Создание химиотерапевтических противоопухолевых систем направленного действия с использованием белковых факторов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, доктор биологических наук Луценко, Сергей Викторович

• Луценко, Сергей Викторович
• доктор биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации доктор биологических наук Луценко, Сергей Викторович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Са2+/кальмодулин-зависимые протеинкиназы и их субстраты.

1.1.1. Кальций как вторичный мессенджер

1.1.2. Кальмодулин - универсальный клеточный модулятор 1 б

1.1.2.1. Распространение кальмодулина

1.1.2.2. Физико-химические свойства кальмодулина

1.1.2.3. Механизм действия кальмодулина

1.1.3. Са2+/кальмодулин-зависимые протеинкиназы.

1.1.4. Субстратные белки Са2+/кальмодулин-зависимых протеинкиназ.

1.1.4.1. Нейроспецифический белок синапсин I

1.1.4.2. Другие субстратные белки

1.2. Рецепторопосредованный эндоцитоз

1.2.1. Процессинг ЭФР-рецепторных комплексов

1.2.1.1. Мембранный этап процессинга ЭФР

1.2.1.2. Интернализация ЭФРРК

1.2.1.3. Внутриклеточная компартментализация ЭФРРК

1.2.1.4. Биохимический процессинг ЭФРРК

1.2.2. Создание цитотоксических систем направленного действия с использованием рецепторопосредованного эндоцитоза в качестве транспортного механизма

1.2.2.1. Преимущества и недостатки использования СНД

1.2.2.2. Ковалентное связывание

1.2.2.3. Нековалентное связывание

1.2.2.4. Критические параметры для использования СНД

1.2.2.5. Внутриклеточный транспорт ХП, ковалентно связанного с вектором

1.2.2.6. Внутриклеточный транспорт ХП, нековалентно связанного с вектором

1.2.3. Общие характеристики векторных белков

1.2.3.1. Альфа-фетопротеин

1.2.3.2. Эпидермальный фактор роста

1.2.3.2.1. Структура и физико-химические свойства ЭФР

1.2.3.2.2.Видоспецифичность ЭФР

1.3. Рекомбинантные белки

1.3.1. Векторы, используемые для экспрессии

1.3.2.Методы экспрессии

1.3.3. Методы лизиса клеток

1.3.4. Нерастворимые белки

1.3.5. Растворимые белки

1.3.6. Дополнительные проблемы, связанные с выделением рекомбинантных белков.

1.4. Цитокины

1.4.1. Терапевтический потенциал цитокинов

1.4.2. Применение ИЛ-4 при лечении онкогематологических заболеваний.

1.4.3. Локальное применение цитокинов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Выделение и изучение свойств Са2+, кальмодулинзависимой протеинкиназы II из мозга крысы

2.1.1. Выделение ПК П.

2.1.2. Определение активности ПК II.

2.1.3. Определение автофосфорилирования ПК П.

2.1.4. Влияние автофосфорилирования на активность ПК II

2.1.5. Определение молекулярной массы и радиуса Стокса ПК II.

2.1.6. Связывание 1-кальмодулина с полипептидами ПК П

2.1.7. Электрофорез препаратов ПК П

2.2. Выделение и изучение некоторых физико-химических свойств синапсина I из мозга морской свинки

2.2.1. Выделение синапсина I.

2.2.2. Электрофорез препаратов синапсина I

2.2.3. Определение молекулярной массы и радиуса Стокса синапсина I.

2.2.4. Определение базальной активности каталитической субъединицы сАМР-зависимой протеинкиназы.

2.2.5. Фосфорилирование синапсина I.

2.2.6. Определение аминокислотного состава синапсина I.

2.3. Связывание синапсина I с тубулином и кальмодулином.

2.3.1. Связывание синапсина I с liJI -меченым кальмодулином и Iмеченым тубулином на нитроцеллюлозных фильтрах.

2.3.2. Количественная характеристика связывания синапсина Ic I-меченым кальмодулином и 1251-меченым тубулином.

2.4. Получение и изучение свойств систем направленного транспорта на основе АФП и ЭФР.

2.4.1. Выделение и очистка АФП.

2.4.2. Выделение и очистка ЭФР.

2.4.3. Получение систем направленного действия (СНД), включающих химиопрепараты и векторные белки (ЭФР и АФП). 108 2.4.3 .1. СНД на основе ЭФР и АФП (СНДэфр и афп), включающие

ФЦ(А1), ФЦ(Со) и Вк.

2.4.3.2. СНДэфр и дфп, включающие Др, Км и Вб.

2.4.3.3. СНДэфр и афп, включающие XJI рб и XJI ее.

2.4.4. Культивирование клеток.

2.4.5. Определение цитотоксической активности препаратов in vitro.

2.4.5.1. ЦТА СНДэфр и афп , включающих ФЦ(А1), ФЦ(Со), ХЛ р6, ХЛ еб и свободных химиопрепаратов.

2.4.5.2. СНДэфр и афп, включающих антрациклиновые антибиотики и растительные алкалоиды.

2.4.5.3. Оценка жизнеспособности клеток.

2.4.6. Исследование накопления и внутриклеточного распределения СНДэфр, включающих доксорубицин и карминомицин и свободных антрациклиновых антибиотиков.

2.4.7. Определение биологической активности ЭФР и ЭФРФР.

2.4.7. Противоопухолевая активность СНД in vivo.

2.4.8. Дозы препаратов и схемы их введения. 113 2.4.8.1. СНДэфр и -афп, включающие фталоцианины.

2.4.8.2. СНДэфр и афп, включающие антрациклиновые антибиотики и растительные алкалоиды.

2.4.8.3. Контрольные животные.

2.4.9. Объем опухолей.

2.4.10. Продолжительность жизни животных.

2.5. Конструирование систем экспрессии рекомбинантного чЭФР в клетках Е. coli.

2.5.1. Получение Лй-РМ-фрагмента гена OmpF.

2.5.2. Замена дистального (по ходу трансляции) сайтаPstl.

2.5.3. Конструирование плазмиды pKKD.

2.5.4. Конструирование плазмиды pBT-hEGF.

2.5.5. Конструирование плазмиды pBTN-hEGF.

2.5.6. Конструирование серии плазмид pBT-(hEGF)n.

2.5.7. Выделение чЭФР.

2.5.8. Определение аминокислотной последовательности чЭФР.

2.5.9. Определение биологической активности чЭФР.

2.6. Химико-ферментативный синтез усилителя трансляции гена фага Т

2.6.1. Синтез олигонуклеотидов.

2.6.2. Анализ белков.

2.7. Создание систем экспрессии рекомбинантного интерлейкина-3 в клетках Е. coli.

2.7.1. Электрофорез препаратов чИЛ-3.

2.7.2. Выделение чИЛ-3 из продуцентов E.coli с плазмидами pTE2IL3 и pTOTE2IL3.

2.7.3. Выделение рекомбинантного чИЛ-3 из продуцента Е. coli НВ с плазмидой pTE2IL3.

2.7.3.1. Выделение чИЛ-3.

2.7.3.2. Восстановление S-S-связей в молекуле чИЛ-3 и чИЛ-4.

2.7.3.3. Определение N-концевой аминокислотной последовательности чИЛ-3.

2.8. Создание систем экспрессии рекомбинантного чИЛ-4 в клетках Е. coli.

2.8.1. Выделение плазмидной ДНК.

2.8.2. Электрофорез ДНК.

2.8.3. Элюция ДНК из легкоплавкой агарозы.

2.8.4. Синтез олигонуклеотидов.

2.8.5. Выделение рекомбинантного чИЛ-4.

2.8.5.1. Лизис Е. coli для анализа клеточных белков.

2.8.5.2. Бактериальная культура.

2.8.5.3. Выделение чИЛ-4.

2.8.5.4. Определение биологической активности чИЛ-3 и -4.

Стимуляция пролиферации активированных Т-лимфоцитов человека.

2.8.5.6. Электрофорез препаратов чИЛ-3 и -4.

2.8.5.7. Определение аминокислотной последовательности чИЛ-4 128 2.9. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 13О 3.1. Роль ПК II и синапсина I в регуляции клеточной активности

3.1.1. Выделение и изучение некоторых физико-химических и кинетических свойств ПК II из мозга крысы.

3.1.2. Пути регуляции активности ПКП

3.1.2.1. Исследование кальмодулинсвязывающих свойств ПК П

3.1.2.2. Роль автофосфорилирования в регуляции активности ПК II

3.1.2.3. Регуляция активности ПК II жирными кислотами и фосфолипидами

3.1.2.4. Роль ПК II в энзиматической регуляции клеточной активности

3.1.3. Выделение и изучение некоторых физико-химических свойств синапсинаI

3.1.4. Фосфорилирование глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы ПК

3.1.5. Связывание синапсина I с тубулином и кальмодулином.

3.1.6. Фосфорилирование синапсина I протеинкиназой С

3.1.7. Регуляция фосфорилирования синапсина!ПК С кислыми фосфолипидами

3.1.8. Ингибирование фосфорилирования синапсина I ПК С кальмодулином

3.2. Созданиехимиотерапевтических противоопухолевых систем направленного действия с использованием белковых векторов.

3.2.1. Получение систем направленного действия (СНД) на основе ЭФР (СНДэфр) и АФП (СНДафп) и химиотерапевтических противоопухолевых препаратов (ХП).

3.2.2. Цитотоксическая активность противоопухолевых СНДэфр и

СНДафп

3.2.2.1. Сравнительное исследование ЦТА свободных и входящих в состав СНД фталоцианинов и хлоринов.

3.2.2.2. ЦТА свободных и входящих в состав СНД антрациклиновых антибиотиков.

3.2.2.3. ЦТА свободных и входящих в состав СНД растительных алкалоидов.

3.2.3. Сравнительное исследование ЦТА, динамики накопления и внутриклеточного распределения свободных и входящих в состав

СНДэфр антрациклиновых антибиотиков

3.2.3.1. ЦТА свободных и входящих в состав СНДэфр антрациклинов.

3.2.3.2. Накопление свободных и входящих в состав СНДэфр антрациклинов в чувствительных и резистентных опухолевых клетках

3.2.3.3. Накопление свободных и входящих в состав СНДэфр антрациклинов в ядрах чувствительных и резистентных опухолевых клеток.

3.2.4. Использование СНД для преодоления лекарственной резистентности опухолевых клеток

3.2.5. Исследование противоопухолевой активности СНДэфр и афп, включающих фталоцианины, антрациклиновые антибиотики и растительные алкалоиды, in vivo.

3.2.5.1. Противоопухолевая активность свободного и входящего в состав СНДэфр и афп ФЦ(Со) in vivo.

3.2.5.2. Противоопухолевая активность свободных и входящих в состав СНДэфр и афп антрациклиновых антибиотиков in vivo.

3.2.5.3. Противоопухолевая активность свободных и входящих в состав СНДэфр и афп растительных алкалоидов.

3.3. Разработка методов получения человеческих ЭФР, ИЛ 3 и 4 с использованием генно-инженерных подходов

3.3.1. Получение рекомбинантного ЭФР человека

3.3.2. Химико-ферментативный синтез усилителя трансляции гена фага Т7 и функция элементов его структуры

3.3.3. Выделение рекомбинантного интерлейкина-3, продуцируемого Е.

3.3.4. Системы экспрессии в Е. coli рекомбинантного интерлейкина-3.

3.3.5. Экспрессия синтетического гена интерлейкина-4 (чИЛ-4) человека в клетках Е. coli. Получение биологически активного белка.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание химиотерапевтических противоопухолевых систем направленного действия с использованием белковых факторов»

Одной из важнейших задач современного естествознания является поиск путей и возможностей проведения регуляторных сигналов для осуществления целенаправленного воздействия на физиологические процессы, протекающие в живой клетке. В качестве таких путей нами рассматривалась система мессенджеров, реализующая каскадное усиление внешнего сигнала и рецепторопосредованный эндоцитоз - механизм селективного концентрирования и поглощения специфических лигандов (рис. 1). Посредством согласованного действия систем мессенджеров реализуется регуляция ключевых внутриклеточных процессов. При взаимодействии первичных мессенджеров с соответствующими рецепторами, под действием сопряженных с рецептором ферментативных систем, внутриклеточный уровень вторичных мессенджеров изменяется, что приводит к запуску регуляторных ферментных каскадов, основными звеньями которых являются ферменты, модифицирующие соответствующие субстраты, что в конечном итоге приводит к определенным физиологическим реакциям. Одним из ключевых ферментов, играющих важную роль в передаче трансмембранного сигнала, но до настоящего времени недостаточно изученным, является Са2+/кальмодулинзависимая протеинкиназа II (ПКП), опосредующая регуляторное действие

Са на внутриклеточные процессы. Основным физиологическим субстратом ПКП является синапсин I - белок, ассоциированый с цитоплазматической поверхностью синаптических везикул нервных окончаний, участвующий в процессах нейросекреции и возникновении ряда заболеваний нервной системы. Изучение свойств и роли ПКП в процессах клеточной пролиферации, секреции нейротрансмиттеров, функционировании цитоскелета, гликолизе, опухолевом росте и патологических нарушениях нервной системы представляется актуальным. Разъяснение значения фосфорилирования синапсина I и взаимодействия белка с элементами цитоскелета создает основу для более детального понимания механизма нейросекреции. Исследование физиологической роли ПКП и ее субстратов позволяет не только определить место данного фермента в системе регуляции 1 1 мембранные трансмиттеры клеточные эффекторы активность клеточных процессы »ядре активация гекое

Рис. 1. Подходы к избирательности регуляции клеточного метаболизма. клеточной активности, но и расширить представления о возможности избирательной регуляции внутриклеточных процессов на уровне вторичных мессенджеров и на стадии химической модификации субстрата активированными ферментными системами.

Помимо системы мессенджеров, перспективным путем избирательного воздействия на внутриклеточные процессы является рецепторопосредованный эндоцитоз - общий механизм переноса в клетки эукариот биологически активных веществ. С использованием эндоцитоза может быть осуществлен избирательный транспорт в клетку-мишень химически связанных с физиологическими лигандами различных модуляторов клеточной активности, в том числе и лекарственных препаратов. Избирательность транспорта при этом достигается за счет способности лиганда (вектора) к высокоаффинному связыванию со специфическими рецепторами, экспрессированными только/или преимущественно на клетках-мишенях. Для практического применения векторы должны отвечать ряду требований, к числу которых относятся: доступность в препаративных количествах, стабильность, сохранение высокого сродства к рецептору после химической модификации. В полной мере этим требованиям отвечают эпидермальный фактор роста (ЭФР), аномально высокий уровень экспрессии рецепторов которого отмечается в клетках опухолей эпителиального происхождения, и онкофетальный белок альфа-фетопротеин (АФП), рецепторы которого экспрессируются практически всеми типами раковых клеток, но отсутствуют на клетках нормальных тканей. Поэтому ЭФР и АФП были использованы нами для создания систем направленного действия, предполагающих наличие специфического рецептора и ковалентно связанных векторного белка и модулятора клеточной активности. Подобные системы могут найти применение в различных областях медицины для изучения возможностей направленного влияния на физиологические процессы и повышения эффективности действия известных химиотерапевтических средств при лечении целого ряда заболеваний, включая онкологические. В настоящее время фундаментальной проблемой практической онкологии является высокая токсичность и низкая избирательность действия противоопухолевых препаратов известных классов. Применение систем направленного транспорта с использованием моноклональных антител в качестве векторов не оправдало надежд на их высокую терапевтическую активность. Создание противоопухолевых систем направленного действия с использованием физиологических векторов (АФП и ЭФР) для избирательного транспорта широко применяемых в клинической практике химиопрепаратов - порфиринов, антрациклиновых антибиотиков и растительных алкалоидов - в опухолевые клетки призвано послужить решению задачи повышен™ терапевтической эффективности химиопрепаратов за счет снижения токсичности и увеличения избирательности их действия. Сравнительное исследование в модельных экспериментах in vitro и in vivo уровня противоопухолевой активности полученных систем направленного действия позволяет оценить возможности их применения в области практической онкологии. Изучение динамики накопления и внутриклеточного распределения химиопрепаратов, доставляемых в клетку в составе систем направленного действия, имеет существенное теоретическое и прикладное значение, поскольку позволяет прояснить механизм их цитотоксического действия и наметить пути повышения его эффективности.

В настоящее время масштабное исследование биологических функций и возможностей применения в медицине целого ряда белков, особенно факторов роста и цитокинов, ограничено из-за их труднодоступности в препаративных количествах из природных источников. В связи с этим представляется

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Луценко, Сергей Викторович

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. С помощью разработанных эффективных модифицированных методов выделения получены ПКП и ее субстрат синапсин I. Изучены физико-химические свойства белков, субстратная специфичность ПКП, а также регуляторное влияние автофосфорилирования, фосфолипидов и жирных кислот на активность фермента.

2. Впервые показано наличие в структуре кальмодулинзависимых ферментов (ПКП, киназа фосфорилазы и фосфодиэстераза сАМР) и синапсина I гомологичных кальмодулинсвязывающих участков, отражающих структурно-функциональную консервативность кальмодулинзависимых регуляторных механизмов.

3. Впервые продемонстрировано регуляторное влияние ПКП на процесс гликолиза, посредством активации ГАФД.

4. Обнаружена способность тубулина к связыванию с синапсином I и продемонстрировано регуляторное действие фосфорилирования различных сайтов синапсина I в отношении аффинности его взаимодействия с тубулином.

5. Исходя из полученных данных сформулирована гипотеза о ключевой роли фосфорилирования синапсина I в регуляции нейросекреции, наглядно иллюстрирующая чрезвычайную сложность избирательного проведения однонаправленного регуляторного сигнала на стадии химической модификации субстрата активированными ферментными системами.

6. Путем химического синтеза получены системы направленного действия (СНД), включающие химиопрепараты (фталоцианины, хлорины, антрациклиновые антибиотики и растительные алкалоиды) и векторные белки (чЭФР, чЭФРФР и чАФП), проявляющие цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток человека, превышающую активность соответствующих химиопрепаратов.

7. Показано преимущественное накопление антрациклиновых антибиотиков в основных мишенях их цитотоксического действия - ядрах опухолевых клеток - при использовании СНДэфр (ДР) и (КМ). Обнаружено, что при поступлении антрациклинов в опухолевые клетки в составе СНД уровень их содержания в клетках и ядрах, а также распределение между ядром и цитоплазмой практически не зависят от чувствительности клеток к антибиотикам. Динамика и уровень накопления свободных антрациклинов определяется уровнем резистентности опухолевых клеток.

8. Продемонстрировано значительное снижение резистентности опухолевых клеток к доксорубицину при использовании СНДэфр (ДР) и СНДэфрфр (ДР).

9. Показано, что при поступлении антрациклинов в клетки MCF-7wt и MCF-7AdrR в составе систем направленного действия уровень их внутриклеточной деградации заметно снижается.

10. В экспериментах in vivo на мышах с привитыми солидными опухолями меланомы В16 продемонстрировано, что терапевтическое применение систем направленного действия, включающих фталоцианины, антрациклины и растительные алкалоиды, приводит к значительному ингибированию опухолевого роста и увеличению продолжительности жизни животных. Применение свободных препаратов в тех же дозах практически не оказывает влияния на эти параметры.

11. Доказана возможность практического использования рецепторопосредованного эндоцитоза в качестве эффективного механизма селективного концентрирования и транспорта в клетку модуляторов клеточной активности и цитотоксических веществ, осуществляемого с помощью чЭФР, чЭФРФР и чАФП.

12. Для получения препаративных количеств рекомбинантных векторных белков сконструированы плазмиды E.coli, позволяющие осуществить эффективную экспрессию синтетических генов ЭФР, ИЛ-3 и ИЛ-4 человека в условиях конститутивного и индуцированного биосинтеза белка.

13. На основании сравнительного изучения уровня синтеза рекомбинантного белка в продуцентах на основе различных штаммов E.coli, содержащих ряд экспрессионных плазмид, несущих гены ЭФР, ИЛ-3 и ИЛ-4, выработано оптимальное сочетание генно-инженерной конструкции плазмиды и несущего ее штамма-продуцента. Получены штаммы-продуценты E.coli JM105/pBT-(hEGF)2 (чЭФР), HB101/pTE2IL3 и TGl/pTOTE2IL3 (чИЛ-3), TGl/pKKhIL4-9 (чИЛ-4), обеспечивающие высокий уровень экспрессии рекомбинантных белков.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Луценко, Сергей Викторович, 2000 год

1. Abelev G.I., Perova S.D., Khratkova N.I., Postnikova Z.A., Irlin I.S. Production of embrional alpha-globulin by transplantable mouse hepatomas (1963). Transplantation, 1, 174-180.

2. Aboud-Pirak E., Hurwitz E., Bellot F., Schlessinger J., and Sela M. Inhibition of human tumor growth in nude mice by a conjugate doxorubicin with monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor (1989). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 3778.

3. Adelstein R.S. Calmodulin and the regulation of the actin myosin interaction in smooth muscle and non-muscle cells (1982). Cell, 30, 349-350.

4. Adelstein R.S., Sellers J.R, Conti M.A., Pato M.D., De Lanerolle P: Regulation of smooth muscle contractile proteins by calmodulin and cAMP (1982). Fed. Proc., 41, 2873-2878.

5. Ahmad Z., De Paoli-Roach A. A., Roach P.J. Purification and characterization of a rabbit liver calmodulin-dependent protein kinase able to phosphorylate glycogen syntase (1982). J. Biol. Chem., 25, 8348-8355.

6. Akashi K. et al. EL-4 supresses the spontaneous growth of chronic myelomonocytic leukemia cells (1991). J. Clin. Invest., 88, 223.

7. Alderson P.F., Sze P.Y. Purification and characterization of a soluble cyclic nucleotide-independent Ca/calmodulin-sensitive protein kinase from rat brain (1966). J. Neurochem., 46(2), 594-603.

8. Allen G., Paynter C.A., Winther M.D. Production of epidermal growth factor in Escherichia coli (1985). J. Cell Sci. Suppl., 3, 29-38.

9. Allen T.M. Long-circulating (sterically stabilized) liposomes for targeted drug delivery (1994). TiPS, 4, 15, 215.

10. Amann E., Brosius J., Ptashne M. Vectors bearing a hybrid trp-lac promoter useful for regulated expression of cloned genes in Escherichia coli (1983). Gene, 25(2-3), 167-178.

11. Anderson I.M., Cormier M.J. Calcium-dependent regulator of NAD kinase in higer plants (1978). Biochem. Blophys. Res. Commun., 84(3), 595-602.

12. Autric F., Ferraz C., Kllhoffer M.C., Cavadore J.-C., Demaille J.G. Large-scale purification and characterization of calmodulin from rat testis. Its metal ion-dependent conformers (1980). Biochim. Biophys. Acta., 631(1), 139-147.

13. Baines A.J., Bennett V. Synapsin I is a microtubule-binding protein (1986). Nature, Lond., 319, 145-147.

14. Baines A.J., Bennett V. Synapsin I is a spectrin-binding protein immunologically related to erytrocyte protein 4.1 (1985). Nature, Lond., 315, 410-413.

15. Bartlett D.C., Moroney S. Wolff D.J. Purification, characterization and substrate specificity of calmodulin-dependent myosin light chain kinase from bovine brain (1987). Biochem. J., 247, 747-750.

16. Baudier J., Cole R.D. Interactions between the microtubule-associated -proteins and S 100b regulate -phosphorylation by the Ca/calmodulin-dependent protein kinase II (1988). J. Biol. Chem., 263, 5876-5883.

17. Baudier J., Cole R.D. Phosphorylation of tau proteins to a state like that in Alzheimer's brain is catalyzed by a calcium/calmodulin-dependent kinase and modulated by phospholipids (1987). J. Biol. Chem., 262, 17577-17583.

18. Beale E.G., Dedman J.R., Means A.R. Isolation and regulation of the protein kinase inhibitor and the calcium-dependent cyclic nucleotide phosphodiesterase regulator in the Sertoli cell-enriched testis (1977). Endocrinology, 101, 1621-1634.

19. Beguinot L., Lyall R., Willingham M., Pastan I. Down regulation of the epidermal growth factor receptor in KB cells is due to receptor internalization andsubsequent degradation in lysosomas // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1984. Vol. 81. P. 2384-2388.

20. Belagaje R.M., MayneN.G., Van Frank R.M., Rutter W.J. (1984). DNA, 3, 120.

21. Beneze WL, Schmid K// Anal. Biochem. 1957, 29: 1193-1196.

22. Bennet M.K., Kennedy M.B. Deduced primary structure of the subunit of brain type II Ca/calmodulin-dependent protein kinase determined by molecular cloning (1987). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 8, 1794-1798.

23. Bennett A., Rhind S.K., Lowe P.A., Hentschell C.C.G. (1984). U.K., Patent GB2140810A.

24. Bennett M.K., Erondu N.E., Kennedy M.B. Purification and characterization of a calmodulin-dependent protein kinase that is highly concentrated in brain (1983). J. Biol. Chem., 258, 12735-12744.

25. Billingsley M.L., Velletry P.S., Kuhn D.M. Levine R.A., Lovenberg W. Carboxymetilation inhibits calmodulin-dependent phosphorylation in rat brain membranes and cytosol (1983). Soc. Neurosci. Abstr., 9, 596-600.

26. Bird M.M. Endogenous phosphorylation of a microtubule-associated protein (1976). Cell Tissue Res., 168, 101-115.

27. Birnboim H.C., Doly I. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA (1979). Nucl. Acids Res., 7(6), 1513-1522.

28. Bolton A.E., Hunter W.M. The labelling of proteins to high specific radioactivities by conjugation to a 1251-containing acylating agent (1973). Biochem J., 133(3), 529-539.

29. Bomsel M. and Mostov K. Sorting of plasma membrane proteins in epithelial cells (1991). Curr. Opin. Cell Biol., 3, 647.

30. Boonstra J., de Laat S. W., Ponec M. Epidermal growth factor receptor expression related to differentiation capacity in normal and transformed keratinocytes (1985). Exp. Cell Res., 161, 421-433.

31. Bosco M.C. et al. IL-4 inhibits IL-2-induced tumoricidal activity and secretory function of human monocytes (1995). J. Immunol., 155(3), 1411.

32. Bourgiugnon L.J.W., Kerrick W.G.L. Phosphorylation-dependent regulation of Limulus myosin (1983). J. Membr. Biol., 75, 65-72.

33. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding (1976). Anal.Biochem., 72, 248-254.

34. Bretaudiere J.-P., Spillman T. (1984). In: Methods in Enzymatic Analysis IV, Bergmeyer H.U. (ed.), Verlag Chemie, GmBH, p. 75.

35. Builder S.E, Ogez J.R. (1985). US Patent No. 4511502.

36. Burgess R.R., Jendrisak J.J. A procedure for the rapid, large-scall purification of Escherichia coli DNA-dependent RNA polymerase involving Polymin P precipitation and DNA-cellulose chromatography (1975). Biochemistry, 14(21), 4634-4638.

37. Burgess W.H., Jemiolo D.K., Kretsinger R.M. Interaction of calcium and calmodulin in the presence of sodium dodecyl sulfate (1980). Biochirh. Biophys. Acta., 263, 257-260.

38. Burke B.E., De Lorenzo R.J. Ca and calmodulin-dependent phosphorylation of endogenous synaptic vesicle tubulin by a vesicle-bound calmodulin kinase system (1982). J. Neurochem., 38, 1205-1218.

39. Bush K., Sykes R.B. (1984). In: Methods in Enzymatic Analysis IV, Bergmeyer

40. H.U. (ed.), Verlag Chemie, GmBH, p. 280.

41. Butcher R.W., Sutherland E.W. Adenosine 3',5'-phosphate in biological materials.

42. Purification and properties of cyclic 3', 5'-nucleotlde phosphodiesterase and use of this enzyme to characterize adenosine 3',5'-phosphate in human urine (1962). J. Biol. Chem., 237,1244-1250.

43. Cabilly S., Riggs A.D., Pande H., Shirely J.E., Holmes W.E., Rey M., Perry L.J., Wetzel R., Heyneker H.L. Generation of antibody activity from immunoglobulin polypeptide chains produced in Escherichia coli (1984). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 81, 3273.

44. Carlin R.K., Grab D.G., Cohen R.S., Siekevitz P. Isolation and characterization of postsynaptic densities from various brain region, enrichment of different types of postsynaptic densities (1980). J. Cell Biol., 86, 831-845.

45. Carnegie P.R., Moore W.J. Myelin basic protein (1980). In: Proteins of the nervous system, 2nd ed., BradshawR.A., Schneider D.M., eds., N.Y., 119-143.

46. Carpenter G., Lembach K. 1., Morrison M. M., Cohen S. Characterization of the binding of 125I-labeled epidermal growth factor to human fibroblasts // J. Biol. Chem. 1975. Vol. 250. P. 4297-4304.

47. Carrier M.J., Nugent M.E., Tacon W.C., Primrose S.B. (1983). Trends Biotechnol., 1, 109.

48. Casini T. et al. Bicistronic retroviral vector reveals capacity of verb-A to induce erythroleukemia and to co-operate with v-myb (1995). Oncogene, 11(6), 1019.

49. Caulcott C.A., Lilley G., Wright E.M., Robinson M.K., Yarranton G.T. Investigation of the instability of plasmida directing the expression of Met-prochymosin in Escherichia coli (1985). J. Gen. Microbiol., 131, 3355-3365.

50. Caulcott C.A., Rhodes P.M. Temperature-Induced Synthesis of Recombinant Proteins (1986). Trends Biotechnol., 4(6), 142-146.

51. Cheung W.Y. Calmodulin plays a pivotal role in cellular regulation (1980). Science, 207, 19-27.

52. Cheung W.Y. Cyclic 3', 5 -nucleotide phosphodiesterase: evidence for and properties of a protein activator (1971). J. Biol. Chem., 246, 2859-2869.

53. Cheung W.Y. Cyclic 3',5'-nucleotide phosphodiesterase. Demonstration of an activator (1970). Biochem. Biophys. Res. Cominun., 38(3), 533-539.

54. Cheung W.Y. Role of calmodulin in brain function (1982). Prog. Brain Res., 56, 237-253.

55. Childers S.R. Siegal F.L. Isolation and purification of a calcium-binding protein from electrophase of Electrophorus electriens (1975). Blochlm. Biophys. Acta., 405(1), 99-108.

56. Cohen C.N., Chang A.C.Y., Hsu L. Nonchromosomal antibiotic resistance in bacteria: genetic transformation of Escherichia coli by R-factor DNA (1972). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69(8), 2110-2114.

57. Cohen P. The role of cyclic AMP-dependent protein kinase in the regulation of glycogen metabolism in mammalian skeletal muscle (1978). Curr. Top. Cell Reg., 14, 117-196.

58. Cohen P. The role of phosphorylase kinase in the nervous and hormonal control of glycogenolysis in muscle (1974). Biochem. Soc. Symp., 39, 51-73.

59. Cohen P. The role of protein phosphorylation in the hormonal control of enzyme activity (1985). Eur. J. Biochem., 151, 439-448.

60. Cohen P. The subunit structure of rabbit skeletal muscle phosphorylase kinase and the molecular basis of its activation reactions (1973). Eur. J. Biochem., 34, 1-14.

61. Cohen P., Burchell A., Foulkes J.G., Cohen P.T.W., Vanaman T.C., Nairn A.C. Identification of the Ca-dependent modulator protein as the fourth subunit of rabbit skeletal muscle phosphorylase kinase (1978). FEBS Lett., 92, 287-293.

62. Cohen S. Isolataion of a mous submaxillary gland protein accelerating incisor eruption and eylid opening in the new-born animal (1962). J. Biol. Chem., 273, 1555-1562.

63. Cox J.A., Malnoe A., Stein E.A. Regulation of brain cyclic nucleotide phosphodiesterase by calmodulin (1981). J. Biol. Chem., 256, 3218-3222.

64. Craig R., Smith R., Kendrick J. Phosphorylation of myosin light chains promotes assembly of myosin filaments (1983). Nature, 302,436-439.

65. Curiel D.T., Agarwal S., Wagner E., and Gotten M. Adenovirus enhancement of transferrin-polylysine-mediated gene delivery (1991). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 8850.

66. Dabrowska R, Sherry J.M.F., Aromatoria D.K., Hartshorne D J. Modulator protein as a component of the myosin light chain kinase from chicken gizzard (1978). Biochemistry, 17(2), 253-258.

67. De Camilli P., Ueda T., Bloom F.E., Battenberg E., Greengard P. Widespread distribution of Protein I in the central and peripheral nervous system (1979). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 5977-5961.

68. De Gennaro L.J., McCaffery C.A., Kirchgessner C.V., Yang-Feng T.L., Francke U. Molecular analysis of Synapsin I, a candidate gene for Rett syndrome (1987). Brain & Development, 9, 469-474.

69. Dedman J.R., Potter J.D., Jackson R.L., Johnson J.D., Means A.R. Physico-chemical properties of rat testis Ca-dependent regulator protein of cyclic nucleotide phosphodiesterase (1977). J. Biol. Chem., 252, 8415-8422.

70. Dedman J.R. Jackson R.L., Schreiber W.E., Means A.R. Sequence homology of the Ca-dependent regulator of cyclic nucleotide phosphodiesterase from rat testis with other Ca-binding protein (1978). J. Biol. Chem., 252, 8415-8422.

71. Dedman J.R. Welsh M.J., Means A.R. Ca-dependent regulator: production and characterization a monospecific antibody (1978). J. Biol. Chem., 253, 7515-7521.

72. Demaille J.G., Pechere J.-F. The control of contractility by protein phosphorylation (1983). Adv. Cyclic Nucleotide Res., 15, 337 371.

73. Deutch H.F. Chemistry and biology of alpha-fetoprotein (1991). Cancer Res., 56, 252-267.

74. Drummond G.I. Perrot-Yee S. Enzymatic hydrolysis of adenosine 3',5'-phosphoric acid (1961). J. Biol. Chem., 236, 1126-1129.

75. Dunn J. J., Studier F.W. Complete nucleotide sequence of bacteriophage T7 DNA and the locations of T7 genetic elements (1983). J. Mol. Biol., 166(4-5), 477-535.

76. Dunn W.A. and Hubbard A.L. Receptor-mediated endocytosis of epidermal growth factor by liepatocytes in the perfused rat liver: Ligand and receptor dynamics (1984). J. Cell. Biol., 98, 2148.

77. Edelman A.M., Krebs E.G. Phosphorylation of skeletal muscle myosin light chain kinase by the catalytic subunit of cAMP-dependent protein kinase (1982). FEBS Lett., 138, 293-298.

78. Egrie J.C., Campbell J.A., Flangas A.L., Siegel F.L. Regional, cellular and subcellular distribution of calcium-activated cyclic nucleotide phosphodiesterase and calcium-dependent regulator in porcine brain (1977). J. Neurochem., 28, 1207-1213.

79. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups (1959). Arch. Biochem. and Biophys., 82(1), 70-77.

80. Emerick A.W., Bertolani B.L., Ben-Bassat A., White T.J., Konrad M.W. (1984). BIO/TECHNOL, 2, 165.

81. Endo T., Hidaka H. Ca-calmodulin-dependent phosphorylation of mielin isolated from rabbit brain (1984). Biochem. Biophys. Res. Commun., 97, 553-558.

82. Filburn C.R., Sacktor B. Cyclic nucleotide phosphodiesterase of rabbit renalcortex. Characterization of brush border membran activities (1976). Arch. Biochem. Biophys., 174, 249-261.

83. Filmus J., Trent J.M., Pollak M.N., Buick R.N. Epidermal growth factor receptor gene-amplified MDA-468 breast cancer cell line and its nonamplified variants (1987). Mol. And Cell.Biol., 7, 251-257.

84. Flockhart D.A., Corbin J.D. Regulatory mechanisms in the control of protein kinases (1982). CRC Crit. Rev. Biochem., 12, 133-186.

85. Forn J. Greengard P. Depolarizing agents and cyclic nucleotides regulate the phosphorylation of specific neuronal proteins in rat cerebral cortex slices (1978). Proc. Natl. Acad. Scl. USA, 75, 5195-5199.

86. French A.R., Sudlow G.P., Wiley H.S., and Lauffenburger D.A. Postendocytic trafficking of epidermal growth factor-receptor complexes is mediated through saturalble and specific endosomal interactions (1994). J. Biol. Chem., 269, 15749.

87. Fukunaga K., Goto S., Miyamoto E. Immunohistochemical localization of Ca/calmodulin-dependent protein kinase II in rat brain and various tissues (1988). J. Neurochem., 51, 1070-1078.

88. Fukunaga K., Yamamoto H., Matsui K., Hidashi K., Miyamoto E. Purification and characterization of a Ca and calmodulin-dependent protein kinase from rat brain (1982). J. Neurochem., 39, 1607-1617.

89. Gill D.L. Receptors coupled to calcium mobilization (1985). Adv. in Cyclic Nucleotide and Protein Phosphorylation Research., 19, 307-323.

90. Goelz S.E., Nestler E.J., Chehrazi B., Greengard P. Distribution of Protein I in mammalian brain as determined by detergent-based radioimmunoassay (1981). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78, 2130-2134.

91. Goelz S.E., Nestler E.J., Greengard P. Phylogenetic survey of proteins related to Synapsin I and biochemical analysis of four such proteins from fish brain (1985). J. Neurochem., 45, 63-72.

92. Goldenring J.R., Gonzales B., De Lorenzo R.J. Calcium-calmodulin-dependent tubulin kinase in brain cytosol (1983). Trans. Am. Soc. Neurochem., 14, 186-169.

93. Goldenring J.R., Lasher R.S., Vallano M.L., Ueda T., Naito S., Sternberger L.A.,

94. De Lorenzo R.J. Association of Synapsin I with neuronal cytoskeleton. Identification of cytoskeletal preparation in vitro and immunocytochemical localization in brain of Synapsin I (1986). J. Biol. Chem., 261, 8495-8504.

95. Goldenring J.R., Vallano M.L., De Lorenzo R.L. Purification and characterization of a calmodulin-dependent protein kinase from rat brain cytosol able to phosphorylate tubulin and microtubule-associated proteins (1985). J. Neurochem., 45, 900-905.

96. Grab D.G. Carlin R.K., Siekevitz P. Function of calmodulin in postsynaptic densities. Presence of a calmodulin-activable protein kinase activity (1981). J. Cell Biol., 89, 440-448.

97. Grab D.J. Berzins K., Cohen R.S., Siekevitz P. Presence of calmodulin in postsynaptic densities isolated from canine cerebral cortex (1979). J. Biol. Chem., 254, 8690-8696.

98. Gray G.L., Baldridge J.S., McKeown K.S., Heyneker H.L., Chang C.N. Cloning and expression of c DNA for human lymphotoxin, a lymphokine with tumour necrosis activity (1985). Gene, 39, 247-254.

99. Gregory H. Isolation and structure of urogastrone and its relationship to epidermal growth factor (1975). Nature, 257, 325-327.

100. Griffith L.C., Schulman H. The multifunctional Ca/calmodulin-dependent protein kinase mediates Ca-dependent phosphorylation of tyrosine hydroxylase (1988). J. Biol. Chem., 263, 9542-9549.

101. Guidotti A., Konkel D.R., Ebstain B., Corda M.G., Wise B.C., Krutzch H„ Meek J.L., Costa E. Isolation, characterisation and purification to homogeneity of a rat brain protein (GABA-modulin) (1982). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6084-6088.

102. Haas C.A., De Gennaro L.J. Multiple Synapsin I messenger RHAs are differentially regulated during neuronal development (1988). J. Cell Biol., 106, 195-203.

103. Hait W.N., Weiss B. Charateristics of the cyclic nucleotide phosphodiesteraseof normal and leukemic lymphocytes (1977). Biochim. Biophys. Acta., 497, 86100.

104. Hamon M., Bourgoin S., Artaud F., El Mestikawy S. The respective roles of tryptophan uptake and tryptophan hydroxylase in the regulation of serotonin synthesis in the central nervous system (1981). J. Physiol., Paris, 77, 269-279.

105. Hanley R.M., Means A.R., Kemp B.E., Shenolikar S. Mapping of calmodulin-binding domain of Ca/calmodulin-dependent protein kinase II (1988). Bichem. Biophys. Res. Comm., 152(1), 122-128.

106. Harris T.J.R. (1983). Nordic Symposium on Protein Engineering. PROTEIN ENGINEERING, 1(2), 81-82.

107. Harris T.J.R., Patel T., Marston F.A.O., Little S., Emtage J.S., Opdenakker G., Volckaert G., Rombauts W., Billiau A., De Somer P. (1986). Mol. Biol. Med., 3(1), 279-284.

108. Hartman JR., Gelles T., Yavin Z., Bartfield D., Kanner D., Aviv H., Gorecki M. High-level expression of enzymatically active human Cu/Zn superoxide-dismutase in Escherichia Coli (1986). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 83(19), 71427146.

109. Hashimoto Y., Schworer C.M., Roger J.C., Soderling T.R. Autophosphorylation of a Ca/calmodulin-dependent protein kinase II. Effects on total and Ca-independent activities and kinetic parameters (1987). J. Biol. Chem., 262, 8051-8055.

110. Henderson B. et al. Therapeutic potencial of cytokine manipulation (1992). Trends Pharmacol. Sei., 12(4), 145-151.

111. Henning U., Cole S.T., Bremer E., Hindernach I., Schaller H. Gene fusion using the omp A gene coding for a major outer-membrane protein of Escherichia coli K 12 (1983). Eur. J. Biochem., 136, 233-240.

112. Heyde M., Portalier R. Regulation of major outer-membrane porin proteins of Escherichia Coli K-12 by pH (1987). Mol. Gen. Genet., 208(3), 511-517.

113. Hostomsky Z., Smrt J., Paces V. Cloning and expression in Escherichia coli of the synthetic proenkephalin analogue gene (1985). Gene, 39, 269-274.

114. Hsiung H.M., Mayne N.A., Becker G.W. Expression, efficient secretion and folding of human growth-hormone in Escherichia Coli (1986). BIO/TECHNOL, 4(11), 991-995.

115. Huang C.-K., Browning M.D., Greengard P. Purification and characterisationof protein III, a mammalian brain phosphoprotein (1982). J. Biol. Chem., 257, 6524-6528.

116. Hughis P.A. et al. The adjuvant potencial of cytokines (1992). Biotechnol. Ther., 3 (3-4), 101-117.

117. Huttner W.B., De Gennaro L.J., Greengard P. Differential phosphorylation of multiple sites in purified Protein I by cyclic AMP-dependent and calcium-dependent protein kinases (1986). J. Biol. Chem., 256, 1482-1488.

118. Ihle J. et al. Immunological regulation of hematopoietic/lymphoid stem cell differentiation by interleukin-3 (1986). Adv. Immunol., 39, 1-50.

119. Inokushi K., Muton N., Matsuyama S., Mizushima S.//Nucl. Acids Res. 1982, 21: 6957-6968.

120. Jackie S., Runquist E.A., Miranda-Brady S., and Havel R.J. Trafficking of the epidermal growth factor receptor and transferrin in three hepatocytic endosomal fractions (1991). Biol. Chem., 266, 1396.

121. Jacobs P., Cravador A., Loriau R., Brockly F., Colau B., Churchana P., Van Elsen A., Herzog A., Bollen A. Molecular cloning, sequencing, and expression in Escherichia coli of human preprourokinase cDNA (1985). DNA, 4, 139-146.

122. Jacobsen T.W. et al. Inhibition of SCF-induced proliferation of primitive murine hematopoietic progenitor cells signaled through the 75-kDa TNF-receptor (1995). J. Immunol., 154(8), 3732.

123. Jamieson G.A. (Jr.), Vanaman T.C., Blum J.J. Presence of calmodulin in Terrahymena (1979). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76(12), 6471-6475.

124. Jansen J.H. et al. Inhibitory effect of IL-4 on the proliferation of acutemyeloid leukemia cells wirh myelomonocytic differentiation (AML-M4/M5); the role of IL-6 (1993). Leukemia, 7, 643.

125. Jarret H.W., Kyte J. Human erythrocyte calmodulin: further chemical characterization and the site of its interaction with the membrane (1979). J. Biol. Chem., 254, 8237-8244.

126. Jayaram B., Devor R., Guiser Y., Fiers W. Purification of Human Interleukin-4 Produced in Escherichia-Coli (1989). Gene, 79(1-2), 345-354.

127. Joh T.H., Park D.H., Reis D.J. Direct phosphorylation of brain tyrosine hydroxylase by cAMP-dependent protein kinase: mechanism of enzyme activation (1978). Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 75, 4744-4748.

128. Johnson E.M., Ueda T., Maeno H., Greengard P. Adenosine 3', 5'-monophosphate-dependent phosphorylation of a specific protein in synaptic membrane fractions from rat cerebrum (1972). J. Biol. Chem., 247, 5650-5652.

129. Jones H.P., Bradford M.M., McRorie R.A., Cormier M.J. High levels of a calcium-dependent modulator protein in spermatozoa and its similarity to brain modulator protein (1978). Biochem. Biophys. Res. Commun., 82, 1264-1272.

130. Kakiuchi S., Yamazaki K., Hakajima H. Properties of heat-stable phosphodiesterase activating factor isolated from brain extracts studies on cyclic 3',5'-nucleotide phosphodiesterase (1970). Proc. Jpn. Acad., 46, 589-592.

131. Kamata N., Chida K., Rikimaru K. et al. Growth-ingibitory effects of epidermal growth factor and overexpression of its receptor on human sqaumous carcinomas in culture (1986). Cancer Res., 46, 1648-1653.

132. Kato Y. and Sugiyama Y. Binding, internalization, degradation, and mitogenic effect of epidermal growth factor in cultured rat hepatocytes (1993). STP Pharm. Sci., 3, 75.

133. Kawasaki T. and Ashwell G. Carbohydrate structure ofglycopeptides isolated from an hepatic membrane-binding protein specific for asialoglycoproteins (1976 a). J Biol. Chem., 251, 5292.

134. Kawasaki T. and Ashwell G. Chemical and physical properties of an hepatic membrane protein that specifically binds asialoglycoproteins (1976 b). J. Biol. Chem., 251, 1296.

135. Kelly P.T., McGuinness T.L., Greengard P. Evidence that the major postsynaptic density protein is a component of a calclum-calmodulin dependent protein kinase (1984). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 945-949.

136. Kelly P.T. Montgomery P.R. Subcellular localization of the 52 000 molecular weight major postsynaptic density protein (1982). Brain Res., 233, 265-266.

137. Kennedy M.B., McGuinness T., Greengard P. A calcium/calmodulin-dependent protein kinase from mammalian brain that phosphorylates Synapsin I: partial purification and characterization (1983). Neurosci., 3, 818-831.

138. Kennedy M.S., Greengard P. Two calcium/calmodulin-dependent protein kinases which are highly concentrated in brain phosphorylate protein I at distinct sites (1981). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 78, 1293-1297.

139. Kim H. Binder L.I., Rosenbaum J.L. The periodic association of MAP-2 with brain microtubules in vitro (1979). J. Cell. Biol., 80, 266-276.

140. Kimmenade A., Bond M.W., Shumacher J.H., Laguoi C., Kastelein R.A. Expression, renaturation and purification of recombinant human interleukin-4 from Escherichia Coli (1988). Eur. J. Biochem., 173(1), 109-114.

141. Kindler V., Thorens B., Kossodo S, Allet B., Eliason J.F., Thatcher D., Färber N., Vassalli P. Stimulation of hematopoiesis in vivo by recombinant bacterial murine interleukin-3 (1986). Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 83(4), 1001-1005.

142. Klee C.B. Calmodulin: Structure function relationships. In: "Calcium and cell function", Cheung W.Y. ed, Acad. Press, N.Y., p. 69-77.

143. Klee C.B. Conformational transition accompanying the binding of Ca to the protein activator of 3', 5'-cyclic adenosine monophosphate phosphodiesterase (1977). Biochemistry, 16(5), 1017-1024.

144. Konrad M.W., Lin L.S. (1984). US Patent No. 4450103.

145. Krebs E.G. Phosphorylation and dephosphorylation of glycogen Phosphorylase: a protype for reversible covalent enzyme modification (1981). Curr. Top. Cell Reg., 18, 401-419.

146. Krebs E.G., Beavo J.A. Phosphorylation dephosphorylation of enzymes (1979). Annu. Rev. Biochem., 48, 923-959.

147. Kretsinger R.H. Calcium-binding proteins (1976). Ann. Rev. Biochem., 45, 239-266.

148. Kretsinger RH. Structure and evolution of calcium modulated proteins (1980). C.R.C. Crit. Rev. Biochem., 8, 119-174.

149. Kretsinger R.H. The informational role of calcium in the cytosol (1979). Adv.Cyclic Nucleotide Res., 11, 1-26.

150. Krueger B.K., Forn J., Greengard P. Depolarization-induced phosphorylation of specific proteins, mediated by calcium ion influx in rat brain synaptosomes (1977). J. Biol. Chem., 252, 2764-2773.

151. Kuret J, Schulman M. Purification and characterization of a Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase from rat brain (1984). Biochemistry, 23, 5495-5504.

152. Kuret J., Schulman H. Mechanism of autophosphorylation of the multifunctional Ca/calmodulin-dependent protein kinase (1985). J. Biol. Chem., 260, 6427-6430.

153. Kuznicki J. Kuznicki L. Drabikowski W. Ca-binding modulator protein in protozoa and myxomicete (1979). Cell Biol. In. Rep., 3, 17-23.

154. Kwiatkowski A.P., Shell D.J., King M.M. The role of autophosphorylation in activation of the type II calmodulin-dependent protein kinase (1988). J. Biol. Chem., 263, 6484-6486.

155. La Porte D.C., Wierman B.M., Stiorm D.R. Calcium-induced exposure of a hydrophobic surface on calmodulin (1980). Biochemistry, 19, 3814-3818.

156. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of the head of bacteriophage T4 (1970). Nature, 227, 680-684.

157. Lai J., Nairn A.C., Greengard P. Autophosphorylation reversibly regulates the Ca/calmodulin-dependence of Ca/calmodulin-dependent protein kinase II (1986). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 4253-4257.

158. Lai Y., McGuinness T., Greengard P. Purification and characterization of brain Ca/calmodulin-dependent kinase II that phosphorylates synapsin I (1983). Soc. Neurosci. Abstr., 9, 1029-1033.

159. Lai Y., Nairn A.C., Gorelick F., Greengard P. Ca/calmodulin-dependent protein kinase II: identification of autophosphorylation site responsible for generation of Ca/calmodulin-independence (1987). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 5710-5714.

160. Lazar M.A., Lockfield A.J., Truscott R.J.W., Barchas J.D. Tyrosine hydroxylase from bovine striatum: catalitic properties of the phosphorylated forms of the purified enzyme (1982). J. Neurochem., 39, 409-422.

161. Le Peuch C.J., Haiech J., Demaille J.G. Concerted regulation of cardiac sarcoplasmic reticulum calcium transport by cyclic adenosine monophospnate-dependent and calcium-calmodulin-dependent phosphorylations (1979). Biochemistry, 18, 5150-5157.

162. Le Vine H., Sahyoun N.E. Characterization of a soluble M 30,000 catalitic fragment of the neuronal calmodulin-dependent protein kinase II.

163. Le Vine H.III.,Sahyoun N.E., Two types of brain calmodulin-dependentprotein kinase II: morphological, biochemical and immunochemical properties (1988). Brain Research, 439, 47-55.

164. Lee J.D. et al. IL-4 inhibits the expression of TNFa and (3, IL-1(B and -6 and IFN-y (1995). Immunol, and Cell Biol., 73(1), 57.

165. Lee J.M., Ullrich A. (1984). European Patent Application No. 0128733.

166. Lin C.R., Kapiloff M.S., Durgerian S., Tatemoto K., Russo A., Hanson P., Schulman H., Rosenfeld M.G. Molecular cloning of a brain-specific calcium/calmodulin-dependent protein kinase (1987). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 5962-5966.

167. Lin Y.M., Liu Y.P., Cheung W.Y. Cyclic 3', 5'-nucleotide phosphodiesterase. Purification, characterization and active form of the protein activator from bovine brain (1974). J. Biol. Chem., 249, 4943-4954.

168. Lisman J.E., Goldring M.A. Feasibility of long-term storage of graded information by the Ca/calmodulin-dependent protein kinase molecules of the postsynaptic density (1986). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 5320-5324.

169. Lord S.T. Expression of a cloned human fibrinogen cDNA in Escherichia coli: synthesis of an A alpha polypeptide (1985). DNA, 4, 33-38.

170. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951. Vol. 193. P. 265-275.

171. Luokkamaki M., Palva E.T. Cold-sensitive Ompb mutants affecting expression of Ompc in Escherichia Coli-K12 (1987). FEMS Microbiol. Lett., 40(1), 21-25.

172. Magun B. E., Planck S. R., Wagner H. N. Intracellular processing of 125I-epidermal growth factor in rat embrio fibroblasts (1982). J. Cell. Biochem., 20, 259-276.

173. Mahajna J., Oppenheim A.B., Rattray A., Gottesman M. Translation initiation of bacteriophage-lambda gene cii requires integration host factor (1986). J. Bacteriol., 165(1), 167-174.

174. Maniatis T., Fritsch E.E., Sambrook J.//Molecular Cloning. A Laboratory Manual. CSHLab. 1982.

175. Markey K.A., Kondo S., Shenkman L., Goldstein M. Purification and characterization of tyrosine hydroxylase from a clonal pheochromacytoma cell line (1980). Mol. Pharmacol., 17, 79-85.

176. Marston F.A.O. The Purification of eukaryotic polypeptides synthesized in Escherichia Coli (1986). Biochem. J., 240(1), 1-12.

177. Marston F.A.O., Angal S., Lowe P.A., White S. Solubilization and activation of recombinant calf prochymosin from Escherichia Coli (1984). Biochem. Soc. Transactions, 13(6), 1035-1035.

178. Maruyama K., Takizawa T., Yuda T., Kennel S.J., Huang L. Targetability of novel immunoliposomes modified with amphipathic poly(ethyleneglycol)s conjugated at their distal terminals to monoclonal antibodies (1995). Biochim. Biophy. Acta., 1234, 74.

179. Maxam A.M., Gilbert W.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1977, 74(2): 560-564.

180. McCarthy J.E.G., Schairer H.U., Sebald W. Translational initiation frequency of atp genes from Escherichia coli: indentification of an intercistronic sequence that enhances translation (1985). EMBO J., 4(2), 519-526.

181. McCarthy J.E.G., Sebald W., Lammers R. Enhancement of translational efficiency by the Escherichia Coli Atpe translational initiation region its fusion with 2 human genes (1986). Gene, 41(2), 201-216.

182. McClelland M., Hanish J., Nelson M., Patel Y. Kgb a single buffer for all restriction endonucleases (1988). Nucl. Acids Res., 16(1), 364.

183. McGuinness T., Kelly P.T., Ouimet C.C., Greengard P. Studies of the subcellular and regional distribution of calmodulin-dependent protein kinase II in rat brain (1983). Soc. Neurosci. Abstr., 9, 1029-1033.

184. McGuinness T., Lai Y., Greengard P. Ca/calmodulin-dependent protein kinase II (1985). J. Biol. Chem., 260, 1696-1704.

185. McGuinness T.L., Lai J., Greengard P., Woodgett J.R. Cohen P. A multifunctional calmodulin-dependent protein kinase: similarities between skeletalmuscle glycogen syntase kinase and a brain Synapsin I kinase (1984). FEBS Lett., 163, 329-334.

186. Meijer D.K.F. and Molema G. Targeting of drugs to the liver (1995). Semin. Liver Dis., 15, 202.

187. Mesri E.A., Kreitman R.J., Fu Y., Epstein S.E. and Pastan I. Heparin-binding transforming growth factor a-pseudoinonas exotoxin A (1993). J. Biol. Chem., 268, 4853.

188. Mitoh N.//FEBS Lett. 1982, 137(2): 171-174.

189. Miyamoto E., Kakiuchi S. In vitro and in vivo phosphorilation of myelin basic protein by exogenous and endogenous cAMP-dependent protein kinases (1974). J. Biol. Chem., 249, 2769-2777.

190. Mizejewski G.J. a-Fetoprotein as a biologic response modifier: relevance to domain and subdomain structure (1997). J. Exp. Biol. Med., 14, 333-362.

191. Mizejewski G.J. Alpha-fetoprotein signal sequences: a proposed mechanism for subcellular localisation and organelle targeting (1995). J. theor. Biol., 176, 103-113.

192. Mizejewski G.J., Jacobson H.I. Alpha-fetoprotein is a dual regulator of growth in estrogen-responsive tissues (1985). CRS Press, Boca Raton, Florida, 1, 71-82.

193. Mora R., Tamaoki T., Wegmann T.G., Longenecker B.M., Laderoute M.P. Monoclonal antibodies directed against a widespread oncofetal antigen: the alpha-fetoprotein receptor (1993). Tumor Biol.,' 14, 116-130.

194. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxity assays. J. Immunol. Meth. 1983, 65, 5563.

195. Nagahari K., Kanaya S., Monakata K., Aoyagi Y., Mizushima S. Secretion into the culture medium of a foreign gene product from Escherichia coli: use of the omp F gene for secretion of human beta-endorphin (1985). EMBO J., 4, 35893592.

196. Nagai K., Perutz M.F., Poyart C. Oxygen binding properties of human mutant hemoglobins synthesized in Escherichia coli (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 7252-7255.

197. Nairn A.C., Bhagat B., Palfrey H.C. Identification of calmodulin-dependent protein kinase III and its major M 100,000 substrate in mammalian tissues (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 7939-7943.

198. Nairn A.C., Greengard P. Purification and characterization of brain Ca/calmodulin-dependent protein kinase I that phosphorylated synapsin I (1983). Soc. Neurosci. Abstr., 9, 1029-1034.

199. Nairn A.C., Greengard P. Purification and characterization of Ca/calmodulin-dependent protein kinase I from bovine brain (1987). J. Biol. Chem., 262, 72737281.

200. Nairn A.C., Palfrey H.C. Identification of the major M 100,000 substrate for calmodulin-dependent protein kinase III in mammalian cells as elongation factor 2 (1987). J. Biol. Chem., 262, 17299-17303.

201. Nestler E.J. Greengard P. Distribution of Protein I and regulation of its state of phosphorylation in the rabbit superior cervical ganglion (1982). J. Neurosci., 2, 1011-1023.

202. Niggli V., Adunyah E.S., Carafoli E. Acidic phospholipids, unsaturated fatty acids and limited proteolysis mimic the effect of calmodulin on the purified erytrocyte Ca-ATPase (1981). J. Biol. Chem., 256, 8588-8592.

203. Nilsson G. et al. TNF-a and IL-6 induce differentiation in the human basophilic leukemia cell line Ku 812 (1994). Immunology, 81(1), 73-78.

204. O'Farrell P.H., Gelfand D.H,. Shepard H.M., Polisky B. Isolation and characterization of ColEl-derived plasmid copy-number mutant (1978). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75(12), 5869-5873.

205. O'Garra A., Umland S. B-Cell Factors Are Pleiotropic (1988). Immunology Today, 9(2), 45-54.

206. Offensperger W., Wahl S., Neurath A.R., Price P., Strick N. Kent S.B.H., Christman J.K., Acs G. Expression in Escherichia coli of a cloned DNA sequence encoding the pre-S2 region of hepatitis B virus (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 7540-7544.

207. Ohgai H., Kumakura T., Komoto S., Matsuo Y., Ohshiden K., Koide T., Yanaihara C., Yanaihara N. Production of rat epidermal growth factor by Escherichia Coli cells containing a secretion plasmid (1989). J. Biotechnol., 10(2), 151-160.

208. Oka T., Sakamoto S., Miyoshi K.-I., Fuwa T., Yoda K., Yamasaki M., Tamura G., Miyake T. Synthesis and secretion of human epidermal growth factor by Escherichia coli (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 7212-7216.

209. Okabe M. et al. Inhibitory effect of IL-4 on the in vitro growth of Ph+-positive acute lymphoblastic leukemia cells (1991). Blood, 78(6), 1574-1580.

210. Okabe T., Sobue E. Identification of a new 84/82 KDa calmodulin-binding protein, which also interact with actin filaments, tubulin and spectrin, as synapsin I (1987). FEBS Lett., 213(1), 184-188.

211. Okuno S., Fujisawa H. Purification and some properties of tyrosine 3-monooxygenase from rat adrenal medulla (1982). Eur. J. Biochem., 122, 49-50.

212. Olins P.O., Devine C.S., Rangavala S.H. A translational enhancer sequence -application for high-level expression of foreign genes in Escherichia Coli (1988). Abstr. of Am. Chem. Soc., 196, 61.

213. Olins P.O., Rangwala S.H. A novel sequence element derived from bacteriophage-T7 messenger-RNA acts as an enhancer of translation of the Lacz gene in Escherichia Coli (1989). J. Biol. Chem., 264(29), 16973-16976.

214. Ostrow K.S., Silhavy T.J., Garrett S. Cis-acting sites required for osmoregulation of Ompf expression in Escherichia Coli K-12 (1986). J. Bacteriol., 168(3), 1165-1171.

215. Ouime T.C.C., McGuinness T.L., Greengard P. Immunocytochemical localization of calcium/calmodulin-dependent protein kinase II in rat brain (1984). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 5604-5608.

216. Palfrey H.C., Rothlein J.E. Greengard P. Calmodulin-dependent protein kinase and associated substrate in Torpedo electric organ (1983). J. Biol. Chem., 258, 9496-9503.

217. Pardridge W.M. Receptor-mediated transcytosis ofpeptides through the blood-brain barrier, in Peptide Drug Delivery to the Brain, Pardridge, W.M., Ed., Raven Press, New. York, 1991, 160.

218. Payne M.E., Fong Y.-L., Ono T., Colbran R.J., Kemp B.E., Soderling T.R., Means A.R. Calcium/calmodulin-dependent protein kinase II. Characterization ofdistinct calmodulin binding and ingibitory domains (1988). J. Biol. Chem., 263, 7190-7196.

219. Payne M.E., Soderling T.R. Calmodulin-dependent glycogen syntase kinase (1980). J. Biol. Chem., 255, 8054-8056.

220. Pechel C. et al. Effects of B-cell stimulatory factor-1 / interleukin-4 (1987). Blood, 70(1), 254-263.

221. Perales J.C., Ferkol T., Beegen H., Ratnoff O. D., and Hanson R.W. Gene transfer in vivo: Sustained expression and regulation of genes introduced into the liver by receptor-targeted uptake (1994). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 4086.

222. Perales J.C., Ferkol T., Molas M., and Hanson R.W. An evaluation ofreceptor-mediated gene transfer using synthetic DNA-ligand complexes (1994). Eur. J. Biochem., 226, 255.

223. Pires E., Perry S.V. Purification and properties of myosin light chain kinase from fast skeletal muscle (1977). Biochem. J., 167, 137-146.

224. Pitcher J., SaunderK. //Lett. Appl. Microbiol. 1989, 8(4): 151-156.

225. Potter J.D., Gergely J. The calcium and magnesium binding sites on troponin and their role in the regulation of myofibrillar adenosine triphosphatase (1975). J. Biol. Chem., 250, 4628-4633.

226. Prigent S. A., Lemoine N. R. The type 1 (EGFR-related) family of growth factor receptors and there ligands (1992). Progress Growth Factor Res., 4, 1-24.

227. Rasmussen M. Cell communication, calcium ion and cyclic adenosine monophosphate (1970). Science, 170, 404-412.

228. Rasmussen M., Goodman D.B.P. Relationship between calcium and cyclic nucleotides in cell activation (1977). Physiol. Rev., 57, 421-509.

229. Roberts R.J. Restriction and modification enzymes and their recognition sequences (1978). Gene, 4(3), 183-194.

230. Runge M.S., Hewgley P.B., Puett D., Williams R.C. (jr). Cyclic nucleotide phosphodiesterase activity in 10-nm filaments and microtubule preparations from bovine brain (1979). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 2561-2565.

231. Ryasanov A.G., Natapov P.G., Shestakova E.A., Severin F.F., Spirin A.S. Phosphorylation of the elongation factor 2: the fifth Ca/calmodulin-dependent system of protein phosphorylation (1988). Biochimie, 70, 619-626.

232. Saitoh T., Schwartz J.H. Phosphorylation-dependent subcellular translocation of a Ca/calmodulin-dependent protein kinase produced a autonomous enzyme in Aplisia neurons (1985). J. Cell Biol., 100, 835-842.

233. Salzman P.M., Roth R.H. Noradrenergic neurons: post-stimulation increase in catecholamine biosynthesis (1978). In: Neuro-psycho-pharmacology, Deniker P., Radouco-Thomas C., Villeneuve A., eds., Pergamont, N. Y., 2, 1439-1455.

234. Sanyal G., Marquis-Omer D., Gress J.O., Middaugh C.R. A transforming growth factor-a-Pseudomonas exotoxin hybrid protein undergoes pH-dependent conformational changes conducive to membrane interaction (1993). Biochemistry, 32, 3488.

235. Sasagawa T., Ericsson L.M., Walsh K.A., Schreiber W.E., Fisher E.H., Titani R. Complete amino acid sequence of human brain calmodulin (1982). Biochemistry, 21(10), 2565-2569.

236. Sassenfeld H.M., Brewer S.J. (1984). BIO/TECHNOL, 2, 76.

237. Sato N., Hayami T., Murata K., Watanabe K., Kariya Y., Sakaguchi M., Kimura S., Nonaka M., Kimura A. Expression of tuna growth-hormone cDNA in Escherichia Coli (1989). Appl. Microbiol. Biotechnol., 30(2), 153-159.

238. Savage C.R., Cohen J. Epidermal growth factor and a new derivative: rapid isolation procedures and biological and chemical characterisation. J. Biol. Chem. 1972, 247, 7609-7611.

239. Savage Jr C.R., Hash G.H., Cohen S. Epidermal growth factor, location of disulfide bonds (1973). J. Biol. Chem., 248, 7669-7672.

240. Savage Jr C.R., Inagami T., Cohen S. The primary structure of epidermal growth factor (1972). J. Biol. Chem., 247, 7612-7621.

241. Schoner B.E., Belagale R.M., Schoner R.G. Translation of a synthetic 2-cistron messenger RNA in Escherichia Coli (1986). Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 83(22), 8506-8510.

242. Schoner R.G., Ellis L.F., Schoner B.E. (1985). BIO/TECHNOL, 3, 151.

243. Schulman H. Calcium-dependent protein phosphorylation (1984). J. Cell Biol., 99, 11-19.

244. Schulman H., Greengard P. Ca -dependent protein phosphorylation system in membranes from various tissues and its activation by calcium-dependent regulator (1978). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 75, 5432-5436.

245. Schulman H., Greengard P. Stimulation of brain membrane protein phosphorylation by calcium and endogenous heat-stable protein // Nature.-1978.-V.271.-P.478-479.

246. Seymour L.W., Ulbrich K., Wedge S.R., Hume I.C., Strohalm J., and Duncan R. N-(2-hydroxypropyl) methacrylamide copolymers targetted to the hepatocyte galactose receptor: pharmacoldnetics in DBA2 mice (1991). Br. J. Cancer, 63, 859.

247. Shapiro J.T., Leng M., and Felsenfeld G. Deoxyribonucleic acid-polylysine complexes. Structure and nucleotide specificity (1969). Biochemistry, 8, 3219.

248. Sharma S.K. Recovery of soluble human renin from inclusion-bodies produced in recombinant Escherichia Coli (1986). J. Biotechnol., 4(2), 119-124.

249. Shaw G. Specific postsynaptic density proteins bind tubulin and calmodulin-dependent protein kinase type II (1984). Nature, 30, 496-497.

250. Shen S.-H. Multiple joined genes prevent product degradation in Escherichia coli (1984). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 81, 4627-4631.

251. Shenolikar S., Lickteig R., Hardie D.G., Soderling T.R., Hanley R.M., Kelly P.T. Calmodulin-dependent multifunctional protein kinase (1986). Eur. J. Biochem., 161, 739-747.

252. Shields S.M., Vernon P.J., Kelly P.T. Autophosphorylation of calmodulin-dependent kinase II in synaptic junctions modulates endogenous kinase activity (1984). J. Neurochem., 43, 1599-1609.

253. Shimizu A. and Kawashima S. Kinetic study ofmternalization and degradation of 131I-labeled follicle-stimulating hormone in mouse Sertoli cells and its relevance to other systems (1989). J. Biol. Chem., 264, 13632.

254. Shine J., Fettes I., Lan N.C. Y., Roberts J.L., Baxter J.D. Expression of cloned beta-endorphin gene sequences by Escherichia coli (1980). Nature, 285, 456-463.

255. Shoji S., Ohnishi J., Funakoshi T., Fukunaga K., Miyamoto E., Ueki H., Kubota Y. Phosphorylation sites of bovine brain myelin basic protein phosphorilated with Ca/calmodulin-dependent kinase from rat brain (1987). J. Biochem., 102, 1113-1120.

256. Slaughter G.R., Means A.R. Quantitation and significance of 1251-calmodulin binding to myosin light chain kinase and phosphorylase distributed on polyacrylamide gels (1985). BBRC, 126, 295-303.

257. Sloboda R.D., Rudolph S.A., Rosenbaum J.L. Greengard P. Cyclic AMP-dependeht endogenous phosphorylation of a microtubule-associated protein (1975). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 72, 177-18L

258. Smoake J.A., Song S.-Y, Cheung W.Y. Cyclic 3', 5'-nucleotide phosphodiesterase: distribution and developmental changes of the enzyme and its protein activator in mammalian tissues and cells (1974). Biochim. Biophys. Acta., 341(2), 402-411.

259. Soderling T.R., Payne M.E. Rabbit liver calmodulin-dependent glycogen synthase kinase (1987). Cold Spring Harbor Conf. Cell Prolif., 8, 413-423.

260. Soderling T.R., Schworer C.M., El-Maghrabi M.R. Pilkis S.J. Phosphorylation of liver pyruvate kinase by Ca/calmodulln-dependent protein kinase: characterization of two phosphorylation sites (1986). Biochem. Biophys.

261. Res. Coramun, 139(3), 1017-1023.

262. Sofer G. (1984). BIO/TECHNOL, 2, 1035.

263. Stormo G.D., Gold L., Schneider T.D. Quantitative analysis of the relationship between nucleotide-sequence and functional activity (1986). Nucl. Acids Res., 14(16), 6661-6679.

264. Strom T.W., Anderson P.L., Rubin-Kelley V.E., Williams D.P., Kiyokawa T., Murphy J.R. Immunotoxins and cytokine toxin fusion proteins (1991). Ann. NY Acad. Sci., 636, 233.

265. Suissa M., Altuvia S., Koby S., Giladi H., Oppenheim A.B. Translational signals of a major head protein gene of bacteriophage-lambda (1988). Mol. Gen. Genet., 214(3), 570-573.

266. Sutherland E.V., Rail T.W., Menon T. Adenylatecyclase. 1. Distribution, preparation and properties (1962). J. Biol. Chem., 237, 1220-1227.

267. Suzuki Yuji, Zeng Q.Y., Alpert E. Isolation and partial characterization of a specific alpha-fetoprotein receptor on human monocytes (1992). J. Clin. Invest., 90, 1530-1536.

268. Szoka P.R., Schreiber A.B., Chan H., Murthy J. A General method for retrieving the components of a genetically engineered fusion protein (1986). DNA, 5(1), 11-20.

269. Taft W.C., Tennes-Rees K.A., Blair R.E., Clifton G.L., De Lorenzo R.J. Cerebral ischemia decreases endogenous calcium-dependent protein phosphorylation in gerbil brain (1988). Brain Research, 447, 159-163.

270. Taira T., Kii R., Sakai E., Tabuchi H., Takimoto S., Nakamura S., Takahashi J., Hashimoto E., Yamamura H., Nishizuka Y. Comparison of glycogen phosphorylase kinases of various rat tissues (1962). J. Biochem., 91, 883-888.

271. Talmadge K., Gilbert W. Cellular location affects protein stability in Escherichia coli (1982). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79(6), 1830-1833.

272. Tanaka T., Hidaka H. Hydrophobic regions function in calmodulin-enzyme(s) interaction (1980). J. Biol. Chem., 255, 11078-11080.

273. Tatarinov Yu.S. Human alpha-fetoprotein 30 years from basic resrarch to clinical applications. Russian State Medical Univ., Moscow, 1995.

274. Taylor G., Hoare M., Gray D.R., Marston F.A.O. Size and density of protein inclusion-bodies (1986). BIO/TECHNOL, 4(6), 553-557.

275. Teo T.S., Wang T.H., Wang J.H. Purification and properties of the protein activator of bovine heart cyclic adenosine 3', 5'-monophosphate phosphodiesterase (1973). J. Biol. Chem., 248, 588-595.

276. Teshima Y., Kakiuchi S. Mechanism of stimulation of Ca plus Mg dependent phosphodiesterase from rat cerebral cortex by the modulator protein and Ca (1974). Biochem. Biophys. Res. Commun., 56, 489-495.

277. Teshima Y., Kakiuchi S. Membrane-bound forms of Ca-dependent and independent binding of modulator protein to the barticulate fraction from brain (1978). J. Cyclic Nucleotide Res., 4, 219-231.

278. Torchilin V.P., Klibanov A.L., Huang L. O'Donnell S., Nossiff N.D., and Khaw B.A. Targeted accumulation ofpolyethylene glycol-coated immunoliposomes in infarcted rabbit myocardium (1992). FASEB J., 6, 2716.

279. Torres J.M., Geuskens M., Uriel J. Receptor-mediated endocytosis and recycling of alpha-fetoprotein in human B-lymphoma and T-leukemia cells (1991). Int. J. Cancer, 47, 110-117.

280. Torres J.M., Naval J., Laborda M. Expression of alpha-fetoprotein receptors by human T-lymphocytes during blastic transformation (1989). Mol. Immunol., 26, 851-857.

281. Tsou K., Greengard P. Regulation of phosphorylation of proteins I, Ilia and Illb in rat neurohypophysis in vivo by electrical stimulation and by neuroactive agents (1982). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 6075-6079.

282. Ueda T., Greengard P. Adenosine 3', 5'-monophosphate-regulated phosphoprotein system of neuronal membranes. Solubilization, purification and some properties of an endogenous phosphoprotein (1977). J. Biol. Chem., 252, 5155-5163.

283. Uhlen M., Nilsson B., Abrahmsen L., Moks T. Secretion of heterologous gene-products to the culture- medium of Escherichia Coli (1986). Nucl. Acids Res., 14(18), 7487-7500.

284. Uriel J., Villacampa M.J., Moro R., Naval J., Failly-Crepin Ch. Uptake of radiolabeled alpha-fetoprotein by mouse mammary carcinoma's and its usefulness in tumor scintigraphy (1984). Cancer Res., 44, 5314-5319.

285. Van Eldik. L.J., Watterson D.M. Characterization of a calcium-modulated protein from transformed chicken fibroblasts (1979). J. Biol. Chem., 254, 1025010255.

286. Varsanyi M., Heilmeyer L.M.G. (jr.). The protein kinase properties of calsequestrin (1979). FEBS Lett., 103, 85-88.

287. Varsanyi M., Heilmeyer L.M.G. Autocatalytic phosphorylation of calsequestrin (1980). FEBS Lett, 122, 227-230.

288. Villacampa M.J, Lapreave F, Calvo M., Naval J., Pineiro A, Uriel J. Incorporation of radiolabeled AFP in the brain and other tissues of the developing rat (1984). Dev. Brain Res, 12, 77-82.

289. Vulliet P.R., Langan T.A., Weiner N. Tyrosine hydroxylase: a substrate of cyclic AMP-dependent protein kinase (1980). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 77, 9296.

290. Wagner F.W., Burger A.R., Vallee B.L. Kinetic properties of human liver alcohol dehydrogenase: oxidation of alcohol by class I isoenzymes (1983). Biochemistry, 22, 1857-1863.

291. Wang J.H., Stull J.T., Huang T.-S., Krebs E.G. A study of the autoactivation of rabbit muscle Phosphorylase kinase (1976). J. Biol. Chem., 251, 4521-4527.

292. Watterson D.M., Harrelson W.G., Keller P.M., Sharief F., Vanaman T.C. Structural similarities between the Ca-dependent regulatory properties of 3', 5'-cyclic nucleotide phosphodiesterase and actomyosin ATPase (1976). J. Biol. Chem., 251, 4501-4513.

293. Watterson D.M., Sharief F., Vanaman T.C. The complete amino acid sequence of the Ca-dependent modulator protein (calmodulin) of bovine brain (1980). J. Biol. Chem., 255, 962-975.

294. Weir M.P., Sparks J. Purification and renaturation of recombinant human interleukin-2 (1987). Biochem. J., 245(1), 85-91.

295. Welsh M.J., Dedman J.R., Brinkley B.R. Means A.R. Calcium-dependent regulatory protein: localization in mitotic apparatus of eukariotic cells (1978). Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 75, 1867-1871.

296. Wetzel R, Goeddel D.V. (1983). In: Peptides, Gross E. and Meienhofer J. (eds.), Academic Press Inc., New York, Vol. 5, p. 1.

297. Wieslander L. A simple method to recover intact high molecular weight RNA and DNA after electrophoretic separation in low gelling temperature agarose gels (1979). Anal. Biochem., 98(2), 305-309.

298. Willingham M. C., Haigier H. T., Fitzgerald D. J., Gallo M. G., Rutherford A. V., Pastan I. H. The morphologic pathway of binding and internalization of epidermal growth factor in cultured cells// Exp. Cell Res. 1983. Vol.146. P.163-175.

299. Winkler M.E., Blaber M, Bennett G.L., Holmes W., Vehar G.A. (1985). BIO/TECHNOL, 3, 990.

300. Wise B.C., Guidotti A., Costa E. Phosphorilation induced a decrease in the biological activity of the protein inhibitor (GABA-modulin) of aminobutiric acid binding sites (1983). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 886-890.

301. Witer-Giannott J.A.S., Leary A.C., Kriz R., Donahue R.E., Wong G.G., Clark S.C. Human IL-3 (multi-CSF) identification by expression cloning of a novel hematopoietic growth factor related to murine IL-3 (1986). Cell, 47(1), 3-10.

302. Witholt B., Kingma J., de Leij L. Nature of the regions involved in the insertion of newly synthesized protein into the outer membrane of Escherichia coli (1976). Biochim. Biophys. Acta., 553(2), 224-34

303. Wolf D.J, Siegal F.L. Purification of calcium-binding phosphoprotein from pig brain (1972). J. Biol. Chem., 247(13), 4180-4185.

304. Wolf H., Hofman P. Purification of myosin light chain kinase from bovine cardiac muscle (1980). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77, 5852-5855.

305. Wolff D.J., Poirier P.G, Brostrom C.O., Brostrom M.A. Divalent cation binding properties of bovine brain Ca-dependent regulator protein (1980). J. Biol. Chem., 252, 4108-4112.

306. Wood J.G. Wallace R.W., Cheung W.Y. Immunocytochemical studies of calmodulin and CaM-BP in brain (1980). In: "Calcium and cell function", Cheung W.Y. ed., Acad. Press, N.Y., p.291-303.

307. Woodgett J.R., Davison M.T., Cohen P. The calmodulin-dependent glycogen synthase kinase from rabbit skeletal muscle. Purification and substrate specificity (1983). Eur. J. Biochem., 136, 481-487.

308. Wu C.H, Wilson J.M., and Wu G.Y. Targeting genes: Delivery and persistent expression of a foreign gene driven by mammalian regulatory elements in vivo (1989). J. Biol. Chem, 264, 16985.

309. Wu G.Y. and Wu C.H. Liver-directed gene delivery (1993). Adv. Drug Delivery Rev, 12, 159.

310. Wu G.Y. and Wu C.H. Receptor-mediated gene delivery and expression in vivo (1988). J Biol. Chem, 263, 14621.

311. Yagi K, Matsuda S, Nagamoto H, Mikuni T, Yazawa M. Structure and Cadependent conformational change of calmodulin. In: "Calmodulin and intracellular Ca receptors", Kakiuchi S., HidakaH., Means A.R., eds., Phenum., N.Y., p.75-92.

312. Yagi K., Yasawa M., Kakiuchi S., Oshima M., Uenishi K. Identification of an activator protein for myosin light chain kinase as the Ca-dependent modulator protein (1978). J. Biol. Chem., 253, 1338-1340.

313. Yamamoto Т., Kamata N., Kawano H. et al. High incidence of amplification of gene in human sqaumous carcinoma cell lines (1986). Cancer Res., 46, 414416.

314. Yamauchi Т., Fujisawa H. Disassembly of microtubules by action of calmodulin-dependent protein kinase (kinase II) which occur only in brain tissues (1983). Biochem. Biophys. Res. Commun., 110, 287-291.

315. Yamauchi Т., Fujisawa H. Phosphorylation of microtubule-associated protein 2 by calmodulin-dependent protein kinase II which occurs only in the brain tissues (1982). Biochem. Biophys. Res. Comm., 109, 975-981.

316. Yamauchi Т., Fujisawa H. Purification and characterization of the brain calmodulin-dependent protein kinase (kinase II) which is involved in the activation of tryptophan-5-mono-oxygenase (1983). Eur. J. Biochem., 132, 15-21.

317. Yarranton G.T., Wright E.M., Robinson M.K., Humphreus G.O. Dual-origin plasmid vectors whose origin of replication is controlled by the coliphage lambda promoter (1984). Gene, 28, 1293-1300.

318. Yoshikawa T. and Pardridge W.M. Biotin delivery to brain with a covalent conjugate of avidin and a monoclonal antibody to the transferrin receptor (1992). J. Pharmacol. Exp. Ther., 263, 897.

319. Zemel-Dreasen O., Zamir A. Secretion and processing of an immunoglobulin light chain in Escherichia coli (1984). Gene, 27, 315-322.

320. Богуш T.A., Шубина И.Ж., Смирнова Г.Б., Сыркин А.Б., Богуш Е.А. Прижизненная количественная оценка внутриклеточного распределения доксорубицина в опухолевых клетках. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1995. №11. с. 518-521.

321. Гуревич А.И., Некрасова О.В. Новые плазмидные векторы для клонирования и экспрессии генов (1988). Биоорган, химия, 14(2), 149-152.

322. Гуревич А.И., Скапцова Н.В., Луценко С.В., Смирнов В.А., Куркин А.Н., Ажаев А.В. Химико-ферментативный синтез усилителя трансляции гена 10фага Т7 и функция элементов его структуры (1991). Биоорган, химия, 17(5), 647-652.

323. Клаус Д. Лимфоциты и методы. М., 1990, 292-293.

324. Ковальчук Л.В. и др. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция (1995). Иммунол., 1, 4-7.

325. Краев A.C. Простая система клонирования в фаге М13 и секвенирование ДНК с терминатора (1988). Мол. биол., 22(5), 1164-1197.

326. Кулагина М.А., Скапцова Н.В., Батчикова Н.В., Куркин А.Н., Ажаев A.B. Н-фосфонатный метод в синтезе структурного гена интерлейкина-4 человека1990). Биоорган, химия, 16(5), 625-634.

327. Луценко C.B., Гуревич А.И., Каневский В.Ю., Смирнов В.А., Назимов И.В., Ажикина Е.Л., Чернов И.П., Ростапшов В.М., Сонина Н.В, Ажаев A.B. Выделение рекомбинантного интерлейкина-3, продуцируемого Е. coli1991). Биоорган, химия, 17(12), 1649-1654.

328. Никольский H. Н., Соркин А. Д., Сорокин А. Б. Эпидермальный фактор роста. 1987, Л.: Наука, 200 с.

329. Потапнев М.П. B-лимфоциты. Цитокинообразующая функция (1994). Иммунол., 4, 4-7.

330. Северин С.Е. (мл.), Швец В.И., Балденков Г.Н., Ткачук В.А. Влияние жирных кислот на регуляцию кальмодулином аленилатциклазы стриарной системы мозга (1983). Биохимия, 48(11), 1906-1913.

331. Скапцова Н.В., Куркин А.Н., Ажаев A.B. Н-фосфонатный синтез олигодезоксирибонуклеотидов с использованием п-нитрофенилэтильной защитной группы (1989). Биоорган, химия, 15(7), 940-946.

332. Чувпило С.А., Кравченко В.В. Твердофазный метод определения нуклеотидной последовательности ДНК (1983). Биоорган, химия, 9(12), 301304.247