Исследование повреждения и процессов восстановления сетчатки глаза мышей после облучения ускоренными протонами и действия метилнитрозомочевины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.01, кандидат наук Виноградова, Юлия Вячеславовна

• Виноградова, Юлия Вячеславовна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Виноградова, Юлия Вячеславовна

Оглавление

Использованные сокращения

Введение

Глава 1. Литературный обзор

1.1. Строение сетчатки глаза животных

1.2. Резистентность сетчатки глаза при действии генотоксических агентов

1.3. Факторы, приводящие к цитотоксическшь последствиям для сетчатки глаза

1.3.1. Радиационное воздействие на человека при осуществлении пилотируемых космических полетов

1.3.2. Радио-, химиотерапия и вторичные патологии зрения

1.4. Действие метилнитрозомочевины на сетчатку глаза животных

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Содержание мышей

2.2. Облучение животных

2.3. Введение животным метилнитрозомочевины

2.4. Выделение сетчатки глаза мышей и приготовление суспензии ее клеток

2.5. Приготовление препаратов для морфологических исследований

2.6. Вестерн-анализ белков Р53 и АТМ

2.7. Иммуноцитохимическое определение экспрессии белков

2.8. ТиМЕЬ-детекция гибели клеток

2.9. Регистрация электроретинограммы

2.10. Визуализация глиалъных клеток Мюллера в срезах сетчатки глаза

2.11. Метод ДНК-комет

Глава 3. Результаты исследования

3.1. Реакция сетчатки глаза мышей на облучение ускоренными протонами

3.2. Влияние метилнитрозомочевины на сетчатку глаза мышей

3.3. Спонтанные повреждения и репарация ДНК в клетках сетчатки глаза мышей

3.4. Адаптивный ответ сетчатки глаза мышей на введение метилнитрозомочевины и облучение протонами

Глава 4. Обсуждение результатов исследования

4.1. Генотоксическая устойчивость сетчатки глаза мышей

4.2. Структурное и функциональное восстановление сетчатки глаза мышей после генотоксического воздействия

Выводы

Заключение

Список литературы

Использованные сокращения

BrUdR Бромдезоксиуридин (bromodeoxyuridine)

Casp 3 Каспаза-3 (Caspase-3)

dsDNA Двунитевая ДНК (double strand DNA)

DTIC Дакарбазин (5-(3,3-Dimethyl-l-triazenyl)imidazole-4-

carboxamide)

FasR Трансмембранный гликопротеид (FasR/APO-l/CD95,

Mw 45000), принадлежащий суперсемейству рецепторов TNF (Tumor Necrosis Factor) FITC Флуоресцеинизотиоцианат (fluorescein isothiocyanate)

mt Момент хвоста кометы (Tail Moment)

МАР-киназа Митоген активированные белки

NER Эксцизионная репарация нуклеотидов (nucleotide excision

repair)

PBS Фосфатно-солевой буфер (Phosphate-Buffered Saline)

ssDNA Однонитевая ДНК (single strand DNA)

Topo 2 Топоизомераза 2 (Topoisomerase 2)

TUNEL Terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated deoxyuridine

triphosphate-digoxygenin nick-end labeling XIAP X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis

ATM Ataxia telangiectasia mutated

АФК Активные формы кислорода

ГКИ Галактическое космическое излучение

ГКМ Глиальные клетки Мюллера

ИИ Ионизирующее излучение

ЛПЭ Линейная передача энергии

МНМ Метилнитрозомочевина (Methylnitrosourea)

РПЭ Ретинальный пигментный эпителий

Солнечное космическое излучение Фоторецепторные клетки Электроретинограмма

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование повреждения и процессов восстановления сетчатки глаза мышей после облучения ускоренными протонами и действия метилнитрозомочевины»

Введение

Актуальность проблемы. Исследование патогенеза дегенеративных заболеваний сетчатки глаза является ключевой и до сих пор нерешенной проблемой современной экспериментальной и клинической офтальмологии. Значительный вклад в возникновение и развитие этих патологий вносят генотоксические факторы внешней среды — радиация и химические вещества. Изучение механизмов действия этих факторов на сетчатку глаза принципиально важно для оценки рисков постлучевых осложнений, возникающих при лучевой терапии глаза и мозга и, как правило, в сочетании с химиотерапией. Пострадиационная ретинопатия и когнитивные расстройства часто являются нежелательными побочными эффектами при радиотерапии, поскольку локальные дозы на органы головы человека могут быть весьма значительными. Так, при радиотерапии опухолей носоглотки и глаза суммарная доза облучения может превышать 50 Гр, а при протонной терапии меланомы глаза кумулятивная доза фракционированного облучения составляет 54-75 Гр.

Радиационный фактор также представляет вполне реальную опасность для сетчатки глаз космонавтов при осуществлении длительных космических полётов. В последнем случае речь идёт о повреждающем действии тяжёлых заряженных частиц Галактического космического излучения при длительных полетах вне магнитосферы Земли. При этом клинически значимые повреждения могут возникать не непосредственно после воздействия, а спустя месяцы и даже годы, что важно для разработки средств профилактической терапии, базирующейся на способности сетчатки к восстановлению.

Цитотоксическая химиотерапия также вызывает офтальмологические осложнения в виде обратимых и необратимых острых и хронических глазных заболеваний. Базовым компонентом стандартных протоколов химиотерапии, в том числе меланомы, являются метилнитрозомочевина (МНМ) и ее производные. Метилнитрозомочевина - монофункциональный метилирующий

агент, вызывающий повреждение ядерной ДНК в клетках млекопитающих. В середине 90-х годов в литературе появились сообщения о цитотоксическом действии супермутагена МНМ на клетки сетчатки глаза лабораторных животных (Yuge К. et al, 1996). Особенностью действия МНМ является ее высокая избирательная цитотоксичность по отношению только к фоторецепторным клеткам сетчатки (Tsubura A. et al, 2011), что делает МНМ удобным инструментом для изучения дегенерации сетчатки и оценки эффективности веществ и процедур, препятствующих ее развитию.

Основу зрелой сетчатки глаза млекопитающих составляют терминально дифференцированные клетки, утративших свой регенеративный потенциал. Для них апоптоз представляется гибельным, угрожающим существованию органа и организма в целом. Вместе с тем в эмбриогенезе глаза апоптоз играет важную роль. По мере дифференцировки клеточных элементов сетчатки частота апоптоза снижается (Walsh К., Perlman H., 1997). Таким образом, зрелая сетчатка приобретает высокую устойчивость к генотоксическому стрессу и связанному с ним апоптозу. Ранее разными авторами была показана резистентность сетчатки по отношению как к ионизирующему излучению (Gorgels T. et al., 2007, Тронов В.А. и соавт., 2008, Amoaku W.M. et al., 1992), так и к действию алкилирующих агентов (Jenkins G.J.S. et al., 2005). Также было показано, что дозы, вызывающие детектируемые морфологические изменения сетчатки глаза, превышают летальные дозы для исследуемого животного при общем облучении (Gorgels T. et al., 2007; Williams G.R. and Lett J.T., 1996; Keng and Lett, 1981).

Наследственная или вызванная внешним воздействием дегенерация сетчатки начинается с гибели фоторецепторных клеток, вслед за которой разрушается система трофической поддержки ткани, приводящая к гибели нейронов сетчатки глаза (Marc R.E. et al, 2003). Хотя доминирующей формой гибели фоторецепторных клеток сетчатки глаза признается апоптоз (Xu G. Z., 1996; Marigo V., 2007), тем не менее связь повреждения ДНК с гибелью

постмитотических клеток, формирующих сетчатку глаза, в настоящее время не исследована. Показано, что в постмитотических клетках активной сохраняется репарация ДНК, ассоциированная с транскрипцией активных генов, она из разновидностей эксцизионной репарации нуклеотидов (NER) (Nouspikel Т., Hanawalt P.C., 2002; Simonatto M. et al, 2007).

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является исследование повреждающего действия протонов высоких энергий и метилнитрозомочевины на функциональную активность и структуру ДНК клеток сетчатки глаза мышей и оценка способности сетчатки к восстановлению после воздействия этих генотоксических агентов.

На пути ее выполнения решались следующие задачи:

1. Исследовались морфологические изменения сетчатки глаза мышей после действия ускоренных протонов с энергией 150 МэВ и у-излучения 60Со (дозы 14 Гр и 25 Гр) и метилнитрозомочевины (дозы 35 и 70 мг/кг). Данные дозы различаются по их цитотоксичному воздействию на сетчатку.

2. Исследовалось повреждение генома клеток зрелой сетчатки глаза и активность репарационной системы после действия ускоренных протонов, у-излучения и метилнитрозомочевины.

3. Оценивалось изменение функциональной активности сетчатки глаза в ответ на воздействие протонами высоких энергий и метилнитрозомочевиной.

4. Оценивалось адаптирующее действие на сетчатку глаза ускоренных протонов и метилнитрозомочевины в относительно низких дозах и способность сетчатки глаза мышей к восстановлению.

5. Исследовалась роль глиальных клеток Мюллера в повреждении и восстановлении сетчатки глаза мышей после воздействия протонами и метилнитрозомочевиной.

Положения и результаты, выносимые на защиту:

1. Ответ зрелой сетчатки глаза на облучение протонами и инъекцию метилнитрозомочевины свидетельствует о наличии у нее генотоксического порога и способности к структурному и функциональному восстановлению.

2. Обнаружен адаптивный ответ сетчатки глаза на фракционированное введение метилнитрозомочевины, а также на комбинированное воздействие протонами и введение МНМ.

3. Обнаружено возможное участие глиальных клеток Мюллера в восстановлении от генотоксического стресса.

Научная новизна. В работе впервые:

1. Исследована динамика формирования разрывов ДНК и их последующая репарация in vivo в сетчатке глаза мышей, облученных протонами высоких энергий и у-квантами 60Со. Показано, что в ответ на возникшие повреждения ДНК после облучения возрастает экспрессия генострессовых белков ATM и Р53 в сетчатке глаза, которые стимулируют репарацию ДНК и не вызывают апоптоза поврежденных клеток.

2. Показана нелинейная зависимость ответа сетчатки на воздействия, что говорит о наличии у сетчатки глаза генотоксического порога. Этот порог эквивалентен дозе облучения ускоренными протонами ~ 15 Гр, ниже которого происходит восстановление поврежденого генома а также структурной целостности и функциональной активности сетчатки. При воздействии облучения ускоренными протонами в дозе выше пороговой, 25 Гр или после введения МНМ в дозе 70 мг/кг в сетчатке наблюдались структурная деградация и необратимое снижение/утрата функциональной активности.

3. Показано, что предварительное введение мышам МНМ в нетоксической дозе повышает толерантность сетчатки глаза к последующему действию агента в ретинотоксической дозе. Такое фракционированное воздействие МНМ снижает экспрессию эффекторной апоптотической каспазы-

3 и гибель фоторецепторных клеток по сравнению с однократным воздействием МНМ в ретинотоксической дозе.

4. Показано, что предварительное облучение протонами в дозе 1 Гр вызывает адаптирующий эффект зрелой сетчатки глаза: она приобретает устойчивость к последующему ретинотоксическому действию МНМ. Эффект радиационного гормезиса сетчатки согласуется с возрастанием эффективности репарации двунитевых разрывов ДНК.

5. Обнаружена активация глиальных клеток Мюллера (ГКМ) в сетчатке глаза в ответ на инъекцию мышам МНМ в дозе 70 мг/кг. Отмечается тенденция к снижению числа активированных ГКМ в сетчатке глаза после последовательного введения МНМ в дозе 17 и 70 мг/кг.

6. Показано наличие в сетчатке глаза спонтанных повреждений ДНК в виде щелочелабильньтх сайтов, которые являются окси-модифицированными основаниями ДНК.

Научно-практическая значимость работы. Результаты проведенного исследования имеют теоретическое и практическое значение для решения фундаментальной проблемы повреждения и восстановления терминально дифференцированных клеток и, состоящих из них, тканей (в данном случае сетчатки глаза). Результаты по восстановлению и гормезису сетчатки глаза могут быть использованы для оптимизации радио- и химиотерапии опухолей головы, мозга, шеи и глаз (подбор дозы фракционированного воздействия, длительности интервалов между фракциями).

Модель МНМ-индуцированной дегенерации сетчатки глаза может использоваться для первичной оценки эффективности лекарственных средств, препятствующих дегенерации сетчатки, и для прогноза опасности ретинотоксического воздействия на человека радио- и химиотерапевтических процедур. Полученные данные также могут послужить прогностическим показателем влияния условий космоса на человека при осуществлении длительных пилотируемых космических полетов.

Глава 1. Литературный обзор

и

Как известно, зрительный процесс базируется на прямом воздействии сфокусированных световых лучей на высокочувствительные нейроны глаза. Для его осуществления требуется развитая сеть кровеносных сосудов, благодаря которым в глазах обеспечиваются процессы клеточного катаболизма и метаболизма. В зрительном процессе важная роль принадлежит сетчатке глаза. Она является высоко специализированной многослойной нейрональной тканью, функция которой состоит в осуществлении световой перцепции и процессинга первичного сигнала.

1.1. Строение сетчатки глаза животных

Сетчатая оболочка глаза мышей состоит из 10 слоев (рис. 1): внутренней пограничной мембраны, слоя волокон зрительного нерва, слоя ганглиозных клеток, внутреннего плексиформного слоя, внутреннего нуклеарного слоя, наружного плексиформного слоя, наружного нуклеарного слоя, наружной пограничной мембраны, слоя палочек и колбочек и пигментного эпителия (Шамшинова A.M. и Волков В.В., 1999). Клетки ретинального пигментого эпителия (РПЭ) формируют первый слой сетчатки. Он оказывает трофическую поддержку и выполняет важную роль в регенерации сетчатки. Благодаря наличию в клетках этого слоя пигмента меланина, в нем поглощается и рассеивается ультрафиолетовый свет и снижается его разрушительное действие на сетчатку, что обеспечивает создание в сетчатке первого защитного барьера (Siu T.L., Morley J.W. and Coroneo M.T., 2008). Эпителиальные клетки регулируют также транспорт питательных веществ и продуктов метаболизма. Наряду с этим, РПЭ обладают фагоцитарной активностью и участвуют в процессе постоянного обновления внешних сегментов фоторецепторных клеток. РПЭ содержат крупные лизосомы, которые осуществляют лизис сегментов и экспорт содержимого к кровеносным капиллярам хороида (сосудистой оболочки глаза). Кроме того, пигментный эпителий содержит

Рис. 1. Схема и микрофотография сетчатки глаза мышей: 1- внутренняя пограничная мембрана, 2 - слой волокон зрительного нерва, 3 - слой ганглиозных клеток, 4 - внутренний плексиформный слой, 5 - внутренний нуклеарный слой, 6 - наружный плексиформный слой, 7 - наружный нуклеарный слой, 8 - наружная пограничная мембрана, 9 - слой палочек и колбочек и 10 - слой пигментного эпителия. (Логинова и др., 2008, http://webvision.med.utah.edU/sretina.html#overview)

фермент изомеразу, превращающую all-trans ретиналь в 11-цис-ретиналь, необходимый для осуществления зрительного цикла (Strauss О., 2005).

В сетчатке глаза различают три иерархически организованных клеточных слоя: наружный ядерный слой (outer retina), представленный ядрами фоторецепторных клеток и их сегментами; внутренний слой (inter retina), состоящий из биполярных клеток (нейроцитов) и слой ганглиозных нейроцитов. Из отростков (аксонов) ганглиозных нейроцитов формируется зрительный нерв, который направляется в мозг. Зрительный сигнал, формируемый в фоторецепторных клетках, передается к биполярным и ганглиозным нейроцитам.

В межклеточном пространстве сетчатки располагаются большие глиальные клетки Мюллера (ГКМ). Они радиально пронизывют все слои от фоторецепторных клеток до хороида сетчатки. Известно, что глиальные клетки Мюллера выполняют опорную, буферную и трофическую функции. ГКМ играют важную роль в поддержании стабильности всех нейрональных функций в центральной нервной системе. Предполагается также их важная роль в процессах регенерации сетчатки (Bernardos R.L. et al., 2007).

Клеточный состав зрелой сетчатки глаза был исследован

о

авторадиографически после введения 6-недельным мышам Н-тимидина (Young R.W., 1985). Показано, что в сетчатке глаза фоторецепторные клетки (ФР) составляют 73%, биполяры — 20%, клетки Мюллера — до 6%. Также содержится небольшое число (около 1 %) амакриновых и ганглиозных клеток.

1.2. Резистентность сетчатки глаза при действии генотоксических агентов

Сетчатка глаза постоянно подвергается воздействию факторов, индуцирующих разные виды ретинопатии: соматических токсинов, окислительного стресса, сфокусированного света, химических и физических агентов (в том числе радиационное воздействие). Изучение радиационного поражения тканей глаза началось с открытием рентгеновских лучей. К

настоящему времени накопились многочисленные данные (таблица 1) о чувствительности тканей глаза к действию рентгеновского излучения (Клгшап й а1., 2003).

Таблица 1. Чувствительность тканей глаза человека к действию рентгеновского излучения (Ипуап 1.Р. & а1., 2003)

Ткани глаза Доза, сГр Латентный период Эффект

5000 4-6 нед Конъюнктивит

Конъюнктива 3000-5000 >5000 2-4 нед Поздняя телеангиэктазия сосудов Эпителиальная кератинизация

5000 12 лет Цитологические изменения Симблефарон

Роговица 2000 >2000 4-6 нед Мягкий точечный кератит Язва эпителия и отек стромы

Склера 750 >10 лет Утоньшение склеры

2400 3-20 лет Некроз, инфекционный склерит

Сосудистая оболочка глаза 1000-2000 6000-8000 3-4 сут 6-8 нед Мягкий преходящий уверит Стойкий уверит

Хрусталик 250 750 от 6 мес до 20 лет Непрогрессирующие помутнение хрусталика Катаракта (50% — прогрессирующая)

Сетчатка 1500 8-24 сут Мягкая форма ретинопатии (Perrers-Taylor М. et al.,1965)

3000 >6 мес Высокий риск лучевой ретинопатии (Brown G.C. et al., 1982)

Клетки, составляющие сетчатку глаза, являются постмитотическими, за исключением глиальных клеток и клеток ретинального пигментного эпителия. Поскольку, в соответствии с правилом J. Bergonie и L.Tribondeau (1906), радиочувствительность клеток тем выше, чем интенсивней они делятся и чем менее они дифференцированы, сетчатка глаза является довольно радиорезистентной тканью, что находит отражение в величинах повреждающих ее доз облучения (таблицы 1 и 2). Как видно из таблицы 2, дозы, вызывающие детектируемые морфологические изменения, превышают летальные дозы для исследуемого животного при общем облучении (Gorgels Т., Pluijm I. and Brandt R., 2007; Williams G.Rand LettJ.T., 1996; Keng С. and Lett J.T., 1981).

Таблица 2. Чувствительность сетчатки глаза животных к действию ИИ

Виды животных Эффект Виды излучений Пороговая доза, Гр Латентный период Литература

Мыши Апоптоз ФР и РПЭ /-кванты 18,5-25 7 сут Gorgels Т., Pluijm I. and Brandt R., 2007

Крысы Гибель ФР Гибель РПЭ /-кванты 10 5 20 15 1 мес 6 мес 1 мес 6 мес Amoaku W.M. etal., 1989; Amoaku W.M. etal., 1992

Кролики Гибель ФР Утрата ЭРГ 20Ые, 40Аг, 56Ре - в пике Брэгга; /-кванты 2-10 45 0,5 - 2,5 года Williams G.R. and Lett J.T., 1994; Williams G.R. and Lett J.T. 1996; KengC. and Lett J.T., 1981

Зачастую ответ сетчатки на облучение обнаруживается не непосредственно после воздействия, а в отдаленный период через месяцы и

даже годы (таблица 3). Также он зависит от дозы ионизирующего излучения (ИИ) и видовой принадлежности организма.

Таблица 3. Ответ сетчатки in vivo на локальное облучение глаза крыс

Вид ионизирующего излучения Доза, Гр Период наблюдения Реакция сетчатки глаза Литература

Рентгеновское 2-20 30 сут, электронная микроскопия ФР не изменены (< 10 Гр) В РПЭ происходит разбухание митохондрий (>5 Гр) Летального исхода не наблюдается (20 Гр) Amoaku W.M. et al., 1989

Рентгеновское <20 6 мес, электронная микроскопия 1 год В ФР наблюдаются изменения (>5 Гр) В РПЭ повреждений не обнаружено (15 Гр) Доминирует реакция сосудов В нейронах и глиальных клетках повреждений не обнаружено Amoaku W.M., et al., 1992

Рентгеновское 15 6 мес Наблюдается повреждение сегментов и ядер ФР Stitt A.W. et al., 1994

Протонное 8 и 28 >3 мес Повреждение и истощение ядерного слоя ФР Снижение длины ретинальных капилляров Мао X.W. et al., 2009

Рентгеновское 20-25 7 сут Полное исчезновение ФР Gorgels Т., et al., 2007

Во многих работах по электронной микроскопии срезов сетчатки глаза животных отмечается, что наиболее радиочувствительными являются

фоторецепторные клетки. У них наиболее чувствительными являются сегменты. Они повреждаются и разупорядочиваются ранее, чем наблюдаются какие-либо изменения в ядрах фоторецепторных клеток. Более того, клетки ретинального пигментного эпителия (РПЭ), сохраняющие способность к делению, оказываются даже более радиоустойчивыми по сравнению с неделящимися фоторецепторными клетками (Amoaku W.M. et al., 1989; Amoaku W.M. et al., 1992). Хотя в приведенных работах исследуемые дозы превышают 10 Гр, имеются данные, свидетельствующие о том, что облучение в меньших дозах может вызывать биохимические изменения в сетчатке глаза. После облучения глаз крыс протонами в дозах 0,5 - 4 Гр рядом авторов (Мао X.W. at al. 2010) наблюдалась активация генов, продуцирующих окси-стресс в сетчатке глаза (Fmo2, Gpx2, Noxal and Sod3), и экспрессия проапоптотических генов Fas и Faslg. Это указывает на вероятность возникновения индуцированного протонами окси-стресса, а также на связанный с ним апоптоз, который является предпосылкой необратимых структурных изменений в сетчатке глаза.

В результате воздействия ионизирующих излучений в сетчатке глаза происходили функциональные изменения. Они регистрировались с помощью электроретинограммы (ЭРГ). Показано, что зависимость амлитуды а- и ¿-волн электроретинограммы от дозы облучения (у-кванты 60Со, ускоренные ионы "С) напоминает аналогичную зависимость для светового воздействия (Sannita W.G. et al., 2007; Труханов К.А. и др., 2001).

С увеличением дозы облучения сетчатки глаза мышей ускоренными 1 ^

ионами "С наблюдалось снижение амплитуды а- и ¿-волн ЭРГ, а также отмечалась тенденция к сглаживанию ее профиля (Sannita W.G. et al., 2007). Снижение амплитуды ЭРГ у кроликов после у-облучения и облучения тяжелыми ионами в дозах 20-45 Гр также отмечено в исследовании ряда авторов (KengC. and LettJ.T., 1981). Однократное облучение кроликов у-квантами или разными видами тяжелых заряженных частиц в дозах, не превышающих 41 Гр, сопровождалось восстановлением амплитуды ЭРГ до

нормы через 48 часов. Стремительная утрата электрической активности сетчатки глаза и величина дозы, при которой это происходит, позволяют предположить, что дозолимитирующим фактором физиологической активности нервной ткани у кроликов являются морфологические повреждения ткани. Другими словами, функциональное изменение сетчатки глаза является вторичным по отношению к структурным и морфологическим нарушениям. Тогда следует признать наличие радиационного порога морфологических изменений в ответе сетчатки глаза мышей на облучение.

1.3. Факторы, приводящие к цитотоксическнм последствиям для сетчатки глаза

Зрительная система вообще и сетчатка глаза, в частности, представляются довольно устойчивыми структурами к действию ионизирующей радиации. В то же время значительные контингента людей оказываются, по разным причинам, в условиях, когда цитотоксическое воздействие генотоксикантов превышает уровень устойчивости сетчатки, а также когда тип этого воздействия не является адаптивным для человека. Это может происходить, по крайней мере, в трех ситуациях: при проведении радиационной терапии опухолей мозга и меланомы глаза, при химиотерапии онкологических заболеваний и при осуществлении длительных пилотируемых космических полетов.

1.3.1. Радиационное воздействие на человека при осуществлении пилотируемых космических полетов

Основным поражающим фактором при пилотируемых космических полетах являются потоки заряженных частиц, составляющих Галактическое космическое излучение (ГКИ), и протоны, генерируемые при солнечных вспышках. Поскольку зрительная система (в том числе и сетчатка глаза) характеризуются достаточно высокой степенью радиационной устойчивости, то

следует исключать рентгеновские лучи и у-кванты, как ретинопатические факторы при космических полетах.

Основную часть ГКИ составляют протоны и ионы гелия (до 98%). Остальная часть представлена тяжелыми заряженными частицами (Винклер Дж.Р., 1964; Curtis S.B., 1974). При длительных полетах вне магнитосферы Земли наибольшую биологическую опасность представляет ГКИ из-за высокого содержания высокоэнергетичных тяжелых ядер (http://www.nap.edu/openbook.php7record id= 12045&displayrelatecN22). При прогнозировании длительных космических полетов в глубоком космосе имеют значение следующие особенности протонов и ГКИ:

— протоны солнечных вспышек обладают энергией до нескольких ГеВ/нуклон,

— тяжелые ядра в составе ГКИ характеризуются высокими величинами линейных потерь энергии (ЛПЭ). Поэтому видимый биологический эффект при их воздействии достигается уже при невысоких дозах,

— магнитосфера и атмосфера Земли практически исключают попадание высокоэнергитичных заряженных частиц на ее поверхность. Вследствие этого все живые организмы не имеют эволюционной адаптации к этим воздействиям.

В наземных условиях смоделировать воздействие космических видов излучения возможно лишь в лабораторных экспериментах, проводимых на ускорителях протонов и тяжелых заряженных частиц. В Объединенном институте ядерных исследований для таких экспериментов используются фазотрон, генерирующий протоны с энергией 660 МэВ, Нуклотрон - ускоритель релятивистских тяжелых ядер с энергиями до нескольких ГэВ/нуклон и изохронный циклотрон МЦ-400, ускоряющий заряженные ядра до энергии 50 МэВ/нуклон.

При облучении ретинальных эксплантов эмбрионов цыплят (Vazquez М.Е. and Kirk Е., 2000) морфометрически было показано, что дозы 0,1-0,5 Гр тяжелых ионов железа тормозят формирование нейритов ганглиозными

клетками. Максимальное торможение наблюдалось при дозе 1 Гр. Однако при морфологическом анализе срезов сетчатки глаза крыс после пролета отдельных ускоренных ионов аргона с энергией 570 МэВ/нуклон (доза 1 Гр) во всех слоях облученной сетчатки не было обнаружено «микроповреждений» (Krebs W. et al., 1988). Отмечалось, что облучение сетчатки глаза крыс in vivo ускоренными ионами железа с энергией 450 МэВ/нуклон в дозе 2,5 Гр приводило к 20%-му снижению общего количества клеток пигментного эпителия, фоторецепторов и биполяров. Со временем наблюдалось ее восстановление до контрольных значений. При облучении в дозе 0,1 Гр повреждающий эффект отмечен не был (Krebs W., Krebs I. and Worgul B.V., 1990).

Уже при первых пилотируемых космических полетах космонавты фиксировали появление в глазах световых вспышкек (фосфенов) в виде ярких точек, черточек и линий, двигающихся по зрительному полю. Было высказано предположение, что их появление является следствием пролета заряженных частиц, присутствующих в космических лучах. Эта гипотеза была подтверждена экспериментально. В прямых экспериментах с участием добровольцев аналогичные вспышки наблюдались при пролете через глаз ускоренных тяжелых заряженных частиц с энергией, ниже пороговой для видимого черенковского свечения (Curtis S.B., 1994). Проведенный анализ частоты вспышек в глазах космонавтов показал, что они вызваны, в основном, ионами углерода и/или кислорода. Хотя наблюдения не идентифицировали каких-либо прямых последствий от фосфенов для зрения космонавтов, тем не менее их исследование включено в научные программы по безопасности NASA для космонавтов, работающих на МКС (Sannita W.G., Narici L. and Picozza P., 2006; http://www.nap.edu/openbook.php7record id=12045&page=9).

Следствием воздействия ГКИ на космонавтов могло быть наблюдаемое у них впоследствии возникновение катаракты. Изучение катарактогенеза при действии низких доз радиации способствовало тому, что была пересмотрена норма минимальной дозы радиоактивного излучения, вызывающая образование

катаракты у человека. Если ранее минимальная доза равнялась 2 Гр, то в 2012 г. она была снижена до 0,6 Гр (Thorne М.С., 2012).

Под действием радиации нарушаются процессы образования и миграции волоконных клеток хрусталика глаза. В результате этого в эпителиальном слое появляются пустоты, что ведет к увеличению диффузии молекул кислорода в хрусталик, а в кортексе появляются клетки, содержащие митохондрии. Увеличение концентрации кислорода в хрусталике приводит к усиленшо образования активных форм кислорода (АФК) в митохондриях, откуда они диффундируют в окружающие ткани. Так, взаимодействие АФК с белками хрусталика вызывает денатурацию и агрегацию белка, приводит к нарушению белок-белковых взаимодействий и усилению светорассеяния в цитоплазме хрусталика. Помутнение хрусталика затрагивает сначала кортикальные области, но постепенно распространяется и на его ядерную область. Конечной стадией этого процесса является окислительное повреждение белков цитоплазмы волоконных клеток хрусталика, главным образом, кристаллинов (Муранов К.О. и Островский М.А., 2013).

1.3.2. Радио-, химиотерапия и вторичные патологии зрения

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Виноградова, Юлия Вячеславовна, 2015 год

Список литературы

1. Винклер Дж.Р. Первичные космические лучи // Радиационная опасность при космических полетах. М.: Мир, 1964. С. 25-52.

2. Муранов К.О., Островский М.А. Молекулярная физиология и патология хрусталика глаза. М.: ТОРУС ПРЕСС. 2013. С. 68-89.

3. Разин C.B., Юдинкова Е.Ю. Крупномасштабная фрагментация ДНК при апоптозе: разрезается ли геном по границам топологических доменов? Известия РАН. Сер. Биол. 1998. № 2. С. 167-171.

4. Тронов В.А., Артамонов Д.Н., Абрамов М.Е., Горбачева Л.Б., Личиницер М.Р. Связь эффективности репарации ДНК, уровня экспрессии белков MLH1, MSH2 и FASR в лимфоцитах больных меланомой кожи с клиническим ответом на химиотерапию. Вопросы онкологии. 2011. Т. 5 № 2. С. 165-172.

5. Тронов В.А., Логинова М.Ю., Крамаренко И.И. Метилнитрозомочевина challenge-мутаген в оценке активности коррекционной репарации ДНК (MMR): связь с некоторыми видами рака. Генетика. 2008. № 44. С. 686-692.

6. Тронов В.А., Виноградова Ю.В., Логинова М.Ю., Поплинская В.А., Островский М.А. Механизмы радиорезистентности терминально дифференцированных клеток зрелой сетчатки глаза. Цитология. 2012. Т. 54. № 3. С. 261-269.

7. Труханов К.А., Бриндикова Т.А., Зак П.П., Лебедев В.М., Спасский A.B., Федорович И.Б., Островский М.А. Действие тяжелых заряженных частиц на родопсин и изолированную сетчатку глаза. Доклады Академии Наук. 2001. №377. С. 715-717.

8. Шамшинова A.M., Волков В.В. Функциональные методы исследования в офтальмологии. М.: Медицина. 1999. С. 11.

9. Al-Tweigeri T., Nabholtz J.M., Mackey J.R. Ocular toxicity and cancer chemotherapy. A review. Cancer. 1996. V. 78. № 7. P. 1359-1373.

10. Amoaku W.M., Frew L., Mahon G.J., Gardiner T.A., Archer D.B. Early ultrastructural changes after low-dose X-irradiation in the retina of the rat. Eye. 1989. V. 3.P. 638-646.

11. Amoaku W.M., Mahon G.J., Gardiner T.A., Frew L., Archer D.B. Late ultrastructural changes in the retina of the rat following low-dose X-irradiation. Greafe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 1992. V. 230. P. 569-574.

12. Anderson M.G., Libby R.T., Gould D.B., Smith R.S., John S.W. Highdose radiation with bone marrow transfer prevents neurodegeneration in an inherited glaucoma. PNAS. 2005. V. 102 . № 12. P. 4566-4571.

13. Barabino S., Raghavan A., Loeffler J., Dana R. Radiotherapy-induced ocular surface disease. Cornea. 2005. V. 24. № 8. P. 909-914.

14. Beranek D.T. Distribution of methyl and ethyl adducts following alkylation with monofunctional alkylating agents. Mutat. Res. 1990. V.231. C. 11— 30.

15. Bergonie J, Tribondeau L. Interpretation de quelques resultats de la radiothera - pie et essai de fixation d'une technique rationelle. Comptes Rendus des Seances de I'Academie des Sciences. 1906. V.143. P. 983-985.

16. Bernardos R.L., Barthel L.K., Meyers J.R., Raymond P.A. Late-stage neuronal progenitors in the retina are radial Muller glia that function as retinal stem cells. JNeurosci. 2007 Jun 27. V. 27. №26. P. 7028-7040.

17. Brown G.C., Shields J.A., Sanborn G., Augsburger J.J., Savino P.J., Schlatz N.J. Radiation retinopathy. Ophthalmology. 1982. V.89. P. 1494-1501.

18. Calabrese E.J., Baldwin L.A. Toxicology rethinks its central belief. Nature. 2003. V.421. №6924. P. 691-692.

19. Chalupecky H. Ueber die Wirkung der rontgenstrahlen auf das Aufe und die Haut. Z. Prakt Augenheilk. 1897. V.21. P. 234-239.

20. Champoux JJ. DNA topoisomerases: structure, function, and mechanism. Annu Rev Biochem. 2001. V.70. P. 369-413.

21. Chollangi S., Wang J., Martin A., Quinn J., Ash J.D. Preconditioning -induced protection from oxidative injury is mediated by leukemia inhibitory factor receptor (LIFR) and its ligands in the retina. Neurobiol Dis. 2009. V. 34. № 3. P. 535-544.

22. Collins A.R., Oscoz A.A., Brunborg G., Gaivao I., Giovannelli L., Kruszewski M., Smith C.C., Stetina R. Review. The comet assay: topical issues. Mutagenesis. 2008. V. 23. P. 143-151.

23. Curtis S.B. Historical survey of space radiation biology. Chap. 2 // Space radiation, biology and related topics / Ed. C.A. Tobias and P.W. Todd. N.Y.: Acad. Press, 1974.

24. Curtis S.B. Single-track effects and new directions in GCR risk assessment. Adv Space Res. 1994. V. 14. № 10. P. 885-894.

25. Demizu Y., Murakami M., Miyawaki D., Niwa Y., Akagi T., Sasaki R., Terashima K., Suga D., Kamae I., Hishikawa Y. Analysis of Vision loss caused by radiation-induced optic neuropathy after particle therapy for head-and-neck and skull-base tumors adjacent to optic nerves. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2009. V.75. № 5. P. 1487-1492.

26. Eagle R.C. Jr., Shields C.L., Bianciotto C., Jabbour P., Shields J.A. Histopathologic observations after intra-arterial chemotherapy for retinoblastoma. Arch Ophthalmol. 2011. V. 129. № 11. P. 1416-1421.

27. Fishel M.L., He Y., Smith M.L., Kelley M.R. Manipulation of Base Excision Repair to Sensitize Ovarian Cancer Cells toAlkylating AgentTemozolomide. Clin Cancer Res. 2007. V. 13. P. 260-267.

28. Gao Y., Deng X.G., Sun Q.N., Zhong Z.Q. Ganoderma spore lipid inhibits N-methyl-N-nitrosourea-induced retinal photoreceptor apoptosis in vivo. Exp Eye Res. 2010. V. 90. № 3. P. 397-404.

29. Giralt J., Rey A., Villanueva R., Alforja S., Casaroli-Marano R.P. Severe visual loss in a breast cancer patient on chemotherapy. Med Oncol. 2012. V. 29. № 4. P. 2567-2569.

30. Gorgels T., Pluijm I., Brandt R. Retinal degeneration and ionizing radiation hypersensitivity in a mouse model for cockayne syndrome. Molecular and Cellular Biology. 2007. V.27. P. 1433-1441.

31. Haas A., Pinter O., Papaefthymiou G., Weger M., Berghold A., Schrottner O., Müllner K., Pendí G., Langmann G. Incidence of radiation retinopathy after high-dosage single-fraction gamma knife radiosurgery for choroidal melanoma. Ophthalmology. 2002. V. 109. № 5. P. 909-913.

32. Imperia P.S., Lazarus H.M., Lass J.H. Ocular complications of systemic cancer chemotherapy. Surv Ophthalmol. 1989. V. 34. № 3. P. 209-230.

33. Jenkins G.J.S., Doak S.H., Johnson G.E.,Quick E, Waters E.M., Parry J.M. Do dose response thresholds exist for genotoxic alkylating agents? Mutagenesis. 2005. V. 20. P. 389-398.

34. Johnson G.E., Doak S.H., Griffiths S.M., Quick E.L., Skibinski D.O., Zaír Z.M., Jenkins G.J. Non-linear dose-response of DNA-reactive genotoxins: Recommendations for data analysis. Mutat Res. 2009. V. 678. P. 95-100.

35. Kadauke S., Blobel G.A. Chromatin loops in gene regulation. Biochim. Biophys. Acta. 2009. V.1789. P. 17-25.

36. Keng C., Lett J.T. Effects of heavy ions on rabbit tissues: loss of electroretinogram and DNA repair in retinal photoreceptor cells. International Journal of Radiation Biology. 1981. V.39. P. 655-664.

37. Kirwan J.F., Constable P.H., Murdoch I.E., Khaw P.T. Beta irradiation new uses for an old treatment: a review. Eye. 2003. V. 17. P. 207-215.

38. Kiuchi K., Kondo M., Ueno S., Moriguchi K., Yoshizawa K., Miyake Y., Matsumura M., Tsubura A. Functional rescue of N-methyl-N-nitrosourea-induced retinopathy by nicotinamide in Sprague-Dawley rats. Curr Eye Res. 2003. V. 26. № 6. P. 355-362.

39. Konca K., Lankoff A., Banasik A., Lisowska H., Kuszewski T., Gozdz S., Koza Z., Wojcik A. A cross-platform public domain PC image-analysis program for the comet assay. Mutation Research. 2003. V. 534. P. 15-20.

40. Kouzarides T. Chromatin modifications and their functions. Cell. 2007. V. 128. № 4. P. 693-705.

41. Krebs W., Krebs I., Merriam G.R. Jr., Worgul B.V. The effect of accelerated argon ions on the retina. Radiat Res. 1988. V. 115. № 1. P. 192-201.

42. Krebs W., Krebs I., Worgul B.V. Effect of accelerated iron ions on the retina. Radiat Res. 1990. V. 123. № 2. P. 213-9.

43. Kuniaki Sano K., Miyaji-Yamaguchi M., Tsutsui K.M., Tsutsui K. Topoisomerase lip Activates a Subset of Neuronal Genes that Are Repressed in AT-Rich Genomic Environment. PLoS ONE. 2008. V. 3. № e4103. P. 1-17.

44. Lips J., Kaina B. DNA double-strand breaks trigger apoptosis in p53-deficient fibroblasts. Carcinogenesis. 2001. V.22. P. 579-585.

45. Liu L., Gerson S.L. Therapeutic impact of methoxyamine: blocking repair of abasic sites in the base excision repair pathway. Curr Opin Investig Drugs. 2004. V.5. P. 623-627.

46. Luckey T.D. Radiation hormesis: the good, the bad, and the ugly. Dose Response. 2006. V. 4. № 3. P. 169-190.

47. Mader T.H., Gibson C.R., Pass A.F., Kramer L.A., Lee A.G., Fogarty J., Tarver W.J., Dervay J.P., Hamilton D.R., Sargsyan A., Phillips J.L., Tran D., Lipsky W., Choi J., Stern C., Kuyumjian R., Polk J.D. Optic disc edema, globe flattening, choroidal folds, and hyperopic shifts observed in astronauts after long-duration space flight. Ophthalmology. 2011. V. 118. № 10. P. 2058-2069.

48. Mader T.H., Gibson C.R., Pass A.F., Lee A.G., Killer H.E., Hansen H.C., Dervay J.P., Barratt M.R., Tarver W.J., Sargsyan A.E., Kramer L.A., Riascos R., Bedi D.G., Pettit D.R. Optic disc edema in an astronaut after repeat long-duration space flight. J Neuroophthalmol. 2013. V. 33. №3. P. 249-255.

49. Mao X. W., Crapo J. D., Mekonnen T., Lindsey N., Martinez P., Gridley D. S., Slater J. M. Radioprotective effect of a metalloporphyrin compound in rat eye model. Current Eye Res. 2009. V. 34. P. 62-72.

50. Mao X.W., Green L.M., Mekonnen T., Lindsey N., Gridley D.S. Gene expression analysis of oxidative stress and apoptosis in proton-irradiated rat retina. In Vivo. 2010. V. 24. № 4. P. 425-430.

51. Mao X.W., Pecaut M.J., Stodieck L.S., Ferguson V.L., Bateman T.A., Bouxsein M., Jones T.A., Moldovan M., Cunningham C.E., Chieu J., Gridley D.S. Spaceflight Environment Induces Mitochondrial Oxidative Damage in Ocular Tissue. RadiatRes. 2013. V. 180. № 4. P. 340-350.

52. Marc R.E., Jones B.W., Watt C.B., Strettoi E. Neural remodeling in retinal degeneration. Prog Retin Eye Res. 2003. V. 22. P. 607-655.

53. Marigo V. Programmed cell death in retinal degeneration: targeting apoptosis in photoreceptors as potential therapy for retinal degeneration. Cell Cycle. 2007. V. 6. P. 652-655.

54. Miyachi Y., Kasai H., Ohyama H., Yamada T. Changes of aggressive behavior and brain serotonin turnover after very low-dose X-irradiation of mice. Neurosci Lett. 1994. V.175. P. 92-94.

55. Monroe A.T., Bhandare N., Morris C.G., Mendenhall W.M. Preventing radiation retinopathy with hyperfractionation. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2005. V. 61. № 3. P. 856-864.

56. Nouspikel T. DNA repair in differentiated cells: some new answers to old questions. Neuroscience. 2007. V.145. P. 213-1221.

57. Nouspikel T., Hanawalt P.C. DNA repair in terminally differentiated cells. DNA Repair (Amst). 2002. V. 1. P. 59-75.

58. Olive P.L. DNA damage and repair in individual cells: applications of the comet assay in radiobiology. Int. J. Radiat. Biol 1999. V.75. № 4. P. 395-405.

59. Ostling O., Johanson K.J. Microelectrophoretic study of radiation-induced DNA damages in individual mammalian cells. Biochem Biophys Res Commun. 1984. V. 123. №1. P. 291-298.

60. Otani A., Kojima H., Guo C., Oishi A., Yoshimura N. Low-dose-rate, low-dose irradiation Delays neurodegeneration in a model of retinitis pigmentosa. Am. J. Pathol. 2012. V. 180. №1. P. 328-336.

61. Parsons J.T., Bova F.J., Mendenhall W.M., Million R.R., Fitzgerald C.R. Response of the normal eye to high dose radiotherapy. Oncology (Williston Park). 1996. V. 10 №6. P. 837-847.

62. Perrers-Taylor M., Brinkley D., Reynolds T. Choroido-retinal damage as a complication of radiotherapy. Acta Radiologica: Therapy, Physics, Biology. 1965. V.3.P. 431-440.

63. Petrin D., Baker A., Coupland S.G., Liston P., Narang M., Damji K., Leonard B., Chiodo V.A., Timmers A., Hauswirth W., Korneluk R.G., Tsilfidis S. Structural and Functional Protection of Photoreceptors from MNU-Induced Retinal Degeneration by the X-Linked Inhibitor of Apoptosis. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003. V. 44. P. 2757-2763.

64. Sabourin M., Osheroff N. Sensitivity of human type II topoisomerases to DNA damage: stimulation of enzyme-mediated DNA cleavage by abasic, oxidized and alkylated lesions. Nucleic Acids Res. 2000. V. 28. P. 1947-1954.

65. Salvin J.H., Hendricks D. Ophthalmology manifestations of pediatric cancer treatment. Curr Opin Ophthalmol. 2012. V. 23. № 5. P. 394-9.

66. Sannita W.G., Narici L., Picozza P. Positive visual phenomena in space: A scientific case and a safety issue in space travel. Vision Res. 2006. V. 46. № 14. P. 2159-2165.

67. Sannita W.G., Peachey N.S., Strettoi E., Ball S.L., Belli F., Bidoli V., Carozzo S., Casolino M., Fino L.D., Picozza P., Pignatelli V., Rinaldi A., Saturno M., Schardt D., Vazquez M., Zaconte V., Narici L. Electrophysiological responses of the mouse retina to 12C ions. Neuroscience letters. 2007. V. 416. P. 231-235.

68. Schmid K.E., Kornek G.V., Scheithauer W., Binder S. Update on ocular complications of systemic cancer chemotherapy. Surv Ophthalmol. 2006. V. 51 №1. P. 19-40.

69. Schrogel P., Distel L., Kober L., Pizzolotto C., Teufel A., Vogel C., Eyrich W. Investigation of DNA double-strand breaks induced by high-LET protons. 2009. P. 103-104.

70. Simonatto M., Latella L., Puri P.L. DNA Damage and Cellular Differentiation: More Questions Than Responses J. Cell. Physiol. 2007. V. 213. P. 642-648.

71. Siu T.L., Morley J.W., Coroneo M.T. Toxicology of the retina: advances in understanding the defence mechanisms and pathogenesis of drug- and light-induced retinopathy. Clinical and Experimental Ophthalmology. 2008. V. 36. P. 176-185.

72. Srinivasula S.M., Hegde R., Saleh A., Datta P., Shiozaki E., Chai J., Lee R.A., Robbins P.D., Fernandes-Alnemri T., Shi Y., Alnemri E.S. A conserved XIAP-interaction motif in caspase-9 and Smac/DIABLO regulate caspase activity and apoptosis. Nature. 2001. V. 410. P. 112-116.

73. Stitt A.W., Anderson H.R., Gardiner T.A., Mclntyre I., Archer D.B. The combined effects of diabetes and ionising radiation on the rat retina: an ultrastructural study. Curr Eye Res. 1994. V.13. P. 79-86.

74. Strauss O. The retinal pigment epithelium in visual function. Physiol Rev. 2005. V. 85. P. 845-881.

75. Taverna P., Liu L., Hwang H., Hanson A.J., Kinsella J., Gerson S.L. Methoxyamine potentiates DNA single strand breaks and double strand breaks induced by temozolomide in colon cancer cells. Mutat. Res. 2001. V. 485. P. 269281.

76. Thorne M.C. Regulataing exposure of the lens of the eye to ionizing radiation. J. Radiol. Prot. 2012. V. 32. P. 147-154.

77. Tronov V.A., Konoplyannikov M.A., Nikolskaya T.A., Konstantinov E.M. Apoptosis of unstimulated human lymphocytes and DNA strand breaks induced by the topoisomerase II inhibitor etoposide (VP-16). Biochemistry (Mosc). 1999. V. 64. P. 345-352.

78. Tsubura A., Lai Y.C., Miki H., Sasaki T., Uehara N., Yuri T., Yoshizawa K. Review: Animal models of N-Methyl-N-nitrosourea-induced mammary cancer and retinal degeneration with special emphasis on therapeutic trials. In Vivo. 2011. V. 25. №1. P. 11-22.

79. Tsubura A., Yoshizawa K., Kuwata M., Uehara N. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol. Histopathol. 2010. V. 25. P. 933-944.

80. Valarde ML, Fortoul T.I., Diaz-Barriga F., Mejia J., del Castillo E.R. Induction of genotoxicity by cadmium chloride inhalation in several organs of CD-I moice. Mutagenesis. 2000. V. 15. P. 109-114.

81. Valarde M., Trejo C., Rojas E. Is the capacity of lead acetate and cadmium chloride to induce genotoxic damage due to direct DNA-metal interaction? Mutagenesis. 2001. V. 18. P. 265-270.

82. Varga-Weisz P.D., Wilm M., Bonte E., Dumas K., Mann M., Becker P.B. Chromatin-remodelling factor CHRAC contains the ATPases ISWI and topoisomerase II. Nature. 1997. V. 388. P. 598-602.

83. Vazquez M.E., Kirk E. In vitro neurotoxic effects of 1 GeV/n iron particles assessed in retinal explants. Adv Space Res. 2000. V. 25. №10. P. 20412049.

84. Walsh K., Perlman H. Cell cycle exit upon myogenic differentiation. Curr. Opin. Genet. Dev. 1997. V.7. P. 597-560.

85. Wang A.,L., Lukas T.J., Yuan M., Neufeld A.H. Age-related increase in mitochondrial DNA damage and loss of DNA repair capacity in the neural retina. Neurobiol Aging. 2010. V. 31. P. 2002-2010.

86. Williams G.R, Lett J.T. Damage to the photoreceptor cells of the rabbit retina from 56Fe ions: effect of age at exposure. Advances in Space Research. 1996. V.18. P. 55-58.

87. Williams G.R., Lett J.T. Effects of 40Ar and 56Fe ions on retinal photoreceptor cells of the rabbit: implications for manned missions to Mars. Advances in Space Research. 1994. V.14. P. 217-220.

88. Wohl S.G., Schmeer S.W., Friese T., Witte O.W., Isenmann S. In Situ Dividing and Phagocytosing Retinal Microglia Express Nestin, Vimentin, and NG2 In Vivo. PLoS ONE. 2011. V.6. №8. P. 1-18.

89. Xu G. Z. Apoptosis in human degenerations. Trans. Am. Ophthalmol. Soc. 1996. V.9. P. 411-430.

90. Xu H., Yang J.N., Li X.K., Zheng Q., Zhao W., Su Z.J., Huang Y.D. Retina protective effect of acidic fibroblast growth factor after canceling its mitogenic activity. J Ocul Pharmacol Ther. 2008. V.24. №5. P. 445-51.

91. Yamada M., Wong F.L., Fujiwara S., Akahoshi M., Suzuki G. Noncancer disease incidence in atomic mobm survivors. 1958-1998. Radiat. Res. 2004. V.161. №6. P. 622-632.

92. Yang L., Li D., Chen J., Yang J., Xue L., Hu S., Wu K. Microarray expression analysis of the early N-methy-N-nitrosourea-induced retinal degeneration in rat. Neurosci Lett. 2007 May 11. V.418. №1. P. 38-43.

93. Yoshizawa K., Nambu H., Yang J., Oishi Y., Senzaki H., Shikata N., Miki H., Tsubura A. Mexhanisms of photoreceptor cell apoptosis induced by N-methyl-N-nitrosourea in Sprague-Dauley rats. Lab. Invest. 1999. V.79. P. 13591367.

94. Young R.W. Cell differentiation in the retina of the mouse. Anat Rec. 1985. V.212. №2. P. 199-205.

95. Yuge K., Senzaki H., Nakao I., Miki H., Uyama M., Tsubura A. N-methyl-N-nitrosourea-induced photoreceptor apoptosis in the mouse retina. In Vivo. 1996. V.10.P. 483-488.