Фенотипические изменения клеток пигментного эпителия сетчатки глаза человека in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Ржанова, Любовь Александровна

• Ржанова, Любовь Александровна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Ржанова, Любовь Александровна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Степень разработанности темы

Цель и задачи исследования

Основные положения, выносимые на защиту

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость работы

Апробация результатов

Степень достоверности результатов

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Общее строение глаза и сетчатки позвоночных

1.1. Общее строение глаза позвоночных

1.2. Расположение, строение и функции сетчатки позвоночных

2. Ретинальный пигментный эпителий

2.1. Строение клеток ретинального пигментного эпителия

2.2. Гетерогенность ретинального пигментного эпителия

2.3. Функции ретинального пигментного эпителия

2.4. Развитие ретинального пигментного эпителия

2.4.1. Общие данные по нормальному развитию глаза позвоночных

2.4.2. Первичная индукция и специализация ретинального пигментного эпителия

3. Фенотипические изменения клеток ретинального пигментного эпителия

позвоночных животных и человека

3.1. Фенотипическая пластичность клеток ретинального пигментного эпителия позвоночных животных in vivo

3.3.1. Регенерация ретинального пигментного эпителия млекопитающих

3.3.2. Трансдифференцировка клеток ретинального пигментного эпителия у позвоночных

3.2. Фенотипическая пластичность клеток ретинального пигментного эпителия in vitro

3.3. Фенотипическая пластичность клеток ретинального пигментного эпителия человека

3.3.1. Изменение фенотипа клеток ретинального пигментного эпителия человека in vivo

3.3.2. Изменение фенотипа клеток ретинального пигментного эпителия человека in vitro

3.4. Трансдифференцировка клеток ретинального пигментного эпителия взрослого человека в нейральном направлении

3.4.1. Ростовые и нейротрофические факторы, стимулирующие нейроногенез

Нейротрофические и ростовые факторы периферической и центральной нервной системы

3.4.2. Использование морфогенов для стимулирования в нейральном направлении клеток ретинального пигментного эпителия человека

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материал исследования

2. Методы исследования

2.1. Динамика поведения и фенотипические изменения клеток ретинального пигментного эпителия глаза плодов человека in vitro

2.1.1. Характеристика интактного ретинального пигментного эпителия и сетчатки глаза человека на ранних сроках развития при помощи гистологических и иммуногистохимических

методов исследования

Гистологическое исследование

Иммуногистохимический анализ

2.1.2. Выделение клеток ретинального пигментного эпителия глаза плодов человека

2.1.3. Культивирование клеток ретинального пигментного эпителия глаза плодов человека в средах с высоким содержанием сыворотки

2.1.4. Культивирование клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека на ранних стадиях развития в среде с ростовыми факторами

2.1.5. Анализ фенотипической пластичности клеток ретинального пигментного эпителия глаза

человека ранних стадий развития, культивируемых in vitro

Прижизненное наблюдение (фазово - контрастная микроскопия)

Иммуноцитохимический анализ

2.2. Изменение фенотипа клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека in vitro

2.2.1. Характеристика интактного ретинального пигментного эпителия и сетчатки глаза взрослого человека при помощи гистологических, иммуногистохимических, методов

исследования и метода полимеразной цепной реакции

Гистологическое исследование

Иммуногистохимический анализ

Метод полимеразной цепной реакции

2.2.2. Выделение клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека

2.2.3. Культивирование клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека в средах с высоким содержанием сыворотки

2.2.4. Культивирование клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека в средах с добавление нейротрофических и ростовых факторов: основного фактора роста фибробластов (bFGF) и эпидермального фактора роста (EGF), нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF); цилиарного нейротрофического фактора (CNTF) и нейротропного

фактора мозга (BDNF)

Влияние ростовых факторов основного фактора роста фибробластов (bFGF) и

эпидермального фактора роста (EGF)

Влияние нейротрофических факторов: нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF); цилиарного нейротрофического фактора (CNTF) и нейротропного фактора мозга (BDNF)

2.2.5. Характеристика ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека in vitro

Прижизненное наблюдение (фазово - контрастная микроскопия)

Иммуноцитохимический анализ

Метод полимеразной цепной реакции

МТТ тестирование - колориметрический тест для оценки метаболической активности клеток

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследование изменений поведения и фенотипа клеток ретинального пигментного

эпителия глаза плодов человека IN VITRO

1.1. Характеристика интактного ретинального пигментного эпителия и сетчатки глаза человека на ранних сроках развития

1.1.1. Гистологическое исследование

Ретинальный пигментный эпителий

Сетчатка

1.1.2. Иммуногистохимический анализ

1.2. Анализ фенотипической пластичности клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека на ранних стадиях развития, культивируемых в средах с высоким содержанием сыворотки

1.2.1. Прижизненное наблюдение (фазово - контрастная микроскопия)

1.2.2. Иммуноцитохимический анализ

1.3. Анализ фенотипической пластичности клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека на ранних стадиях развития, культивируемых в средах с добавлением ростовых

факторов (bFGF, EGF) и кондиционированной среды

1.3.1. Прижизненное наблюдение (фазовая контрастная микроскопия)

1.3.2. Иммуноцитохимический анализ

2. Исследование пластических способностей клеток ретинального пигментного

эпителия глаза взрослого человека IN VITRO

2.1. Характеристика интактного ретинального пигментного эпителия и сетчатки глаза взрослого человека

2.1.1. Гистологическое исследование

2.1.2. Иммуногистохимический анализ

2.1.3 Анализ методом полимеразной цепной реакцией

2.2. Характеристика фенотипической пластичности клеток РПЭ глаза взрослого человека, культивируемых в средах с высоким содержанием сыворотки

2.2.1. Прижизненное наблюдение (фазово - контрастная микроскопия)

2.2.2. Иммуноцитохимический анализ

2.2.3. Анализ методом полимеразной цепной реакцией клеточных культур ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека

2.3. Характеристика фенотипической пластичности клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека, культивируемых в средах, содержащих нейротфические и ростовые факторы (bFGF, EGF, BDNF, CNTF, GNTF) с низким содержанием сыворотки

2.3.1. Прижизненное наблюдение (фазово - контрастная микроскопия)

Влияние ростовых факторов: основного фактора роста фибробластов (bFGF) и

эпидермального фактора роста (EGF)

Влияние нейротрофических факторов: нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF); цилиарного нейротрофического фактора (CNTF) и нейротропного фактора мозга (BDNF) на поведение клеток ретинального пигментного эпителия в селективных культурах

2.3.2. Иммуноцитохимический анализ

Влияние ростовых факторов основного фактора роста фибробластов (bFGF) и

эпидермального фактора роста (EGF)

Влияние нейротрофических факторов нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF); цилиарного нейротрофического фактора (CNTF) и нейротропного фактора мозга (BDNF)

2.3.3. Колориметрический МТТ тест для оценки метаболической активности клеток

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Клетки ретинального пигментного эпителия глаза человека на ранних стадиях развития in vitro

Клетки ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека in vitro

78

Иммуноцитохимический анализ и анализ полимеразной цепной реакции клеток ретинального

пигментного глаза человека

Влияние факторов на поведение клеток ретинального пигментного эпителия глаза плодов

человека in vitro

Влияние факторов на поведение клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого

человека in vitro

Клетки ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека I и II субпопуляций

Суспензионные культуры клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека

Сравнение поведение клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека на ранних стадиях развития и глаза взрослого человека in vitro

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А. Рисунки и таблицы к главе 1 «Обзор литературы»

ПРИЛОЖЕНИЕ Б. Рисунки и таблицы к главе 2 «Материал и методы исследования»

ПРИЛОЖЕНИЕ В. Рисунки и таблицы к главе 3 «Результаты исследования»

ПРИЛОЖЕНИЕ Г. Рисунки и таблицы к главе 4 «Обсуждение результатов»

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фенотипические изменения клеток пигментного эпителия сетчатки глаза человека in vitro»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Исследования дифференцировки и пластичности стволовых клеток, а также создание индуцированных плюрипотентных клеток из соматических [Takahashi and Yamanaka, 2006], повлекли за собой новую волну интереса к проблемам де- и трансдифференцировки. Среди разных клеточных популяций, особый интерес вызывают клетки ретинального пигментного эпителия (РПЭ) глаза, которые обладают биологической предрасположенностью к трансдифференцировке. Классическую модель представляют клетки РПЭ глаза низших позвоночных, которые при травме дедифференцируются, а их потомки развиваются в нервные и глиальные клетки, полностью реконструируя сетчатку [Chiba and Mitashov, 2008]. У птиц и млекопитающих трансдифференцировка РПЭ наблюдается только в ранние периоды эмбрионального развития, однако, ее можно стимулировать введением специфических факторов роста, морфогенов и инсерцией генов [Yan et al., 2007; Azuma et al., 2005].

В глазу человека клетки РПЭ под влиянием различных патологических индукторов драматически меняют поведение, активируя процесс смены клеточного фенотипа, подобный трансдифференцировке, что приводит к нарушению зрения и слепоте. Раскрытие механизмов трансдифференцировки клеток РПЭ человека представляет важную фундаментальную и клиническую проблему.

Степень разработанности темы

Изменения дифференцировки в клетках РПЭ человека были обнаружены при различных патологиях глаза, при которых клетки РПЭ активно пролиферировали, мигрировали, теряли пигмент и начинали экспрессировать нехарактерные маркеры [Mann, 1949; Строева, 1971; Панова, 1993; Vemuganti et al., 2002; Toyran et al., 2005]. Сходные процессы наблюдались при культивировании РПЭ человека in vitro. В культурах часть клеток РПЭ глаза взрослого человека проявляет мультипотентность и начинает продуцировать белки-маркеры нейральных стволовых клеток, ранних и поздних стадий дифференцировки нейронов [Dutt et al., 1993; Vinores et al., 1993, 1995; Wu et al., 2005; Kojima et al., 2008; Akrami et al., 2009; Carr et al., 2011; Salero et al., 2012]. В тоже время, при длительном культивировании клетки РПЭ плодов человека способны трансдифференцироваться в клетки хрусталика [Stroeva and Mitashov, 1983;

Salero et al., 2012], подобно клеткам РПЭ взрослого тритона в условиях in vitro [Eguchi, 1979]. В недавней работе была показана способность клеток РПЭ в условиях in vitro экспрессировать маркеры дифференцировки не только нейральных, но и мезенхимальных клеток [Salero et al., 2012]. Эти исследования указывают на то, что клетки РПЭ в определенных условиях in vivo и in vitro могут проявлять мультипотентность и трансдифференцироваться в другие типы клеток [Saini et al, 2016]. Однако процессы трансдифференцировки РПЭ человека изучены мало, поскольку основными объектами исследований являются клетки амфибий, птиц и грызунов.

Изучение особенностей дифференцировки клеток РПЭ и ее изменений in vivo и in vitro необходимо для решения фундаментальных вопросов клеточной дифференцировки, а также биомедицинских проблем, связанных с конверсией РПЭ при врожденной патологии или заболеваний глаза. Особый интерес представляют изменения клеток РПЭ в направлении нейральной дифференцировки, так как открывают возможность получения клеток -предшественников для замещения поврежденных нейронов сетчатки.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - изучение способности клеток РПЭ глаза плодов и взрослого человека к трансдифференцировке в нейральном направлении in vitro.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить поведение и фенотипические изменения клеток РПЭ глаза плодов человека при культивировании:

- отработать условия выделения клеток РПЭ плодов человека, которые обеспечат наиболее продуктивный клеточный выход, и условия, которые позволят нарастить необходимое количество клеток для дальнейшего исследования;

2. Проанализировать поведение и дифференцировку клеток РПЭ плодов человека в средах, содержащих ростовые факторы, которые используют для культивирования нейральных стволовых клеток (НСК);

3. Исследовать способность клеток РПЭ глаза взрослого человека к дифференцировке в другие типы клеток при культивировании:

- подобрать условия выделения клеток РПЭ глаза взрослого человека, которые обеспечат наиболее продуктивный клеточный выход и условия, которые позволят нарастить необходимое количество клеток для дальнейшего исследования.

4. Провести культивирование клеток РПЭ глаза взрослого человека, в средах с добавлением нейротрофических и ростовых факторов (bFGF, EGF, BDNF, CNTF, GNTF).

5. Дать характеристику фенотипической пластичности клеток РПЭ глаза взрослого человека при помощи гистологических, ИЦХ, ПЦР - методов исследования.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Исходная гетерогенность клеток РПЭ плода и взрослого человека проявляется in vitro в особенностях роста клеток и формировании колоний, в специфике пролиферации и дифференцировки в ответ на факторы микроокружения.

2. Дедифференцированные клетки РПЭ человека проявляют тенденцию к нейрональной дифференцировке независимо от возраста донора и использованной среды, что подтверждает экспрессия комплекса нейрональных белков - маркеров.

Научная новизна

Впервые исследовано поведение и фенотипические изменения клеток РПЭ глаза плодов и взрослого человека при разных условиях культивирования. Показана способность клеток к нейральной дифференцировке in vitro и влияние ростовых и нейротрофических факторов. Впервые показано, что гетерогенность клеток РПЭ плодов и взрослого человека проявляется в характере роста клеток и формировании колоний, в особенностях пролиферации и дифференцировки в ответ на различные индукторы в ростовой среде. Показано, что в направленных условиях культивирования клетки РПЭ плода и взрослого человека формируют 3D-сферы, состоящие из малодифференцированных клеток экспрессирующих белки-маркеры плюри - и мультипотентных клеток. Впервые в клетках РПЭ глаза человека in vivo и in vitro обнаружена экспрессия генов, кодирующих транскрипционные факторы плюрипотентных клеток: OCT4 и NANOG. Показано, что дедифференцированные клетки РПЭ глаза человека проявляют тенденцию к нейральной дифференцировке независимо от возраста донора и использованной среды культивирования. Впервые в клетках РПЭ in vitro выявлены специфические маркеры зрелых клеток сетчатки и мозга: рековерин, тирозингидроксилаза, О4, CNPase.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты работы важны для понимания процессов клеточной дифференцировки и решения биомедицинских проблем, связанных с изменениями клеток РПЭ при врожденной патологии и заболеваниях глаза. Разработанные модели in vitro открывают перспективы для исследования патологических процессов глаза человека, связанных с нарушением РПЭ и поисков факторов для их компенсации. Результаты представляют интерес с позиции трансформации клеток РПЭ в нейральном направлении и открывают возможность получения клеток предшественников для изучения замещения поврежденных нейронов сетчатки. Результаты работы используются в чтении курсов и в практических занятиях на кафедрах эмбриологии и клеточной биологии, и гистологии МГУ им. М.В. Ломоносова и в медицинских учебных заведениях.

Апробация результатов

Материалы диссертации были представлены на 31 всероссийских и международных конференциях: «Биология стволовых клеток: фундаментальные аспекты» (Москва, 2005); конференции молодых ученых ИБР РАН (Москва, 2004, 2006, 2007, 2008, 2009, 2011); XIV, XV школах молодых ученых «Актуальные проблемы биологии развития и биотехнологии» (Звенигород, 2005, 2008); «Аутологичные стволовые и прогениторные клетки: экспериментальные и клинические достижения» (Москва, 2008); «Аутологичные стволовые клетки экспериментальные и клинические исследования» (Москва, 2009); научной школе-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина» (Москва, 2010); итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2008-2009 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 20072012 годы» (Москва, 2008, 2009); «Ломоносов-2009», «Ломоносов-2010» (Москва); «Клетки в культуре» (Санкт - Петербург, 2009); «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии» (Санкт-Петербург, 2010); научно-практической конференции по офтальмохирургии с международным участием (Уфа, 2011); V, VI, VII, VIII международном междисциплинарном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, Крым, Украина, 2009, 2010, 2011, 2012, 2014); V Всероссийская научно-практическая конференция "Стволовые клетки и регенеративная медицина" Медицинский научно-образовательный центр

МГУ имени М. В. Ломоносова, Москва, 2013 г.; Международная научная конференция «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» Москва. 16-17 апреля 2014 г.

Степень достоверности результатов

Степень достоверности результатов проведённых исследований опирается на представительность и достоверность данных, корректность методик исследования и проведённых расчётов, выполненных в диссертации. Достоверность результатов исследования обусловлена широким привлечением научных публикаций по теме диссертационной работы, применением совокупности методов, адекватных цели, задачам и логике исследования, качественным анализом исходных данных, аргументированностью научных положений и выводов, представлением основных результатов исследования в профессиональной печати и докладах на научных конференциях.

Исследование проведено с использованием стандартных гистологических, иммуноцитохимических, молекулярно - генетических методов. Работа выполнена на базе лаборатории проблем регенерации ИБР РАН 2008-2016гг.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1. Общее строение глаза и сетчатки позвоночных 1.1. Общее строение глаза позвоночных

Глаз (лат. оси1т) у всех позвоночных животных имеет сходное строение (Рисунок 1.1.)

Walls, 1942).

Роговица (лат. cornea) — передняя наиболее выпуклая прозрачная часть глазного яблока, одна из светопреломляющих сред глаза [Walls, 1942; Вит, 2003]. Хрусталик (лат. lens) образован радиально расположенными хрусталиковыми волокнами (лат. fibra lentis) и заключен в капсулу (лат. capsula lentis), представляющую собой утолщенную базальную мембрану. От экваториальной зоны капсулы отходят тонкие волокна зонулы, образующие ресничный поясок (лат. zonula ciliaris) и прикрепляющиеся в периферической части глаза к цилиарному телу (лат.

corpus ciliare) (ЦТ) [Walls, 1942; Вит, 2003]. Радужка (лат. iris) состоит из наружного и внутреннего листков. В центре радужки имеется круглое отверстие — зрачок, через которое лучи света проникают внутрь глазного яблока и достигают сетчатки [Walls, 1942; Вит, 2003]. Желеобразное стекловидное тело (лат. ^rpus vitreum) заполняет пространство между волокнами зонулы, хрусталиком и сетчаткой (лат. retína). На уровне наружных сегментов фоторецепторов сетчатка находится в тесном контакте с однорядным слоем интенсивно пигментированных эпителиальных клеток, названных пигментным эпителием сетчатки (pars pigmentosa) [Walls, 1942; Вит, 2003]. Ретинальный пигментный эпителий контактирует через мембрану Бруха с сосудистой оболочкой глазного яблока (tunica vasculosa bulbi), которая играет важную роль в обменных процессах, обеспечивая питание глаза и выведение продуктов обмена. Она богата кровеносными сосудами и пигментом (который препятствует проникновению света через склеру, устраняя светорассеяние) [Walls, 1942; Вит, 2003]. Наружная — очень плотная фиброзная оболочка глазного яблока (tunica fibrosa bulbi), выполняет защитную функцию и благодаря тургору обусловливает форму глаза. Она состоит из передней прозрачной части — роговицы, и задней непрозрачной части белесоватого цвета — склеры [Walls, 1942; Вит, 2003].

1.2. Расположение, строение и функции сетчатки позвоночных

Сетчатка (лат. retína) - это тонкая (около 300 мкм) оболочка, выстилающая заднюю стенку глаза человека, представляющая собой структуру, состоящую из 10 слоев. В составе сетчатки различают следующие слои в направлении от внутренней ограничивающей мембраны к наружной ограничивающей мембране: слой нервных волокон, ганглиозный слой, внутренний сетчатый слой, внутренний ядерный слой, наружный сетчатый слой, наружный ядерный слой, слой палочек и колбочек (Рисунок 1.2.).

В сетчатке миллионы нейронов действуют согласованно, обеспечивая восприятие и преобразование электромагнитного излучения видимой части спектра в нервные импульсы, и их первичную обработку. Слой, в котором расположены первые нейроны зрительного анализатора, граничит с РПЭ. В этом слое начальные светочувствительные нейроны фоторецепторов (палочки и колбочки) захватывают фотоны и создают электрофизиологические сигналы. Эти сигналы затем передаются и модулируются вторичными, внутренними интернейронами и, наконец, передаются в головной мозг ганглиозными клетками сетчатки с помощью аксонов. Эти аксоны составляют зрительный нерв [Walls, 1942; Mann, 1949; Вит, 2003]. Нейроны сетчатки - терминально дифференцированные клетки, которые не восполняются при

повреждении и гибель основной популяции приводит к необратимой потере зрения. Это определяет повышенный интерес к разработке терапевтических подходов, включая замену

{ Свет |

Амакриновые клетки

Мюллеровсш клетки

Горизонтальная клетка

...J* w*

(•Л® L

t Импульсы ♦

К диску зрительного * нерва

Ганглисзнал клетка

Внутренний сетчатый слой

Биполярная клетка

} Наружный сетчатый слой

^Фогорецелтор-ные клетки

пигментный эпителий

Рисунок 1.2. Схематическое изображение строения сетчатки глаза позвоночных.

погибших клеток сетчатки эндогенными клетками, полученными благодаря клеточной регенерации, либо с помощью экзогенных клеток - путем клеточной трансплантации [da Cruz et al., 2007].

2.

Ретинальный пигментный эпителий

Пигментный эпителий сетчатки (pars pigmentosa), или по принятой международной терминологии ретинальный пигментный эпителий (РПЭ) [Панова, 1993], является важной частью зрительной системы позвоночных, необходимой для поддержания структурной и функциональной целостности сетчатки глаза.

2.1. Строение клеток ретинального пигментного эпителия

У позвоночных животных и человека в норме РПЭ представляет собой монослой сильнопигментированных, гексагональных, поляризованных, непролиферирующих, высокодифференцированных клеток. Они выстилают заднюю стенку глаза и располагаются между фоторецепторными клетками нейральной сетчатки и сосудистой оболочкой глаза (Рисунок 1.3. а). РПЭ занимает площадь, соответствующую площади склерального отдела глаза, простираясь от головки глазного нерва до зубчатого края сетчатки ora serrata, где переходит в пигментированный эпителий ЦТ, который в свою очередь переходит в пигментированный эпителий радужки [Панова, 1993].

В клетках РПЭ различают три основные поверхности: базальная (обращенная к склере), центральная (боковые поверхности) и апикальная (обращенная к наружным сегментам фоторецепторов (НСФ)) [Bok, 1982, Панова, 1993; Korte et al., 1994]. Базальная поверхность клеток РПЭ представлена многочисленными складками, глубина которых коррелирует с интенсивностью транспорта метаболитов из сосудистой оболочки в сетчатку. Она соединена с мембранной Бруха.

Мембрана Бруха (лат. lamina vitrea) -это внеклеточный слой, к которому прилегают клетки РПЭ и формируют базальную мембрану. Мембрана Бруха формируется клетками РПЭ и клетками сосудистой оболочки глаза. Это многослойная структура, которая состоит из базальной пластинки РПЭ (базальная мембрана РПЭ), внутреннего коллагенового слоя, среднего эластичного слоя, наружного коллагенового слоя и базальной фенестрированной пластинки хориокапилярного эндотелия [Korte et al., 1994; Панова, 1993; Zarbin, 2003].

Клетки РПЭ соединены между собой при помощи латеральных межклеточных контактов, представленных: zonula occludens, zonula adherens и gap junction, благодаря которым образуется непроницаемый гематоретинальный барьер [Панова, 1993; Korte et al., 1994; Strauss, 2005].

На апикальной стороне клетки РПЭ формируют апикальные отростки. Длинные тонкие апикальные отростки находятся между наружных сегментов фоторецепторов (НСФ) и содержат меланиновые гранулы. Короткие не имеют пигментных гранул, они окружают дистальные кончики НСФ и принимают участие в фагоцитозе отработанных дисков НСФ [Панова, 1993; Korte et al., 1994].

Ядро клеток РПЭ овальное или круглое, с равномерно диспергированным хроматином с одним или несколькими ядрышками. Кроме одноядерных в слое РПЭ встречаются двух -, трех, четырехъядерные полиплоидные клетки. Ультраструктурные исследования показали изобилие

шероховатого и гладкого эндоплазматического ретикулума в клетках РПЭ, простирающегося от базальной к апикальной поверхности клеток и митохондрий, концентрирующегося у базальной поверхности клеток [Панова, 1993].

Рисунок 1.3. Схематическое изображение строения и функционирования клеток ретинального пигментного эпителия глаза позвоночных.

а - РПЭ расположен между фоторецепторными клетками сетчатки (1) и сосудистой оболочкой глаза (2); б- функции РПЭ глаза позвоночных (по Strauss, 2005).

Клетки РПЭ содержат микропероксисомы, которые характеризуются каталазной активностью. Они вовлечены в реакцию этерификации витамина А, в транспорте, хранении и метаболизме липидов, включая детоксикацию перекиси водорода. В клетках РПЭ обнаружены мембранные включения, специализированные структуры эндоплазматической сети -миелоидные тела. В околоядерной области обнаруживается аппарат Гольджи. В клетках хорошо развита фаголизосомальная система, связанная с перевариванием фагоцитированных дисков НСФ, деградирующих меланосом и поврежденных клеточных компонентов [Панова, 1993]. В центральной и базальной частях зрелых клеток РПЭ расположены липофусциновые гранулы, которые содержат не полностью переваренные мембранные диски НСФ. Характерным свойством липофусциновых гранул является их способность к аутофлуоресценции.

Спектрофотофлуориметрический анализ показал, что пик возбуждения приходится на 350-370 нм, а пик флуоресценции лежит в пределах 450-470 нм [Wing et al., 1978; Панова, 1993].

Специфическими органеллами клеток РПЭ являются меланосомы или меланопротеиновые гранулы, которые обеспечивают выполнение ряда функций клетками РПЭ. Они поглощают избыток квантов света, тем самым увеличивая разрешающую способность фоторецепторов, защищают сетчатку от повреждающего действия света и ультрафиолета. Меланин участвует в окислительно - восстановительных и свободно - радикальных клеточных процессах, играет роль антиоксидантов, защищая сетчатку и сами клетки РПЭ от повреждающего действия пероксидазного окисления липидного компонента мембранных дисков НСФ [Островский, 1980; Панова, 1993]. Меланин обладает свойствами ионообменника избирательно абсорбирует различные фармакологические агенты, ионы двухвалентных металлов и их соединения, иодаты, оксалаты и др., что предохраняет ферментативные системы сетчатки от поражения этими агентами. Благодаря этим свойствам РПЭ является неотъемлемой частью гематоретинального барьера [Панова, 1993].

2.2. Гетерогенность ретинального пигментного эпителия

Особенно пристально эту проблему изучали Бурке и Геймеланд [Burke and Hjelmeland, 2005]. Они показали, что в монослое РПЭ клетки обладают фенотипической стабильностью, но демонстрируют большую вариабельность по количеству меланиновых и липофусциновых гранул в клетках, а так, же разнообразие в синтезе некоторых белков.

В глазу взрослого человека 4-6 миллионов клеток РПЭ. Несмотря на общность строения, клетки РПЭ не однородны по составу. Во-первых, клетки РПЭ гетерогенны по размеру. Так в области желтого пятна (макулы) клетки небольшие, около 12 мкм и 14 мкм в диаметре, но высокие, а на периферии - они имеют диаметр 60 мкм и изменчивы по высоте. Во-вторых, клетки РПЭ различаются по содержанию меланина. В области макулы клетки темнее, в них содержится большое количество темно-коричневого пигмента меланина, что определяет здесь более эффективную абсорбцию лучей света (наивысшая острота зрения). В-третьих, клетки РПЭ отличаются по строению апикальной клеточной мембраны, а именно по форме ворсинок. Форма ворсинок определяется фоторецептором, который они окружают - палочкой или колбочкой. Известно, что в центральной области пятна фоторецепторы представлены только колбочками, они длиннее обычных, и упакованы плотнее, чем за его пределами. Так как в этой области на одну клетку РПЭ приходится больше фоторецепторов, чем за ее пределами, клетки адаптированы к более высокому уровню переваривания компонентов дисков

фоторецепторов, что подтверждается повышенным уровнем ферментативной активности в макулярных клетках РПЭ. Все выше сказанное свидетельствует о морфологической и функциональной неоднородности клеток РПЭ [Burke and Hjelmeland, 2005].

2.3. Функции ретинального пигментного эпителия

РПЭ выполняет множество важных функций в сетчатке, которые направлены на поддержание структурной целостности сетчатки и сосудистой оболочки (Рисунок 1.3. б). Функции РПЭ хорошо представлены в обзоре Страус [Strauss, 2005].

В РПЭ темно - коричневый пигмент меланин в меланосомах поглощает часть попадающих в глаз лучей света, проходящих сквозь сетчатку, осуществляя защитную функцию. В микроворсинках меланин изолирует наружные сегменты фоторецепторов друг от друга, увеличивая, таким образом, остроту зрения. Кроме того, РПЭ синтезирует транспортный белок транстиретин и содержит большое количество ретинола, обеспечивающего химизм зрительного восприятия [Панова, 1993, Strauss, 2005].

Микроворсинки клеток РПЭ обеспечивают механическую опору хрупким наружным сегментам. Фагоцитоз дисков наружных сегментов - это тоже важная функция. Клетки РПЭ играют важную роль в регенерации хромофоров, осуществляя транспорт витамина А. Так, клетки РПЭ захватывают фотоизомеризованные зрительные пигменты (11-транс-ретиналь), преобразуют их в исходную 11-цис форму и переносят обратно в фоторецепторы. Клеточный ретинальдегид - связывающий белок (cellular retinaldehyde binding protein, CRALBP) в норме присутствующий в клетках РПЭ, вовлечен в регенерацию зрительного пигмента [Панова, 1993, Korte et al., 1994; Strauss, 2005].

Клетки РПЭ, благодаря системе плотных контактов на боковых поверхностях выполняют барьерную функцию между нейральной сетчаткой и капиллярами сосудистой оболочки и регулируют прохождение веществ через эти два слоя. Так в одном направлении, из субретинального пространства к сосудистой оболочке клетки РПЭ транспортируют электролиты и воду, а в другом направлении, из крови к фоторецепторам - глюкозу и другие питательные вещества. На апикальной и базолатеральной мембране клеток РПЭ наблюдается высокий уровень экспрессии белков-транспортеров глюкозы, таких как GLUT1 и GLUT3, опосредующих основной транспорт глюкозы [Strauss, 2005].

Клетки РПЭ неонатальных крыс, плодов человека и взрослых людей экспрессируют электрогенные Na-каналы, через которые активно откачивают Na+, образуя на поверхности РПЭ потенциал около 10 мВ. Это свойство в норме характерно нейронам. №+/К+-АТФазный

транспортер располагается на апикальной стороне клеточной мембраны РПЭ, в отличие от других эпителиальных клеток, где данный насос располагается на базолатеральной стороне [Korte et al., 1994; Strauss, 2005].

Клетки РПЭ экспрессируют рецепторы для ретиноевой кислоты (RAR-p2), для белков CRALBP (клеточный ретинальдегид-связывающий белок) и CRBP (клеточный ретинол -связывающий белок) [Strauss, 2005].

Клетки РПЭ синтезируют и секретируют различные ростовые факторы, а также факторы, которые являются существенными для поддержания структурной целостности сетчатки и хориокапилляров, например, различные типы тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ (TIMPs). Так, TIMP-1 и TIMP-3 являются дополнительными секретируемыми факторами, которые стабилизируют эндотелий, а также внеклеточный матрикс [Strauss, 2005].

Таким образом, РПЭ синтезирует факторы, которые поддерживают выживание фоторецепторов и обеспечивают структурную основу для оптимальной циркуляции и доставки питательных веществ. Клетки РПЭ синтезируют мукополисахариды и факторы роста: фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), фактор роста, вырабатываемый пигментным эпителием (PEDF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), эпидермальный фактор роста (EGF), факторы роста фибробластов (FGF1, FGF2 и FGF5), трансформирующий фактор роста в (TGFP), инсулиноподобный фактор роста-I (IGF-I), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), фактор роста эпителия хрусталика (LEDGF). Секреция одних ростовых факторов направлена на стабилизацию дифференцировки эндотелиальных клеток, а секреция других - на поддержание фоторецепторов. Эта секреция сохраняется во взрослом глазе и обеспечивает тканевую целостность сетчатки [Strauss, 2005].

Секреция ростовых факторов изменяется в ответ на повреждение или ранение, которые стимулируют синтез и секрецию нейропротекторных факторов, включая bFGF и CNTF, что, как полагают, защищает фоторецепторы от светового повреждения. Кроме того, на механическое или тепловое повреждение клетки РПЭ отвечают фиброваскулярной пролиферацией и перемещением пигмента [Strauss, 2005].

Так как РПЭ отделяет внутренние ткани глаза от кровотока, ему приписываются функции, отвечающие за иммунную привилегированность глаза.

В эмбриональных глазах, РПЭ является организатором многих процессов. Он влияет на формирование склеры, дифференцировку НСФ, сосудистого капиллярного слоя, который является главным источником питания фоторецепторов [Mann, 1949, Coulombre, 1979]. РПЭ вызывает стратификацию эмбриональной сетчатки и дифференцировку НСФ в культуре [Liu et al., 1988; Spoerri et al., 1988; Wolburg et al., 1991]. У амфибий и у эмбрионов птиц РПЭ может

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ржанова, Любовь Александровна, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Сравнительный анализ дифференцировки и поведения стволовых клеток человека in vivo и in vitro / М. А. Александрова, Г. Т. Сухих, Р. К. Чайлахян и др. // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2005. -№ 1. - С.44-52.

2. Структура и клеточный состав сфер, культивированных из сетчатки плодов человека / М. А. Александрова, О. В. Подгорный, Р. А. Полтавцева и др. // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2006. - №3. - С.171-178.

3. Способ получения дедифференцированных клеток ретинального пигментного

о

эпителия глаза взрослого человека : пат. 2409663 Российская Федерация, МПК C 12 N 5/071 / М. А. Александрова, Л. А. Милюшина, А. В. Кузнецова ; патентообладатели Фед. аг. по науке и иннов., Учр. Рос. академии наук Ин-т биол. разв. им. Н.К. Кольцова РАН. - № 2009137876/10 ; заяв. 14.10.09 ; опубл. 20.01.11, Бюл. № 2. - 16 с.

4. Витт, В. В. Строение зрительной системы человека / В. В. Витт //Астропринт. -2003. - С. 727.

5. Сравнительный анализ экспрессии генов ассоциированных с нейральными стволовыми клетками в развитии неокортекса мозга и сетчатки глаза человека / Б. И. Вердиев, Л. А. Милюшина, О. В. Подгорный, Р. А. Полтавцева, Р. Д. Зиновьева, Г. Т. Сухих, М. А. Александрова // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2012. - №4. - С. 183 - 191.

6. Исследование регенерации у амфиий в эпоху молекулярно - генетических подходов и медотов / Э. Н. Григорян, Ю. В. Маркитантова, П. П. Авдонин, Е. А. Радугина // Генетика. - 2013. - Т. 49, № 1. - С. 55 - 72.

7. Григорян, Э. Н. Факторы компетенции клеток ретинального пигментного эпителия для репрограммирования в нейрональном направлении при регенерации сетчатки у тритона/ Э. Н. Григорян // Известия РАН. Серия Биологическая. - 2015. -№ 1. - С. 5-16.

8. Кузнецова, А. В. Ретинальный пигментный эпителий глаза взрослого человека — потенциальный источник клеток для восстановления сетчатки / А. В. Кузнецова, Е. Н. Григорян, М. А. Александрова // Цитология. - 2011. - Т. 53, № 6. - С. 505-512.

9. Куренков, В. В. Современные предствления об эмбриогенезе глаза / В. В. Куренков // Офтальмология. - 2004. - Т.1, №1. - С.6-16.

10. Лопашов, Г. В. Развитие глаза в свете экспериментальных исследований / Г. В. Лопашов, О. Г. Строева // М.: Изд-во. АНСССР. - 1963. - С. 205.

11. Максимова, Е. М. Нейромедиаторы сетчатки и перестройки в нервных слоях сетчатки при дегенерации фоторецепторов / Е. М. Максимова //Сенсорные системы. - 2008. - Т. 22, № 1. - С. 36-51.

12. Маркитантова, Ю. В. Исследование паттерна экспрессии регуляторных генов Pax6, Prox1 и Six3 в ходе регенерации структур глаза тритона / Ю. В. Маркитантова, Е. О.Макарьев, Ю. А.Смирнова и др. // Изв. РАН. Сер.биол. - 2004. - № 5. - С. 522-531.

13. Милюшина, Л. А. Модификация клеток ретинального пигментного эпителия глаза человека на ранних стадиях развития / Л. А. Милюшина, Р. А. Полтавцева, М. В. Марей и др.// Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2009. - № 3. - С.128.

14. Милюшина, Л. А. Фенотипическая пластичность клеток ретинального пигментного эпителия глаза взрослого человека in vitro / Л. А. Милюшина, А. В. Кузнецова, Э. Н. Григорян, М. А. Александрова // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2011. -№2.- С.71-76.

15. Милюшина, Л. А. Экспрессия мультипотентных и ретинальных маркеров клетками ретинального пигментного эпителия человека in vitro / Л. А. Милюшина, Б. И. Вердиев, А. В. Кузнецова, М. А. Александрова // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2012. - № 1. - С. 44 - 50.

16. Островский, М. А. Антиокислительная функция экранирующих пигментов глаза / М. А. Островский, А. Е. Донцов, Н. Л. Сакина // Докл. АН СССР. - 1980. - . 255, № 3. - C. 748752.

17. Петтен, Б. М. Эмбриология человека / Б. М. Петтен // Москва. - Медгиз. - 1959. -

С. 768.

18. Панова, И. Г. Цитоструктура и цитохимия пигментного эпителия сетчатки / И. Г. Панова // Изв. РАН. Сер.биол. 1993. - Т. 10. - С. 165- 191.

19. Строева, О. Г. Экспериментальное исследование морфогенетических свойств пигментного эпителия в эмбриогенезе млекопитающих / О. Г. Строева // Журн. общ. биология. - 1960. - Т. 21. - С. 113-121.

20. Строева, О. Г. Морфогенез и врожденные аномалии глаза млекопитающих / О. Г. Строева // Москва, Наука. - 1971 - С. 242.

21. Фалин, Л. А. Эмбриология человека. Атлас / Л. А. Фалин // Москва. Медицина. -1976. - С. 509 - 530.

22. Фрешни, Р. Я. Культура животных клеток / Р. Я. Фрешни // Бином. Лаборатория знаний. - 2010. - С. 706.

23. Fronk, A. H. Methods for culturing retinal pigment epithelial cells: a review of current protocols and future recommendations / A. H. Fronk, E. Vargis // J Tissue Eng. - 2016. - Vol. 7.

24. Abe, T.Dedifferentiation of the retinal pigment epithelium compared to the proliferative membranes of proliferative vitreoretinopathy / T. Abe, M. Sato, M. Tamai // Curr Eye Res. - 1998. -Vol. 17, № 12. - P. 1103-1109.

25. Akrami, H. Retinal pigment epithelium culture;a potential source of retinal stem cells / H. Akrami, Z. S. Soheili, K. Khalooghi and et al. // J Ophthalmic Vis Res. - 2009. - Vol. 4, № 3. - P. 134-141.

26. Albert, D. M. In vitro growth of pure cultures of retinal pigment epithelium / D. M. Albert, M. O. M. Tso, A. S. Rabson // Arch. Ophthalmol. - 1972. - Vol.88. - P.63.

27. Alexiades, M. R. Subsets of retinal progenitors display temporally regulated and distinct biases in the fates of their progeny / M. R. Alexiades, C. L. Cepko // Development. - 1997. - Vol. 124(6). - P. 1119 - 1131.

28. Mature retinal pigment epithelium cells are retained in the cell cycle and proliferate in vivo / H. Al-Hussaini, J.H. Kam, A.Vugler and et al. // Mol. Vis. - 2008. - Vol.14. - P.1784 -1791.

29. Adult human retinal pigment epithelial cells capable of differentiating into neurons / K. Amemiya, M. Haruta, M. Takahashi and et. al. // Biochem. Biophys. Commun. - 2004. - Vol. 316, №1. - P. 1 - 5.

30. The onset of pigment epithelial proliferation after retinal detachment / D. H. Anderson, W. H. Stern, S. K. Fisher and et al. // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. - 1981 - Vol.21. - P.10 - 16.

31. Morphological recovery in the reattached retina / D. H. Anderson, C. J. Guerin, P. A. Erickson and et. al. // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 1986. - Vol. 27, №2. - P.168-83.

32. Angenieux, B. Epidermal growth factor is a neuronal differentiation factor for retinal stem cells in vitro /B. Angenieux, D. F. Schorderet, Y. Arsenij // Stem Cells. - 2006. - Vol. 24, № 3. - P. 696 - 706.

33. Nomalous intraocular and periocular formation of adipose tissue / D. J. Apple , C. Y. Dagher, H. F. Shammas, K. Miller // A. Am. J. Ophthalmol. - 1982. - Vol. 94. - P. 344 - 350.

34. Arsenijevic, Y. Insulin-like growth factor-I is a differentiation factor for postmitotic CNS stem cell-derived neuronal precursors: distinct actions from those of brain-derived neurotrophic factor / Y. Arsenijevic, S. Weiss // J Neurosci. - 1998. - Vol. 18, № 6. - P. 2118 - 2128.

35. The Pax6 isoform bearing an alternative spliced exon promotes the development of the neural retinal structure / N. Azuma, K. Tadokoro, A. Asaka and et al // Hum. Mol. Genet - 2005. -Vol. 14, № 6. - P. 735 - 745.

36. Balmer, J. E. Gene expression regulation by retinoic acid/ J. E. Balmer, R. Blomhoff // J Lipid Res. - 2002. - Vol. 43, № 11. - P. 1773 - 1808.

37. Barishak, Y. In vitro behavior of the pigmented cells of the retina and uvea of the adult eye / Y. Barishak // Acta.Ophthalmol. - 1960. - Vol.38. - P.339.

38. Late-stage neuronal progenitors in the retina are radial Müller glia that function as retinal stem cells / R. L. Bernardos, L. K. Barthel, J. R. Meyers, P. A. Raymond // J Neurosci. - 2007. - Vol. 27, № 26. - P. 7028 - 7040.

39. The other pigment cell: specification and development of the pigmented epithelium of the vertebrate eye / K. Bharti, M. - T. T. Nguyen, S. Skuntz and et al. // Pigment Cell Res. -2006. -Vol.19. - P. 380 - 394.

40. Bok, D. Renewal of photoreceptor cells / D. Bok // Methods Enzymol. - 1982. - 81. - P. 763 - 72.

41. Bredehorn-Mayr, T. Eye Banking. Culture of Retinal Pigment Epithelium Cells / T. Bredehorn-Mayr, G. I. W. Duncker, W. J. Armitage // Dev Ophthalmol. Basel, Karger. - 2009. - Vol 43. -P. 109 - 119.

42. Burke, J. M. Mosaicism of the retinal pigment epithelium: seeing the small picture / J. M. Burke, L. M. Hjelmeland // Mol. Interv. - 2005. - Vol.5. - P. 241 - 249.

43. Burke, J. M. Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt? / J. M. Burke // ProgRetin Eye Res. - 2008. - Vol. 27, № 6. - P. 579-595.

44. The expression of retinal cell markers in human retinal pigment epithelial cells and their augmentation by the synthetic retinoid fenretinide / A. J. Carr, A. A. Vugler, L. Yu and et al // Mol Vis. - 2011. - Vol. 17. - P. 1701 - 1715.

45. Cepko, C. L. Lineage versus environment in the embryonic retina / C. L. Cepko // Trends Neurosci. - 1993. - Vol. 16, № 3. P. 96-97.

46. Cepko, C. L. The roles of intrinsic and extrinsic cues and bHLH genes in the determination of retinal cell fates / C. L. Cepko // CurrOpinNeurobiol. - 1999. - Vol. 9,№ 1. - P. 3746.

47. Functional expression cloning of Nanog, a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cells / I. Chambers, D. Colby, M. Robertson and et al // Cell. - 2003. - Vol. 113, № 5. - P. 643655.

48. Fenretinide-induced neuronal differentiation of ARPE-19 human retinal pigment epithelial cells is associated with the differential expression of Hsp70, 14-3-3, pax-6, tubulin beta-III, NSE, and bag-1 proteins / S. Chen, R. N. Fariss, R. K. Kutty and et al // Mol Vis. - 2006. - Vol. 12. -P. 1355 - 1363.

49. Serum inhibits tight junction formation in cultured pigment epithelial cells / C.-W. Chang, L. Ye, D. M. Defoe, R. B. Caldwell // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 1997. - Vol. 38. - P. 1082 -1093.

50. Visual cycle protein RPE65 persists in new retinal cells during retinal regeneration of adult newt / C. Chiba, A. Hoshino, K. Nakamura and et al. // J. Comp. Neurol. - 2006. - Vol.495. -P.391-407.

51. Chiba, C. Cellular and molecular events in the adult newt retinal regeneration / C. Chiba, V. I. Mitashov // Strategies for retinal tissue repair and regeneration in vertebrates: from Fish to Human // Ed. Chiba Ch. India: Trivandrum Res. Singpost. - 2008.

52. Coulombre, A.J. Roles of the retinal pigment epithelium in the development of ocular tissues / A. J. Coulombre // In: Zinn KM, Marmor MF, editors. The retinal pigment epithelium. Cambridge, Mass.: Harvard University Press. - 1979.

53. Coulombre, J. L. Regeneration of neural retina from the pigmented epithelium in the chick embryo / J. L. Coulombre, A. J. Coulombre // Dev Biol. - 1965. - Vol. 12, № 1. - P. 79 - 92.

54. Creuzet, S. Neural crest derivatives in ocular and periocular structures / S. Creuzet, C. Vincent, G. Couly // Int. J. Dev. Biol. - 2005. - Vol. 49. - P. 161 - 171.

55. RPE transplantation and its role in retinal disease / L. da Cruz, F. K. Chen, A. Ahmado and et al// ProgRetin Eye Res. - 2007. - Vol. 26, № 6. -P. 598 - 635.

56. DelRio-Tsonis, K. Expression of pax-6 during urodele eye development and lens regeneration / K. DelRio-Tsonis, C. H. Washabaugh, P. A. Tsonis // Proc Natl Acad Sci U S A. -1995. - Vol. 92, № 11. - P. 5092 - 5096.

57. DelRio-Tsonis, K. Eye regeneration at the molecular age / K. DelRio-Tsonis, P.A. Tsonis // DevDyn. - 2003. - Vol. 226, № 2. - P. 211-224.

58. Selective blockade of phosphodiesterase types 2, 5 and 9 results in cyclic 3'5' guanosine monophosphate accumulation in retinal pigment epithelium cells / R. M. Diederen, E. C. La Heij, M. Markerink-van Ittersum and et al // Br. J. Ophthalmol. - 2007. - Vol. 91, № 3. - P. 379 - 384.

59. Expression of class III P-tubulin in normal and neoplastic human tissues / E. Draberova, Ivanyi D. ZdenekLukas, V. Viklicky, P. Draber // Springer Berlin. Heidelberg. 1998. Vol. 109, № 3. P. 231 - 239.

60. Class III a-tubulin is constitutively coexpressed with glial fibrillary acidic protein and nestin in midgestational human fetal astrocytes: implications for phenotypic identity / E. Draberova, L. Del Valle, J. Gordon, and et al //J NeuropatholExp Neurol.- 2008. - Vol. 4. -P. 341 - 354.

61. ARPE-19, a human retinal pigment epithelial cell line with differentiated properties / K. C. Dunn, A. E. Aotaki-Keen, F. R. Putkey, L. M. Hjelmeland // Experimental Eye Research. - 1996. -Vol. 62, № 2. - P. 155-169.

62. Transdifferentiation of adult human pigment epithelium into retinal cells by transfection with an activated H-ras proto-oncogene / K. Dutt, M. Scott, P.P. Sternberg and et al // DNA Cell Biol. - 1993. - Vol. 12, № 8. - P. 667 - 673.

63. Dutt, K. Ciliary neurotrophic factor: a survival and differentiation inducer in human retinal progenitors / K. Dutt, Y. Cao, I. Ezeonu // In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. - 2010. -Vol. 46, № 7. - P. 635 - 646.

64. Proxl function controls progenitor cell proliferation and horizontal cell genesis in the mammalian retina / M. A. Dyer, F. J. Livesey, C. L. Cepko, G. Oliver // Nat. Genet - 2003. - Vol. 34, № 1. - P. 53 - 58.

65. Eguchi, G. Lens Transdifferentiation in the Vertebrate Retinal Pigmented Epithelial Cell / G. Eguchi // Prog. Ret. Res. Pergamon Press Ltd. - 1993. - V. 2. Ch. 9. P. 205 - 230.

66. Intermediate filament protein partnership in astrocytes / C. Eliasson, C. Sahlgren, C. H. Berthold and et al // J Biol Chem. - 1999.- Vol. 274, № 34. - P. 23996 - 24006.

67. Engelhardt, M. Adult retinal pigment epithelium cells express neural progenitor properties and the neuronal precursor protein doublecortin / M. Engelhardt, U. Bogdahn, L. Aigner // Brain Res. - 2005. - Vol. 1040. - P.98 - 111.

68. Establishment and Maintenance of In Vitro Cultures of Human Retinal Pigment Epithelium / E. L. Feldman, M. A. Del Monte, M. J. Stevens, D. A. Greene // Methods in Molecular Medicine, Human Cell Culture Protocols, Second Edition, Edited by: G E Jones. - 1996. - Humana Press Inc , Totowa, NJ

69. Fischer, A. J. Nitric oxide synthase-containing cells in the retina, pigmented epithelium, choroid, and sclera of the chick eye / A. J. Fischer, W. K. Stell // J. Comp. Neurol. - 1999. - Vol. 405, № 1. - P. 1-14.

70. Fischer, A. J. Identification of a proliferating marginal zone of retinal progenitors in postnatal chickens / A. J. Fischer, T. A. Reh // Dev. Biol. - 2000. -V. 220. -P. 197-210.

71. Flood, M.T. Growth characteristics and ultrastructure of human retinal pigment epithelium in vitro /M. T. Flood, P. Gouras, H. Kjeldbye // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 1980. - P. 1309-1320.

72. Frayer, W. C. Reactivity of the retinal pigment epithelium: an experimental and histopathologic study / W. C. Frayer // Trans Am Ophthalmol Soc. - 1966. - Vol. 64. - P. 586-643.

73. Fuhrmann, S. Extraocular mesenchyme patterns the optic vesicle during early eye development in the embryonic chick / S. Fuhrmann, E. M. Levine, T. A. Reh // Development. - 2000. - Vol. 127, № 21. - P. 4599 - 4609.

74. Fuhrmann, S. Eye morphogenesis and patterning of the optic vesicle / S. Fuhrmann // Curr Top Dev Biol. - 2010. - Vol. 93. - P. 61 - 84.

75. Development, repair and regeneration of the retinal pigment epithelium / I. Grierson, P. Hiscott, P. Hogg and et al // Eye (Lond). - 1994. - Vol. 8 ( Pt 2). - P. 255 - 262.

76. Grisanti, S. Transdifferentiation of retinal pigment epithelial cells from epithelial to mesenchymal phenotype / S. Grisanti, C. Guidry // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 1995. - Vol.36. - P. 391 - 405.

77. Guillemot, F. Retinal fate and ganglion cell differentiation are potentiated by acidic FGF in an in vitro assay of early retinal development / F. Guillemot, C. L. Cepko // Development. - 1992. - Vol. 114, №3. - P. 743 - 754.

78. Hamburger, V. A series of normal stages in the development of the chick embryo / V. Hamburger, H. L. Hamilton // Journal of Morphology. - 1951. - Vol. 88, № 1. - P. 49 - 92.

79. Harris, W.A. Cellular diversification in the vertebrate retina / W. A. Harris // CurrOpin Genet Dev. - 1997. - Vol. 7, № 5. - P. 651 - 658.

80. GDNF: a potent survival factor for motoneurons present in peripheral nerve and muscle / C. E. Henderson, H. S. Phillips, R. A. Pollock and et al. // Science. -1994. - Vol. 266, № 5187. - P. 1062 - 1064.

81. Heriot, W.J. Pigment epithelial repair / W. J. Heriot, R. Machemer // Graefes Arch ClinExpOphthalmol. - 1992. - Vol. 230, № 1. - P. 91 - 100.

82. Mutations at the mouse microphthalmia locus are associated with defects in a gene encoding a novel basic-helix-loop-helix-zipper protein / C. A. Hodgkinson, K. J. Moore, A. Nakayamaand et al // Cell. - 1993. - 74, P. 395 - 404.

83. Hoffpauir, B. K. Modulation of synaptic function in retinal amacrine cells / B. K. Hoffpauir, E. L. Gleason // Integr. Comp. Biol. - 2005. - Vol. 45, № 4. - P. 658-664.

84. Regulation of radial glial cells in the mouse brain by the Pax6-Sox2-EGFR pathway / Q. Hu, L. Zhang, J. Wen, L. Li. // Cell Research. - 2008. - Vol. 18. - P. 174.

85. Huang, E. J. Neurotrophins: roles in neuronal development and function / E. J. Huang, L. F. Reichardt // Annu Rev Neurosci. - 2001. - Vol. 24. - P. 677 - 736.

86. Pax6 and SOX2 form a co-DNA-binding partner complex that regulates initiation of lens development / Y. Kamachi, M. Uchikawa, A. Tanouchi and et al// Genes Dev. - 2001. - Vol. 15, № 10. - P. 1272 - 1286.

87. Epiretinal and vitreous membranes. Comparative study of 56 cases / A. Kampik, K. R. Kenyon., R. G. Michels and et al // Arch. Ophthalmol. - 1981. - Vol. 99. - P. 1445 -1454.

88. E-cadherin cell-cell adhesion in ewing tumor cells mediates suppression of anoikis through activation of the ErbB4 tyrosine kinase / H. G. Kang, J. M. Jenabi, J. Zhang and et al // Cancer Res. - 2007. - Vol. 67, № 7. - P. 3094 - 3105.

89. Characterization of genetically modified human retinal pigment epithelial cells developed for in vitro and transplantation studies / N. Kanuga, H. L. Winton, L. Beauchene and et al // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2002. - Vol. 43, № 2. - P. 546 - 555.

90. Keefe, J. R. An analysis of urodelean retinal regeneration / J. R. Keefe // J. Exp. Zool. -1973. - Vol. 184, № 2. - P. 185 - 257.

91. Transcriptional regulation of cellular retinaldehyde-binding protein in the retinal pigment epithelium. A role for the photoreceptor consensus element / B. N. Kennedy, S. Goldflam, M. A. Chang and et al //J Biol Chem. - 1998. - Vol. 273, № 10. - P. 5591 - 5598.

92. Differentiation of adult bone marrow stem cells into neuroprogenitor cells in vitro /B. J. Kim, J. H. Seo, J. K. Bubien Y. S. Oh // Neuroreport. - 2002. -Vol. 13, № 9. - P. 1185 - 1188.

93. Generation of induced pluripotent stem cells from neural stem cells / J. B. Kim, H. Zaehres, M. J. Arauzo-Bravo, H. R. Scholer // Nat Protoc. - 2009. - Vol. 4, № 10. - P. 1464 - 1470.

94. Neuroprotection, Growth Factors and BDNF-TrkB Signalling in Retinal Degeneration / A. Kimura, K. Namekata, X. Guo and et al. // Int J Mol Sci. - 2016. - Vol. 17, № 9.

95. Klassen, H. Stem Cells and Retinal Repair / H. Klassen, D. S. Sakaguchi, M. J. Young // Prog. Retin. Eye Res. - 2004. - Vol. 23, №2. - Р.149 - 181.

96. Klimanskaya, I. Approaches for derivation and maintenance of human ES cells: Detailed procedures and alternatives / I. Klimanskaya, J. McMahon // In: Handbook of Stem Cells. San Diego, Calif., Academic Press. -2004. - Vol. 1. - P. 437 - 451.

97. Klimanskaya, I. Retinal pigment epithelium / I. Klimanskaya // Methods Enzymol. -2006. - Vol. 418. - P. 169 - 194.

98. Knight, J. K. Retinal pigmented epithelium does not transdifferentiate in adult goldfish / J. K. Knight, P.A. Raymond //J. Neurobiol. -1995. - Vol.27, № 4. - P. 447 - 456.

99. Method for culturing neural stem cells using hepatocyte growth factor / J. Kokuzawa, S. Yoshimura, H. Kitajima and et al // US 2006/0134078 A1. - № 10/536,563. - заявка: 2.12.2003

100. Korte, G. E. Regeneration of mammalian retinal pigment epithelium / G. E. Korte, J. I. Perlman, A. Pollack // Int Rev Cytol. - 1994. -Vol. - 152. - P. 223 - 263.

101. Connexin 43 contributes to differentiation of retinal pigment epithelial cells via cyclic AMP signaling / A. Kojima, K. Nakahama, K. Ohno-Matsui and et al // BiochemBiophys Res Commun. - 2008. - Vol. 366, №2. - P.532 - 538

102. Decreased levels of cGMP in vitreous and subretinal fluid from eyes with retinal detachment / E. C. La Heij, H. G. Blaauwgeers, J. de Vente and et al // Br J Ophthalmol. - 2003. -Vol. 87, № 11. - P. 1409 - 1412.

103. Efficient generation of retinal progenitor cells from human embryonic stem cells / D. A. Lamba, M. O. Karl, C. B. Ware, T. A. Reh // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2006. - Vol.103. - P. 12769 - 12774

104. Transplantation of human embryonic stem cell-derived photoreceptors restores some visual function in Crx-deficient mice / D. A. Lamba, J. Gust, T. A. Reh // Cell Stem Cell. - 2009. -Vol. 9. - P. 73 - 79.

105. Lavado, A. Prox1 expression patterns in the developing and adult murine brain / A. Lavado, G. Oliver // Dev. Dynamic. - 2007. - Vol. 236. -P. 518 - 524.

106. Prox1 is required for granule cell maturation and intermediate progenitor maintenance during brain neurogenesis / A. Lavado, O. V. Lagutin, L. M. Chow and et al // PLoS Biol. - 2010. -Vol. 8, № 8:e1000460

107. Lavado, A. Immunohistological markers for proliferative events, gliogenesis, and neurogenesis within the adult hippocampus / A. Lavado, G. Oliver // Cell Tissue Res. - 2011. - Vol. 345. - P. 1 - 19

108. The transcription factor cSox2 and Neuropeptide Y define a novel subgroup of amacrine cells in the retina / R. D. Le, K. Rayner, M. Rex and et al // J. Anat. - 2002. - Vol. 200, № 1. - P. 5156.

109. Process outgrowth in oligodendrocytes is mediated by CNP, a novel microtubule assembly myelin protein / J. Lee, M. Gravel, R. Zhang and et al // The Journal of Cell Biology. - 2005.

- Vol. 170, No. 4. - P. 661 - 673.

110. Epitheliomesenchymal transdifferentiation of cultured RPE cells / S. C. Lee, O. W. Kwon, G. J. Seong and et al// Ophthalmic Res. - 2001. - Vol. 33, №2. - P. 80-86 (a).

111. TGF-betas synthesized by RPE cells have autocrine activity on mesenchymal transformation and cell proliferation / S. C. Lee, S. H. Kim, H. J. Koh, O. W. Kwon //Yonsei Med J.

- 2001. - Vol. 42, №3. -P. 271 - 277 (b).

112. Using neurogenin to reprogram chick RPE to produce photoreceptor-like neurons / X. Li, W. Ma, Y. Zhuo and et al // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2010. - Vol. 51, № 1. - P. 516 - 525.

113. Reprogramming progeny cells of embryonic RPE to produce photoreceptors: development of advanced photoreceptor traits under the induction of neuroD / L. Liang , R.T. Yan, X. Li, and et al // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2008. - Vol. 49, 39. - P. 4145 -4 153.

114. Noggin antagonizes BMP signaling to create a niche for adult neurogenesis / D. A. Lim, A. D. Tramontin, J. M. Trevejo and et al // Neuron. - 2000. -Vol. 28, № 3. - P. 713-726.

115. Malignant tumor of the retinal pigment epithelium with extraocular extension in a phthisical eye / K. U. Loeffler, T. Kivela, H. Borgmann, H. Witschel // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. - 1996. - Vol. 234. - P. 70 - 75.

116. Loewenstein, J. I. Osseous metaplasia in a preretinal membrane / J. I. Loewenstein, R. N. Hogan, and F. A. Jakobiec // Arch. Ophthalmol. - 1997. - Vol. 115. - P. 117 - 119.

117. Lopashov, G.V. Artificial metaplasia of pigmented epithelium into retina in tadpoles and adult frogs / G. V. Lopashov, A. A. Sologub // J EmbryolExpMorphol. - 1972. - Vol.28, №3.-P. 521 -546.

118. Liu, L. Influence of retinal basement membrane on growth of nerve fiber from retinal explant of chick embryo / L. Liu //Shi Yan Sheng Wu XueBao. - 1988. -Vol. 21, № 3. - P. 295 - 309.

119. Subretinal transplantation of genetically modified human cell lines attenuates loss of visual function in dystrophic rats / R. D. Lund, P. Adamson, Y. Sauvé et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2001. - Vol. 98, № 17. - P. 99429947.

120. Lwigale, P. Y. Semaphorin3A/neuropilin-1 signaling acts as a molecular switch regulating neural crest migration during cornea development / P. Y. Lwigale, M. Bronner-Fraser // Dev Biol. - 2009. - Vol. 336, № 2. - P. 257 - 265.

121. A role of ath5 in inducing neuroD and the photoreceptor pathway / W. Ma, R.-T. Yan, W. Xie, S.-Z. Wang // J. Neurosci. - 2004. - Vol. 24, № 32. - P. 7150 - 7158.

122. Reprogramming retinal pigment epithelium to differentiate toward retinal neurons with Sox2 / W. Ma, R. T. Yan, X. Li, S. Z. Wang // Stem Cells. -2009. - Vol. 27, № 6. - P. 1376-1387.

123. Confluent monolayers of cultured human fetal retinal pigment epithelium exhibit morphology and physiology of native tissue / A. Maminishkis, S. Chen, S. Jalickee and et al. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 2006. - Vol.47. - P.3612-3624.

124. Mann, I. The development of the human eye / I. Mann // London, British Medical Association TavistockSavare, W.C.1. - 1949.

125. Mannagh, J. Tissue culture of human retinal pigment epithelium / J. Mannagh, D. V. Arya, A. R. Irvine // Invest. Ophthalmol. - 1973. - Vol.12. - P. 52.

126. Mao, W. Reprogramming chick RPE progeny cells to differentiate towards retinal neurons by ash1 / W. Mao, R. T. Yan, S. Z. Wang // Mol Vis. - 2008. - Vol. 14. - P. 2309 - 2320.

127. Neural remodeling in retinal degeneration / R. E. Mark, B. W. Jones, C. B. Watt, E. Strettoi // Progress in Retinal and Eye Research. - 2003. -Vol. 22.- P. 607 - 655.

128. Pax6 is required for the multipotent state of retinal progenitor cells / T. Marquardt, R. Ashery-Padan, N. Andrejewski and et al // Cell. - 2001. - Vol. 105, № 1. - P. 43 -55.

129. Marti'nez-Morales, J. R. Eye development: a view from the retina pigmented epithelium / J. R. Marti'nez-Morales, I. Rodrigo, P. Bovolenta // Bio.Essays. - 2004. - Vol. 26. - P.766 - 777.

130. Neural progenitor cells from postmortem adult human retina / E. J. Mayer, D.A. Carter, Y. Ren and et al // Br J Ophthalmol. - 2005. - Vol. 89, №1. - P. 102-106.

131. McKay, B.S. Separation of phenotypically distinct subpopulations of cultured human retinal pigment epithelial cells / B. S. McKay, J. M. Burke // Exp. Cell. Res. - 1994. - Vol.213, №1. -P. 85 - 92.

132. Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells / J. S. Meyer, R. L. Shearer, E. E. Capowski and et al. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 2009.

- Vol.106. - P.16698 - 166703.

133. Localization of tubby-like protein 1 in developing and adult human retinas / A. H. Milam, A.E. Hendrickson and et al. // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2000. - Vol.41, № 8.

134. Pathogenesis of laser-induced choroidalsubretinal neovascularization / H. Miller, B. Miller, T. Ishibashi, S.J. Ryan //Invest Ophthalmol Vis Sci. - 1990. - Vol.31, № 5. - P. 899 - 908.

135. Mitashov, V.I. Retinal regeneration in amphibians / V. I. Mitashov // Int. J. Dev. Biol. -1997. - Vol.41. - P.893 - 905.

136. Spontaneous transdifferentiation of quail pigmented epithelial cell is accompanied by a mutation in the Mitf gene / M. Mochii, T. Ono, Y. Matsubara, G. Eguchi // Dev. Biol. - 1998. -Vol.196. - P.145 - 159.

137. A comparison of epithelial and neural properties in progenitor cells derived from the adult human ciliary body and brain / M. C. Moe, R. S. Kolberg, C. A. Sandberg and et al // Exp Eye Res. -2009. - Vol. 88, №1. - P. 30 - 38.

138. Müller, F. Bone morphogenetic proteins specify the retinal pigment epithelium in the chick embryo / F. Müller, H. Rohrer, Vogel-Hopker // Development.- 2007. - Vol. 134, №19. - P. 3483 -3493.

139. Multipotent stem cells from adult olfactory mucosa / W. Murrell, F. Ferron, A. Wetzig and et al // DevDyn. - 2005. - Vol. 233, № 2. - P. 496 - 515.

140. Nagatsu, T. Tyrosine hydroxylase: human isoforms, structure and regulation in physiology and pathology / T. Nagatsu // Essays Biochem. - 1995. - Vol. 30. P. 15-35.

141. Newsome, D. A. Human massive periretinal proliferation. In vitro characteristics of cellular components / D. A. Newsome, M. M. Rodrigues, R. Machemer // Arch. Ophthalmol. - 1981.

- Vol. 99. - P. 873-880.

142. Formation of pluripotent stem cells in the mammalian embryo depends on the POU transcription factor Oct4 / J. Nichols, B. Zevnik, K. Anastassiadis and et al // Cell. - 1998. - Vol. 95, №3. - P. 379 - 391.

143. Mitf, a basic helix-loop-helix-zipper transcription factor regulating development of the retinal pigment epithelium (RPE) / M. T. T. Nguyen, A. Nakayama, C. Chen and et al // Dev. Biol. -1997. - P. 186, B25.

144. Nguyen, M. T. T. Signaling and transcriptional regulation in early mammalian eye development: a link between FGF and Mitf / M. T. T .Nguyen, H. Arnheiter // Development.- 2000.-Vol. 127. - P. 3581-3591.

145. Toward the generation of rod and cone photoreceptors from mouse, monkey and human embryonic stem cells / F. Osakada, H. Ikeda, M. Mandai and et al. // Nat. Biotechnol. - 2008. -Vol.26. - P.215-224.

146. Concise review: Pax6 transcription factor contributes to both embryonic and adult neurogenesis as a multifunctional regulator / N. Osumi, H. Shinohara, K. Numayama-Tsuruta, M. Maekawa // Stem Cells. - 2008. - Vol. 7. - P. 1663-1672.

147. Morphology and distribution of tyrosine hydroxylase-like immunoreactive neurons in the cat retina / C. W. Oyster, E. S. Takahashi, M. Cilluffo, N. C. Brecha // Proc Natl Acad Sci U S A. -1985. - Vol. 82, № 18: -P. 6335-6339.

148. Park, C. M. Growth factor-induced retinal regeneration in vivo / C. M. Park, M. J. Hollenberg // Int Rev Cytol. - 1993. - Vol. 146. - P. 49-74.

149. Park, C. M. Basic fibroblast growth factor induces retinal regeneration in vivo / C. M. Park, M. J. Hollenberg // Dev Biol. - 1989. - Vol. 134, №1. P. 201-205.

150. Pe'er, J. Calcifications in Coats' disease / J. Pe'er // Am. J. Ophthalmol. - 1988.- Vol. 106. - P. 742-743.

151. Pittack, C. Basic fibroblast growth factor induces retinal pigment epithelium to generate neural retina in vitro / C. Pittack, M. Jones, T.A. Reh // Development. - 1991. - Vol.113. - P. 577588.

152. Pittack, C. Fibroblast growth factors are necessary for neural retina but not pigmented epithelium differentiation in chick embryos / C. Pittack, G. B. Grunwald, T. A. Reh // Development. -1997.-Vol.124. - P.805-816.

153. In vitro development of neural progenitor cells from human embryos / R. A. Poltavtseva, A. A. Rzhaninova, A. V. Revishchin and et al // Bull Exp Biol Med. - 2001. - Vol. -132, №3. P. 861863.

154. In Vitro differentiation capacity of telomerase immortalized human RPE cells / L. Rambhatla, C.-P. Chiu, R. D.Glickman, C. Rowe-Rendleman // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 2002. -Vol.43. - P.1622-1630.

155. Raymond, S.M. The retinal pigmented epithelium is required for development and maintenance of the mouse neural retina / S. M. Raymond, I. J. Jackson // Curr Biol. - 1995. - Vol. 5(11). - P. 1286-1295.

156. Reh, T. A. Retinal pigmented epithelial cells induced to transdifferentiate to neurons by laminin / T. A. Reh, T. Nagy, H. Gretton // Nature. - 1987. - Vol.330. - P. 68-71.

157. Reh, T.A. Common mechanisms of retinal regeneration in the larval frog and embryonic chick / T. A. Reh, M. Jones, C. Pittack // Ciba Found Symp. - 1991. - Vol. 160. - P.192-204.

158. Reynolds, B. A. Weiss S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system / B. A. Reynolds // Science. - 1992. - Vol.255, №5052. - P. 1707-1710.

159. Transcriptional regulation of nanog by OCT4 and SOX2 / D. J. Rodda, J. L. Chew, L. H. Lim and et al// J Biol Chem. - 2005. - Vol. 280, № 26. - P.24731-24737.

160. Saarma, M. Other neurotrophic factors: glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) / M. Saarma, H. Sariola // Microsc Res Tech. - 1999. - Vol. 45, № 4-5. - P. 292-302.

161. Saini, J. S. Human Retinal Pigment Epithelium Stem Cell (RPESC) / J. S. Saini, S. Temple, J. H. Stern // Adv Exp Med Biol. - 2016. - Vol. 854. - P. 557-562.

162. Sharma, R. K. Early born lineage of retinal neurons express class III beta-tubulin isotype / R. K. Sharma, P. A. Netland // Brain Research. - 2007. - Vol. 1176. - P. 11-17.

163. Adult human RPE can be activated into a multipotent stem cell that produces mesenchymal derivatives / E. Salero, T. A. Blenkinsop, B. Corneo and et al// Cell Stem Cell. - 2012. -Vol. -10, № 1. - P. 88-95.

164. Sakaguchi, D. S. Basic fibroblast growth factor (FGF-2) induced transdifferentiation of retinal pigment epithelium: generation of retinal neurons and glia / D. S. Sakaguchi, L. M. Janick, T. A. Reh // Dev. Dyn. - 1997. - Vol. 209, № 4. - P. 387-398.

165. Basic, not acidic fibroblast growth factor stimulates proliferation of cultured human retinal pigment epithelial cells / J. S. Schwegler, M. C. Knorz, I. Akkoyun, H. Liesenhoff // Mol Vis. 1997. - Vol.3, №10. - P.10.

166. Retinal pigment epithelium differentiation and dedifferentiation / C. Sheridan, P. Hiscott, I. Grierson and et al. // Vitreo-retinal surgery. - Edited by: Kirchhof B., Wong D. - 2005.

167. Multifocal hypopigmented retinal pigment epithelial lesions in incontinentiapigmenti / C. L. Shields, R. C. Eagle, R. M. Shahand et al // Retina. - 2006. - Vol. 26. - P. 328-333.

168. The ciliaryneurotrophic factor and its receptor, CNTFR alpha / M. W. Sleeman, K. D. Anderson, P. D. Lambert and et al // Pharm ActaHelv. - 2000. - Vol. 74, № 2-3. - P. 265-272.

169. Smith, R. S. Systematic Evaluation of the Mouse Eye: Anatomy, Pathology, and Biomethods / R. S. Smith // Boca Raton: CRC Press. - 2002.

170. Sologub, A. A. The development of differentiation of pigment epithelium in teleosts and its stimulation to metaplasia / A. A. Sologub //Ontogenez. - 1975. - Vol. 6, №1. - P.39-46.

171. Photoreceptor cell development in vitro: influence of pigment epithelium conditioned medium on outer segment differentiation / P. E. Spoerri, R. J. Ulshafer, H. C. Ludwig and et a// Eur J Cell Biol. - 1988. - Vol. 46(2). P. 362-367.

172. Stenkamp, D. L.Spatiotemporal coordination of rod and cone photoreceptor differentiation in goldfish retina / D. L. Stenkamp, L. K. Barthel, P. A. Raymond // J Comp Neurol. -1997. - Vol. 382(2). - P. 272-284.

173. Establishment, maintenance, and transfection of in vitro cultures of human retinal pigment epithelium / M. J. Stevens, D. D. Larkin, E. L. Feldman and et al. // Methods in Molecular Medicine. - 2005. -Vol. 107. - P.343-351.

174. Stone, L.S. Neural retina degeneration followed by regeneration from surviving retinal pigment cells in grafted adult salamander eyes / L. S. Stone // Anat Rec. - 1950. - Vol. 106, №1. - P. 89-109.

175. Stone, L. S. Regeneration of neural retina and lens from retina pigment cell grafts in adult newts / L. S. Stone, H. Steinitz // JExp Zool. - 1957. - Vol. - 135, №2. - P. 301-17.

176. Stone, L. S. An investigation recording all salamanders which can and cannot regenerate a lens from the dorsal iris / L. S. Stone // J ExpZool -. 1967. - Vol. 164, №1. - P.87-103.

177. Strauss O. The Retinal Pigment Epithelium in Visual Function / O. Strauss // Physiol. Rev. - 2005. - Vol.85. - P.845-881.

178. Stroeva, O. G. Retinal pigment epithelium: proliferation and differentiation during development and regeneration / O. G. Stroeva, V. I. Mitashov // Intl. Rev. Cytol. - 1983. -Vol. 83. -P.221-293.

179. Takahashi, K. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors / K. Takahashi, S. Yamanaka // Cell. - 2006. - Vol. 126, № 4. -P. 663-676.

180. SOX2 is a dose-dependent regulator of retinal neural progenitor competence / O. V. Taranova, S. T. Magness, M. B. Fagan and et al. // Genes Dev. - 2006. - Vol. 20, №9. - P. 11871202.

181. Effects of glial cell line-derived neurotrophic factor on the cultured adult full-thickness porcine retina / L. Taylor, K. Arner, K. Engelsberg and et al. // Curr Eye Res. - 2013. - Vol. 38, № 4. - P. 503-515.

182. Tezel, T. H. Serum-free media for culturing and serial passaging of adult human retinal pigment epithelium / T. H. Tezel, L. V. Del Priore // Exp Eye Res. - 1998. - Vol. 66, № 6. P. 807815.

183. The expression of native and cultured human retinal pigment epithelial cells grown in different culture conditions / J. Tian, K. Ishibashi, S. Honda and et al // Br. J. Ophthalmol. - 2005. -Vol. 89, №11. - P.1510-1517.

184. Toda, N. Phylogenesis of constitutively formed nitric oxide in non-mammals / N. Toda, K. Ayajiki // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. - 2006. - Vol. 157. - P. 60-62.

185. Toyran, S. Expression of growth differentiationfactor-5 and bone morphogenic protein-7 in intraocular osseous metaplasia / S. Toyran, A. Y. Lin, D. P. Edward // Br. J. Ophthalmol. - 2005. -Vol. 89. - P. 885-890.

186. A unique aged human retinal pigment epithelial cell line useful for studying lens differentiation in vitro / P. A. Tsonis, W. Jang, K. Del Rio-Tsonis, G. Eguchi // Int. J.Dev. Biol. -2001. - Vol.45. - P. 753-758.

187. Tso, M.O.Pathological condition of the retinal pigment epithelium. Neoplasms and nodular non-neoplastic lesions / M. O. Tso, D. M. Albert// Arch Ophthalmol. - 1972. -Vol. 88(1). - P. 27-38.

188. Tsunematsu, Y. Demonstration of Transdifferentiation of Neural Retina from Pigmented Retina in Culture / Y. Tsunematsu, A. J. Coulombre // Development, Growth & Differentiation. -1981. - Vol. 23, I. - 4.-P. 297-311.

189. Tso, M.O.Repair and late degeneration of the primate foveola after injury by argon laser / M. O. Tso, B. S. Fine //Invest Ophthalmol Vis Sci. - 1979. - Vol. 18(5). P. 447-461.

190. A unique aged human retinal pigmented epithelial cell line useful for studying lens differentiation in vitro / P. A. Tsonis, W. Jang, K. Del Rio-Tsonis, G. Eguchi // The International Journal of Developmental Biology. - 2001. - Vol. 45, № 5-6. - P. 753-758.

191. Uhlenhuth, E. Changes in pigment epithelium cells and iris pigment cells of Ranapipiens induced by changes in environmental conditions / E. Uhlenhuth // The journal of experimental medicine. - 1916. - Vol. XXIV.

192. Invasion of retinal pigment epithelial cells: N-cadherin, hepatocyte growth factor, and focal adhesion kinase / E. H. Van Aken, O. De Wever, L. Van Hoorde, and et al //Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2003. - Vol. 44, № 2. - P.463-472.

193. Vemuganti, G. K. Intraocular osseous metaplasia. A clinico-pathological study / G. K. Vemuganti, S. G. Honavar, S. Jalali // Indian J. Ophthalmol. - 2002. - Vol. 50. - P. 183-188.

194. Vielkind, U. Influence of Donor Age on Establishing Well-Differentiated Clonal Cultures from Embryonic Chicken Retinal Pigmented Epithelium / U. Vielkind, B. J. Crawford // Develop. Growth &Differ. -1988. -Vol.30, № 6. - P. 727-736.

195. A morphological and immunohistochemical study of human retinal pigment epithelial cells, retinal glia, and fibroblasts grown on Gelfoam matrix in an organ culture system. A comparison of structural and nonstructural proteins and their application to cell type identification / S. A. Vinores, M. M. Herman, S. F. Hackett, P. A. Campochiaro // Graefes Arch ClinExpOphthalmol. - 1993. - Vol. 231, № 5. - P. 279-288.

196. Class III beta-tubulin in human retinal pigment epithelial cells in culture and in epiretinal membranes / S. A. Vinores, N. L. Derevjanik, J. Mahlow and et al. // Exp.Eye.Res. - 1995. -Vol.60, №4. - P.385-400.

197. Walls, G. L. The vertebrate eye (and its adaptive radiation) / G. L. Walls // Cranbrook Institute of Science. - 1942. - P. 808

198. Wang, N.A Method for the Isolation of Retinal Pigment Epithelial Cells From Adult Rats / N. Wang, C. A. Koutz, R. E. Anderson // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 1993. - Vol.34. -P.101-107.

199. Alternative translation of OCT4 by an internal ribosome entry site and its novel function in stress response / X. Wang, Y. Zhao, Z. Xiao and et al // Stem Cells. - 2009. - Vol. 6. - P. 12651275.

200. Wen, R. Expression of a tetrodotoxin-sensitive Na+ current in cultured human retinal pigment epithelial cells / R. Wen, G. M. Lui, R. H. Steinberg // J Physiol. - 1994. -Vol. 476, № 2. - P. 187-196.

201. Wolburg, H. Müller glia endfeet, a basal lamina and the polarity of retinal layers form properly in vitro only in the presence of marginal pigmented epithelium/ H. Wolburg, E. Willbold, P. G. Layer // Cell Tissue Res. - 1991. - Vol. 264(3). - P. 437-51.

202. Wing, G. L. The topography and age relationship of lipofuscin concentration in the retinal pigment epithelium / G. L. Wing, G. C. Blanchard, J. J. Weiter // Invest Ophthalmol Vis Sci. -1978. - Vol. 17, №7. - P. 601-607.

203. In vitro transdifferentiation of adult human retinal pigment epithelium cells to neuro-like cells induced by blocking VEGF expression / J. H. Wu, F. Wang, P. Xu, Q. Huang // Zhonghua Yan KeZaZhi. - 2005. - Vol.41, №2. - P.114-118.

204. Characteristics of progenitor cells derived from adult ciliary body in mouse, rat, and human eyes / H. Xu, D. D. StaIglesia, J. L. Kielczewski and et al //Invest Ophthalmol Vis Sci.- 2007. -Vol. 48, № 4. - P.1674-82.

205. Reprogramming of human fibroblasts to pluripotent stem cells using mRNA of four transcription factors / E. Yakubov, G. Rechavi, S. Rozenblatt, D. Givol // BiochemBiophys Res Commun. - 2010. - Vol. 394, № 1. - P. 189-193.

206. Epidermal growth factor receptor in cultured human retinal pigment epithelial cells / Yan F., Y. Hui, Y.J. Li, C. M. Guo and et al//Ophthalmologica. - 2007.- № 221. - P. 244-250

207. Yan, R. T. Expression of an array of photoreceptor genes in chick embryonic retinal pigment epithelium cell cultures under the induction of neuroD / R. T. Yan, S. Z. Wang // Neuroscience Letters. - 2000. - Vol. 280, № 2. - P. 83-86.

208. Neurogenin1 effectively reprograms cultured chick retinal pigment epithelial cells to differentiate toward photoreceptors / R. T. Yan, L. Liang, W. Ma and et al // J Comp Neurol. - 2010. -Vol. 518, № 4. - P. 526-546.

209. Human RPE expression of cell survival factors / P.Yang, J. L. Wiser, J. J. Peairs and et al // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2005. -Vol. 46, № 5. -P. 1755-1764.

210. Yu, D.Stem cell sources and therapeutic approaches for central nervous system and neural retinal disorders / D. Yu, G. A. Silva // Neurosurg. Focus. - 2008. - Vol. 24, №3-4. - P. 1-14.

211. Zahir, T. Effects of ciliaryneurotrophic factor on differentiation of late retinal progenitor cells / T. Zahir, H. Klassen, M. J. Younga // Stem Cells. - 2005. - Vol. 23, № 3. - P. 424-32.

212. Zarbin, M. A. Analysis of retinal pigment epithelium integrin expression and adhesion to aged submacular human Bruch's membrane / M. A. Zarbin // Trans. Am. Ophthalmol. Soc.- 2003. -Vol. 101. - P. 493-514.

213. Zhanga J., Lia L. BMP signaling and stem cell regulation / J. Zhanga, L. Lia // Dev Biol. - 2005. - Vol. 284, № 1, P. 1-11.

214. Zhao, S. In vitro transdifferentiation of embryonic rat pigment epithelium to the neural retina / S. Zhao, S. C. Thornquist, C. J. Barnstable // Brain. Research. - 1995. - Vol.677. - P.300-310.

215. Zhao, S. Differentiation and transdifferentiation of the retinal pigment epithelium / S. Zhao, L. J. Rizzolo, C. J. Barnstable // Int Rev Cytol. -1997. - Vol. 171. - P. 225-266.

216. Growth Factor-Responsive Progenitors in the Postnatal Mammalian Retina / X. Zhao,. V. Das Ani, F. Soto-Leon, I. Ahmad // DevDyn. - 2005. - Vol. 232, № 2. P. 349-358.

217. Properties of growth and molecular profiles of rat progenitor cells from ciliary epithelium / Y. Yanagi , Y. Inoue, Y. Kawase and et al // Exp. Eye. Res. - 2006. - Vol.82, № 3. - P. 471-478.

218. Zhang, N.L. Mitogenesis and retinal pigment epithelial cell antigen expression in the rat after krypton laser photocoagulation / N. L. Zhang, E. E. Samadani, R. N. Frank // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1993. - Vol.34. - P.2412-2424.