Исследование цитотоксической активности и механизмов действия производных бетулина и глицирризиновой кислоты в опухолевых клетках в культуре тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Шинтяпина, Александра Борисовна

• Шинтяпина, Александра Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шинтяпина, Александра Борисовна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клеточные культуры как модель экспериментальной онкологии

1.2. Разработка адресованных противоопухолевых препаратов.

1.2.1. Создание новых противоопухолевых препаратов, влияющих на передачу митогенных сигналов.

1.2.2. Молекулярные мишени для антиангиогенной терапии.

1.2.3. Теломераза - потенциальная мишень противоопухолевой терапии.

1.2.4. Противоопухолевые препараты - индукторы апоптоза

1.3. Тритерпеновые соединения.

1.3.1. Глицирризиновая кислота.

Противоопухолевая активность.

1.3.2. Бетулин, бетулиновая кислота.

Противоопухолевая активность.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Реактивы, используемые в работе.

2.1.2. Исследуемые соединения.

2.1.3. Клеточные линии.

2.1.4. Олигодезоксирибонуклеотиды.

2.1.5. Буферные растворы.

2.2. Методы.

2.2.1. Исследование цитотоксической активности соединений в . опухолевых клетках в культуре (МТТ-тест).

2.2.2. Анализ апоптоза методом проточной цитометрии.

2.2.3. Выделение суммарной клеточной РНК.

2.2.4. Определение концентрации РНК в образце.

2.2.5. Реакция обратной транскрипции.

2.2.6. Полимеразная цепная реакция.

2.2.7. Анализ продуктов ПЦР.

2.2.8. Флуоресцентная гибридизация in situ с последующим анализом на проточном цитометре (flow-FISH).

2.2.9. Статистическая обработка данных.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Исследование цитотоксической активности производных высших тритерпенов in vitro.

3.1.1. Исследование цитотоксической активности производных бетулина in vitro.

3.1.2. Исследование цитотоксической активности производных глицирризиновой кислоты in vitro.

3.2. Исследование способности тритерпенов вызывать апоптоз в опухолевых клетках in vitro.

3.3. Изучение молекулярных механизмов противоопухолевого действия производных тритерпеновых соединений.

3.3.1. Исследование влияния производных тритерпенов на экспрессию гена Bcl-2 в опухолевых клетках.

3.3.2. Исследование влияния производных тритерпенов на экспрессию гена Cyclin D1 в опухолевых клетках.

3.3.3. Исследование влияния производных тритерпенов на экспрессию гена hTERT в опухолевых клетках.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование цитотоксической активности и механизмов действия производных бетулина и глицирризиновой кислоты в опухолевых клетках в культуре»

Рост онкологической заболеваемости в XX веке происходил такими быстрыми темпами, что это дало основание для его сравнения с эпидемией. Ежегодно во всём мире от злокачественных опухолей умирает около 7 млн человек. По данным Всемирной организации здравоохранения в 2006 году в мире от рака умерло свыше 7 млн человек и диагностировано 10 млн новых случаев онкологических заболеваний. В большинстве развитых стран они занимают второе место среди причин смерти. По оценкам Всемирной организации здравоохранения онкологические заболевания к 2020 году выйдут на первое место в мире по смертности в структуре всех заболеваний, обогнав при этом «традиционного лидера» — сердечно-сосудистые заболевания. К 2030 году число новых диагнозов может возрасти до 27 млн, а число живущих с раком пациентов достигнет 75 млн.

Таким образом, поиск и создание эффективных лекарственных противоопухолевых препаратов является актуальной задачей в современной науке.

Национальный институт рака (National Cancer Institute) осуществляет программу по разработке противоопухолевых препаратов. В рамках этой программы ежегодно проводится тестирование in vitro более 10000 соединений как природного, так и синтетического происхождения. NCI Drug Information System располагает информацией о 400000 соединениях, протестированных на сегодняшний день. Важное место в таких исследованиях занимает поиск возможных молекулярных мишеней или модуляторов для этих лекарств. Число таких мишеней составляет уже более 100, и их число постоянно растет (Dai Z. et al., 2007).

Особенный интерес вызывают те соединения, о противоопухолевой активности которых уже есть данные. Давно известно, что глицирризиновая кислота (ГК), глицирризин, активные компоненты корня солодки (Glycyrrhiza sps.) обладают антиканцерогенным и антимутагенным действием (Tanaka М. and Mano N., 1987). Позднее было показано, что глицирризин, глицирризиновая кислота и некоторые ее производные способны избирательно ингибировать рост опухолевых клеток в культуре (Rossi Т. et al., 2003).

Бетулиновая кислота (БК) - растительный пентациклический тритерпеноид, выделенный из коры березы (Кислицын А. Н., 1994), обладает избирательным цитотоксическим действием в отношении различных опухолевых клеток, противовирусными свойствами, такими как анти-ВИЧ активность, противомалярийным, антибактериальным, а также системным противовоспалительным действием (Kashiwada Y. et al., 1996). Противоопухолевая активность была показана на клеточной линии меланомы (Liu W. et al., 2004), а таюке на модели in vivo, на бестимусных мышах, несущих человеческую меланому (Pisha Е. et al., 1995). Противоопухолевое действие БК и некоторых ее аналогов связывают с избирательной индукцией апоптоза в опухолевых клетках (Eiznhamer D. et al., 2004). В 2000 году БК была включена в программу RAID (Rapid Access to Intervention Development) Национального института рака, как потенциальный противоопухолевый агент (http://dtp.nci.nih.gov/docs/smallmol/statussmallmol.html). В настоящее время препарат на основе бетулиновой кислоты проходит клинические исследования в США в качестве средства для лечения злокачественной меланомы (http://clinicaltrials.gov/show/NCT00346502).

Данные последних исследований свидетельствуют о том, что БК, ГК и другие природные тритерпены ингибируют пролиферацию опухолевых клеток, индуцируют их апоптоз (Urech К. et al., 2005; Essaady D. et al., 1996; Rossi T. et al., 2003), либо усиливают его индукцию при действии лучевой или химиотерапии (Sawada N. et al., 2004; Wick W. et al., 1999; Fulda S. et al.,

1997), подавляют процессы ангиогенеза и метастазирования (Melzig М. et al.,

1998). Однако, несмотря на значительное количество данных о противоопухолевой активности растительных тритерпенов, на настоящий момент не до конца понятны механизмы их действия в клетке. Показано, что основной противоопухолевый механизм действия тритерпенов связан с индукцией апоптоза в опухолевых клетках, запуск которого под действием ГК, БК в раковых клетках осуществляется независимо от «рецепторов смерти» (CD-95/Fas) и белка р53. С другой стороны, из литературных данных известно, что при действии бетулиновой кислоты на опухолевые клетки происходит активация каспазы 9, но не каспазы 8, что может говорить о Bcl-2-зависимом пути индукции апоптоза (Fulda S. et al., 1997; 1999; Zuco V. et al., 2002).

Изложенное выше определило цель настоящей работы: изучение противоопухолевой активности производных тритерпенов in vitro и исследование возможных молекулярных механизмов их противоопухолевого действия в опухолевых клетках человека in vitro.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1) Исследовать цитотоксическую активность высших терпеноидов амиранового и лупанового рядов (глицирризиновой кислоты, глицирретовой кислоты, бетулина, бетулиновой кислоты и их производных) в культурах опухолевых клеток, выявить наиболее активные.

2) Изучить с помощью метода проточной цитометрии способность наиболее активных производных тритерпеновых соединений индуцировать апоптоз в опухолевых клетках человека (линии МТ-4, MOLT-4, СЕМ, Hep G2, HeLa).

3) Исследовать влияние наиболее активных производных тритерпенов на экспрессию гена апоптоза Bcl-2 и клеточного цикла Cyclin D1 в опухолевых клетках человека в культуре.

4) Исследовать с помощью метода флуоресцентной гибридизации in situ с последующим анализом на проточном цитометре возможное влияние производных наиболее активных тритерпенов на экспрессию гена каталитической единицы теломеразы (hTERT) в опухолевых клетках in vitro.

Апробация работы и публикации. Результаты исследования были представлены на 10-ой международной школе-конференции для молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006), на 14-й, 15-ой, 16-ой международных конференциях «СПИД, рак и общественное здоровье» (Санкт-Петербург, 2005, 2006, 2007), на 8-ом международном симпозиуме «Biology of Disease - A Molecular Battlefield» (Гейдельберг, Германия, 2006), на 10-ом международном симпозиуме европейского общества медицинской химии (EFMC) и американского химического общества (ACS) «International Symposium on Advances in Synthetic and Medicinal Chemistry ASMC 07» (Санкт-Петербург, 2007). По результатам работы опубликовано 8 печатных работ, из них 2 статьи и 6 тезисов докладов.

Личный вклад автора. Все эксперименты были выполнены и проанализированы автором, часть измерений на проточном цитометре была проведена сотрудниками Института клинической иммунологии СО РАМН Борисовым В. И. и Пронкиной Н. В.

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые проведено тестирование на противоопухолевую активность 25 соединений тритерпенового ряда на 5 опухолевых клеточных линиях человека. Определены

50% ингибирующие дозы для этих клеток (ИД50). Выявлены наиболее активные. С помощью метода проточной цитометрии получены новые данные, характеризующие способность природных тритерпенов лупанового ряда и их производных индуцировать апоптоз в опухолевых клетках in vitro. Исследованы молекулярные механизмы действия тритерпенов лупанового ряда в клетке. Впервые показано, что механизм действия производных бетулиновой кислоты связан со снижением экспрессии гена апоптоза Bcl-2, клеточного цикла Cyclin D1, каталитической субъединицы теломеразы hTERT.

Оригинальный фактический материал, полученный в процессе экспериментальных исследований, представляет собой ценную информацию для дальнейшего изучения противоопухолевого действия тритерпенов с целью направленного создания производных с повышенной специфичностью воздействия на молекулярные мишени опухолевых клеток. Приведенные исследования также являются стимулом для дальнейшего доклинического исследования производных бетулиновой кислоты в системах in vivo их противоопухолевой активности и создания на их основе перспективных препаратов со специфической противоопухолевой активностью.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Шинтяпина, Александра Борисовна

выводы

Впервые исследована цитотоксическая активность азотсодержащих производных тритерпеновых кислот - глицирретовой и бетулоновой, а также ацетооксипроизводных бетулина in vitro. Определены 50% ингибирующие дозы (ИД50) на опухолевых клетках человека МТ-4, MOLT-4, СЕМ, Hep G2, HeLa (5,5 - 440 мкМ). Показано, что химические трансформации бетулина, бетулиновой, глицирретовой кислоты в С-28 положении увеличивают их способность в 2-10 раз ингибировать рост опухолевых клеток в культуре. Обнаружено апоптозиндуцирующее действие производных бетулина в опухолевых клетках в культуре. Показано, что азотсодержащие производные бетулиновой кислоты, замещенные в 17-положении тритерпенового остова, являются в 2-5 раза более активными индукторами апоптоза в лейкозных клетках МТ-4, MOLT-4, СЕМ, в 1,5 раза в клетках гепатокарциномы Hep G2 и 1,5-2,5 раза в клетках аденокарциномы шейки матки HeLa, чем бетулиновая кислота (р<0,05).

Установлено, что под действием тритерпеновых соединений лупанового ряда (бетулиновой кислоты, бетулоновой кислоты, амидов бетулоновой кислоты, содержащих 7, 8, 10 метиленовых остатков и СОО" концевую группу, и ее дипептида) происходит снижение содержания мРНК гена Bcl-2 в клетках MOLT-4 и СЕМ в 1,6-2,3 раза (р<0,05).

Показано снижение содержания мРНК Cyclin D1 в клетках MOLT-4 и СЕМ в 1,6-2,1 раза (р<0,05) под действием амидов бетулоновой кислоты, содержащих 7, 8, 10 метиленовых остатков и СОО" концевую группу, и ее дипептида.

5. Впервые с помощью flow-FISH анализа установлено, что одним из механизмов противоопухолевого действия производных бетулоновой кислоты, модифицированных по 17-положению тритерпенового остова группой, содержащей 8 и 10 метиленовых остатков и СОО" концевую группу, и дипептида, является ингибирование экспрессии гена hTERT на 23,5, 33 и 55% соответственно (р< 0,05).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы возрастает интерес к изучению противоопухолевой активности растительных тритерпеноидов. Согласно (Setzer W. N. et al., 2003), в этом ряду выявлено более 100 соединений перспективных в качестве антинеопластических агентов. Ранее было показано цитотоксическое действие тритерпенов на опухолевые клетки (Fulda S. et al., 1997; Fulda S. et al., 1999). С тех пор это свойство тритерпенов изучалось по разным направлениям: в отношении различных линий опухолевых клеток, в отношении способности индуцировать апоптоз в опухолевых клетках, что особенно важно, в отношении клеточных механизмов реализации цитотоксичности (Braca A. et al., 2004; Einbond L. et al., 2007).

Объектами тритерпенового ряда, привлекающими последнее время особое внимание, являются гликозид солодки - глицирризиновая кислота (ГК) и метаболит березы - бетулиновая кислота (Толстиков Г. А. и др.,

2002), проявляющие противоопухолевую активность in vitro и in vivo (Liu W. et al., 2004; Urech K. et al., 2005; Essaady D. et al., 1996; Rossi T. et al.,

2003). Показано, что механизм действия производных тритерпенов связан со способностью индуцировать апоптоз в опухолевых клетках, который реализуется независимо от «рецепторов смерти» (Pisha Е. et al., 1995; Ehrhardt Н. et al., 2004; Fulda S. et al., 1999). Тем не менее, механизм противоопухолевого действия указанными тритерпенами остается до конца не изучен.

В данной работе исследована цитотоксическая активность на рост опухолевых клеток в культуре (линии МТ-4, СЕМ, MOLT-4, HeLa, HepG2) (МТТ-тест) соединений тритерпеновой химической природы глицирризиновой кислоты, глицирретовой, бетулина, бетулиновой кислоты и их производных). Определены для этих соединений 50% ингибирующие дозы (ИД50).

Из первичного скрининга (МТТ-теста) нами выявлено, что амиды (IVa-в) и дипептид (IVr) бетулоновой кислоты в целом являются наиболее активными цитотоксическими соединениями на линиях МТ-4, СЕМ, MOLT-4, Hep G2, HeLa, чем немодифицированные бетулин или БК. ГК оказалась неактивна на исследуемых клеточных линиях. Производные глицирризиновой кислоты в целом оказались менее активными ингибиторами роста опухолевых клеток в культуре, чем производные бетулина и БК. Используя сопоставление химических структур производных бетулоновой кислоты и данных МТТ-теста, было сделано предположение о важности структуры радикала в С-17-ом положении тритерпенового остова производных, что согласуются с литературными данными (Sarec J. et al., 2003; You Y. J. et al., 2003).

Далее, с учетом полученных результатов МТТ-теста для тритерпеновых соединений, проявивших наибольшую ингибирующую активность на рост опухолевых клеток в культуре, с помощью проточной цитофлуориметрии была определена способность вызывать апоптоз в этих клетках. Наиболее эффективными индукторами апоптоза в опухолевых клетках (линии МТ-4, СЕМ, MOLT-4, HeLa) оказались амиды и дипептид бетулоновой кислоты (соединения IVa-r), у которых АИ был выше, чем у немодифицированных растительных тритерпенов (I, III, IV). В клетках карциномы печени человека (Hep G2) апоптозиндуцирующая активность тритерпенов оказалась незначительной (АИ не превышал 10%). Также в ходе анализа данных было замечено, что варьирование длины спейсер-метиленового звена амидного заместителя в положении С-28 незначительно влияет на изменении апоптозиндуцирующих свойств соединений.

Следующим этапом в изучении противоопухолевого действия растительных тритерпенов и их модифицированных производных было изучение молекулярных механизмов в клетке. Поэтому далее на основании данных МТТ-теста и апоптозиндуцирующего анализа для этих целей были выбраны наиболее активные соединения в опухолевых клетках (MOLT-4, СЕМ). Поскольку уже имелся ряд литературных данных о действии тритерпенов в клетке, мы смогли опираться на эти факты при выборе потенциальных мишеней.

Литературные данные указываю на то, что апоптоз в опухолевых клетках под действием тритерпенов связан с инициацией Вс1-2-зависимого пути (Fulda S. et al., 1997; Zuco V. et al., 2002). В связи с этим, было проведено исследование возможного влияния тритерпеновых производных на экспрессию гена антиапоптотического белка Bcl-2 в наиболее чувствительных к их апоптозиндуцирующему действию опухолевых клетках (MOLT-4, СЕМ). Для этого были выбраны БК (III), бетулоновая кислота (IV), ее амиды (IVa-в) и дипептид (IVr). Как показали эксперименты, обработка этими соединениями клеток MOLT-4, СЕМ приводит к уменьшению содержания мРНК гена Bcl-2 в этих клетках в 1,6 -2,3 раза по сравнению с контрольными клетками (р<0,05).

Также было определено с помощью мультиплексного ОТ-ПЦР анализа изменение экспрессии гена Cyclin D1 в клетках СЕМ, MOLT-4 контрольных линий и клеток, подвергнутых действию тритерпенов (III, IV, IVa-r). Существуют и сведения о том, что гиперэкспрессия Cyclin D1 является одним из факторов злокачественной трансформации лимфоцитов ретровирусом HTLV-I, который, в свою очередь, рассматривается в качестве маркера лимфоидных опухолей (Taniguchi Т. et al., 1998; Neuveut С. et al.,

2000). С другой стороны отмечено, что ингибирование экспрессии гена Cyclin D1 приводит к остановке клеточного деления и выходу клетки в фазу апоптоза (Aggarwal В. et al., 2004). Согласно полученным нами результатам соединения (IV, IVa-r) снижают экспрессию гена Cyclin D1 в 1,6-2,1 раза (р<0,05). Однако, растительный тритерпен БК не влияет на изменение содержание мРНК гена Cyclin D1 в лейкозных клетках in vitro.

Следующим шагом в изучении возможных механизмов противоопухолевого действия тритерпенов стало исследование влияния тритерпеновых соединений на экспрессию гена hTERT (каталитической единицы теломеразы) в опухолевых клетках. Показано, что механизм противовирусного действия тритерпенов связан со способностью ингибировать обратную транскриптазу ретровируса (Ильина Т. В. и др., 2002). Существуют сведения о высокой степени гомологии между каталитической субъединицей теломеразы (hTERT) и обратной транскриптазой ретровирусов (Eickbush Т. et al., 1997). С другой стороны известно, что ингибирование экспрессии гена hTERT ведет к снижению активности теломеразы, что приводит к потере теломер и хромосомной нестабильности - это также может индуцировать апоптоз (Herbert В. et al., 1999). Поэтому, применив метод флуоресцентной гибридизации in situ с последующим анализом на проточном цитометре, мы исследовали влияние тритерпенов (III, IVa-r) на экспрессию гена hTERT в лейкозных клетках MOLT-4. Как показали эксперименты, в обработанных клетках не наблюдалось снижения содержания мРНК hTERT под действием БК и амида бетулоновой кислоты (IVa) в выбранных условиях эксперимента, однако, при обработке клеток производными (IV6-r) происходило снижение мРНК hTERT на 23,5, 33 и 55% соответственно, относительно контроля (р<0,05).

Таким образом, впервые было показано, что одним из молекулярного механизмов противоопухолевого действия исследуемых производных растительных тритерпенов является ингибирование экспрессии онкогенов hTERT, Bcl-2, Cyclin Dl, блокирующих противоопухолевую защиту клеток, что в конечном итоге приводит к остановке клеточного роста и выходу клеток в фазу апоптоза.

Представленные нами данные показывают перспективность дальнейшего изучения противоопухолевого действия высших терпеноидов и их модификаций с целью направленного синтеза производных с повышенной специфичностью воздействия на молекулярные мишени опухолевых клеток. Кроме того, полученные результаты о противоопухолевой активности in vitro производных тритерпеноидов являются стимулом для дальнейшего доклинического исследования в системах in vivo их противоопухолевой активности.

Таким образом, исследованные нами производные тритерпенов могут рассматриваться как перспективные химические соединения, на основе которых возможно создание препаратов со специфической противоопухолевой активностью.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шинтяпина, Александра Борисовна, 2008 год

1. Кислицын А. Н. Экстрактивные вещества бересты: выделение, состав, применение // Химия древесины. 1994. - №3. - С. 3-28.

2. Копнин Б. П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза // Биохимия. -2000. Т. 65. - №. 1. - С. 5-33.

3. Петренко Н. И., Еланцева Н. В., Шулъц Э. Э., Шакиров М. М., Толстиков Г. А. Синтез производных бетулоновой кислоты, содержащих аминокислотные фрагменты // Химия природных соединений. 2002. - №. 4. - С. 276-283.

4. Плясунова О. А., Егоричева И. Н., Федюк Н. В. Изучение анти-ВИЧ активности |3-глицирризиновой кислоты // Вопросы вирусологии. -1992. Т. 37(5-6). - С. 235-238.

5. Сорокина И. В., Толстикова Т. Г., Жукова Н. А., Петренко Н. И., Шулъц Э. Э„ Узенкова Н. В. Бетулоновая кислота и ее производные новая группа агентов, снижающих побочное действие цитостатиков // ДАН. -2004. - Т. 399(2). - С. 274-277.

6. Толстиков Г. А., Болтина Л. А., Шулъц Э. Э., Покровский А. Г. Глицирризиновая кислота// Биоорг. химия. 1997. - Т. 23. - С. 691-709.

7. Толстиков Г. А., Болтина Л. А., Толстикова Т. Г., Шулъц Э.Э. Синтетические трансформации высших терпеноидов и алкалоидов // Химия и компьютерное моделирование. 2002. - № 7. - С. 9-20.

8. Толстиков Г. А., Флехтер О. Б., Шулъц Э. Э., Болтина Л. А., Толстиков А. Г. Бетулип и его производные. Химия и биологическая активность // Химия в интересах устойчивого разв. 2005. Т. 13. - №. 1. - С. 1-30.

9. Флетчер О. Б., Карачурина Л. Т., Нигматуллина Л. Р. Синтез и фармакологическая активность диникотината бетулина // Биоорг. химия. 2002. - Т. 28. - № 6. - С. 543 - 550.

10. Abe N., Ebina Т., Ishida N. Interferon induction by glycyrizzin and glycyrrhetinic acid in mice // Microbiol. Immunol. 1982. - V. 26. - P. 535539.

11. Abe H., Ohya N., Yamamoto K., Shibuya Т., Arichi S., Odashima S. Effects of glycyrrhizin and glycyrrhetinic acid on growth and melanogenesis in cultured В16 melanoma cells // Eur. J. Cancer Clin. Oncol. 1997. - V. 23(10).-P. 1549-1555.

12. Abe S., Kubota Т., Otani Y„ Furukawa Т., et al. UCN-01 (7-Hydoxystaurosporine) inhibits in vivo growth of human cancer cells through selective perturbation of G1 phase checkpoint machinery // Jpn. J. Cancer Res. 2001. - V. 92. - P. 537-545.

13. Acharya S., Dasarathy S., Tandon A. A preliminary open trial on interferon stimulator (SNMC) derived from Glycyrrhiza glabra in the treatment of subacute hepatic failure // Indian J. Med. Res. 1993. - V. 98. - P. 69-74.

14. Ahmad M., Shi Y. TRAIL-induced apoptosis of thyroid cancer cells: potential for therapeutic intervention // Oncogene. 2000. - V. 19(30). - P. 33633371.

15. Aggarwal В. В., Shishodia S. Molecular targets of dietary agents for prevention and therapy of cancer // Biochem. Pharmacol. 2006. - V. 71(10).-P. 1397-1421.

16. Aggarwal В. В., Takada Y., Oommen О. V. From chemoprevention to chemotherapy: common targets and common goals // Expert. Opin. Investig. Drugs.-2004.-V. 13(10).-P. 1327-1338.

17. Afanasyev V. N., Korol B. A., Matylevich N. P., Pechatnikov V. A., Umansky S. R. The use of flow cytometry for the investigation of cell death // Cytometry. 1993. - V. 14(6). - P. 603-609.

18. Aktas O., Schulze-Topphoff U., Zipp F. The role of TRAIL/TRAIL receptors in central nervous system pathology // Front. Biosci. 2007. - V. 12. - P. 2912-2921.

19. Aly A., Al-Alousi L., Salem H. Licorice: a possible anti-inflammatory and anti-ulcerdrug // AAPS Pharm. Sci. Tech. 2005. - V. 6(1). - P. 74-82.

20. Amioka Т., Kitadai Y., Hiyama Т., Tanaka S., Yoshihara M. Expression of human telomerase reverse transcriptase mRNA in esophageal cancers and precancerous lesions // Oncol. Reports. -2004. V.ll. - P.51-55.

21. Andre N., Rome A., Carre M. Antimitochondrial agents: a new class of anticancer agents // Arch. Pediatr. 2006. - V. 13(1). - P. 69-75.

22. Appels N., Beijnen J. H., Schellens J. Development of farnesyl transferase inhibitors: a review // Oncologist. 2005. - V. 10(8). - P. 565-578.

23. Ashkenazi A., Dixit V. Death receptors: signaling and modulation I I Science. 1998. - V. 281. - P. 1305-1308.

24. Bazzoni F., Beulier B. Tumor necrosis factor ligand and receptor families // N. Engl. J. Med. 1996. -V. 334. - P. 1717-1725.

25. Barnett J. M., McCollum G. W., Fowler J. A., DuanJ. J. Pharmacologic andgenetic manipulation of MMP-2 and -9 affects retinal neovascularization in rodent models of OIR // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2007. - V. 48(2). -P. 907-915.

26. Baglin I., Mitaine-Offer A. C., Nour M., Tan K, Cave C. A review of natural and modified betulinic, ursolic and echinocystic acid derivatives as potential antitumor and anti-HIV agents // Mini Rev. Med. Chem. 2003. - V. 3(6). -P. 525-539.

27. Bernardi M., D'Intino P., Trevisani F, Cantelli-Forti G., Raggi M., Turchetto E., Gasbarrini G. Effects of prolonged ingestion of graded doses of licorice by healthy volunteers // Life Sci. 1994. - V. 55(11). - P. 863872.

28. Blagosklonny M., Bishop P., Robey R. Loss of cell cycle control allows selective microtubule-active drug-induced Bcl-2 phosphorylation and cytotoxicity in autonomous cancer cells // Cancer Res. 2000. - V. 60. - P. 3425-3428.

29. Blajeski A. L., Kottke T. J., Kaufmann S. H. A multistep model for paclitaxel-induced apoptosis in human breast cancer cell lines // Exp. Cell Res. 2001. -V. 27.-P. 537-545.

30. Blower P. E., Yang C., Fligner M. A., Verducci J. S., Yu L., Richman S., Weinstein J. N. Pharmacogenomic analysis: correlating molecular substructure classes with microarray gene expression data // Pharmacogenomics J. 2002. - V. 2(4). - P. 259-271.

31. Braca A., Autore G., De Simome F., Marzocco S., Morelli I., Venturella F. Cytotoxic saponins from Shefflera rotundifolia // Planta Med. 2004. - V. 70(10).-P. 960-966.

32. Brandao M., Lacaille-Dubois M., Teixera M, Wagner H. Triterpene saponins from the roots of Ampelozizyphus amazonicus II Phytochem. -1992.-V. 31.-P. 352-354.

33. Brown Т., Sigurdson E., RogatkoA., Broccoli D. Telomerase inhibition using azidothymidine in the HT-29 colon cancer cell line // Ann. Surg. Oncol. -2003.-V. 10(8).-P. 910-915.

34. Builles N., Bechetoille N., Justin V., Andri V., Barbaro V., Di Iorio E., Auxenfans C., Hulmes D. Development of a hemicornea from human primary cell cultures for pharmacotoxicology testing // Cell Biol. Toxicol. 2007. -V. 23(4). - P. 279-292.

35. Burn F., Hwang P., Torrance C. Disruption of p53 in human cancer cells alters the responses to therapeutic agents // Clin. Invest. 1999. - V. 104. -P. 263-269.

36. Buolamwini J. K. Novel anticancer drug discovery // Currt. Opinion in Chem. Biol. 1999. - V. 3. - P. 500-509.

37. Canduri F, Uchoa H. В., de Azevedo W. F. Molecular models of cyclin-dependent kinase 1 complexed with inhibitors // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. - V. 324(2). - P. 661-666.

38. Cichewicz R., Kouse S. Chemistry, biological activity, and chemotherapeutic potential of betulinic acid for the prevention and treatment of cancer and HIV infection // Med. Res. Rev. 2004. - V. 24. - P. 90-108.

39. Chappell J. The genetics and molecular genetics of terpene and sterol origami // Curr. Opin. Plant. Biol. 2002. - V. 5(2). - P. 151-157.

40. Chavali S., Francis Т., Campbell J. An in vitro study of immunomodulatory effects of some saponins // Int. J. Immunopharmacol. 1987. - V. 9(6). - P.675.683.

41. Chin L., Tarn A., Pomerantz J., Wong M., Holash J. Essential role for oncogenic Ras in tumour maintenance // Nature. 1999. - V. 400. - P. 468472.

42. Chistofalli M., Charnsangavej C., Hortobagyi G. N. Angiogenesis modulation in cancer research: novel clinical approaches // Nat. Rev. 2002. -V. 1.-P. 415-426.

43. Chodon D., Ramamurty N., Sakthisekaran D. Preliminary studies on induction of apoptosis by genistein on HepG2 cell line // Toxicol. In Vitro. 2007-V. 21(5). -P. 887-891.

44. Colvin О. M., Friedman H. S., Gamesik M. P., Fenselau C., Hilton J. Role of glutathione in cellular resistance to alkylating agents // Adv. Enzyme Regul. 1993.-V. 33.-P. 19-26.

45. Courtneidge S., Plowman G. D. The discovery and validation of new drug targets in cancer // Current Opinion in Biotech. 1998. - V. 9. - P. 632-636.

46. Crance J., Leveque F., Biziagos E. Studies on the mechanism of action of glycyrrizin against hepatitis A virus replication // Antiviral Res. 1994. - V. 23.-P. 63-76.

47. Cross M. J., Claesson-Welsh L. FGF and VEGF function in angiogenesis: signalling pathways, biological responses and therapeutic inhibition // Trends Pharmacol. Sci. 2001. - V. 22. - P. 201-207.

48. Dai Z., Sadee W., Blower P. Chemogenomics of sensitivity and resistance to anticancer drugs // Current Pharmacogenomics. 2007. - V. 5(1). - P. 1119.

49. Dai G., Chan К. K., Liu S. Cellular uptake and intracellular levels of the Bcl-2 antisense G3139 in cultured cells and treated patients with acute myeloid leukemia // Clin. Cancer Res. 2005. - V. 11. - P. 2998-3008.

50. Dargan D., Aitken J., Subak-Sharpe J. The effect of triterpenoid compounds on uninfected and herpes simplex virus-infected cells in culture. III.

51. Ultrastructural study of virion maturation // J. Gen. Virol. 1998. - V. 69(2). -P. 439-444.

52. Darrick S., Pezzuto J. M., Pisha M. Synthesis of betulinie acid derivatives with activity against human melanoma // Bioorg. Med. Chem. Lett. 1998. -V. 8.-P. 1707-1712.

53. Dash S., Haque S., Joshi V. et al. HCV-hepatocellular carcinoma: new findings and hope for effective treatment // Microsc. Res. Tech. 2005. - V. 68(3-4).-P. 130-148.

54. Davila J., Rodriguez R. J., Melchert R. В., Acosta D. Predictive value of in vitro model systems in toxicology // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1998. -V. 38.-P. 63-96.

55. Debatin К. M. Activation of apoptosis pathways by anticancer treatment // Toxicol. Lett. 2000. - V. 112. - P. 41-48.

56. Debatin К. M., Krammer P. H. Death receptors in chemotherapy and cancer // Oncogene. 2004. - V. 23. - P. 295-266.

57. Diomede L., Piovani В., Re F. et al. The induction of apoptosis is a common feature of cytotoxic action of ether-linked glycero-phospholipids in human leukemia cells // Int. J. Cancer. 1994. - V. 57. - P. 645-649.

58. Dhiman R. K., Chawla Y. K. Herbal medicines for liver diseases // Dig. Dis. Sci. -2005. V. 50(10). - P.1807-1812.

59. Dhiman H. K., Ray A. R., Panda A. K. Three-dimensional chitosan scaffold-based MCF-7 cell culture for the determination of the cytotoxicity of tamoxifen // Biomaterials. 2005. - V. 26(9). - P. 979-986.

60. Dredge К. AE-941 (AEterna) // Curr. Opin. Investig. Drugs. 2004. - V. 5(6). - P. 668-677.

61. Duss S., Andre S., Nicoulaz A. L., Fiche M., Bonnefoi H., Brisken C., Iggo R. An estrogen-dependent model of breast cancer created by transformation of normal human mammary epithelial cells // Breast Cancer Res. 2007. - V. 9(3). - P. 38

62. Eickbush Т. H. Telomerase and retrotransposons: which came first? // Science. 1997. - V. 277(5328). - P. 955-959.

63. Einbond L,, Su T, Wu H., Friedman R., Wang X., Jiang B. Gene expression analysis of the mechanisms whereby black cohosh inhibits human breast cancer cell growth // Anticancer Res. 2007. - V. 27(2). P. 697-712.

64. Eiznhamer D. A, Xu Z. Q. Betulinic acid: a promising anticancer candidate // I. Drugs 2004. - V. 7(4). - P. 359-373.

65. Ehrhardt H., Fulda S., Fuhrer M., Debatin К. M., Jeremias I. Betulinic acid-induced apoptosis in leukemia cells // Leukemia. 2004. - V. 18(8). - P. 1406-1412.

66. Ellis L. M. Tumor angiogenesis // Horizons in Cancer Res. 2002. - V. 3. -P. 4-22.

67. Essaady D., Simon A., Oilier M., Maurizis J. C., Chulia A., Delage C. Inhibitory effect of ursolic acid on B16 proliferation through cell cycle arrest // Cancer Lett. 1996. - V. 106(2). - P. 193-197.

68. Fernandez M., Heras В., Garcia M., Saenz M., Villar A. New insights into the mechanism of action of the anti-inflammatory triterpene lupeol // J. Pharm. Pharmacol.-2001.-V. 53(11).-P. 1533-1539.

69. Floyd E., McShane T. Development and use of biomarkers in oncology drug development toxicologic //Toxicol. Pathol. 2004. - V. 1. - P. 106-115.

70. Freshney R. I. Culture of animal cells, a practical approach. Oxford. "IRL Press Limited". - 1989. - P. 277.

71. Fridman J. S., Lowe S. W. Control of apoptosis by p53 // Oncogene. 2003. -V. 22.-P. 9030-9040.

72. Fulda S., Debatin К. M. Betulinic acid induces apoptosis through a direct effect on mitochondria in neuroectodermal tumors // Med. Periatr. Oncol. -2000. V. 35(6). - P. 616-618.

73. Fulda S., Friesen C., Los M„ Scaffidi C. Betulinic acid triggers CD95 (APO-1/Fas) and p53-independent apoptosis via activation of caspases inneuroectodermal tumors // Cancer Res. 1997. - V. 57. - P. 4956-4964.

74. Fulda S., Jeremias I., Steiner H. H., Pietsch Т., Debatin К. M. Betulinic acid: a new cytotoxic agent against malignant brain-tumor cells // Int. J. Cancer. -1999.-V. 82(3).-P. 435-441.

75. Furuhashi L, Iwata S., Shibata S., Sato Т., Inoue H. Inhibition by licochalcone A, a novel flavonoid isolated from liquorice root, of IL-1 beta-induced PGE2 production in human skin fibroblasts // J. Pharm. Pharmacol.- 2005. V. 57(12). - P. 1661-1666.

76. Gardner C. R. Anticancer drug development based on modulation of the Bcl-2 family core apoptosis mechanism // Expert. Rev. Anticancer Ther. 2004.- V. 4(6).-P. 1157-1177.

77. Gilardini Montani M.S., Tuosto L., Giliberti R. Dexamethasone induces apoptosis in human T cell clones expressing low levels of Bcl-2 avoid an excess of immune response. // Cell Death and Differentiation. 1999. - V. 6. -P. 79-86.

78. GranaX., Reddy E. P. Cell cycle control in mammalian cells: role of cyclins, cyclin dependent kinases (CDKs), growth suppressor genes and cyclin-dependent kinase inhibitors (CKIs) // Oncogene. 1999. - V. 11. - P. 211219.

79. Gus C., Sautos В., Ror A., Lit G., Rusal M. Current therapeutic progress in oncology: the development of targeted therapies // Rev. Med. Liege. 2007. -V. 62.-P. 391-398.

80. Gutierrez F., Estevez-Braun A., Ravelo A.G., Astudillo L., Zarate R. Terpenoids from the medicinal plant Maytenus ilicifolia // J. Nat. Prod. -2007. V. 70(6). - P. 1049-1052.

81. Hakem R., Накет A., Duncan G. S., Henderson J. 71, Woo M., Soengas M. S. Differential requirement for caspase 9 in apoptotic pathways in vivo // Cell. -1998.-V. 94.-P. 339-352.

82. Hanahan D., Folkman J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis // Cell. 1996. - V. 86. - P. 353364.

83. Нао X., Du M., Bishop A. Talbot I. C. Imbalance between proliferation and apoptosis in the development of colorectal carcinoma // Virchows Arch. -1998.-V. 433.-P. 523-527.

84. Hata H., Kuramoto H., Immunocytochemical determination of estrogen and progesterone receptors in human endometrial adenocarcinoma cells // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 1992. - V. 42(2). - P. 201-210.

85. Hata K., Hori K., Takahashi S. Differentiation- and apoptosis-inducing activities by pentacyclic triterpenes on a mouse melanoma cell line // J. Nat. Prod. 2002. - V. 65(5). - P. 645-648.

86. Helder M. N., Jong S., Vries E. G., Zee A. G. Telomerase targeting in cancer treatment: new developments // Drug Resist. Update. 1999. - V. 2. - P. 104-115.

87. Herbert В., Pitts A., Baker S. I., Hamilton S. E„ Wright W. E. Inhibition of human telomerase in immortal human cells leads to progressive telomere shortening and cell death // Proc. Natl. Acad. Sci. 1999. - V. 96. - P. 14276-14281.

88. Herold A., Cremer L., Calugaru A., Tamas V., Ionescu F., Manea S., Szegli G. Hydroalcoholic plant extracts with anti-inflammatory activity // Roum.

89. Arch. Microbiol. Immunol. 2003. - V. 62(1-2). - P. 117-129.

90. Hibasami H., Iwase H., Yoshikota K. Glycyrrhizin induces apoptosis in human stomach cancer KATO III and human promyelotic leukemia HL-60 cells // Int. J. Mol. Med. 2005. - V. 16(2). - P. 233-236.

91. Hibasami K, Komiya Т., Achiwa Y. Induction of apoptosis in human stomach cancer cells by green tea catechins // Oncol. Rep. 1998. - V. 5. -P. 527-529.

92. Ho Y. S., Tsai P. W, Yu C. F., Liu H. L„ Chen R. J., Lin, J.K. Ketoconazole-induced apoptosis through p53-dependent pathway in human colorectal and hepatocellular carcinoma cell lines // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1998. - V. 153.-P. 39-47.

93. Holbeck S. L. Update on NCI in vitro drug screen utilities // Eur. J. Cancer. -2004. V. 40(6). - P. 785-793.

94. Hugh J. M., Gabriel G. A. Molecules in focus Bax. The pro-apoptotic Bcl-2 family member, Bax // Int. J. Biochem. Cell Biology. 1998. - V. 30. - P. 647-650.

95. Яш С. H, ShenL. R., Zhao Y. Y, Liang H. Chemical constituents of plants from the genus Symplocos // Chem. Biodivers. 2007. - V. 4(1). - P. 1-11.

96. Ishiwata S., Nakashita K., Ozawa Y, Niizeki H., Nozaki S. Fas-mediated apoptosis is enhaneced by glycyrrhizin without alteration of caspase-3-like activity // Biol. Pharm. Bull. 1995. - V. 22(11). - P. 1163-1166.

97. Ji Z. N. Ye W. C„ Liu G. G., Hsiao W. L. 23-Hydroxybetulinic acid-mediated apoptosis is accompanied by decreases in bcl-2 expression and telomerase activity in HL-60 cells // Life Science. 2002. - V. 72(1). - P. 19.

98. Jin Z., El-Deiry W. S. Overview of cell death signaling pathways // Cancer Biol. Ther. -2005. V. 4. - P. 139-163.

99. Jung G. D., Yang J. Y., Song E. S., Par J. W. Stimulation of melanogenesis by glycyrrhizin in B16 melanoma cells // Exp. Mol. Med. 2001. - V. 33(3).- P.131-135.

100. Kawamoto K. Flow cytometric analysis, mechanism of action and evaluation of viability by antineoplastic agents // Nippon. Rinsho. 1992. - V. 50(10).- P. 2360-2367.

101. Kent L. L., Hull-Campbell N. E., Lau Т., WuJ. C., Thompson S. A., Nori M. Characterization of novel inhibitors of cyclin-dependent kinases I I Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - V. 260(3). - P. 768-774.

102. Kersten G., Crommelin D. Liposomes and ISCOMS as vaccine formulations //Biochim. Biophys. Acta. 1995. - V. 1241(2).-P. 117-138.

103. Kim J. В., Stein R., O'Hare M. J. Three-dimensional in vitro tissue culture models of breast cancer a review // Breast Cancer Res. Treat. - 2004. - V.85.-P. 281-291.

104. WA.Kim J. Y., Koo H. M., Kim D. S. Development of C-20 modified betulinic acid derivatives as antitumor agents I I Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001. - V. 11(17).-P. 2405-2408.

105. Kitagawa K., Nishino H., Iwashima A. Inhibition of the specific binding of 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate to mouse epidermal membrane fractions by glycyrrhetic acid // Oncology. 1986. - V. 43(2). - P.127-130.

106. Khajuria A., Gupta A., Garai S., Wakhloo B. P. Immunomodulatory effects of two sapogenins 1 and 2 isolated from Luffa cylindrica in Balb/C mice // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007. - V. 17(6). - P. 1608-12.

107. Klastersky J. Adverse effects of the humanized antibodies used as cancer therapeutics I I Curr. Opin. Oncol. 2006. - V. 18(4). - P. 316-320.

108. Known J. K., Shim J. S., Kim J. Я, Cho H. Y., Yum Y. N. Betulinic acid inhibits growth factor-induced in vitro angiogenesis via the modulation of mitochondrial function in endothelial cells // Jap. J. Cancer Res. 2002. - V. 93.-P. 417-425.

109. YlX.Konoshima Т., Takasaki M., Kozuka M. Studies on ihibitors of skin-tumor promotion // J. Nat. Prod. 1987. - V. 50(6). - P. 1167-1170.

110. Lanzi C., Cassinelli G., Cuccuru G., Supino R., Zuco V., Ferlini C., Scambia G., Zunino F. Cell cycle checkpoint efficiency and cellular response to paclitaxel in prostate cancer cells // Prostate. 2001. - V. 48(4). - P.254-264.

111. Larsen R. D., Schonau A., Thisted M., Petersen К. H. Detection of gamma-globin mRNA in fetal nucleated red blood cells by PNA fluorescence in situ hybridization // Prenat. Diagn. 2003. - V. 23. - P.52-59.

112. Lee G. Y., Kenny P. A., Lee E. H., Bissell M. J. Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells // Nat. Methods. -2007. V. 4(4). - P. 359-365.

113. Lehrman S. Virus treatment questioned after gene therapy death // Nature. -1999.-V. 401(6753).-P. 517-518.

114. Li Z. L„ YangB. Z, LiX., WangS. J., Li N., Wang Y. Triterpenoids from the husks of Xanthoceras sorbifolia Bunge // J. Asian Nat. Prod. Res. 2006. -V. 8(4).-P. 361-366.

115. Liu W. К., Ho J. C., Cheung F. W., Liu B. P., Ye W. C., Che C. N. Apoptotic activity of betulinic acid derivatives on murine melanoma B16 cell line // Eur. J. Pharmacol. 2004. - V. 498(1-3). - P. 71-78.

116. Luo R. J., Chen J. W, Quan Z. L., Li C., Liang J. K. Effects of Ilexonin A on circulatory neuroregulation // Adv. Exp. Med. Biol. 1995. - V. 363. - P. 143-154.

117. Masson V. Roles of serine proteases and matrix metalloproteinases in tumor invasion and angiogenesis // Bull. Mem. Acad. R. Med. Belg. 2006. - V. 161(5).-P. 320-326.

118. Matysiak M., Jurewicz A., Jaskolski D., Selmaj K. TRAIL induces death of human oligodendrocytes isolated from adult brain // Brain. 2002. - V. 125(11)-P. 2469-2480.

119. Mehta J. P., O'Driscoll L., Barron N., Clynes M, Doolan P. A microarray approach to translational medicine in breast cancer: how representative are cell line models of clinical conditions? // Anticancer Res. 2007. - V. 27(3A).-P. 1295-1300.

120. Melzig M. F„ Bormann H. Betulinic acid inhibits aminopeptidase N activity // Planta Med. 1998. - V. 64. - P. 655-657.

121. Mis aw a M., Tauchi Т., Sashida G., Nakajima A., Abe K., Ohyashiki J. H., Ohyashiki K. Inhibition of human telomerase enhances the effect of chemotherapeutic agents in lung cancer cells // Int. J. Oncol. 2002. - V. 21(5).-P. 1087-1092.

122. Mizushina Y., Iida A., Ohta K., Sugawara F., Sakaguchi K. Novel triterpenoids inhibit both DNA polymerase and DNA topoisomerase //

123. Biochem. J. 2000. - V. 350(3). - P. 757-763.

124. Mukherjee R., Kumar V., Srivastava S. K., Agarwal S. K., Burman A. Betulinic acid derivatives as anticancer agents: structure activity relationship // Anticancer Agents Med. Chem. 2006. - V. 6. - P. 271-279.

125. Mateyak M. K., Obaya A. J., Sedivy J. M. c-Myc regulates cyclin D-Cdk4 and -Cdk6 activity but affects cell cycle progression at multiple independent points // Mol. Cell Biol. 1999. - V. 19(7). - P. 4672-4683.

126. Mo Y., Gan Y., Song S., Johnston J., Xiao X., Wientjes M. G. Simultaneous targeting of telomeres and telomerase as a cancer therapeutic approach // Cancer Res. 2003. - V. 63(3). - P. 579-585.

127. Mo Y., Gan Y., Song S., Johnston J., Xiao X, Wientjes M. G., Au J. L. Simultaneous targeting of telomeres and telomerase as a cancer therapeutic approach // Cancer Res. 2005. - V. 65(4). - P. 1489-1496.

128. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunol. Methods. -1983.-V. 16(65).-P. 55-63.

129. Nagarajan S., Mohan Rao L. Triterpenoids from swallow roots a convenient HPLC method for separation // J. Chromatogr. Sci. - 2007. - V. 45(4).-P. 189-194.

130. Neuveut C„ Jeang К. T. HTLV-I Tax and cell cycle progression. // Prog. Cell Cycle Res. -2000. V. 4.-P. 157-162.

131. Nicoletti I., Migliorati G., Pagliacci M.C., Grignani F. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry // J. Immunol. Methods. 1991. - V. 139(2). - P. 271-279.

132. Panvichian R., Orth K., Pilat M. J., Day M. L, Day К. С., Yee C. Signaling network of paclitaxel-induced apoptosis in the LNCaP prostate cancer cell line // Urology. 1999. - V. 54(4). - P. 746-752.

133. Pendino F., Tarkanyi I., Dudognon C., Hillion J., Lanotte M., Aradi J., Segal-Bendirdjian E. Telomeres and telomerase: Pharmacological targets for new anticancer strategies // Curr. Cancer Drug Targets. 2006. - V. 6(2). -P. 147-180.

134. Pengsuparp Т., Cai L., Constant H., Fong H. H., Lin L. Z., Kinghorn A. D., Pezzuto J. M. Mechanistic evaluation of new plant-derived compounds that inhibit HIV-1 reverse transcriptase // J. Nat. Prod. 1995. - V. 58(7). - P. 1024-1031.

135. Pines J., Rieder C. L. Re-staging mitosis: a contemporary view of mitotic progression // Nat. Cell Biol. 2001. - V. 3(1). - P. 3-6.

136. Pis ha E., Chai H., Lee I. S., Chagwedera Т. E. Discovery of betulinic acid as a selective inhibitor of human melanoma that functions by induction of apoptosis//Nat. Med.- 1995.-V. l.-P. 1046-1051.

137. PoonK., Zhang J., Wang C, Tse A. K., Wan С. K., Fong W. F. Betulinic acid enhances 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3-induced differentiation in human HL-60 promyelocyte leukemia cells // Anticancer Drugs. 2004. - V. 15(6). -P. 619-624.

138. Qian L., Murakami Т., Kimura Y., Takahashi M., Okita K. Saikosaponin Ainduced cell death of a human hepatoma cell line (HuH-7): the significance of the 'sub-Gl peak' in a DNA histogram // Pathol. Int. 1995. - V. 45(3). -P. 207-214.

139. Reed J. C., Pellecchia M. Apoptosis-based therapies for hematologic malignancies // Blood. 2005. - V. 106. - P. 408-418.

140. O'Reilly M., Teichmann S., Rhodes D. Telomerases // Curr. Opin. Struct. Biology. 1999. - V. 9. P. 56-65.

141. Rege T. A., Fears C. Y., Gladson C. L. Endogenous inhibitors of angiogenesis in malignant gliomas: nature's antiangiogenic therapy // Neuro. Oncol.-2005.-V. 7(2).-P. 106-121.

142. Ribrag V, Massade L, Faussat AM, Dreyfus F, Bayle C, Gouyette A, Marie JP. Drug resistance mechanisms in chronic lymphocytic leukemia // Leukemia. 1996. - V. 10(12). - P. 1944-1949.

143. Riccardi C., Nicoletti I. Analysis of apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry // Nat. Protoc. 2006. - V. 1(3). - P. 1458-1461.

144. Richter M, Zhang H. Receptor-targeted cancer therapy // DNA Cell Biol. -2005. V. 24(5). - P. 271-282.

145. Ross D. Т., Perou С. M. A comparison of gene expression signatures from breast tumors and breast tissue derived cell lines // Dis. Markers. 2001. -V. 17.-P. 99-109.

146. Rossi Т., Benassi L., Magnoni C., Ruberto A.I., Coppi A., Baggio G. Effects of glycyrrhizin on UVB-irradiated melanoma cells // In Vivo. 2005. - V. 19(1).-P. 319-322.

147. Human Gene Ther. 1996. - V. 7. - P. 861-874.

148. Row insky E. K., Donehower R. C., Jones R. J., Tucker R. W. Microtubule changes and cytotoxicity in leukemic cell lines treated with taxol // Cancer Res. 1988. - V. 48(14). - P. 4093-4100.

149. Sarkar F. H., Adsule S., Padhye S., Kulkarni S., Li Y. The role of genistein and synthetic derivatives of isoflavone in cancer prevention and therapy // Mini Rev. Med. Chem. 2006. - V. 6(4)! - P. 401-407.

150. Salomon D. S., Brandt R„ Ciardiello F., Normanno N. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in human malignancies // Crit. Rev. Oncol. Hematol. 1995. - V. 19. - P. 183-232.

151. Satyamoorthy K., DeJesus E., Linnenbach A. J., Kraj В., Kornreich D. L.,

152. Sawada N., Kataoka K., Kondo K., Arimochi H, Fujino H Betulinic acid augments the inhibitory effects of vincristine on growth and lung metastasis of B16F10 melanoma cells in mice // Br. J. Cancer. 2004. - V. 90(8). - P. 1672-1678.

153. Schulze W. X., Deng L., Mann M. Phosphotyrosine interactome of the ErbB-receptor kinase family // Mol. Syst. Biol. 2005. - V. 1. - P. 205-208.

154. Schulze-Bergkamen H., Krammer P. H. Apoptosis in cancer implications for therapy // Semin. Oncol. - 2004. - V. 31. - P. 90-119.

155. Schwartz G. K., Shah M. A. Targeting the cell cycle: a new approach to cancer therapy // J. Clin. Oncol. 2005. - V. 23(36). - P. 9408-9421.

156. Segal E., Friedman N., Kaminski N., Regev A., Koller D. From signatures to models: understanding cancer using microarrays // Nat. Genet. 2005. - V. 10.-P. 38-45.

157. Selzer E., Pimentel E., Wacheck V., Schlegel W., Pehamberger H., Jansen B. Effects of betulinic acid alone and in combination with irradiation in human melanoma cells // J. Invest. Dermatol. 2000. - V. 114(5). - P. 935-940.

158. Selzer E., Thallinger C., Hoeller C., Oberkleiner P., Wacheck V., Pehamberger H, Jansen B. Betulinic acid-induced Mcl-1 expression in human melanoma-mode of action and functional significance // Mol. Med. -2002. V. 8(12). - P. 877-884.

159. Setzer W. N., Setzer M. C. Plant-derived triterpenoids as potential antineoplastic agents // Mini Rev. Med. Chem. 2003. - V. 3. - P. 540-558.

160. Shay J. W., Bacchetti S. A. Survey of telomerase activity inhuman cancer //

161. Eur. J. Cancer. 1997. - V. 33. - P. 787-791.

162. Shapiro G. I., Harper J. W. Anticancer drug targets: cell cycle and checkpoint control // J. Clin. Invest. 1999. - V. 104. - P. 1645-1653.

163. Shibata S. A drug over the millennia: pharmacognosy, chemistry, and pharmacology of licorice // Yakugaku Zasshi. 2000. - V. 120(10). - P. 849-862.

164. Schimdt M. L., Kuzmanoff K. L., Ling-Indeck L., Pezzuto J. M. Betulinic acid induces apoptosis in human neuroblastoma call lines // Eur. J. Cancer. -1997.-V. 33.-P. 2007-2010.

165. Shiota G., Harada K., Ishida M., Tomie Y., Okubo M., Katayama S. Inhibotion of hepatocellular carcinoma by glycyrrhizin in diethylnitrosamin-treated mice // Carcinogenesis. 1999. - V. 20(1). - P. 59-63.

166. Sklar L. A., Carter M. В., Edwards B. S. Flow cytometry for drug discovery, receptor pharmacology and high-throughput screening // Curr. Opin. Pharmacol. 2007. V. 7(4). - P. 395-403.

167. Sutherland R. L., Musgrove E. A. Cyclin D1 and mammary carcinoma: New insights from transgenic mouse models // Breast Cancer Res. 2002. - V. 4. -P. 14-17.

168. Suzuki F., Schmitt D. A., Utsunomiya Т., Pollard R. B. Stimulation of host resistance against tumors by glycyrrhizin, an active component of licorice roots // In Vivo. 1992. - V. 6(6). - P. 589-596.

169. Sweet L. I., Passino-Reader D. R., Metier P. G., Omann G. M. Xenobiotic-induced apoptosis: significance and potential application as a general biomarker of response // Biomarkers. 1999. - V. 4. - P. 237-253.

170. Taga Т., Suzuki A., Gonzalez-Gomez I., Gilles F. H., Stins M., Shimada H, alpha v-Integrin antagonist EMD 121974 induces apoptosis in brain tumor cells growing on vitronectin and tenascin // Int. J. Cancer. 2002. - V. 98(5). - P. 690-697.

171. Takara K., Obata Y., Yoshikawa E., Kitada N., Sakaeda T. Molecular changes to IleLa cells on continuous exposure to cisplatin or paclitaxel // Cancer Chemother. Pharmacol. 2006. - V. 58(6). - P. 785-793.

172. Takeda K., Stagg J., Yagita H., Okumura K., Smyth M. J. Targeting death-inducing receptors in cancer therapy // Oncogene. 2007. - V. 26(25). - P. 3745-3757.

173. Tan Y, Yu R., Pezzuto J. M. Betulinic acid-induced programmed cell death in human melanoma cells involves mitogen-activated protein kinase activation // Clin. Cancer Res. 2003. V. 9(7). - P. 2866-2875.

174. Tanaka M., Mano N. Inhibition of mutagenicity by glycyrrhiza extract and glycyrrhizin // J. Pharmacobiodyn. 1987. - V. 10(12). - P. 685-688.

175. Tohda С., Tamura Т., Matsuyama S„ Komatsu K. Promotion of axonal maturation and prevention of memory loss in mice by extracts of Astragalus mongholicus //Br. J. Pharmacol. -2006. V. 149(5). P. 532-541.

176. Urech K., Scher J., Hostanska K., Becker H. Apoptosis inducing activity of viscin, a lipophilic extract from Viscum album L // J. Pharm. Pharmacol. -2005.-V. 57(1).-P. 101-109.

177. Vinyals A., Peinado M., Gonzalez-Garrigues M. Failure of wild-type p53gene therapy in human cancer cells expressing a mutant p53 protein // Gene Therapy. 1999. - V. 6. - P. 22-33.

178. Vries E. G., Timmer Т., Mulder N. H., Geelen С. M., Graaf W Т., Spierings D. C. Modulation of death receptor pathways in oncology // Drugs Today (Bare). 2003. -V. 39. - P. 95-109.

179. Wajant H., Gerspach J., Pfizenmaier K. Tumor therapeutics by design: targeting and activation of death receptors // Cytokine Growth Factor Rev. -2005.-V. 16.-P. 55-76.

180. Wan X., Takahashi S., Niwa K. The 5'-end of hTERT mRNA is a good target for hammerhead ribozyme to suppress telomerase activity // Biochem. Biophys. Res.-2001.-V. 61. P. 3053-3061.

181. Wanibuchi H., Wei M., Salim E. I., Kinoshita A., Morimura K. Inhibition of rat urinary bladder carcinogenesis by the antiangiogenic drug TNP-470 // Рас. J. Cancer Prev. 2006. - V. 7(1). - P. 101-107.

182. Wang Z. Y., Nixon D. W. Licorice and cancer // Nutr. Cancer. 2001. - V. 39(1).-P. 1-11.

183. Wang J. L., Zhang Z. J., Choksi S., Shan S., Lu Z., Croce С. M. Cell permeable Bcl-2 binding peptides: a chemical approach to apoptosis induction in tumor cells // Cancer Res. 2000. - V. 60(6). - P. 1498-502.

184. Walczak Я, Miller R. E., Ariail K., Gliniak В., Griffith T. S., Kubin M., Tumoricidal activity of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in vivo // Nat. Med. 1999. - V. 5(2). - P. 146-147.

185. Walter-Yohrling J., Morgenbesser S., Rouleau C., Bagley R., Callahan M., Weber W., Teicher B. A. Murine endothelial cell lines as models of tumor endothelial cells // Clin. Cancer Res. 2004. - V. 10(6). - P. 2179-2189.

186. Watson M. В., bind M. J., Cawbvell L. Establishment of in vitro models of chemotherapy resistance // Anticancer Drugs. 2007. - V. 18. - P. 749-754.

187. Williams M. E., Densmore J. J. Biology and therapy of mantle cell lymphoma // Curr. Opin. Oncol. 2005. - V. 17. - P. 425-431.

188. Wilson J. K., Sargent J. M., Elgie A. W., Hill J. G., Taylor C. G. A feasibility study of the MTT assay for chemosensitivity testing in ovarian malignancy I I Br. J. Cancer. 1990. -V. 62(2). - P. 189-194.

189. Wong H., Anderson W. D., Cheng Т., Riabowol К. T. Monitoring mRNA expression by polymerase chain reaction: the "primer-dropping" method // Anal. Biochem. 1994. - V. 223(2). - P. 251-258.

190. XiangH., Schevzov G., Gunning P., Williams H. M., SilinkM. A comparative study of growth-inhibitory effects of isoflavones and their metabolites on human breast and prostate cancer cell lines // Nutr. Cancer. 2002. - V. 42(2). - P. 224-232.

191. Yamori T. Panel of human cancer cell lines provides valuable database for drug discovery and bioinformatics // Cancer Chem. Pharmacol. 2003. - V. 52. - P. 74-79.

192. Yanagihara K., Ito A., Tuge Т., Numoto M. Antiproliferative effects of isoflavones on human cancer cell lines established from gastrointestinal tract // Cancer Res. 1993. - V. 53. - P. 5815-5821.

193. Yang Y., Chen Y., Zhang C., Huang H., Weissman S. M. Nuclear localization of hTERT protein is associated with telomerase function // Exp. Cell Res. -2002.-V. 277.-P. 201-209.

194. Yasunari Т., Baharat B. A. Betulinic acid suppress carcinogen-induced NF-kB Activation through inhibition of 1кВа kinase and p65 phosphorylation: abrogation of cyclooxygenase-2 and matrix metallopotease-9 // J. Immunol. -2003. V. 171.-P. 3278-3286.

195. Yip M. Т., Chen I. S. Modes of transformation by the human T-cell leukemia viruses // Mol. Biol. Med. 1990. - V. 7(1). - P. 33-44.

196. Yogeeswari P., Sriram D. Betulinic acid and its derivatives: a review on their biological properties // Curr. Med. Chem. 2005. - V. 12(6). - P. 657-666.

197. Yoshikawa M., Matsuda H. Antidiabetogenic activity of oleanolic acid glycosides medicinal foodstuffs // Biofactors. 2000. - V. 13(1). - P. 31-37.

198. Yoshikawa M., Toyhara M., Ueda S., Shiroi A., Takeuchi H., Nishiyama T. Glycyrrhizin inhibits TNF-induced, but not Fas-mediated, apoptosis in human hepatoblastoma line HepG2 I I Biol. Pharm. Bull. 1999. - V. 22(11). -P. 1163-1166.

199. Yoshiki Y., Kudou S., Okubo K. Relationship between chemical structures and biological activities of triterpenoid saponins from soybean // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1998. - V. 62(12). - P. 2291-2299.

200. You Y J., Kim Y, Nam N. H., Ahn B. Z. Synthesis and cytotoxic activity of A-ring modified betulinic acid devatives // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003. - V.13. - P.3137-3140.

201. Yun Y., Han S., Park E., Yim D., Lee С. K. Immunomodulatory activity of betulinic acid by producing proinflammatory cytokines and activation of macrophages // Arch. Pharm. Res. 2003. - V. 26(12). - P. 1087-1095.

202. Zuco V., Supino R., Righetti S. C., Cleris L., Marchesi E., Gambacorti-Passerini C. Selective cytotoxicity of betulinic acid on tumor cell lines, but not on normal cells // Cancer Lett. 2002. - V. 175(1). - P.17-25.1. ОТ АВТОРА