Исследование рецептор-опосредованной трансфекции клеток эпителия молочной железы in vitro и in vivo тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Смирнова, Ольга Анатольевна

• Смирнова, Ольга Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Смирнова, Ольга Анатольевна

Список сокращений.

Введение.

Обзор литературы.

1. Рецептор-опосредованная трансфекция.

1.1. ДНК-переносящие конструкции для рецептор-опосредованной трансфекции.

1.1.1. ДНК.

1.1.2. Лиганды.

1.1.3. Поликатионы.

1.1.4. Компактизация ДНК и размеры трансфецирующих комплексов.

1.2. Транспорт ДНК-переносящих конструкций.

1.2.1. Эндоцитоз.

1.2.2 Внутриклеточный транспорт конструкций.

1.2.2.1. Транспорт через мембрану эндосом.

1.2.2.2. Транспорт в ядро.

2. Использование аденовирусов для усиления эффективности трансфекции.

2.1. Транспорт аденовирусов.

2.2. Влияние аденовирусов на транспорт макромолекул в клетки.

2.3.Усиление рецептор-опосредованной доставки генетического материала.

2.4. Включение аденовирусов в систему рецептор-опосредованной доставки ДНК.

2.5. Действие аденовирусов на другие методы трансфекции.

3. Доставка генетического материала in vivo.

3.1. Способы введения ДНК-переносящих конструкций in vivo.

3.2. Некоторые особенности рецептор-опосредованной трансфекции ш vivo.

3.2.1 Введение ДНК-переносящих конструкций и иммунный ответ организма.

3.2.2 Пути увеличения продолжительности экспрессии трансгена.

3.2.2.1. Частичная гепатэктомия.

3.2.2.2. Оптимальная конденсация ДНК.

4. Животные-биореакторы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование рецептор-опосредованной трансфекции клеток эпителия молочной железы in vitro и in vivo»

14. Анализ активности люциферазы.44

14.1. Получение клеточных и тканевых лизатов.44

14.2 Определение содержания белка в пробах.45

14.3. Определение активности люциферазы.45

15. Вестерн-блот анализ.45

Результаты.46

1. Сборка ДНК-переносящих конструкций.46

1.1. Синтез компонентов ДНК-переносящих конструкций.46

1.2. Оценка связывания ДНК с конъюгатом инсулин-полилизин.46

1.3. Сборка ДНК-переносящих конструкций.48

2. Исследование транспорта ДНК-переносящих конструкций в клетки линии НС-11 методом видеоинтенсификационной микроскопии.49

2.1. Транспорт конъюгата инсулин-полилизин.49

2.2. Транспорт флуоресцентно-меченной ДНК-переносящей конструкции в клетки линии НС-11.51

2.3. Внутриклеточная локализация ДНК-переносящих конструкций.53

3. Влияние аденовирусов на проницаемость фосфолипидной мембраны.54

3.1. Выход содержимого липосом под действием аденовирусов.54

3.2. Мембранолитическая активность аденовируса, включенного в состав ДНК-переносящей конструкции.56

4. Трансфекция клеток эпителия молочной железы мыши in vitro.59

4.1. Трансфекция клеток эпителия молочной железы мыши линии НС-11 конструкцией инсулин-полилизин-ДНК.59

4.2. Использование аденовирусов для усиления рецептор-опосредованной трансфекции.60

4.2.1. Трансфекция в присутствии свободных аденовирусов.60

4.2.2. Трансфекция конструкциями (инсулин-полилизин)-ДНК-(стрептавидин-полилизин)-аденовирус.61

4.2.3. Оптимизация содержащих вирус конструкций.64

5. Рецептор-опосредованная трансфекция эпителия молочных желез in vivo.66

5.1. Трансфекция молочных желез мыши.66

5.2. Трансфекция молочных желез овец.69

6. Секреция модифицированной люциферазы в молоко после трансфекции молочной железы in vivo.71

6.1. Секреторные формы люциферазы.71

6.2. Анализ активности люциферазы в молоке трансгенных животных.72

Обсуждение результатов.75

Выводы.83

Список литературы.84

Благодарности.100

Список сокращений.

Ad2 - аденовирус человека серотип 2 Ad5 - аденовирус человека серотип 5

BES - К,К-бис(2-оксиэтил)-2-аминоэтансульфоновая кислота CELO - Chicken Embryo Lethal Orphan CMV - цитомегаловирус

EDS-76 - Egg Drop Syndrome-76 Синдром снижения яйценоскости EGF - эпидермальный фактор роста HBS - 25 мМ HEPES, рН 7,5, 150 мМ NaCl

HEPES - К-(2-оксиэтил)пиперазин-ГчГ'-(2-этансульфоновая кислота) LA - а-лактальбумин Luc - люцифераза

NHS-AC-биотин - N-оксисукцинимидный эфир биотинамидокапроата RSY - вирус саркомы Рауса SDS - додецилсульфат натрия

SpBLG - сигнальный пептид овечьего Р-лактоглобулина

SPDP - N-сукцинимидил 3-(2-пиридилдитио)пропионат

БСА - бычий сывороточный альбумин в.ч. - вирусные частицы

ДТТ - дитиотреитол о.е. - относительные световые единицы т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов

ФИТЦ - флуоресцеинизотиоцианат

ЭГТА - этиленгликоля, бис(2-аминоэтиловый эф ир)-Ы ,N,N ' ,N ' -тетраацетат ЭДТА - этилендиаминтетраацетат

Введение.

К настоящему времени изолированы и охарактеризованы сотни генов, кодирующих белки, имеющие большое значение для медицины и других потребностей человека. Получение таких белков в достаточных количествах является одной из важных задач биотехнологии. Выделение и очистка необходимых белков из крови или тканей является дорогостоящей процедурой, сопряженной с возможной контаминацией инфекционными агентами. Развитие методов генной инженерии привело к созданию бактериальных систем экспрессии для получения требуемых белков. Однако, в бактериальных системах не всегда удается осуществить посттрансляционные модификации эукариотических белков, такие как фосфорилирование, гликозилирование и аминирование. С этой же целью могут использоваться эукариотические системы экспрессии, например - масштабное культивирование клеток млекопитающих. Недостатком эукариотических систем экспрессии является их низкая рентабельность, т.к. для культивирования требуются относительно большие затраты, а выход и концентрация белков не велики. Другое направление основано на создании трансгенных животных-биореакторов, способных продуцировать целевые белки человека и транспортировать их во внеклеточные жидкости организма.

В этой связи молочная железа млекопитающих представляется естественным биореактором для продукции рекомбинантных белков и секреции их с молоком. Молочная железа обладает огромным синтетическим потенциалом, так как исходно предназначена для синтеза и извлечения большого количества белка. Концепция молочной железы как биореактора потенциально имеет ряд преимуществ с точки зрения биотехнологии: получение нативных белков, большой выход, отсутствие токсичных примесей.

В качестве одного из путей введения трансгена для создания животных-биореакторов предлагается использование методов трансфекции соматических клеток. Трансфекция молочной железы может осуществляться путем непосредственного введения генетического материала через молочный проток. Местное введение ДНК-переносящих конструкций представляется несложной и малотравматичной процедурой, кроме того, оно позволяет создать более высокие концентрации трансфецирующих конструкций и минимизировать потери, неизбежные при системном введении.

К настоящему времени разработано большое количество методов введения чужеродной ДНК в эукариотические клетки (Yang, 1992; Desnick and Schuchman, 1998). В последнее время проводятся интенсивные исследования в области систем доставки ДНК в организм животных, в том числе - рецептор-опосредованной трансфекции. Рецептор-опосредованная доставка генетического материала сочетает использование естественного для клетки механизма рецептор-опосредованного транспорта и синтетических лигандированных конструкций, что, в принципе, может позволить специфически трансфецировать любой выбранный тип клеток (Michael and Curiel, 1994; Guy et al. 1995). Этот метод дает возможность трансфецировать также дифференцированные и неделящиеся клетки. Он применяется для трансфекции in vitro и in vivo. Данный метод позволяет легко варьировать и заменять компоненты конструкций, в том числе доставляемый генетический материал и адресный лиганд. Метод не накладывает строгих ограничений по последовательности и размерам молекул ДНК. Компоненты ДНК-переносящих конструкций могут быть выделены (плазмиды) или синтезированы (бифункциональные конъюгаты) в достаточно большом количестве. Для внедрения метода в биотехнологию представляется важным дальнейшее исследование закономерностей и механизмов рецептор-опосредованной трансфекции и ее оптимизация, особенно для применения in vivo.

Под руководством A.C. Соболева была разработана система рецептор-опосредованной доставки генетического материала с инсулином в качестве лиганда (Соболев, 1988). Этот подход успешно использовался при трансфекции клеток гепатомы человека в культуре (Розенкранц и др. 1990; Rosenkranz et al. 1992). Исходя из того, что клетки эпителия молочной железы обладают инсулиновыми рецепторами (Burnol et al. 1990), инсулин был выбран в качестве лиганда для рецептор-опосредованной доставки генетического материала в клетки эпителия молочной железы. Таким образом, на основании имеющейся на сегодня совокупности данных нами была предложена идея создания животного-биореактора путем рецептор-опосредованной трансфекции молочной железы. В развитие этой идеи и выполнялась данная работа. 7

Цель исследования:

Целью настоящей работы было изучение возможности использования рецептор-опосредованной доставки генетического материала в клетки эпителия молочных желез для получения целевых белков с молоком сельскохозяйственных животных.

Для реализации указанной цели были поставлены следующие практические задачи:

1. Исследовать рецептор-опосредованный эндоцитоз и внутриклеточный транспорт конъюгата инсулин-полилизин и ДНК-переносящих конструкций, содержащих данный конъюгат, в клетках эпителия молочной железы в культуре.

2. Исследовать и оптимизировать состав и свойства ДНК-переносящих конструкций для получения наибольшего уровня трансфекции клеток в культуре.

3. Осуществить рецептор-опосредованную доставку репортерного гена в клетки эпителия молочной железы in vivo.

4. Оценить возможность рецептор-опосредованной доставки гена, кодирующего секретируемый с молоком белок, в клетки эпителия молочной железы in vivo.

Обзор литературы.

Человеческое знание неизмеримо во все стороны, и из того, что достойно знания, никто в одиночку не может знать даже и тысячной доли.

Артур Шопенгауэр "Афоризмы и максимы "

В последние десятилетия получили широкое развитие методы создания рекомбинантных ДНК, доставки ДНК в клетки млекопитающих in vitro и in vivo, а также методы исследования экспрессии введенных генов. Эти технологические достижения привели к возможности практического применения в биотехнологии - для производства белков клинической важности, ранее получаемых из природных источников, и в медицине - для лечения генетических заболеваний путем интродукции нормального гена в соответствующие клетки больного организма (генная терапия).

Несмотря на то, что к настоящему времени разработано большое количество методов введения чужеродной ДНК, проблема эффективного транспорта ДНК in vivo остается нерешенной (Yang, 1992; Desnick and Schuchman, 1998). Существует ряд требований, обеспечивающих возможность и эффективность применения in vivo тех или иных систем доставки: 1) направленность - поступление ДНК в избранный тип клеток/тканей, 2) эффективность, 3) отсутствие токсичности и безопасность для организма, 4) устойчивость при хранении и введении в организм, 5) технологичность и относительная дешевизна получения переносчиков ДНК, 6) отсутствие ограничений переносимой ДНК. Метод рецептор-опосредованной трансфекции во многом соответствует этим требованиям (Michael and Curiel, 1994; Guy et al. 1995). Этот метод сочетает использование естественного для клетки механизма рецептор-опосредованного транспорта и синтетических лигандированных конструкций, что, в принципе, может позволить специфически трансфецировать любой выбранный тип клеток. Он применяется для трансфекции клеток животных in vitro и in vivo. В настоящее время во многих научных лабораториях идет интенсивная работа по превращению потенциальных возможностей данного метода в реальный высокоэффективный способ направленной доставки генов in vivo.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Смирнова, Ольга Анатольевна

Выводы.

1. Показано, что ДНК-переносящие конструкции, содержащие инсулин-полилизин, обеспечивают транспорт ДНК в клетки эпителия молочной железы мыши линии НС-11 через инсулиновые рецепторы. Успешно проведена рецептор-опосредованная трансфекция клеток эпителия молочной железы в культуре.

2. Показано, что включение аденовирусов человека и птиц в качестве мембранолитических компонентов в состав ДНК-переносящих конструкций и дальнейшая оптимизация таких конструкций приводят к увеличению эффективности трансфекции клеток линии НС-11 более чем на 3 порядка. Максимальная экспрессия репортерного гена наблюдается в результате трансфекции конструкциями с соотношением лизин/нуклеотид от 2 до 4, плазмида/вирус от 4 до 10.

3. Впервые осуществлена рецептор-опосредованная трансфекция эпителия молочной железы in vivo путем местного введения ДНК-переносящих конструкций. Получены данные об особенностях рецептор-опосредованной доставки ДНК in vitro и in vivo.

4. Исследована динамика экспрессии репортерного гена в результате рецептор-опосредованной трансфекции клеток эпителия молочной железы в культуре, а также рецептор-опосредованной трансфекции молочных желез мышей и овец.

5. Впервые продемонстрирована принципиальная возможность получения секретируемых белков с молоком сельскохозяйственных животных в результате рецептор-опосредованной трансфекции молочных желез при введении ДНК-переносящих конструкций через молочный проток.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Смирнова, Ольга Анатольевна, 2000 год

1. Розенкранц А.А., Ячменев С.В., Соболев А.С. (1990) Использование искусственных конструкций для селективного переноса генетического материала в клетки человека путем рецептор-опосредованного эндоцитоза, Докл. А.Н. СССР 312: 493-494.

2. Соболев А.С. (1988) Динамика мембранных рецепторов. Международная конференция по медицинской биохимии МЗ СССР, 17-21 октября Москва.

3. Соболев А.С., Розенкранц А.А., Иванова М.М., Смирнова О.А., Никитин В.А., Народицкий Б.С., Эрнст J1.K. (1996) Способ получения трансгенных животных. Патент РФ №2108714.

4. Соболев А. С., Розенкранц А. А., Никитин В. А. (1994) Способ генетической трансформации молочной железы животного и устройство для введения генетического материала в молочный проток молочной железы животного. Патент РФ №2025487.

5. Фриц Ханс-Иоахим. (1988) Гл.8. Направляемый олигонуклеотидами мутагенез в рекомбинантных нитевидных фагах. Стр. 191-205 в книге Клонирование ДНК. Методы: Пер. с англ./ Под ред. Д. Гловера. М.: Мир,.-538 е., ил.

6. Airth, R.L., Rhodes, W.C. and McElroy, W.D. (1958) The function of coenzyme A in luminescence. Biochim. Biophys. Acta, 27: 519-532.

7. Akhlynina, T.V., Jans, D.A., Rosenkranz, A.A., Statsyuk, N.V., Balashova, I.Y., Toth, G., Pavo, I., Rubin, A.B. and Sobolev, A.S. (1997) Nuclear targeting of chlorin e6 enhances its photosensitizing activity, J. Biol. Chem. 272: 20328-20331.

8. Akhlynina, T.V., Rosenkranz, A.A., Jans, D.A., Gulak, P.V., Serebryakova, N.V. and Sobolev, A.S. (1993) The use of internalizable derivatives of chlorin e6 for increasing its photosensitizing activity, Photochem. Photobiol. 58: 45-48.

9. Akhlynina, T.V., Rosenkranz, A.A., Jans, D.A. and Sobolev, A.S. (1995) Insulinmediated intracellular targeting enhances the photodynamic activity of chlorin e6, Cancer Res. 55: 1014-1019.

10. Baker, A. and Cotten, M. (1997) Delivery of bacterial artificial chromosomes into mammalian cells with psoralen-inactivated adenovirus carrier, Nucleic Acids Res. 25: 19501956.

11. Ball, R.K., Friis, R.R., Schoenenberger, C.A., Doppler, W. and Groner, B. (1988) Prolactin regulation of beta-casein gene expression and of a cytosolic 120-kd protein in a cloned mouse mammary epithelial cell line, EMBO J. 7: 2089-2095.

12. Batra, R.K., Wang-Johanning, F., Wagner, E., Garver, R.I., Jr. and Curiel, D.T. (1994) Receptor-mediated gene delivery employing lectin-binding specificity, Gene Ther. 1: 255-260.

13. Blumenthal, R., Seth, P., Willingham, M.C. and Pastan, I. (1986) Ph-dependent lysis of liposomes by adenovirus, Biochemistry, 25: 2231-2237.

14. Boletta, A., Benigni, A., Lutz, J., Remuzzi, G., Soria, M.R. and Monaco, L. (1997) Nonviral gene delivery to the rat kidney with polyethylenimine, Hum. Gene Ther. 8: 12431251.

15. Bommineni, V.R., Chowdhury, N.R., Wu, G.Y., Wu, C.H., Franki, N., Hays, R.M. and Chowdhury, J.R. (1994) Depolymerization of hepatocellular microtubules after partial hepatectomy, J. Biol. Chem. 269: 25200-25205.

16. Buckel, P. (1996) Recombinant proteins for therapy, Trends Pharmacol. Sci. 17: 450456.

17. Bunnell, B.A., Askari, F.K. and Wilson, J.M. (1992) Targeted delivery of antisense oligonucleotides by molecular conjugates, Somat. Cell Mol. Genet. 18: 559-569.

18. Burnol, A.F., Loizeau, M. and Girard, J. (1990) Insulin receptor activity and insulin sensitivity in mammary gland of lactating rats, Am. J. Physiol. 259: E828-34.

19. Campbell, P.G., Frey, D.M. and Baumrucker, C.R. (1987) Changes in bovine mammary insulin binding during pregnancy and lactation, Comp. Biochem. Physiol. BJ. 87: 649-653.

20. Capecchi, M.R. (1980) High efficiency transformation by direct microinjection of dna into cultured mammalian cells, Cell, 22: 479-488.

21. Carstea, E.D., Miller, S.P., Christakis, H. and ONeill, R.R. (1993) Analogues of butyric acid that increase the expression of transfected DNAs, Biochem. Biophys. Res. Commun. 192: 649-656.

22. Chardonnet, Y. and Dales, S. (1970) Early events in the interaction of adenoviruses with HeLa cells. I. Penetration of type 5 and intracellular release of the DNA genome. Virology, 40: 462-477.

23. Charnock Jones, D.S., Sharkey, A.M., Jaggers, D.C., Yoo, H.J., Heap, R.B. and Smith, S.K. (1997) In-vivo gene transfer to the uterine endometrium, Hum. Reprod. 12: 1720.

24. Chen, J., Gamou, S., Takayanagi, A. and Shimizu, N. (1994) A novel gene delivery system using egf receptor-mediated endocytosis, FEBSLett. 338: 167-169.

25. Cheng, D.Y., Kolls, J.K., Lei, D. and Noel, R.A. (1997) In vivo and in vitro gene transfer and expression in rat intestinal epithelial cells by El-deleted adenoviral vector, Hum. Gene Ther. 8: 755-764.

26. Cheng, S., Merlino, G.T. and Pastan, I.H. (1983) A versatile method for the coupling of protein to dna: synthesis of alpha 2-macroglobulin-dna conjugates, Nucleic Acids Res. 11: 659-669.

27. Chin, D.J., Green, G.A., Zon, G., Szoka, F.C., Jr. and Straubinger, R.M. (1990) Rapid nuclear accumulation of injected oligodeoxyribonucleotides, New Biol. 2: 1091-1100.

28. Chiou, H.C., Tangco, M.Y., Levine, S.M., Robertson, D., Kormis, K., Wu, C.H. and Wu, G.Y. (1994) Enhanced resistance to nuclease degradation of nucleic acids complexed to asialoglycoprotein-polylysine carriers, Nucleic Acids Res. 22: 5439-5446.

29. Chu, B.C., Wahl, G.M. and Orgel, L.E. (1983) Derivatization of unprotected polynucleotides, Nucleic Acids Res. 11: 6513-6529.

30. Cotten, M., Baker, A., Saltik, M., Wagner, E. and Buschle, M. (1994) Lipopolysaccharide is a frequent contaminant of plasmid dna preparations and can be toxic to primary human cells in the presence of adenovirus, Gene Ther. 1: 239-246.

31. Cotten, M., Wagner, E., Zatloukal, K. and Birnstiel, M.L. (1993) Chicken adenovirus (celo virus) particles augment receptor-mediated dna delivery to mammalian cells and yield exceptional levels of stable transformants,Virol. 67: 3777-3785.

32. Cristiano, R.J., Smith, L.C. and Woo, S.L. (1993) Hepatic gene therapy: adenovirus enhancement of receptor-mediated gene delivery and expression in primary hepatocytes, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 90: 2122-2126.

33. Croughan, M.S., Chiou, T.W. and Wang, D.I. (1995) Immobilized animal cell bioreactors, Bioprocess. Technol. 21: 377-411.

34. Curiel, D.T. (1994) High-efficiency gene transfer employing adenovirus-polylysine-dna complexes, Nat. Immun. 13: 141-164.

35. Curiel, D.T., Agarwal, S., Wagner, E. and Cotten, M. (1991) Adenovirus enhancement of transferrin-polylysine-mediated gene delivery, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 88: 8850-8854.

36. Curiel, D.T., Wagner, E., Cotten, M., Birnstiel, M.L., Agarwal, S., Li, C.M., Loechel, S. and Hu, P.C. (1992) High-efficiency gene transfer mediated by adenovirus coupled to dna-polylysine complexes, Hum. Gene Ther. 3: 147-154.

37. Defer, C., Belin, M.T., Caillet-Boudin, M.L. and Boulanger, P. (1990) Human adenovirus-host cell interactions: comparative study with members of subgroups b and c, J. Virol. (United. States),. Aug. 64: 3661-3673.

38. Desnick, R.J. and Schuchman, E.H. (1998) Gene therapy for genetic diseases, Acta Paediatr. Jpn. 40: 191-203.

39. Dunlap, D.D., Maggi, A., Soria, M.R. and Monaco, L. (1997) Nanoscopic structure of DNA condensed for gene delivery, Nucleic Acids Res. 25: 3095-3101.

40. Ebbinghaus, S.W., Vigneswaran, N., Miller, C.R., Chee Awai, R.A., Mayfield, C.A., Curiel, D.T. and Miller, D.M. (1996) Efficient delivery of triplex forming oligonucleotides to tumor cells by adenovirus-polylysine complexes, Gene Ther. 3: 287-297.

41. Edwards, R.J., Carpenter, D.S. and Minchin, R.F. (1996) Uptake and intracellular trafficking of asialoglycoprotein-polylysine-DNA complexes in isolated rat hepatocytes, Gene Ther. 3: 937-940.

42. Egilmez, N.K., Iwanuma, Y. and Bankert, R.B. (1996) Evaluation and optimization of different cationic liposome formulations for in vivo gene transfer, Biochem. Biophys. Res. Commun. 221: 169-173.

43. Erbacher, P., Bousser, M.T., Raimond, J., Monsigny, M., Midoux, P. and Roche, A.C. (1996) Gene transfer by DNA/glycosylated polylysine complexes into human blood monocyte-derived macrophages, Hum. Gene Ther. 7: 721-729.

44. Erbacher, P., Roche, A.C., Monsigny, M. and Midoux, P. (1996) Putative role of chloroquine in gene transfer into a human hepatoma cell line by dna/lactosylated polylysine complexes, Exp. Cell Res. 225: 186-194.

45. Erbacher, P., Roche, A.C., Monsigny, M. and Midoux, P. (1997) The reduction of the positive charges of polylysine by partial gluconoylation increases the transfection efficiency of polylysine/DNA complexes, Biochim. Biophys. Acta, 1324: 27-36.

46. Ferkol, T., Kaetzel, C.S. and Davis, P.B. (1993) Gene transfer into respiratory epithelial cells by targeting the polymeric immunoglobulin receptor, J. Clin. Invest. 92: 23942400.

47. Ferkol, T., Mularo, F., Hilliard, J., Lodish, S., Perales, J.C., Ziady, A. and Konstan, M. (1998) Transfer of the human Alphal-antitrypsin gene into pulmonary macrophages in vivo, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 18: 591-601.

48. Ferkol, T., Perales, J.C., Eckman, E., Kaetzel, C.S., Hanson, R.W. and Davis, P.B. (1995) Gene transfer into the airway epithelium of animals by targeting the polymeric immunoglobulin receptor, J. Clin. Invest. 95: 493-502.

49. Ferkol, T., Perales, J.C., Mularo, F. and Hanson, R.W. (1996) Receptor-mediated gene transfer into macrophages, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 93: 101-105.

50. Ferrari, S., Moro, E., Pettenazzo, A., Behr, J.P., Zacchello, F. and Scarpa, M. (1997) ExGen 500 is an efficient vector for gene delivery to lung epithelial cells in vitro and in vivo, GeneTher. 4: 1100-1106.

51. Fisher, K.J. and Wilson, J.M. (1994) Biochemical and functional analysis of an adenovirus-based ligand complex for gene transfer, Biochem. J. 299: 49-58.

52. Fitzgerald, D.J., Padmanabhan, R., Pastan, I. and Willingham, M.C. (1983) Adenovirus-induced release of epidermal growth factor and pseudomonas toxin into the cytosol ofkb cells during receptor-mediated endocytosis, Cell, 32: 607-617.

53. Fitzgerald, D.J., Trowbridge, I.S., Pastan, I. and Willingham, M.C. (1983) Enhancement of toxicity of antitransferrin receptor antibody-pseudomonas exotoxin conjugates by adenovirus, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 80: 4134-4138.

54. Forsayeth, J.R. and Garcia, P.D. (1994) Adenovirus-mediated transfection of cultured cells, Biotechniques, 17: 354-6, 357-8.

55. Fortunati, E., Bout, A., Zanta, M.A., Valerio, D. and Scarpa, M. (1996) In vitro and in vivo gene transfer to pulmonary cells mediated by cationic liposomes, Biochim. Biophys. Acta, 1306: 55-62.

56. Gao, L., Wagner, E., Cotten, M., Agarwal, S., Harris, C., Romer, M., Miller, L., Hu, P.C. and Curiel, D. (1993) Direct in vivo gene transfer to airway epithelium employing adenovirus-polylysine-dna complexes, Hum. Gene Ther. 4: 17-24.

57. Gao, X. and Huang, L. (1996) Potentiation of cationic liposome-mediated gene delivery by polycations, Biochemistry, 35: 1027-1036.

58. Ginobbi, P., Geiser, T.A., Ombres, D. and Citro, G. (1997) Folic acid-polylysine carrier improves efficacy of c-myc antisense oligodeoxynucleotides on human melanoma (Ml4) cells, Anticancer Res. 17: 29-35.

59. Gooding, L.R. (1992) Virus proteins that counteract host immune defenses, Cell (United. States),. Oct. 2. 71: 5-7.

60. Goula, D., Benoist, C., Mantero, S., Merlo, G., Levi, G. and Demeneix, B.A. (1998) Polyethylenimine-based intravenous delivery of transgenes to mouse lung. Gene Ther. 5: 1291-1295.

61. Goula, D., Remy, J.S., Erbacher, P., Wasowicz, M., Levi, G., Abdallah, B. and Demeneix, B.A. (1998) Size, diffusibility and transfection performance of linear PEI/DNA complexes in the mouse central nervous system, Gene Ther. 5: 712-717.

62. Gould, S.G., Keller, G.A. and Subramani, S. (1987) Identification of a peroxisomal targeting signal at the carboxy terminus of firefly luciferase, J. Cell Biol. 105: 2923-2931.

63. Greber, U.F., Webster, P., Weber, J. and Helenius, A. (1996) The role of the adenovirus protease on virus entry into cells, EMBO J. 15: 1766-1777.

64. Greber, U.F., Willetts, M., Webster, P. and Helenius, A. (1993) Stepwise dismantling of adenovirus 2 during entry into cells, Cell, 75: 477-486.

65. Guy, J., Drabek, D. and Antoniou, M. (1995) Delivery of dna into mammalian cells by receptor-mediated endocytosis and gene therapy, Mol. Biotechnol. 3: 237-248.

66. Hansma, H.G., Golan, R., Hsieh, W„ Lollo, C.P., Mullen Ley, P. and Kwoh, D. (1998) DNA condensation for gene therapy as monitored by atomic force microscopy, Nucleic Acids Res. 26: 2481-2487.

67. Harris, C.E., Agarwal, S., Hu, P., Wagner, E. and Curiel, D.T. (1993) Receptor-mediated gene transfer to airway epithelial cells in primary culture, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 9: 441-447.

68. Honda, M., Hu, P.C., Huang, C.H., Matsui, H. and Lemon, S.M. (1996) A replication-deficient adenovirus enhances liposome-mediated nucleic acid transfer into a stable cell line expressing T7 RNA polymerase, J. Virol. Methods, 58: 41-51.

69. Houdebine, L.M., Djiane, J., Dusanter-Fourt, I., Martel, P., Kelly, P.A., Devinoy, E. and Servely, J.L. (1985) Hormonal action controlling mammary activity, J. Dairy. Sci. 68: 489-500.

70. Huckett, B., Ariatti, M. and Hawtrey, A.O. (1990) Evidence for targeted gene transfer by receptor-mediated endocytosis. stable expression following insulin-directed entry of neo into hepg2 cells, Biochem. Pharmacol. 40: 253-263.

71. Huckett, B., Gordhan, H., Hawtrey, R., Moodley, N., Ariatti, M. and Hawtrey, A. (1986) Binding of dna to albumin and transferrin modified by treatment with water-soluble carbodiimides, Biochem. Pharmacol. 35: 1249-1257.

72. Jones, N. and Shenk, T. (1979) Isolation of adenovirus type 5 host range deletion mutants defective for transformation of rat embryo cells, Cell, 17: 683-689.

73. Katayose, S. and Kataoka, K. (1998) Remarkable increase in nuclease resistance of plasmid DNA through supramolecular assembly with poly(ethylene glycol) -poly(L-lysine) block copolymer, J. Pharm. Sci. 87: 160-163.

74. Keller, G.A., Gould, S., Deluca, M. and Subramani, S. (1987) Firefly luciferase is targeted to peroxisomes in mammalian cells, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 84: 3264-3268.

75. Kerr, D.E., Liang, F., Bondioli, K.R., Zhao, H., Kreibich, G., Wall, R.J. and Sun, T.T. (1998) The bladder as a bioreactor: urothelium production and secretion of growth hormone into urine see comments., Nat. Biotechnol. 16: 75-79.

76. Kircheis, R., Kichler, A., Wallner, G., Kursa, M., Ogris, M., Felzmann, T., Buchberger, M. and Wagner, E. (1997) Coupling of cell-binding ligands to polyethylenimine for targeted gene delivery, Gene Ther. 4: 409-418.

77. Kircheis, R., Schuller, S., Brunner, S., Ogris, M., Heider, K.-H., Zauner, W. and Wagner, E. (1999) Polycation-based DNA complexes for tumor-targeted gene delivery in vivo. The Journal of Gene Medicine, 1: 111-120.

78. Klemm, A.R., Young, D. and Lloyd, J.B. (1998) Effects of polyethyleneimine on endocytosis and lysosome stability, Biochem. Pharmacol. 56: 41-46.

79. Koths, K. (1995) Recombinant proteins for medical use: the attractions and challenges, Curr. Opin. Biotechnol. 6: 681-687.

80. Laver, W.G., Younghusband, H.B. and Wrigley, N.G. (1971) Virology, 45: 598-614.

81. Lee, R.J. and Huang, L. (1996) Folate-targeted, anionic liposome-entrapped polylysine-condensed dna for tumor cell-specific gene transfer, J. Biol. Chem. 271: 84818487.

82. Li, P., Bellett, A.J. and Parish, C.R. (1984) The structural proteins of chick embryo lethal orphan virus (fowl adenovirus type 1), J. Gen. Virol. 65: 1803-1815.

83. Limonta, J.M., Castro, F.O., Martinez, R., Puentes, P., Ramos, B., Aguilar, A., Lleonart, R.L. and de la Fuente, J. (1995) Transgenic rabbits as bioreactors for the production of human growth hormone, J. Biotechnol. 40: 49-58.

84. Lozier, J.N., Thompson, A.R., Hu, P.C., Read, M., Brinkhous, K.M., High, K.A. and Curiel, D.T. (1994) Efficient transfection of primary cells in a canine hemophilia b model using adenovirus-polylysine-dna complexes, Hum. Gene Ther. 5: 313-322.

85. Mahato, R.I., Takakura, Y. and Hashida, M. (1997) Nonviral vectors for in vivo gene delivery: physicochemical and pharmacokinetic considerations, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier. Syst. 14: 133-172.

86. Martinez-Fong, D., Mullersman, J.E., Purchio, A.F., Armendariz-Borunda, J. and Martinez-Hernandez, A. (1994) Nonenzymatic glycosylation of poly-l-lysine: a new tool for targeted gene delivery, Hepatology, 20: 1602-1608.

87. McKee, T.D., De Rome, M.E., Wu, G.Y. and Findeis, M.A. (1994) Preparation of asialoorosomucoid-polylysine conjugates, Bioconjug. Chem. 5: 306-311.

88. Mellman, I. (1996) Endocytosis and molecular sorting, Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 12: 575-625.

89. Michael, S.I. and Curiel, D.T. (1994) Strategies to achieve targeted gene delivery via the receptor-mediated endocytosis pathway, Gene Ther. 1: 223-232.

90. Midoux, P., Mendes, C., Legrand, A., Raimond, J., Mayer, R., Monsigny, M. and Roche, A.C. (1993) Specific gene transfer mediated by lactosylated poly-l-lysine into hepatoma cells, Nucleic Acids Res. 21: 871-878.

91. Mislick, K.A. and Baldeschwieler, J.D. (1996) Evidence for the role of proteoglycans in cation-mediated gene transfer, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 93: 1234912354.

92. Mislick, K.A., Baldeschwieler, J.D., Kayyem, J.F. and Meade, T.J. (1995) Transfection of folate-polylysine DNA complexes: evidence for lysosomal delivery, Bioconjug. Chem. 6: 512-515.

93. Monsigny, M., Roche, A.C., Midoux, P. and Mayer, R. (1994) Glycoconjugates as carriers for specific delivery of therapeutic drugs and genes, Advanced Drug Delivery Reviews, 14: 1-24.

94. Novoa, I., Benavente, J., Cotten, M. and Carrasco, L. (1997) Permeabilization of mammalian cells to proteins: poliovirus 2A(pro) as a probe to analyze entry of proteins into cells, Exp. Cell Res. 232: 186-190.

95. OConnell, B.C., Lillibridge, C.D., Ambudkar, I. and Kruse, D. (1998) Somatic gene transfer to salivary glands, Ann. N. Y. Acad. Sci. 842: 171-180.

96. Ogris, M., Brunner, S., SchDller, S., Kircheis, R. and Wagner, E. (1999) PEGylated DNA/transferrin-PEI complexes: reduced interaction with blood components, extended circulation in blood and potential for systemic gene delivery, Gene Ther. 6: 595-605.

97. Ogris, M., Steinlein, P., Kursa, M., Mechtler, K., Kircheis, R. and Wagner, E. (1998) The size of DNA/transferrin-PEI complexes is an important factor for gene expression in cultured cells. Gene Ther. 5: 1425-1433.

98. Ohmori, N., Niidome, T., Wada, A., Hirayama, T., Hatakeyama, T. and Aoyagi, H. (1997) The enhancing effect of anionic alpha-helical peptide on cationic peptide-mediating transfection systems, Biochem. Biophys. Res. Commun. 235: 726-729.

99. Otero, M.J. and Carrasco, L. (1987) Proteins are cointernalized with virion particles during early infection, Virology, 160: 75-80.

100. Page, R.L., Butler, S.P., Subramanian, A., Gwazdauskas, F.C., Johnson, J.L. and Velander, W.H. (1995) Transgenesis in mice by cytoplasmic injection of polylysine/dna mixtures, Transgenic. Res. 4: 353-360.

101. Perales, J.C., Ferkol, T., Beegen, H., Ratnoff, O.D. and Hanson, R.W. (1994) Gene transfer in vivo: sustained expression and regulation of genes introduced into the liver by receptor-targeted uptake, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 91: 4086-4090.

102. Perales, J.C., Ferkol, T., Molas, M. and Hanson, R.W. (1994) An evaluation of receptor-mediated gene transfer using synthetic dna-ligand complexes, Eur. J. Biochem. 226: 255-266.

103. Philipson, L., Lonberg-Holm, K. and Pettersson, U. (1968) Virus-receptor interaction in an adenovirus system. J. Virol. 2: 1064-1075.

104. Plank, C., Mechtler, K., Szoka, F.C., Jr. and Wagner, E. (1996) Activation of the complement system by synthetic DNA complexes: a potential barrier for intravenous gene delivery, Hum. Gene Ther. 7: 1437-1446.

105. Plank, C., Oberhauser, B., Mechtler, K., Koch, C. and Wagner, E. (1994) The influence of endosome-disruptive peptides on gene transfer using synthetic virus-like gene transfer systems, J. Biol. Chem. 269: 12918-12924.

106. Plank, C., Zauner, W. and Wagner, E. (1998) Application of membrane-active peptides for drug and gene delivery across cellular membranes, Advanced Drug Delivery Reviews, 34: 21-35.

107. Pollard, H., Remy, J.S., Loussouarn, G., Demolombe, S., Behr, J.P. and Escande, D. (1998) Polyethylenimine but not cationic lipids promotes transgene delivery to the nucleus in mammalian cells, J. Biol. Chem. 273: 7507-7511.

108. Prchla, E., Plank, C., Wagner, E., Blaas, D. and Fuchs, R. (1995) Virus-mediated release of endosomal content in vitro: different behavior of adenovirus and rhino virus serotype 2, J. Cell Biol. 131: 111-123.

109. Relloso, M. and Esponda, P. (1998) In vivo gene transfer to the mouse oviduct epithelium, Fértil. Steril. 70: 366-368.

110. Rojanasakul, Y., Wang, L.Y., Malanga, C.J., Ma, J.K. and Liaw, J. (1994) Targeted gene delivery to alveolar macrophages via fc receptor-mediated endocytosis, Pharm. Res. 11: 1731-1736.

111. Rosen, J.M., Li, S., Raught, B. and Hadsell, D. (1996) The mammary gland as a bioreactor: factors regulating the efficient expression of milk protein-based transgenes, Am. J. Clin. Nutr. 63: 627S-32S.

112. Rosenkranz, A.A., Yachmenev, S.V., Jans, D.A., Serebryakova, N.V., Murav'ev, V.I., Peters, R. and Sobolev, A.S. (1992) Receptor-mediated endocytosis and nuclear transport of a transfecting dna construct, Exp. Cell Res. 199: 323-329.

113. Ross, G.F., Bruno, M.D., Uyeda, M., Suzuki, K., Nagao, K., Whitsett, J.A. and Korfhagen, T.R. (1998) Enhanced reporter gene expression in cells transfected in the presence of DMI-2, an acid nuclease inhibitor. Gene Ther. 5: 1244-1250.

114. Ross, G.F., Morris, R.E., Ciraolo, G., Huelsman, K., Bruno, M., Whitsett, J.A., Baatz, J.E. and Korfhagen, T.R. (1995) Surfactant protein a-polylysine conjugates for delivery of dna to airway cells in culture, Hum. Gene Ther. 6: 31-40.

115. Schaffer, D.V. and Lauffenburger, D.A. (1998) Optimization of Cell Surface Binding Enhances Efficiency and Specificity of Molecular Conjugate Gene Delivery. J. Biol. Chem. 273: 28004-28009.

116. Seth, P. (1994) Mechanism of adenovirus-mediated endosome lysis: role of the intact adenovirus capsid structure, Biochem. Biophys. Res. Commun. 205: 1318-1324.

117. Seth, P. (1994) A simple and efficient method of protein delivery into cells using adenovirus, Biochem. Biophys. Res. Commun. 203: 582-587.

118. Seth, P. (1994) Adenovirus-dependent release of choline from plasma membrane vesicles at an acidic ph is mediated by the penton base protein, J. Virol. 68: 1204-1206.

119. Seth, P., Brinkmann, U., Schwartz, G.N., Katayose, D., Gress, R., Pastan Ira and Cowan, K. (1996) Adenovirus-mediated gene transfer to human breast tumor cells: an approach for cancer gene therapy and bone marrow purging, Cancer Res. 56: 1346-1351.

120. Seth, P., Fitzgerald, D.J., Willingham, M.C. and Pastan, I. (1984) Role of a low-ph environment in adenovirus enhancement of the toxicity of a pseudomonas exotoxin-epidermal growth factor conjugate, J. Virol. 51: 650-655.

121. Seth, P., Rosenfeld, M., Higginbotham, J. and Crystal, R.G. (1994) Mechanism of enhancement of dna expression consequent to cointernalization of a replication-deficient adenovirus and unmodified plasmid dna, J. Virol. 68: 933-940.

122. Seymour, L.W. (1992) Passive tumor targeting of soluble macromolecules and drug conjugates, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier. Syst. 9: 135-187.

123. Smith, R.M. and Jarett, L. (1990) Partial characterization of mechanism of insulin accumulation in H35 hepatoma cell nuclei, Diabetes, 39: 683-689.

124. Sobolev, A.S., Akhlynina, T.V., Yachmenev, S.V., Rosenkranz, A.A. and Severin, E.S. (1992) Internalizable insulin-bsa-chlorin e6 conjugate is a more effective photosensitizer than chlorin e6 alone, Biochem. Int. 26: 445-450.

125. Sosnowski, B.A., Gonzalez, A.M., Chandler, L.A., Buechler, Y.J., Pierce, G.F. and Baird, A. (1996) Targeting DNA to cells with basic fibroblast growth factor (FGF2), J. Biol. Chem. 271: 33647-33653.

126. Stankovics, J., Crane, A.M., Andrews, E., Wu, C.H., Wu, G.Y. and Ledley, F.D. (1994) Overexpression of human methylmalonyl coa mutase in mice after in vivo gene transfer with asialoglycoprotein/polylysine/dna complexes, Hum. GeneTher. 5: 1095-1104.

127. Strydom, S., Van Jaarsveld, P., Van Helden, E., Ariatti, M. and Hawtrey, A. (1993) Studies on the transfer of dna into cells through use of avidin-polylysine conjugates complexed to biotinylated transferrin and dna, J. Drug Target. 1: 165-174.

128. Szoka, F., Jr. and Papahadjopoulos, D. (1978) Procedure for preparation of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 75: 4194-4198.

129. Taxman, D.J., Lee, E.S. and Wojchowski, D.M. (1993) Receptor-targeted transfection using stable maleimido-transferrin/thio-poly-l-lysine conjugates published erratum appears in anal biochem 1993 nov 1; 214(2):588.,^na/. Biochem. 213: 97-103.

130. Thompson, J.F., Hayes, L.S. and Lloid, D.B. (1991) Modulation of firefly luciferase stability and impact on studies of gene regulation. Gene, 103: 171-177.

131. Thurnher, M., Wagner, E., Clausen, H., Mechtler, K., Rusconi, S., Dinter, A., Birnstiel, M.L., Berger, E.G. and Cotten, M. (1994) Carbohydrate receptor-mediated gene transfer to human t leukaemic cells, Glycobiology. 4: 429-435.

132. Trubetskoy, V.S., Torchilin, V.P., Kennel, S.J. and Huang, L. (1992) Use of n-terminal modified poly(l-lysine)-antibody conjugate as a carrier for targeted gene delivery in mouse lung endothelial cells, Bioconjug. Chem. 3: 323-327.

133. Uherek, C., Fominaya, J. and Wels, W. (1998) A modular DNA carrier protein based on the structure of diphtheria toxin mediates target cell-specific gene delivery, J. Biol. Chem. 273: 8835-8841.

134. Vitiello, L., Bockhold, K., Joshi, P.B. and Worton, R.G. (1998) Transfection of cultured myoblasts in high serum concentration with DODAC:DOPE liposomes, Gene Ther. 5: 1306-1313.

135. Vitiello, L., Chonn, A., Wasserman, J.D., Duff, C. and Worton, R.G. (1996) Condensation of plasmid DNA with polylysine improves liposome-mediated gene transfer into established and primary muscle cells, Gene Ther. 3: 396-404.

136. Wadhwa, M.S., Knoell, D.L., Young, A.P. and Rice, K.G. (1995) Targeted gene delivery with a low molecular weight glycopeptide carrier, Bioconjug. Chem. 6: 283-291.

137. Wagner, E., Cotten, M., Foisner, R. and Birnstiel, M.L. (1991) Transferrin-polycation-dna complexes: the effect of polycations on the structure of the complex and dna delivery to cells, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 88: 4255-4259.

138. Wall, R.J., Rexroad, C.E., Jr., Powell, A., Shamay, A., McKnight, R. and Hennighausen, L. (1996) Synthesis and secretion of the mouse whey acidic protein in transgenic sheep, Transgenic. Res. 5: 67-72.

139. Wendelburg, B.J. and Vos, J. (1998) An enhanced EBNA1 variant with reduced IR3 domein for long-term episomal maintenance and transgene expression of oriP-based plasmids in human cells. Gene Ther. 5: 1389-1399.

140. Wickham, T.J., Filardo, E.J., Cheresh, D.A. and Nemerow, G.R. (1994) Integrin alpha v beta 5 selectively promotes adenovirus mediated cell membrane permeabilization, J. Cell Biol. 127: 257-264.

141. Wickham, T.J., Mathias, P., Cheresh, D.A. and Nemerow, G.R. (1993) Integrins alpha v beta 3 and alpha v beta 5 promote adenovirus internalization but not virus attachment, Cell, 73: 309-319.

142. Winters, W.D. and Russell, W.C. (1971)/. Gen. Virol. 10: 181-184.

143. Wolfert, M.A. and Seymour, L.W. (1996) Atomic force microscopic analysis of the influence of the molecular weight of poly(l)lysine on the size of polyelectrolyte complexes formed with dna, Gene Ther. 3: 269-273.

144. Wolfert, M.A. and Seymour, L.W. (1998) Chloroquine and amphipathic peptide helices show synergistic transfection in vitro, Gene Ther. 5: 409-414.

145. Wolff, J.A., Williams, P., Acsadi, G., Jiao, S., Jani, A. and Chong, W. (1991) Conditions affecting direct gene transfer into rodent muscle in vivo, Biotechniques, 11: 474485.

146. Wu, C.H. and Wu, G.Y. (1998) Targeted inhibition of hepatitis C virus-directed gene expression in human hepatoma cell lines, Gastroenterology, 114: 1304-1312.

147. Wu, G.Y., Wilson, J.M., Shalaby, F., Grossman, M., Shafritz, D.A. and Wu, C.H. (1991) Receptor-mediated gene delivery in vivo. Partial correction of genetic analbuminemia in Nagase rats, J. Biol. Chem. 266: 14338-14342.

148. Wu, G.Y. and Wu, C.H. (1987) Receptor-mediated in vitro gene transformation by a soluble dna carrier system published erratum appears in j biol chem 1988 jan 5; 263(1):588., J. Biol. Chem. 262: 4429-4432.

149. Wu, G.Y. and Wu, C.H. (1988) Evidence for targeted gene delivery to hep g2 hepatoma cells in vitro, Biochemistry, 27: 887-892.

150. Wu, G.Y. and Wu, C.H. (1988) Receptor-mediated gene delivery and expression in vivo, J. Biol. Chem. 263: 14621-14624.

151. Xu, B., Wiehle, S., Roth, J.A. and Cristiano, R.J. (1998) The contribution of poly-L-lysine, epidermal growth factor and streptavidin to EGF/PLL/DNA polyplex formation. Gene Ther. 5: 1235-1243.

152. Yang, N.S. (1992) Gene transfer into mammalian somatic cells in vivo, Crit. Rev. Biotechnol. 12: 335-356.

153. Yang, Y., Nunes, F.A., Berencsi, K., Furth, E.E., Gonczol, E. and Wilson, J.M. (1994) Cellular immunity to viral antigens limits el-deleted adenoviruses for gene therapy, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 91: 4407-4411.

154. Yarns, S., Rosen, J.M., Cole, A.M. and Diamond, G. (1996) Production of active bovine tracheal antimicrobial peptide in milk of transgenic mice, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 93:14118-14121.

155. Yin, W. and Cheng, P.W. (1994) Lectin conjugate-directed gene transfer to airway epithelial cells, Biochem. Biophys. Res. Commun. 205: 826-833.

156. Yoshimura, A. (1985) Adenovirus-induced leakage of co-endocytosed macromolecules into the cytosol, Cell Struct. Funct. 10: 391-404.

157. Yoshimura, K., Rosenfeld, M.A., Seth, P. and Crystal, R.G. (1993) Adenovirus-mediated augmentation of cell transfection with unmodified plasmid vectors, J. Biol. Chem. 268: 2300-2303.

158. Zabner, J., Fasbender, A.J., Moninger, T., Poellinger, K.A. and Welsh, M.J. (1995) Cellular and molecular barriers to gene transfer by a cationic lipid, J. Biol. Chem. 270: 1899719007.

159. Zanta, M.A., Boussif, O., Adib, A. and Behr, J.P. (1997) In vitro gene delivery to hepatocytes with galactosylated polyethylenimine, Bioconjug. Chem. 8: 839-844.99

160. Zauner, W., Blaas, D., Kuechler, E. and Wagner, E. (1995) Rhinovirus-mediated endosomal release of transfection complexes, J. Virol. 69: 1085-1092.

161. Zauner, W., Kichler, A., Schmidt, W., Sinski, A. and Wagner, E. (1996) Glycerol enhancement of ligand-polylysine/DNA transfection, Biotechniques, 20: 905-913.

162. Zhang, K., Lu, D., Xue, J., Huang, Y. and Huang, S. (1997) Construction of mammary gland-specific expression vectors for human clotting factor IX and its secretory expression in goat milk, Chin. J. Biotechnol. 13: 271-276.

163. Ziady, A.G., Ferkol, T., Gerken, T., Dawson, D.V., Perlmutter, D.H. and Davis, P.B. (1998) Ligand substitution of receptor targeted DNA complexes affects gene transfer into hepatoma cells. Gene Ther. 5: 1685-1697.1001. Благодарности.

164. Выражаю благодарность научному руководителю — профессору, доктору биологических наук Александру Сергеевичу Соболеву за предоставленную возможность работать над данной темой в биофизической лаборатории и под его руководством.

165. Также выражаю благодарность второму научному руководителю кандидату биологических наук Андрею Александровичу Розенкранцу за совместную работу, за неоценимую помощь в планировании и проведении экспериментов и в написании данной работы.

166. Очень признательна Владимиру Афанасьевичу Никитину за совместную работу с животными и Татьяне Григорьевне Киселевой за ведение культур клеток, а также всем сотрудникам биофизической лаборатории за помощь и поддержку.