a Gs-axin-beta-catenin signaling axis // Science. 2005.-V. 310.-P. 1504-1510.

28. Cervello M., Montalto G. Cyclooxygenases in hepatocellular carcinoma. // World J. Gastroenterol.-2006.-V. 12 (32).-P. 5113-5121.

29. Chang Y.J., Wu M.S., Lin J.T., Chen C.C. Helicobacter pylori-induced invasion and angiogenesis of gastric cells is mediated by cyclooxygenase-2 induction through TLR2/TLR9 and promoter regulation // J Immunol. 2005. — V. 175.-P. 8242-8252.

30. Chantalat L., Scoufias D.A., Kleman J.P., et al. Crystal structure of survivin reveals a bow tieshaped dimmer with two unusual alpha helical extentions // Mol. Cell. 2000. - V. 6. - P. 183-189.

31. Chiou S.K., Moon W.S., Jones M.K., Tarnawski A.S. Survivin expression in the stomach: implications for mucosal integrity and protection // Biochem Biophys Res Commun. 2003. - V. 305. - P. 374-379.

32. Ghomczynski P., Sacchi N. Single-step method' of RNA isolation by acid" guanidinium thiocyanate- phenol-chloroform extraction // Anal Biochem. — 1987. -V. 162.-P. 156-159.

33. Choy M.Y., Siu S. N., Leung T. N., Lau T. K. Human decidual production of hepatocyte-growth factor is not influenced by trophoblastic invasion in vivo // Fertility and Sterility. 2004. - Vol. 82(3). - P. 1220-1225.

34. Colnaghi R., Connell C.M., Barrett R.M.A., Wheatley S.P. Separating the Anti apoptotic and Mitotic Roles of Survivin // J. Biol. Chem. 2006. - V. 281. -P.33450-33456.

35. Conway E.M., Zwerts F., Eygen V.V., et al. Survivin-dependent angiogenesis in ischemic brain, molecular mechanisms of hypoxia-induced' up-regulation // Am. J. Pathol. 2003. - V. 163. - P. 935-946.

36. Cosgrave N, Hill AD, Young LS. Growth factor-dependent regulation of survivin by c-myc in human breast cancer // J Mol Endocrinol. — 2006. V. 37(3). -P. 377-390.

37. Da C.L., Xin Y., Zhao J., Luo X.D. Significance and relationship between Yes-associated protein and survivin expression in gastric carcinoma and precancerous lesions // World J Gastroenterol. 2009. - V. 15 (32> - P. 40554061.

38. Da M.X., Wu X.T., Guo T.K., et al. Clinical significance of telomerase activity in peritoneal lavage fluid from patients with gastric cancer and its relationship with cellular proliferation // World J Gastroenterol. — 2007. V. 13 (22).-P. 3122-3127.

39. Dalwadi H, Krysan K, Heuze-Vourc'h N, et al. Cyclooxygenase-2-dependent activation of signal transducer and activator of transcription 3 by interleukin-6 in non-small cell lung cancer // Clin Cancer Res. 2005. - V. 11(21). - P. 7674-82.

40. Ding Y., Prieto V.G., Zhang P.S., et al. Nuclear expression of the antiapoptotic protein survivin in malignant melanoma // Cancer. — 2006. V. 106. -P. 1123-1129.

41. Duffy M.J., O'Donovan N., Brennan D.J., et.al. Survivin: a promising tumor biomarker // Cancer Lett. 2007. - V. 249. - P: 49-60:

42. Esteve P.O., Chin H. G., and Pradhan S. Human maintenance DNA (cytosine-5)-methytransferase and p53 modulate expression of p53-repressed promoters // PNAS. 2005. - V. 102 (4). -P. 1000-1005.

43. Fortugno P., Beltrami E., Plescia J., et al. Regulation of survivin function by Hsp90 // PNAS. 2003. - V. 100 (24). - P. 13791-13796.

44. Fujino K., Ueda M., Takehara M., et al. Transcriptional expression of survivin and its splice variants in endometriosis // Mol. Hum. Reprod. — 2006. V. 12.- P.383—388.

45. Fukuda S. and Pelus L.M. Survivin, a cancer target with an emerging role in normal adult tissues // Mol Cancer Ther. 2006. - V. 5 (5). - P. 1087-1098.

46. Fukuda S., Mantel C.R., Pelus L.M. Survivin regulates hematopoietic progenitor cell proliferation through p21WAFl/Cipl-dependent and -independent pathways // Blood. 2004. - V. 103. - P. 120-127.

47. Galizia G., Lieto E., Orditura M., et al. Epidermal growth factor receptor (EGFR) expression is associated with a worse prognosis in gastric cancer patients undergoing curative surgery // World J. Surg. 2007. - V. 31. - P. 1458-1468.

48. Gerstein E.S., Shcherbakov A.M., Kaz'min A.I., Ognerubov N.A., Kushlinskii N.E. Urokinase and tissue type plasminogen activators and their type-1 inhibitor (PAI-1) in gastric cancer // Vopr Onkol. 2003. - V. 49 (2). - P. 165-9.

49. Gonzalez L.O., Corte M.D., Vazquez J., et al. Study of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in ductal in situ carcinomas of the breast // Histopathology. 2008. - V. 53 (4). - P. 403-415.

50. Greenhough A., Smartt H.J.M., Moore A.E., Roberts H.R., et al. The COX-2/PGE2 pathway: key roles in the hallmarks of cancer and adaptation to the tumour microenvironment // Carcinogenesis. 2009. - V. 30(3). - P. 377—386.

51. Gurbuxani S, Xu Y, Keerthivasan G, et al. Differential requirements for survivin in hematopoietic cell development // Proc Natl Acad Sci USA. — 2005. -V. 102.-P: 11480-11485.

52. Haghpanah V., Shooshtarizadeh P., Heshmat R., et al. Immunohistochemical analysis of survivin expression in thyroid follicular adenoma^ and carcinoma // Appl. Immunohistochem // Mol. Morphol. 2006. - V. 14. - P. 422-425.

53. Hanley J.A. The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve // Radiology. 1989. - Vol. 143(1). - P. 29-36.

54. Hirohashi Y., Torigoe T., Maeda A. et al. An HLA-A24-restricted cytotoxic T lymphocyte epitope of a tumor-associated protein, surviving // Clin. Cancer Res.- 2002. V. 8. - P. 1731-1739.

55. Hoffman W.H., Biade S., Zilfou J.T., Chen J., Murphy M. Transcriptional repression of the anti-apoptotic survivin gene wild type p53 // J. Biol. Chem. -V.277. 2002. - P. 3247-3257.

56. II M., Yamamoto H., Adachi Y., et al. Role of Matrix Metalloproteinase-7 (Matrilysin) in- Human Cancer Invasion, Apoptosis, Growth, and Angiogenesis // Exp Biol Med. 2006. - V. 231. - P. 20-27.

57. Jeyaprakash A.A., Klein U.R., Lindner D., et al. Structure of a Survivin Borealin-INCENP Core Complex Reveals How Chromosomal Passengers Travel Together // Cell. 2007. - V. 131. - P. 271-285.

58. Jiang Y., Saavedra H.I., Holloway M.P., Leone G., Altura R.A. Aberrant Regulation of Survivin by the RB/E2F Family of Proteins // J. Biol. Chem. 2004.- V. 279. P. 40511-40520.

59. Johnson S.M., Evers B.M. Translational research in gastric malignancy // Surg. Oncol. Clin. N. Am. 2008. - V. 17. - P. 323-340.

60. Kawasaki H,! Toyoda* M; Shinohara H, et al. Expression of survivin correlates with apoptosis, proliferation, and angiogenesis during human.colorectal tumorigenesis // Cancer. 2001. - V. 91(11). - P. 2026-2032.

61. Kawasaki K, Kawakami T, Watabe H, Itoh F, Mizoguchi M,, Soma Y. Expression of matrilysin (matrix metalloproteinase-7) in primary cutaneous and metastatic melanoma // Br. J. Dermatol. 2007. - V. 156 (4). - P. 613-619.

62. Koch C.A., Vortmeyer A.O., Diallo R., et al. Survivin: a novel neuroendocrine marker for pheochromocytoma // Eur. J. Endocrinol. 2002. - V. 146.-P. 381-388.

63. Konno R., Yamakawa H., Utsunomiya H., et al. Expression of survivin and Bcl-2 in the normal human endometrium // Mol. Hum. Reprod. 2000. - V. 6. — P. 529-534.

64. Konturek P.C., Kania J., Burnat G., Hahn E.G., Konturek S.J. Prostaglandins as mediators of COX-2 derived carcinogenesis in gastrointestinal tract // J Physiol Pharmacol. 2005. - V. 56 . - P. 57-73.

65. Krieg A., Mahotka C., Krieg T., et al. Expression of different survivin variants in gastric carcinomas: first clues to a role of survivin-2B in tumour progression // Br. J. Cancer. 2002. - V. 86. - P. 737-743.

66. Krysan K., Merchant F.H., Zhu L., COX-2-dependent stabilization of survivin in non-small cell lung cancer // FASEB J. 2004. - V. 18 (1). - P. 206208.

67. Lauren P. The two histological main types of gastric carcinoma: diffuse and so-called intestinal-type carcinoma. An attempt at a histo-clinical classification // Acta Pathol Microbiol Scand. 1965. -V. 64. - P. 31-49.

68. Lee K.E., Lee H.J., Kim Y.H., et al. Prognostic significance of p53, nm23, PCNA and c-erbB-2 in gastric cancer // Jpn J Clin Oncol. 2003. - V. 33 (4). - P. 173-9.

69. Lee K.H., Shin S.J., Kim K.O., et al. Relationship between E-cadherin, matrix, metalloproteinase-7 gene expression and1 clinicopathological features, in, gastric carcinoma // Oncol Rep. 2006. - V. 16 (4). - P. 823-830.

70. Li F., Altieri D.C. Transcriptional analysis of human survivin gene expression // Biochem. J. 1999. -V. 344. - P. 305-311.

71. Li Y-J., Wei Z.-M., Meng Y-X., Ji X.-R. (3-catenin up-regulates the expression of cyclinDl, c-myc and MMP-7 in human pancreatic cancer: Relationships with carcinogenesis and metastasis // World J Gastroenterol. 2005. -V. 11 (14).-P.2117-2123.

72. Lin L.J., Zheng C.Q., Jin Y., Ma Y., Jiang W.G., Ma T. Expression of survivin protein in human colorectal carcinogenesis // World J. Gastroenterol. — 2003.-V.9.-P. 974-977.

73. Ling X., Yang J., Tan D., et al. Differential expression of survivin-2B and survivin-DeltaEx3 is inversely associated with disease relapse and patient survival in non-small-cell lung cancer // Lung Cancer. 2005. - V. 49. - P. 353-361.

74. Liu D., Nakano J., Ishikawa S., et al. Overexpression of matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) correlates with tumor proliferation, and a poor prognosis in non-small cell lung cancer // Lung Cancer. — 2007. — V. 58 (3). P. 384-391.

75. Lo C.Y., Lam K.Y., Leung P.P., Luk J.M. High prevalence of cyclooxygenase 2 expression in papillary thyroid carcinoma // European Journal of Endocrinology. 2005. - Vol. 152(4). - P. 545-550.

76. Lohr K., Moritz C., Contente A., and Dobbelstein Mi p21/CDKNlA Mediates Negative Regulation of Transcription by p53 // J. Biol. Chem. 2003. -V. 278.(35). -P. 32507-32516.

77. Lu C.D, Altieri D.C., Tanigawa N. Expression of A Novel Antiapoptosis Gene, Survivin, Correlated with Tumor Gell Apoptosis and p53' Accumulation in Gastric Carcinomas // Cancer Res. 1998. - V. 58. - P. 1808-1812.

78. Ma H., Nguyen C., Lee K.S., Kahn M. Differential roles for the coactivators CBP and p300 on TCF/beta-catenin-mediated survivin gene expression // Oncogene. -2005. -V. 24 (22). -P. 3619-3631.

79. Mahboubi K., Li F., Plescia J., et al. Interleukin-11 up-regulates surviving expression in endothelial cells through a signal transducer and activator of transcription-3 pathway // Lab Invest. 2001. - V. 81. - P. 327-334.

80. Mahotka C., Krieg T., Krieg A., et al. Distinct in vivo expression patterns of survivin splice variants in renal cell carcinomas // Int. J. Cancer. 2002. - V. 100. -P. 30-36.

81. Malcles M.H., Wang H.W., Koumi A., et al. Characterisation of the anti-apoptotic function of survivin-DeltaEx3 during TNFalpha-mediated cell death // Br. J. Cancer. 2007. - V. 96. - P. 1659-1666.

82. Meng H., Lu C.D., Sun Y.L., Dai D.J., Lee S.W., Tanigawa N. Expression level of wild-type survivin in gastric cancer is an independent predictor of survival // World J Gastroenterol. 2004. - V. 10 (22). - P. 3245-3250

83. Nakano J., Huang C., Liu D., et.al. The clinical significance of splice variants and subcellular localisation of survivin in non-small cell lung cancers // Br J Cancer. 2008. - V. 98(6). - P. 1109-1117.

84. Noton E.A., Colnaghi R., Tate Sh., et al. Molecular Analysis of Survivin Isoforms. Evidence that alternatively spliced variants do not play a role in mitosis // J. Biol. Chem. 2006. - V. 281. - P. 1286-1295.

85. Nzeako U.C., Guicciardi M.E., Yoon J.H., Bronk S.F., Gores G.J. COX-2 inhibits Fas-mediated apoptosis in cholangiocarcinoma cells // Hepatolog. 2002. -V. 35 (3).-P. 552-559.

86. O'Connor D.S., Grossman D., Plescia J., Li F., et al. Regulation of apoptosis at cell division by p34cdc2 phosphorylation of survivin // Proc Natl Acad Sci USA. -2000. — V. 97.-P. 13103-13107,

87. O'Connor D.S., Schechner J.S., Adida C., et al. Control of apoptosis during angiogenesis by survivin expression in endothelial cells // Am. J. Pathol. — 2000. —1. V. 156.-P. 393-398.i

88. Okada H., Bakal C., Shahinian A., et al. Survivin loss in thymocytes triggers p53 mediated growtharrest and p53-independent cell death // J Exp Med. 2004. -V.-199.-P. 399-410.

89. Ozaki I., Mizuta T., Zhao G., et al. Involvement of the Ets-1 gene in overexpression of matrilysin in human hepatocellular carcinoma // Cancer Res. -2000. -V. 60 (22). P. 6519-6525.

90. Pai R., Soreghan B., Szabo I.L., et al. Prostaglandin E2 transactivates EGF receptor: a novel mechanism for promoting colon cancer growth and gastrointestinal hypertrophy //Nat Med. 2002. - V. 8(3). - P. 289-293.

91. Qin Z.K., Zhou F.J., Dai Y.P:, et al. Expression and clinical significance of survivin and PTEN in adrenal tumors // Ai Zheng. 2007. - V. 26. - P. 11431147.

92. Raj D, Liu T, Samadashwily G, Li F, Grossman D. Survivin repression by p53, Rb and E2F2 in normal human melanocytes // Carcinogenesis. 2008. - V. 29.-P: 194-201.

93. Rosa J., Canovas P., Islam A., Altieri D.C., Doxsey S J. Survivin Modulates Microtubule Dynamics and Nucleation throughout the Cell Cycle // Mol. Biol. Of Cell:-2006.-V. 17.-P. 1483-1493.

94. Sah N.K., Khan Z., Khan G.J., Bisen P.S. Structural, functional and therapeutic biology of survivin // Cancer Letters. 2006. - V. 244. - P. 164-171.

95. Samaka R.M., Abdou A.G., Abd El-Wahed M.M., et al. Cyclooxygenase-2 Expression in Chronic Gastritis and Gastric Carcinoma, Correlation with Prognostic Parameters // J Egypt Natl Cane Inst. 2006. - V. 18(4). - P. 363-374.

96. Schwandner O., Schlamp A., Broil R., Bruch H.P. Clinicopathologic and' prognostic significance of matrix metalloproteinases in rectal cancer // Int J Colorectal Dis.- 2007. V. 22 (2). - P. 127-136.

97. Shen C., Hu L., Xia L., Li Y. Quantitative real-time RT-PCR detection for survivin, CK20 and CEA in peripheral blood of colorectal cancer patients // Jpn. J. Clin. Oncol. 2008. - V. 38. - P. 770-776.

98. Sheng H., Shao J., Morrow J.D., Beauchamp R.D., DuBois R N. Modulation of apoptosis and Bcl-2 expression by prostaglandin E2 in human colon cancer cells // Cancer Res. 1998. - V. 58. - P. 362-366.

99. Smith,W.L., DeWitt D.L., and Garavito R.M. Cyclooxygenases: structural, cellular, and molecular biology // Annu. Rev. Biochem. 2000 — V. 69. - P. 145182

100. Span P.N., Tjan-Heijnen V.C., Heuvel J.J., et al. Do the survivin (BIRC5) splice variants modulate or add to the prognostic value of total survivin in breast cancer? // Clin. Chem. 2006. - V. 52. - P. 1693-1700.

101. Sun W.H., Sun Y.L., Fang R.N., et al. Expression of Cyclooxygenase-2 and Matrix Metalloproteinase-9 in Gastric Carcinoma and its Correlation with Angiogenesis // Jpn. J. Clin. Oncol. 2005. - V. 35 (12). - P. 707-713.

102. Suzuki A., Hayashida M., Ito T., et al. Survivin initiates cell cycle entry by the competitive interaction with Cdk4/pl6(INK4a) and Cdk2/cyclin E complex activation // Oncogene. 2000. - V. 19 (29). - P. 3225-3234.

103. Suzuki A., Ito T., Kawano H., et al. Survivin initiates procaspase 3/p21 complex formation as a result of interaction with Cdk4 to resist Fas-mediated cell death//Oncogene.-2000.-V. 19.-P. 1346-1353.

104. Taubert H., Kappler M., Bache M., et al. Elevated expression of survivin-splice variants predicts a poor outcome for soft-tissue sarcomas patients // Oncogene. -2005. -V. 24. P. 5258-5261.

105. Teh S.H., Hill A.K., Foley D.A., et al. COX inhibitors modulate bFGF-induced cell survival in MCF-7 breast cancer cells // J. Cell. Biochem. 2004. - V. 91 (4).-P. 796-807.

106. Tessner T.G., Muhale F., Riehl T.E. et al. Prostaglandin E2 reduces radiation-induced epithelial apoptosis through a mechanism involving AKT activation and bax translocation // J. Clin. Invest. 2004. - V. 114(11). - P. 16761685.

107. Udayakumar T.S., Stratton M.S., Nagle R.B., Bowden G.T. Fibroblast growth factor-1 induced promatrilysin expression through the activation of extracellular regulated kinases and STAT3 // Neoplasia. 2002. - V. 4 (1). - P. 60-67.

108. UICC & AJCC Cancer Staging Manual, 5th Edition. Lippincott7 Raven Pubis. - 1997.

109. Varro A., Kenny S., Hemers E., et al. Increased gastric expression of MMP-7 in hypergastrinemia and significance for epithelial-mesenchymal signaling // Am J. Physiol. Gastrointest // Liver Physiol. 2007. - V. 292(4). - P: 1133-1140.

110. Vegran F, Boidot R, Oudin C, et al. Association of p53 gene alterations with the- expression of antiapoptotic survivin splice variants in breast cancer // Oncogene.-2007.-V. 26. -P. 290-297. • ■

111. Verdecia M.A., Huang H., Dutil E., Kaiser D.A., Hunter T., Noel J.P. Structure of the- human anti-apoptotic protein survivin> reveal's' a• dimeric arrangement // Nat. Struct. Biol. 2000. - V. 7(7). - P. 602-608.

112. Voutsadakis I.A. Pathogenesis of colorectal carcinoma and therapeutic implications:the roles of the ubiquitin-proteasome system and Cox // J. Cell. Moll Med. V. 11 (2).-2007.-P. 252-285.

113. Wang R.H., Zheng Y., Kim H.S., et al. Interplay among BRCA1, SIRT1, and Survivin during BRCA1-associated tumorigenesis // Mol Cell. - 2008. - V. 32. -P. 11-20.

114. Wheatley S.P., Barrett R.M., Andrews P.D., et al. Phosphorylation by aurora-B negatively regulates survivin function during mitosis // Cell Cycle. -2007. -V. 6. P. 1220-1230. 32.

115. Wroblewski L. E. Noble P.-J. M., Paglioccal A., et al. Stimulation of MMP-7 matrilysin) by Helicobacter pylori in human gastric epithelial" cells: role in epithelial cell migration // Journal of Cell Science. 2003. - V. 116. - P. 30173026.

116. Wu C.Y., Wang C.J., Tseng C.C., et al. Helicobacter pylori promote gastric cancer cells invasion through a NF-kappaB and COX-2-mediated pathway // World'J Gastroenterol. 2005. - V. 11(21). - P. 3197-203.

117. Wu K. K. Transcription-based COX-2 inhibition: A therapeutic strategy // Thromb, Haemost. 2006. - V. 96(4). - P. 417-422.

118. Xing Z., Conway E.M., Kang C., Winoto A. Essential role of survivin, an inhibitor of apoptosis protein, in T cell development, maturation, and homeostasis // J Exp Med. 2004. - V. 199. - P. 69-80.

119. Xue Y.W., Zhang Q.F., Zhu Z.B., Wang Q., Fu S.B. Expression of cyclooxygenase-2 and clinibopathologic features in human gastric adenocarcinoma // World J Gastroenterol. 2003. - V. 9 (2). - P. 250-253

120. Yamada Y., Kuroiwa, T., Nakagawa, T., et al. Transcriptional expression of survivin and its splice variants in brain tumors in humans // J. Neurosurg. 2003. -V. 99.-P. 738-745.

121. Yamamoto H., Horiuchi S., Adachi Y., et al. Expression of ets-related transcriptional factor E1AF is associated with tumor progression and overexpression of matrilysin in human gastric cancer // Carcinogenesis. 2004. - V. 25 (3).-P. 325-332,

122. Yeh T-S., Wu C-W, Hsu K-W, et al. The Activated Notchl Signal Pathway Is Associated with Gastric Cancer Progression through Cyclooxygenase-2 // Cancer Res. 2009. - V. 69(12). - P. 5039-5048

123. Yin Y., Grabowska A.M., Clarke P.A., et al. Helicobacter pylori potentiates epithelial ¡mesenchymal transition in gastric cancer: links to soluble HB-EGF, gastrin and matrix metalloproteinase-7 // Gut. 2010. - V. 59(8). - P. 1037-1045.

124. You R.I., Chen M.C., Wang H.W., et al. Inhibition of Lymphotoxin-B Receptor-Mediated Cell Death by Survivin-dEx3 // Cancer Res. 2006. - V. 66. -P. 3051-3061.

125. Yu J., Leung W.K., Ebert M.P., et al. Increased expression of survivin in gastric cancer patients and in first degree relatives // Br. J. Cancer. — 2002. — V. 87. -P.91-97.

126. Zhang J.T., Wang M.W., Zhu Z.L., et al. Increased expression of cyclooxygenase-2 in first-degree relatives of gastric cancer patients // World J Gastroenterol. -2005. -V. 11 (31). -P. 4918-4922.

127. Zhang M., Yang J., Li F. Transcriptional and post-transcriptional controls of survivin in cancer cells: novel approaches for cancer treatment // J Exp Clin Cancer Res. 2006. - V. 25 (3). - P. 391-402.

128. Zhao J., Tenev T., Martins L.M., Downward J., Lemoine N.R. The ubiquitin-proteasome pathway regulates survivin degradation in a cell cycle-dependent manner // J Cell Sci. 2000. - V. 113. - P. 4363-4371.

129. Ziaee S.A., Moula S.J., Hosseini Moghaddam S.M., Eskandar-Shiri D. Diagnosis of bladder cancer by urine survivin, an inhibitor of apoptosis: a preliminary report // Urol. J. 2006. - V. 3. - P. 150-153.

130. Zweig M.H. Receiver-operating characteristic (ROC) plots: A fundamental evaluation tool in clinical medicine // Clin. Chem. 1993. - V. 39(4). - P. 561— 577.