Исследование влияния состава защитной среды на эффективность процесса криозамораживания микроорганизмов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.04, кандидат технических наук Кузьмина, Ольга Михайловна

• Кузьмина, Ольга Михайловна
• кандидат технических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат технических наук Кузьмина, Ольга Михайловна

Введение.

Глава 1. Анализ особенностей технологии криозамороженных бактериальных концентратов.

1.1 Роль функциональных продуктов в питании человека.

1.2 Основные направления производства бактериальных концентратов прямого внесения.

1.3 Факторы, влияющие на выживаемость замороженных микроорганизмов.

1.4 Виды защитных сред и криопротекторов.

1.5 Методы оценки выживаемости микроорганизмов.

1.5.1 Применение импедансного метода для определения выживаемости бактерий.

1.6 Цель и задачи исследований.

Глава 2. Объекты и методы исследований.

2.1 Объекты исследований.

2.2 Общепринятые и стандартные методы исследований.

2.3 Оригинальные и модифицированные методики.

2.3.1 Приготовление защитных сред.

2.3.2 Получение бактериальной массы для криозамораживания.

2.3.3 Оценка выживаемости микроорганизмов импедансным методом.

2.3.4 Методика криозамораживания.

2.4 Методы математической обработки экспериментальных данных.

Глава 3. Экспериментальное изучение технологии получения криозамороженных бактериальных концентратов с использованием криопротекторов.

3.1 Изучение влияния концентраций криопротекторов в защитной среде на выживаемость микроорганизмов.

3.2. Экспериментальное обоснование выбора криопротекторов.

3.3 Влияние криозамораживания на морфофункциональные и биохимические свойства исследуемых микроорганизмов.

3.4 Влияние основы защитной среды на выживаемость микроорганизмов.

3.5 Исследование реологических характеристик биомассы при смешивании ее с защитными средами.

Глава 4. Опытная проверка режимов хранения и использования криозамороженных бактериальных концентратов.

4.1 Изучение влияния режимов и сроков хранения на выживаемость.

4.2 Экспериментальная технология использования защитных сред в процессе криозамораживания.

4.3 Апробация замороженных бактериальных концентратов в промышленных условиях.

4.4 Экономическая и социальная значимость.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование влияния состава защитной среды на эффективность процесса криозамораживания микроорганизмов»

Обеспечение здоровья населения является одним из важнейших приоритетов в России. На федеральном и региональных уровнях поставлены задачи, связанные с продовольственной безопасностью страны. /14,23,35,39, 59,82,85,98,114,129,137/

Концепция оздоровления человека и предупреждения старения организма путем включения в рацион кисломолочных продуктов была впервые выдвинута И.И. Мечниковым, который исследовал свойства молока, ферментированного закваской содержащей штаммы L.bulgaricum.

Впервые в России С.А. Королевым были применены закваски, т.е. чистые культуры молочнокислых бактерий, а также были проведены исследования микробиологических процессов по основным отраслям молочного производства. Под его руководством была основана первая школа отечественных микробиологов молочной промышленности. Его учениками, последователями и рядом других исследователей Королевой Н.С., Банниковой JI.A., Богдановым В.М., Гудковым A.B., Лагодой И.В., Гуськовой Л.Д., Семенихиной В.Ф., Рожковой И.В., Ганиной В.И., Тихомировой H.A., Шевелевой С.А., Шендеровым Б.А. заложены основы производства заквасок и бактериальных концентратов на основе таких культур как лактобактерии (L.acidophilus, L.bulgaricus, L.casei, L.rhamnosus), бифидобактерии (B.bifidum, B.infantis, В.breve, B.adolescentis, B.longum, B.animals), грамположительные кокки (Str.salivarius, Str.thermophilus, Str. diacetylactis, Lac.lactis sp.cremoris), дрожжи(8.Ьои1а^Н, S.cerevisiae) обладающих пробиотическими свойствами. /10,15,21,24,26,41,44,45,63,72,78, 88,96,101,104,109,130,136,137,141,161/

Кисломолочные продукты, изготовленные с применением специально подобранных и выделенных в результате селекции культур, являются эффективным средством для лечения и профилактики многих патологических состояний, что подтверждено многочисленными исследованиями/13,24,26,34,40,63,71,72,78,96,99,101,110,124,136,149,152,161/

Опыт отечественной и зарубежной молочной промышленности и анализ научных публикаций /40,47,85,100,110,121,178,179,182,187/ показывает, что производство кисломолочных продуктов прогрессирует, увеличивается спрос на бактериальные концентраты, и как следствие повышаются требования к заквасочным культурам, а именно они должны обеспечивать безопасность и качество, вырабатываемой продукции, обеспечивать необходимый баланс штаммов, обуславливать удобство внесения. Этим требованиям в большей степени соответствуют бактериальные концентраты прямого внесения (БУБ), так как их использование исключает процедуру восстановления культур, перед сквашиванием; стадию перевивки в процессе хранения, что обеспечивает устойчивость в соотношении видов и штаммов микроорганизмов; более эффективно в борьбе с бактериофагами.

На сегодняшний день, при производстве бактериальных концентратов применяются два способа их консервирования: лиофилизация и замораживание при сверхнизких температурах (-196°С). И если первый способ достаточно изучен и широко применяется в производстве, то сведения об использовании второго — носят ограниченный характер, он до сих пор не нашел промышленного применения в нашей стране. Несмотря на значительное количество исследований посвященных вопросам выживаемости микроорганизмов в процессе криоконсервирования, не имеется четких представлений о совокупности и взаимосвязях процессов, позволяющих применить технологию для промышленного производства бактериальных концентратов. Следовательно, разработка технологии получения и способа применения криопротекторных сред, для получения бактериального препарата прямого внесения, методом замораживания при сверхнизких температурах является актуальным вопросом, требующим систематического изучения.

Работа выполнена в рамках темы РАСХН «Разработать комплекс экологически чистых энергосберегающих технологий для переработки молока на базе низких температур», а также Федеральной целевой программы "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2007-2012 годы по теме «Разработка технологий универсального быстропереориентируемого производства заквасок прямого внесения для биотехнологической промышленности».

В результате проведенных исследований получены научно-обоснованные данные о влиянии состава защитной среды на эффективность процесса криозамораживания молочнокислых микроорганизмов и бифидобактерий.

Разработан метод оценки выживаемости бактерий после замораживания, основанный на использовании импедансного метода.

Установлены зависимости, отражающие влияние параметров низкотемпературного замораживания и температуры хранения на выживаемость бактерий и их физиологическую активность.

Разработана «Лабораторная методика подготовки и использования защитных сред для криоконсервирования микроорганизмов».

Разработана методика определения количества молочнокислых микроорганизмов на основе импедансной технологии и внесена в ГОСТ.

Экспериментальная часть работы выполнена в Центральной лаборатории микробиологии и на участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института молочной промышленности Россельхозакадемии.

Заключение диссертации по теме «Технология мясных, молочных и рыбных продуктов и холодильных производств», Кузьмина, Ольга Михайловна

выводы

1. На основе систематизации видов криопротекторов экспериментально обоснована значимость использования в их качестве таких веществ, как: глицерин, лактоза, сахароза, лимоннокислый натрий, желатин, пектин; Установлено их влияние на выживаемость молочнокислых и бифидобактерий и экспериментально определена их рациональная концентрация в составе защитной среды. Наибольшая выживаемость бактерий после замораживания/оттаивания достигалась при содержании в защитной среде глицерина 15%, сахарозы 40%, лактозы 40%;

2. Разработан состав криопротекторных сред для молочнокислых и бифидобактерий обеспечивающий их выживаемость после замораживания/оттаивания на уровне 87-94%. По результатам проведенных исследований рекомендована защитная среда КС-20, приготовленная на основе фосфатного буфера с добавлением 20% глицерина, 20% лактозы, 4% лимоннокислого натрия и 5% желатина;

3. Разработана методика определения количества молочнокислых бактерий и динамики их роста на основе импедансного метода;

4. Изучено влияние криозамораживания на морфологические, культуральные и биохимические свойства исследуемых бактерий. Доказана незначительность изменения этих свойств при осуществлении криозамораживания молочнокислых и бифидобактерий;

5. Установлено что, при хранении бактериального концентрата, изготовленного с применением рекомендованной защитной среды КС-20 в течении 6 месяцев при температуре не выше минус 40°С не отмечается существенных изменений морфологических и биохимических свойств, выживаемость снижается на 2-3%;

6. На участке научно-исследовательских и экспериментальных работ ГНУ ВНИМИ выработаны опытные партии замороженного бактериального концентрата и изучены его физико-химические, микробиологические свойства в процессе хранения. Проведены опытные выработки готового продукта из полученных бактериальных концентратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Кузьмина, Ольга Михайловна, 2010 год

1. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий// М.:«Наука» 1976. — 279с.

2. Актуальные проблемы криобиологии / Под общ. ред. Н.С.Пушкаря,

3. A.М.Белоуса. К.: Наук, думка, 1981. - 608с.

4. Алибаев P.M. «Астролин»-против диабета.// Парафармацевтика, 2002, №8-с.45

5. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий/ Полонская С.М.// Микробиология 1952. - t.XXI, вып.ХХИ. - с.303-310

6. Аркадьев З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения. Научн. докл. высш. школы. Сер. биол. науки М.: 1983, №4

7. Базовые методы работы с эукариотическими клетками.// Смирнова О.// http://molbiol.edu.ru/protocol/a3

8. Бактериальные препараты и закваски: Методическое пособие. Углич: изд-во ВНИИМС, 1998 - 20с.

9. Бактериоциногенные высокоантагонистические штаммы лактобацилл / Ю.

10. B. Червинец, В. М. Бондаренко, Н. А. Шабанова и др.; Медицинская академия и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии : двухмесячный научно-практический журнал. 2006. - N 7 . - С. 78-82.

11. Банникова JI.A., Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности.- М.: Пищевая промышленность, 1975.-255с.

12. Белоус A.M., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция// М.: «Высшая школа» 1987. 80с.

13. Биопродукты продукты будущего / Стенфельдт Э., Шаманова Г. // Мол. пром-сть. - 2000. -№11.- С.20-21.

14. Богданов В.М., Микробиология молока и молочных продуктов. М. «Пищевая промышленность»-1969. 367с.

15. Боровиков В.П. Программа STATISTICA для студентов и инженеров 2-е изд. -М.: КомпьютерПресс, 2001 - 301с.

16. Вирник А.Д., Хомяков К.П., Скокова И.Ф., Декстран и его производные Успехи химии, 44, 1280 (1975).

17. Влияние различных методов сушки и хранения культур на свойства молочнокислых стрептококков/ Гибшман М., Банникова JL, Дерябина Е.// Мол. Пром-ть. 1940. —№8. -с.5-9

18. Вольф Дж. и Брайант Г. Криобиология и биология обезвоживания клеток.2004. Университет Нью-Саус-Уэлса, Сидней, Австралия, на англ.яз. / J.Wolfw and G.Bryant. Cryobiology and anhydrobiology of cells. 2004.

19. Гайсенюк JI.A. Изучение полиэтиленоксида-400 при низкотемпературном консервировании и трансплантации костного мозга в онкологичесокй клинике. Канд. диссер. Харьков. 1972. 217с.

20. Ганина В.И. Пробиотики. Назначение, свойства и основы биотехнологии — Монография. М.:МГУПБ, 2001.- 169с.

21. Ганина В.И., Сониева М.М. Влияние различных криопротекторов на выживаемость пробиотических культур.// Кафедре технологии молока и молочных продуктов МГУПБ 60 лет: Научное издание. — М.:МГУПБ,2005. 187 с.

22. Гаппаров М.М.Г., Войткевич Н.Д. Функциональные пищевые продукты: теория и практика, http://www.medinform.su/healthyfeed/s006/

23. Григоров Ю.Г., Козловская С.Г. Питание и феномен долголетия — М.: Наука, 1988

24. Додж М., Кината К., Стинсон К. Эффективная работа с Microsoft Exel 97 -СПб: Питер, 1998 1072с.

25. Доронин А.Ф., Шендеров Б.А. Функциональное питание М.:Грантъ, 2002.-296с.

26. Дузу П./ Криобиохимия// Москва 1980, с. 127

27. Инихов Г.С„ Брио Н.П. Методы анализа молока и молочных продуктов.-М.: Пищ.пр-ть, 1971.-432с.

28. Инновационные решения в области микробиологического контроля на предприятиях молочной промышленности/ Степаненко И.// Переработка молока. 2007. - №3. - с. 14

29. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры// Рус.мед.журнал-2000.-№13-14.-с.22-29.

30. Кисломолочные напитки// Пер. Бережной A.B. М.: Молочная промышленность, № 6. 2004 с.46-47

31. Кисломолочные продукты нового поколения / Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Сундукова М.Б. / Мол. пром-сть. 1999. - №7. С.29-30.

32. Кочеткова A.A. Функциональные продукты в концепции здорового питания// Пищевая промышленность.- 1999.- №3. с.4-5.

33. Княжев В.А., Суханов В.П., Тутельян В.А., Правильное питание. Биодобавки, которые вам необходимы. -М.:1998. 208с.

34. Коваленко Н.К. Кисломолочные продукты, их качество и влияние наздоровье человека// http://www.uaua.info/content/articles/1030.html

35. Козлова Ю.И., Уринюк В.М., Баранова И.П., Сухорева H.H., Егоров Н.С./ Состав липидной фракции Streptococcus lactis штамм МГУ// Антибиотики, 1979, 24, №10 с.733-736

36. Концепция государственной политики в области здорового питания населения России

37. Концепция сбалансированного питания и ее значение в изучении механизмов лечебного действия пищи / Самсонов М.А. // Вопр. пит. -2001. Т.70, №5. - С.3-9.

38. Королева Н.С., Техническая микробиология кисломолочных продуктов. М. «Пищевая промышленность»-1966.248с.

39. Кочеткова A.A., Колесное А.Ю. Научно-техническое сотрудничество в области производства и использования пектина //Пищевая промышленность, №6,1992.

40. Красильников H.A., Определитель бактерий и актиномицетов. M.-JL, Изд-во АН СССР, 1949. 830с.

41. Красникова JI.B., Салахова И.В., Шаробайко В.И., Эрвольдер Т.М. Бифидобактерии и использование их в молочной промышленности: Обзорная информация. М.: АгроНИИТЭИММП, 1991,32с.

42. Крашенин П.Ф., Гаврилова Н.Б., Скрипникова JI.B. Ассоциации молочнокислых культур и бифидобактерий в кисломолочных продуктах.// Молоч. пром-ть, 1995 №7, с.25

43. Кретинин В.К. Микробиология молока и молочных продуктов. Орел: Изд-во ОрелГАУ, 2003.- 249с.

44. Криоконсервация пробиотических микроорганизмов: научные основы практического использования// Рахуба Д.В., Новик Г.И.// Сборник трудов «Микробные биотехнологии: фундаментальные и прикладные аспекты» Минск 2007 T.lc.268-275

45. Криосохранение крупных биологических объектов // Артюхов И.В.,А.В. Карнаухов// http://bio. lseptember.ru/articlef.php?ID=200304301

46. Крючкова B.B. Автореф. дисс. на соиск. уч. ст. ктн. «Разработка технологии функциональных кисломолочных напитков с применением комплексного пребиотика» Ставрополь 2004

47. Кукушкин В.Ю., Кукушкин Ю.Н. Теория и практика синтеза координационных соединений. JL: Наука, 1990.

48. Кузнецова Г.А. Создание нового бактериального препарата и его использование для интенсификации технологии сырокопченых колбас. Автореф. на соис. уч. степ, к.т.н. М.:ВНИИМП, 2000-23с.

49. Кутузов Р. Бактерии, приносящие миллиард// «Ведомости» №50(613). — 2000.

50. Лиофилизация молочнокислых бактерий // Шершнева В.И., Лагода И.В.// «Труды ВНИМИ», 1970. вып.27, с.58-63

51. Липатов H.H., Сажинов Г.Ю., Башкиров О.И. Функциональные кисломолочные продукты для грудных детей// Пищ. пром-ть, 2001,№8, сЗО-ЗЗ.

52. Львовский E.H. Статистические методы построения эмпирических формул. — М.: Высшая школа, 1998. 239с.

53. Малдрю Кен . Краткий курс криобиологии. 1999. Университет Калгари. Канада, на англ.яз. / Ken Muldrew. Cryobiology A Short Course. 1999

54. Матвеев B.E. Основы асептики в технологии чистых микробиологических препаратов. -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981, -311с.

55. Машенцева Н.Г., Хорольский В.В. Функциональные стартовые культуры в мясной промышленности. — М.:ДеЛи принт, 2008. — 336с.

56. Методика прогноза стойкости сухой закваски / Лагода И.//Мол. Пром-ть. -1969.-№6.-с. 16-1861 .Методические указания МУК 4.2.590-96 «Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс

57. Микробиологические основы производства: Справочник/ Л.А. Банникова, Н.С. Королева, В.Ф. Семенихина; под ред. Канд.техн. наукЯ.И. Костина — М.: Агропромиздат. 1987. 400 с.

58. Молочные продукты для профилактики остеопороза / Донская Г.А., Скобелева Н.В., Королев A.A. /Мол. пром-сть. 2000. - №9. - С. 10-11.

59. Неберт A.B. Научное обоснование обратимого консервирования молочнокислых бактерий при производстве бактериальных концентратов для сыра. Дисс.канд.техн.наук, Углич, 1994.

60. Неводные растворители / Под ред. Т. Ваддингтона. М.: Химия, 1971.6 6. Некоторые факторы, влияющие на качество и стойкость сухих заквасок/Лагода И., Банникова Л.//Мол. Пром-ть. — 1970. -№2. -с. 11-15

61. Никитин Е.Е. Звягин И.В., Замораживание и высушивание биологических препаратов.- «Колос» Москва -1971.-342с.

62. Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах/ Н.С. Пушкарь, A.M. Белоус, В.И. Вишневский, Ю.А. Иткин, Л.Ф. Розанов// Киев-1977, с. 56

63. Новик Г.И., Астапович Н.И., Кадникова Н.Г., Рябая Н.Е., Сохранение жизнеспособности и физиологических свойств бифидобактерий при криоконсервации и лиофилизации. Микробиология, 1998, №5.

64. Новое в организации производственно-микробиологического контроля/ Свириденко Г.М.// Переработка молока. 2008. - №5. - с.42

65. Новое в производстве сухих бакконцентратов и биологически активных добавок / Шабетник Г.Д., Кузьмин В.М. // Мол. пром-сть. 1999. - №8. -С.27-29.

66. Новое поколение стартерных культур для молочных продуктов / Приданникова И.А. // Мол. пром-сть. 2001. - №10. - С.35.

67. Новые продукты (разработки ВНИМИ в 2000.2001 гг., рекомендуемые к освоению на предприятиях России и других стран — членов СНГ) // Мол.пром-сть. 2001. - №7. - С.35-36.

68. Новые тенденции в области техники и технологий/ Рожкова Т.В., Гиринович O.A.// Мол. Пром-ть. 2006. -№8. -с.72

69. Определение активности заквасок и бактериальных концентратов импедансным методом/ Кузьмина О.М., Леонов А.В// Мол. Пром-ть. — 2007. —№5. -с.94

70. Оценка безопасности и функциональной эффективности пробиотических продуктов и биологически активных добавок / С. А. Шевелева // Новые лекарственные препараты : экспресс-информация. 2004. - N 3 . - С. 26-38.

71. Пектины универсальная добавка к молочным продуктам / Соснина H.A. // Мол. пром-сть. - 1999. - №9. - С.33-35.

72. Петухов В.М. Опыт применения глицерина при глаукоме. — Тр.Куйбышев.мед.ин-та, 1969, с.127.

73. Повышение эффективности терапевтического действия пробиотиков / Т. И. Карпунина, Э. С. Горовиц, А. Н. Чиненкова, А. Я. Перевалов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998. - N 2 . - С. 104-107.

74. Потиевский Э.Г., Садыкова А.Н., Мухитдинов И.М. Опыт экспериментального и клинического исследования пектина. Науч.-практ.конф. Актуальные вопросы кишечных инфекций: Тез. докл. Ташкент 1990; 119-120.

75. Предпосылки и факторы формирования региональной политики в области здорового питания в России/ Тутельян В.А., Суханов Б.П., Керимова М.Г.//Вопросы питания. 2007. - №6.

76. Пробиотические и кисломолочные продукты в питании детей раннего возраста / И. Я. Конь // Лечащий врач : медицинский научно-практический журнал. —2007.—N 1 . — С. 8-12.

77. Пробиотические продукты в комплексной терапии детей с хронической неинфекционной патологией / Чередеев А.Н., Семенихина В.Ф., Рожкова И.В., Харитонов В.Д. // Мол. пром-сть. 2001. - №3. - С.52-54.

78. Пробиотический кисломолочный продукт для школьников / Эрвольдер Н.Ю. // Мол. пром-сть. 1999. - №11. - С. 17 - 19.

79. Применение замораживания-высушивания в биологии./ под ред. Р.Харриса.- М.: Иностр. лит., 1956.-534с.

80. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Криопротекторы. Киев: Наук, думка, 1978. - 204.

81. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Калугин Ю.В. О путях создания новых криопротекторов. Пробл. Гематологии и переливания крови, 1977. —№ 2,с.18-19.

82. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Черепнев A.C. и др. Устройство для определения реологических свойств биологических жидкостей. A.c. 667865 СССР, МКИ 01 N 11/08. Опубл. 30.05.79, Бюл. №22.

83. Работнова И.Л. Общая микробиология. -М.: Высшая школа, 1966.-270с.

84. Различные условия сохранения молочнокислых бактерий/ Банникова Л.А.// «Труды ВНИМИ», 1953. вып. 15, с.57-61

85. Разработка научных подходов создания пробиотических продуктов на основе молочнокислых бактерий / Коваленко Н.К. // Пром. теплотехника. 2002. - Т.24, прил. к №4. - С.24-26.

86. Ревко В.А. К вопросу о консервировании костного мозга. — Пробл. Гематологии и переливания крови,, 1961, №9, с.35-40.

87. Рогов И.А., Титов Е.И., Ганина В.И., Нефедова Н.В., Семенов F.B., Роговi

88. С.И. Синбиотики в технологии продуктов питания: Монография. -М.: МГУПБ, 2006. 218с.: ил.

89. Роль молочных продуктов в питании пожилых людей / Радаева H.A., Петров А.Н., Галстян А.Г. // Мол. пром-сть. 2001. - №5. - С.34-36.

90. Роль пребиотиков и пробиотиков в функциональном питании детей/ Коровина Н. А., Захарова И. Н., Малова Н. Е., Скуинь Н. А.//Ж «Лечащий врач» 2005. -№2. -с.3-7

91. Роль пробиотических продуктов в питании / С. А. Шевелева // Качество жизни. Медицина. 2004. - N 2 . - С. 79-80.

92. Рэ Л., Смит О., Консервация жизни холодом, пер. с франц., М., 1962;

93. Сарафанова Л.А. Пищевые добавки: энциклопедия// СПб: ГИОРД, 2003.-688с.

94. Семенихина В.Ф. Развитие микробиологии кисломолочных напитков//Мол. Пром-ть. 1994. -№1. -с.9-11

95. Серов A.B. Химия и физика лактозы и ее производных. Монография С 32 Ставрополь: СевКавГТУ, 2003.-116с.

96. Сидоренко А.В., Новик Г.И. Влияние сверхбыстрого охлаждения на жизнеспособность бактерий рода Bifidobacterium/ Сборник тезисов международной научной конференции «Микроорганизмы и биосера» Москва 2007- 108с.

97. Сизенко Е.И. Некоторые вопросы создания отечественных продуктов питания нового поколения// Пищ. пром-ть, 1998,№12, с44-45.

98. Симоненко С.В. Конценция функционального питания// Сборник научных трудов «Научное обеспечение молочной промышленности». — М.: ГНУ ВНИМИ, 2009. 495с.

99. Совершенствование способов приготовления заквасок и методов-микробиологического контроля в молочной промышленности //Сб. научн. Трудов под ред. В.Ф. Семенихиной М: 1989г.

100. Соловьева Е., Карагодина В. Новые заквасочные культуры для кисломолочных продуктов и сыров— М.: Молочная промышленность,№ 9. 2005 с.14-15

101. Сохранение жизнеспособности и физиологических свойств бифидобактерий при криоконсервации и лиофилизации/Г.И. Новик и др./ Микробиология 1998 Т 67, №5 - с.637-642.

102. Снятковский М.В., КарычевР.З., Шаманова Г.П. Закваски прямого внесения фирмы «Хр. Хансен» для производителей кисломолочных продуктов в России. Молочная промышленность №10.2004. с.30-31

103. Стабильные закваски — качественные и безопасные молочные продукты / Ганина В.И. // Мол. пром-сть. 1999. - №8. - С.25-26.

104. Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов, 2-ой том: Пер. с англ. д-ра биол. наук E.H. Кондратьевой и д-ра биол. наук C.B. Шестакова. М.: Мир, 1979.-331с.

105. Степаненко П.П. Микробиология молока и молочных продуктов: Учебник для ВУЗов.- Сергиев Посад: ООО «Все для Вас-Подмосковье»,1999.- 415с.

106. Сублимационная сушка производственно-ценных штаммов молочнокислых бактерий// Лагода И.В., Банникова Л.А.//Мол. Пром-ть. -1973. -№3. -с.4-7

107. Сублимационная сушка производственно-ценных штаммов молочнокислых бактерий// Лагода И.В., Банникова Л.А.//Мол. Пром-ть. -1973. -№3. -с.4-7

108. Тамим А.И., Робинсон Р.К., Йогурты и аналогичные кисломолочные продукты: научные основы и технологии/ пер. с англ. Под науч. Ред Л.А. Забодаловой. СПб:Профессия, 2003. - 664с.

109. Техническая микробиология пищевых продуктов/ Под ред. А.Я. Понкратова М: Пищевая промышленность 1968. - 743с.

110. Технология лактулозы / Учебное пособие. М.: ДеЛи принт, 2003.-232с.

111. Тихомирова H.A. Технология продуктов функционального питания

112. М.:000 «Франтера»,2002. 213с.

113. Тутельян В.А. Сбалансированное питание — основа процветания нации// Доклад на VI Всероссийской конференции «Здоровое питание: воспитание, образование, реклама». — М.:БАД-Бизнес, 2001

114. Ушакова H.A. Изменение в клеточных липидах при отмирании культуры Streptococcus diacetilactis. В книге: Свободнорадикальное окисление липидов в норме и паталогии. М: Наука, 1976, с. 181-183

115. Фарант Д. Пересмотр некоторых криобиологических концепций// Криобиология и криомедицина. — 1977. — Вып.З. с. 12-20.

116. Фармакологические аспекты применения пробиотиков/ Данилевская Н.В.// «Ветеринария», №11 2005.

117. Функциональные молочные продукты пища будущего / Дьяченко Д.В. // Мол. дело. - 2002. - №1. - С. 12-13.

118. Хамагаева И.С., Качанина JI.M., Тумурова С.М./ Биотехнология заквасок пропионовокислых бактерий // Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ — 2006. 172с.

119. Харитонов Д.В., Райдна Е.И. Изучение некоторых аспектов криозамораживания микробной биомассы // Хранение и переработка сельхозсырья, 2003, №9, с.64-66

120. Хотимченко Ю.С., Кропотов A.B. "Применение энтеросорбентов в медицине", Тихоокеанский медицинский журнал, 1999, №2, с. 84-89

121. Храмцов А.Г. Молочный сахар. М.: Агропромиздат, 1987.-224с.

122. Цуцаева A.A., Аграненко В.А. Криоконсервирование клеточных суспензий. Киев: Наук.думка, 1983. — 240 с.

123. Чуйков В.А. Механизм криозащитной эффективности и фармакологические свойства диметилсульфоксида// Криобиология.-1989.- №1.- с. 3-10.

124. Шаззо Р.И., Касьянов Г.И. Функциональные продукты питания. М.: Колос, 2000.-248с.

125. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональноепитание, в 3-х томах М.: Грантъ, 2001

126. Шинода К., Накагава Т., Тамамуси Б., Исемура Т. Коллоидные поверхностно-активные вещества. М., «Мир»,1966. — 319с.

127. Экспресс-методы контроля качества/ Кравченко Э.Ф.// Мол. Пром-ть. — 2008. —№2. -с.28

128. Ярцев М.Я. Показатель роста микроорганизмов в управляемых процессах культивирования// Ветеринария 2000 №4. - 25-28.

129. An overview of probiotics, prebiotics and synbiotics in the functional food concept: perspectives and future strategies// Ziemer C.J., Gibson G.R.// Int. Dairy 1998. - №8 - 473-479.

130. A study of the optimum conditions of freezing and storing concentrated mesophilic starters// Stadhouders J., Jansen L.A.,Hup,G.// Neth. Milk and dairy J. 1971. v.25 - №4 - 229-239.

131. Biochemical characteristics of fermented milk produced by mixed-cultures of lactic starters and bifidobacteria// Martine Barona Denis Roy - JeanChristophe Vuillemard// Lait 80 (2000) 465-478

132. Citti I.E., Sandine W.E., Elliker P.R. Some observations on the Hull metod for measurement of proteolysis in milk. J.Dairy Sci. — 1963, 46, p.337.

133. Death of Lactobacillus bulgaricus Resulting from Liquid Nitrogen Freezing/ R.B. Smittle et al// Applied Microbiology 1972. Vol. 24. - №4 - 551-554.

134. Effects of inulin and lactose of fecale microflora, microbial activity, and bowel habit in elderly conspirated persons.// B. Klessen, B. Sykura, H.-J. Zunft,

135. M. Blaut.// Am.J.Clin.Nutr. 1997,v.65, p.1397-1402.

136. Fayed E.O., Sultan N.E., Yassein N.I. and Shehata A.E., Egiptian Journal of Dairy Science, 1985.- 149.

137. Fermentation pH and Temperature Influence the Cryotolerance of Lactobacillus acidophilus RD758// Y. Wangl, G. Corrieul and C. Béai// J. Dairy Sci.American Dairy Science Association -2005.- Vol. 88. p.21-29

138. Fook L.J., Fuller R., Gibson G.R. Prebiotics, probiotics and human gut microbiology/Anter Dairy J. 1999. - Vol.9. - №1. -P.53-61.

139. Font de Valdez G., Savoy de Giori G., Pesce de Ruiz Holgado and Oliver G., Crybiology, 1993. 329.

140. Futschik K., Pfiitzner H., Nussaaum C. Selective detection of microorganisms by use of electrode Impedance. — IX International conference on electrical bio-impedance. Heidelberg, Germani, 1995. — P.79-82.

141. Gibson T., Abd-el-Malek I.// The formation of carbon dioxide by lactic acid bacteria and Bacillus licheniformis and a cultural method of detecting the process. — «Dairy Res», 1945, v. 14, N 1-2, p.35

142. Growth and survival of bifidobacteria in milk// Klaver F.A.M., Kingma F., Weerkcamp A.H.//Neth. Milk Dairy 1993. - №47 - 151-164.

143. Guttmann R.D., Perry V.P., Acquired tolerance to homografts induced with dimethylsulphoxide-protected and frozen splenic cells. Criobiology, 1965, p.212-218.

144. Holcomb J.E., Frank J.F., Mcgregor J.U. Viability of Lactobacillus acidofillus and Bifidobacterium bifidum in soft-serve frozen yogurt// Cult.Dairy Prod.J. 1991. - Vol. 26(3). - P.4-5.

145. Hull M.E. Studies on milk protein. Colorimetric determination of the partialhydrolysis of the protein in milk. J.Dairy Sci. - 1947, 30, p.881-884.

146. Husmann K. Steffens K.-J. Impedance Measurement to detect Airborne Viable Microorganisms. APV Kongreb, Paris 25-28 Mai 1998.

147. Imai M. and Kato M., Journal of Agricultural Chemical Society Japan, 1975, p.93.

148. Kiselev K.V., Odintsova N.A., Ageenko N.V., Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Analysis of marine hydrobiont lipid extracts as possible cryoprotective agents// International Journal of Refrigeration (2006). 29(3). p. 387-395.

149. Kleberger K.E. An ophtalmological evalution of DMSO. -Ann.N.Y.Acad.Sci. 1967, p.381-385.

150. Kroyer G. Futschik, K. The Impedance Splitting Metod for Microbiologic Analysis of Food Preservatives. An Evaluation. Biotech Lab International Vol.2, %2, 3-4, 8a-10d, 1997.

151. Lactic acid bacteria: inhibition of angiotensin converting enzymes in vitro and in vivo// Fuglsand A., Rattray F.P., Nilsson D., Nyborg N.C.B.// Antonie Leeuwenhoek 83 2003. - 27-34

152. Lovelock J.E., Bishop M.W. Prevention of freezing damage to living cells by DMSO. Nature, 1959, №4666, p. 1394-1395.

153. McNeil H. P., Chesterman C. N., Krilis S. A. Immunology and clinical importance of antiphospholipid antibodies // Adv. Immunol. — 1991. — Vol. 49. —p. 193—280.

154. Meryman H.T. Cryoprotective agents// Cryobiology. 1971. -8,№2. -p.173-183.

155. Methods for Conservation of Industrial Microorganisms// Todor Donev// National Bank For Industrial Microorganismsand Cell Cultures, Sofia2001 -91p.

156. Morawetz H.A., Hughes W.L. The interaction of protein with synthetic poly electrolyte. J.Phis.Chem., 1952 - p.64-69.

157. Odintsova N.A., Kiselev K.V., Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Cryopreservation of primary cell cultures of marine invertebrates // Cryoletters 22: 299-310.

158. Ordonez G.A., Jeon I.J., Roberts H.A. Manufacture of frozen yogurt with ultrafiltered milk and probiotic lactic acid bacteria// J. of Food Processing and Preservation. 2000.- Vol. 24.- №2.- P.163-175.

159. Preservation techniques increase viability of dairy starter culture // Landerkin G.B.// Canada Agriculture J. 1958. - V. 13 №4 - 30-31.

160. Proteolytic enzymes of lactic acid bacteria// Law J., Haandrikaman A.// Int. Dairy 1997.-№7-1-11.

161. Protectant used in the cryopreservation of microorganisms/ Z. Hubalek// Cryobiology. 2003. -Vol.46 - 205-229.

162. Rasic Y.L., Kurmann I.A. Bifidobacteria and their role. Microbiological, nutritional-physiologal, medical and technological aspects and bibliography.-Borknauser Verlag, Rasel. Boston. Stuttgart, 1983.- 1222p.

163. Role of lactic acid bacteria (LAB) in food preservation and human health — A review // Soomro A.H.T., Masud A., Kiran A.//Pak. J. Nutr. 2002. - №1 -20-24.

164. Rostand J. Glicerine de la resistance du sperme aux basses temperature. — C.r.Acad.sci., 1946, p.222

165. H Song Miao, Susan Mills, Catherine Stanton, Gerald F. Fitzgerald, Yrjo Roos and R. Paul Ross// Effect of disaccharides on survival during storage of freeze dried probiotics// J. Dairy Sci. Technol. 2008 - Vol.88 - p. 19-30

166. Spray drying of yogurt and related cultures// Porubcan R.S. and Sellers

167. R.L.// Journal of Dairy Science 1975. - №58 - 787.

168. Stiff P.J., Koester A.R., Weidner M.K. et al. Autologous bone marrow transplantation using unfractionated cells cryopreserved in dy methyl sulfoxide and hydroxyethyl starch without controlled-rate freezing// Blood.- 1987.-Vol.70.- N 4.- p.974-978.

169. Van der Berg L., Soliaman F.S. Effect of glycerol and dimethylsulfoxide on changes in composition and pH of buffer salt solution during freezing. -Criobiology, 1969, p.93-97.

170. Yee B., Tsuymu Sh., Adams B.G. Bilogical effects DMSO on yeast. — Biochem. and Biophis. Res. Communs, 1972, p.1336-1342.

171. Yi D., Youg P., Wenkui L. Chinese Functional Food. 1999. Beijing, New World Press. -19-20.

172. Zeimer C.J., Gibson G.R. An overview of probotics, prebiotics and synbiotics in the functional food concept perspectives and future strategies// Inter. Dairy J. 1998. - Vol. 8 - №5/6. -P.437-479.

173. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности

174. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для определения количества молочнокислых бактерий в заквасках и молочных продуктах.1. Методические рекомендации1. Москва 2009

175. Результаты измерений количества молочнокислых бактерийимпедансным методом.

176. АП1 разв 2 обр ОШ ст мол 5,25 6.0Е+7 15.07.200714:04:28

177. АП1 разв 4 обр ОШ ст мол 5,42 5.4Е+7 15.07.200714:04:34

178. АП1 разв 5 обр ОШ ст мол 6,23 3,0Е+7 15.07.200714:04:37

179. АПЗ обр ОШ ст мол 7,06 1.8В7 15.07.200714:34:40

180. АП5 обр ОШ ст мол 5,68 4.5Е+7 15.07.200714:34:46

181. АП9 обр ОШ ст мол 8,09 9.0&6 15.07.200714:34:52

182. АП11 обр ОШ ст мол 6,38 2.8В7 15.07.200714:34:58

183. АП12 обр ОШ ст мол 8,75 5,8В6 15.07.200714:35:01

184. АП13 обр ОШ ст мол 9,15 4.4Е+6 15.07.200714:35:04

185. АПЗ ОШ ст мол 6,39 2,8В7 25.07.200719:49:11

186. АП5 ОШ ст мол 5,83 4.1В7 25.07.200719:49:14

187. АП9 ОШ ст мол 1035 1.3В6 25.07.200719:49:17

188. АП13 ОШ ст мол 8,52 6,8В6 25.07.200719:57:16

189. АП1 разв ОШ ст мол 5,28 5,9В7 08.08.2007 17:03:47

190. АП2 разв ОШ ст мол 7,81 1,1 В7 08.08.200717:03:50

191. АПЗ ОШ ст мол 5,21 6,2В7 10.08.2007 22:28:10

192. АП4 ОШ ст мол 5,84 4.1В7 10.08.2007 22:28:16

193. АП5 ОШ ст мол 6,09 3,4Е+7 10.08.200722:28:19

194. АПс 1 ОШ ст мол 5,14 6.5В-7 10.08.2007 22:28:52

195. АП6 ОШ ст мол 4,68 8,8Е+7 10.08.2007 22:28:58

196. АП1 ОШ ст мол 5,24 6.1&7 10.08.2007 22:29:01

197. АПс2 ОШ ст мол 5,24 6,0В7 10.08.2007 22:38:43

198. АПсЗ ОШ ст мол 5,39 5.5Е+7 10.08.2007 22:38:46

199. АП с4 ОШ ст мол 5,33 5,7В7 10.08.2007 22:38:49

200. АПс 6 ОШ ст мол 4,83 8.0Е+7 10.08.200722:38:55

201. АП 1 1 разв ОШ ст мол 6,08 3.5&7 07.09.200714:19:51

202. АП2 1 раза ОШ ст мол 5,78 4,2Е+7 07.09.200714:19:54

203. АПЗ 1 разв ОШ ст мол 5,41 5.4В7 07.09.200714:19:57

204. АП4 1 разв ОШ ст мол 5,70 4.5В7 07.09.200714:20:00

205. АП5 1 разв ОШ ст мол 6,06 3.5Е+7 07.09.200714:20:03

206. АП2 разв ОШ ст мол 7.71 1,2В7 24.09.200717:26:45

207. АПЗ разв ОШ ст мол 9,37 3.8В6 24.09.200717:34:391. УТВЕРЖДАЮ1. НИМИ

208. РАЗРАБОТАНО: ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии Зам. Директора^'' .к^- В.Г. Будрик1. Личная полнись *2010 г.

209. Заведующая Центральной лабораторией микробиологис .^^УУУ-'О В.Ф.Семенихина ""2010 г.

210. Зам. зав. Центральной лабораторией микробиологии- ) И.В.Рожкова ""2010г.

211. Заведующий сектором научно-исследовательских и экспериментальных работ- Д-В. Харитонов " 2010г.1. Инженер-микробиолог1. О.М. Кузьмина2010г.г. Москва 20101. Утверждаю1. АКТ

212. О внедрении научно-исследовательской работы

213. В производственных условиях ОАО «Кезский сырзавод» внедрены результаты диссертационной работы инженера ГНУ ВНИМИ Кузьминой Ольги Михайловны «Исследование влияния состава защитной среды на выживаемость микроорганизмов в процессе криозамораживания».

214. Закрытое акционерное общество «Кировский молочный комбинат»1. АКТ09 сентября 2010 г. № Киров

215. О внедрении научно-исследовательской работы

216. Составлен комиссией в составе:

217. В результате проведённой проверки установлено.

218. Выработки проводились по утвержденной технологической инструкции ТИ ТУ 9222-388-00419785.В качестве закваски использовали бактериальный концентра КАоксп, приготовленный методом криозамораживания с использование защитной среды КС-20.

219. Количество молочнокислых бактерий в готовом продукте определяли с помощью импеданского метода по разработанной в ходе диссертационной работы методике. Данная методика позволяет обеспечить ежедневный контроль качества сырья и выпускаемой продукции.

220. По результатам проведенных испыташш запланировано использование криозамороженного бактериального концентрата КАэкСП при производстве кисломолочных продуктов на 2011 год.

221. Предложенная методика обеспечивает простоту приготовления и внесения образцов, существенно сокращает время исследований, что особенно важно при производстве продуктов питания с небольшим сроком годности

222. Комиссия рекомендует предложенную методику для применения в производственных лабораториях предприятий молочной промышленности.

223. Составлен в 2-х экземплярах:1 экз. -дело№11-052 экз. инженеру ГНУ

224. Председатель Члены комиссии1. УТВЕРЖДАЮ

225. Генеральный-дэректор ЗАО'Жирдвмолкомбинат» Д// ~„ -у В.К Сураев «¿•56 20/£Г.1. ВНИМИ Кузьминой О.М.1. В.А. КалининафМ/.1. С-6-'/1. Л.И. Лебедева1. Шуклина

226. ЗАО «Кировский молочный комбинат» Производственная лаборатория§<«,/ Kiipoacxn

227. Sol на®лреиwiaftTBCHHOH лаборатории Га «ОМвина^Ш J1. Г °:Л Калинина

228. W^^A документов /*■»■ ч// •по качеству 1. АКТо проведении выработки кисломолочного продукта с использованием криозамороженного бактериального концентрата1. Мы, нижеподписавшиеся

229. Инжененр ГНУ ВНИМИ Кузьмина Ольга Михайловна Ведущий врач-микробиолог Шуклина Ирина Николаевна Микробиолог Стяжкина Юлия Анатольевна Составили настоящий акт о следующем:

230. РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК ГОСУДАРСТВЕННОЕ НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ МОЛОЧНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии) ОКП92 29** Группа Ж 71. ОКС 67.100.10)1. СОГЛАСОВАНО

231. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекасанитарно-эпидемиологическоезаключение1. Лг»от1. УТВЕРЖДАЮ1. Дире Рос.1. НИМИ и1. Харитонов 2010 г.

232. ЗАКВАСКИ ПРЯМОГО ВНЕСЕНИЯ ШТАММОВ1.ctobacillus acidophilus NK1, Bifidobacterium bifidum 791,

233. Bifidobacterium longum В 379M и консорциума микроорганизмов (Lactobacillusacidophilus NK1, Bifidobacterium bifidum 791, Bifidobacterium longum В 379M)1. ТУ 9229-00419785-2010

234. Дата введения в действие-РАЗРАБОТАНО: ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии Зам. Директора^'1. В.Г. Будрик1. Личная мо.ишсь2010 г.

235. Заведующая Центральной лабораторией микробиологии1. В.Ф.Семенихина ~2010 г.

236. Зам. зав. Центральной лабораторией микробиологии —" ( И.В,Рожкова "и2010г.

237. Заведующий сектором научно-исследовательских и экспериментальных работ