Молекулярные факторы крови больных новообразованиями женской репродуктивной системы, их клинико-прогностическое значение тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, доктор медицинских наук Обушева, Мария Нармановна

• Обушева, Мария Нармановна
• доктор медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Обушева, Мария Нармановна

Список сокращений Г.т.ша № ICK> ирво-оио.и л и г факторы в сыворотке кров» йоп.ных ннгмоор.ш'Емниями оргапоз *енеч>г> репродуктивной системы, их сеть с прогнотом кнппсвлимч юйчор штературы)

ГлаваИ МАТЕРИАЛЫ II Mi: [ОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2 Общая характеристика обследованных больны»;

2 1,1 Характеристика ос.п.ш.и шороклчее\ вечными н.чюоРраичиппямп яичникои : ib Характерна шка йольныхраком ЯИЧНИКОВ J I t Характеристика Ро.н.них раком теламатки

2.2 Лабораторные методы исследования

2 2а. Определение концентрации растворимого Рал-антигсна в сыворотке крови

2 2Ь Определенно Koinioiiipanmi ф а н е р а р о с т шлотслич сосулов (VEGF1 в сыворои

2.2с Определение копией ц-.ипш ншсрлспкпча-Р в сыворотке

ГЛАВА III Содержание paiiin>pnvii;o Г as- антиген;], пнтелспкнна-6. фактора эндотелия сосудов (VEGF) в сыворотке крови больны* доброкачествен новообра!ованнчмн и раком «нчнпков (результаты собственные исследований! 3 I Особенности к.тщшческип хараыернешки Гички к; \ то йро качественным и новообразованиям к яичников j Ичученнс содержания -1:а> в сыйири п.с криви \ оо • тоороьачес! венными новообразованиями, раком яичников и в гр> ппс контроля

3.4. Содержание VKCiK (фактора роста ч п о гелия сосулов) в сыворотке крови больны: .ннчрокачестиеппымп чоиооора и^аничми и раком ЯИЧНИКОВ j ! Исследован не ll.-1-ii в сыворотке кроен i оолвнн. юоро качестве иным и ниииоор.пинаноя.мн. раком и нков в в мчи |п>.п,НОЙ фуппе j б Общая и fictpciiii HIBH.OI ш.и-кивасмость i полымлх паком яичников

ГЛАВА IV ИССЛЕДОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ sFai. VEC3F. ИЛ-б В СЫВОРОТКЕ КРОВИ Ш.'П.ПЫХ РАКОМ ТЕЛА МАТКИ

4 I Содержание sFas в сыворотке крови бодыоп раком тела матки с учетом клннико морфологических особенностей н у практически ииривыч »кс ин контрольной фут

4 Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных раком тела матки в зависимости oi клинико-мсрфслогн'ичкнх характеристик li.i.TCTini i [ ) iip.iKiii'K'CKn здоровых женщин

4 Выживаемость больных раком те

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярные факторы крови больных новообразованиями женской репродуктивной системы, их клинико-прогностическое значение»

исследования». результаты собственных наблюдений. обсуждение полученных данных, заключение, выводы, список цитируемой литературы, который состоит из 30 работ отечественных и 302 работ зарубежных авторов.Работа иллюстрирована 87 таблицами. 59 рисунками.1 ГЛАВА Мол скул нрно-биологнческие факторы в сыворотке крови больных новообразованиями органов женской репродуктивной системы, их связь с прогнозом заболевания (обзор литературы).Основным проявлением прогрессирования опухоли является метастазирование или перенос опухолевых клеток в сосудистую систему, с последующим опухолевым н сосудистым взаимодействием и образованием новых очагов опухолевого роста. Что делает необходимым изучение моле кулярно-биологических факторов, регулирующих инвазивный рост и метастаз и рование опухоли, и развитие ее гормон ©резистентности (Красильников М.А.. 2005: Gupta Р.В. et а!.. 2004).Метаболические процессы в злокачественной опухоли отличаются большей интенсивностью обмена веществ, чем в физиологических условиях и повышенная потребность в кислороде быстро про.шферирующих клеток обеспечивается ангиогенезом. Повышение ангиогенеза имеет место и в физиологических условиях, как циклические изменения в репродуктивной системе, заживление ран. эмбриональное развитие, так и в патологических процессах - ревматоидные заболевания, диабетическая ретинопатия и опухолевый рост (Folkman J. etal.. 1980; Gimbrone М.. 1973).В 1971 году. J- Folkman выдвинул гипотезу о том. что ангиогенез связан с действием ангиогенных факторов, которые индуцируют рост кровеносных сосудов, расположенных в непосредственной близости от опухоли, либо пронизывающие опухолевую ткань. Эта гипотеза была подтверждена рядом научных работ, проведенных как самим автором, так и другими исследователями (Folkman J.. 1990: 1995; lkeda Е.. 1995. Kim K.J., 1993). Ангиогенез определяет и метастазирование опухоли по сосудистому руслу в органы, отдаленные от первичной локализации опухоли. Вновь образованные сосуды способствуют миграции и инвазии опухолевых клеток {Gaspanni G. et al., 1994; Weidner N. et al., 1992; Obermair A., 1995).Большинство метастазов опухолей развиваются в капиллярном русле сразу после отделения опухолевых элементов от первичного очага и регулируются влиянием эндогенных ангиогенных факторов, которые секретируются опухолевыми клетками, а также белками экстрацеллюлярного матрикса (Folkman J., 1985). Развитие метастазов также зависит от наличия рецепторов индукторов ангиогенеза, как иа поверхности опухолевых клеток, так и клеток органа, где происходит инвазия опухолевых клеток и от протеолитической активности и ангиогенеза опухоли (Nicolson G., 1988). В развитии опухоли выделяют две фазы: бессосудистую, для которой характерен замедленный рост и сосудистую фазу с быстрым развитием опухоли под влиянием ангиогенных факторов (Folkman J.. 1985).Ангиогенезу предшествует активация эндотелиоцитов с ферментативной деградацией мембраны и последующая пролиферация, и миграция эндотелиальных клеток по направлению ангиогенного стимула (Bischoff J. et al., 1995). В опухолях эти процессы происходят параллельно с инвазией опухолевых клеток. Следовательно, ангиогенез определяет инвазивную и метастатическую активность опухоли. Экспериментальные данные подтверждают, что солидные опухоли способны непрерывно индуцировать ангиогенез, при этом интенсивно пролиферирующая капиллярная сеть, отделяется от существующей микрососудистой системы и растет в сторону опухоли (Folknian J., Haudenschild С, 1980). Опухоль без кровоснабжения растет в культуре до 1-2 мм в диаметре, дальнейшее увеличение ее массы не наблюдается независимо от длительности времени, и она может полностью деградировать (Folkman J. et al., 1963). Таким образом, неваскуляризация определяет рост и размер опухоли. При отсутствии кровоснабжения опухолевых культур, их рост ограничивается определенными размерами, они не способны к метастазированию (Folkman J., CotranR., 1976).Ангиогенные свойства проявляют многие известные факторы роста и о цитокины, продуцируемые опухолевыми клетками, в том числе и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), который регулирует ангиогенез многих опухолей (Takahashi Y., Mai М., 2005). Выделенный из культуры опухолевых клеток U937 белок, увеличивал проницаемость сосудов кожи у морских свинок и был назван сосудистым фактором проницаемости. Предполагали, что данный белок является специфическим фактором, повышающим проницаемость сосудов опухоли. (Senger D.R.,1983). Однако, позже две независимые группы исследователей выделили и определили аминокислотную последовательность эндотелноснецнфнческого белка, который назвали фактором роста эндотелия сосудов и васкулотропином, соответственно. Дальнейшие исследования показали, что VEGF и сосудистый фактор проницаемости являются одним и тем же белком (Ferrara R, Plouet J., 1989). В последствии был открыт ряд близкородственных белков из этого семейства: VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D. функция которых до конца не выяснена (Eriksson U. el al., 1999). VEGF (vascular endothelial growth factor) - это основной гепарин с вязы вающий, гомодимерный гликопротеин с молекулярной массой около 45 кДА. Обнаружены несколько изоформ фактора роста эндотелия сосудов, варианты альтернативного сплайсинга размером 121, 165, 189, 206 аминокислотных остатков, имеющих сходную биологическую активность, но существенно отличающиеся по биологической доступности (Ferrara К , 1992,1995). Основными растворимыми формами VEGF являются молекулы размером 121 и 165 аминокислотных остатков, они же являются и основными биологически активными формами VEGF. Часть VEGF -165 связывается с внеклеточным матриксом и является основной взоформой VEGP в тканях.Однако, экспрессия VEGF реиндчцируется во время патологического ангиогенеза (ишемия миокарда, сетчатки, воспаление и опухоли). Кроме того, существует растворимая форма pVEGF-l, определяемая в сыворотке крови, вероятно, что данная форма рецептора может ингибировать VEGF. (Kendall R.L. et al., 1993). VEGF взаимодействует исключительно с эндотелиальными клетками и специфическое взаимодействие с другими типами клеток в норме практически отсутствует. Следовательно, мишенью специфической активности VEGF является эндотелий, но в то же время в самих эндотелиальных клетках отсутствует экспрессия VEGF (Jakemann L.B.etal.,1992).Многие опухоли экспрессируют VEGF, включая рак легкого (Volm М., 1997), молочной железы (Brown L.F. et al., 1995; Yoshiji H. et al., 1996), мочевого пузыря (Brown L.F. et al, 1993), яичников (Olson T.A. et al., 1994) и эндометрия (Guidi A.J. el al., 1996). Помимо индукции ангиогенеза, VEGF повышает проницаемость сосудов. с этим его свойством связывают образование асцита при раке яичников. VEGF оказывает выраженное про воспалительное действие, высокие содержание его выявляется в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом (Koch А.Е., 1994; Fava R.A.. 1994). Предполагают также, что VEGF является также медиатором циклического роста сосудов в органах женской репродуктивной системы (Phillips H.S. et al., 1990; Ravindranath N. et al., 1992; Shweiki D. et al., 1993; Cullinan-Bove K. et al., 1998).Инвазивная и метастатическая активность злокачественных опухолей зависит во многом от неоваскулярязацив опухоли Определение аигиогенеза с использованием иммунологических методов позволяет прогнозировать возможные рецидивы, метастазирование и выживаемость больных: плотность микрососудов на единице поверхности опухоли имеет прямую корреляционную связь с частотой метастазов у некоторых солидных опухолей. Обратную корреляцию между выживаемостью больных и плотностью сосудов опухоли наблюдали у больных раком желудка, пищевода (Tamgawa N. et al., 1997), молочной железы (Gasparini G. et al., 1996, Heimann R. et al., 1996) и меланомой (Srivastava A. et al, 1988). Ho использование количественной оценки ангиогенеза опухоли как прогностического критерия ограничено возможностям методов идентификации и подсчета капилляров, применяемых в настоящее время.Распространенным методом оценки неоваскулиризации является подсчет капилляров в первичной опухоли с применением иммупопериоксидазной техники окраски сосудов и с использованием специфических маркеров эндотелиальных клеток, как CD31, CD34 и VIII фактор (Weidner N. et al., 1993). Ангиогенез предшествует прогрессии опухоли и определяет дальнейшее ее развитие и при карциноме молочной железы, интенсивность его может служить прогностическим критерием перехода рака in situ в инвазивный. (Weidner N. et al., 1991).Изучение патогенетических механизмов злокачественных опухолей в последнее десятилетие пополнилось результатами исследований полипептидных факторов роста и цитокинов, активаторов неоангиогенеза (Герштейн Е.С. и соавт., 2005; Луценко СВ. и соавт., 2005; Dolle L. Et al., 2004), инвазии и метастазирования (Барышников АЛО. и соавт., 2005).При изучении роли ангиогенеза в прогрессировании рака гортани у европейских мужчин 35-70 лет после хирургического и комбинированного печения через 60-84 месяцев, длительность безрецидивного периода была связана с плотностью сосудов в «горячих» участках опухоли.Многофакторный анализ показал, что количество сосудов (р<0,00001) является независимым критерием прогноза длительности безрецидивного периода рака гортани. Полученные данные, по мнению авторов исследования, расширяют возможности поиска новых лекарственных средств, подавляющих анигиогенез (Beatrice Fabio et al., 1998). В образцах карциномы гортани иммуногистохимическим методом проводилось определение индукторов ангиогенеза: основного фактора роста фиброб ластов (bFGF), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и матриксных металлопротеиназ (ММР-2, ММР-9). Отмечено, что экспрессия фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) коррелировала с плотностью микрососудов (р=0,01) и слабо - со степенью дифференцировки опухоли (р=0,006). Эти результаты позволяют предположить, что вышеуказанные ангиогенные факторы не имеют прогностического значения у больнах раком гортани (Burian М. et al., 1999). Более короткий безрецидивный период наблюдался у больных первичным раком молочной железы с высоким уровнем VEGF в сыворотке крови (Gasparini G. et al., 1997). Кроме этого, имеются данные о том, что с высоким уровнем VEGF в сыворотке крови сочетается неэффективность химиотерапевтического лечения больных неходжкинскими лимфомами и мелкоклеточным раком легкого (Rondo S. et al., 1994;SalvenP. etal., 1997; 1998; Takigawa N. et al., 1998).Иммуногистохимическое изучение ангиогенеза в колоректальной карциноме выявило наиболее плотную сосудистую сеть в наблюдениях с метастазами в печень. Более высокий уровень ангиогенеза повышает вероятность отдаленных метастазов и агрессивность опухоли при местном распространении (Giatromanolaki A. et et., 1999). Повышение экспрессии фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактора проницаемости сосудов (VPF) в сыворотке крови при определении методом ELlSA-анализа было отмечено у больных карциномой яичников, тела и шейки матки.Максимальные концентрации VEGF были выявлены в образцах крови больных раком легких (Kondo Shinichiet al., 1994).Клинико-морфологические исследования карциномы молочной железы, шейки матки и яичников подтверждают значение ангиогенеза как независимого прогностического критерия (Weidner N. et al., 1991; Hollingsworth H.C. et al., 1995; Wiggins D.L. et al., 1995). По мнению Bremer et al. (1996), плотность капиллярной сети - независимый параметр, определяющий безрецидивный период у больных раком шейки матки I В и II А стадий. Усиление неоваскуляризации отмечается при переходе интраэпителиальной карциномы шейки матки в инвазивную (Guidi A.J. et al., 1995).В образцах с атипической гиперплазией и карциномой эндометрия плотность микрососудов была выше, чем в контрольной группе. Наиболее плотная капиллярная сеть выявлена в образцах с карциномой эндометрия Отмечено, что интенсивность ангиогенеза при раке эндометрия I стадии прямо коррелировала с глубиной инвазии и степенью дифференцировки опухоли (Abulafia О. et al., 1995) Эффект ингибирования ангиогенеза при эндометриальной карциноме возникает при использовани противоопухолевого препарата, медрокснпрогсстерона ацетата (Jikihara Н. et al., 1992). Schoell et al. (1997) подтвердили ранее полученные данные о зависимости длительности общего выживания больных раком яичников от уровня ангиогенеза: повышенная васкуляризация опухоли ухудшает исход заболевания. Такие же результаты, полученные в других исследованиях доказывют, что ангиогенез имеет существенное значение для прогноза безрецидивного периода и длительности общего выживания пациентов с карциномой яичников (Hollingsworth Н.С. et al., 1995).Если прогностическая ценность количественной оценки опухолевого ангиогенеза подтвердится будущими исследованиями, то в дополнение к существующим клиническим параметрам, плотность микрососудов опухоли может использоваться как критерий прогноза исхода заболевания и эффективности лечения.По современным представлениям цитокины являются унверсальными средствами коммуникации между различными клетками организма, в том числе и в самой опухоли (Молчанов О.Е.. 2002).Цитокины и им подобные молекулы - важней компонент взаимного влияния микроокружения и клеток соединительной ткани и эпителия, и роль трудно переоценить. При образовании и росте опухолей некоторые цитокины могут быть для них факторами роста и агрессии метастазирования. При этом, следует отметить, что экспрессия IL-6 выявлена как в нормальных, так и в опухолевых клетках различной гистологической природы (Лавин Н., 1999; Bell D., et al., 1995; Geiger Т., 1488) Цитокины передставляют обширную группу белков, регулирующих пролиферацию и дифференцировку клеток при специфическом взаимодействии с рецепторами на клетках-мишенях. Это низкомолекулярные белки - медиаторы, участвующие в процессах межклеточных взаимодействиях и в регуляции биологических процессов, как рост и дифференцировка гемо поэтических, лимфоидных и мезенхимальных клеток, иммунные реакции, репарация тканей, васкуляризация и воспаление. Равновесная цитокиновая система, при нарушении которой происходит избыточная или недостаточная секреция определенных белков, что может привести к развитию разнообразных патологических состояний, вызывающих широкий спектр болезней человека, в том числе и злокачественные опухоли (Л.Л.Грачева. 1996; NagaiaS.. 1995).Цитокины играют важную роль в фолликулогенезе яичников. Они регулируют рост, дифференцировку и программированную гибель при циклических превращениях в яичниках, а также количество и популяционное распределение лимфоцитов, вырабатывающих многие цитокины в этом органе При раке яичников цитокины регулировать рост и развитие опухоли, как ростовые факторы. Они также могут определять инвазивный и метастатический потенциал опухоли через повышение адгезивности клеток или усиления ангиогенеза в опухолевой ткани.Цитокины также блокируют противоопухолевый иммунитет. Опухолевые клетки, модифицированные генами некоторых цитокинов, вероятно, могут использоваться в качестве активных противоопухолевых вакцин (Hirano Т. et а!.. 1990: Nash М.А. et а!.. 1999).К числу известных ингибиторов апоптоза. в том числе и Fasiamicnuoro. благодаря способности оказывать влияние на экспрессию FLIP - ингибитора Fas - зависимого апоптоза (FLICE - inhibitory protein), относится интерлейкин-б (IL-6/BSF-2/IFN 02). ИЛ-6 открыт в 1987 году (Poupart P.. et al.. 1987). его синонимы отражают историю открытия. Он получил название «гибридомный плазмоцитомный ростовой фактор».Затем обнаружили, что он индуцирует в клетках печени белки острой фазы воспаления, вследствие чего он был обозначен как «гепатоцит стимулирующий фактор». Молекулярное клонирование ДНК показало, что ИЛ-6 гомологичен молекулам идентифицуруемым как интерферон f>2 Синонимом ИЛ-6 является «интерлейкин гепатомно-плазмоцитомный-1».Кроме того, ранее ИЛ-6 были даны и такие названия, как «В-клеточный фактор дифференцировки», «В-клеточный стимулирующий фактор-2» (С.В.Шаманский. 1997). ИЛ-6 человека является гликопротеином. состоит из 212 аминокислотных остатков, включая гидрофобную сигнальную последовательность, и имеет относительную молекулярную массу 23,7.Секреторный ИЛ-6 включает 184 аминокислотных остатка и имеет молекулярную массу 21 (Zilberstein A. et al., 1986). Ген человеческого ИЛ6 расположен в 7 хромосоме и состоит из 5 экзонов и 4 интроноа (Yasukawa К, et а!.. 1987).ИЛ-6 регулирует рост н дифференцировку различных тканей в норме и при развитии опухолей, играет важную роль в иммунном ответе в острой фазе воспалительного процесса (Kishimoto Т. et al.. 1995; Yamasaki К. et al., 1998). В иерархии цитокинов ИЛ-6 рассматривают как ключевой системный цитокин, который вызывает широкий спектр ответа организма на тканевые поражения, индуцирует синтез белков острой фазы, вызывает пролиферацию и дифференцировку иммуннокомпетентных клеток и является фактором, регулирующим гемопоэз. При этом биологический эффект ИЛ-6 осуществляется на фоне других белков и гормонов. Индукция одного цитокнна другим. их синергические или взаиморегул яторные взаимодействия, а также взаимодействия с другими гормонами играет решающую роль в запуске воспалительных, иммунных клеточных реакций (Hirano Т., 1992; Kishinoto Y., 1989). Экспрессия ИЛ-6 происходит под влиянием вирусов, бактерий и их поликлонапьных активаторов, а также цитокинов, секретируемых клетками при воздействии инфекционных агентов. Рецептор к ИЛ-6 (HJI-6R) экс пресс иру ется на лимфоидных и нелимфоидных клетках (Taga Т., et al., 1987). Для В-лимфоцитов характерно наличие рецептора на активированных или бластных клетках, тогда как нормальные и покоящиеся В-клетки не несут на своей поверхности ИЛ-6В. (Hirata Y., et al., 1989). В-лимфоциты, экспрессирующие ИЛ-бИ, продуцируют повышенные уровни Jg G (Yshiyama Т., et al., 1996). В отличие от них, Т-лимфоциты экспрессируют ИЛ-бЯ. Другими клетками периферической крови, несущими на поверхности ИЛ-6К, являются моноциты. Человеческий ИЛ-6К состоит из 468 аминокислот, включая сигнальный пептид из 19 аминокислот, трансмембранный домен из 28 и цитоплазматический из 82 аминокислот (Hirata Y.. et al., 1989).Экс премируемый на клеточной поверхности HJ1-6R является гликопротеином с молекулярной массой 80 kDa (Hirata Y.. et al.. 1989).Комплекс, образованный ИЛ-6 и его рецептором, ассоциируется с вторичным мембранным гликопротеином. имеющим молекулярную массу 130 kDa. Он обозначается как gpl30 и является сигнальным трансдуктором, то есть транс мембранным переносчиком сигнала, передаваемого ИЛ-бИ. При активации рецептора ИЛ-6 происходит гомодимеризация трансмембранного рецептора, gp 130. запускающего каскад передачи сигнала.Кроме того, в сыворотке крови человека обнаружена растворимая форма белка gpl30 - sgp!30 с молекулярной массой от 90 до ПО кДа и показано, что в присутствии рекомбинантного IL-6 растворимая форма этого белка способна связываться с растворимой формой рецептора IL-6. В то же время обнаружено, что sgpl30 сыворотки крови может оказывать негативное влияние на регуляцию сигнала ИЛ-6. Кроме того, рекомбинантный sgpl30 обладает ингибирующим эффектом на биологическую функцию некоторым цитокинов. Благодаря участию растворимой формы ИЛ-6 активация gpl30 происходит даже в тех клетках, которые не имеют мембранного рецептора ИЛ-6 (Liauiard J. et al., 1997). Так, ИЛ-6 может вызывать гипертрофию миокарда, воздействуя на gpl30. хотя в миоцитах отсутствуют рецепторы ИЛ-6. Рецептор gpl30 обеспечивает передачу сигнала многих цитокинов и факторов роста, включая интерлейкин-11. онкостатин-М. фактор подавления лейкоза, цилиарный нейротрофический фактор, кардиотропин-1, лептин (Stahl N.. Yancopoulos G.D., 1993: Kishimoto Т. et al., 1994, 1995). Связывание циркулирующего в крови ИЛ-6 с его растворимым рецептором может активировать субъединицы рецептора gpl30 на поверхности клеток, не имеющих мембранного рецептора ИЛ-6. Возможно, активация тех же субъединиц рецептора gpl30 происходит при активации рецептора лептина. рецептора фактора подавления лейкоза, который взаимодействует с фактором подавления лейкоза. онкостатином-М. цилиарным нейротрофическим фактором и кардиотропином-1 и специфическим рецептором онкостатина-М (Stahl N.. Yancopoulos G.D., 1993; Kishimoto Т. el al., 1994, 1995).ИЛ-6 оказывает разнообразное и очень существенное влияние на многие органы и системы организма: кровь, печень, иммунную и эндокринную системы, а также на обмен веществ. В частности, ИЛ-б действует как мощный активатор гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, а глюкокортикоиды регулируют его секрецию по принципу отрицательной обратной связи. ИЛ-б в значительной степени стимулирует секрецию соматотропного гормона, подавляет секрецию тиреотропного гормона и снижает концентрацию липидов в крови (Bay lis Р.Н., Thompson C.J., 1990; Mastorakos G.etal., 1994; Brugada R., et al, 1996; Papanicolaou D.A. et al., 1996). Кроме того, секреция ИЛ-6 усиливается под влиянием стресса и регулируется катехоламинами по принципу положительной обратной связи.Введение ИЛ-6 вызывает лихорадку, анорексию и слабость. Повышение уровня ИЛ-6 в крови наблюдается при синдроме отмены кортикостероидов, а также при тяжелых воспалительных процессах, инфекциях, травмах, т.е. состояниях. когда может нарушаться секреция вазопрессина (антидиуретического гормона) (Papanicolaou D.A. et al., 1996, 1997; Tsigos et al., 1997). Кроме того, содержание ИЛ-6 в крови повышается при заболеваниях с выраженным воспалительным компонентом, таких как ревматоидный артрит. Эстрогены и андрогены подавляют действие ИЛ-6 (Girasole G. et al., 1995; Chen J.Т. et al., 1996), который играет центральную роль в патогенезе остеопороза с повышенной резорбцией костной ткани (Bellido Т. et al., 1995; Stein В., Yang М.Х., 1995). Ги пер продукция ИЛ-6 может способствовать развитию заболеваний в период старения и при хроническом стрессе (Ershler W.B. et а!., 1993; Hager К. et al., 1994; Cohen H.J. et al., 1997). ИЛ-6 продуцируется многими типами клеток, включая Т- и В-лимфоциты при митогенной стимуляции, моноциты, кератикоиды и фибробласты, р клетки островков Лангерганса поджелудочной железы, эндотелиоциты и клетки стромы эндометрия, а также клетки макрофагальной клеточной линии Р-388. Интерлейкин-б секретируется различными опухолями, в том числе клетками плазмацитомы, сердечной миксомы, мезотелиомы, клетками различных миелом, эпидермалыюй карциномы, остеосаркомы, карциномы мочевого пузыря (Yang Y.C. et al., 1988; Vankelecom H. et al., 1989; Heinrich P.C. et al., 1990; Kameda T. et al., 1990; Loppnow R, Libby P., 1990; McGee D.W. et al., 1993; Boockfor F.R. et al., 1994; Bellido T. et al., 1996). Обнаружено, что эндотелиоциты больных лимфопролиферативными заболеваниями обладают способностью к длительной спонтанной секреции больших количеств ИЛ-6, которые способны ингибировать человеческие клеточные линии. Подобное действие описано для клеток карциномы молочной железы (Tam i. et al., 1989) Под влиянием эндогенного ИЛ-6 опухолевые клетки утрачивают эпителиальную морфологию, повышается их подвижность, теряются десмосомы (Шаманский СВ., 1997). ИЛ-б может также ингибировать рост некоторых В-клеточных линий хронического лимфолейкоза и лимфом (Серербряная И.В. и соавт., 1998). ИЛ-6 может быть аутокринным ростовым фактором и способствовать росту плазмоцитомных и миеломных клеточных линий (Vink A. et al., 1998).Диапазон влияния ИЛ-6 на эндокринную систему и обмен веществ весьма широк. Катехоламины стимулируют продукцию ИЛ-6, тогда как глюкокортикоиды, эстрогены и андрогены подавляют ее. ИЛ-6 существенно повышает выработку кортикотропин-рилизинг-гормона (КТРГ, кортиколиберина). что приводит к усилению секреции адренокортнкотропного гормона (АКТГ) и кортизола. В высоких концентрациях ИЛ-6 стимулирует также секрецию соматотропного гормона и вазопрессина (антидиуретического гормона) и подавляет секрецию тиреотропного гормона и снижает уровень липидов в крови. В экспериментах на животных было показано, что резкая активация гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы под влиянием ИЛ-6, в первую очередь, обусловлена его воздействием на нейроны, секретируюгяие КТРГ. Блокада секреции КТРГ подавляет влияние экзогенного ИЛ-6 на гипоталамо - гипофизарно-надпочечниковую систему крыс (Naitoh Y. et al., 1988). Подкожное введение ИЛ-6 здоровым добровольцам повышает в крови уровень адренокортикотропного гормона, и лишь после этого - кортизола (Papanicolaou D.A. et al., 1998). Уровень кортизола достигает максимального значения после достижения пика концентрации АКТГ. Это свидетельствует о том, что влияние ИЛ-6 на уровень кортизола скорее всего опосредуется через высвобождение АКТГ (Papanicolaou D.A. el al., 1996). ИЛ-6 представляется одним из самых мощных факторов, способных стимулировать гипоталамогипофизарно-надпочечниковую систему человека Подкожное введение ИЛ-6 один раз в сутки в течение 7 дней приводит к значительному увеличению надпочечников, подобному тому, которое развивается после продолжительного активирующего влияния АКТГ на надпочечники при болезни Кушинга или при эктопической продукции АКТГ (Mastorakos G. et al., 1993). Глюкокортикоиды подавляют выработку ИЛ-6 у человека и животных как in vitro, так и in vivo (Rock С S. et al, 1992, Breuninger L.M. et al., 1993). Отмечено, что введение гидрокортизона или дексаметазона ослабляет связанное с физической нагрузкой повышение уровня ИЛ-6 в крови (Papanicolaou D.A. et al., 1996). В то же время после хирургической коррекции гиперкортицнзма (удаление продуцирующей кортикотропин аденомы) содержание кортизола в крови становилось неопределяемым, а уровень ИЛ-6 более чем в 4 раза превышал уровень, наблюдаемый при болезни Кушинга (Papanicolaou D.A. et al., 1996).Следовательно, ИЛ-6 стимулирует гипоталамо-гипофизарнонадпочечниковую систему, а кортизол влияет на секрецию ИЛ-6 по принципу отрицательной обратной связи. Таким образом, ИЛ-6 действует подобно классическому гормону, являясь одним из звеньев в петле обратной связи гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы. Так, имеющиеся данные указывают на то, что ИЛ-6 активирует гипоталамо-гипофизарнонадпочечниковую систему, а глюкокортикоиды подавляют его секрецию.ИЛ-6 стимулирует термогенез и основной обмен (Rothwell N.J., 1993; 1994; Papanicolaou D.A. et al., 1998), а также участвует в патогенезе синдрома отмены кортикостероидов (Mastorakos G et al , 1994, Papanicolaou D.A. et al., 1996, 1998}.Помимо этого, ИЛ-6 стимулирует секрецию вазопрессина и, возможно, участвует в развитии синдрома повышенной секреции АДГ (Weber J.S. et al., 1979; Thompson C.J., 1990). ИЛ-6 участвует также в стрессовой реакции, возможно, под влиянием катехоламинов (Papanicolaou D.A. et al., 1996; Soszynski D et al.. 1996) и способствует резкому снижению уровня липидов в крови (Wenger N К. et al.. I9S7- Papanicolaou D.A. et al., 1996).Следует отметить, что экспрессия ИЛ-6 может подавлять функцию щитовидной железы и, по-видимому, принимает участие в развитии синдрома эутиреоидного гипотиреоза (Burman K D . 1982. McCann S.M., 1991;BoelenA. etal, 1993).Имеются сведения, что ИЛ-6 оказывает влияние на скорость опухолевого роста в костях, экспрессия которого выявлена как в нормальных, так и в опухолевых клетках различного гистеогенеза. ИЛ-6 также обладает способностью повышать резорбцию костной ткани in vitro и оказывать влияние на дифференцнровку остеокластов в культуре костной ткани человека и млекопитающих. Доказано, что ИЛ-6 в большей степени способствует выработке новых остеокластов из клеток предшественников, чем повышению активности зрелых остеокластов, участвует в регуляции метаболизма кальция и фосфора в костях (Кушлинский НЕ. и соавт., 2001) Течение злокачественных новообразований костей сопровождаются более высоким содержанием ИЛ-6 в крови, чем доброкачественных новообразований, и достигает максимума при генерализации опухолевого процесса. Полученные результаты исследования позволяют предполагать связь между экспрессией ИЛ-6 и развитием новообразований костей у человека. Таким образом, повышение скорости ре моделирован и я и потери костной ткани, присущие некоторым заболеваниям, можно объяснить избыточной деятельностью остеокластов вследствие повышенной продукции или усиления эффектов.Показано, что у больных раком и другими новообразованиями молочной железы ИЛ-6 выявляется в 1.4 раза чаще, чем у практически здоровых женщин соответствующего возраста.Однако достоверных различий между уровнями цитокина в обследуемых группах не выявляется. Также не обнаружено зависимости между частотой выявления, уровнем ИЛ-6 и возрастом в сыворотке практически здоровых женщин В больных раком молочной железы (Швецова Г.Н.. 2002). На линиях клеток рака яичников человека изучалось влияние ИЛ-6 на апоптоз. индуцированный химиотерапией. Клетки трех линий рака яичника человека JV. GG и NF. были обработаны противораковым препаратом цис-диамминдихлорплатиной (II) (CDDP) и паклитакселем (таксол) на протяжении 72 часов. Обработки были повторены в комбинации с рекомбинантным IL-б человека или анти-1Ь-6 моноклональным антителом (анти-П.-6тАЬ). Наблюдали сниженную цитотоксичность и меньшее количество апоптотических клеток после комбинированной обработки CDDP или таксолом и IL-6 по сравнению с обработкой одними лекарствами без IL-б. Однако комбинированная обработка CDDP или таксолом с анти-1Ь-6тАЬ значительно повышала цитотоксические зффекты лекарств и достоверно увеличивала число апоптотических клеток (Rancourt C.et а!.. 1999).Как показывают приведенные нами данные литературы, экспериментальных работ по определению роли ИЛ-6 в процессах пролиферации клеток и апоптозе немало, значительно меньше клинических исследований. Проводившиеся изучение уровня ИЛ-6 в крови, которые показали, что при увеличении уровня цитокина в крови отмечается снижение экспрессии рецептора Fas. Клинических исследований по изучению роли ИЛ6 при опухолях женской репродуктивной системы в доступной нам литературе мы встретили немного. Если прогностическая ценность ИЛ-6 в сывортке крови больных опухолями женской репродутивной системы подтвердится будущими исследованиями, то в дополнение к существующим клиническим параметрам, значение данного показателя может использоваться как критерий прогноза исхода заболевания и эффективности лечения.Апоптоз важный биологический процесс, принимающий участие в поддержании постоянства клеточного состава организма. Его определяют как вид клеточной гибели с характерными морфологическими и биохимическими признаками (Thompson В., 1995). Термин апоптоз или «сморщивающий некроз» предложен Кегг J.F.R. и соавторами в 1972 году.Программированная гибель клетки или апоптоз имеет место в поцессах эмбриогенеза, регулирует возрастную и гор монозависимую инволюцию органов и тканей (эпифиз, тимус), удаляет стареющие и поврежденные клетки (B.C. Новиков, 1996; А.А. Ярилин, 1998). Апоптоз играет важную роль в регуляции функций иммунной системы, подавляя избыточный иммунный ответ путем элиминации активированных лимфоцитов после их взаимодействия с чужеродными антигенами, также обеспечивает лизис клеток-мишеней цитотоксическими Т-лимфоцитами (ЦТЛ) и NK-клетками (Abbas А.К., 1996). В организме ежедневно посредством апоптоза элиминируется 70 миллионов только В-клеток, продуцирующих ннзкоаффинные иммуноглобулины и аутореактивные клоны (Holzman D. et al., 1994). Апоптоз или профаммиронапная гибель клетки участвует в патогенезе многих заболеваний, включая аутоиммунные, опухолевые и вирусные заболевания. Эти заболевания могут быть разделены на две группы. В первую группу входят болезни, для которых характерна повышенная выживаемость клеток, т.е. ннгибирование апоптоза. К ним относятся аутоиммунные нарушения, опухолевые и вирусные заболевания.Вторая группа патологических состояний связана с чрезмерной активностью апоптоза: это такие нейродегспсративныс заболевания, как болезнь Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, эпилепсия и алкогольная энцефалопатия, дегенерация мозжечка (Thompson СВ., 1995).Встречается апоптоз и при ишемических повреждениях тканей. В развитии инфаркта миокарда и инсульта ведущее место занимает ишемия, клетки в основном погибают по типу некроза. Однако клетки по периферии очага повреждения подвергаются апоптозу (Beilharz EJ. et al., 1995).Результаты исследований показали, что клетки при ишемическом повреждении подвергаются Fas-зависимому апоптозу (Matsuyama Т. et al., 1994).Программированная гибель клетки или апоптоз имеет место и при различных заболеваниях печени. Например, при острой жировой дистрофии печени, вызванной алкогольной интоксикацией, клетки печени подвергаются программированной гибели. Известно, что дегенеративные и возрастные изменения зависят от соотношения активности процессов пролиферации и гибели клеток. В литературе представлены данные о том, что апоптоз участвует в патогенезе атеросклероза. Так как известно, что атеросклеротические изменения в сосудах начинаются с бесконтрольной пролиферации гладкомышечных клеток, а уровень их гибели, очевидно, низок в связи с нарушением программированной клеточной гибели.В последние годы появились работы, посвященные роли апоптоза в патогенезе опухолевых заболеваний (А. А. Фильченков, 1996; А.А. Фильченков и Р.С. Стойка , 1998). Предполагается, что развитие опухоли является результатом дисбаланса между процессами пролиферации клеток и апоптозом. Апоптоз также принимает участие и в циклических изменениях эндометрия и яичников. Программированной гибели подвергается поверхностный эпителий преовуляторного фолликула. (Akkerman R.C. et al., 1993; Murdoch W.J., 1995). Апоптозу подвергаются и клетки несущие поврежденные ДНК, что препятствует образованию клонов с мутациями (Que F.G., 1996).Смерть клетки во время апоптоза является активным процессом, требующим участия самой клетки в собственном уничтожении (Kerr J.F.R. et al., 1972), что и отличает его от другого вида клеточной гибели некроза, который возникает при сильных повреждениях таких, как ишемия, механическая и химическая травма, высокая температура {Cohen J.J., 1993).При некрозе разрушаются мембраны клетки, что ведет к выходу лизосомальных ферментов в межклеточное пространство и развитию воспалительного процесса. В отличие от некроза, который зависит от воздействия внешних факторов, апоптоз связан с экспрессией генов, которые могут индуцировать или ингибировать гибель клетки (Magno G. и Joris I., 1995).Апоптоз начинается с конденсации цитоплазмы и уменьшения ее объема, уплотнения клеточных органелл и фрагментации хромосомных ДНК до отдельных нуклеосом. Все это заканчивается образованием апоптотических телец, которые утилизируются макрофагами или соседними паренхиматозными клетками, что позволяет избежать воспаления и повреждения окружающих структур (Кегт J.F.R. etal., 1972, Cohen J J., 1993).Смерть клетки может быть вызвана множеством стимулов типа истощение факторов роста, гормоны, облучение и другие ДНК повреждающие агенты. Одним из факторов, запускающих в клетке апоптоз, является Fas-лиганд (FasL). При связывании его с агонистическими моноклональными антителами против Fas или с Fas-рецептором развивается Fas-опосредуемый апоптоз. приводящий к гибели клетокмишеней (Traulh B.C. et al., 1989; Itoh N. et al.. 1991). В 1989 году исследователи в лабораториях Германии и Японии независимо друг от друга получили моноклональные антитела, вызывающие гибель различных линий человеческих клеток. Антигены клеточной поверхности, опознаваемые ими, были названы АРО-1 и Fas (Trauth B.C. et al., 1989; Yonehara S. et al., 1989). Дальнейшие исследования установили, что моноклональные антитела против Fas и АРО-1 опознают один и тот же антиген, который согласно международной номенклатуре получил название СД95 (Robertson М. и Ritz J.. 1994). Fas/APO-1 является гликопротеином 1 типа длиной из 335 аминокислотных остатков с сигнальной последовательностью на N-конце и трансмембранным участком а середине молекулы (Itoh N. et al., 1993; Oehm A. et al., 1992). Fas относится к семейству рецепторов TNF/NGF, которое включает СД27, СДЗО, СД40, рецептор TNF 1 и 2 типов (TNF R1 и TNF R2), рецептор NGF, рецептор лимфотоксина-р и TRAMP (Nagata S. и Golstein P., 1995). Эти рецепторы являются трансмембранными белками 1 типа, Nконцевая последовательность которых находится вне клетки, С-конец - в цитоплазме.У человека ген Fas локализован в длинном плече 10 хромосомы. Fasантиген обнаружен почти во всех тканях, где может присутствовать постоянно или появляться после активации клеток. Fas экспрессируется в тимусе, печени, сердце, легких, яичнике, предстательной железе, клетках лимфоидного и миелоидного происхождения (Rokhlin O.W. et al., 1997; Sidorenko S.P. et al., 1990; П.Сидоренко, 1998).Повышенная экспрессия Fas отмечается на активированных лимфоцитах, а также на лимфоцитах, трансформированных вирусами, такими как вирус Эпштейна-Барра (EBV), вирус Т-клеточного лейкоза человека (HTLV-1), вирус иммунодефицита человека (HIV) (Sidorenko S.P. et al., 1992; Robertson M., 1994). Наиболее подробно изучена роль FasL в индукции Fas-опосредуемого апоптоза. Развитие Fas-за вис им ого апоптоза осуществляется перекрестным связыванием Fas-рецептора тримерами FasL или с помощью агонистических моноклональиых антител против Fas (Dhein Let al., 1995). FasL имеет строение трансмембранного белка 2 типа, длина 281 аминокислотных остатков, N-концевая последовательность находится в цитоплазме, С-конец вне клетки. FasL существует в двух формах: мембраносвязанный FasL (mFasL) и растворимый Fas-лиганд. sFasL существует в виде тримера и является продуктом протеолиза мембранос вязанного FasL и способен ингибировать его действие (Suda Т. et al., 1993; Nagata S. et al., 1995). FasL экспрессируется на активированных лимфоцитах, NK-клетках, моноцитах и макрофагах. FasL постоянно экспрессирован в тканях глазного яблока и на клетках Сертоли семенников.Эти ткани защищены от местных иммунных реакций и связанного с ними воспаления. Экспрессированный на них FasL предотвращает проникновение в ткани глаза и семенников активированных воспалительных клеток, обеспечивает этим участкам привилегированный иммунный статус.Аллогенные и ксеногенные ткани могут быть успешно трансплантированы в эти органы (Suda Т. et ah, 1993; Liles W.S., 1996; Griffith T.S., 1996). Fast является цитокином и относится к семейству TNF (Suda Т. el al., 1993; Nagata S. et al., 1995). Цитокины - регуляторные белки, способные модулировать функциональную активность клеток - продуцентов. При взаимодействии цитокииов с мембраносвязанным рецептором клетки происходит передача сигнала с клеточной поверхности через цитоплазм этические структуры к ядру и модуляция экспрессии соответствующих генов, что приводит к появлению новых белков- продуктов активированных генов Взаимодействие FasL приводит к тримеризации Fasрецептора, его «домены смерти» (DD) связываются с гомологами «домена смерти» (DDH) в белках-адапторах FADD/MORTI и RJP, что приводит к транслокации цитозольных адапторных белков к мембране. «Домен смерти» (DED), принадлежащий FADD/MORT1 связывается с N-концевым продоменом каспазы-8 (FLICE, МАСН. Mch 5), который имеет два DEDдомена. Подобный механизм возможен и для каспазы-1 и каспазы-10 (Boldin М.Р. et al., 1996; Muzio M. et al., 1996).Эта группа каспаз выступает в роли «ампляфицирующих» каспаз и является чувствительной к ингибитору Сгт А (белок вируса оспы) и пептидным ингибиторам YVAD, zVAD (Fraser А. и Evan G., 1996).Субстратами для них являются «рабочие»: каспаза-3 (СРР 32, Yama, апопаин), каспаза-7 (Mch3, ICE-LAP3, СМН-1) и каспаза-9 (ICE-LAP6, Mch 6), чувствительные к ингибитору DEVD (Fraser A. el. al., 1996). «Рабочие» каспазы расщепляют ферменты, участвующие в репарации ДНК: поли(АДФрибозо)полимераза (PARP) и ДНК-зависимая протеинкиназа, а также ядерные ламины и компоненты цитоскелета (Martin S.J. et al., 1995).Морфологические изменения клеточной структуры, происходящие при ап о птозе, включают протеолитическое расщепление компонентов цитоскелета, разрушение ядерной ламиновой сети, конденсацию хроматина, активацию эндонуклеаз, вызывающих фрагментацию хромосомной ДНК на ол игом еры. Образовавшиеся при этом апоптотические тельца элиминируются макрофагами до разрушения их мембран, что предотвращает воспалительные процессы (Martin S.J. et al.. 1994; Kerr J.F.R. et al., 1995; Green D.R. et al., 1992).С нарушениями в системе Fas/FasL связаны два вида аутоиммунных заболевания у мышей; спонтанные мутации Ipr (лимфоидная пролиферация) и gld (генерализованное лимфоирачифсритшшое зайЪ.'и: панне), несущие аутосомные мутации в 19 и 1 хромосомах (Russel J.H. и Wang R., 1993; Watanabe-Fukunaga R. et al., 1992). Мыши, гомозиготные по Ipr и gld аллелям, имеют синдром нарушения функций лимфоцитов, сходный по проявлениям с системной красной волчанкой и включающий гипергаммаглобулинемию, аккумуляцию аутоантител, артрит, васкулит и гломерулонефрит (Tiberghien F. et al., 1993; Watanabe-Fukunaga R. et al., 1992). Аутоиммунное заболевание у детей, сходное с синдромом у мышей с мутацией !рг, ассоциировано с мутациями в гене, кодирующем Fas (Sneller М.С., 1992). Для него характерны спленомегалия, лимфаденопатия, гипергаммаглобулинемия, аутоиммунные реакции, В-клеточный лимфоцитоз, а также нарушение апоптоза in vitro (Fuss l.J. et al., 1997; Sneller M.C., 1997). Заболевание получило название аутоиммунный лимфопролиферативный синдром (ALPS). У родителей этих детей, также имеющих мутации в гене Fas и нарушения Fas-опосредуемого апоптоза, отсутствовали клинические проявления заболевания, что позволяет предположить наличие пока неизвестных модифицирующих факторов (Lenardo M.J., 1996). FasL экспрессируется на опухолевых клетках различного происхождения: на клетках меланомы, множественной миеломы, гепатоцелл гол яркой карциномы печени и рака толстого кишечника.Уровень растворимого Fas л и ганда (sFasL,) в сыворотке крови онкологических больных оказался значительно выше, чем в сыворотке крови здоровых людей (Lautragoon-Lewin N., 1998). При этом индукция апоптоза в опухолевых клетках не происходит, что может быть объяснено «потерей» ими Fas или продукцией цито протекторных белков клетками, коэкспрессирующими Fas и FasL, что препятствует развитию апоптоза (WellerM., 1998).Особенно чувствительны к Fas-Иадуцнруемому апоптозу клетки печени. Fas-антиген при острых гепатитах, особенно часто эк с премируется на гепатоцитах, окруженных лимфоцитами на границе некроза и здоровой ткани паренхимы (Okazaki М. et al., 1995). Следует отметить также гиперэкспрессию FasL на этих лимфоцитах, что способствует массивному повреждению ткани печени (Mita Е. et al., 1994).Имеются сведения об экспрессии Fas-антигена при лимфагрануломатозе на поверхности клеток Березовского-Штернберга и Ходжкина (Owen-Schaub L.B. et al., 1993; Pinchuk V.G. et al., 1986; Sidorenko S.P. et al., 1990). Было показано, что Fas-антиген на поверхности этих клеток является функционально активным и способен индуцировать апоптоз при связывании с моноклональиымн антителами против Fas или FasL (Gruss H-J- et al., 1995), Гиперэкспрессия Fas-антигена на опухолевых клетках отмечается также при медиастинальных В-лимфомах (Moller P. et al., 1993).Не все Fas-позитивные клетки восприимчивы к апоптозу: Т-клетки в периферической крови в дополнение к некоторым В-клеточиым опухолям на активацию Fas отвечают пролиферацией вместо гибели (Mapara M.Y., 1993; Alderson M.R., 1993).Можно предположить, что реакция клетки на связывание FasL с Fasантигеном, смерть или пролиферация, зависит от типа клетки, стадии лиффсренцировки и присутствия других стимулов.Апоптоз или программированная гибель клетки может также модулироваться растворимым Fas-ант и геном. Для определения возможности экспрессии растворимых форм Fas были исследованы транскрипты мРНК Fas, полученные из мононуклеарных клеток здоровых людей и опухолевых клеток человека. Описаны три варианта мРНК Fas: Fas TMDel, Fas Del 2, FasDel 3 (Cascino I. et at., 1995), способные ингибировать Fas-опосредуемый апоптоз, индуцированный агонистическими моноклональными антителами против Fas. Растворимые формы рецепторов образуются за счет протеолиза мембраносвязанных рецепторов, как имеет место для IL-2R (Rubin L.A. et al., 1985; Josimovic-Alasevic O.T., 1988) и TNFR (Loetscher H.Y., 1990) или посредством альтернативного сплайсинга, что касается IL-4R и IL-7R (Mosley В.М. et al., 1989, Godwin А.К., 1992).У больных, страдающих различными формами опухолей лимфоидной ткани, часто определялись в сыворотке крови растворимые формы Fas, видимо, обусловленные нарушением транскрипции и трансляции гена Fas, а также синтезом мутантныч белков (Weller М. et al., 1998).Повышенный уровень растворимого Fas-антигена обнаружен также в сыворотке крови у больных системной красной волчанкой и наблюдаемый при этом лимфоцитоз, возможно, объясняется нарушением элиминации активированных лимфоцитов при ингибировании Fas-опосредуемо го апоптоза растворимым Fas-антигеном (Thompson СВ., 1995).Также отмечали повышенный уровень sFas-антигена в сыворотке крови при таких аутоиммунных заболеваниях, как системный туберкулез кожи (Fushimi М. et al., 1998), болезни Грейвса (Shimaoka Y. et al., 1998).В экспериментальных исследованиях показано, что все три растворимые формы Fas-антигена подавляют Fas-опосредуемый апоптоз индуцироваш 1ЫЙ агонистическими моноклональными антителами против Fas и конкурируют с мембраносвязанным Fas-антигеном за связывание FasL. Fas TMDel связывает MA против Fas, таким образом, ингибируя Fasопосредуемый апоптоз (Cheng J. et al., 1994). Однако, этот механизм вряд ли характерен для FasDel2 и FasDel3. In vivo, возможно, они ингибируют Fasзависимый апоптоз. связывая Fas-антиген.Имеются сообщения о взаимодействии между растворимыми формами лигандов и растворимыми формами рецепторов, например, подавление тирозинкиназной активности эпидерм ал ьно го фактора (EGF) регулируется не простой конкуренцией за доступный EGF. а определенной ассоциацией с EGF {Basu A. el al.. 1989). Подобный вид ассоциации был установлен и для других растворимых рецепторов типа IL-6R (Hibi М. et al.. 1990).Растворимые варианты Fas-антигена могут взаимодействовать и с другими белками клеточной поверхности и косвенно влиять на агонистические МА против Fas. Видимо, что механизм подавления апоптоза растворимыми формами Fas- антигена гораздо сложнее, чем конкурентное ингибирование.Подводя итог анализу литературных данных, можно отметить, что исследование молекулнрно оно.логических факторов, участвующих в регуляции апоптоза и ангиогенеза. поможет в понимании патогенеза опухолевых заболеваний. Экспериментальные исследования достаточно убедительно свидетельствуют о важной роли вышеупомянутых белков в процессах инвазии и метастаз ирован и я злокачественных опухолей, в том числе и опухолей женской репродуктивной системы. Вопрос о возможности использования этих показателей в качестве прогностического критерия заслуживает дальнейшего углубленного изучения.ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Обушева, Мария Нармановна

выводы

I Чистота выявления и уровни sFas-амтнгсно, VEGF и ИЛ-б в сМНротп крови больных новообразованиями яичников выше, чем у практически здоровых жен шин соответствующего возраета и менструального статуса. При этом наибольшей диагностической ценностью обладал sFas при порогам его значен ни IД иг/мд.

Содержание «Fas ■ сыворотке кропи больны* раком тела матки в 2 раза достоверно выше, чем у практически здоровых женщин Уровни ИЛ-б <р~0,ГЮ1 К VEGF (р=О.ООП в сыворотке крови практически здоровых женшнн ИТ контрольной группы достоверно ниже, чем у больных раком тела чагки,

3, У больных доброкачественными новообразованиями яичников наиболее высокие показатели sFas обнаружены при музщнозной пограничной опухоли, цистаденофнброме и опухоли Бреннера. Содержание VEGF в сыворогке крови больных доброкачественными нокюбракмшниими яичников повышается в постыеиопзую, Уровень ИЛ-6 в сыворотке кровн больных с пограничными опухолями яичников имеет корреляционную взаимосвязь с возрастом.

4, Выявлено, что содержание sFas-антнгена в сыворотке крови больных раком яичников достоверно (р-0,018) зависит от гистологическою варианта с1роеиия и размера опухоли.

5 Показано, что соде ржание VEGF в сыворотке крови больных раком яичников имеет прямую корреляционную связь с размерами опухоли, а наиболее высокие уровни VEGF выявлены у больных серозной цнстадснокарцнномоПб. Показано, что сочетание «высокого» содержания íFas в сыворотке кровн с крупными размерами опухоли достоверно снижает обшую (р=0,01) и безреаидивную (р-0.028) выживаемость больны* раком яичников,

7 Содержание аРв* (р-0.001; р<0,0001), ИЛ-6 <р=0,Ш5; р-0,001), УЕОР <р=О.О0] > и сыворотке крови больных раком тела матки достоверно связано корреляционной взаимосвязью со стадией заболевали», степенью дифференцирован и размером первичной опухоли.

8, У больных раком тела матки анализ обшей выживаемости с учетом клнннко-морфолсизртеских проявлений заболевания и содержания 5Газ. УЕбР, Ш1-6 в сыворотке крови выявил, что УЕОЕ (р=0.035) является независимым прогностическим фактором

9. Г [оказано, что у больных раком тела матки только стадии заболевания <р-0.001 к и содержание УЕСЕ (р-4,002) в сыворотке крови статистически значимо определяют время возникновения рецидива болезни.

Заключение

В обшей структуре онкологических заболеваний женской репродуктивной системы рак яичников составляет от 20% до 53% всех злокачественных опухолей и в яру их тяжелого клинического течения и высокой смертности является важной социальной проблемой, В большинстве развитых стран мира имеется тенденция к повышению уровня заболеваемости роком яичников н смертности от него (Е Г.Новикова и Е.А. Роннна, 2000), По данным Международного агентства но изучению рака ежегодно в мире регистрируется более чем 165000 новых случаев рака яи'мнков, к более 100000 женщин умирает от злокачественных опухолей яичников (IARC So, Pabt, Lyon, 1997) Ежегодно в России рак яичников выявляется более чем у 11000 женшин (11,7 на !00 тыс.), занимая 7-е место в структуре общей онкологической заболеваемости и 3-е место - среди опухолей женской репродуктивное системы, после рака тела и шейки матки (В,И Чиссоа и соавт., 1999) и при этом средний возраст больных составляет 58 лет (Е М Аксель и соавт,, 2401),

В последние десятнлсгия отмечается также значительный рост заболеваемости раком тела матки, обусловленный старением женскою населения, изменением условий жизни и характера житии. Рост заболеваемости раком тела матки также связано с увеличением продолжзггсльиостн жизни женщины, с повышением частоты иейрообментю-эндохринных нарушений (сахарный диабет, ожирение, аиовуляцня, гнперэстрогеиня), неадекватным использованием гормональных препаратов с высоким содержанием эстрогенов (Е Г.Новикова н соавт, 2000).

С целью дальнейшего углубленного понимания патогенеза опухолевых заболеваний возникает необходимость изучения роли биологически активных веществ в механизм ах регуляции роста н метастазкрованил опухолей. Особое мотание в последние голы исследователи уделяют изучению апогттоза, запрограммированной гибели клеток, в процессе которого удаляются «нежелательные», биологически нецелесообразные клетки, а также избыточно пролиферирующие опухолевые клеткн(Кс1т J ii соавт.,1972). Одной m ключевых молекул, участвующих в развитии Fas-опосредуемого аполтом, является Fas-рецептор (синонимы APO-l/CD-95}, траисмемброниый тликопротеин ) типа, индуцирующий апо4ттаз в клетке после взаимодействия с Fas-лкгандом или агонистическими моноклональнымн антителами против Fas Причиной устойчивости опухолевых клеток к Fas-зависимому аиоптозу может быть повышенная продукция ими ïFas. который является продуктом альтернативного сплайсинга полиоразмерной молекулы Fas и способен ннгибнровать Fas-опосредуемый алоптоз. Растворимый Fas связывается с FasL, ннгнбируя его действие, н обеспечивает клеткам продуцентам преимущества в выживании и размножении (Cheng J. н еоавт., 1994; Cascino 1. и соавт. 1995). Высокая концентрация iFu в сыворотке крови больных раком яичников обнаружена в исследованиях К Ryo et al (2000), а продолжительность жизни была значительно ниже среди больных с концентрацией sFas > 1.5иг/мл Следовательно, изучение содержания sFas в сыооротке крови больных ршом яшншкоа, как одного из возможных факторов, определяющих злокачественность опухоли, позволит выявить взаимосвязь его с основными клннико-морфологическими характеристиками рака яичников и прогзгозом заболевания.

Представленные в настоящем исследовании данные иммутгофермеитного определения концентрации sFas в сыворотке кроен 202 больных доброкачественными новообразованиями яичников. 141 больных раком яичннкоо и 137 больных роком тела матки обнаружили более частое выявление sFas. по сравнению с практически здоровыми женщинами соответствующего возраста. Растворимый Fas-антиген выявлен в сыворотке крови 162 (80,2%) болышх доброкачественными новообразованиями ят1чн1тков. 78 (55,3%) больных раком яичников и у 48 (40%) практически здоровых женщин (контрольная группа) Уровни sFas в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников колебались от

0,65 иг/мл до 20 кг/мл н в группе Больных раком яичников от 0,65 нг/мл до 20,5 иг/мл (медиана показателя 2,2 Я 2,5 нг/мл. соответственно). II при этом нысокодоетояер)ю(р«0,000001) различались концентрации растворимого Раз в сыворотке крюк больных доброкачественными новообразованиями (среднее точение показателя 3.96±0,45 нг/мл) и раком яичников (среднее значение показателя 4,3±0,51 нг'мл) и практически здоровых женщин (среднее значение показатели 0,8б±0,03 иг/мл), Различна между концентрациями в сыворотке кропи больных доброкачественными новообразованиями и раком яичников были статистически недостоверными <р=0,58).

Таким образом, нами докатаю, что, несмотря на широкие колебания уровней Брая в сыворотке крови преобладающего большинства больных новообразованиями яичников продукция «Бая была вьине, чем у практически здоровых женшин контрольной группы, При зтом нами не обнаружено достоверных различий в содержании &Ра$ между больными раком и доброкачественными и пограничными опухолями яичников Полученные данные позволяют предположить, что высокий уровень зБаз в сыворотке крови и частота его выявления у большинства обследованных нами больных новообразован нямн яичников, не зависимо от их гистогенеза, вероятно, связаны с развитием в ор!ашпме патологического процесса Подтверждением этому служит повышение содержания &Ра£ в сыворотке крови больных с увеличением размера новообразования; при размерах опухоли до 10 см среднее значение показателя равнялось 3,1 ±0,5 нг/мл, более 10 ем - 5,2+1,7 и г.'мл. Выявлена корреляционная зависимость (г=0,49, р-0.03.1) концентрации эГаэ в сыворотке крови и размера опухоли у больных с папиллярной цистяденокарниноыой. В группе больных раком яичников наиболее высокие кониогтрацнн яГл* в сыворотке крови были у пациенток с папиллярной цисталеиокарииномой (медиана 5,2 нг/мл) н муци нотной вденокарцнночой (медиана 3.4 пг/мл),

Отмечено, также, что существует корреляционная зависимость между концентрацией sFas в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников н максимальным размером опухоли у больных с экдометриоодной хнстоВ яичников {г=0,#б: р»0,003), Наблюдши i тесную корреляционную связь между концентрацией sFas в сыворотке крови и размером опухоли (г=0,8б; р=044) у больных серозной цнетаденомой яичников при проведении исследования во |i фазе менструального цикла. Следовательно, существует связь между уровнем sFas в сыворотке крови больных новообразованиями янчннков размером и гистологическим вариантом строения опухоли

Анализ графика обшей выживаемости больных папиллярной цнетадеиокарииномой выявил, что уровень sFa» в сыворотке имеет значение как прогностический фактор и различи* были достоверны (рг0,01) Так, 5-летняя общая выживаемость у больных указанной группы с концентрацией sFas выпи 5 пг/мд равнялась 31,1*17,994, медиана срока наблюдения составила 4 года, а при более низких уровнях показателя 5-легияя выживаемость составила 83.3*15,2%. и медиана срока наблюдения не составила 5 лет.

Изучение результатов обнаружило статистически значимое снижение общей выживаемости (р-0.0042) больных раком янчннков с максимальными размерами опухоли 5-10 см при содержании sFas в сыворотке крови более 5 пКмл: S-летняя выживаемость в этой группе составила 31,3*25,5%, а при уровне sFas менее 5 пг/мл - 89,9*6,9%. Можно предположить, что концентрация sFas выше 5 пг/мл снижает общую выживаемость при сочетании с отягощенным преморбидиом фоном Выпялено достоверное снижение обшей пыживяемости больных раком янчннков без метастазов (р-0,028) при содержании sFas в сыворотке крови выше 5 пт/мл. Так, 3-летняя безряпынвная выживаемость больных раком яичников этой грузина составила 30*9.4%, а медиана срока жизни без рецидива болезни равнялась

2.3 гола В то же время 3 -летня* безреиидивная выживаемость больных раком яичником с уровзкм яРа5 в сыворотке крови ниже 5 пт/мл составила 52.816.9%, а медиана безрецндивной выживаемости 3 года.

Нами также проведено сравнительное изучение содержания ®Раа в сыворотке крова больных раком теля матки и практически здоровых женшин контрольной группы и. несмотря на широкие колебания концентрации показателя среди обшей группы больных раком тела матки (0.62-21 иг/мл} и в группе контроля (0.62-1.14 иг/мл), манит концентрации враз была выеоколостоверно ниже у практически здоровых женщин по сравнению с больными (0,93 и 3.7 нг''мл, соответственно, ра0,0000001). Максимальное содержание яРая в сыворотке крови женщин контрольной группы не превышало ], 14 иг/мл, такие «низкие» уровни зРав выяазеиы только у 26 (23.4%) больных раком тела матки, Частота выявления яРк в сыворотке крови бальных раком тела матки равнялась 76,7%,

Полученные данные выявили высокодостовериун» корреляционную связь содержания »Баз в еыворогке кропи больных раком тела матки, стадии заболевания, степени диффереицировки, глубины инвазии н размера опухоли (р»0,000000]) Выявлена также повышение 5роя в сыворотке крови у больных раком тела матки с диффузной локализацией опухоли и медиана показателя у этой группы больных была выше в 2 раза, чем у больных с локализованной опухолью (ри0.1) Следует отметить, что наиболее высокое значение медианы зРаз (5,9 нг/мл) обнаружено при сопутствующей миоме матке (отягощенный нреморбидный фон).

Изучение кривых выживаемости больных раком тела матки с учетом содержания яРа» а сыворотке крови установило достоверное различие (р=0,0021): 5-летняя общая выживаемость у больных ряком тела матки с «низкими» значениями показателя составила 95,7±4 3% (медиана выживаемости не достигнута). а при «высоких» концентрациях хБа» -65«3±5.9% (медиана не достигнута).

Наблюдалась достоверно« связь (р-О.О0О77| показателей безренндионой выживаемости больных раком тело мягки н уровня iFa» в сыворотке крови, Так» у больных раком тела матки с содержанием $Fat и сыворотке крови < 2 нг'мл 5-летняя безрециднвная выживаемость составила 19.2±7,7% (медиана 4 гола), а при ^высоких» значениях показателя составила 7.6±3.í% (медиана 2.9 лет).

Выявленное нами повышенное содержание sFas в сыворотке крови больных раком яичннков и матки, отмечено также и в работах других авторов (Takayuki U. et al. 1999; Ryo К., et al. 2000). Большинство исследователей связывает это с продукцией опухолевыми клетками растворимой формы Fai, способной нн гиб и ропать Fai-опосредуемый ВЛОЛТОЗ и стало быть даст им возможность увеличивать свою массу (Chcng J. и соант., 1994: Casclno I. и соовт., 1995). Это подтверждают результаты настоящего исследования, в котором убедительно доказано повышение концентрации sFas у больных раком яичников при увеличении размера первичной опухоли Это подтверждают исследования S, Jodo и соавторы (1998). в которых показано, что уровень sFas в сыворотке крови больных множественной гепатоцеллюлярной карциномой был значительно выше, чем у больных локализованной опухолью» а также предполагает тесную связь уровня sFas е опухолевым процессом и течением заболевания. Эти же авторы выявили, что удаление опухоли у больных приводило к снижению содержания sFas в течение первой недели. U- Takayuki el al., 1999 также выявили более высокие уровни sFas в сыворотке крови больных раком молочной железы по сравнению с практически здоровыми женшинамн, а прогноз заболевания был неблагоприятным у больных с наиболее высоким содержанием растворимою Fas. При этом отмечено» что при наличии метастазов опухоли в печени содержание »Fas сыворотке крови было самым высоким.

Значение íFaí как прогностического критерия при опухолевых заболеваниях женской репродуктивной системы до конца не изучено. Необходимо дальнейшее изучение связи уровня sFas в сыворотке крови онкологических болинлс лл» выявления стон показателя с течением заболевания, эффективностью проводимой терапии, частотой появления рецидива болезни

Актуальной проблемой клинической н экспериментальной онкологии за последние годы является изучение механизмов жошпнгян» при развитии злокачественных новообразований Метаболические процессы в злокачественной опухоли отличаются большей интенсивностью обмена веществ, чем и физиологических условиях и повышенная потребность в кислороде быстро пролиферкрутоших опухолевых клеток обеспечивается ангногенеюм Активность, которого регулируется влиянием эндогенных ангиогенных факторов, секрегируемых опухолевыми клетками, а также белками экстрацеллюлярного матрикса (Folkman J et al. 1980,1985). Одним из ключевых активаторов анпюгеиеза является VEGF. который бы.з открыт в 1983 году (Senger D R. е( al., 1983) н назван сосудистым фактором проницаемости. Показано, что фахтор роста эндотелия сосудов (VF.GF) оказывает провосполительное действие, высокое содержание его определяется в синовиальной жилкостн больных ревматоидным артритом (Koch А.Е. 1994, Favo R A., 1994) и усиливает проницаемость сосудов, вызывая образование асцита при опухолевых заболеваниях,

В настоящей работе VEGF определялся в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями и раком яичников, также у практически здоровых женит и Контрольной группы.

При этом, уровень VEGF в сыворотке крови больных новообразованиями яичников колебался в широких пределах от 16,9-1098 п г/мл. у большинства практически здоровых женщин контрол иной группы значение показателя не превышало 350 пг/ыл. При сравнении значений VEGF у больных доброкачественными новообразованиями яичников и у женщин контрольной группы не выявлено достоверных отличий (р°0,057), в то же время у больных раком яичников уровень VEGF был достоверно выше по сравнению как е группой контроля так н при доброкачественных опухолях p=0,000000t).

При этом обнаружена достоверная сщпь (р=0.027) концентрация VEGF в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников от гистологического варианта строения опухоли: наибольшие медианы VEGF у больных с опухолью Бреннера (733,3 пг/мл), е пограничной цнетаденомой (454.3 иг/мл) и с пограничной муцинозной опухолью (624,4 пг/мл)

Обноружеио также, что в сыворотке крови больных раком янчников содержание VEGF достоверно различалось в зависимости от гистологического варианта строения опухоли (р=0.03): наиболее высокое содержание VEGF выявлено у больных серозной ннстаденокарциномой (медиана 796 пг/мл).

Наблюдали «высокие» концентрации VEGF у всех больных с метаетазамн в забрюшинные лимфатические узлы, а большой сальник, в толстый кишечник, с карцшнишоэом брюшины, у 66,7% больных с метастазами о сигмовидную кишку, также у 66,7% пациенток - а тонкий кишечник (р-0,1).

Следует отметить, что изучение кривых выживаемости больных раком яичников с высоким содержанием VEGF от 500 пг/мл медиану срока жизни без метастазов равную 2,9 лет, а при значениях VEGF менее 500 пг/мл медиана срока жизни без метастазов составила 2,8 лег.

Также отмечали более короткий безрецкднвиый период ЖИЖИ у больных первичным раком молочной железы с высоким содержанием VEGF в сыворотке крови (Gaiparini О ei si. 199Т), Кроме этого, имеются данные о том, что с высоким уровнем VEGF в сыворотке крови сочетается неэффективность химнотерапсвтического лечения больных исходжкиискнми лнмфомамн и мелкоклеточным раком легкого (Koredo S. ct al, 1994: Salven P el al., Í997; 1998; Takigawn N. et aL 1998).

Полученные нами результаты подтверждают исследования лруптх авторов в том, что содержание VEGF повышено в сыворотке крови больных опухолям« различных локализаций, и том числе и при новообразованиях органов женской репродуктивной системы. Так, многие опухоли продуцируют VEGF, включая рак легкого (Volrn М, 1997), молочной железы (Brown L.F. et al, 1995; Yoshiji Н. ei «I., 1996). мочевого пузыря (Brown L.F. el al,, 1993), яичников (Olson Т.А, el al. 19Ф4) и эндометрия (Ciiidi AJ. el al,. 1996) MTd el al. (1995.1996) обнаружили, что экспрессия VEGF в сильно ааскудяризироваиных опухолях РМЖ достоверно выше, чем в слабо васкулярнзнроваиных Н Yoshiji el al. (1996) К Anan et al. (1996. 199В), А. Guidi « al. (1997) Г.И Швецова (2003) убедительно доказали, экспрессия VEGF существенно повышена в опухолевых клетках РМЖ по сравнению с нормальными клетками.

В настоящей работе нами также било изучено содержание VEGF в сыворотке крови больных раком тела матки и обнаружено, что значение этого показателя было достоверно выше по сравнению с группой коЕГтроля (р=0,0000001) При этом уровни VEGF я сыворотке крови больных раком тела матки имели яичимую связь с размером первичной опухоли более 5 см (р=0,001). 3-4 стадией заболевания (р=0,0!б), с глубиной инвазии опухоли (р-0,000001), возрастом больных (р=0.0001).

Следует отмстить еще один выявленный нами факт, что у больных раком тела повышенное содержание VEGF связано с числом беременностей, родов (р-0,01), абортов (р-0.02) и также с сопутствующей миомой матки (p-O.OOOOOl).

У больных раком зела матки с концентрацией VEGF в сыворотке крови < 350 пг/мл крови медиана 5-лсгней безреииливной выживаемости составила 4,3 года, а >350 лг/мл медиана равнялась 1.3 лет.

Представленные нами данные свидетельствуют о тесной связи экспрессии VEGF с основными клиинко-морфогсогичсскимн характеристиками опухолевого заболевания и особенностями прсморбндного фона. Повышенный уровень VEGF в сыворотке крови больных опухолевыми заболеваниями, возможно, объясняется активностью внпгогенеза, Многие исследования подтверждают предположение об анпюгтаез-завненмои росте опухоли, о том. что размер опухоли определяется величиной иеоввекуляризашти, При отсутствии кровоснабжения опухолевых культур, их рост ограничивается определенными ратагеромн. они не способны к метветазировани» (FoLkman J., Cot ran R, 1976).

К числу известных ингибиторов апоптоза. в том числе н Fas-зависимого относится иитерлейкнн-б (tL-6-USF-2ilFN bcla 2) мультифункцнональный цитокин. который регулирует рост, дифференцнровку и размножение клеток различных тканей и участвует в развитии иммунного ответа в острой фазе воспаления (Yamasaki К. ct at. 1988; J ilka R.L et al 1998) Обнаружено, что зндотслиадьные клетки больных лнмфопролнфератнвнымн заболеваниями обладают способностью к спонтанной ескрецни интерленкнн-б Экспрессия ИЛ-б может подавлять рост некоторых В-клеточиых линий хронического лимфолейкоза, лимфомы и карциномы молочной железы, он также может быть аутокринным регулятором роста пллзмоиитомных н мисдомных клеточных линий (Chen L. loss. Tam I. eta)., 19S9; Vink A. el al. 1998; Ссрербряная И В и соавт., 1998).

Й настояний работе наряду с изучением содержания sFas и VEQF в сыворотке крови больных новообразованиями яичников также проводился анализ уровней ИЛ-б. Различия значений показателя в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями и у женщин контрольной группы были выеокодоетоверными (р=0,0000001), Уровни ИЛ-б в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями и раком яичников также высокодостоверно различались (р^О,0000001) Отмечено, что медиана концентрации МЛ-6 в сыворотке крови бальных раком яичников была в 3 раза выше, чем у больных доброкачественными новообразованиями в 9 роз выше, чем у женщин контрольной группы.

Анализ связи содержания ИЛ-б в сыворотке крови больных новообразованиями яичников и фаты меиструалыюго никла обнаружил, что уровни ИЛ-б во II фазу менструального цикла несколько снижались в сыворотке крови бальных доброкачественными новообразованиям!! яичников н у практически здоровых женщин, но зтн различия не были статистически достоверными.

Отмечено также, что у больных раком шпнкп» концентрации ИЛ-б во 2 фазе менструального цикла, были достоверно выше, чем в 1 фазе цикла (соответственно, р*0,0003) и «низкие» уровни ИЛ-б в сыворотке крови больных раком яичников чаше выявлялись в I фазе менструального никла

При дисперсионном анализе не выявлено достоверных различий концентрации ИЛ-6 в сыворотке крови как больных новообразованиями яичников, так и в сыворотке крови практически здоровых женщин контрольной группы в зависимости от менструального статуса (р>0,05). Однако отменено, что во всех группах значения этого показателя были выше при сохраненном репродуктивном статусе. Частота выявления «нкжнх» значений ИЛ-б у больных доброкачественными новообразованиями яичников в постзкнопиузе была достоверно ниже, чем у пациенток репродуктивного возраста (рНЗ,04), Кроме того, наблюдали корреляционную связь между содержанием ИЛ-б а сыворотке крови и возрастом больных доброкачественными новообразованиями яичников в иод менопаузе (г=0.б. р=0,002).

В то же время нами не выявлено корреляционной связи между уровнем ИЛ-б в сыворотке крови и возрастом больных рвхом яичников

Несмотря на недостоверное различие медиан у больных доброкачественными новообразованиями яичников с отсутствием абортов и нх наличием в анамнезе частота выявления «высоких* уровней ИЛ-6 (выше порогового значения 1,5 пг/ыл) достоверно увеличивалась у пациенток с абортами » амамиезе (р*0,01),

Следует отметзгть выраженную корреляционную связь уровня ИЛ-б и возраста у больных опухолью Бреннера, пограничными опухолями яичников г-оде р=о.оо5)

С нашей точки зрения следует отметить выявленный факт, что в группе больных раком яичников ¡йбЯбЩШ корреляционную сеян, между уровнем ИЛ-б. частотой выявления его в сыворотке крови и размером опухоли у пациенток без отягощенного преморбндного фона (г*0,41; р=0,08)

Отмечено» что кривая общей выживаемости больных раком яичников в зависимости от Содержания ИЛ-6 в сыворотке крови не выявила статистически значимых различай (р=0,8), Кривая выживаемости без метастазов также не обнаружила разлнч нй (р=0,8).

Следует отметить, что нами щчиш возможтия связь между содержанием зРаз, \ГЕСН и НЛ-б в сыворотке крови больных 1ювообраюеаииями яичников и практически здоровых женщин В сыворотке кропи практически здороиык женшин коитролыгой группы корреляционные связи между значениями показателей не выявили Наблюдали, что концентрации ИЛ-6 и УЕСБ в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников с воспалительными заболеваниями матки и придатков в анамнезе (г=0.5В; р=0.022) пропорционально повышались.

Обнаружено, что у больных доброкачественными новообразованиями яичников пропорциональное изменение уровня НЛ-б относительно максимального размера опухоли наблюдалось только при «низких» значениях зРа4 (г=0.б; р=0,003). тогда как при «высоких'- его значениях зта зависимость отсутствовала Таким образом, ИЛ-6 отражал размер опухоли у больных доброкачественными новообразованиями яичпиков только при содержании зРаз в сыворотке крови менее 1,2 нг/мл.

Достоверная обратная корредипиоинпл зависимость установлена между концентрацией ьГа5 и ИЛ-6 в сыворотке крови больных раком яичников при метастазах и толстый кишечник (г=-0,б&, р=0,01 4),

Следует отметить, что содержания ИЛ-6 и УЕбР в сыворотке крови больных раком яичников и размеры опухоли связаны прямой корреляционной зависимостью при размерах образования более Ю см (1-0,62; р-0.07).

Корреляционная зависимость между икчскиш sFas к VEGF бьша отрицательной и недостоверной у больных раком яичником (г=0,3; р=0. J —> Можно предположить, что показатели изменяются согласованно только при наличии определенных факторов, в остальных случаях у больных раком яичников заменю активизируется какой-то один из изучаемых показателей, а другие при зтом остаются на уровне показателей контрольной группы.

В сыворотке крови практически здоровых женщин преобладали одновременно «инзыге» значения как ИЛ-Ь, так и sFas ■ 75% наблюдений Вместе с тем, в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями яичников преобладал и концентрации a Fas от ] ,5 нг/мл до 4 иг/мл * 63% наблюдений. Следует отметить еще один обнаруженный нами факт того, что в сыворотке крови 50% больных раком яичников преобладали «высокие» значения как HFI-6, так н sFas.

Таким образом, нами доказано, что, несмотря но широкие колебания уровней sFas, ИЛ-б и VEOF а сыворотке крови у преобладающего большинства больных новообразованиями яичников значения показателей были выше, чем у контрольной группы. При зтом нами обнаружены достоверные различия в содержании sPaa. ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови между больными доброкачественными новообразованиями и раком яичников. Полученные нами результаты позволяют предположить, что высокий уровень sFas, ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови и частота их выявления у большинства обследованных нами больных новообразованиями яичников, независимо от нх гистогенеза, вероятно, связаны с развитием в организме патологического процесса.

В настоящем исследовании представлены данные определения ИЛ-б в сыворотке больных раком тела матки н обнаружено достоверное различие содержания ИЛ-6 в сыворотке крови больных раком тела матки от уровней показателя в сыворотке крови практически здоровых женщин (р=0,000003).

Кроме того, изучение изменений ИЛ-6 в сыворотке крови больных раком гела матки позволило выявить связь его с основными клнникоморфологическими характеристиками л прогнозом заболевания Отмечено, что М№юк показателя повышалось про пор око иял ыю стадии (р^,0000001), причем многократно у больных п 3-4 стадиях процесса Анализ влияния на содержат» ИЛ-6 в сыворотке крови больных раком тела матки локализации опухоли выявил достопериос различие, при ограниченной Локализации медиана ИЛ-6 равнялась 2,1 пг'мд н была мкже по сравнению с диффузной, где медиана составила 7,3 пг'мд (р-0,00069) Кроме того, обнаружили, что 5-летняя безреиидианая выживаемость больных раком тела матки при «низких» значениях ИЛ-б составила 23,3±5.5%, (медиана 4,3 года), а при «высоких» концентрациях - 2,2±2,1% (медиана 2,1 год), (р"0,00001). Многофакториый анализ безрецидивной выживаемости больных раком тела матки с учетом клннико-морфалогнчсскнх признаков и содержания я Рая, Х'ЕОР. ИЛ-6 обнаружил, что только стадия заболевания (рЧХООООО!) и значении УЕйР (рН),0024) в наибольшей степени определяли время возникновения метастазов. Данный факт подтверждают результаты исследователей которые выявили повышение экспрессии УЕСР с увеличением СПДИИ опухолевого процесса (Е В. Степанова солят. 2000; И,Н. Подушкина и соавт-, 2004)

В последнее время все большее внимание уделяется ряду молекулярных факторов, которые отражают взаимодействие опухоли и организма. Достаточно перспективными, на наш взгляд, представляются два фактора, связанных с ростом и развитием опухоли - интерлеПкин-б (И.-6) и фактор роста эндотелия сосудов (УЕСЕ). Результаты исследований многих авторов показывают, что оценка содержания этих факторов в крови может был. весьма перспектив)«« при выборе метода терапии онкологических больных и адекватной оненкн результатов лечения для достижения максимального эффекта доения ( Молчанов О Е . 2002).

Таким образом, Проведенное исследование позволило выявить зависимости между показателями основных ингибиторов запрограммированной гибели клеток (агюптоза) 5ря5. ИЛ-6 и ключевым активатором онтогенеза - МЮР с ведущими клнннко-морфодогичсскнмн факторами, которые характеризуют клиническое течение опухолей органов женской репродуктивной системы, Кроме того, подтаем, что выше указанные факторы в определенной степени могут обусловливать успех современной терапии этих заболеваний, о также играть важную роль прогнозе болезни. Уровни »Рая, ИЛ-б, УКОР в сыворотке крови могут быть использованы я кочествс дополнительны* прогностических критериев, а также при разработке индивидуальных схем лечения больных опухолями яичников и матки, возможно, при разработке новых видов патогенетической лекарственной терапии этих заболеваний в качестве мишеней,

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Обушева, Мария Нармановна, 2007 год

1. АббвСОВВ С. I", СоЗДВНИС ТССТ-СПСТеМЫ ,1-1 в к <м i i N CCrlK'l IIIÜ го определения растворимого f а з-антигена в сыворотке крови человека //Днос. канд биол наук -1999. с.49-69.

2. Лавы лов М.И., Аксель Е-М- Злокачественные новообразования а России в странах СНГ в 2000 году // М РОНЦ им. Н.Н Блохнна РАМН.2002,- С 92-95.

3. ЮДбяр /К,II, Экспрессия янгногенных факторов при роке яичников III-EV Сталин II Дисе.канд.мсд.иаук.-М--2003

4. ПДвойрни II, И., Л к се л ь К, Mr, "I ранет икон lt.ll, Статистика злокачественных преобразований в России и некоторых странах СНГ М. -1994.

5. Кушлннскнй НЕ., Н.В,£»бкнив, Ю.Н.Соловьещ М Д. Алиев, Т.Л.Тарасова, Н.Н.Трапеэннков. Интерлейки н-б в сыворотке кровн больных новообразованиями костей. Кремлевская медицина -2001.- St 4.-е. 62 -64.

6. Jj Красильни кон М.Л, Молекулярные механизмы гормональной резистентности рака молочной железы В книге «Рак молочной железы» под ред, Н Е Кушлинского, СМ. Портного, КП Лякпюиова // Редакционио-издательски й совет Президиума РАМН М. - 2005

7. Лавин II. Эндокринологи* и М, ■ Практики, 1999,

8. Луценко С,В„ Киселев СМ,. Фельдман Н.В„ Северин С,Е. Молекулярные механизмы внгиогенеза в фмзиологзгчсских н патологических процессах II В книге «(Введение в молекулярную медицину"» (под ред МАПальаева) М - Медицина - 2004, - с. 446 -496

9. Молчанов О.Е. ЦцПИИЩрПШ МО качественных опухолей ннтерлеЙкином-2. Санкт-Петербург 2002.

10. Нечаева ИД Олухалн яичников//JI- ■ Медицина. 1987,- с.23-26.1..Новикова Е. Г„ Чулковв О.В, Избранные лекции по клинической онкологии. Под редакцией Чнссова В.И, Дарьяловой СЛ ti Москва -2000.

11. Новиков &С Прогаммнрованная клеточгия гибель и1 С-Г1. Паука 1996. -с.89-104.

12. Подушкина И. Н., Степа нова К. В., Дбар Ж, II- Молекуляр»юбиологически* маркеры, характеризующие апоптоз, пролиферацию и ангногекоз при раке яичников И Вестник РОНЦ им, H.H. Блохннв РАМН, 2004, №4, С.9-М.

13. Фильчеиков А.А, Современные представления о роли апоптоза в опухолевом процессе его значении для противоопухолевой терапии И Экспер. оикол, 1998- ■ Т.20. - с.259-270.

14. Шаманский С.В. Диагностическое и прогностическое значение еыворвТОЧНМо интерлейкина б у больных острым лейкозом //Дисс. . канд мед и&ук.-М -с- 1997

15. Швеиова Г.Н. Морфо-бнологическис маркеры (sFas, интсрлсйкин-6, VEGF, Kí-67) при раке молочной железы и их связь с прогнозом заболевания Дисс.докг,чсд.наук.- М,- 2002- е. 198.

16. Чехум В.Ф., Шншова IO.B.» Юрченко О.В. Синергическос цитотоксическое действие цисплатииы и моноклональных антител РО-4 на клетки эпндермоидиой карциномы человека линии KB /,'' Экспср оикол (998.-tJ2o.-CJZI0-2I6.

17. Чиесов В. К., Стярииекий В.В., Ремеиник Л, В- (пол ред.) Злокачественные новообразования в России в 1998 г (заболеваемость исмеряют.) M. 1999 c.284.

18. Нрнлим А. А. Л поп f оз Природа феномена и его роль в целостном орпшпме//Плтгфмиюгдкслер.гср. 1998, т,2. с 38-48.

19. ЗЗ-Adathi I'.V. The potential rclcvance of cyn&ines to ovarian physiology the emerging role of resident ovarian cells of the white blood cell »cries // Endoer.Rev. -1990. Vol.11. - p.454 - 464,

20. Акегтап К.Г. Mudroeh WJ, Prostaglandin induced apoptosis of ovarian surface epithelial cells// ProWagtandindjiu. -1993. - Vol 45 - p 475-485

21. Aldervon M.R., Armitage R J„ Mamsfcovsky L et al. Fas transduces activation signals in normal human T lymphocytes // J.Exp.Med. 1993. -Vol, 178. -p,2231-2235.

22. A Ion Т. He шо I., I (in A- et al. Va3eular endothelial growth factor acts as a survival factor for newly formed retinal vessels and has implications for retinopathy of permaturity U Nat. Med. 1995- - Vol I,-p. 1024-1028,

23. Ahtulo K4 Korpelainen E. Signaling angiogencsis and lymphimgiogcncsis Current Opinion in Cell Biology. 1998. - Vol. Ю--Р 159-164.

24. Amsterdam A. Dante? A„ Hosokawa К. et al. Steroid regulation during apoptosis of ovarian follcular cells U Steroids. 1998 - Vol.63,N.5. • p-314-318.

25. Bagava ndow P., Will» J AV. Specific inhibition of endothelial cell prolifération by thrombospondin )t Biochem Biophys.Rcs Commun -1990 -Vol,l70.-p.867-872.

26. Buer R. Bcl-2 breathes life into embryogenesis ff Amer J.Pathol 1994, -Vol.145>f.L-p.7-10.

27. Bann i S- ShwcikJ D.» Pinson A, et »1- Uptegulation of vascular endothelial growth factor expression induced by myocardial ischaemia: implications for conwtary angiogeneais, jiCnnfiovasc Res. 1994 Aug, Vol.28 <8),-p f f 76-9.

28. Basl J-R-C-. Jacob« l„ Bench A. Malignant transformation of ovarian epithelium H J,Natl,Cancer Inst. 1992. - Vol 84. - p 556-558

29. Baylia P.H., Thompson CJ. Syndrome of Inappropriate anúdiuresis In: Becker K.L. BLIczikian J.P., Brcmncr W.J. eda Principles and Practicc of Endocrinology and Metabolien. Philadelphia: Lippincott 1990-p. 241 - 247.

30. H«| haw К J., Williams C.E., Draguno« M., Sirimanne ES. Mechanisms of delayed cell death following hypoxic-ischemic injury in the immalure rat evidence for apoptosis dimng selective neuronal loss // Brain ReiAfol.BramJtcs. 1995. - VolJf9.N I. -p.l,

31. Boele и A., Ptetvoet-Ter Schiphorst M .С, Wierstnga W.M, Association between serum interleukin-6 and serum 3.5,3-truododiyroninc in nonthyiotdal illness //J.ClinJHndoerinol.Metab.-l993.- Vol. 77.-p. 1695-1699

32. Hooekfor F.R., Wang D. Ein T., Nagpal M.U, Spanjjclu B.L. Jntcrleukin-Ô secretion from ral Lcydig cells in culture /.' Endocrinology 1994 - Vol. 134 -p. 2150-2155.

33. Bold in M.P-, Concharon T.M, Goltscv V.V^ Wallach D. Involvement of MACH» a novel MORTI/FADD-interacting protease, in Ли/APO-J and TNF receptor-induced eel I death // Cell. 1996. - Vol .85. - p.803-815.

34. Human Pathol -1992,-Vol.23.-p,755-761

35. Burian M„ Quinl Ch., Nenehml C. Angiogenic factors in laryngeal carcinomas- Do ihey have prognostic rdevance? H Acta CKolarvngol -1999.-Vol.l l9,N.2.-p2W-292.

36. Burse Ii W4 РаГГс S. Putz В,, Barthcl G-, Schuhe-1 temían R. Determination of the length of the histological »tages of apopiosis in normal liver ami in altered hepatic foci of rats H Carcinogenesis- 1990 - Vol. 11. -p,847-853.

37. Bray G. A. Obesity- a time bomb lo be defused tí Lancet. 1998. - Vot. 352 ( 18)-p, 160-161.

38. Bremer G. Tieboseh A-, van tier Palten H„ Scheuten II., de Haan J., Arcflds J AV, Tumor angiogenesis an independent prognostic parameter in cervical cancer H Am J.Obgtcl-Gynecol.- l996 -Vol.174.-p. 126-131.

39. Brugada ft., Wenger N-K-. Jacobson ТЛ., Clark W.S., Cotsonis G., Iglesia« A. Changes in plasma cholesterol levels after hospitalization for acutecoronary eveftt» // CardiologyI 996 -Vol. 87.-p. 194 -199

40. Campana D„ Coustan- Smilh F,, Man«be A, et al, Prolongcd lurvíval of B-lymphoblasuc kukcmia «lis ¡l Blcod -1993, ■ Vol 81.N 4. p, i 025-1031.

41. CMíi»it i-, FIikíJ G„ PapofF G., Rubcrti C. TtlrCC fimeOoral soluble forros of (be hwniw «popUW*. njduclng Fas moleculc are produced by aliemattve splicing ti J.lmmanoL 1995 ■ Vol. 154,N.6. - p.2706-2713.

42. Carson D.A., Ribero J.M. Apoptosis and disease // Ijmcet. 1993. -Vol,341 ,N-8855. - p. 1251 -1254.

43. Cheng J„ Zboo t,iu G, Shnpiru ,l.p. et al. Protcetion from FaMnediated apoptosis by a soluble form ofthe Fas molecule tf Seicnee 1994. - Vol.263. -p.1759.

44. Cbrn H.L, Muninkkffia J-U Sancho-Tello M. et al. Tumor necrosis factor-a gene expression in mouse oocytea and follicular «lis // Biol Rcpeod. 1993, - Vol 48, - p.707-714,

45. Chittcnden T-, Hirrinülon E-A., O'Connor R. et aL Induetion of apoptosis by tí« bcl-2 homologue Bak//Nature. -1995. Vol ,374,N-6524. - p.733-73«,

46. Cltun S.Y* Eiscnhauer K.M Mina mi S. el al. Hormonal regulolion of apoptosis i n early antral (bl líeles: folliele -stimulating Iwwmone as a majo* swvival factor// Endocrinology. 1996. - VoJ.137.K4 - p. 1447-1456

47. Cohén JJ. Apoptosis // tmmunol,Today 1993. - Vol.14. - p.126-130.

48. Toxicol.Appl Phormocol. -1997. Vol.146. - p.281-293.

49. Crook T., Vousden К.Ц-, Properties of p53 mutations detected in pnmory and secondary cervical cancers suggest mechanisms of melMt«W9 and involvement of environmental carcinogens ft EMBO J, ■ 1995, VoUf. ■ p.3935-3940.

50. Si.Eischen C.Mr, Kottkc TJ„ Martins L.M. el al. Comparison of apoptasis in wild-type and Faj-rcsistant cells: chemotherapy -induced apoptosis is not dependent on Fas/F(u ligand interactions ft Blood. 1997. - Vol,90, - p.935-943

51. SfrEnuri M,, Hug H., \agniu S. Involvement of an ICE-like protease in Fasmediated apoptosis ft Nature. -1995, Vol 375^,6526 - p.78-81,

52. Eisen, T., Boshoff, C„ Мак, L, Sapanar, F., Vaaghan, M.M., Pyle, L,.

53. Johnston. S.K., Ahem, KM Smiih, I.E.» Gore, M,E- Coniinuous low dose Thalidomide: a phase tl study In advanced melanoma, renal cell, ovarian and breast oncer. Dr J Cancer, V 82, N 4, P S J2-7,2000.

54. SB Eriksson LU AlitaJo K. Stiuclure, expression and receptor- binding propeniesof novel vascular endothelial growth factor»/' Curr Top Microbiol. Immunol. 19«. Vol, 237, -p.41-57.

55. QOTairchild l>-L, Pale J.L. Modulation of bovine luteal cell synthetic capacity by intcrfcTon-gamma /1 BiotReprod. J99|. - Vol,44. - p.357-363.

56. Farrow S.N., White JLH* Martinou 1. et al. Cloning of a bcl-2 homologue by interaction with adenovirus T:IB I9K it Nature 1995, ■ Vol 374,N.6S24 -p731-733.

57. Ferrnrru N« Davis-Smith T. The biology of vascular growth factor tl Endocrinol.Reviews.- 1997 -N,18, Vol | -p.4-25.

58. Fcrrnn> V, Ilcn/el W. J. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin binding factor specific for vascular endothelial cells tl Biochem Diophys Res, Commun 1989- Vol. t6l.-p.851-859.

59. Ferrara N. Houck K„ Jukemim Leung DAV. Molecularand biological properties of the vascular endothelial growth factor of proteins it Endocr, Rev. 1992 Feb, Vol.t3<i)-p. 18-32.

60. Ferrara N. The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis ft Breast Cancer Res Treat 1995. Vol. 36. N 2 p. 127-137

61. Folkman J„ Colran R. Relation of vascular proliferation to tumor growl Int.Rev.Exp.Pathol.-l 976.-Vol. 1б.-р.207-248.

62. Folkmon J., Iliudcnxliilil Folkman J. Tumor angiogenesis Adv.Cancer Res,-1985,-Vol.43,-p. 175-230 C. Angiogenics in vitro // Nature (Umd).980,-Vol.288,N 5791 -p-55 l-55fi.

63. Folkman J. Angiogenesis fa) cancer, vascular, rheumatoid and other disease It NM, Med 1995, - Vol. 1. - p, 27-31.

64. Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogensis dependent? tt}. Nath-Cancer Inst, -1990. Vol. 82-- p. 4.l02.Frascr A„ Evan G. A license to kill //Cell 1996 - Vol.85, - p,781-784.

65. Fukuoka M , Yasuda K.t F.mi N. et a I. Cytokine modulation of progesterone and estradiol secretion in cultures of luteinized human granulosa cells//J,Clin Endocrinol.Metabol. 1992. - Vol.75. - p 254-258.

66. Fulda S., Seiverts Ц., Fritsen C. et al The CD95 (APO-I/CD95) system mediates drug-induced apoptosis in neuroblastoma cell* ff Cancer Res. 1997. -Vol.57.-p 3823-3429

67. GarretH G.G.f Ciavattini A„ Provincial! M. et al. Expression of p53 and apoptosis of tumor cells in locally advanced cervical carcinoma after cisplatin based neoadjuvant chemotherapy tt Anticancer Res. 1996. - Vol.l6.N-5B. -p3229-3234

68. S Gaspariiii G., Wcidner N., Belilaqua P. Malo ta S„ Palma P., Cafío O.

69. Geiger T., Andu» T-. Klapprolh J, et al. Induction of rat acute phaseproteins by interleukin-6 in vivo Eur ) Immunol, 198®, - Vol. 18, ■ p. 717-721112, Ginlromanobtld A., Staphopoulus G-, Tsiobanou E Papadimitrrou C„

70. Georgoulas V., Ga tter K.C. el al. Combined role of tumor angiogenesis. bcl-2 and p53 expression in the prognosis of patients with colorectal carcinoma И Cancer,-1999,-Vol .86.N8.-p.1421-14 30,

71. Gimbrone M.A., Leapman S.B., t'otran R.S„ Eolkman J. Tumour dormancy in vivo by prevention of neovascularisaticm tt J. Exp. Med. 1972. • VoL 73.-p. 461-473.

72. Guidi A-r Aba-Jawed G., Tognazzi К. et at- Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth faclor) and its receptors in endometrial carcinoma Л Cancer.-1996.-Vol.86.-p454-460.

73. Heiniana K, Ferguson 0., Powers C„ Rccani W., Wctehsclluiiim R. Heflman S. Angiogeaesis as a predictor of longterm survival for patients with node-negative breast caitcer H J.Natl.Cance-r Itwl,-1996 -Vol«8.-p. 1764-1769.

74. Himno T. tnlerleukin-6. lit The cytokine handbook Ed by Thomson A.W., 3-d print London etc: Acad Press -1992 -p. 169* 190.

75. Hirano T., Abim S., Taga T-, ci al. Biological and clinical aspects of ilrierteukin-6// Immunol. Today 1990.-&I I -p 443 * 449.

76. Hirata V., Tafia T., Ilibi M., et al. Characterization of tntcrleukin-6 «eeptor expression by monoclonal and polyclonal antibodies tt}, Immunol * 1989,-Vol. l43.-p. 2900 2906.

77. Ifockenbery Ü-M- Zulter M-r Hickcy W. cl al. Bd-2 protein in topographically restricted In tissues characterized by apoptotic cell death >V Proc.Natl.Sci.USA- 1991. - Vol.88. - p. 6961 -6965.

78. Hsu li., Martin M.Cn Brishay S, et al, Expression of bcl-2 gene confersmultidrug resmence to chntiothetap;, -induced cell death /Cancer Bull -1994. Vol.46,N.2.-p.l25-l29.

79. Hsueh A J. Billig H. Trasriri A, Ovarian follicle atresia a hormonnlly controlled apoptotic process If Endocrine Rev. »994, - Vol-1 J,N.6. - p,707-723.

80. Hsueh A.J-. Eisenhauer K„ Chun S.V- et al Gonadal cell apoptosis // Recent Prog.Horm.Res. 1996. - Vol.51. • p.433-455

81. Ikedu E- A then M.G. Breier G. Risau \V. Hypoxia- induced transcriptional activation and increased mRN A stability of vascular endothelial growth factor in C6 glioma cells if J- Biol. Chem. ■ 1995. Vol. 270. - p, 19761 ■ 19766.

82. Jake man 1-, Winer J., Bennett G.L. ct al. Binding for sites vascular endothelial growth factor ore local ized on endothelial cells in adult rat tissues.//J Clin. Invest 1992 Jan. Vol 89(1),-p, 244-53.

83. JusstLa T. Stenback P. Cell proliferation markers and growth factors >n ovarian cancer tt Ann.Med 1995. - VoJ;27. - p,87-94.

84. Kameda T„ Matsazaki N-, Sawat iC, Okada T„ Saji tn Matsuda T„ el al. Production of inlerleukin-6 by normal human trophoblast Placenta H- 1990 ■ 11,-p 205-213.

85. Kawakami A„ Eguchi K., Matsualu N. Twboi M el al. Thyriod -stimulating hormone inhibits Fas antigen-mediated apoptosis of human thymocyte* in vitro U Endocrinology. 1996,. VoU37. - p.3163-3169

86. Kendall R. I. Thomas K A. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an cndogenously encoded soluble receptor wProec Natl Acad Sci USA. 1993 Nov. 15. Vol. 90 (22).-p. 10705-9

87. Kerhel, K.N., VlloriaPetit. A., Ktanenl. G„ Rak, J Accidental anti-angiogcnic drugs, omi-oncogene directed signal transduction inhibitors and conventional chemotherapeutic agents as examples Eur J Cancer, V 36, N 10, P 1248-57,2000

88. Kerr J.F.R., Wyllie A.H., Cnrrie A.R. Apoptosis basic biological phenomen with wide-ringing implications in tissue kinetics (I Brit J.Canccr. -1972.-Vol.26,-p.239-257.

89. Kerr J.F.R., Cobe C.C., Winlnford C.M. Harmon B.V. Anatomical methods in eel I death '1/ Methods it Cell Biology. ■ 1995. ■ Vol.46. p. I-27,

90. Kim KJ., Li B-, Winer J. et al. Inhibition of vascular endothelial growth factor-induced angiogencsi* suppresses tumour growth m vivo // Nature -1993,-Vol. 362.-p 841,

91. Kishimoto T.t Akirn Nnr-azaki M„ Taga T. lnterlcukin-6 family of cytokines and ep 130.7 Blood -1995. -V.86 -p. 1243 1254.

92. Kishimoto T., Tag* T„ Akira S. Cytokine signal transduction // CelH994,-VJ6,-p.253-62

93. Kishinoto Y. The biology of rrttcrIeukm-6// Blood. 1989,- Vol. 74. №l.-p.l

94. Koch AX. Harlow L., Haines G.K., Amenta E.P., Unemori E-N„ Wong W.L, Pope R.M-. Kerraru N. Vascular endothelial growth factor a cytokine modulating endothelial fraction in rheumatoid arthritis // J Immunol -1994.-Vol, 152.-p,4149-4156,

95. Korsmeyer S.J. Bcl-2 initiates a new category of oncogene«: regulators of cell death // Blood. -1992. Vol.80. - p.879 - 886

96. Korsmeyer S.J., Shutter JR. Vets D.J. Bcl-2/Bax: a rheostat thai regulates an antioxidant pathway and cell death If Semin,Cancer Biol, 1995 -Vol.4 ,N,6. - p .327-332.

97. Kurvinen K-, Syrjancn K., Syrjanen S. p53 and bcl-2 proteins as prognostic markers in human pspiHomavirus-associaled cervical lesions U J.Clin Oncol. -1996. Vol.14, -p 2120-2130.

98. Kwnano K-, Hagimoto N. Naniolo J.t rt aL p53 and p2l mRNA expression associated with DNA damage and repair // Lab,Invest. 1997 -Vol 76 -p 161

99. Lacronique V., Mignan A-, Fibre M. et at- Bcl-2 protects front lethal hepatic apoptosis induced by on Viti-fa antibody in mice // Nature Med ■ 1996, Vol.2. - p.80-86

100. Lane D.P., Xin L., Hupp T. et al. The role of the p53 protein in the apoptotic response// Phil-Trans Roy Soc Undon B. 1994. - Vol.345^.1313.- р 277-280.

101. Lnulrngoon-Lewlii N. Programmed cell deaih the influence of CD40. CD95 (Fat or APO-1) and their tigands If MedOticol 1998, - Vol.15. - p. 15-19,

102. Le Brun D.P., Warlike R.A. Clearly M.Z. Expression of bcl-2 in fetal tissues suggests a role in morphogenesis I/ Amer J.Pathol. • 1993. • Vol.142, -p.743-753.

103. Lenardo MJ, Fas and the art of lymphocyte maintenance (comment) // J.Exp.Med. -1996. Vol.184.' p.721-724.

104. Liauiard J. Sun R-X-, Coll« N. el al- Cytokine -1997, -Vol 9, N4 -P-233-241.

105. Liles W.C. Kiener P.A,. Udbelter Aguffo A,. KlcbanofT SJ.

106. Differential expression of Fas (CD95) and Fas Itgand on normal human phagocytes: implications for the regulation of apoptosis in neutrophils fl J.Exp Med. 1996. - Vol. 184. - p.429-440.

107. Loetwher If., Pan Y.C.E., I дНт R. et al. Molecular cloning and expression of the human SSkDa tumor factor rcccptor it Cell. 1990. - Vol 61 -p.3SI.

108. Loppnow II., Libby P. Proliferating or interleukin 1-activated human vascular smooth muscle cells secrete copjous interleukin 611 } Clin Invest.-l990.-V.85.-p.731 -8.

109. Lous J.M., McFarland V,Wn May P., Mora P.T. The phosphoprotein p53 Is downregulated post-transcriptionally during embryogencsis in vertebra ts U Biochem.Biophys.Acta. 1988. - Vol.950 - p 395-402.

110. Mapara MA'., Bargou R.„ Zugek C. et al. APO-I mediated apoptosts or proliferation in human chronic B lymphocytic leukemia: correlation with hcl-2 oncogene expression II EurJ.lmmunol. -1993- Vol-23. 'p.702*708.

111. Martin SJ-, Green B.R-, Colter T.G, Dicing with death; dissecting the components of the apoptosis machinery tt Trends Biochem Sei. 1994 -Vol.19. - p-28-30,

112. Martin S-J-. O'Brien G.A-. Nisbiokn W,K- et al. Proteolysis of fodrin (non* cryihroid spectrin) during apoptosis // J.Biol.Chem • 1995- Vol.270. -p.6425-6428.

113. Mastora kos GH Ch rouses G.P., Weber J.S. Recombinant intcrlcukin-6 activates the hypothalamic-pituitaiy-adrenal axis in humans U J Clin Endocrinol Metnb -1993 -V.77 -p 1690-4

114. Matsuyama T. Ilata R., Tuguya M. et al. Far antigen m RNA induction in postishemic murine brain U Brain Res. * 1994. Vol.657,N.l/2. - p.342-346.

115. McCee D.W., Beagley K.W„ Aleher W.K- McGhre J R. Transforming growth factor-beta and 1L-1 beta act in synergy to enhance IL-6 sccretion by the intestinal epithelial ccU line. IEC-6V J Immunol -1993.-V. 151 -p 970-8

116. Mesiano S,. Ferrarre N-, Jafftr R.B Role of vascular endothelial growth factor in ovarian cancer //Am J. Pathol. 1998. - Vol. 153. - p. 1249-1256.

117. Mita E., Hayashi N. Ito S. et al. Role of Fo.t Iigandinapopiosi« induced by hepatitis C virus infection it Biochem,Biophys-Res.Commun ■ 1994, -Vol.204. p,468-474.

118. MJyawald T., Ohara T-, Nibi R„ Tsuyi T, el al. Differential expression ofapopiosLs-rclaied Fas antigen on lymphocyte subpopultions m human peripheral blood// J,Immunol. -1992. Vol, 149. - p.3753-375S.

119. Mosley B.M., Dechman M .P. March CJ„ cl al. The murine intertcukin-4 receptor molecular cloning and characterization of secreted and membrane bound forms И CelL -1989. Vol.59. - p.335.

120. Mori molo H., Yonehar» Sn Вопи vida В. Overcoming tumor necrosis factor and drug resistance of human tumor cell lines by combination treatment with anti-Foi antibody and drugs or toxin»// Cancer Res. 1993. - Vol.53. - p.2591-2593.

121. Mudroch WJ. Programmed ceil death in preovulatopy ovine follicles H Biol.Rcprod, 1997. - VoL53. -p .8-12.

122. Mizutani Y« Ynshida O., Bona vida В. Sensitization of human bladcr cancer cells to ftw-mediated cytwoxicity by eis- dîammincdichloroplatinum H J.Urol. -1998.- Vol.160. p 561-579

123. Мило Мц Chiana I) an A.M., Kischkel F.C, el al. FLtCE, a novel FADD-homologous lCE/CËD-3-like protease, is recruited to the CD95 (WAPai) death inducing signaling comptes //Ceil. -1996, ■ Vol.85. ■ p,817-827,

124. Naga ta S,, Colslebt P. The Fat death factor// Science. 1995. - Vol.267. -p. 1449-1456.

125. Nagata S, Apoptosis by Death Factor IL /,'Cell.-l995.- Vol,88- -p,355 365.

126. Nailoh Y, Fufcata J., Tominaga T., Nabal YM Tamal S., Mori К., et al.lnterleukin-6 stimulates the secretion of adrenocorticotropic hormone in conscious, freely-moving rats. Biochem Biophys Res Commun 1988, VoJ. 155: 1459-63.

127. Ntcolson G. Organ specificïty of tumor mclasiasis: role pecfercntial adhésion, invasion and growth of malignanl cells ai spécifié sceondary »¡tes H Cancer Metastasis Rcv-l98S.-Vol7.-p. 143-188

128. Obermotr A,. Kun Cn Czerwenk» K,. Thoma M., Kaider A., Wagner T. et al. Microvcssel density and vessel invasion ui lymph-nodc-ncganve breast cancer: elftct on tecurrence-ftee survival if lniJ,Cancer,-l995.-Vol.62.-p.l26-131.

129. Oka Kaki M- Keuukv H-. Fujii K. « al, Hepatic Fas antigen expression before and aller and after interferon therapy in patients wîth chronic hepatits C //Digest.Ehs.Sci. 1995. - Vol.4i. -pJ453-2458.

130. Papanicolaou D.A,, Pelrides J.S., Tsigos C., Bina S., Kalogera.% K.T„ Wilder R„ el al. Exercise stimulates mtericukin-6 secretion: inhibition by glucocorticoids and correlation with catecholamines // Am J Physiol- 1998-p.27l(3 Pi l):E60l-5.

131. Papanicolaou D.A., Trij>o\ C-, Tnrjn li.,1. el ah Recombinant interleukin-6 effects on pituitary secrelion in humans U l.lnve« Med-1996,-Vol.44,-p26b.

132. Phillips U.S. Mains J^ Leung D.W., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is expressed in rat corpus luteum H Endocrinology -1990 -Vol. 127.-p 965-967,

133. Quirk S.M., Porter D.A. Huber S.C,., Cowan R.G. Potentiation of Fasmediated apoptosis of murine granulosa cells by interferon-gamma, tumor necrosis factor-alpha and cydoheximide // Endocrinology. ■ 1998. ■ VoJ.139.Rl2.- p.4860-4869.

134. Ruvindmnath N. Uttle-lhrig U, Phillips II. S., Fcrrara N. Zelc/nik AhI, Vascular endothelial growth factor messenger ribonucleic acid expression in the primate ovary ii Endocrinology,-1992 -Vol, 131 -p-254-260

135. Reed J.C. Bel-2 and the regulation of programmed cell death it J.Cetl.Biol. -1994,-Vol.124, N.t,-p 1-6.

136. Risau W. Mechanismus of angiogencsis ffNnHuie 1997 - p,671-674.

137. Robertson M„ Ritt J. Cluster report: CD95 ti In: Schlossman S.F. ed Leukocyte Typing V. Boston: Oxford University Press. 1994. - Vol2.p. It42-1143.

138. Rock C.S., Coyle S.M., k'eosh CV-, Uun» D.I). Hnrt* A.S., Lcskiw M„ el nl. Influence of hypereortisolemia oil the acute-phase protein response to endotoxin in humans H Surgery- 1992,-V, 112.-p.467-74,

139. Rokhlin O AV., Bishop G-A., Ilostager B.S., ct al, Fai-medtated apoptoiis in human prostatic carcinoma cell lines /1 Cancer Res. 1997. - Vol. $7, • P-175S-17«,

140. Rotelfo RJ., Libcrmun R,C„ LcpofT R.B. Gerschenson LE. Coordinated regulation of apoptosis and ccll proliferation by TGF-pl in culiered merinc epithelial cellsH Proc.Natl.Aead-Sci.USA-- 1992. ■ Vol.8«, p.3412-3415.

141. Rothwell NJ. CNS regulation of thermogenesis It Crit Rev Ncurobiol-1994, V8.pl.1023? Rothwell NJ, Cytokines and thermogenesis // luí 1 Obes Rclat Mettb Disord.-1993.-V. 17.<Suppl 3}.-p.98-101.

142. Rowan S,. Ludwig R-L, Specific toss of apoptotic bW not ccll cycle anest function in human tumor derived p53 mutant IIEMBO J 1996. - Vol.15. -p.827-83B.

143. SalvcD P., Ruobalainen T,, .Mattson K., Joensuu H. High prelrcotmentserum level of vascular endothelial growth factor (VEGF) is associated with poor outcome in smalt-cell lung cancer tt ImJ.Canccr.-1998.-Vol79 .-p. 144146.

144. Sayaraa K,. Vonehara S., Watunabe Mild Y- Expression of Fat antigen on keratinocytes in vivo and induction of apoptosis in cultured keratinocytes H I Invest. Dermatol. 1994, - Vol.103. - p 330-334.

145. Senge r I). H. Galli S J., Dvorak A.M. Tumour cells secrete a vascular permeability Factor that promotes accumulation of asei tes fluid, Science 1983. Vol. 219- p.-983-985.

146. Schoell 4V„ Pieber Dm Reich 0„ Lahousen MH Jaokek И, Gutter F„ Winter R. Tumor of altgiogencsis as a prognostic factor in ovarian carcinoma; quantification of endothelial immunoreactivity by image analysis tt Cancer -1997.-Vol.S0.-p.22i 7-2262.

147. Sidorenko S.P., Vetrova E.P., Yarchenko O.V. et al. Monoclonal antibodies of the IPO series in studying and diagnosing malignant lymphoprolifcrative diseases Ц Gematol.TranifimoI. 1990, ■ Vol,35.N,4. -p. 19-22.

148. Schccts F.F., Ye h J. The Role of apoptosis in gynaecological malignancies //Am».Med 1996, - Vol.29. - p.121-126.

149. Schocll W„ PícIvct 0-, fteieh O., Lahousen M-, J*«rcck M., Guecer F., Winter R. Tumor of angiogenesis as a prognostic faciotf in ovarian carcinoma : quantification of endothelial immunoreactivity by image analysis // Cancer.-1997 -VoL80.-p.22S7-2262.

150. Shibuya M. tía ft, Clacsson-Welsh L. Structure and function of vascular endothelial growth factor receptor-1 and -VII Cutr Top Microbiol, Immunol 1999. VoL237.-p.39- 83.

151. SehuHe-Herraane H., Bur%b W„ Low-Bnsclli A. Apoplosts in the liver and its role in hepatocarcinogcnesis H Cell Bktl.Toxicol. 1997. - Vol. 13. - p.339-348.

152. Shweiki D . Ilin Лм Neufeld G-, Gitay-Gorea H„ Keshcl E. Patterns of expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and VEGF receptors in mice suggest a role in bormonally-mediated angiogenesis H J.Clin.lnvest-1993.-Vol.9l-p 2235-2243

153. Shweiki I). I tin A., Softer D et al Vascular endothelial growth factor (induced by hypoxia may mediate hypoxia-iniliaied angiogenesis H Nature-I992.0ct Vol. 359 (6 39«) • p«43-5.

154. Schutzc-Osthoff K,. Walezak II., Droge W. el al. Celt nucleus and DNA fragmentation are not reguired forapoptosis // J.Ceti Biol- 1994 - Vol 56,N 5 -p. 15-20.

155. Shi ma oka V., Ilidaka Y„ Oku тага M. et al. Serum concentration of soluble Fas in patients with autoimmune thyriod diseases // Thyroid, 1998, -Vol.8. - p.43-47.

156. Sadler M.C., Straus S.E., Jafíe E.S. el aL A novel lymphoproliferativc*1 autoimmune syndrome resembling murine Ipr/gW disease .'/ J.Clin Insert ■ 1992 -Vol.90.-p.334-341.

157. Sneller MX'-, Wang J., Dale J.K. Clinical, immunologic, and genetic features of an autoimmune lyinphpprolifetntive syndrome associated with abnormal lymphocyte apoptosis // Blood, -1997. Vol.89, - p, 1341-1348.

158. Soszyaskl D-, Ко»к W, Conn СЛ., Rudolph K-, Kluger M J. Bctaadrenoceptor antagonists suppress elevation in body temperature and increase in plasma IL-6 in rtus exposed to open field II Ncuroendocrmology -1996

159. Strasser A. Harris A.W., Huang D„ Krammer P.fL, Gory S- Bcl-2 and FjjMPO- I regulate distinct pathways to lymphocyte apoptosis t( EMBO i -1995 Vol. 14,-p. 6136-6147

160. Taklgnwa N. Segaisa Y.,Fujimotu N„ Hotta K., F.guchi K, Elevated vascular endothelial growth factor levels in sera of patients with lung cancer // Anticancer Res.-l998.-Vol.18.-p. 1251-1254.

161. Takahnshi T„ Golstein P., Nagata S. Molecular cloning and expression of the Fas ligand , a novel member of the tumor necrosis factor family // Cell -(993. Vol.75,-p.ll69-1 ITS

162. Tulhcit P., Martin G-G„ Ashby H. formation of the roture site in preovulatory hamster and mou« follictes: loss of the surface epithelium U Gnmete Res 19*7, - Vol. 17. - p.287-302.

163. Tanigawa N,, Amaya H., Matsumura M,, ShimomatsHvn T. Association of tumor \TBculaliire with tumor progression and overall surviva. of patients wilh non-earty gastric carcinomes'ï'BrJ Cnncer.-l997.-Vo|.75,.p.566-571.

164. Thompson C.B. Apoptosis in the pathogenesis and ireatment of dtseasc H Science, 1995- - Vol.267.N, 5203, - P. 1456-1462,

165. Toi M. Inada K-. Suzuki H. Tominaga T. Tumor angiogencsis in breast cancer its importance as a proposait indicator and the association wilh vascular endothelîal growth factor expression H Breast Cancer Res. Treat. -19956 -Vol.36.N 2 p 193-204.

166. Toi, M., Vanna moto, Y., Taniguchi. T. Régulation of endothelial growth factor expressions in breast cancer M Gan To Kagaku Ryol». -1996G. Vol-23, Suppl. I-P.75-79,

167. Trauth B.C., Klas A,M,. Pcters A-M-J-, et al. Monoclonal antibody-mediafed tumor régression by induction of apoptosis /1 Science. 1989 -Voi245.-pJ0l-307,

168. Tsigos t'„ Papanieutaou D.A., Defensor R., Mitsiadis C.S., Kyrou ln Chrousos G,P. Dose-ciïccts of reeombinam human inlerlestkin-6 on pitinlaiy hormone sécrétion and etwrgy expcoditure H NeuTOCtwJocnnolo gy.- 1997-V.66-p.54-62.

169. Production of interleukin-6 by follicuto-steltme cells of the anierror pituitary gland Us a histotypic «11 aggregate culture system //Neuroendocrinoiogy.-1989,-V49-P 102-6

170. Vei* DJ-, Sonersoo CJH-. Shatter J.R., Korsmcyer SJ. Bcl-2 deficient mice demonstrate fulminant lymphoid apoptosis polycystic kidney and hypopegmented hair// Cell, -1993. Vol.75 ■ p,229-240.

171. VtUunger A», Egle A„ Kns M. et it Drug induced apoptosis is associated with enhanced Fiii/(APO-1 /CD95) signaling in human T-acute lymphatic leukemia cell»// Cancer Res. -1997. Vol.57. - p,333l-33K

172. Vink A„ Conlte P,C., WamJer G„ et ol. Mouse plasma cytoma growth in vivo: Enhouccment by interieukin-6 and inhibition hv antibodies directed against imericukin-6 or its receptor // J. Eitp, Med.-!99S- Vol, 172,-p. 9971000.

173. Watababc-Fdktinaea K„ Brannan C.I.» Copcrland N.C., Jenkins N.A., Nngata S. Lymphoproliferation disorder in mice explained by defects in Fas antigen that mediates apoptosis // Mature. 1992. - Vol .356- - p.314-317

174. Wakahara F„ Nawa A., Okamolo T, et al Combination eflecy of anti-Foi antibody and ehemotherapcutie drugs in ovarian cancer cells in vitro // Oncology. 1997, - Vol, 54, - p. 48-54.

175. Wcidncr N„ Srmplc J„ Welch W., Eolkman J Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma it N.EnglJ.Med.-1991-Vol.324-p.l-8

176. Weidncr N. Folkman J„ Pom F„ Bevilaequa P., Allred N. Moored et al. Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early-Stage breast carcinoma// J.Natl.Cancer Inst--1992,-Vol.84.-p. 1875-1887.

177. Weidner N„ Carroll P.R-, Fla* J^ Hlumcnfeld W„ Folkman J. Tumor angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma t! AmJ.Pathol.-1993.-Vol.l43J-p.401-409. Weller M , Kleihues P., Dichgans J.,

178. Ohgaki H CMS liguid; lethal weapon against malignant glioma? // Brain Pathol. -1998, * Vol.8. p 285-293.

179. Wiggins D.L., Granai C.O. Steinl»off M Calabresi P. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in cervical carcinoma tt Gynecol Oncol ■1995-Vol.56-p.353-356.

180. W'miuii K-G. p53: emergency brake and target for cancer therapy tt Exp.Ccll.Res. 1997 - Vol.237. - p.14-18.

181. Wytlie A.N", Glucocorticoid induced thymocyte» apoptosis is associated with endogenous endonuclease activate« (I Nature. 1980. - Vol.284 . p 555-556.

182. Y*Hta*akt K„ Taga T, Hirsts Y. cl ah Cloning and expression of the human interteukin-6 {B2/INF beta 2) receptor f Science ■ 1998, Vol.241.-p, 825, -828.

183. Yang E„ Korsmeyer S. J. Molecular thanatopsis a discourse on the bcl-2 family and cell death tt Blood. 1996. - Vol.««. - p3S6-40l

184. Yang Y.C„ Tsai S,, Wong G.G^ Clark S,C. Interleukin-J regulation of hematopoietic growth factor production by human stromal fibroblasts//J Cell Physiol,-1988V 134 ,-p 292-296

185. Yosbiji II., Gomez D.E., SMbaya M„ Thorgeirsson U-P- Expression of vascular endothelial growth factor Its receptor, and other angiogenic factors in human breast eaneer t! Cancer Res-l996.-Vol.56.-p,2013-20l6

186. Yoshiji H., Gomez D.E., Shibuya M, Thorgeirsson U.P. Expression of vascular endothelial growth factor. Its receptor, and «her angiogenic factors in human breast cancer// Cancer Res.-1996.-Vol. 56.-p.2013-2016.

187. Zhao Y., Hague S., Manek $. Zhang L , Bickell R . Rees M. PCR display identifies tamoxifen induction of the novel angiogenic factor adrenomedullin by a non estrogenic mechanism in die human endometrium // Oneogenc1998,-Vol. 16Л.З.-Р,409-415

188. Zilbcrstein A. Ruggieri R. Korn J. N. Revel M.Structure and expression of cDNA and genes for human interferon beta - 2, a distinct species inducible by growth - stimulatory cytokines // EMBOJ -1986. - Vol.5. JfclO.-p.2529-2537.

189. Zornig M, Gresehiciek A. Kowalski M.B. et al. Loss of Foi/Apo-l receptor accelerates lymphomagenesis in E mu L-MYC transgenic mice but not in animate infected with Mo Mu LV H Oncogene, ■ 1995. Vol.lO,N,l2. -p.2397-2401.