Изучение роли неканонической молекулы главного комплекса гистосовместимости человека HLA-E в регуляции противоопухолевого иммунного ответа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Закеева, Ирина Рафаиловна

• Закеева, Ирина Рафаиловна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Закеева, Ирина Рафаиловна

Страница

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Ингибиторные рецепторы лимфоцитов и их роль в противоопухолевом иммунитете

1.1. Иммунотерапия онкологических заболеваний

1.1.1 Роль иммунной системы в противоопухолевой защите.

1.1.2 Использование моноклональных антител в иммунотерапии

1.1.3 Использование иммуномодуляторов для стимуляции противоопухолевого иммунного ответа.

1.1.4 Противоопухолевая вакцинация.

1.2. Ингибиторные рецепторы лимфоцитов и их лиганды.

1.2.1. Ингибиторные рецепторы, распознающие константную

часть молекул иммуноглобулинов.

1.2.2. Ингибиторные рецепторы, распознающие молекулы главного комплекса гистосовместимости.

Иммуноглобулипоподобные рецепторы киллерпых клеток.

Рецепторы CD94/NKG2.

Рецепторы семейства Ly49.

1.2.3. Ингибиторные рецепторы, распознающие молекулы

В7 семейства.

Молекула CTLA-4.

Молекула PD-1.

Молекула BTLA

1.3. Роль ингибиторных рецепторов и их лигандов в противоопухолевом иммунитете.

1.4. Неканоническая молекула МНС lb класса HLA-E.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Ферменты и реактивы „

2.2. Клеточные линии

2.3. Электрофорез в ДСН-ПААГ и иммуноблот-анализ

2.4. Выделение тотальной РНК из клеток меланомы человека.

2.5. ПЦР в реальном времени

2.6. Проточная цитометрия

2.7. Анализ клеточной цитотоксичности.

2.8. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Анализ экспрессии мРНК молекулы HLA-E в клетках меланомы человека

3.2. Анализ присутствия белка HLA-E в клетках меланомы человека.,

3.3. Поверхностная локализация молекул HLA-E в клетках меланомны человека.

3.4. Экспрессия HLA-E в клетках меланомы человека под действием INF-y

3.5. INF-y стимулирует транспорт молекул HLA-E на клеточную мембрану.

3.6. Участие протеасомной деградации белков в INF-y стимулированной презентации молекул HLA-E на поверхности клеток.

3.7. Выход молекулы HLA-E на поверхность клеток под действием INF-y защищает клетки меланомы от цитотоксического действия лимфоцитов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение роли неканонической молекулы главного комплекса гистосовместимости человека HLA-E в регуляции противоопухолевого иммунного ответа»

В настоящее время наблюдается значительный рост числа онкологических заболеваний. Несмотря на разработку многочисленных современных подходов к терапии опухолей, раковые заболевания до сих пор занимают верхние строки в списке причин смерти в большинстве развитых стран. Большинство нехирургических методов лечения, таких как лучевая и химиотерапия, направлены на уничтожение трансформированных клеток, однако при этом страдают нормальные клетки, что вызывает множество побочных эффектов. Использование возможностей иммунной системы для лечения онкологических заболеваний позволяет избежать данных побочных эффектов.

За последнее десятилетие был совершён прорыв в области молекулярной онкоиммунологии, который послужил толчком к разработке многочисленных иммунотерапевтических методов борьбы с трансформированными клетками. Однако и иммунотерапия при внедрении в клиническую практику не всегда даёт положительных результатов [81; 128]. Одним из возможных объяснений недостаточной эффективности различных методов иммунотерапии является ускользание опухолевых клеток от иммунного надзора или индукция трансформированными клетками толерантности опухолеспецифических лимфоцитов.

Описано несколько механизмов, благодаря которым опухоли могут избегать иммунологического надзора: возникновение вариантов раковых клеток с утерей антигенов [155], локальная экспрессия ингибиторных молекул, таких как трансформирующий фактор роста (TGF-P) [151] и Fas лиганд [52], снижение уровня процессинга и презентации антигенов [123], а также потеря молекул МНС на клеточной поверхности [54]. Казалось бы, в случае снижения или полного исчезновения молекул МНС на поверхности, опухолевые клетки с одной стороны избегают лизиса цитотоксическими Т-лимфоцитами (CTL), но с другой стороны становятся идеальными мишенями для естественных киллерных клеток (NK). Однако было показано, что подобные клетоки часто не чувствительны к NK клеточной цитотоксичности, то есть существует дополнительный, не выявленный ранее механизм ускользания опухолевых клеток от иммунологического надзора. Возможно, что одним из механизмов может быть использование трансформированными клетками ингибиторных сигнальных путей CTL и NK клеток. Считается, что связывание ингибиторных рецепторов на поверхности CTL с соответствующими лигандами представленными на поверхности клеток-мишеней может подавлять эффекторные функции лимфоцитов [86]. Ряд человеческих ингибиторных рецепторов, распознающих молекулы МНС, включает в себя иммуноглобулиноподобные рецепторы киллерных клеток, узнающие классические молекулы МНС класса la (HLA-A, HLA-B, HLA-C) и молекулу HLA-G [165], а также рецепторы лектинового семейства NKG2, распознающие неканоническую молекулу главного комплекса гистосовместимости HLA-E [16].

В 1998 году группа исследователей определила, что HLA-E является основным лигандом гетеромерной молекулы CD94/NKG2A - ингибиторного рецептора большинства NK клеток и у8 Т-клеток, а также значительной части ар Т-лимфоцитов [16; 18]. А в работе М. Ulbrecht и коллег было продемонстрировано использование цитомегаловирусом ингибиторной функции молекулы HLA-E для избежания лизиса заражённых клеток NK клетками, путём предоставления мимикрирующего лидерную последовательность HLA-C нанопептида [154]. Таким образом, существует гипотеза о том, что опухолевые клетки со сниженным уровнем МНС класса

Ia могут взамен увеличивать выход на поверхность неканонических молекул МНС, чтобы избежать как CTL, так и NK клеточной цитотоксичности [105; 134].

В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования являлось изучение возможной роли неканонической молекулы главного комплекса гистосовместимости человека HLA-E в регуляции противоопухолевого иммунного ответа.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи.

1. Определить уровень экспрессии молекулы HLA-E в клеточных линиях меланомы человека.

2. Оценить уровень представления молекулы на поверхности опухолевых клеток.

3. Исследовать влияние факторов опухолевого микроокружения на экспрессию и представленность на клеточной поверхности молекул HLA-E.

4. Изучить влияние экспрессии молекул HLA-E на цитотоксичность NK клеток в отношении клеток меланомы человека.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Закеева, Ирина Рафаиловна

выводы

1. Показана экспрессия мРНК неканонической молекулы HLA-E во всех покоящихся клетках меланомы человека, соизмеримая с экспрессией классических молекул главного комплекса гистосовместимости человека 1а класса, а также наличие полноразмерного белкового продукта гена HLA-E в большинстве исследуемых клеточных линий меланомы человека.

2. Выход белка HLA-E на клеточную поверхность в покое происходит в 25% исследуемых линий меланомы человека.

3. Продемонстрирована дозозависимая индукция экспрессии INF-y молекул HLA-E в опухолевых клетках.

4. Показано, что выход на поверхность клеток меланомы человека молекул HLA-E увеличивается под действием INF-y и характерен для всех клеточных линий, имеющих молекулы МНС 1а касса и функциональный Рг-микроглобулин.

5. Впервые показано, что стимулирование INF-y выхода на поверхность клеток молекулы HLA-E зависит от эффективного процесса генерирования пептидов протеасомой.

6. Впервые продемонстрировано, что присутствие неканонической молекулы HLA-E на поверхности клеток-мишеней приводит к защите последних от NK-клеточной цитотоксичности, то есть, получено экспериментальное подтверждение предполагаемого механизма HLA-E опосредованного ускользания опухолевых клеток от иммунного надзора.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе была проанализирована экспрессия неканонической молекулы главного комплекса гистосовместимости lb класса HLA-E в клетках меланомы человека. Было обнаружено, что мРНК гена HLA-E присутствовал во всех покоящихся клетках меланомы в количестве сопоставимом с количеством мРНК классических молекул МНС I класса. Также было обнаружено, что происходит синтез полноразмерной молекулы HLA-E в клетках меланомы. Однако в разных клеточных линиях были выявлены вариации в количестве белка. Полученные результаты указывали на возможное существование регуляции экспрессии на посттранскрипционном уровне. Ранее, в работах по изучению стабильности молекул главного комплекса гистосовместимости было продемонстрировано, что неканонические молекулы обладают более коротким временем жизни в клетках, особенно, если в клетках отсутствуют молекулы р2-микроглобулина и/или необходимые для загрузки в тяжелую цепь молекулы нанопептиды, то есть в отсутствие необходимых условий для выхода молекулы на поверхность клетки. Поскольку нарушения вышеуказанных условий мы наблюдали лишь в одной клеточной линии (Mel Ког), у которой нарушен ген р2-микроглобулина, то мы предположили присутствие молекулы на клеточной поверхности.

При исследовании локализации молекулы HLA-E на поверхности покоящихся клеток меланомы человека методом проточной цитометрии белок был обнаружен на клеточной мембране в 25% клеточных линий. Таким образом, выход на поверхность белка даже при наличии в клетке всех участников формирования мембраносвязанного комплекса HLA-E по какой-то причине не происходило. Для выявления причин подобного нарушения процесса выхода на поверхность клеток, мы решили проверить влияние микроокружения, в котором клетки опухоли находятся во время активации иммунного ответа. Нами был выбран наиболее важный участник регуляции иммунного ответа на трансформированные клетки - это цитокин INF-y. Важной предпосылкой в выборе послужило открытие ранее INF-y-регулируемых элементов в промоторной области гена HLA-E.

Анализ экспрессии и транспорта на клеточную поверхность под действием INF-y подтвердил существование регуляции экспрессии гена на уровне транскрипции - было выявлено увеличение количества мРНК HLA-E в среднем в 5.5 раз по сравнению с нестимулируемыми клетками, что приводило к выравниваю внутриклеточного белка и сопровождалось выходом молекул на поверхность клеток меланомы. Таким образом, можно было бы предположить, что улучшение транспорта белка HLA-E на поверхность происходит из-за увеличения количества тяжёлых цепей. Однако, наличие таких клеточных линий как, например, Mel МТР, в которой было обнаружено большое количество полноразмерной молекулы HLA-E при отсутствии окрашивания белка мАТ анти-HLA-E на поверхности, указывало на существование дополнительного механизма, стимулируемого присутствием рекомбинантного человеческого INF-y в культуральной среде.

Поскольку большое количество биохимических работ о свойствах белка HLA-E указывало на стабилизацию молекулы за счёт пептидов из сигнальных последовательностей классических молекул МНС I класса и неканонической молекулы HLA-G, то мы решили исследовать возможное участие INF-y в этом процессе. Известно, что большинство пептидов для классических молекул МНС 1а класса образуется из белков в цитоплазме клетки в процессе их деградации по убиквитин-протеасомному пути. При этом было показано, что INF-y способен менять качественный состав протеасомы, заменяя несколько субъединиц на INF-у-индуцибельные белки, а также индуцировать ряд протеасом-ассоциированных регуляторов. Роль индукции INF-y в протеасомном расщеплении белков до конца не изучена. Одни исследователи считают, что подобная замена приводит к формированию специфических антигенных пептидов для классических МНС, однако чёткого доказательства данного утверждения получено не было. Альтернативный механизм воздействия INF-y на формирование иммунопротеасом был предложен Peter Kloetz с коллегами в опытах по инфицированию HeLa клеток вирусом коровьей оспы со вставленным главным антигеном вируса гепатита В (HBVcAgni.isi) [136]. Авторами было показано, что для эффективного высвобождения и презентации эпитопов HBVcAgi41.15I необходима стимуляция HeLa клеток INF-y. При этом с помощью масс-спектрометрии было показано, что конститутивная 26 S протеасома также способна экспрессировать HBVcAgi4i.i51 эпитоп, однако с меньшей (на порядок) эффективностью. Таким образом, авторам удалось показать, что формирование под воздействием INF-y иммунопротеасом может быть важно не столько в плане изменения профиля получаемых пепетидов, сколько в скорости, а, соответственно, в количестве генерированных пептидов.

В данной работе нам впервые удалось показать, что в индуции INF-y транспорта на клеточную поверхность молекул HLA-E задействован механизм расщепления сигнального пептида протеасомой. При применении ингибитора протеасомной деградации белка ALLN происходило блокирование выхода на клеточную поверхность молекулы HLA-E даже в условиях стимуляции INF-y. Значит, INF-y стимулирует выход белка HLA-E на поверхность клетки не только путём увеличения количества молекул HLA-E в клетке, но также способен действовать на уровне обеспечения необходимыми пептидами, то есть стабилизации молекулы на клеточной поверхности.

Итак, в наших экспериментах было обнаружено, что поверхностная фракция молекул HLA-E в покоящихся клетках меланомы представлена у 25% клеточных линий, при этом индукция и выход на поверхность молекул в оставшихся клеточных линиях происходит под действием INF-y, то есть в условиях имитации микроокружения опухолевых клеток in vivo. Однако, самым важным в изучении роли молекулы HLA-E явилось проведение функционального теста на выявление способности клеток защищать опухолевые клетки от цитолитического воздействия клеток NKL.

Клетки линии NKL, которые являются производными NK клеток, были выбраны нами из-за присутствия на их поверхности исключительно рецепторов лектинового семейства NKG2, единственным лигандом которых является молекула HLA-E. В экспериментах с NKL клетками в качестве цитотоксических и исследуемых клеток меланомы человека в качестве клеток-мишеней было продемонстрировано, что присутствие белка HLA-E на поверхности опухолевых клеток способно вызывать устойчивость к лизису со стороны цитотоксических клеток. При этом эффект защиты клеток-мишеней зависел напрямую от плотности белка на клеточной мембране, то есть при стимулировании INF-y мы наблюдали максимальную защиту от цитотоксического лизиса NKL клетками.

Таким образом, нам удалось не только продемонстрировать экспрессию молекулы HLA-E в клетках меланомы человека, показать индукцию экспрессии под действием INF-y и зависимость этого процесса от презентации пепетидов протеасомой, но также выявить непосредственную роль молекулы HLA-E в защите опухолевых клеток от лизиса со стороны цитотоксических клеток.

Полученные данные, несомненно, имеют важное значение в понимании процессов формирования толерантности опухолевыми клетками к иммунному воздействию со стороны организма. Поиск путей ингибирования показанного в данной работе механизма ускользания трансформированных клеток или блокирование мАТ как рецепторов, так и самой молекулы HLA-E, может значительно улучшить эффективность имеющихся протоколов иммунотерапии злокачественных новообразований.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Закеева, Ирина Рафаиловна, 2006 год

1. Бачдуева И.А. Противоопухолевые вакцины // Практ. Онкол. 2003. - Т. 4, № 3. -С. 157-166.

2. Михайлова КН., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Меланомные клеточные линии как основа противоопухолевых вакцин // Вестн. Росс. Акад. Мед. Наук. -2005.-Т. 7.-С. 37-40.

3. Моисеенко В.М. Возможности вакцинации меланомы кожи // Практ. Онкол. 2001. -Т. 8, №4.-С. 58-64.

4. Моисеенко В.М. Моноклональные антитела в лечении злокачественных опухолей // Практ.Онкол. 2003. - Т. 4, № 3.- С. 148-156.

5. Adam J.K., Odhav В., Bhoola K.D. Immune responses in cancer // Pharm. Therapeut. -2003.-Vol. 99.-P. 113-132.

6. Adams G.P., Weiner L.M. Monoclonal antibody therapy of cancer // Nat. Biotechnol. -2005.-Vol. 23, №9.-P. 1147-1157.

7. Ansari M.J.I., SalamaA.D., Chitnis T. et al. The programmed death-1 (PD-1) pathway regulates autoimmune diabetes in nonobese4 diabetic (NOD) mice // J. Exp. Med. -2003.-Vol. 198.-P. 63-69.

8. Atzpodien J., Hoffmann R., Franzke M. et al. Thirteen-year, long-term efficacy of interferon 2 alpha and interleukin 2-based home therapy in patients with advanced renal cell carcinoma // Cancer. 2002. - Vol. 95. - P. 1045-1050.

9. Banchereau J., Palucka A.K., Dhodapkar M. et al. Immune and clinical responses in patients with metastatic melanoma to CD34+ progenitor-derived dendritic cell vaccine //Cancer Res.-2001.-Vol. 61.-P. 6451 6458.

10. Barrett D.M., Gustafson K.S., Wang J. et al. A GATA factor mediates cell type-restricted induction of HLA-E gene transcription by gamma interferon // Mol. Cel. Biol. 2004. - Vol. 24, № 14. - P. 6194-6204.

11. Banco Z, Bene L., Damjanovich L., Damjanovich S. INF-gamma rearranges membrane topography of MHC-I and ICAM-1 in colon carcinoma cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. - Vol. 290. - P. 635-640.

12. Belli F., Testori A., Rivoltini L. et al. Vaccination of metastatic melanoma patients with autologous tumor derived heat shock protein gp96-peptide complexes: clinical and immunologic findings // J. Clin. Oncol. 2002. - Vol. 20. - P. 4169 4180.

13. Blattman J.N., Greenberg P.D. PD-1 blockade: rescue from a near-death experience // Nat. Immunol. 2006. - Vol. 7. - P. 227-228.

14. Braud V., Jones E.Y., McMichael A. The human major histocompatibility complex class lb molecule HLA-E binds signal sequencederived peptides with primary anchor residues at positions 2 and 9 // Eur. J. Immunol. 1997. - Vol. 27. - P. 1164 1169.

15. Braud V.M., Allan D.S., O'Callaghan C.A. et al. HLA-E binds to natural killer cell receptors CD94/NKG2A, В and С // Nature. 1998. - Vol. 391. - P. 795-799.

16. Burowski R., Ernstoff M.S. Gore M.E. et al. Regulated interferon alfa-2b treatment for patients with solid tumours: a phasel/II study // J. Clin. Oncol. 2002. - Vol. 20. - P. 3841-3849.

17. Cebon J., Jager E., Shackleton M.J. et al. Two phase I studies of low dose recombinant human IL-12 with Melan-A and influenza peptides in subjects with advanced malignant melanoma // Cancer Immun. 2003. - Vol. 3. - P. 3.

18. Cerboni C., Mousavi-Jazi M., Wakiguchi H. et al. Synergistic effect of IFN-gamma and human cytomegalovirus protein UL40 in the HLA-E-dependent protection from NK cell-mediated cytotoxicity // Eur. J. Immunol. 2001. - Vol. 31. - P. 2926-2935.

19. Cerudolo V., Kelly A., Elliott Т., Trowsdale J., Townsend A. Genes encoded in the major histocompatibility complex affecting the generation of peptides for TAP transport // Eur. J. Immunol. 1995. - Vol. 25. - P. 554-562.

20. Chen E., Karr R.W., GinderGD. Negative and positive regulation of human leukocyte antigen class I gene transcription in K562 leukemia cells // Mol. Cell Biol. 1987. -Vol. 7, № 12.-P. 4572-4575.

21. Chen L. Co-inhibitory molecules of the B7-CD28 family in the control of T-cell immunity // Nat. Rev. Immunol. 2004. - Vol. 4. - P. 336-346.

22. Choi I.H., Zhu G., Sica G.L. et al. Genomic organization and expression analysis of B7-H4: an immune inhibitory molecule of the B7 family // J. Immunol. -2003. Vol. 171. - P. 4650-4654.

23. Coley W.B. Treatment of inoperable malignant tumors with the toxins of erysipelas and the Bacillus prodigiosus // Trans. Amer. Surg. Assn. 1894. - Vol. 12. - P. 183-212.

24. Collins A.V., Brodie D.W., Gilbert R.J.C. et al. The interaction properties of costimulatory molecules revisited// Immunity. -2002. Vol. 17. - P. 201-210.

25. Cruz M„ Eienich L.A., Smolarek T.A. et al. DNA sequence, chromosomal localization and tissue expression of the mouse proteasome subunits LMP10 (Psm 10) gene // Genomics. 1997. - Vol. 45. - P. 618-622.

26. Curiel T.J., Wei S., Dong H. et al. Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity // Nat. Med. 2003. - Vol. 9. - P. 562-567.

27. Daeron M, Latour S., Malbec O. et al. The same tyrosine-based inhibition motif, in the intracytoplasmic domain of Fc gamma RIIB, regulates negatively BCR-, TCR-, and FcR-dependent cell activation // Immunity. 1995. - Vol. 5. - P. 635-646.

28. DeLeo A.B., Jay G., Appella E. et al. Detection of a transformation-related antigen in chemically induced sarcomas and other transfromed cells of the mouse // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. - Vol. 5. - P. 2420-2424.

29. Derre L„ Corvaisier M., Charreau B. et al. Expression and release of HLA-E by melanoma cells and melanocytes: potential impact on the response of cytotoxic effector cells // J. Immunol. 2006. - Vol. 177, № 5. - P. 3100-3107.

30. Dohring C., Scheidegger D., Samaridis J. et al. A human killer inhibitory receptor specific for HLA-A // J. immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 3098-3101.

31. Dong H„ Strome S.E., Salomao D.R. et al. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion // Nat. Med. 2002. - Vol. 8. - P. 793-800.

32. Dong H., Zhu G., Tamada K., Chen L. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion // Nat. Med. 1999. - Vol. 5. -P. 1365-1369.

33. Dorval Т., Palangie Т., Jouve M. et al. Treatment of metastatic melanoma with recombinant interferon alfa-2b // Invest. New Drugs. 1087. - Vol. 5. - P. S61-S63.

34. Driscoll J., Brown M.G., Finley D., Monaco J.J. МНС-linked LMP gene products specially after peptidase activities of the proteasome // Nature. 1993. - Vol. 365. - P. 262-264.

35. Dudley M.E., Wunderlich J.R., Robbins P.F. et al. Cancer regression and autoimmunity in patients after clonal repopulation with antitumor lymphocytes // Science. 2002. -Vol. 298.- P. 850-854.

36. Dutta N., Gupta A., Mazumber D., Banerjee S. Down-regulation of locus-soecific human lymphocyte antigen class I expression in Epstein-Barr virus-associated cancer // Cancer.-2006.-Vol. 106.-P. 1685-1693.

37. Eder J.P., Kantoff P.W., Roper K. et al. A phase I trial of a recombinant vaccinia virus expressing prostate-specific antigen in advanced prostate cancer // Clin. Cance Res.2000.-Vol. 6.-P. 1632-1638.

38. Egen J.G., Juhns M.S., Allison J.P. CTLA-4: new insights into its biological function and use in tumor immunotherapy//Nat. Immunol.-2002. Vol. 3.-P. 611-618.

39. Ehrlich P. Ueber den jetzigen stand der Karzinomforschung // Ned. Tijdschr. Geneeskd. -1909.-Vol. 5.-P. 273-290.

40. Espinoza-Delgano I. Cancer vaccines // Oncologist. 2002. - Vol. 7, № 2. - P. 20-33.

41. Fong L., Hou Y., Rivas A. et al. Altered peptide ligand vaccination with Flt3 ligand expanded dendritic cells for tumor immunotherapy // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2001.-Vol. 98.-P.8809 8814.

42. Garrido F., Ruiz-Cabello F., Cabrera T. et al. Implications for immunosurveillance of altered HLA class I phenotypes in human tumors // Immunol. Today. 1997. - Vol. 18. - P. 89-95.

43. GeigerJ.D., Hutchinson R.J., Hohenkirk L.F. et al. Vaccination of pediatric solid tumor patients with tumor lysate pulsed dendritic cells can expand specific T cells and mediate tumor regression // Cancer Res. 2001. - Vol. 61. - P. 8513 8519.

44. Glynne Я, Powis S., Beck S. et al. A proteasome related gene between the two abc transporter loci in the calls II region of the human MHC // Nature. 1991. - Vol. 353. -P. 357-360.

45. Gulley J., Chen A.P., Dahut W. et al. Phase I study of a vaccine using recombinant vaccinia virus expressing PSA (rV-PSA) in patients with metastatic androgen-independent prostate cancer // Prostate. 2002. - Vol. 53. - P. 109-117.

46. Hahne M., Rimoldi D., Schroter M. et al. Melanoma cell expression of Fas (Apo-1/CD95) ligand: implications for tumor immune escape // Science. 1996. - Vol. 274, №5291.-P. 1363-1366.

47. Hanson H.L., Donermeyer D.L., Ikeda H. et al. Eradication of established tumors by CD8+ T cell adoptive immunotherapy // Immunity. 2000. - Vol. 13. - P. 265-277.

48. Haywood G.R., McKhann C.F. Antigenic specificities on murine sarcoma cells. Reciprocal relationship between normal transplantation antigens (H-2) and tumor-specific immunogenicity // J. Exp. Med. 1971. - Vol. 133, № 6. - P. 1171-1187.

49. Heinzel A.S., Grotzke J.E., Lines R.A. et al. HLA-E-dependent presentation of Mtb-derived antigen to human CD8+ T cells // J. Exp. Med. 2002. - Vol. 196, № 11. - P. 1473-1481.

50. Hersey P., Menzies S.W., Halliday G.M. et al. Phase I/II study of treatment with dendritic cell vaccines in patients with disseminated melanoma // Cancer Immunol. Immunother. 2003. - Vol. 53. - P. 125 134.

51. Hirano F„ Капеко К., Tamura H. et al. Blockade of B7-H1 and Pd-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity // Cancer Res. 2005. - Vol. 65, № 3.-P. 1089-1096.

52. Holtl L„ Zelle-Rieser C., Gander H. et al. Immunotherapy of metastatic renal cell carcinoma with tumor lysate pulsed autologous dendritic cells // Clin. Cancer Res. -2002.-Vol. 8.-P. 3369 3376.

53. Horig H., Lee D.S., Conkright W. et al. Phase I clinical trial of a recombinant canarypoxvirus (ALVAC) vaccine expressing human carcinoembryonic antigen and the B7.1 co-stimulatory molecule // Cancer Immunol. Immunother. 2000. - Vol. 49. - P. 504 514.

54. Humphrey M.B., Lanier L.L., Nakamura M.C. Role of ITAM-containing adapter proteins and their receptors in the immune system and bone // Immunol. Rev. 2005. -Vol. 208. - P. 50-65.

55. Iwai Y., Ishida M., Tanaka Y. et al. Involvement of PD-L1 on tumor cells in the escape from host immune system and tumor immunotherapy by PD-L1 blockade // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - Vol. 99. - P. 12293-12297.

56. Jager E., Gnjatic S„ Nagata Y. et al. Induction of primary NY-ESO-1 immunity: CD8+ T lymphocyte and antibody responses in peptide-vaccinated patients with NY-ESO-1+ cancers // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 12198-12203.

57. Janetzki S., Palla D., Rosenhauer V. et al. Immunization of cancer patients with autologous cancer-derived heat schock protein gp96 preparations: a pilot study // Int. J. Cancer.-2000.-Vol. 88.-P.232 238.

58. Juffs Я, Fowler N., Saal R et al. В cell chronic lymphocytic leukaemia cells have reduced capacity to upregulate expression of MHC class I in response to interferon-gamma // Pathology. 2004. - Vol. 36. - P. 69-76.

59. Kagari Т., Tanaka D., Doi H„ Shimozato T. Essential role of Fey receptors in anti-type II collagen antibody-induced arthritis//J. Immunol. -2003. Vol. 170. - P. 4318-4324.

60. Khakoo S.I., Rajalingam R, Shum B.P. et al. Rapid evolution of NK cell receptor systems demonstrated by comparison of chimpanzees and humans // Immunity. 2000. -Vol. 12.-P. 687-698.

61. Khakoo S.I., Thio C.L., Martin M.P. et al. HLA and NK cell inhibitory receptor genes in revolving hepatitis С virus infection // Science. -2004. vol. 305. P. 872-874.

62. Khleif S.N., Abrams S.I., Hamilton J.M. et al. A phase I vaccine trial with pepetides reflecting ras oncogene mutations of solid tumors // J. Immunother. 1999. - Vol. 22. -P. 155-165.

63. Kikuchi-Maki A., Catina T.L., Campbell K.S. Cutting edge: KIR2DL4 transduces signals into human NK cells through association with the Fc receptor gamma protein // J. Immunol. 2005. - Vol. 174. - P. 3859-3863.

64. Kikuchi-Maki A., Yusa S., Catina T.L., Campbell K.S. KIR2DL4 is an IL-2 regulated NK cell receptor that exhibits limited expression in humans but trigger strong INF-gamma production // J. Immunol. 2003. - Vol. 171. - P. 3415-3425.

65. Klebanoff C.A., Gattinoni L., Torabi-Parizi P. et al Central memory self/tumor-reactive CD8+ T cells confer superior antitumor immunity compared with effector memory T cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - Vol. 102, № 27. - P. 9571-9576.

66. Klein G. Tumor antigens // Annu. Rev. Microbiol. 1966. - Vol. 20. - P. 223-252.

67. Knapp L.A., Cadavid L.F., Watkins D.I. The MHC locus is the most well conserved of all known primate class I histocompatibility genes // J. Immunol. 1998. - Vol. 160. -P. 189-196.

68. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity // Nature. 1975. - Vol. 256. - P. 495-497.

69. Koller В., Geraghty D„ Shimizu Y. et al. HLA-E. A novel HLA class I gene expressed in resting T lymphocytes // J. Immunol. 1988. - Vol. 41. - P. 897-904.

70. Kryczek I., Zou L„ Rodriguez P. et al. B7-H4 expression identifies a novel suppressive macrophage population in human ovarian carcinoma // J. Exp. Med. 2006. - Vol. 203, №4.-P. 817-820.

71. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. -1970. Vol. 227. - P. 680-685.

72. Lanier L.L. NK cell recognition // Annu. Rev. Immunol. 2005. - Vol. 23. - P. 225-274.

73. Lanier L.L., Corliss B.C., Wu J. et al. Immunoreceptor DAP12 bearing a tyrosine-based activation motif is involved in activating NK cells // Nature. 1998. - Vol. 391. - P. 703-707.

74. Larin S.S., Georgiev G.P., Kiselev S.L. Gene transfer approaches in cancer immunotherapy // Gene Ther. 2004. - Vol. 1. - P. S18-25.

75. Lee N„ Goodlett D„ IshitaniA. et al. HLA-E surface expression depends on binding of TAP-dependent peptides derived from certain HLA class I signal sequences // J. Immunol. 1988,-Vol. 160.-P. 4951 4960.

76. Lee N., Llano M., Carretero M. et al. HLA-E is a major ligand for the natural killer inhibitory receptor CD94/NKG2A // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. - P. 5199 5204.

77. Lee P., Wang F., KuniyoshiJ. et al. Effects of interleukin-12 on the immune response to a multipeptide vaccine for resected metastatic melanoma // J. Clin. Oncol. 2001. - Vol. 19.-P. 3836-3847.

78. Leibson P.J. The regulation of lymphocyte activation by inhibitory receptors // Curr. Opin. Immunol. 2004. - Vol. 16(3). - P. 328-336.

79. Leibson P.J. The regulation of lymphocyte activation by inhibitory receptors // Curr. Opin. Immunol.-2004.-Vol. 16.-P. 328 336.

80. Lemberg M.K., Bland F.A., Weihofen A. et al. Intramembrane proteolysis of signal peptides: as essential step in the generation of HLA-E epitop // J. Immunol. 2001. -Vol. 167.-P.-6441-6446.

81. Maker A. V., Attia P., Rosenberg S.A. Analysis of the cellular mechanism of antitumor responses and autoimmunity in patients treated with CTLA-4 blockade // J. Immunol. -2005. Vol. 175, № 11. - P. 7746-7754.

82. Malmberg K, Levitsky V., Norell H. et al. IFN-gamma protects short-term ovarian carcinoma cell lines from CTL lysis via a CD94/NKG2A-dependent mechanism // J. Clin. Invest.-2002.-Vol. 110.-P. 1515-1523.

83. Marin R., Ruiz-Cabello F., Pedrinaci S. Analysis of HLA-E expression in human tumors // Immunogenetics. 2003. - Vol. 54, № 11. - P. 767-75.

84. Marshall J.L., Hawkins M.J., Tsang K.Y. et al. Phase I study in cancer patients of a replication-defective avipox recombinant vaccine that expresses human carcinoembryonic antigen Hi. Clin. Oncol. -1999. -Vol. 17.-P. 332 337.

85. Met 0., Wang M., Pedersen A.E. et al. The effect of a therapeutic dendritic cell-based cancer vaccination depends on the blockage of CTLA-4 signaling // Cancer Let. 2006. -Vol. 231, №2.-P. 247-256.

86. Michaelsson J., Teixeira de Matos C„ Achour A. et al. A signal peptide derived from hsp60 binds HLA-E and interferes with CD94/NKG2A recognition // J. Exp. Med. -2002.-Vol. 196, № 11.-P. 1403-1414.

87. Miller J.D., Weber D.A., Ibegbu C. et al. Analysis of HLA-E peptide-binding specificity and contract residues in bound peptide required for recognition by CD94/NKG2 // J. Immunol.-2003.-Vol. 171.-P. 1369-1375.

88. Mitchell M.S., Кап-Mitchell J., Morrow P.R. et al. Phase I trial of large multivalent immunogen derived from melanoma lysates in patients with disseminated melanoma // Clin. Cancer Res. 2004. - Vol. 10. - P. 76 83.

89. Mocellin S., Mandruzzato S., Bronte V., Marincola F.M. Cancer vaccines: pessimism in check//Nat. Med.-2004.-Vol. 10, № 12.-P. 1278-1279.

90. Muhlfeld A.S., Segerer S., Hudkins K. et al. Deletion of the Fey receptor lib in thymic stromal lymphopoietin transgenic mice aggravates memranoproliferative glomerulonephritis//Am. J. Pathol.-2003.-Vol. 163.-P. 1127-1136.

91. Muta Т., Kurosaki Т., Misolovin Z. et al. A 13 amino-acid motif in the cytoplasmic domain of Fc gamma RIIB modulates B-cell receptor signaling // Nature. 1994. - Vol. 368.-P. 70-73.

92. Nemunaitis J., Sterman D„ Jablons D. et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor gene-modified autologous tumor vaccines in non-small-cell lung cancer // J. Natl. Cancer Inst. 2004. - Vol. 96. - P. 326 331.

93. Nestle F.O., Alijaqic S., Gilliet M. et al. Vaccination of melanoma patients with peptide-or tumor lysatepulsed dendritic cells // Nat. Med. 1998. - Vol. 4. - P. 328 332.

94. Nishimura H„ Nose M., Hiai H. et al. Development of lupus-like autoimmune diseases by disruption of the PD-1 gene encoding an ITIM-motif-carrying immunoreceptor // Immunity. 1999. - Vol. 11. - P. 141-151.

95. O'Callaghan C. Molecular basis of human natural killer cell recognition of HLA-E (human leukocyte antigen-E) and its relevance to clearance of pathogen-infected and tumour cells // Clin. Sci. 2000. - Vol. 99. - P. 9-17.

96. O'Callaghan C.A., Tormo J., Willcox B.E. et al. Structural features impose tight peptide binding specificity in the nonclassical MHC molecule HLA-E // Mol. Cell. 1998. -Vol. l.-P. 531-541.

97. Okazaki Т., Iwai Y., Honjo T. New regulatory co-receptors: inducible co-stumulator and PD-1 // Curr. Opin. Immunol. 2002. - Vol 14. - P. 779-782.

98. Old L., Boyse E.A. Immunology of experimental tumors // Annu. Rev. Med. 1964. -Vol. 15.-P. 167-186.

99. Ortiz-Narvarete V., Seelig A., Gernold M. et al. Subunits of the 20S proteasome (multicatalytic proteinase) encoded by major histocompatibility complex // Nature. -1991.-Vol. 353.-P. 662-762.

100. Overwijk W.W., Theoret MR., Finkelstein S.E. et al. Tumor regression and autoimmunity after reversal of a functionally tolerant state of self-reactive CD8+ T cells // J. Exp. Med. 2003. - Vol. 198. - P. 569-580.

101. Pace J.L., Russell S.W., R.D. Schreiber et al. Macrophage activation: priming activity from a T-cell hybridoma is attributable to interferon-gamma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983. - Vol. 12. - P. 3782-3786.

102. Palmisano G., Contardi E., MorabitoA. et al. HLA-E surface expression is independent of the availability of HLA class I signal sequence-derived peptides in human tumor cell lines // Hum. Immunol. 2005. - Vol. 66. - P. 1-12.

103. Peipp M., Valerius T. Bispecific antibodies targeting cancer cells // Biochem. Soc. Trans. 2002. - Vol. 30, № 4. - P. 507-511.

104. Pietra G„ Romagnani C., Mazzarino P. et al. HLA-E-restricted recognition of cytomegalovirus-derived peptides by human CD8+ cytolytic T lymphocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2003.-Vol. 100, № 19.-P. 10896-10901.

105. Plunkett T.A., Miles D.W. New biological therapies for breast cancer // Int. J. Clin. Pract. 2002. - Vol. 56, № 4. - P. 261-266.

106. Poszepczynska-Guigne E., Schiavon V., D'Incan M. et al. CD158k/KIR3DL2 is a new phenotypic marker of Sezary cells: relevance for the diagnosis and follow-up of Sezary syndrome // J. Invest. Dermatol. 2004. - Vol. 122, № 3. - P. 820-823.

107. Rajagopalan S., Long E.O. A human histocompatibility leukocyte antigen (HLA)-G-specific receptor expressed on all natural killer cells // J. Exp. Med. 1999. - Vol. 189. -P. 1093-1100.

108. Ravetch J. V., BollandS. IgG Fc receptors // Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol. 19. - P. 275 290.

109. Ravetch J. V., Lanier L.L. Immune inhibitory receptors // Science. 2000. - Vol. 290. -P. 84-89.

110. Reits E.A., Benham A.M., Plougastel B. et al. Dynamics of proteasome distribution in living cells // EMBO J. 1997. - Vol. 16. - P. 6087-6094.

111. Restifo N.P., Esquivel F., Asher A.L. etal. Defective presentation of endogenous antigens by a murine sarcoma. Implications for the failure of an anti-tumor immune response//J. Immunol.-1991.-Vol. 147, №4.-P. 1453-1459.

112. Robbie-Ryan M., Tanzola M.B., Secor V.H., Brown M.A. Cutting Edge: Both activating and inhibitory Fc receptors expressed on mast cells regulate experimental allergic encephalomyelitis disease severity//J. Immunol.-2003.-Vol. 170.-P. 1630-1634.

113. Robinson J., Waller M, Par ham P. et al. IMGT/HLA and IMGT/MHC: sequence databases for the study of the major histocompatibility complex // Nucleic Acids Res.2003.-Vol.31.-P. 311-314.

114. Rosenberg S.A., Dudley M.E. Cancer regression in patients with metastatic melanoma after the transfer of autologous antitumor lymphocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.2004.-Vol. 101.-P. 14639-14645.

115. Rosenberg S.A., YangJ.C., Restifo N.P. Cancer immunotherapy: moving beyond current vaccines // Nat. Med. 2004. - Vol. 9. - P. 909-915.

116. SambrookJ., Fritsch E„ Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd edn) // Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor. 1989. - P. 1847 1875.

117. Sato Y. et al. A phase I trial of cytotoxic T-lymphocyte precursor-oriented peptide vaccines for colorectal carcinoma patients // Br. J. Cancer. 2004. - Vol. 90. - P. 13341342.

118. Scheibenbogen C., Schmittel A., Keilholz U. et al. Phase 2 trial of vaccination with tyrosinase peptides and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor in patients with metastatic melanoma//J. Immunother. -2000. Vol. 23. - P. 275-281.

119. Seliger В., Ritz U„ Ferrone S. Molecular mechanisms of HLA class I antigen abnormalities following viral infection and transformation // Int. J. Cancer. 2006. -Vol. 118.-P. 129-138.

120. Sica G.L., Choi I.-H., Zhu G. et al. B7-H4, a molecule of the B7 family, negatively regulates T cell immunity // Immunity. 2003. - Vol. 18. - P. 849-861.

121. Sijts A., Ruppert Т., Rehermann B. et al. Efficient generation of a Hepatitis В virus cytotoxic T lympjocyte epitote requires the structural features of immunoproteasomes // J. Exp. Med. -2000,- Vol. 191. P. 503-513.

122. Silverstein A.M. History of Immunology // Academic, San Diego,CA. 1989.

123. Srivastava P.K., Udono H. Heat-shock protein-peptide complexs in cancer immunotherapy // Curr. Opin. Immunol. 1994. - Vol. 6. - P. 728-732.

124. Stift A., Friedl J., Dubsky P. et al. Dendric cell-based vaccination in solid tumor // J. Clin. Oncol. 2003. - Vol. 21. - P. 135-142.

125. Strehl В., Seifert U., Kriiger E. et al. Interferon-y, the functional plasticity of the ubiquitin-proteasome system, and MHC class I antigen processing // Immunol. Rev. -2005.-Vol. 207.-P. 19-30.

126. Su Z, Dannull J., Heiser A. et al. Immunological and clinical responses in metastatic renal cancer patients vaccinated with tumor RNA-transfected dendritic cells // Cancer Res.-2003.-Vol. 63.-P.2128 2133.

127. Suto Y., Maenaka K., Yabe T. et al. Chromosomal localization of the human natural killer cell class I receptor family genes to 19ql3.4 by fluorescence in situ hybridization // Genomics. 1996. - Vol. 35. - P. 270-272.

128. Tanaka S., Harada M., Mine T. et al. Peptides vaccination for patients with melanoma and other types of cancer based on pre-existing peptide-specific cytotoxic T-lymphocyte precursors in the periphery // J. Immunother. 2003. - Vol. 26. - P. 357-366.

129. Taylor P.A., Lees C.J., Fournier S. et al. B7 expression on T cells down-regulates immune responses through CTLA-4 ligation via T-T interactions // J. Immunol. 2004. -Vol. 172.-P. 34-39.

130. Tivol E.A., Bordello F., Schweitzer A.N. et al. Loss of CTLA-4 leads to massive lymphoproliferation and fatal multi-organ tissue destruction, revealing a critical negative regulatory role of CTLA-4 // Immunity. 1995. - Vol. 3. - P. 541-547.

131. Tomasec P., Braud V., Rickards C. et al. Surface expression of HLA-E, an inhibitor of natural killer cells, enhances by human cytomegalovirus gpUL40 // Science. 2000. -Vol. 287.-P. 1031-1033.

132. Torre-Amione G., Beauchamp R.D., Koeppen #., BHPark et al. A highly immunogenic tumor transfected with a murine transforming growth factor type B1 cDNA escapes immune surveillance // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol. 87. - P. 1486-1490.

133. Trauth B.C., Klas C., Peters A.M. et al. Monoclonal antibody-mediated tumour regression by induction of apoptosis // Science. 1989. - Vol. 245. - P. 301-305.

134. Veda H., Howson J.M.M., Esposito L. et al. Association of the T-cell regulatory gene CTLA-4 with susceptibility to autoimmune disease // Nature. 2003. - Vol. 423. - P. 506-511.

135. Ulbrecht M„ Martinozzi S., Grzeschik M. et al. Cutting edge: the human cytomegalovirus UL40 gene product contains a ligand for HLA-E and prevents NK cell-mediated lysis // J. Immunol. 2000. - Vol. 164. - P. 5019-5022.

136. Urban J.L., Burton R.C., Holland J.M. et al. Mechanisms of syngeneic tumor rejection. Susceptibility of host-selected progressor variants to various immunological effector cells // J. Exp. Med. 1982. - Vol. 155, № 2. - P.557-573.

137. Van Driel W.J., Ressing M.E., Kenter G.G. et al. Vaccination with HPV16 peptides of patients with advanced cervical carcinoma // Eur. J. Cancer. 1999. - Vol. 22. - P. 155156.

138. Vance R.E., Kraft J.R, Altman J.D. et al. Mouse CD94/NKG2A is a natural killer cell receptor for the nonclassical major histocompatibility complex (MHC) class I molecule Qa-l(b)//J. Exp. Med.-1998.-Vol. 188.-P. 1841-1848.

139. Verheyden S„ Bernier M., Demanet C. Identification of natural killer cell receptor phenotypes associated with leukemia // Leukemia. 2004. - Vol. 12. - P. - 2002-2007.

140. Vivier E., Anfossi N. Inhibitory NK-cell receptors on T-cells: witness of the past. Actors ofthe future//Nat. Reviews. Immunology. -2004. -Vol. 4. P. 190-198.

141. Vonderheide R.H., Domchek S.M., Schultze J.L. et al. Vaccination of cancer patients telomerase induces functional antitumor CD8+ T lymphocytes // Clin. Cancer Res. -2004.-Vol. 10.-P. 828-839.

142. Wagtmann N., Rajagopalan S., Winter C.C. et al. Killer cell inhibitory receptors specific for HLA-C and HLA-B identified by direct binding and by functional transfer // Immunity. 1995. - Vol. 3. - P. 801-809.

143. Watanabe N., Gavrieli M., Sedy J.R et al. BTLA is a lymphocyte inhibitory receptor with similarities to CTLA-4 and PD-1 // Nat. Immunol. 2003. - Vol. 7. - P. 670-679.

144. Watanabe Т., Okano M., Hattori H. et al. Roles of FcyRIIb in nasal eosinophilia and IgE production in murine allergic rhinitis // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2004. -Vol. 169.-P. 105-112.

145. Williams A.P., Bateman A.R., Khakoo S.I. KIR and their role in disease // Nature Immun. -2005.-Vol. 5(4).-P. 226-240.

146. Yajima K., Nakamura A., Sugahara A., Takai T. FcyRIIB deficiency with Fas mutation is sufficient for the development of systemic autoimmune disease // Eur. J. Immunol. -2003.-Vol. 33.-P. 1020-1029.

147. Yusa S.-I., Campbell K.S. Src homology region 2-containing protein tyrosine phosphatase-2 (SHP-2) can play s direct role in the inhibitory function of killer cell Ig-Like receptors in human NK cells // J. Immunol. 2003. - Vol. 170. - P. 4539-4547.

148. Zinzani P.L., Lauria F„ Salvucci M. et al. Hairy-cell leukemia and alfa-interferon treatment: long-term responders // Haematologica. 1997. - Vol. 82. - P. 152-155.1. Благодарности

149. Я выражаю искреннюю благодарность своему научному руководителю Сергею Сергеевичу Ларину за предоставление возможности выполнения работы, за терпение и чуткое руководство, а также критическое чтение диссертации.

150. Спасибо всем сотрудникам различных подразделений ИБГ РАН, которые помогали решать технические вопросы обеспечения и проведения работ.