Исследование влияния антиангиогенных агентов и конъюгатов альфа-фетопротеина и эпидермального фактора роста с химиотерапевтическими препаратами на онкогенез тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Киселев, Сергей Михайлович

• Киселев, Сергей Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Киселев, Сергей Михайлович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Физиологический ангиогенез

1.2. Роль ангиогенеза в развитии злокачественных новообразований

1.3. Морфологические особенности опухолевого ангиогенеза

1.4. Генетическая детерминация опухолевого ангиогенеза

1.5. Основные медиаторы опухолевого ангиогенеза 1В

1.5.1. \TEGF (фактор роста эндотелия сосудов)

1.5.2. Ангиопоэтины

1.5.3. Основной фактор роста фибробластов (ЬБОБ)

1.5.4. Окись азота (N0)

1.6. Ингибиторы опухолевого ангиогенеза.

1.7. Перспективы антиангиогенного и антиваскулярного воздействия в 30 противоопухолевой терапии.

1.7.1. Антиангиогенная терапия

1.7.1.1. Ингибиторы ангиогенных факторов роста

1.7.1.2. Ингибиторы протеолитических ферментов ВКМ, опосредующих 33 процесс ангиогенеза.

1.7.1.3. Ингибиторы клеточно-матриксных взаимодействий

1.7.1.4. Ингибиторы пролиферации эндотелиальных клеток

1.7.2. Антиваскулярная терапия

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 46 2.1. Получение ангиостатина 46 2.1.1 Приготовление аффинной смолы для выделения плазминогена

2.1.2. Выделение плазминогена.'

2.1.3. Протеолиз плазминогена эластазой.

2.1 АВыделение и очистка ангиостатина

2.2 Получение и очистка фрагментов плазминогена, полученных 48 протеолизом сериновыми протеазами

2.2.1 46, 48 кДа протеолитический фрагмент плазминогена

2.2.2. 55 кДа протеолитический фрагмент плазминогена (К1-5)

2.2.3. Электрофоретическое разделение белков в полиакриламидном геле.

2.2.4. Иммуноблоттинг

2.3. Выделение и очистка АФП.

2.4. Выделение и очистка ЭФР

2.5. Получение конъюгатов

2.5.1. Получение конъюгата Др с АФП.

2.5.2. Получение конъюгата Др с ЭФР

2.6. Культивирование клеток

2.7. Определение цитотоксической активности препаратов in vitro

2.7.1. Определение ЦТА ангиостатина в отношении эндотелиальных 52 клеток АВАЕ

2.7.2. Определение ЦТА ангиостатина, протеолитических фрагментов плазминогена и конъюгатов доксорубицина с АФП и ЭФР в отношении эндотелиальных клеток HUVEC.

2.7.3. Определение ЦТА плазминогена, ангиостатина и конъюгатов 53 доксорубицина с АФП и ЭФР в отношении клеток ЗТЗ, bSMC, MCF-7,

А431, В

2.7.4. Оценка жизнеспособности клеток

2.8. Определение противоопухолевой активности препаратов in vivo

2.8.1. Животные и опухоли

2.8.2. Дозы препаратов и схемы их введения

2.8.2.1. Ангиостатин

2.8.2.2. Интерферон-ос

2.8.2.3. Доксорубицин и его конъюгаты с АФП и ЭФР

2.8.2.4. Контрольные животные

2.8.2.5. Объем опухолей

2.8.2.6. Продолжительность жизни животных

2.9. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 56 3.1. Получение и очистка ангиостатина

3.1.1. Выделение плазминогена из плазмы крови человека

3.1.2. Получение и очистка ангиостатина 58 3.2.Определение цитотоксической активности ангиостатина

3.3. Изучение активности фрагментов протеолиза плазминогена 64 сериновыми протеазами

3.3.1. Протеолитическое расщепление плазминогена а-химотрипсином

3.3.2. Протеолитическое расщепление плазминогена плазмином

3.3.3. Цитотоксическая активность протеолитических фрагментов Пг

3.4. Исследование противоопухолевой активности ангиостатина in vivo

3.5. Исследование антиангиогенной и противоопухолевой активности 69 интерферона-a in vitro

3.6. Получение и исследование противоопухолевой активности 72 конъюгатов доксорубицина с векторными белками (а-фетопротеином и эпидермальным фактором роста)

3.5.1. ЦТА доксорубицина и его коньюгатов с АФП и ЭФР

3.5.2. Цитотоксическая активность конъюгатов АФП-ДР и ЭФР-ДР в 75 отношении эндотелиальных клеток

3.5.3. Противоопухолевая активность ДР и его конъюгатов с АФП и ЭФР 77 in vivo

3.5.4. Исследование противоопухолевой активности конъюгата АФП с ДР 81 и интерферона-a in vivo

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование влияния антиангиогенных агентов и конъюгатов альфа-фетопротеина и эпидермального фактора роста с химиотерапевтическими препаратами на онкогенез»

Одной из ключевых проблем современной медицинской науки и смежных с ней дисциплин является поиск путей повышен™ эффективности терапии злокачественных новообразований. Развитие опухолей представляет собой сложный морфогенетический процесс, полностью интегрированный в систему жизнеобеспечения организма. Интенсивные метаболитические потребности опухолевых клеток требуют адекватного снабжения их питательными веществами. Известно, что поддержание роста злокачественных новообразований тесно связано с процессом ангиогенеза, заключающегося в образовании кровеносной сосудистой сети, питающей опухоль. Подавление ангиогенеза приводит к резкому торможению роста опухолей и развития регионарных метастазов. В связи с этим особенно актуальной задачей является разработка методов получения и изучения возможностей терапевтического применения антиангиогенных препаратов, среди которых наиболее перспективным является ангиостатин - мощный эндогенный ингибитор ангиогенеза, образование которого инициируется рядом опухолей. Также важным представляется исследование антиангиогенного потенциала известных, хорошо зарекомендовавших себя в клинической практике препаратов, обладающих широким спектром терапевтического действия (стимуляция иммунной системы, подавление роста опухолей, способность снижать мутагенность химиопрепаратов и т.д.). Одним из таких препаратов может служить интерферон, изучение антиангиогенного и противоопухолевого действия которого в комбинированной терапии, совместно с противоопухолевыми препаратами направленного действия, может привести к значительному увеличению эффективности лечения онкологических заболеваний.

Несмотря на достигнутые в последние годы успехи в применении антиангиогенных агентов в области онкологии, необходимо отметить, что хотя их действие приводит к эффективному торможению роста опухолей, после прекращения терапии происходит быстрое возобновление опухолевого роста. В связи с этим особую актуальность при лечении онкологических заболеваний приобретает комплексная терапия, основанная как на прямом цитотоксическом воздействии на опухолевую клетку, так и опосредованном через систему кровоснабжения опухоли. Однако, применение химиопрепаратов, в свою очередь, имеет ряд ограничений, важнейшими из которых являются низкая избирательность их действия и развивающаяся в короткие сроки резистентность опухолевых клеток к лекарственным препаратам. Одним из наиболее перспективных путей повышения терапевтической эффективности химиопрепаратов является их избирательный транспорт в виде конъюгатов с белковыми векторными молекулами. В связи с этим актуальной задачей исследования являлось получение конъюгатов АФП и ЭФР с доксорубицином -препаратом, широко используемым в клинической практике, а также сравнительное изучение противоопухолевой активности полученных конъюгатов. Параллельно решались задачи разработки метода препаративного выделения ангиостатина и изучения антиангиогенной и противоопухолевой активности ангиостатина и интерферона in vitro и in vivo.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Широкий круг исследований, проведенных в последние годы, показал, что противоопухолевый эффект лекарственных препаратов может быть обусловлен как прямым токсическим действием на опухолевые клетки, так и опосредован через модификацию функций различных систем организма. Очевидно, что мишень химиотерапевтического воздействия должна удовлетворять, по крайней мере, двум принципам. Во-первых, она должна играть ключевую роль в жизнедеятельности опухолевой клетки или всей опухоли. Во-вторых, биохимический процесс в опухолевой клетке, на которую направлено воздействие должен отличаться от соответствующих процессов, протекающих в нормальных клетках. Именно в соответствии с этими принципами в настоящем обзоре рассматривается ангиогенез как мишень противоопухолевых воздействий.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Киселев, Сергей Михайлович

ВЫВОДЫ

1. Разработана модифицированная методика получения и очистки ангиостатина человека, позволяющая получать высокоочищенный белок в препаративных количествах.

2. Продемонстрирована специфическая цитотоксическая активность ангиостатина в отношении эндотелиальных клеток. В экспериментах in vivo на мышах с привитыми опухолями меланомы В16 показано, что терапевтическое применение ангиостатина приводит к значительному ингибированию опухолевого роста и увеличению средней продолжительности жизни животных.

3. Обнаружена антиангиогенная активность различных фрагментов плазминогена, полученных путем протеолитического расщепления белка сериновыми протеазами.

4. Показана цитотоксическая активность интерферона-a в отношении эндотелиальных и опухолевых клеток человека. При этом установлено, что пролиферирующий эндотелий значительно более чувствителен к действию ИНФ-а, чем конфлюентный. Показана терапевтическая эффективность ИНФ-а in vivo при лечении мышей с солидными опухолями меланомы В16.

5. На основе разработанных схем синтезированы конъюгаты доксорубицина с векторными белками - АФП и ЭФР и продемонстрирована их высокая противоопухолевая активность in vitro и in vivo. Показано, что применение доксорубицина в составе конъюгатов с векторными белками (АФП, ЭФР) позволяет значительно снизить резистентность опухолевых клеток к антибиотику.

6. Впервые продемонстрирована цитотоксическая активность конъюгатов АФП- и ЭФР-ДР в отношении эндотелиальных клеток человека, причем активность конъюгатов в отношении пролиферирующего эндотелия значительно превышала их активность в отношении конфлюентного.

7. Показано, что применение конъюгатов АФП и ЭФР с ДР для лечения солидных опухолей меланомы В16 у мышей приводит к значительному ингибированию опухолевого роста и увеличению продолжительности жизни

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Киселев, Сергей Михайлович, 2000 год

1. Evans Н.М. On the development of the aortae, cardinal and umbilical veins, and the other blood vessels of vertebrate embryos from capillaries Anat.Rec 1909, 3, 498518.

2. Афанасьев Ю.А., Юрина H.А. Гистология M.: Медицина, Москва, 1999.

3. Risau W., Sariola H., Zerwes H., Sasse J.,Ekblom P.,Kemler R., Doetschman T. Vasculogenesis and angiogenesis in embryonic-stem-cell-derived embryoid bodies. Development. 1988, 102, 471-478.

4. Pepper M.S., Mandriota S.J.,Vassalli J.D., Orci L., Montesano R. Angiogenesis-regulating Cytokines: Activities and Interactions. Current Topics in Microbiology and Immunology. 1996, 213, 31-65.

5. Carmeliet P. Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis. Nature Med. 2000, 6, 389-395.

6. Risau W. Mechanisms of angigenesis. Nature. 1997, 386, 671-674

7. Moses M.A., Klagsbrun M. Molecular angiogenesis. Chemistry&Biology 1999, 6, R217-R224.

8. Gimbrone M.A., Leapman S.,Cotran R.S., Folkman J. Tumour dormancy in vivo by prevention of neovascularisation. J.Exp.Med. 1972, 73, 461-473.

9. Folkman J. Antiangiogenesis: new concept for therapy of solid tumours. Ann. Surg. 1972, 409-416.

10. Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent? J.Natl.Cancer Inst. 1990, 82,4-6.

11. Brem S.S., Jensen H.M., Gullino P.M. Angiogenesis as a marker of preneoplastic lesions of the human breast. Cancer(Philad.) 1978, 41, 239-244.

12. Hanahan D., Folkman J. Patterns and Emerging Mechanisms of the Angiogenic Switch during Tumorigenesis. Cell. 1996, 86, 353-364.

13. Folkman J., Watson K., Ingber D.,Hanahan D. Induction of angiogenesis during the transition from hyperplasia to neoplasia. Nature 1989, 339, 58-61.

14. Guidi A. J., Fischer L., Harris J.R., Schnitt S.J. Microvessel density and distribution in ductal carcinoma in situ of the breast. J.Natl.Cancer Inst. 1994, 86, 614619.

15. Vaupel P.,Kallinowski F.,OkuniefF P.Blood flow, oxygen and nutrient supply, and metabolic microenviroment of human tumours: a review. Cancer Res. 1989, 49, 64496465.

16. Sutherland R.M. Cell and enviroment interactions in tumour microregions: the multicell spheroid model. Science 1988,240, 177-183.

17. Nederman T., Twentyman P. Spheroids for studies of drug effects. In Spheroid in cancer research: methods and perspectives New York: Springer-Verlags, 1984, 84 -102.

18. Schweiki D., Neeman M., Itin A., Keshet E. Induction of vascular endotelial growth of factor expression by hypoxia and by glucose deficiency in multicell spheroids: implications for tumour angiogenesis. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1995, 92, 768-772.

19. Denekamp J., Hobson B. Endotelial cell proliferation in experimental tumours. Br.J.Cancer 1982, 46, 711-720.

20. Dewhirst M.W., Tso C.Y., Oliver R., Gustafson C.S., Secomb T.W., Gross J.F. Morfologic and Hemodynamyc comparison of tumor and healing normal tissue microvasculature. Int. J.Radiation Oncology Biol. Phys. 1989, 17, 91-99.

21. Jain R.K. Determinants of tumor blood flow: a review. Cancer Res. 1988, 48, 2641-2658.

22. Denekamp J. Endotelial cell proliferation as a novel approach to targeting tumor therapy. Brit.J.Cancer 1982, 45, 136-139.

23. Dameron K.M., Volpert O.V., Tainsky M.A. Control of angiogenesis in fibroblast byp53 regulation of thrombospondin-1. Science 1994 265 1582-1584

24. Rastinejad F., Polverini P.J., Regulation of the activity of a new inhibitor of angiogenesis by a cancer suppressor gene. Cell 1989, 56,345-355.

25. Ponton A.,Coulombe B.,Skup D. Decreased expression of tissue inhibitor of metalloproteinases in metastatic tumor cells leading to increased levels of collagenase activity. Cancer.Res 1991, 51, 2138-2143.

26. Mitsuhashi R., Bayko L., Shirasawa S., Kerbel R. Mutant Ras upregulates VEGFWPF expression: implications for induction and inhibition of tumor angiogenesis. Cancer.Res 1995, 55, 4575- 4580.

27. Inglesias T., Lianos S.,Munoz A. Induction of ptaleted-derived growth factor B\c-sis by the v-erbA oncogene in glial cells. Oncogene 1995, 10, 1103-1110.

28. Thomas K. Transforming potential of fibroblast growth factor genes. TIBS 1988, 13,327-328

29. Rastinejad F.,Bouck N. Oncogenes and tumour suppressor genes in the regulation of angiogenesis. Tumour angiogenesis 1997,9,101-111.

30. Mukhopadhyay D.,Tsiokas L., Foster D. Hypoxic induction of human vascular endotelial growth factor expression through c-src activation. Nature, 1995,375, 577579.

31. Vandenbunder B.,Wernert N. L'oncogene c-ets-1 participe-t-il a la regulation de 1'angiogenese tumorale. Bull.Cancer 1993, 80, 38-49.

32. Kaszubska W.,Hai T. Cyclic AMP-independent ATF family members interact with NF-kappa B and function in the activation of the E-selectin promoter in response to cytokines. Moll.Cell.Biol. 1993, 13, 7180-7190.

33. Bobik A., Agrotis A, and Little P.J. Vascular-derived growth factors: potential role in the development of the tumour vasculature. Tumour angiogenesis ,1997,15,170-184.

34. Dvorak H.F., Senger D.R. Fibrin as a component of the tumor stroma: Origins and biological significans. Cancer Metastasis Rev. 1983, 2, 41-73.

35. Connolly D.T.,Heuvelman D.M.,Nelson R., Feder J. Tumor vascular permeability factor stimulates endotelial cell growth and angiogenesis. J. Clin Invest. 1989, 84, 1470-1478.

36. Ferrara N., Davis-Smyth T. The Biology of Vascular Endotelial Growth Factor. Endocrine Rev. 1997, 18, 4-25.

37. Achen M.G., Stacker S.A. The vascular endotelial growth factor family; proteins which guide the development of the vasculature. Int. J.Exp.Path. 1998, 79, 255-265.

38. Dvorak H.F., Nagy J.A.,Feng D., Dvorak A.M. Vascular Permeability FactorYVascular endotelial Growth Factor and the significance of microvascular Hyperpermeability in Angiogenesis. Berlin: Springer-Verlags, 1999, 237, 98-130.

39. Nicosia R.F. What is the role of Vascular Endotelial Growth factor -related molecules in tumor angiogenesis? American Journal of Pathology 1998, 1, 11-15.

40. Davis S.,Yancopoulos G.D. The Angiopoetins: Yin and Yang in angiogenesis Berlin: Springer-Verlags, 1999, 237, 174-184.

41. Davis S., Gale N.W. Ligand for the EPH-related receptor tyrosine kinase that require membrane attachment or clustering for activity. Science 1994, 266, 816-819.

42. Maisonpierre P.C.,Suri C., Jones P.F., Yancopoulos G.D. Angiopoetin-2, a natural antogonist for Tie-2 that disrupts in vivo angiogenesis. Science 1997,277,5560.

43. Basilico C.,Moscatelli D. The FGF family of growth factors and oncogenes. Adv.Cancer.Res. 1992, 59, 115-165.

44. Bikfalvi A.,Klein S.,Pintucci G. The role of proteases in angiogenesis. Tumor angiogenesis, 1997,11, 116-122.

45. Florkiewicz R.Z. Multiple forms of bFGF: differential nuclear and cell surface localization . Growth factors 1991, 4, 265-275.

46. Burrus L.M., Zuber M.E., Lueddecke M.E. Identification of a cystein-rich receptor for fibroblast growth factors.Mol.Cell.Biol. 1992, 12, 5600-5609.

47. Ignaro L.J. Endotelium-derived nitric oxide: actions and properties. FASEB J. 1989,3,31-36.

48. Ziche M., Morbidelli L., Masini E. Nitric oxide mediates angiogenesis in vivo and endotelial cell growth and migration in vitro promoted by substance. J.Clin.Invest. 1994, 94, 2036-2044.

49. Fukumura D., Jain R.K. Role of nitric oxide in angiogenesis and microcirculation of tumors. Cancer and Metastasis Reviews 1998, 17, 77-89.

50. Lewis C.E., Balkwill F.R. The complex molecular network regulating tumour angiogenesis: the importance of context. Tumor angiogenesis 1997, 10, 110-114.

51. Moore B.B., Keane M.P.,Addison C.L.,Arenberg D.A. CXC chemokine modulation of angiogenesis: the importance of balance between angiogenic and angiostatic members of the family. J.Inv.Med. 1998, 46, 114-120.

52. Rollins B.G., et.al. Chemokines. Blood 1997, 90, 909-928.

53. Parangi S.,O'Reilly M.S., Christofori G.,Antiangiogenic therapy of transgenic mice impairs de novo tumor growth. Proc. Natl. Acad.Sci. USA 1996, 93, 2002-2007.

54. Brouty-Boye D., Zetter B.R., Inhibition of cell motility by interferon. Science 1980,208,516-518.

55. Ricketts R.R., Hatley R.M., Corden B.J. Interferon a-2a for the treatment of complex hemangiomas of infancy and childhood. Ann Surg. 1994, 219, 605-614.

56. Gupta S.K., Hassel Т., Singh J.P. A potent inhibitor of endotelial cell proliferation is generated by proteolytic cleavage of the chemokine platelet factor -4. Proc. Natl. Acad.Sci. USA 1995, 92, 7799-7803.

57. BouckN., Stellmach V., Hsu S. How tumors become angiogenic.Adv.Cancer.Res. 1996, 23, 345-349.

58. Dameron K.M., Volpert O.V.,Tainsky M.A., Bouck N. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospondin-1. Science 1994, 265, 1582-1584.

59. Tolmsa S.S., et.al. неопубликованные данные.

60. Van Meir E.G., Polverini P.J. Release of an inhibitor of angiogenesis upon induction of wild type p53 expression in glioblastoma cells. Nature Genet. 1994, 8, 171-176.

61. Dawson D.W., Tolsma.S.S., Volpert O.V., Bouck N.P. Retinoblastoma gene expression alters angiogenic phenotype. Proc. Am. Soc. Cancer. Res. 1995, 63, 88.

62. Iliopoulos O,, Levy A., Goldberg M. Negative regulation of hypoxia-inducible genes by the von Hippel-Lindau protein. Proc.Natl.Acad. Sci.USA 1996, 93, 1059510599.

63. Bagavandoss P., Wilks J.E., Specific inhibition of endotelial cell proliferation by thrombospondin. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990, 170, 867-872.

64. Bartow C.F., Priebe C.J., Mulliken J.B. Spastic diplegia as a complication of interferon a-2a treatment of hemangiomas ofintancy. J. Pediatry 1998, 132, 527-530

65. Larsen N.S. Clinical applications of interferon у in cancer treatment. J.Natl.Cancer.Inst. 1993, 85, 1628-1630.

66. Ny T.,Sawdey Т., Lawrence D. PAI-1, PAI-2 regulatory functions of tumor angiogenesis. Proc.Natl.Acad. Sci.USA 1986, 83, 6776-6780.

67. Fan T-P.D. Platelet- factor- 4. Trends Pharmacol. Sci.1994,15,33-36.

68. O'Reilly M.S., Holmgren L.,Shing Y.,Cao Y., Folkman J. Angiostatin- a novel angiogenesis inhibitor that mediates the suppression of metastases by a Lewis lung carcinoma. Cell. 1994, 79, 315-328.

69. O'Reilly M.S.,Boehm T.,Shing Y., Folkman J. Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth. Cell. 1997, 88, 277-285.

70. Pike S.E., Yao L., Jones K.D.,Tosato G. Vasostatin, a calreticulin fragment, inhibits angiogenesis and suppresses tumor growth. J.Exp.Med. 1998, 188, 2349-2356.

71. Clapp C., Martial J.A.,Guzman R.C. The 16 kDa N-terminal fragment of human prolactin is a potent inhibitor of angiogenesis. Endocrinol. 1993, 133, 1292-1299.

72. Homandberg G.A., Williams J.E., Grand D., Schumacher B., Eisenstein R. Heparin-binding fragments of fibronectin are potent inhibitors of endotelial cell growth. Am. J. Pathol. 1985, 120, 327-332.

73. Adams G.E., Fowler J.F., Wardman P. Hypoxic cell sensitizers in radiobiology and radiotherapy (Proceedings of 8th L.H. Gray Conference). Brit. J. Cancer, 1978, 37, Supplement III.

74. Szabo S., Sandor Z., The diagnostic and prognostic value of tumor angiogenesis. Eur.J.Surgery 1998, 164, 99-103.

75. Denekamp J. Angiogenesis, neovascular proliferation and vascular pathophysiology as targets for cancer therapy. The British Journal of Radiology 1993, 66, 181-196.

76. Kendall R.L., Wang G., Thomas K.A. Identification of a natural soluble form of a vascular endotelium growth factor Flt-1 and its heterodimerisation with KDR. Biochem. Biophy. Res. Comm. 1996, 226, 324-328.

77. Cheng S.Y., Huang S., Nagane M. Suppression of glioblastoma angiogenicity and tumorgenicity by inhibition of endogenous expression of vascular endotelial growth factor. Proc.Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 8502-8507.

78. Saleh M., Stacker S.A., Wilks A.F. Inhibition of growth of C6 glioma cells in vivo by expression of antisense vascular endotelial growth factor sequence. Cancer.Res. 1996,56, 393-401.

79. Claffey P.C.,Senger D., Spiegelman B.M. Structural requirements for dimerisation, glycosylation , secretion, and biological function of VPFWEGF. Biochim. Biophys. Acta 1995, 1246, 1-9.

80. Kerbel R.S. Tumor angiogenesis: past, present, and the near future. Cancerogenesis 2000,123,505-515

81. Hayashi K„ Madri J.A., Yurchenco P.D. J.Cell.Biol. 1992, 119, 945-959.

82. Gourley M., Williamson J.S., Angiogenesis: New targets for the development of anticancer chemotherapy. Current Pharmaceutical Design 2000, 6, 417-439

83. Kleiner D.E., Stetlerstevenson W.G. Matrix Metalloproteinases and Metastasis. Cancer chemotherapy and pharmacology 1999, 43, S42-S51.

84. Mignatti P., Rifkin D.B. Biology and biochemistry of proteinases in tumor invasion. Physiol. Rev. 1993, 73, 161-195.

85. Werb Z., Thiennu H., Julie L. Matrix-degrading proteases and angiogenesis during development and tumor formation. APMIS 1999, 107, 11-18.

86. Declerk Y.A., Laug W.E. Plasminogen activators and their inhibitors: cooperation between matrix metalloproteinases and the plasminogen activator-plasmin system in tumor progression. Enzyme Protein 1996, 49, 72-84.

87. Montgomery A.M.P., Mueller B.M., Reisfeld R. A., Declerck Y. A. Effect of tissue inhibitor of the matrix metalloproteinase-2 expression on the growth and spontaneous metastasis of a human melanoma cell line. Cancer Res. 1994, 54, 5467-5473 .

88. Jonson M.D., Kim H.R., Chesler L. Inhibition of angiogenesis by tissue inhibitor of metalloproteinase. J. Cell. Physiol. 1994, 160, 194-202.

89. Hagmann W.K., Lark M.W.,Becker J.W. Ann.Rep.Med.Chem. 1996, 31, 231240.

90. Eliceiri B.P.,Cheresh D.A. The role of av integrins during angiogenesis. Molecular Medicine 1998, 4, 741-750.

91. Brooks P.C., Montgomery A.M., Rosenfeld. Integrin avb3 antagonists promote tumor regression by inducing apoptosis of angiogenic blood vessels. Cell 1994, 79, 1157-1164.

92. Brooks P.C., Clark R.A.F., Cheresh D.A. Requirement of vascular integrin avP3 for angiogenesis. Science 1994, 264, 569-571.

93. Ruegg C. Evidence for the involvement of endotelial cell integrin av(33 in the disruption of the tumor vasculature induced by TNF and IFN-y. Nature Med. 1998, 4, 408-414.

94. Scwarz M.A. Signaling by integrins: implications for tumorigenesis. Cancer Res. 1993, 53, 1503-1506.

95. Folkman J. Adressing blood vessels. Nature biotechnology 1999, 34, 505.

96. Gutheil J.C., et.al. Phase I study of Vitaxin, an anti-angiogenic humanized monoclonal antibody to vascular integrin avp3. Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.( in the press)

97. Laflamme S.E., AuerK.L. Integrin signaling. Cancer Biology 1996, 7, 111101. Ingber D., Fujita T., Kishimoto S. Synthetic analogues of fiimagillin that inhibit angiogenesis and suppress tumour growth. Nature 1990, 348, 555-557.

98. Abe J.I., Zhou W., Takuwa N., Taguchi J.I., Kurokawa K. Cancer Res. 1994, 54, 3407-3412.

99. Ingber D., In Cancer Therapeutics: Experimental and Clinical Agents; Teicher B.A.,Ed.; Teicher B. A., Ed.; Humana Press: Totowa, NJ, 1997, 283-335.

100. Folkman J. Angiogenesis inhibitors generated by tumors. Mol.Med. 19995, 1, 120-122.

101. Cao Y., Ji R.W.,Davidson D., Schaller J., Folkman J. Kringle domains of human angiostatin. J.Biol. Chem. 1996, 271,29461-29467.

102. Gately S.M.,Twardowsky P.,Stack M.S. Humane prostate carcinoma cells express enzymatic activity that converts human plasminogen to the angiogenesis inhibitor, angiostatin. Cancer Res. 1996, 56, 4887-4890.

103. Falcone D.J., Faisal Khan K.M., Layne T., Fernandes L. Macrophage formation of angiostatin during inflammation. J.Biol. Chem. 1998, 273, 31480-31485.

104. Rivas M.J.G., Arii S., Furutani M.,Imamura M. Expression of human macrophage metalloelastase gene in hepatocellular carcinoma: correlation with angiostatin generation and its clinical significance. Hepatology 1998, 28, 986-993.

105. O'Reilly M.S., Stetlerstevenson W.G., Folkman J., Moses M. Regulation of Angiostatin Production by Matrix Metalloproteinase-2 in a Model of Concomitant Resistance. J. Biol. Chem. 1999,274, 41,29568-29571.

106. Gately S., Twardowski P., Stack M.S.,et.al. The mechanism of cancer-mediated conversion of plasminogen to the angiogenesis inhibitor angiostatin. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1997, 94, 10868-10872.

107. Lucas B.R., Holmgren I., Sim B.K.L., Pepper M.S. Multiple forms of angiostatin induce apoptosis in endotelial cells. Blood 1998, 12, 4730-4741.

108. Ji W.R., Castellino F.J., Chang J., Deford M.E, et.al. Characterization of kringle domains of angiostatin as antogonists of endotelial cell migration, an important process in angiogenesis. FASEB.J. 1998, 12, 1731-1738.

109. Sim B.K.L. AngiostatinTM and EndostatinTM:endothelial cell-specific endogenous inhibitorsof angiogenesis and tumor growth. Angiogenesis 1998, 2, 37-48.

110. Moser T.L., Stack M.S., Asplin J. et.al., Angiostatin binds ATP syntase on the surface of human endotelial cells. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1999, 96, 2811-2816.

111. Claesson-Welsh L., Welch M., Folkman J. Angiostatin induces endotelial cell apoptosis and activation of focal adhesion kinase independently of the integrin-binding motifRGD. Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1998, 95, 5579-5583.

112. Gately S Bafetti LM et al Stack MS. Angiostatin inhibits endothelial and melanoma cellular invasion by blocking matrix-enhanced plasminogen activation. Biochem. J 1999,340,77-84.

113. Kirsh M., Strasser J., Allende R., et.al. Angiostatin supresses malignant glioma growth in vivo. Cancer Res. 1998, 58, 4654-4659.

114. Lannutti B.J.,Gately S.T., et.al. Human angiostatin inhibits murine hemangioendothelioma tumor growth in vivo. Cancer Res. 1997, 57, 5277-5280.

115. Holmgren L.,0'Reilli M.S., Folkman J. Dormancy of micrometastases: balanced proliferation and apoptosis in the presence of angiogenesis suppression. Nature Med. 1995, 1, 149-153.

116. Wu Z., O'Reilly M.S.,Folkman J., Shink Y. Suppression of tumor growth with recombinant murine angiostatin. Biochem. Biophy. Res. Commun. 1997, 236, 651654.

117. Sim B.K.L., O'Reilly M.S.,Liang H.,et.al. A recombinant human angiostatin protein inhibits experimental primary and metastatic cancer. Cancer Res. 1997, 57,1329-1334.

118. O'Reilly M.S., Holmgren L., Chen C., Folkman J. Angiostatin induced and sustains dormancy of human primary tumors in mice. Nature Med. 1996, 2, 689-692.

119. Blezinger P., Wang J.J., et.al. Inhibition of tumor growth and tumor metastases by intramuscular administrtion of the endostatin gene. Nature Biotecnology 1999, 17, 343-348.

120. O'Reilly M.S.,Boehm T.,Shing Y., Folkman J. Endostatin: an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth. Cell. 1997, 88, 277-285.

121. Boehm T., Folkman J., Browder T.,O'Reilly M.S. Antiangiogenic therapy of experimental cancer does not induce acquired drug resistance. Nature 1997, 390, 404407.

122. Meneses P.I., Abrey L.E.,Hajjar K.A.,et.al. Simplified production of a recombinant human angiostatin derivative that suppresses intracerebral glial tumor growth. Clinical Cancer Res. 1999, 5, 3689-3694.

123. Dhanabal M.,Ramchandran R.,et.al. Endostatin yeast production, mutants, and antitumor effect in renal cell carcinoma. Cancer Res. 1999, 59, 189-197.

124. Nguyen J.T., Wu P., Clouse M.E., et.al. Adenoassociated virus mediated delivery of antiangiogenic factors as an antitumor strategy. Cancer Res. 1998, 58, 5673-5677.

125. Cao Y.H. Therapeutic Potentials of Angiostatin in the Treatment of Cancer. Haematologia 1999,84,643-650.

126. Hill S.A., Williamse K.B., Denekamp J. Vascular collapse after flavone acetic acid: a possible mechanism of its anti-tumour actions. Europ.J.Clin.Oncol. 1989, 25, 1419-1424.

127. Browder R.,Butterfield C.E., et.al. Antiangiogenic scheduling of chemotherapy improves efficacy against experimental drug-resistant cancer. Cancer Res. In press.

128. Baguley B.C.,Holdaway K.M.,Thomsen L.L., et.al. Inhibition of growth of colon 38 adenocarcinoma by vinblastine and colchicine: evidence for vascular mechanism. Eur. J. Cancer 1991, 27, 482-487.

129. Klauber N., Parangi S., Flynn E., Hamel E., D'Amato R.J. Cancer Res. 1997, 57, 81-86.

130. Bibby M.C., Double J.A., et.al. Reduction of tumor blood flow by flavone acetic acid: a possible component for therapy. J.Natl.Cancer Inst. 1989, 81, 216-220.

131. Kalinowski F., Schaefer C., Tyler G. In vivo targets of recombinant tumor necrosis factor- a: blood flow, oxygen consumption and growth of isotransplanted rat tumours. Br.J.Cancer 1989, 60, 555-560.

132. Teicher В. A., Ara G.,Buxton D., et.al. Optimal scheduling of interleukin 12 and chemotherapy in the Murine bladder carcinoma and B16 melanoma. Clinical Cancer Res. 1997, 3, 1661-1667.

133. Huang X.,Molema G., et.al. Tumor infraction in mice by antibody-directed targeting of tissue factor to tumor vasculature. Science 1997, 24, 547-550.

134. Fan T.P., Jaggar R.,Bicknell R. Controlling the vasculature:angiogenesis, anti-angiogenesis and vascular targeting of gene therapy. Trends Pharmacol. Sci. 1995, 16, 57-66.

135. Ellis L.M., Walker R.A., Gasparini G. Is Determination of angiogenic activity in human tumors clinically useful? Eur.J.Cancer 1998, 34, 609-618.

136. Ушморов А.Г., Александров В.А. Ангиогенез как мишень для противоопухолевых воздействий. Вопросы Онкологии 1989,:263-269.

137. Hahnfeldt P.,Panigrahy D.,Folkman J. Tumor development under angiogenic signaling: a dynamical theory of tumor growth, treatmrnt response and postvascular dormancy. Cancer Res. 1999, 59, 4770-4775.

138. Teicher B.A., Holden S.A., Ara G. Potentiation of cytotoxic cancer therapy by TNP-470 alone and with other anti-angiogenic agents. Int. J. Cancer 1994, 57, 920925.

139. Pluda J.M. Tumor-Associated Angiogenesis: mechanisms, clinical implications, and therapeutic strategies. Seminars in Oncology 1997, 24, 203-218.

140. Thompson W.D., William W.L., Maragoudakis M. The clinical manipulation of angiogenesis: pathology, side-effects, surprises, and opportunities with novel human therapy. J. Pathol. 1999, 187, 503-510.

141. Kohn J., Wilchek M., FEBS Lett. 1983, 154, 209-210.

142. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L.,Randall R.J., Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol.Chem. 1951, 193, 265-75.

143. Shi G.Y.,Wu H.L. Isolation and characterization of microplasminogen. J.Biol.Chem. 1988, 263, 17071-17075.

144. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T-4. Nature 1970, 227, 680-685.

145. Towbin H, Staehelin Т., Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc.Natl.Acad.Sci. USA 1979, 76, 4350-4354.

146. Severin S.E., Moskaleva E.Yu., Posypanova G.A., et al. In vivo antitumor activity of cytotoxic drugs conjugated with human oc-fetoprotein. Tumor targeting.-1996, 2, 299-306.

147. Savage C.R., Cohen J. Epidermal growth factor and a new derivative: rapid isolation procedures and biological and chemical characterisation. J. Biol. Chem., 1972, 247, 7609-7611.

148. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxity assays. J. Immunol. Meth. 1983, 65, 55-63.

149. Deutsch D.G., Mertz E.T. Plasminogen: purification from human plasma by affinity chromatography. Science 1970, 170, 1095-1096.

150. Castellino F.L. Chem.Rev. 1981, 81, 431-446.

151. Reunung U., Magdolen V.,Wilhelm O., et.al. Multifunctional potential of the plasminogen activation system in tumor invasion and metastasis(Review). Int.J.Oncol. 1998, 13, 893-906.

152. Williams L., Wilkins F. Death to endotelial cells, death to melanoma? Melanoma Research 1999, 9, 2-3.

153. Грачева JI.А. Цитокины в онкогематологии. М:.Москва, 1996

154. Carson W.E. Interferon -a- induced activation of signal transducer and activator of transcription proteins in malignant melanoma. Clin.Cancer Res. 1998, 4, 2219-2228.

155. Волкова M.A. Основные представления об интерферонах. Гематол. и трансфузиол. 1999, 44, 32-36.

156. Naval J., Villacampa M.J., Goguel A.F., Uriel J: Cell-type specific receptors for alpha-fetoprotein in a mouse T-lymphoma cell line. Proc Natl Acad Sci USA 1985; 82, 3301-3305.

157. Ottensmeier C., Swanson L., Strobel Т., Druker В., Niloff J., Cannistra S.A. Abcence of constitutive EGF receptor activation in ovarian cancer cell lines // British J. Cancer.- 1996,- 74,-P. 446-452.

158. Ставровская А.А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Биохимия 2000,65,112-126.

159. Von Stamm U., Brocker E.B.,et.al. Effects of interferon-a(IFN-a) on the antigenic phenotype of melanoma metastases. Melanoma Res. 1993, 3, 173-180.97

160. Salmon S.E.,Durie B.G.,Young L.,et.al. Effects of cloned human leukocyte interferons in the human tumor stem cell assay. J.Clin. Oncol. 1983, 1, 217-225.

161. Osanto S., Jansen R., et.al. In vivo effects of combination treatment with recombinant interferon y and a in metastatic melanoma. Int.J. Cancer 1989, 43, 10011006.