Изучение полиморфизма ДНК у видов рода Aegilops L., произрастающих в различных природно-климатических условиях Таджикистана тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.12, кандидат биологических наук Кавракова, Зубайда Бурихоновна

• Кавракова, Зубайда Бурихоновна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кавракова, Зубайда Бурихоновна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Геномный анализ зерновых злаков с помощью молекулярных маркеров.

1. 2. RAPD — маркеры в анализе генома зерновых злаков.

1.3. Микросателлиты (SSR - маркеры) в генотипировании зерновых злаков

1.4. Использование молекулярных маркеров в изучении генома видов рода Aegilops L.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Краткая характеристика видов рода Aegilops L.

2.2. Описание видов рода Aegilops L., использованных в работе.

2.1.1. Эгилопс цилиндрический (Aegilops cylindrica Host.).

2.1.2. Эгилопс mayuiuu (Aegilops tauschii Coss.).

2.1.3. Эгилопс трёхдюймовый (Aegilops triuncialis L.).

2.1.4. Эгилопс толстый (Aegilops crassa Boiss).

2.3. Образцы видов Aegilops, собранные в природных условиях и использованные в работе.

2.4. Методы биохимического анализа.

2.4.1. Выделение ДНК из свежих листьев пшеницы микрометодом.

2.4.2. Проведение ПЦР анализа.

2.4.3. Проведение электрофореза в агарозном геле.

2.4.4. Анализ продуктов ПЦР в ПААГ.

2.4.5. Использование ПЦР метода.

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1 Анализ RAPD маркеров при генотипировании видов рода Aegilops L., произрастающих в Таджикистане.

3.2. Микросателлитный (SSR-маркеры) анализ генома видов Aegilops L.,произрастающих в Таджикистане.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение полиморфизма ДНК у видов рода Aegilops L., произрастающих в различных природно-климатических условиях Таджикистана»

Актуальность темы. В настоящее время в области сравнительной генетики зерновых злаков интенсивно проводятся эксперименты с использованием молекулярных маркеров. В результате таких исследований либо строятся практически лишенные функциональных генов карты, либо проводится «сравнительная привязка» того или иного гена разных видов к одним и тем же молекулярных маркерам (Гречко, 2002; Горюнова, 2004). Это связано с тем, что сравнительно-генетические исследования помогают эффективно сопоставить геномы разных видов растений, и открывают дополнительные резервы мобилизации генетических ресурсов видов, родов при создании нового исходного материала, который может быть использован как для повышения эффективности генетических исследований, так и для селекции (Вавилов, 1967; Конарев, 1980; Алтухов, 1989; Гончаров, 2002).

Важнейшей характеристикой популяций служит их внутрипопуляционная генетическая изменчивость, «полиморфизм» по дискретным качественным и непрерывным количественным признакам (Дрейпер, 1991; Зеленин, 2001; Жимулев, 2002).

Изучение практически всех видов рода Aegilops Ь. развивалось и развивается в связи с их высокой устойчивостью к ряду грибковых болезней и некоторым насекомым-вредителям, а также с возможностью проведения между ними и возделываемыми видами пшеницы интрогрессивной гибридизации для передачи им полезных признаков (Корень, 1998; Картель, 1999).

Географическое расположение Таджикистана с его своеобразными климатическими условиями, а также разнообразием диких представителей зерновых злаков представляет особый интерес для изучения полиморфизма ДНК генома видов Aegilops Ь. Поэтому нам представлялось вполне актуальным провести исследование природных форм и типов (биотипов) видов рода Aegilops Ь., произрастающих в различных природно3 климатических условиях Республики Таджикистан с применением молекулярных маркеров.

Цель и задачи работы. Целью нашей работы было изучение полиморфизма ДНК у видов рода Aegilops Ь. с использованием молекулярных маркеров, а также геномный анализ образцов видов рода Ле§Иоря Ь., произрастающих в различных регионах Таджикистана. Для решения достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

• экспедиционные сборы семян видов рода Aegilops, произрастающих в различных природно-климатических условиях Центрального, Южного и Северного Таджикистана, и их краткое фенотипическое описание;

• использование молекулярных маркеров на основе проведения полимеразной цепной реакции для анализа генетической вариабельности каждого вида;

• геномный анализ образцов видов, собранных в различных природно-климатических условиях Таджикистана;

• использование ЛАРЮ - маркеров для геномного анализа образцов видов рода Ае&1оря;

• использование микросателлитов или - маркеров для выявления филогенетических связей между видами и внутривидового полиморфизма представителей рода Ае§Иор8 флоры Таджикистана;

• определение генетического расстояния и построение дендрограммы на основе анализа различных молекулярных маркеров для выявления степени генетической близости или различия у образцов изученных видов.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые с использованием двух типов молекулярных маркеров (ЯАРО и БЗЯ) проведен анализ широкого набора образцов - представителей четырёх видов рода

Aegilops, произрастающих на территории Таджикистана. На основе полученных данных определены уровни внутри- и межвидового геномного полиморфизма и показаны существенные различия внутривидовой геномной вариабельности у изученных видов. Обнаружен определенный параллелизм внутривидовой вариабельности морфо-биологических признаков с вариабельностью молекулярного анализа генома. У исследованных видов Aegilops выявлен внутри- и межвидовой полиморфизм по всем использованным молекулярным маркерам, что свидетельствует об информативности данных маркеров. Впервые был проанализирован полиморфизм ДНК у видов, произрастающих на разных высотах над уровнем моря и в разных природно-климатических условиях Таджикистана. В связи с этим особую практическую значимость имеют результаты, касающиеся образцов, обладающих высоким уровнем изменчивости генов, ответственных за соле - и засухоустойчивость, а также устойчивость к различным заболеваниям. Подобранные нами методы и праймеры позволяют эффективно выявлять меж- и внутривидовую изменчивость у изученных видов и могут быть использованы селекционерами в их работе по созданию устойчивых сортов зерновых злаков. Кроме того, полезные результаты были использовании при создании коллекции рода Aegilops, произрастающих в различных экологических условиях Таджикистана.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Кавракова, Зубайда Бурихоновна

Выводы

1. Впервые с использованием SSR -и RAPD- молекулярных маркеров проведен геномный анализ четырёх видов рода Aegilops L, произрастающих на территории Таджикистана. Определен уровень внутри- и межвидового полиморфизма видов Aegilops на уровне случайных ДНК-повторов (RAPD) и микросателлитных простых повторов генома (SSR).

2. Показано, что на молекулярном уровне виды, имеющие D-геном (Ае. tauschii, Ае. cylindrica и Ае. crass а), содержат одинаковые фрагменты ДНК, а вид Ае. triuncialis - отличные от них фрагменты.

3. По результатам RAPD -и SSR- маркирования наиболее полиморфным является вид Ае. tauschii (по SSR- маркерам 90% составляет полиморфнисть и около 10% мономорфность).

4. По коэффициенту генетического сходства между различными образцами вида Ае. triuncialis образуется два основных кластера: первый кластер объединяет в основном образцы, произрастающие в северных регионах Таджикистана, а второй кластер - образцы Aegilops, распространенный в южных регионах.

5. Образцы вида Ае. crassa имеют более близкий уровень генетического сходства с Ае. tauschii, чем с Ае. cylindrica, что, по-видимому, связано с тем, что вид Ае. cylindrica, кроме D-генома, имеет еще и С-геном.

6. Микросателлитный анализ показал, что количество ПЦР - фрагментов у использованных праймеров на один маркер варьировало от 1 до 20. В некоторых вариантах встречается только один ПЦР - фрагмент-мономорфный. ПЦР-анализ праймера WSP-190 у различных образцов видов Aegilops выявил наличие высокой степени полиморфизма ДНК внутри каждого изученного вида, а также между различными видами.

Заключение

Из приведенных выше данных видно, что в последние годы наблюдается стремительный рост знаний в области создания и применения молекулярных маркеров в генетике растений. Бурное развитие молекулярной биологии позволяет использовать более мощный разрешающий аппарат, выявляющий изменчивость на уровне нуклеотидной последовательности ДНК, предоставляет исследователям возможность решать вопросы, ответы на которые нельзя было получить другими методами. Применение молекулярных маркеров позволяет существенно продвинуться в понимании структурной организации и эволюции живых организмов. В этих работах используются следующие молекулярные маркеры — КАРО, БКР и 8811. Использование данных маркеров при генотипировании диких видов Aegilops и выявило определенную закономерность. Так, КАРБ-маркеры позволяют выявить межвидовые и межсортовые различия в полиморфизме ДНК. В то же время БЭК-маркеры были информативны для установления внутривидовых различий. Результаты могут быть использованы для паспортизации видов, сортов, линий, что необходимо учитывать при селекционных работах.

Как известно, различные виды рода Aegilops Ь., всегда привлекали большое внимание исследователей в качестве перспективных генетических источников. Как показали многочисленные исследования, некоторые виды рода Aegilops Ь., принимали непосредственное участие в эволюционном становлении тетраплоидных и гексаплоидных пшениц (Гарюнова, 2004).

Для исследования генома различных видов рода Aegilops Ь., использовали 17-ИАРБ и 14 88Я - праймеров, которые показали высокую информативность. Нами было использовано 106 образцов Aegilops, произрастающих в различных регионах Таджикистана для анализа полиморфизма ДНК с помощью молекулярных маркеров.

Высокий уровень полиморфизма генома, сочетающийся с высокой специфичностью для каждого образца ДНК, указывает на преимущества молекулярных маркеров перед другими, известными в литературе маркерами. Также привлекает простота, доступность и экономичность этого метода: полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет легко и быстро проводить микросателлитный анализ, без применения радиоактивности и для этого требуется небольшое количество ДНК.

В результате амплификации с использованием 17-RAPD и 14 SSR были получены в общей сложности около 1300 ПЦР фрагмента.

Данная работа состояла в оценке уровня внутривидовых различий для каждого из анализируемых видов Aegilops L., методом RAPD-маркирования.

Как известно, RAPD- праймеры более характерны для выявления внутривидового полиморфизма.

В работе приведены данные ПЦР-анализа по RAPD-праймерам, где были выявлены отличия в количестве фрагментов у различных видов рода Aegilops. В качестве примера можно привести результаты анализа продуктов ПЦР, полученные с праймером R-157. Длина фрагментов в пределах от 200 до 2000 п.н. при амплификации ДНК по 15 образцам каждого из видов Эгилопса. Как показывает фрагменты ДНК, имеющие 340, 450, 420, 550, 650, 700, 850 п.н. не полиморфные, а фрагменты длиной 380, 500, 750, 770 и выше 1000 п.н. являются полиморфными. Это доказывает что, данные RAPD-анализа показывают высокий уровень внутривидового полиморфизма. Интересные результаты были получены для вида Ае. crassa, который имеет незначительную фенотипическую изменчивость, и что подтвердил RAPD-анализ (48.1% фрагментов полиморфные). Уровень внутривидового различия по RAPD-анализу у различных видов Aegilops не одинаковый, что подтверждает их разнообразие в природе. В целом, на наш взгляд, данная работа намечает подходы к более детальному анализу генома диких сородичей злаковых на уровне картирования генов.

В дальнейшем можно, используя эти данные, проводить исследования по определению генетического расстояния между видами и построить дендрограмму.

Как следует из приведенных выше данных, Б^АРЭ - анализ образцов Aegilops вид Ае. IатсНИ имеет примерно 50%-ный внутривидовой полиморфизм, что указывает на древнее происхождение данного вида и его адаптивные возможности. Вид Ае. сгаБва по нашим данным имеет очень низкий уровень внутривидового полиморфизма, в то же время из литературных источников известно, что этот вид имеет высокий уровень хромосомного полиморфизма и разнообразие морфологических признаков. Таким образом, в результате ЛАРО-маркирования видов рода Aegilops в Таджикистане впервые удалось определить уровень генетического полиморфизма и коэффициент сходства их геномов по использованным молекулярным маркерам. Для построения дендрограммы для кластерного анализа (ЦРОМА) при использовании компьютерной программы ИТ8У8-рс, 2.0 (№1 М. 1987) (Р1к) использовалась построенная бинарная матрица. По результатам анализа были определены генетические расстояния и методом иерархического кластерного анализа построены дендрограммы. Максимальное внутривидовое сходство было отмечено для Ае. суНпйпса (коэффициент генетического сходства - 0,92).

На схеме 2 представлена дендрограмма на основании коэффициента генетического сходства между различными образцами вида Ае. ЫипсгаИй, где образуется два основных кластера: первый кластер объединяет в основном образцы, произрастающие в северных регионах Таджикистана, а второй кластер - в южных региона. Дендрограмма показывает, что данный вид имеет наибольший уровень генетического разнообразия среди всех изученных видов Aegilops. Внутри вида наибольшим генетическим разнообразием выделяются представители образцов, собранные из Файзабадского района. Между образцами из Рудакинского и Варзобского районов существенного различия не обнаружено.

На схеме 3 представлены данные по Ае. суНпс1пса, которые имеют высокий уровень внутривидовой изменчивости и выделяются 2 кластера, внутри которых образцы имеют большое генетическое сходство. Виды Ае. crassa и Ae. tauschii по изученным праймерам показали примерно 50%-ный полиморфизм.

На схеме 4 приведены данные дендрограммы, где не выявлено высокого уровня генетического разнообразия среди образцов Ae. crassa, здесь образовано два основных кластера. В первом кластере подпадают образцы, произрастающие в районе Рудаки, а второй кластер -подразделяется на два подкластера, в котором сгруппированы образцы из Гиссарского солевого источника.

Вид Ae. tauschii на схеме 5 имеет высокий уровень генетического сходства и образует два кластера — первый кластер состоит из 8 образцов, где не наблюдается генетического разнообразия, тогда как во втором кластере -большое генетическое разнообразие.

Нами были проанализированы филогенетические связи в группе видов Aegilops, имеющих D-геном, а также родственные отношения : видов, не имеющих D-геном.

На схеме б представлены данные диплоидного вида Ae. tauschii (D-геном), а также виды А е. crassa и Ae. cylindrica, являющие полиплоидными видами, но также имеющие D-геном. Поэтому молекулярный анализ для установления филогенетических связей видов Aegilops с D-геномом является актуальным. По литературным данным, диплоидный вид Aegilops tauschii при использовании RAPD-анализа является самым полиморфным.

Что касается полиплоидных видов Ae. crassa и Ae. cylindrica с D-геномом, то они имеют более низкий уровень внутривидового разнообразия. Наши данные показывают, что образцы вида Ae. crassa имеют более близкий уровень генетического сходства с Ae. tauschii, чем с Ae. cylindrica, что, по-видимому, связано с тем, что вид Ae. cylindrica, кроме D-генома, имеет еще и С-геном. Полиплоидный вид Ae. triuncialis не имеет D-генома, но имеет С-геном и U -геном благодаря которому этот вид образует единый кластер с Ае. cylindrica. Таким образом, виды Ae. cylindrica u Ae. triuncialis имеет общий геном С, что подтверждается наличием общего кластера по RAPD-анализа.

В отличие от видов, имеющих Э-геном, представители вида с Ц-геномом (Ае. МипЫаНБ) характеризуются значительным уровнем внутривидового разнообразия. Вид Ае. МипЫаШ среди изученных нами видов является одним из распространенных и имеет высокий уровень генетического разнообразия. Данные на схеме 2 показывают, что у вида Ае. МипсгаШ выделяется несколько кластеров по образцам, произрастающим в различных регионах Таджикистана. Исходя из полученных результатов, можно предположить множественное независимое происхождение полиплоидных видов Ае2йорз от различных диплоидных видов.

Как известно, различные виды рода Aegilops Ь. всегда привлекали большое внимание исследователей в качестве перспективных разнообразных генетических источников. Как показали многочисленные исследования, некоторые виды рода Aegilops Ь. принимали непосредственное участие в эволюционном становлении тетраплоидных и гексаплоидных. пшеницы (Горюнова, 2004).

Микросателлитный анализ показал, что количество ПЦР фрагментов у использованных преймеров на один маркер варьировало от 1 до 20. В некоторых вариантах встречается только один ПЦР фрагмент— мономорфный. Иногда у одного образца выявлялись более чем один фрагмент, что можно объяснить наличием внутривидовой гетерогенности. Данные БЭЯ—анализа показали, что каждый вид обладал характерными, не повторяющимися ПЦР-фрагментами. Данные ПЦР-анализа праймера 190 у различных образцов разных видов Aegilops показал наличие высокого полиморфизма ДНК внутри каждого изученного вида, а также между различными видами. Как показывают результаты получение по различные образцы Ае. МипыаНз, произрастающие в различных регионах Таджикистана дают три ПЦР-фрагмента и почти половина из них — полиморфные. Данные по ПЦР-фрагментам 30 образцов Ае. гатски, также с использованием 190 88Я-праймера где имеется, 6 ПЦР-фрагментов показывают, что 90% изученных образцов полиморфные. Данные, приведенные в табл. 3, показывают, в основном, полиморфизм у видов Ае. cylindrica, Ае. tauschii и Ае. crassa по 14 SSR-праймерам, что составляет 80-95%, за исключением вида Ае. triuncialis, где полиморфизм составляет всего 47%. Интересно, что результаты, полученные по Ае. triuncialis, сильно отличаются от данных, полученных по другим видам Aegilops. Возможно, этот вид менее изменчив независимо от места обитания и литературные данные также подтверждают, что вид Ае. triuncialis более мономорфный по различным фенотипическим признакам. Результат межвидового анализа ПЦР-фрагментов показал, что между изученными нами видами наблюдается четкое различие при использовании различных праймеров. Данные микросателлитного анализа содержат информацию, необходимую для оценки генетического разнообразия, а именно таких характеристик как число аллелей на локус и коэффициент сходства.

Таким образом, использованный набор из 14 микросателлитных маркеров для анализа генома различных видов Aegilops позволяет охарактеризовать каждый изученный вид. На основании наших данных можно сказать, что использованные нами SSR-праймеры очень информативные и их можно использовать при изучении межвидовых и внутривидовых различий у злаковых культур и их сородичей. В литературе описано, что D-геномные группы растений характеризуется меньшим внутривидовым полиморфизмом, чем большинство полиплоидных видов с U-геномом. Интересные результаты получила С. Горюнова, у которой RAPD-анализ не показал различия между плоидностью двух видов Aegilops, хотя эти виды очень сходны морфологически и некоторые авторы их не рассматривают как два самостоятельных вида (Горюнова, 2004). По данным RAPD-анализа единственным исключением среди высоко полиморфных полиплдоидных видов с U геномом является Ае. triuncialis, который имеет крайне низкий уровень внутривидового различия, а также является малополиморфным по данным дифференциального окрашивания и FISH, что подтверждает наши результаты по SSR-маркированию.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кавракова, Зубайда Бурихоновна, 2009 год

1. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. Москва. Наука. 1989.

2. Вавилов Н. И. Мировые растительные ресурсы и их использование в селекции // Изб. тр. Москва. Ленинград. Т. 3. 1962.

3. Васильева JI.A. Биологическая статистика (Избр. гл.). Новосибирск. 2000.С. 40-43.

4. Горюнова C.B., Кочиева Е.З., Чикида H.H., Пухальский В.А. RAPD-анализ внутривидовой изменчивости и филогенетических связей видов Aegilops L. с D- геномом, содержащих D-геном // Генетика 2004. Т. 40, №5. С. 642-651.

5. Гвоздев В.А. Изменчивость гетероароматических районов генома эукариот в связи с их биологической ролью // Мол. биология. 1993. Т. 27(6). С. 1205-1217.

6. Гончаров Н.П. Сравнительная генетика пшеницы и их сородичей. Новосибирск: Сиб. унив. изд-во. 2002.

7. Гречко В.В. Молекулярные маркеры ДНК в изучении филогении и систематики //Генетика. 2002. Т. 38(8). С. 1013-1025.

8. Гиляров А. М. Мнимые и действительные проблемы биоразнообразия // Успехи современной биологии. 1996. Т.116, №.4. С. 493-506.

9. Гостимский С.А., Кокаева З.Г., Боброва В.К. Использование молекулярных маркеров для анализа генома растений // Генетика. 1999. Т.35, №11. С.1538.

10. Гулов М.К., Хурматов Х.Х., Наймов С., Насырова Ф.Ю. Использование SSR-маркеров для выявления полиморфизма генома Aegilops tauschii // Мат. респ. конф. Адаптационные аспекты функционирования живых систем. Душанбе. 2007. С. 44-46.

11. Дорофеев В.Ф., Мигушова Э.Ф. Ботаническое разнообразие Aegilops L. Закавказья // Тр. по прикл. бот. ген. и селек. 1966 Т. 38, №2. С. 152-158.

12. Дрейпер Дж., Скотт Р., Армитидж Ф., Уолден Р. // Генная инженерия растений. Москва. Мир. 1991. С. 245-248.

13. Долгушин Д.А. Мировая коллекция пшеницы на фоне яровизации. Москва. 1935.

14. Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика. Новосибирск: Сиб. ун-та изд-во. 2002. С. 73.

15. Зеленин A.B., Бадаева Е.Д., Муравенко О.В. Введение в геномику растений // Молекулярная биология. 2001. Т.35, №3. С. 339-348

16. Конарев В.Г. Белки пшеницы. М.: Колос. 1980. С. 350.

17. Каминская JI.H., Корень JI.B., Леонова И.Н., Адонина И.Г., Хотылева JI.B., Салина Е.А. Создание линий тритикале, маркированных Vrn-генами и их молекулярно-генетический анализ // Вестник ВОГ и С. 2005. Т 9, №4. С. 481-489.

18. Корень Л.В., Каминская Л.Н., Хатылева Л.В. Цитологическое исследование пшенично-ржаных амфиплоидов с включением Vrn-генов. // Докл. АН Беларуси. 1998. Т.42, №2. С. 79-84.

19. Кудрявцев A.M., Мартынов С.П., Броджио М., Пухальский В.А. Оценка правомерности использования RAPD- анализа для выявления филогенетических связей между сортами яровой твердой пшеницы (Т. Durum Desf.) //Генетика. 2003. Т.39, №9. С. 1237-1246.

20. Картель H.A., Макеева E.H., Мезенко A.M. Генетика. Энциклопедический словарь. Минск: Технология. 1999. С. 90.

21. Костюченко М.В., Удина И.Г., Зайцев A.M., Храброва Л.А., Сулимова Г.Е. Изучение генетического разнообразия пород лошадей отечественнойселекции на основе RAPD-PCR и микросателлитных маркеров // Сельскохозяйственная биология. 2001. № 6. С.29-34.

22. Мазин A.B., КузнеделовК.Д., Краев A.C. Методы молекулярной генетики и генной инженерии // Новосибирск: Наука, 1990. С. 248.

23. Малышев C.B., Картель H.A. Молекулярные маркеры в генетическом картировании растений // Молекулярная биология. 1997. Т. 31(2). С. 197208.

24. Майстренко О.И. Ефремова Т. Т., Салина Е. А., Шумный В.К. Открытие и изучение не проявления гена ярового образа жизни ржи Spl в линиях с чужеродным замещением хромосомы 5R (5А) // Докл. РАН. 1998. Т. 360, №4. С. 574-576.

25. Мигушева Э.Ф. К вопросу о происхождении геномов пшеницы // Тр. по прикл. бот. ген. и сел. 1975. Т.55, № 3. С. 3-26.

26. Мартынов С.П., Добротворская Т.В. Анализ генетического разнообразия пшеницы с помощью Информационно-аналитической системы генетических GRIS //Генетика. 2000. Т. 36, №2. С. 195-202.

27. Флора Таджикской ССР. Названия видов Aegilops L. и их характеристика //Москва-Ленинград. 1957. Т 1.

28. Наймов С., Касымова. Г.Ф., Нигмонов М. Морфобиологическое и биохимическое разнообразие видов Эгилопс, произрастающих в разных экологических условиях Таджикистана // Тезисы докладов. Душанбе. 2002. С. 126-127.

29. Наймов С., Каримов С., Нигмонов М., Луис Е.У. Оссес. Испытание сортообразцов пшеницы в высокогорной зоне Таджикистана // Вестник региональной сети по внедрению сортов пшеницы и семеноводству, Алматы. 2002. № 2 (03). С. 42-46.

30. Наймов С., Касымова Г. Ф., Нигмонов М., Каримов Х.Х. Сбор и характеристика видов Aegilops L. Флоры Таджикистана // The 3 rdinternational IRAN and Russia conference // Agriculture and Natural Resources. Moscow. 2002. P. 27-28.

31. Наймов С., Каримов X.X. Солеустойчивость зерновых злаков трибы Triticeae Dumort флоры Таджикистана // Мат. Республ. конф. по зерновым и зернобобовым культурам. Душанбе. 2004. С. 23-24.

32. Иванец Т.А. Использование ПЦР метода // Мат. Региональной научно-практической конференцию МЦ «Асклепий». Владивосток. 2000.

33. Овчинников П.Н. О некоторых направлениях в классификации растительности Средней Азии // Изв. Отд. естеств. Наук АН ТаджССР, 1957.

34. Салина Е.А., Песцова Е.Г., Вершинин A.B. "Spelt-1" новое семейство тандемных повторов злаков // Генетика. 1997. Т. 33 (4). С. 437-442.

35. Салина Е. А., Леонова И.Н., Родер М. Микросателлиты пшеницы перспективы использования для картирования генов и анализа реконструированных геномов // Физиология растений. 2001. Т.48. С. 441446.

36. Стельмах А. Ф. Наследование и генетическая роль различий по типу и скорости развития у мягкой пшеницы. Автореферат дисс. д-ра биол. наук Москва, 1987.

37. Сергеев Д.А., Хурматов Х.Х., Наймов С.Н., Насырова Ф.Ю. Применение микросателлитного анализа в изучении полиморфизма ДНК культурныхзлаков // Мат. респ. конф. Адаптационные аспекты функционирования живых систем. Душанбе. 2007. С. 120-122.

38. Сергеев Д.А., Гулов М.К., Хурматов Х.Х., Насырова Ф.Ю. Применение ДНК маркеров в изучении генома злаковых культур, произрастающих в Таджикистане // Мат. конф. молодых ученых АН РТ Душанбе. 2007. С. 121.

39. Созинов A.A. Полиморфизм белков и его знание в генетике и селекции // Москва. Наука, 1985. С. 272

40. Тютерев С. JL, Чимелева З.В., Мойса И.И., Дорофеев В.Ф. Изучение содержания белка и незаменимых аминокислот в зерне видов пшеницы и ее диких сородичей // Тр. по прикл. бот. ген. и сел. 1973. Т.52, №1. С. 222241.

41. Хлесткина Е., Салина Е.А., Леонова И. Использование RAPD и STS анализа для маркирования генов 5 гомеологической группы хромосом мягкой пшеницы // Генетика. 1999. Т.35, №8. С. 1-9.

42. Хлёсткина Е., Салина Е., Леонова И., Лайкова Л.И., Коваль С.Ф. Использование RAPD и STS анализ для маркирования генов 5 гомеологической группы хромосом мягкой пшеницы // Генетика. 1999. Т. 35. С.1349-1357.

43. Флейвелл Р. Амплификация, делеция и перегруппировка последовательностей: основные источники изменчивости в процессе дивергенции видов // Эволюция генома. Москва. Мир, 1986. С. 291-311.

44. Хурматов Х.Х., Сергеев Д.А., Салина Е.А., Хлесткина Е.К., Насырова Ф.Ю., Алиев К.А. RAPD и SNP-анализ генома пшеницы и диких сородичей зерновых злаков Таджикистана // Изв. АН РТ. Отд. биол. и мед. наук. 2006. № 1 (154) С. 18-24.

45. X. X. Хурматов, Д. А. Сергеев, Е.К. Хлёсткина, Е. А. Салина, Ф. Ю. Насырова, К. А. Алиев "Анализ генома пшеницы и диких сородичей зерновых злаков Таджикистана с помощью молекулярных маркеров // Депонировании рукопись №242. Душанбе. 2006.

46. Цвел ев Н.Н. Злаки СССР. Л.: Наука, 1976.

47. Цвелев Н.Н. Система злаков (Роасеае) и их эволюция // Комаровские чтения. Л.: Наука, 1987. С. 75.

48. Akkaya M.S., Bhagwat А.А., Cregan P.B. Length polymorphism of simple sequence repeat DNA in soybean // Genetics 1992. P. 1131-1139

49. Anamthawat-Jonsson K., Heslop-Harrison J.S. Isolation and characterization of genome-specific DNA sequences in Triticeae species // Mol. Gen. Genet. 1993. V. 240. P. 151-158.

50. Belaj A., Satovic Z., Rallo L., Trujillo I. Genetic diversity and relationships in olive {Olea euoropaea L.) germaplasm collections as determined by randomly amplified polymorphic DNA // Theor. Appl. Genet. 2002. V. 105. P. 638-644.

51. Botstein D., White R.L., Scolnick M., Davis R.V. Constructions of genetic linkage map in man using restriction fragment lengh polymorphisms // Am. J. Hum. Genet. 1980. V. 32. P. 314-331.

52. Borner A., Korzun V., Worland A J. Comparative genetic mapping of mutant loci affecting plant height and development in cereals // Euphytica. 1998. V. 100. P. 245-248.

53. Baker C.M., Manwell C. Anim. Blood Groups and Biochem // Genet. 1980. V.ll.P. 127.

54. Castilho A., Heslop-Harrison J.S. Physical mapping of 5S and 18S-25S rDNA and repetitive DNA sequences in Aegilops umbellulata И Genome. 1995. V. 38. P. 91-96.

55. Csink A.K., Henihoff S. Something from nothing: the evolution and utility of satellite repeats // Trends Genet. V. 14. P. 199-203.

56. Daud H.M., Gustafson J.P., Molecular evidence for Triticum speltoides as B-genome progenitor of wheat (Triticum aestivum) // Genome. 1996. V. 39. P. 543-548.

57. Devos K.M., Chao S., Li Q.Y., Simonetti M.C., Gael M.D. Relationship between chromosome 9 of maize and wheat homoeologous group 7 chromosomes//Genetics. 1994. V. 138. P. 1287-1292.

58. Devos K.M., Gale M.D. The use of random amplified polymorphic DNA markers in wheat // Theor. Appl. Genet. 1992. V. 84. P. 567-572.

59. Devos K.M., Gale M.D. The genetic maps of wheat and their potential in plant breading // Outlook Agric. 19936. V. 22. P. 93-99.

60. Dover G., Brown S., Coen E. et al. Dinamic of genome evolution and species differentiation // In: Dover G.A., Flavell R.B // Genome Evolution. Academic Press. London. 1982.

61. Dweikat I., Mackenzie S., Levy M., Ohm H. Pedigree assessment using RAPD-DDGE in cereal crop species // Theor. Appl. Genet. 1993. V. 85. P. 497-505.

62. Felsenstein J. PHYLIP: Phylogeny Inference Package, version 3.572 // Dept. Genetics, Univ. Washington, Seattle. 1995.

63. Friebe B., Gill B.S. Chromosome banding and genome analysis in diploid and cultivated polyploidy wheat. In: Methods of genome analysis in plants (ed. Jauhar P.P.) // Boka Raton et al.: CRC Press. 1996. P. 36-60.

64. Fritsch P., Hanson M.A., Spore C.D., Pack P.E., Riseberg L.H. Constancy of RAPD primer amlification strength among distantly related taxons of flowering plants // Plant Mol. Biol. Rep. 1993. V. 11. P. 10-20.

65. Guadagnuolo R., Bianchi D.S., Felber F. Specific genetic markers for wheat, spelt, and four wild relatives: comparison of isozymes, RAPDs, and wheat microsatellites // Genome. 2002. v. 44. P. 610.

66. Gupta P.K., Roy J.K., Prasad M. Single nucleotide polymorphism: a new paradigm for molecular marker technology and DNA polymorphism with emphasis on their use in plants // Current Sci. 2001. V. 80. P. 524-535.

67. Gupta P.K., Varshney R.K., Sharma P.S., Ramesh B. Molecular markers and their applications in wheat breading // Plant Breed. 1999. V. 118. P. 369-390.

68. Huff D.R., Peakall R., Smouse P.E. RAPD variation within and among natural populations of outcrossing buffalo grass (Buchloe dactyloides (Nutt.) Englem) II Theor. Appl. Genet. Y. 86. P. 927-934

69. Iqbal M.J., Rayburn A.L. Stability of RAPD markers for determining cultivars specific DNA profiles in rye (Secale sereale) // Euphytica. 1994. V. 75. P. 215220

70. Jaaska V. Aspartate aminotransferase and alcohol dehydrogenase isozymes: intraspecific differentiations in Aegilops tauschii and the origin of the D genome polyploids in the wheat group // PI. Syst. Evol. 1981. V. 137. P. 259273.

71. Jones J., Flavell R. The structure, amount and chromosomal location of defined repeated DNA sequences in species of the genus Secale.) II Chromosoma. 1982. V. 86. P. 613-641.

72. Joshi C.P., Nguyen H.T. RAPD (random amplified polymorphic DNA) analysis based on intervarietal genetic relationships among hexaploid wheats // Plant Sci. Y. 93. P. 95-103.

73. Kato K., Miura H., Sawada S. Comparative mapping of the wheat Vrn-Al region with the rice Hd-6 region II Genome. 1999. V. 42. P. 204-209.

74. Kellog E., Apples R. Intraspecific and interspecific variation in 5S RNA genes are decoupled in diploid wheat relatives II Genetics. 1995. V. 140. P. 325-343.

75. Khan S.A., Hussain D., Askari E., Stewat J McD., Malik K.A., Zafar Y. Molecular phylogeny of Gossypium species by DNA fingerprinting // Theor. Appl. Genet. 2000. V. 101. P. 931-938.

76. Khlestkina E.K., Salina E.A. Genome-specific markers of tetraploid wheats and their putative diploid progenitor species // Plant Breading. 2001. V. 120. P. 227-232.

77. Kunugi H., Ishida S. et al. A functional polymorphism in the promoter region of monoamine oxidase-A gene and mood disorders // Mol. Psychiatry. V. 4(4). 1994 P. 393-405.

78. Khurmatov Kh. Kh., Sergeev D. A., Kavrakova Z. B, Salina E.A., Khlestkina E.K, Nasyrova F. Y. Genom analysis of local species and wild forms of cereal crops in Tajikistan // Материалы 6 съезда физиологов растений. Сыктывкар, РФ 2007. С. 223-225.

79. Lapitan N.L.V. Organization and evolution of higher plant nuclear genomes // Genome. 1992. V. 35. P. 171-181.

80. Leitch I., Heslop-Harrison J. Physical mapping of the 18S, 5.8S, 26S rRNA genes in barley by in situ hybridization // Genome. 1992. V.35. P. 1013-1018.

81. Ma Z.Q., Lapitan N.L.V. A comparison of amplified and restriction fragment length polymorphism in wheat // Cereal Res. Com. 1998. V. 26. P. 7-13.

82. Maniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual // New York: Cold Spring Harbor Lab., 1982. P. 362.

83. Mclntyre C. Variations at isozyme loci in Triticeae // PI. Syst. Evol. 1988 V. 160. P. 123-142.

84. Miller Т.Е. Systematics and evolution In: Wheat breeding (ed. Lupton) // London, New York. 1987. P. 1-30.

85. Morgante M., Olivieri A.M. PCR-amplified microsatellites as markers in plants genetics // The Plant Journal. 1993. V. 3(1). P. 175-182.

86. Naqvi N1, Chattoo BB. Molecular genetic analysis and marker- assisted indirect selection of blast resistance in rice // In: Rice Genetics. 1997.

87. Nei M. Molecular evolutionary genetics // New York. Columbia Univ. Press, 1987. P. 512.

88. Naimov S., Kasimova G. F., Donsova S. V., Nigmonov M The characteris of gliadins of Aegilops L, species, growing in different climatic condtions of Tajikistan // Материалы 6 съезда физиологов растений, Сыктывкар, РФ 2007. С. 202-203

89. Ohnishi О., Matsuoka Y. Search for the wild ancestor of buckwheat. II. Taxonomy of the Fagopyrum (Polygonaceae) species based on morfology, isozyme and chloroplast DNA variability // Genes Genet. Syst. 1996. V. 71. P. 383-390.

90. Pederson C., Rasmussen S., Linde-Laursen I. Genome and chromosome identification in cultivated barley and related species of Triticeae (Poaceae) by in situ hybridization with GAA-satellite sequences // Genome. 1996. V.39. P. 93-104.

91. Plaschke J., Ganal M.W., Roder M.S. Detection of genetic diversity in closely related bread wheat using microsatellite markers // Theor. Appl. Genet., 1995. V.91.P. 1001-1007

92. Penner G.A. RAPD analysis of plant genome. In: Methods of genome analysis in plants (ed. Jauhar P.P.) // Boka Raton et al.\ CRC Press. 1996. P. 251-270.

93. Pestsova E.G., Goncharov N.P., Salina E.A. Elimination of a tandem repeat of telomeric heterochromatin during evolution of wheat // Theor. Appl. Genet. 1998. V. 97. P. 1380-1386.

94. Peterson G., Seberg O. Phylogenetic analysis of the Triticiaea (Poaceae) based on proA sequence data // Mol. Phylogenet. Evol. 1997. V. 7. P. 217-230.

95. Panaud O., Chen X., McCouchR. Development of microsatellite markers and characterization of simple sequensce length polimorphism (SSLP) in rice (Oryza Sativa L.) // Mol. Gen. Genet. 1996 V. 252. P. 597-607.

96. Peil A., ICorzun V., SchubernV., Schumann E., Weber W.E., Roder M.S. The aplicatio of wheat microsatellites to identifi disomic Triticum Aestivum -Aegilops markgrafii addition lines // Theor. Appl. Genet. 1998. V. 96, P. 138146.

97. Roder M.S., Korzun V., Wendeheke K., Plaschke J., Tixier M.H., Leroy P., Ganal M.W.A Microsatellite Map of Wheat // Genetics 1998. V. 149. P. 20072023.

98. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A., Arncheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia // Sciense. 1985. V. 230. P. 1350-1354.

99. Salina E.A., Pestsova E.G., Adonina I.G., Vershinin A.V. Identification of a new family of tandem repeats in Triticeae genomes // Euphytica. 1998. V. 100. P. 231-237.

100. SasanumaT., Miyashita N.T., Tsunewaki K. Wheat phylogeny determined by RFLP analysis of nuclear DNA. 3. Intra- and interspecific variation of the five Aegilops Sitopsis species // Theor. Appl. Genet. 1996. V. 92. P. 928-934.

101. Sharma S.K., Dawson I.K., Waugh R. Relationships among cultivated and wild lentils revealed by RAPD analysis // Theor. Appl. Genet. 1995. V. 91. P. 647654.

102. Sharma T.R., Jana S. Species relationships in Fagopyrum revealed by PCR-based DNA fingerprinting // Theor. Appl. Genet. 2002. V.105. P. 306-312.

103. Stiles J.I., Lemme C., Sondur S., Morshidi M.B., Maitshardt R. Using random amplified polymorphic DNA for evaluating genetic relationship among papaya cultivars // Theor. Appl. Genet. 1993. V. 85. P. 697-701.

104. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Higuchi R. Primer-directed enzymatic amplification of DNA. with thermostable DNA polymerase // Science, 1988. P. 239.

105. Subramanian V., Gurtu S., Rao R. C. N., Nigan S.N. Identification of DNA polymorphism in cultivated groundnut using random amplified DNA (RAPD) assay // Genome.2000. V. 43. P. 6565-660.

106. Tautz D., Nuel. Minimal homology requirements for PCR primers // Nucleic Actds. Res 1989 V. 17. P. 6463 6471.

107. Tsuji K., Ohnishi O. Origin of cultivated tatary buckwheat (Fagapyrum tataricum Gaertn.) revealed by RAPD analysis // Genet. Resour. Crop Evol. 2000. V. 47. P. 431-438.

108. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Nucl. Acids Res. 1990. №24. V. 18. P. 7213-7218.

109. Wang G.- Z., Matsuoka Y., Tsunewaki K. Evolutionary features of chondriome divergence in Triticum (wheat) and Aegilops shown by RFLP analysis mitochondrial DNAs // Theor. Appl. Genet. 2000. V.100, P. 221-231.

110. Wang Z. Y., Tanksley S. D. Restriction length polymorphism in Oryza sativa L. // Genome. 1989. V. 32. P. 1113-1118.

111. Wei J.-Z., Wang R. R.-C. Genome- and species-specific markers and genome relationships of diploid perennial species in Triticeae based on RAPD analyses // Genome. 1995. V. 38. P. 1230-1236.

112. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers //Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. P. 7213-7218.

113. West J., Mclntyre C., Appels R. Evolution and systematic relationships in the Triticeae (Poaceae) //PI. Syst. Evol.1988. V. 160, P. 1-28.

114. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polymorphism amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. P. 6531-6535.

115. Yang Yen, Baenziger P.S., Morris R. Genomic constitution of bread wheat: current status // In: Metods of genome analysis in plants (ed. Jauhar P.P.) // Boka Raton et al\ CRC Press. 1996. P. 359- 373.

116. Zohary D., Feldman M. Hybridization between amphyploids and the evolution of polyploids in the wheat ('Aegilops-Triticum) group // Evolution. 1962. V. 16. P. 44-61.