Исследование биосинтеза белков, жизнеспособности и дифференцировки мононуклеарных клеток пуповинной крови человека, трансфицированных рекомбинантными нуклеиновыми кислотами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат биологических наук Салафутдинов, Ильнур Ильдусович

• Салафутдинов, Ильнур Ильдусович
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Салафутдинов, Ильнур Ильдусович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Перенос рекомбинантных нуклеиновых кислот

1.1.1 Плазмидные конструкции как векторы для переноса генетической информации

1.2 Факторы роста

1.2.1 Фактор роста фибробластов

1.2.2 Фактор роста эндотелия сосудов

1.3 Нейродегенеративные заболевания

1.3.1 Моделирование нейродегенеративных заболеваний

1.4 Генная терапия нейродегенеративных заболеваний

1.5 Клеточная терапия нейродегенеративных заболеваний

1.5.1 Эмбриональные стволовые клетки

1.5.2 Мезенхимная стволовая клетка красного костного мозга

1.5.3 Стволовые клетки пуповинной крови

1.6. Генетическая модификация стволовых клеток для генно-клеточной терапии

1.6.1 Нейротрансплантация генетически модифицированных стволовых клеток

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Методы создания рекомбинантных генетических конструкций

2.1.1 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.1.2 Гидролиз ДНК специфическими эндодезоксирибонуклеазами

2.1.3 Дефосфорилирование нуклеиновых кислот

2.1.4 Лигирование фрагментов нуклеиновых кислот

2.1.5 Электрофорез в агарозном геле

2.1.6 Очистка продуктов ПЦР реакции и рестрикционных фрагментов

2.1.7 Выделение нуклеиновых кислот (ДНК)

2.1.8 Определение первичной нуклеотидной последовательности ДНК (секвенирование)

2.2 Методы работы с прокариотическими клетками

2.2.1 Бактериальные штаммы

2.2.2 Трансформация бактериальных клеток

2.3 Методы работы с эукариотическими клетками

2.3.1 Клеточные типы, культивирование

2.3.2 Перенос рекомбинантных нуклеиновых кислот в клетки (трансфекция)

2.3.3 Анализ эффективности трансфекции клеток

2.3.4 Оценка активности митохондриальных дегидрогеназ в эндотелиальных клетках in vitro

2.4 Методы анализа экспрессии рекомбинантных белков in vitro

2.4.1 Иммуноцитохимический анализ

2.4.2 Иммуноблоттинг

2.5 Методы исследования экспрессии генов

2.5.1 Выделение нуклеиновых кислот (РНК) из клеточных культур

2.5.2 Реакция обратной транскрипции

2.5.3 Количественная оценка экспрессии мРНК генов с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени

2.6 Опыты на животных

2.6.1 Объект исследования

2.6.2 Трансплантация генетически модифицированных клеток

2.7. Иммуногистохимические методы

2.7.1 Подготовка образцов тканей для иммуногистохимического исследования

2.7.2 Иммуногистохимическое исследование

2.8 Программное обеспечение и статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Создание плазмидных конструкций, кодирующих кДНК генов vegfl21, vegfl65, vegfl89,fgf2 negfp

3.1.1 Создание экспрессионных векторов на основе pcDNA3.1(+)

3.1.2 Создание двухкассетных экспрессионных векторов на основе pBudCE4.1

3.2 Анализ экспрессии мРНК клонированных генов и биосинтеза рекомбинантных белков

3.2.1 Количественная оценка экспрессии мРНК клонированных генов

3.2.2 Анализ биосинтеза рекомбинантных белков

3.3 Влияние биосинтеза и секреции рекомбинантных белков на пролиферацию клеток HUVEC in vitro

3.4 Исследование свойств генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповидной крови человека in vivo

3.4.1 Трансфекция клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови человека

3.4.2 Оценка экспрессии мРНК рекомбинантных генов в генетически модифицированных клетках пуповинной крови человека с помощью ПЦР в реальном времени

3.4.3 Ксенотрансплантация генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповинной крови человека трансгенным

животным с фенотипом бокового амиотрофического склероза

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

um (мкм) —- микрометр

b.p. (base pairs), п.н. — пар нуклеотидов

CD (Cluster of Differentiation) — кластер дифференцировки

CD34 — мембранный белок, играющая роль на ранних этапах гемопоэза

CMV (Cytomegalovirus) — цитомегаловирус

DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) — 4,6-диамидино-2-фенилиндол DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) — среда Игла модифицированная Дульбекко

DMEM/F12 (Dulbecco's modified eagle's medium and Ham's F-12 Nutrient Mixture) — среда Игла модифицированная Дульбекко с питательной смесью F12 Хэма

DPBS (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline) — фосфатно-солевой буфер Дульбекко

EDTA (Ethylenediaminetetraacetic Acid) — этилендиаминтетраацетат EF-la (Elongation Factor-1 alpha) — фактор элонгации 1 альфа EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) — улучшенный зеленый флуоресцирующий белок

FBS (Fetal Bovine Serum) — сыворотка крови плодов коровы FGF (Fibroblast Growth Factor) — фактор роста фибробластов FGFR (Fibroblast Growth Factor Receptor) — рецептор фактора роста фибробластов

G93A-SOD1 —трансгенные мышы с фенотипом бокового амиотрофического склероза человека

НЕК293Т (Human Embryonal Kidney cell type 293, expressing simian virus 40 T

antigen) — клетки эмбриональной почечной линии 293Т человека,

экспрессирующие Т антиген вируса обезьян

HNA (Human Nuclei Antibody) — человеческий ядерный антиген

НОХВ4 (transcription factor homeobox В4) — транскрипционный фактор

гомеобокс В4

HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cells) — эндотелиальные клетки вены пуповины человека

Ibal (Ionized calcium binding adaptor molecule 1) — ионизированная, связывающая кальций, молекула 1 kDa (кДа) — килодальтон

Ll-CAM (LI Cell Adhesion Molecule) — молекула нейральной адгезии L1

LS-LB (Low Salt Luria-Bertani Medium) — низкосолевая среда Лурия-Бертани

OD (Optical Density) — оптическая плотность

ORF (Open Reading Frame) — открытая рамка считывания

ORI (Origin of Replication) — точка начала репликации

OSP (Oligodendrocyte Specific Protein) — специфический белок олигодендроцитов

PBS (Phosphat Buffer Solution) — фосфатно-солевой буфер

R — рецептор

RPMI1640 (Roswell Park Memorial Institute Medium 1640) — среда для

культивирования клеток №1640, разработанная в Инстшуте раковых

исследований Розвелла Парка

S-100 (S100 protein) — белок S100

SDS (Sodium dodecyl sulfate) — додецилсульфат натрия

siRNA (small interfering RNA) — малые интерферирующие РНК

SOD1 (Superoxide Dismutase 1) — супероксидцисмутаза

TUJ1 (Neuron-specific class III beta-tubulin) — нейрональный ß III-тубулин

UTR (Untranslated Region) — нетранслируемая область

VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor) — фактор роста эндотелия сосудов VEGFR (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor) — рецептор фактора роста эндотелия сосудов AT — антитела

БАС — боковой амиотрофический склероз ГСК — гемопоэтические стволовые клетки ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота кДНК — комплементарная ДНК мМ — микромоль

МСК из ЗТМ — мультипотентные стволовые клетки из зачатков третьих моляров человека

МСК — мезенхимная стволовая клетка

ОТ-ПЦР — обратная транскрипционная полимеразная цепная реакция

плДНК — плазмидная ДНК

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ПЦР-РВ — полимеразная цепная реакция в реальном времени

рА — сигнал полиаденилирования

РНК — рибонуклеиновая кислота

CK — стволовые клетки

ФР — фактор(ы) рост(а)

ЦНС — центральная нервная система

ЭСК — эмбриональные стволовые клетки

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование биосинтеза белков, жизнеспособности и дифференцировки мононуклеарных клеток пуповинной крови человека, трансфицированных рекомбинантными нуклеиновыми кислотами»

ВВЕДЕНИЕ

Одной из важнейших задач в области регенеративной медицины является восстановление утраченных и поврежденных структур. Регенеративная медицина - бурно развивающаяся область современной биомедицинской науки, являющаяся своеобразным альянсом биотехнологии, клеточной биологии, биохимии генетики и медицины (Mason & Dunnill, 2008; Еремеева, 2009). В настоящее время с целью стимулирования регенерации тканей активно исследуют ряд подходов, таких как доставка в область повреждения различных терапевтических генов (ангиогенных, нейротрофических факторов, молекул адгезии, противовоспалительных факторов и др.) введением в целевые клетки рекомбинантных нуклеиновых кислот. В качестве средств доставки терапевтических генов для стимулирования регенерации изучают возможности стволовых и прогениторных клеток. Однако, значительного прогресса в этом направлении пока не достигнуто, что обусловлено недостаточной изученностью функционирования этих клеток и отсутствием адекватных методических подходов (Lim et al., 2011). Определенный интерес в этом отношении представляют клетки пуповидной крови, которые уже более двадцати лет широко применяются для трансплантации пациентам с гематологическими и некоторыми другими заболеваниями (Glucman et al., 1997; Wagner et al., 1996; Yang et al., 2010). Перспективность применения клеток пуповинной крови обусловлена доступностью материала, малой инвазивностью процедуры забора, низкой иммуногенностью, содержанием в крови различных типов клеток, способных дифференцироваться в клетки тканей, формируемых из различных зародышевых листков (Gluckman et al., 2000; Ballen et al., 2001; Космачева и др., 2008). Клетки пуповинной крови применяют как для аутологичной, так и для аллогенной трансплантации (Eapen et al., 2010; Шаманская и др., 2010). К настоящему времени в мире проведено более 20 000 трансплантаций клеток пуповинной крови (Kurtzberg et al., 2009).

Доклинические исследования показали эффективность применения клеток пуповинной крови при различных заболеваниях, в том числе при терапии инсульта, травматических поражений головного и спинного мозга, а также нейродегенеративных заболеваниях (Yang et al., 2010). Вместе с тем многие аспекты их поведения при трансплантации пациентам остаются неясными, что иногда приводит к нежелательным побочным эффектам (Perez et al., 2011).

Несмотря на большое количество экспериментальных работ и клинических исследований по использованию клеток пуповинной крови в качестве материала для трансплантации при терапии различных заболеваний, на сегодняшний день остается актуальной проблема эффективности применяемой клеточной терапии. Как один из способов повышения терапевтического потенциала трансплантируемых клеток рассматривается их генетическая модификация (Ikeda et al., 2004; Chen et al., 2005; Шевченко и др., 2010).

В то же время в литературе практически отсутствуют сведения о генетической модификации и применении генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповинной крови. Альтернативным подходом для лечения нейродегенеративных заболеваний является применение биологически активных веществ, таких как различные факторы роста (Zacchigna et al., 2008; Завалишин и др., 2008). Возможными кандидатами для терапии этих заболеваний рассматриваются сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) и основной фактор роста фибробластов (FGF2). Вот почему представляется актуальным исследование эффективности трансплантации клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови человека, трансфицированных генами vegf и/или fgf2 для различных клинических ситуаций. Предлагаемые ростовые факторы являются ключевыми в процессах ангиогенеза, нейрогенеза и обладают выраженным синергетическим и нейропротекторным эффектом (Sabti et al., 2007; Islamov et al. 2004; Макаревич и др., 2010). Однако, сведений о механизмах их

действия на поврежденные ткани в организме явно недостаточно. Показано, что именно VEGF обеспечивает улучшение поведенческих функций, отодвигает начало заболевания и продлевает жизнь трансгенным мышам с фенотипом бокового амиотрофического склероза (Hwang et al., 2009; Azzouz et al., 2004). Можно предположить, что введение в организм клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови, генетически модифицированных vegf и fgf2, окажет позитивное влияние на процессы регенерации при нейродегенеративных заболеваниях. Все вышесказанное свидетельствует о том, что выяснение оптимальных векторных конструкций, генов и их комбинаций, выбор клеток-носителей, а также определение путей их доставки с целью терапии различных заболеваний человека, безусловно, являются актуальными и очень важными в решении проблем регенеративной медицины.

Цель работы: разработка и получение рекомбинантных нуклеиновых кислот на основе двухкассетных плазмидных векторов, обеспечивающих биосинтез сосудистого эндотелиального фактора роста и основного фактора роста фибробластов в мононуклеарных клетках пуповинной крови человека.

Исходя из цели работы, были определены следующие задачи исследования:

1. Получить двухкассетные генетические конструкции на основе плазмидного вектора pBudCE4.1, обеспечивающего одновременную и независимую экспрессию мРНК генов и биосинтез рекомбинантных белков: различных изоформ сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF121, VEGF165 и VEGF189), основного фактора роста фибробластов (FGF2) и улучшенного зеленого флуоресцентного белка (EGFP).

2. Провести анализ экспрессии рекомбинантных генов в мультипотентных стволовых клетках из зачатков третьих моляров человека (МСК из ЗТМ), в мононуклеарных клетках пуповинной крови человека и в клетках эмбриональной почечной линии 293Т человека (НЕК293Т), трансфицированных рекомбинантными нуклеиновыми кислотами.

3. Исследовать влияние различных изоформ сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF121, VEGF165 и VEGF189) и основного фактора роста фибробластов (FGF2), секретируемых генетически модифицированными клетками НЕК293Т, на пролиферацию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVEC) in vitro.

4. Получить мононуклеарные клетки пуповинной крови человека, генетически модифицированные двухкассетными плазмидными конструкциями, кодирующими гены egfp, vegf и/или fgf2, и исследовать их выживаемость, миграцию и дифференцировку после трансплантации трансгенным мышам с фенотипом бокового амиотрофического склероза.

Научная новизна работы

В работе впервые описаны созданные двухкассетные невирусные генетические конструкции, одновременно и независимо экспрессирующие гены факторов роста: комбинации изоформ сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и основного фактора роста фибробластов (FGF2). Несомненной новизной обладают данные, полученные методами полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, свидетельствующие об экспрессии мРНК клонированных генов, а также иммуноцитохимии и иммуноблотинга, свидетельствующие о биосинтезе рекомбинаитных белков в генетически модифицированных клетках, трансфицированных рекомбинантными нуклеиновыми кислотами на основе двухкассетных плазмидных конструкций. Приоритетными следует признать результаты, полученные in vitro на модели ангиогенеза, где установлено, что генетически модифицированные клетки НЕК293Т секретируют VEGF и/или FGF2, что дозозависимо ускоряет пролиферацию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVEC).

Впервые разработан метод генетической модификации мононуклеарных клеток пуповинной крови человека двухкассетными плазмидными конструкциями (получен патент на изобретение РФ №2431669), показана их способность к экспрессии мРНК клонированных

генов с последующим биосинтезом рекомбинантных белков in vitro и in vivo. Принципиально новыми являются данные о том, что генетически модифицированные клетки пуповинной крови человека, трансплантированные трансгенным мышам с фенотипом бокового амиотрофического склероза, выживают, мигрируют в очаги нейродегенерации и дифференцируются в клетки, экспрессирующие маркеры эндотелия. Впервые показано, что клетки мононуклеарной фракции пуповинной крови человека, одновременно экспрессирующие мРНК генов vegf ~afgf2, дифференцируются в астроцитоподобные клетки в спинном мозге мышей с фенотипом бокового амиотрофического склероза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клетки, генетически модифицированные плазмидными конструкциями, несущими комбинации различных изоформ сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) и основного фактора роста фибробластов (FGF2), экспрессируют высокий уровень мРНК клонированных генов и биосинтезируют рекомбинантные белки, что ускоряет пролиферацию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (HUVEC) in vitro.

2. После трансплантации генетически модифицированные мононуклеарные клетки пуповинной крови человека, синтезирующие рекомбинантные сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) и основной фактор роста фибробластов (FGF2), мигрируют в спинной мозг трансгенных мышей с фенотипом бокового амиотрофического склероза и дифференцируются в клетки, экспрессирующие маркеры, характерные для эндотелиальных клеток и астроцитов.

Теоретическая и практическая ценность работы

Настоящее исследование расширяет представления о возможностях применения методов генной и генно-клеточной терапии различных заболеваний человека. В рамках проведенного исследования предложен подход для создания невирусных генетических конструкций,

экспрессирующих комбинации различных генов, что позволяет обеспечить эффективную адресную одновременную доставку нескольких терапевтических генов в клетки мишени. Нами показано, что двухкассетные плазмидные вектора осуществляют эффективный перенос терапевтических генов на примере сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕОБ) и основного фактора роста фибробластов (РОР2) и могут быть использованы для разработки методов терапии дегенеративных заболеваний. Разработаны способы получения и применения препарата на основе генетически модифицированных клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови человека (подана заявка на получение патента на изобретение РФ №2009133970 и получен патент на изобретение РФ №2431669). Экспериментальные и методические подходы, используемые в работе, открывают перспективу для разработки биологически безопасных генно-клеточных препаратов для использования в регенеративной медицине.

Связь работы с базовыми научными программами

Исследования по теме работы проведены в период с 2007 по 2011 г. в соответствии с НИР Казанского государственного медицинского университета 01200850995 и Казанского государственного университета 01200952944. Работа поддерживалась грантами РФФИ 07-04-00746-а «Стимулирование регенерации аксонов в центральной и периферической нервной системе с помощью гелевых носителей для стволовых клеток, супрамолекулярных систем с самосборкой, сосудистого эндотелиального фактора роста и ксимедона»; грант Правительства Республики Татарстан по подготовке и переподготовке кадров в зарубежных научных центрах; государственный контракт ФЦП Федерального Агентства по Науке и Инновациям 02.512.11.2052 «Клеточная терапия генетически модифицированными стволовыми клетками пуповинной крови трансгенных мышей 093А, экспрессирующих фенотип бокового амиотрофического склероза»; грант РФФИ 06-04-49396-а «Состояние аксонного транспорта и внутриаксонного синтеза белка в условиях гравитационной разгрузки»;

молодёжный грант Академии Наук Республики Татарстан, №11-9/2009(Г) «Разработка современных биомедицинских методов лечения хронической артериальной недостаточности нижних конечностей с использованием клеточных, генно-клеточных и генных технологий»; государственный контракт ФЦП Федерального Агентства по Науке и Инновациям 02.740.11.0302 «Исследование фундаментальных механизмов патогенеза нейродегенеративных заболеваний и разработка современных технологий для их лечения»; грант РФФИ 09-04-05079-6 «Развитие МТБ для проведения исследований по области знаний 04»; государственный контракт ФЦП -Федерального Агентства по Науке и Инновациям 02.552.11.7088. Проведение поисковых научно-исследовательских работ в области физико-химии наноматериалов и молекулярных систем, включая биологические, в центре коллективного пользования научным оборудованием «Федеральный центр коллективного пользования физико-химических исследований веществ и материалов».

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на следующих всероссийских и международных симпозиумах, конгрессах и конференциях: Proceedings of the First Interuniversity Conference on Modern Biology (Казань, 2008); I Всероссийский с международным участием конгресс студентов и аспирантов биологов «Симбиоз-Россия» (Казань, 2008); II Международная научно-практическая конференция «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2008); 13th Annual Symposium for Biology Students of Europe «SymBioSE 2009» (Казань, 2009); Всероссийская научная школа-конференция для молодежи «Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные и клинические исследования» (Москва, 2009, 2010); V Международная (XIV Всероссийская) Пироговская научная медицинская конференция студентов и молодых ученых (Москва, 2010); Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2009,

2010, 2011); Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2010, 2011); IV Всероссийский симпозиум с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии» (Санкт-Петербург, 2010); III Всероссийский с международным участием конгресс студентов и аспирантов-биологов «Симбиоз-Россия 2010», 2nd International student medical congress (Кошице, Словакия, 2010); Всероссийская научная школа-конференция «Стволовые клетки и регенеративная медицина» (Москва, 2010); Международная научно-практическая конференция «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (Санкт-Петербург 2010); 4th International Congress Of Molecular Medicine (Стамбул, Турция, 2011).

Публикация результатов исследования.

По материалам диссертации опубликовано 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК для защиты кандидатских диссертаций и 19 тезисов докладов на международных и всероссийских конференциях и конгрессах.

Место выполнения работы

Работа выполнена на базе Казанского государственного медицинского университета и Казанского (Приволжского) федерального университета.

Структура и объем диссертационной работы

Материалы диссертационной работы изложены на 183 страницах машинописного текста. В работе приведено 48 рисунков и 13 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, списка литературы (276 наименования) и приложения.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Салафутдинов, Ильнур Ильдусович

147 ВЫВОДЫ

1. Созданы двухкассетные генетические конструкции на основе плазмидного вектора рВис1СЕ4.1, обеспечивающие одновременную и независимую экспрессию различных изоформ сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕСР121, УЕОР165 и УЕОР189), основного фактора роста фибробластов (РОР2) и улучшенного зеленого флуоресцентного белка (БОБР).

2. Показана экспрессия мРНК генов и биосинтез рекомбинантных белков различных изоформ сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕОР121, УЕОБ165 и УЕОР189), основного фактора роста фибробластов (РОР2) и улучшенного зеленого флуоресцентного белка (ЕОРР) в мультипотентных стволовых клетках из зачатков третьих моляров человека, мононуклеарных клетках пуповинной крови человека и в клетках эмбриональной почечной линии 293Т человека (НЕК293Т), трансфицированных рекомбинантными нуклеиновыми кислотами на основе двухкассетных плазмидных конструкций.

3. Генетически модифицированные клетки НЕК293Т биосинтезируют и секретируют в культуральную среду различные изоформы сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕОР121, УЕОР165 и УЕОР189) и основного фактора роста фибробластов (РОР2), дозозависимо стимулируя пролиферацию эндотелиальных клеток пупочной вены человека (ШУЕС).

4. Генетически модифицированные мононуклеарные клетки пуповинной крови человека, экспрессирующие рекомбинантные гены е^р, уе^ и/или /ф, после трансплантации трансгенным мышам с фенотипом бокового амиотрофического склероза выживают, мигрируют и дифференцируются в различных направлениях: а) клетки, модифицированные плазмидными векторами, экспрессирующими ген е^р, дифференцируются в клетки, несущие маркёры, характерные для микроглии (1Ьа1+) и эндотелиальных клеток (СЭ34+); б) клетки, модифицированные двухкассетными плазмидными векторами, экспрессирующими гены и/или /^/2, дифференцируются в клетки, несущие маркёры, характерные для эндотелиальных клеток (СБ34+); в) клетки, модифицированные двухкассетными плазмидными векторами, одновременно экспрессирующими гены уе^ и дифференцируются в клетки, несущие маркёры, характерные для астроцитов (8-100+).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нейродегенеративные заболевания, травматические повреждения спинного и головного мозга, ишемические инсульты сопровождаются гибелью нейронов, дегенерацией аксонов, нарушением коммуникаций в нейронных сетях и контролируемых ими функций. С целью предотвращения вторичной дегенерации и поддержания роста нервных волокон, перспективным подходом представляется применение генных и клеточных технологий. Современные методы генной терапии направлены на подавление или усиление экспрессии гена-мишени. Различные векторные системы применяют для доставки генов, продукты которых могут оказать положительный терапевтический эффект при конкретном заболевании. В настоящее время активно исследуют возможности использования эмбриональных и стволовых/прогениторных клеток взрослого организма для доставки в область повреждения нервной ткани различных терапевтических факторов, поддерживающих выживание нейронов и стимулирующих регенерацию.

Стволовые клетки, сверхэкспрессирующие рекомбинантные гены, могут значительно усилить терапевтический эффект трансплантируемых клеток и регенеративный потенциал органа-мишени. К настоящему времени предложен и протестирован широкий спектр стволовых клеток, полученных из различных источников. Основанием для трансплантации клеток пуповинной крови, для стимуляции регенерации нервной ткани является их пригодность как для алло-, так и для аутотрансплантации у человека, их низкая иммуногенность, доступность, простота получения и возможность длительного хранения в криобанках. Кроме того, в пуповинной крови присутствуют стволовые клетки, способные давать начало специализированным клеткам разных тканей, в том числе и нейрональной.

Таким образом, для устранения дефектов нервной ткани, для целей нейропротекции и стимулирования регенерации нервных волокон в центральной нервной системе и периферическом нерве, получение и использование генетически модифицированных мононуклеарных клеток пуповидной крови может считаться перспективным направлением клеточной терапии. При этом возможно тестирование множества конкретных подходов - применение различных клеточных типов, различные генетические модификации клеток перед трансплантацией, различные гены и их комбинации, варианты по срокам, количеству и способу введения клеток (непосредственно в область травмы, в кровоток, в биоматрикс и др.).

Настоящее исследование является продолжением научного поиска молекулярно-генетических методов лечения нейродегенеративных заболеваний (2006-РИ-19.0/001/320, №02.442.11.7319) и направлено на получение генетически модифицированных стволовых клеток пуповинной крови человека для лечения нейродегенеративных заболеваний человека.

Для усиления терапевтического эффекта стволовые кроветворные клетки пуповинной крови были подвергнуты генетической модификации путём трансфекции плазмидными векторами, экспрессирующими гены сосудистого эндотелиального фактора роста, УЕОБ, и основного фактора роста фибробластов, РвР2, или их комбинацией. Усиление экспрессии генов, кодирующих синтез данных молекул, позволяет рассчитывать на более выраженный терапевтический эффект генетически модифицированных клеток на мотонейроны головного и спинного мозга при терапии БАС. Генетическая модификация может быть полезна в трёх аспектах. Во-первых, для повышения жизнеспособности трансплантированных клеток в тканях реципиента. Во-вторых, для доставки специфических ростовых и трофических факторов в область поражённых клеток. В-третьих, для направленной дифференцировки трансплантированных клеток в разные паренхиматозные клетки ЦНС (астроциты, макрофаги, эндотелий). Важно отметить, что мононуклеарные клетки пуповинной крови способны проникать через гематоэнцефалический барьер, а сигнальные молекулы, секретируемые погибающими нервными клетками, способны усиливать хоуминг мононуклеаров в ЦНС.

В ходе исследования проведены работы по созданию плазмидных генно-инженерных конструкций: клонированы гены факторов роста человека vegf (изоформы 121, 165, 189) и fgf2, получены экспрессионные вектора на основе плазмид pcDNA3.1 и pBudCE4.1. С использованием в качестве базового вектора плазмиды pBudCE4.1 были созданы различные генетические конструкции, одновременно и независимо экспрессирующие комбинации рекомбинантных белков pBud-VEGF121-FGF2, pBud-VEGF165-FGF2, pBud-VEGF189-FGF2, pBud-FGF2-EGFP. Проведен анализ экспрессии генов клонированных в плазмидные вектора pBud-VEGF 121 -EGFP, pBud-VEGF165-EGFP, pBud-VEGF189-EGFP, pBud-VEGF121-FGF2, pBud-VEGF165-FGF2, pBud-YEGF 189-FGF2, pBud-FGF2-EGFP, pBud-EGFP. Также продемонстрирована их биологическая активность в отношении индукции пролиферации эндотелиальных клеток in vitro.

В соответствтии с поставленной целью, нами было проведено выделение, генетическая модификация мононуклеарных клеток пуповинной крови человека и последующая их трансплантация трансгенным мышам B6SJL-Tg(SODl-G93A)dllGur/J с фенотипом БАС. Для генетической модификации мононуклеарных клеток пуповинной крови человека были использованы плазмидные вектора pBud-EGFP, pBud-VEGF 165 -EGFP, pBud-VEGF165-FGF2, и pBud-FGF2-EGFP. С целью вдентификации и фенотипирования трансплантированных клеток был применён метод иммунофлуоресцентного окрашивания с AT против ядерного АГ человека (UNA), маркёра эндотелиальных клеток (CD34), астроцитов (S100), олигодендроцитов (OSP), клеток микроглии (Ibal) и нейрональных клеток (TUJ1).

Предварительные результаты по трансплантации клеток пуповинной крови, трансфицированные плазмидами, экспрессирующими EGFP, показали, что модифицированные клетки мигрируют в нервную ткань спинного мозга трансгенных животных, проявляющих фенотип БАС, и сохраняют способность к экспрессии рекомбинантного белка.

Анализ судьбы трансплантированных клеток мононуклеарной фракции пуповинной крови, трансфицированных плазмидными векторами рВис1-БОБР, рВиё-УЕОР165-ЕОРР, рВис!-РОР2-ЕОРР или рВиё-УЕОР165-РОР2 показал, что генетически модифицированные клетки мигрируют в места нейродегенерации и дифференцируются в эндотелиальные клетки (ШЫА+СБ34+). Остальные ША-позитивные, но при этом СБ34-негативные клетки (ЕГКА+СБ34"), по-видимому, могут дифференцироваться в других направлениях или существовать на стадии прогениторных клеток среди эндотелиальных клеток стенки кровеносных сосудов. Трансплантированные клетки, трансфицированные плазмидными векторами рВис1-ЕОРР, рВис1-УЕОР165-ЕСРР, рВис!-РОР2-ЕСРР или рВис!-УЕОР165-РОР2 не дифференцируются в о л и годендр о циты (РПЧА+08Р") или в нервные клетки (НМА+ТШ1+). Трансплантированные клетки, трансфицированные плазмидными векторами рВисЬ-ЕвРР, дифференцируются в микроглия подобные клетки (НЫА+1ЬаГ). Трансплантированные клетки, трансфицированные плазмидными векторами рВиа-УЕОР165-РСЕ2 дифференцируются в астроцитоподобные клетки (ШЧА+8100+).

Полученные нами экспериментальные данные показывают, что генетически модифицированные мононуклеарные клетки пуповинной крови человека мигрируют в очаги нейродегенерации и, в зависимости от трансфицирующего вектора, дифференцируются в эндотелиальные клетки, клетки микроглии, астроциты. Открытым остается вопрос, являются ли дифференцированные клетки функционально активными или они лишь фенотипически подобны обнаруженным клеточным типам? Как трансплантация генетически модифицированных клеток влияет на клиническое течение заболевания? На эти и ряд других вопросов предстоит ответить в будущем до внедрения данного метода в клиническую практику.

Таким образом, нами впервые разработаны различные невирусные (плазмидные) системы для одновременной доставки в организм комбинации терапевтических генов, также предложен подход, позволяющий решать задачу экспрессии рекомбинантных генов, повышающих терапевтический потенциал трансплантируемых стволовых клеток при терапии нейродегенеративных заболеваний человека.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Салафутдинов, Ильнур Ильдусович, 2012 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Богданенко Е.В. Невирусный перенос генов in vivo в генной терапии / Е.В. Богданенко, Ю.В. Свиридов, A.A. Московцев, Р.И. Жданов // Вопросы медицинской химии. - 2000. - Т.46. - С.223-245.

2. Генин A.M. Биоэтические правила проведения исследований на человеке и животных в авиационнои, космической и морской медицине / A.M. Генин, А.Е. Ильин, A.C. Капланский, Т.Б. Касаткина, и др. // Авиакосмическая и экологическая медицина. - 2001. - Т.4. - С. 14-20.

3. Еремеева М.В. Возможности применения стволовых клеток и клеток-предшественников для стимуляции реваскуляризации и регенерации органов / М.В. Еремеева // Вестник трансплантологии и искусственных органов. -2010. - Т. 12, №1. - С.86-93.

4. Завалишин H.A. Генная терапия бокового амиотрофического склероза: двухлетнее рандомизированное плацебо-контролируемое исследование / И. А. Завалишин, Н.П. Бочков, З.А. Суетна, М.Н. Захарова, и др.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - Т. 145, №4. - С.467-470.

5. Зубова H.H. Спектральные и физико-химические свойства зеленого (GFP) и красного (DsRed) флуоресцирующих белков Успехи биологической химии / H.H. Зубова, А.Ю. Булавина, А.П. Савицкий // Успехи биологической химии. - 2003. - Т.43. - С. 163-224.

6. Ипатов С.Е. Вопросы безопасности генной терапии / С.Е. Ипатов, С.А. Румянцев // Онкогематология. - 2010. - Т.1. - С.57-63.

7. Космачева С.М. Рост мезенхимальных стволовых клеток пуповинной крови человека in vitro и их дифференцировка в хондроциты и остеобласты / С.М. Космачева, И.Н. Северин, Н.В. Гончарова, Н.В. Петевка, М.П. Потапнев, // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2008. - №1. -С.34-38.

8. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин // М.: Высшая школа, 1990 - 352.С

9. Макаревич П.И. Новые плазмидные конструкции, предназначенные для терапевтического ангиогенеза и несущие гены ангиогенных факторов роста -YEGF, HGF и ангиопоэтина-1 / П.И. Макаревич, А .Я. Шевелев, И.Н. Рыбалкин, Н.М. Каширина, и др. // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. - 2010. - Т.5, №1. - С.47-52.

10. Мелихова B.C. Клеточные популяции, выделяемые из пуповинно-плацентарного комплекса и перспективы их научно-практического использования / B.C. Мелихова, A.A. Исаев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2007. - Т.2, № 4. - С.31-38.

11. Ризванов A.A. Вирусные и невирусные методы введения в организм рекомбинантных нуклеиновых кислот // Дис.... док. биол. наук. - Казань. 2010.-346С.

12. Шаманская Т.В. Использование пуповинной крови при проведении аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у детей (опыт работы московского банка стволовых клеток) / Т.В. Шаманская, Т.А. Астрелина, З.А. Подколзина, Е.Э. Карпова, и др. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия - 2010. -Т.5, №2. - С.29-35.

13. Швальб П.Г. Эффективность и безопасность применения препарата «неоваскулген» в комплексной терапии пациентов с хронической ишемией нижних конечностей (IIB-III фаза клинических испытаний / П.Г. Швальб, A.B. Гавриленко, P.E. Калинин, Ю.В. Червяков, и др. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия - 2011. - Т.6, № 3. - С.76-83.

14. Шевченко Е.К. Эффективная трансдукция стромальных клеток жировой ткани человека с помощью рекомбинантного аденоассоциированного вируса / Е.К. Шевченко, П.И. Макаревич, З.И. Цоколаева, Е.И. Ратнер, Е.В. Парфенова // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. - 2010. - Т.5, №1. - С.60-64.

15. Abdulrazzak H. Biological characteristics of stem cells from foetal, cord blood and extraembryonic tissues / H. Abdulrazzak, D .Moschidou, G. Jones, P.V. Guillot // J R Soc Interface. - 2010. - V.7. - P.S689-706.

16. Akhtar R.S. Immunohistochemical detection with quantum dots / R.S. Akhtar, C.B. Latham, D. Siniscalco, C. Fuccio, K.A. Roth // Methods Mol Biol. -2007 - V.374. - P. 11-28.

17. Al-Dosari M.S. Nonviral gene delivery: principle, limitations, and recent progress /M.S. Al-Dosari, X. Gao // AAPS J. - 2009. - V.ll, №4. - P.671-681.

18. A1 Sabti H. Therapeutic angiogenesis in cardiovascular disease / H. A1 Sabti // J Cardiothorac Surg. - 2007 - V.2. - P.49.

19. Alexander G.M. Effect of transgene copy number on survival in the G93A SOD1 transgenic mouse model of ALS / G.M. Alexander, K.L. Erwin, N. Byers, J.S. Deitch, et al. // Brain Res Mol Brain Res. - 2004. - V. 130. - P.7-15.

20. Ali H. Umbilical cord blood stem cells - potential therapeutic tool for neural injuries and disorders / H. Ali, H. Bahbahani // Acta Neurobiol Exp (Wars). -2010. -V.70, №3. - P.316-24.

21. Andersen P.M. Autosomal recessive adult-onset amyotrophic lateral sclerosis associated with homozygosity for Asp90Ala CuZn-superoxide dismutase mutation. A clinical and genealogical study of 36 patients / P.M. Andersen, L. Forsgren, M. Binzer, P. Nilsson, et al. // Brain. - 1996. - V.119(Pt 4). - P. 1153-72.

22. Andrus P.K. Protein oxidative damage in a transgenic mouse model of familial amyotrophic lateral sclerosis / P.K. Andrus, T.J. Fleck, M.E. Gurney, E.D. Hall // J Neurochem. - 1998. - V.71, №5. - P.2041-8.

23. Antoine M. Fibroblast growth factor 3, a protein with dual subcellular localization, is targeted to the nucleus and nucleolus by the concerted action of two nuclear localization signals and a nucleolar retention signal / M. Antoine, K. Reimers, C. Dickson // J Biol Chem. - 1997. - Y.272, №47. - P.29475-81.

24. Asheuer M. Human CD34+ cells differentiate into microglia and express recombinant therapeutic protein / M. Asheuer, F. Pflumio, S. Benhamida, A. Dubart-Kupperschmitt // Proc Natl Acad Sci USA. - 2004. - V.101, №10. -P.3557-62.

25. Azizi S.A. Engraftment and migration of human bone marrow stromal cells implanted in the brains of albino rats-similarities to astrocyte grafts / S.A. Azizi,

D. Stokes, B.J. Augelli, C. DiGirolamo, D.J. Prockop // Proc Natl Acad Sci USA. -1998. -V.95, №7. - P.3908-13.

26. Azzouz M. VEGF delivery with retrogradely transported lentivector prolongs survival in a mouse ALS model / M. Azzouz, G.S. Ralph, E. Storkebaum, L.E. Walmsley et al. // Nature. - 2004. - V.429, №6990. - P.413-7.

27. Ballard C. Alzheimer's disease / C. Ballard, S. Gauthier, A. Corbett, C. Brayne, et al. // Lancet. - 2011. - V.377, №9770. - P.1019-31.

28. Ballen K., Current status of cord blood banking and transplantation in the United States and Europe / K. Ballen, H.E. Broxmeyer, J. McCullough, et al. // Biol Blood Marrow Transplant. - 2001. - V.7, №12. - P.635-45.

29. Balvay L. Structural and functional diversity of viral IRESes / L. Balvay, R. Soto Rifo, E.P. Ricci, D. Decimo, et al. // Biochim Biophys Acta. - 2009. -V. 1789, №9-10.-P.542-57.

30. Barker J.N. Survival after transplantation of unrelated donor umbilical cord blood is comparable to that of human leukocyte antigen-matched unrelated donor bone marrow: results of a matched-pair analysis / J.N. Barker, S.M. Davies, T. DeFor, N.K. Ramsay, et al. // Blood. - 2001. - V.97, №10. - P.2957-61.

31. Beenken A. The FGF family: biology, pathophysiology and therapy / A. Beenken, M. Mohammadi // Nat Rev Drug Discov. - 2009. - V.8, №3. - P.235-53.

32. Bendotti C. Transgenic SOD1 G93A mice develop reduced GLT-1 in spinal cord without alterations in cerebrospinal fluid glutamate levels / C. Bendotti, M. Tortarolo, S.K. Suchak, et al. // J Neurochem. - 2001. -V.79, №4. - P.737-46.

33. Bernreuther C. Neural cell adhesion molecule Ll-transfected embryonic stem cells promote functional recovery after excitotoxic lesion of the mouse striatum / C. Bernreuther, M. Dihne, V. Johann, Schiefer J., et al. // J Neurosci. -2006. - V.26, №45. - P. 11532-9.

34. Bjorklund L.M. Embryonic stem cells develop into functional dopaminergic neurons after transplantation in a Parkinson rat model / L.M. Bjorklund, R. Sanchez-Pernaute, S. Chung, T. Andersson, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. -2002. - Y.99, №4. - P.2344-9.

35. Bokeriya L. A. Use of human VEGF(165) gene for therapeutic angiogenesis in coronary patients: first results / L.A. Bokeriya, E.Z. Golukhova, M.V. Eremeeva, // Bull Exp Biol Med. - 2005. -V.140, №1. - P. 106-12.

36. Bolt M.W. High-efficiency blotting of proteins of diverse sizes following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis / M.W. Bolt, P.A. Mahoney // Anal Biochem. - 1997. - V.247, №2. - P. 185-92.

37. Boshart M. A very strong enhancer is located upstream of an immediate early gene of human cytomegalovirus / M. Boshart, F. Weber, G. Jahn, K. Dorsch-Hasler, et al. // Cell. - 1985. - V.41, №2. - P.521-30.

38. Boulis N.M. Neuronal survival following remote adenovirus gene delivery / N.M. Boulis, D.E. Turner, M.J. Imperiale, et al. // J Neurosurg. - 2002. - V.96. -P.212-9.

39. Broxmeyer H.E. Growth characteristics and expansion of human umbilical cord blood and estimation of its potential for transplantation in adults / H.E. Broxmeyer, G. Hangoc, S. Cooper, R.C. Ribeiro, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 1992. - V.89, №9. - P.4109-13.

40. Broxmeyer H.E. Umbilical cord blood hematopoietic stem and repopulating cells in human clinical transplantation / H.E. Broxmeyer, J. Kurtzberg, E. Gluckman, A.D. Auerbach, et al. // Blood Cells. - 1991. - V.17, № 2. - P.313-29.

41. Brun A.C. Enforced adenoviral vector-mediated expression of HOXB4 in human umbilical cord blood CD34+ cells promotes myeloid differentiation but not proliferation/ A.C. Brun, X. Fan, J.M. Bjornsson, R.K. Humphries et al.// Mol Ther. - 2003. - V.8, №4. - P.618-28.

42. Bruns C.K. Impaired post-translational folding of familial ALS-linked Cu, Zn superoxide dismutase mutants / C.K. Bruns, R.R. Kopito // EMBO J. - 2007. -V.26, №3. - P.855-66.

43. Burger C. Recombinant adeno-associated viral vectors in the nervous system / C. Burger, K. Nash, R.J. Mandel // Hum Gene Ther. - 2005. - V.16, №7. - P. 781-91.

44. Burland T.G. DNASTAR's Lasergene sequence analysis software / T.G. Burland // Methods Mol Biol. - 2000. - V. 132. - P.71-91.

45. Canalis E. Growth factors and cytokines in bone cell metabolism / E. Canalis, T.L. McCarthy, M. Centrella // Annu Rev Med. - 1991. - V.42. - P. 1724.

46. Cardoso A. A. Release from quiescence of CD34+ CD38- human umbilical cord blood cells reveals their potentiality to engraft adults / A. A. Cardoso, M.L. Li, P. Batard, A. Hatzfeld, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 1993. - Vol. 90, №18. -P.8707-11.

47. Carow C.E. Human multipotential progenitor cells (CFU-GEMM) have extensive replating capacity for secondary CFU-GEMM: an effect enhanced by cord blood plasma / C.E. Carow, G. Hangoc, H.E. Broxmeyer // Blood. - 1993. -V.81, №4. - P.942-9.

48. Cemazar M. Effective gene transfer to solid tumors using different nonviral gene delivery techniques: electroporation, liposomes, and integrin-targeted vector/ M. Cemazar, G. Sersa, J. Wilson, G.M. Tozer, et al. // Cancer Gene Ther. - 2002. -V.9, №4. -P.399-406.

49. Chan H.Y. Comparison of IRES and F2A-Based Locus-Specific Multicistronic Expression in Stable Mouse Lines / H.Y. Chan, Xing X. Sivakamasundari, P. Kraus, et al. // PLoS One. - 2011. -V.6, №12. - P.e28885.

50. Chang C. W. Efficient expression of vascular endothelial growth factor using minicircle DNA for angiogenic gene therapy / C.W. Chang, L.V. Christensen, M. Lee, S.W. Kim // J Control Release. - 2008. - V. 125, №2. - P. 155-63.

51. Chen B.-Y. PCR Cloning Protocols / B.-Y. Chen, H.W. Janes // Humana Press, 2002.

52. Chen H.K. Combined cord blood stem cells and gene therapy enhances angiogenesis and improves cardiac performance in mouse after acute myocardial infarction / H.K. Chen, H.F. Hung, K.G. Shyu, B.W. Wang, et al. // Eur J Clin Invest. - 2005. - V. 11, №35. - P.677-86.

53. Chen J. Cell adhesion molecule Ll-transfected embryonic stem cells with enhanced survival support regrowth of corticospinal tract axons in mice after spinal cord injury / J. Chen, C. Bernreuther, M. Dihne, M. Schachner // J Neurotrauma. -2005. - V.22, №8. - P.896-906.

54. Chen J. Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats / J. Chen, P.R. Sanberg, Y. Li, L. Wang, et al. // Stroke. - 2001. - V. 32, №11. - P.2682-8.

55. Chen R. The potential for the use of mononuclear cells from human umbilical cord blood in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis in SOD1 mice / R. Chen, N. Ende // J Med. - 2000. - V.31, №1-2. - P.21-30.

56. Chen X. Ischemic rat brain extracts induce human marrow stromal cell growth factor production / X. Chen, Y. Li, L. Wang, M. Katakowski, et al. // Neuropathology. - 2002. - V. 22, №4. - P.275-9.

57. Chintalgattu V. Cardiac myofibroblasts: a novel source of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors Flt-1 and KDR / V. Chintalgattu, D.M. Nair, L.C. Katwa // J Mol Cell Cardiol. - 2003. -V.35, №3. -P.277-86.

58. Cohen S.N. Construction of biologically functional bacterial plasmids in vitro / S.N. Cohen, A.C. Chang, H.W. Boyer, R.B. Helling // Proc Natl Acad Sci USA. - 1973. - V.70, №11. -P.3240-4.

59. Cohen T. VEGF 121, a vascular endothelial growth factor (VEGF) isoform lacking heparin binding ability, requires cell-surface heparan sulfates for efficient binding to the VEGF receptors of human melanoma cells / T. Cohen, H. Gitay-Goren, R. Sharon, et al. // J Biol Chem. - 1995. - V.270, №19. - P. 11322-6.

60. Compston A. Multiple sclerosis / A. Compston, A. Coles // Lancet. - 2008. -V. 372, №9648. - P. 1502-17.

61. Cressey R. Alteration of protein expression pattern of vascular endothelial growth factor (VEGF) from soluble to cell-associated isoform during tumourigenesis / R. Cressey, O. Wattananupong, N. Lertprasertsuke, U. Vinitketkumnuen // BMC Cancer. - 2005. - V5. - P. 128.

62. Daud A.I. Phase I trial of interleukin-12 plasmid electroporation in patients with metastatic melanoma / A.I. Daud, R.C. DeConti, S. Andrews, P. Urbas, et al. // J Clin Oncol. - 2008. -V.26, № 36. - P.5896-903.

63. Dawbarn D. Neurotrophins and neurodegeneration / D. Dawbarn, S.J. Allen // Neuropathol Appl Neurobiol. - 2003. - Y.29, №3. - P.211-30.

64. Dean D.A. Electroporation as a method for high-level nonviral gene transfer to the lung / D.A. Dean, D. Machado-Aranda, K. Blair-Parks, A.V. Yeldandi, J.L. Young, // Gene Ther. - 2003. - V. 10, №18. - P. 1608-15.

65. Dezawa M. Insights into autotransplantation: the unexpected discovery of specific induction systems in bone marrow stromal cells / M. Dezawa // Cell Mol Life Sci. - 2006. - V.63, №.23. - P.2764-72.

66. Donnelly J.J. Protective efficacy of intramuscular immunization with naked DNA / J.J. Donnelly, J.B. Ulmer, M. A. Liu // Ann NY Acad Sci. - 1995. - V.772. - P.40-6.

67. Douville R. Identification of active loci of a human endogenous retrovirus in neurons of patients with amyotrophic lateral sclerosis / R. Douville, J. Liu, J. Rothstein, A. Nath//Ann Neurol. - 2011. -V.69, №1. - P. 141-51.

68. Dromard C. NG2 and 01ig2 expression provides evidence for phenotypic deregulation of cultured central nervous system and peripheral nervous system neural precursor cells / C. Dromard, S. Bartolami, L. Deleyrolle, H. Takebayashi, et al. // Stem Cells. - 2007. - V. 25, №2. - P.340-53.

69. Dupuis L. Mitochondria in amyotrophic lateral sclerosis: a trigger and a target / L. Dupuis, J.L. Gonzalez de Aguilar, H. Oudart, M. de Tapia, et al. // Neurodegener Dis. - 2004. -V.l, №6. - P.245-54.

70. Dvorak H.F. Fibrin gel investment associated with line 1 and line 10 solid tumor growth, angiogenesis, and fibroplasia in guinea pigs. Role of cellular immunity, myofibroblasts, microvascular damage, and infarction in line 1 tumor regression / H.F. Dvorak, A.M. Dvorak, E.J. Manseau, L. Wiberg, W.H. Churchill, // J Natl Cancer Inst. - 1979. -V.62, №6. - P. 1459-72.

71. Eapen M. Effect of graft source on unrelated donor haemopoietic stem-cell transplantation in adults with acute leukaemia: a retrospective analysis / M. Eapen, V. Rocha, G. Sanz, et al. // Lancet Oncol. - 2010. - V.ll, №7. - P. 653-60.

72. Ende N. Human umbilical cord blood cells ameliorate Alzheimer's disease in transgenic mice / N. Ende, R. Chen, D. Ende-Harris, // J Med. - 2001. - V.32, №34. - P.241-7.

73. Ende N. Human umbilical cord blood effect on sod mice (amyotrophic lateral sclerosis) / N. Ende, F. Weinstein, R. Chen, M. Ende // Life Sci. - 2000. -V.67, №1. -P.53-9.

74. Eriksson P.S. Neurogenesis in the adult human hippocampus / P.S. Eriksson, E. Perfilieva, T. Bjork-Eriksson, A.M. Alborn, et al. // Nat Med. - 1998. - V.4, №11. -P.1313-7.

75. Evans J.T. Human cord blood CD34+CD38- cell transduction via lentivirus-based gene transfer vectors / J.T. Evans, P.F. Kelly, E. O'Neill, J.V. Garcia // Hum Gene Ther. - 1999. - V.10, №9. - P. 1479-89.

76. Feigner J.H. Enhanced gene delivery and mechanism studies with a novel series of cationic lipid formulations / J.H. Feigner, R. Kumar, C.N. Sridhar, C.J. Wheeler, et al. // J Biol Chem. - 1994. - V.269, №4. - P.2550-61.

77. Ferrara N. The biology of VEGF and its receptors / N. Ferrara, H.P. Gerber, J. LeCouter // Nat Med. - 2003. - V.9, №6. - P.669-76.

78. Ferrara N. Molecular and biological properties of the vascular endothelial growth factor family of proteins / N. Ferrara, K. Houck, L. Jakeman, D.W. Leung, // Endocr Rev. - 1992. - Y.13, №1. - P.18-32.

79. Fitzgerald K.A. The cytokine factsbook / K.A. Fitzgerald, L.A.J. O'Neill, J.A.H. Gearing, R.E. Callard // Academic Press, 2001.

80. Freed C.R. Transplantation of embryonic dopamine neurons for severe Parkinson's disease / C.R. Freed, P.E. Green, R.E. Breeze, W.Y. Tsai, et al. // N Engl J Med. - 2001. - V.344, №10. - P.710-9.

81. Gao F. A promising strategy for the treatment of ischemic heart disease: Mesenchymal stem cell-mediated vascular endothelial growth factor gene transfer

in rats / F. Gao, T. He, H. Wang, S. Yu, et al. // Can J Cardiol. - 2007. - V.23, №11.-P.891-8.

82. Garbuzova-Davis S. Intravenous administration of human umbilical cord blood cells in an animal model of MPS III B / S. Garbuzova-Davis, S.K. Klasko, PR. Sanberg // J Comp Neurol. - 2009. - V.515, №1. - P.93-101.

83. Garbuzova-Davis S. Human umbilical cord blood treatment in a mouse model of ALS: optimization of cell dose / Garbuzova-Davis S., Sanberg C.D., Kuzmin-Nichols N., et al. // PLoS One. - 2008. - Y.3, №6. - P.e2494.

84. Garbuzova-Davis S. Feasibility of cell therapy for amyotrophic lateral sclerosis / S. Garbuzova-Davis, P.R. Sanberg // Exp Neurol. - 2009. - V. 216, №1. -P.3-6.

85. Garbuzova-Davis S. Intravenous administration of human umbilical cord blood cells in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis: distribution, migration, and differentiation / S. Garbuzova-Davis, A.E. Willing, T. Zigova, S. Saporta, et al. // J Hematother Stem Cell Res. - 2003. - V. 12, №3. - P.255-70.

86. Gehl J. Electroporation: theory and methods, perspectives for drug delivery, gene therapy and research / J. Gehl // Acta Physiol Scand. - 2003. - V. 177, №4. -P.437-47.

87. Gentry T. Retroviral vector-mediated gene transfer into umbilical cord blood CD34brCD38-CD33-cells / T. Gentry, C. Smith // Exp Hematol. - 1999. - V.27, №4. - P. 1244-54.

88. Giasson B.I. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein / B.I. Giasson, J.E. Duda, S.M. Quinn, B. Zhang, et al.//Neuron. - 2002. - V.34, №4. - P.521-33.

89. Glorioso J.C. Herpes vector-mediated gene transfer in treatment of diseases of the nervous system / J.C. Glorioso, D.J. Fink // Annu Rev Microbiol. - 2004 -V.58. - P.253-71.

90. Gluckman E. Current status of umbilical cord blood hematopoietic stem cell transplantation / E. Gluckman // Exp Hematol. - 2000. - V.28, №11 - P. 1197-205.

91. Gluckman E. Hematopoietic stem-cell transplants using umbilical-cord blood / E. Gluckman // N Engl J Med. - 2001. -V.344, №24. - P. 1860-1.

92. Gluckman E. Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical-cord blood from an HLA-identical sibling / E. Gluckman, H.A. Broxmeyer, A.D. Auerbach, H.S. Friedman, et al. // N Engl J Med. - 1989. -V.321, №17. - P. 1174-8.

93. Gluckman E. Umbilical cord blood transplants / E. Gluckman, F. Locatelli // Curr Opin Hematol. - 2000. - V.7, №6. - P.353-7.

94. Gluckman E.G. Use of Cord Blood Cells for Banking and Transplant / E.G. Gluckman, Y.V. Roch, C. Chastang // Oncologist. - 1997. - V.2, №5. - P.340-343.

95. Gnarra J.R. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor mRNA by the product of the VHL tumor suppressor gene / J.R. Gnarra, S. Zhou, M.J. Merrill, J.R. Wagner, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 1996. - V.93, №20. - P. 10589-94.

96. Goldman L.A. Modifications of vectors pEF-BOS, pcDNAl and pcDNA3 result in improved convenience and expression / L.A. Goldman, E.C. Cutrone, S.Y. Kotenko, C.D. Krause et al. // Biotechniques. - 1996. - V.21, №6. - P. 1013-5.

97. Gong B. Characterization of the zebrafish vascular endothelial growth factor A gene: comparison with vegf-A genes in mammals and Fugu / B. Gong, D. Liang, T.G. Chew, R. Ge // Biochim Biophys Acta. - 2004. - V. 1676, №1. - P.33-40.

98. Gospodarowicz D. Purification of the fibroblast growth factor activity from bovine brain / D. Gospodarowicz, H. Bialecki, G. Greenburg // J Biol Chem. -1978. - V. 253, №10. - P.3736-43.

99. Gould E. Neurogenesis in adult mammals: some progress and problems / E. Gould, C.G. Gross // J Neurosci. - 2002. - V.22, №3. - P.619-23.

100. Graham F.L. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5 / F.L. Graham, J. Smiley, W.C. Russell, R. Nairn // J Gen Virol. - 1977. - V. 36, №1. - P.59-74.

101. Griesenbach U. Cystic fibrosis gene therapy: successes, failures and hopes for the future / U. Griesenbach, E.W. Alton // Expert Rev Respir Med. - 2009. -V.3, №4. - P.363-71.

102. Guo P. Vascular endothelial growth factor isoforms display distinct activities in promoting tumor angiogenesis at different anatomic sites / P. Guo, L. Xu, S. Pan, R.A. Brekken, et al. // Cancer Res. - 2001. - V.61, №23 - P.8569-77.

103. Gurney M.E. Transgenic-mouse model of amyotrophic lateral sclerosis / M.E. Gurney // N Engl J Med. - 1994. - Vol. 331, №25. - P. 1721-2.

104. Gurney M.E., Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation / M.E. Gurney, H. Pu, A.Y. Chiu, M.C. Dal Canto, et al. // Science. - 1994. - V.264, №5166. - 1772-5.

105. Habisch H.J. Intrathecal application of neuroectodermally converted stem cells into a mouse model of ALS: limited intraparenchymal migration and survival narrows therapeutic effects / H.J. Habisch, M. Janowski, D. Binder, M. Kuzma-Kozakiewicz, et al. // J Neural Transm. - 2007. - V. 114, №11. - P. 1395-406.

106. Hadaczek P. Eight years of clinical improvement in MPTP-lesioned primates after gene therapy with AAV2-hAADC / P. Hadaczek, J.L. Eberling, P. Pivirotto, J. Bringas, et al. // Mol Ther. - 2010. - V.18, №8:- P.1458-61.

107. Hawley T.S. Flow Cytometry Protocols / T.S. Hawley, R.G. Hawley, Totowa N.J. // Humana Press, 2004.

108. Helledie T. A. simple and reliable electroporation method for human bone marrow mesenchymal stem cells / T. Helledie, V. Nurcombe, S.M. Cool // Stem Cells Dev. - 2008. - V. 17, №4. - P.837-48.

109. Hendricks W.A., Pak E.S., Owensby J.P., Menta K.J., et al. Predifferentiated embryonic stem cells prevent chronic pain behaviors and restore sensory function following spinal cord injury in mice / W.A. Hendricks, E.S. Pak, J.P. Owensby, K.J. Menta, et al. // Mol Med. - 2006. - V.12, №1-3. - P.34-46.

110. Herve M.A. VEGF189 stimulates endothelial cells proliferation and migration in vitro and up-regulates the expression of Flk-l/KDR mRNA / M.A.

Herve, H. Buteau-Lozano, S. Mourah, F. Calvo, et al. // Exp Cell Res. - 2005. -V.309, №1. -P.24-31.

111. Herzog R.W. A Guide to Human Gene Therapy / R.W. Herzog, S. Zolotukhin // World Scientific, 2010.

112. Holmes D.I. The vascular endothelial growth factor (VEGF) family: angiogenic factors in health and disease / D.I. Holmes, I. Zachary // Genome Biol. - 2005. - V.6, №2. - P.209.

113. Houck K.A. Dual regulation of vascular endothelial growth factor bioavailability by genetic and proteolytic mechanisms / K.A. Houck, D.W. Leung, A.M. Rowland, J. Winer et al. // J Biol Chem. - 1992. - V.267, №36. - P.26031-7.

114. Hu B.Y. Differentiation of human oligodendrocytes from pluripotent stem cells / B.Y. Hu, Z.W. Du // Nat Protoc. - 2009. - V.4, №11. - P. 1614-22.

115. Huang P.I. Targeted genetic and viral therapy for advanced head and neck cancers / P.I. Huang, J.F. Chang, D.H. Kirn, T.C. Liu // Drug Discov Today. -2009. - V. 14, №11-12. - P.570-8.

116. Hwang D.H. Intrathecal transplantation of human neural stem cells overexpressing VEGF provide behavioral improvement, disease onset delay and survival extension in transgenic ALS mice / D.H. Hwang, H.J. Lee, I.H. Park, J.I. Seok, et al. // Gene Ther. - 2009. - V.16, №10. - P. 1234-44.

117. Hyde S.C. Correction of the ion transport defect in cystic fibrosis transgenic mice by gene therapy / S.C. Hyde, D.R. Gill, C.F. Higgins, A.E. Trezise, et al. // Nature. - 1993. - V.362, №6417. - P.250-5.

118. Hyde S.C. CpG-free plasmids confer reduced inflammation and sustained pulmonary gene expression / S.C. Hyde, I.A. Pringle, S. Abdullah, A.E. Lawton, et al. // Nat Biotechnol. - 2008. - V.26, №5. - P.549-51.

119. Ikeda Y. Development of angiogenic cell and gene therapy by transplantation of umbilical cord blood with vascular endothelial growth factor gene / Y. Ikeda, N. Fukuda, M. Wada, T. Matsumoto, et al. // Hypertens Res. -2004. - V.27, №2. - P. 119-28.

120. lian N. Vascular endothelial growth factor expression, beta-catenin tyrosine phosphorylation, and endothelial proliferative behavior: a pathway for transformation? / A. Tucker, J.A. Madri // Lab Invest. - 2003. - V.83, №8. -P. 1105-15.

121. Islamov R.R. Induction of VEGF and its Flt-1 receptor after sciatic nerve crush injury / R.R. Islamov, V. Chintalgattu, E.S. Pak, L.C. Katwa, A.K. Murashov // Neuroreport. - 2004. - V. 15, №13. - P. 2117-21.

122. Itoh N. Evolution of the Fgf and Fgfr gene families / N. Itoh, D.M. Ornitz // Trends Genet. - 2004. - V.20, №11. - P.563-9.

123. Itoh N. Functional evolutionary history of the mouse Fgf gene family / N. Itoh, D.M. Ornitz // Dev Dyn. - 2008. - V. 237, №1. - P. 18-27.

124. Itoh N. Fibroblast growth factors: from molecular evolution to roles in development, metabolism and disease / N. Itoh, D.M. Ornitz // J Biochem. - 2011.

- V.149, №2. - P. 121-30.

125. Jankovic J. Parkinson's disease: clinical features and diagnosis / J. Jankovic // J Neurol Neurosurg Psychiatry. - 2008. - V.79, №4. - P.368-76.

126. Jankowsky J.L. Mutant presenilins specifically elevate the levels of the 42 residue beta-amyloid peptide in vivo: evidence for augmentation of a 42-specific gamma secretase / J.L. Jankowsky, D.J. Fadale, J. Anderson, G.M. Xu, et al. // Hum Mol Genet. - 2004. - V.13, №2. - P. 159-70.

127. Jankowsky J.L. Persistent amyloidosis following suppression of Abeta production in a transgenic model of Alzheimer disease / J.L. Jankowsky, H.H. Slunt, V. Gonzales, et al. // PLoS Med. - 2005. - V.2, №12. - P.e355.

128. Jia X. Coexpression of vascular endothelial growth factor and interleukin-1 receptor antagonist for improved human islet survival and function / X. Jia, K. Cheng, R.I. Mahato // Mol Pharm. - 2007. - V.4, №2. - P. 199-207.

129. Jiang Y. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow / Y. Jiang, B.N. Jahagirdar, R.L. Reinhardt, R.E. Schwartz, et al. // Nature. - 2002.

- V.418, №6893. - P.41-9.

130. Jiao Y. A simple and sensitive antigen retrieval method for free-floating and slide-mounted tissue sections / Y. Jiao, Z. Sun, T. Lee, F.R. Fusco, et al. // J Neurosci Methods. - 1999. - V.93, №2. - P. 149-62.

131. Jingjing L. Human Muller cells express VEGF183, a novel spliced variant of vascular endothelial growth factor / L. Jingjing, Y. Xue, N. Agarwal, R.S. Roque // Invest Ophthalmol Vis Sei. - 1999. - V.40, №3. - P.752-9.

132. Johnson D.E. Diverse forms of a receptor for acidic and basic fibroblast growth factors / D.E. Johnson, P.L. Lee, J. Lu, L.T. Williams // Mol Cell Biol. -1990. - V. 10, №9. - P.4728-36.

133. Jordan E.T. Optimizing electroporation conditions in primary and other difficult-to-transfect cells / E.T. Jordan, M. Collins, J. Terefe, L. Ugozzoli, et al. // J Biomol Tech. - 2008. -V.19, №5. - P.328-34.

134. Jurga M. Markiewicz Neurogenic potential of human umbilical cord blood: neural-like stem cells depend on previous long-term culture conditions / M. Jurga, I. Markiewicz, A. Sarnowska, A. Habich, et al. // J Neurosci Res. - 2006. - V.83, №4. - P.627-37.

135. Kano M.R. VEGF-A and FGF-2 synergistically promote neoangiogenesis through enhancement of endogenous PDGF-B-PDGFRbeta signaling / M.R. Kano, Y. Morishita, C. Iwata, et al. // J Cell Sei. - 2005. - V. 118. - P.3759-68.

136. Kaspar B.K. Retrograde viral delivery of IGF-1 prolongs survival in a mouse ALS model / B.K. Kaspar, J. Llado, N. Sherkat, J.D. Rothstein, F.H. Gage // Science. - 2003. - V.301, №5634. - P.839-42.

137. Kelley M.J. Emergence of the keratinocyte growth factor multigene family during the great ape radiation / M.J. Kelley, M. Pech, H.N. Seuanez, J.S. Rubin, et al. // Proc Natl Acad Sei USA. - 1992. - V.89, №19. - P.9287-91.

138. Kiefer P. Competition between nuclear localization and secretory signals determines the subcellular fate of a single CUG-initiated form of FGF3 / P. Kiefer, P. Acland, D. Pappin, G. Peters, et al. // EMBO J. - 1994. - V. 13, №17. - P.4126-36.

139. Kiernan M.C. Amyotrophic lateral sclerosis / M.C. Kiernan, S. Vucic, B.C. Cheah, M.R. Turner, et al. // Lancet. - 2011. -V.377, № 9769. - P.942-55.

140. Kong J. Massive mitochondrial degeneration in motor neurons triggers the onset of amyotrophic lateral sclerosis in mice expressing a mutant SOD1 / J. Kong, Z. Xu // J Neurosci. - 1998. - V.18, №9. -P.3241-50.

141. Kotzamanis G. CFTR expression from a BAC carrying the complete human gene and associated regulatory elements / G. Kotzamanis, H. Abdulrazzak, J. Gifford-Garner, et al. // J Cell Mol Med. - 2009. - V. 13, №9A. - P.2938-48.

142. Kozak M. Point mutations define a sequence flanking the AUG initiator codon that modulates translation by eukaryotic ribosomes / M. Kozak // Cell. -1986. - V.44, №2. - P.283-92.

143. Kukekov V.G. Multipotent stem/progenitor cells with similar properties arise from two neurogenic regions of adult human brain / V.G. Kukekov, E.D. Laywell, O. Suslov, et al. // Exp Neurol. - 1999. -V. 156, №2. - P.333-44.

144. Kukula K. Intramyocardial plasmid-encoding human vascular endothelial growth factor A165/basic fibroblast growth factor therapy using percutaneous transcatheter approach in patients with refractory coronary artery disease (VIFCAD) / K. Kukula, L. Chojnowska, M. Dabrowski, A. Witkowski, et al. // Am Heart J. - 2011. - V. 161, №3. - P.581-9.

145. Kunst C.B. Genetic mapping of a mouse modifier gene that can prevent ALS onset / C.B. Kunst, L. Messer, J. Gordon, J. Haines, D. Patterson // Genomics. -2000. - V.70, №2. - P. 181-9.

146. Kurtzberg J. Update on umbilical cord blood transplantation / J. Kurtzberg // Curr Opin Pediatr. - 2009. - V.21, №1. - P.22-9.

147. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. - V.227, №5259. -P.680-5.

148. Lagarkova M. A. Induction of pluripotency in human endothelial cells resets epigenetic profile on genome scale / M.A. Lagarkova, M.V. Shutova, A.N. Bogomazova, E.M. Vassina, et al. // Cell Cycle. - 2010. -Y.9, №5. - P.937-46.

149. Lange T. VEGF162, a new heparin-binding vascular endothelial growth factor splice form that is expressed in transformed human cells / T. Lange, N. Guttmann-Raviv, L. Baruch, M. Machluf, G. Neufeld // J Biol Chem. - 2003. -V.278, №19.-P. 17164-9.

150. Lansdorp P.M. Ontogeny-related changes in proliferative potential of human hematopoietic cells / P.M. Lansdorp, W. Dragowska, H. Mayani // J Exp Med. -1993. - V.178, №3. -P.787-91.

151. Larsen M.D. Bactofection of lung epithelial cells in vitro and in vivo using a genetically modified Escherichia coli / M.D. Larsen, U. Griesenbach, S. Goussard, D.C. Gruenert, et al. // Gene Ther. - 2008. - V.15, №6. - P.434-42.

152. Latchman D.S. Herpes simplex virus-based vectors for the treatment of cancer and neurodegenerative disease / D.S. Latchman // Curr Opin Mol Ther. -2005. - V.7, №5. - P.415-8.

153. Ledley F.D. Pharmaceutical approach to somatic gene therapy / F.D. Ledley //Pharm Res. - 1996. - V. 13, №11. - P. 1595-614.

154. Lee M. Hypoxia-inducible VEGF gene delivery to ischemic myocardium using water-soluble lipopolymer / M. Lee, J. Rentz, M. Bikram, S. Han, et al. // Gene Ther. - 2003. - V.10, №18. - P. 1535-42.

155. Lee W.S. Progesterone inhibits arterial smooth muscle cell proliferation / W.S. Lee, J.A. Harder, M. Yoshizumi, M.E. Lee, E. Haber // Nat Med. - 1997. -V.3, №9. - P. 1005-8.

156. Lepore A.C. Human glial-restricted progenitor transplantation into cervical spinal cord of the SOD1 mouse model of ALS / A.C. Lepore, J. O'Donnell, A.S. Kim, T. Williams, et al. // PLoS One. - 2011. - V.6, №10. - P.e25968.

157. Levy N.S. Sequencing of the human vascular endothelial growth factor (VEGF) 3' untranslated region (UTR): conservation of five hypoxia-inducible RNA-protein binding sites / N.S. Levy, M.A. Goldberg, A.P. Levy // Biochim Biophys Acta. - 1997. - V.1352, №2. - P. 167-73.

158. Liew C.G. Transient and stable transgene expression in human embryonic stem cells / C.G. Liew, J.S. Draper, J. Walsh, H. Moore, P.W. Andrews // Stem Cells. - 2007. - V.25, № 6. - P.1521-8.

159. Lim E. A method for control of an implantable rotary blood pump for heart failure patients using noninvasive measurements / E. Lim, A.H. Alomari, A.V. Savkin, S. Dokos, et al. // Artif Organs. - 2011. - V.35, №8. - P.E174-80.

160. Lim J.Y. Microporation is a valuable transfection method for efficient gene delivery into human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells / J.Y. Lim, S.H. Park, C.H. Jeong, J.H. Oh, et al. // BMC Biotechnol. - 2010. - V.10. -P.38.

161. Lin G. An FGF-responsive astrocyte precursor isolated from the neonatal forebrain / G. Lin, J.E. Goldman // Glia. - 2009. -V.57, №6. - P.592-603.

162. Lindvall O. Evidence for long-term survival and function of dopaminergic grafts in progressive Parkinson's disease / O. Lindvall, G. Sawle, H. Widner, J.C. Rothwell, et al. // Ann Neurol. - 1994. - V.35, №2. - P. 172-80.

163. Liu L. Effect of basic fibroblast growth factor on the expression of glial fibrillary acidic protein after tractive spinal cord injury in rats / L. Liu, B. Lu, C.Q. Tu, L.T. Chi, et al. // Chin J Traumatol. - 2005. - V.8, №2. - P. 117-20.

164. Logan J. Real-Time PCR: Current Technology and Applications / J. Logan, E. Kirstin, S. Nick // Caister Academic Press, 2009.

165. Lu G. Vector NTI, a balanced all-in-one sequence analysis suite / G. Lu, E.N. Moriyama // Brief Bioinform. - 2004. -V.5, №4. - P.378-88.

166. Lu L. Therapeutic benefit of TH-engineered mesenchymal stem cells for Parkinson's disease / L. Lu, C. Zhao, Y. Liu, X. Sun, et al. // Brain Res Brain Res Protoc. - 2005. - V.15, №1. -P.46-51.

167. Manabe Y. Adenovirus-mediated gene transfer of glial cell line-derived neurotrophic factor prevents motor neuron loss of transgenic model mice for amyotrophic lateral sclerosis /Y. Manabe, I. Nagano, M.S. Gazi, T. Murakami, et al. // Apoptosis. - 2002. - V.7, №4. - P.329-34.

168. Mangiarini L. Exon 1 of the HD gene with an expanded CAG repeat is sufficient to cause a progressive neurological phenotype in transgenic mice / L. Mangiarini, K. Sathasivam, M. Seller, B.Cozens, et al. // Cell. - 1996. - V.87, №3. - P.493-506.

169. Mason C. A brief definition of regenerative medicine / C. Mason, P. Dunnill // Regen Med. - 2008. - V.3, №1. - P. 1-5.

170. McKay I.A. Growth factors and receptors /I.A. McKay, B.D. Kenneth // Oxford University Press, 1998.

171. Meininger V. ALS, what new 144 years after Charcot? / V. Meininger // Arch Ital Biol. - 2011. - V. 149, №1. - P.29-37.

172. Meng Q.Y. Transplantation of VEGF165-gene-transfected endothelial progenitor cells in the treatment of chronic venous thrombosis in rats / Q. Y. Meng, X.Q. Li, X.B. Yu, F.R. Lei, et al. // Chin Med J (Engl). - 2010. - V.123, №4. -P. 471-7.

173. Miagkov A. Gene transfer of baculoviral p35 by adenoviral vector protects human cerebral neurons from apoptosis / A. Miagkov, J. Turchan, A. Nath, D.B. Drachman, // DNA Cell Biol. - 2004. - V.23, №8. - P.496-501.

174. Mineur P. Newly identified biologically active and proteolysis-resistant VEGF-A isoform VEGF111 is induced by genotoxic agents / P. Mineur, A.C. Colige, C.F. Deroanne, J. Dubail, et al.// J Cell Biol. - 2007. - V.179, №6. -P. 1261-73.

175. Monani U.R. The human centromeric survival motor neuron gene (SMN2) rescues embryonic lethality in Smn(-/-) mice and results in a mouse with spinal muscular atrophy / U.R. Monani, M. Sendtner, D.D. Coovert, D.W. Parsons, et al. // Hum Mol Genet. - 2000. - V.9, №3. - P.333-9.

176. Morishita R. Phase I/IIa clinical trial of therapeutic angiogenesis using hepatocyte growth factor gene transfer to treat critical limb ischemia / R. Morishita, H. Makino, M. Aoki, N. Hashiya, et al. // Arterioscler Thromb Vase Biol. -2011. -V.31, №3. - P.713-20.

177. Morsczeck C. Isolation of precursor cells (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth / Morsczeck C., Gotz W., Schierholz J., Zeilhofer F., et al. // Matrix Biol. - 2005. - V.24, №2. - P. 155-65.

178. Muller Y.A. Vascular endothelial growth factor: crystal structure and functional mapping of the kinase domain receptor binding site / Y.A. Muller, B. Li, H.W. Christinger, J.A. Wells, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 1997. -V.94, №14. -P.7192-7.

179. Muzyczka N., Berns K. I. Parvoviridae: the viruses and their replication. [Book Section] // Fields Virology / book auth. P. M. Howley. - New York: Lippincott, Williams & Wilkins, 2001.

180. Nakahata T. Hemopoietic colony-forming cells in umbilical cord blood with extensive capability to generate mono- and multipotential hemopoietic progenitors / T. Nakahata, M. Ogawa, // J Clin Invest. - 1982. -V.70, №6. - P. 1324-8.

181. Naldini L. Ex vivo gene transfer and correction for cell-based therapies / L. Naldini // Nat Rev Genet. - 2011. -V.12, №5. - P.301-15.

182. Naldini L. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector / L. Naldini, U. Blomer, P. Gallay, D. Ory, et al. // Science. -1996. - V.272, №5259. - P.263-7.

183. Neering S.J. Transduction of primitive human hematopoietic cells with recombinant adenovirus vectors / S.J. Neering, S.F. Hardy, D. Minamoto, S.K. Spratt, C.T. Jordan // Blood. - 1996. - V.88, №4. - P. 1147-55.

184. Neufeld G. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors / G. Neufeld, T. Cohen, S. Gengrinovitch, Z. Poltorak // FASEB J. - 1999. - V.13, №1. - P.9-22.

185. Ng Y.S. Therapeutic angiogenesis for cardiovascular disease / Y.S. Ng, P. A. D'Amore // Curr Control Trials Cardiovasc Med. - 2001. - V.2, №6. - P.278-285.

186. Nico B. Vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor-2 expression in mdx mouse brain / B. Nico, P. Corsi, A. Vacca, L. Roncali, D. Ribatti // Brain Res. - 2002. -V.953, №1-2. - P. 12-16.

187. Nilsen I.W. Thermolabile alkaline phosphatase from Northern shrimp (Pandalus borealis): protein and cDNA sequence analyses / I.W. Nilsen, Overbo K., Olsen R.L. // Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. - 2001. - Y.129, №4.-P.853-61.

188. Oldak T. Optimisation of transfection conditions of CD34+ hematopoietic cells derived from human umbilical cord blood / T. Oldak, M. Kruszewski, E.K. Machaj, A. Gajkowska, Z. Pojda // Acta Biochim Pol. - 2002. - V.49, №3 - P.625-32.

189. Oliver C. Immunocytochemical methods and protocols / C. Oliver, M.C. Jamur // Humana Press, 2010.

190. Onda T. Therapeutic benefits by human mesenchymal stem cells (hMSCs) and Ang-1 gene-modified hMSCs after cerebral ischemia / T. Onda, O. Honmou, K. Harada, K. Houkin, et al. // J Cereb Blood Flow Metab. - 2008. - V.28, №2. -P.329-40.

191. Oosthuyse B. Deletion of the hypoxia-response element in the vascular endothelial growth factor promoter causes motor neuron degeneration / B. Oosthuyse, L. Moons, E. Storkebaum, H. Beck, et al. // Nat Genet. - 2001. - V.28, №2. -P.131-8.

192. Orazi A. Commentary: Immunohistochemistry represents a useful tool to study human cell engraftment in SCID mice transplantation models / A. Orazi, S.E. Braun, H.E. Broxmeyer// Blood Cells. - 1994. -V. 20, №2-3. - P.323-30.

193. Ornitz D.M. Fibroblast growth factors / D.M. Ornitz, N. Itoh // Genome Biol. - 2001. - V.2, №3. - P. REVIEWS3005.

194. Pang Z.P. Induction of human neuronal cells by defined transcription factors / Z.P. Pang, N. Yang, T. Vierbuchen, A. Ostermeier, et al. // Nature. — 2011. — V.476, №7359. - P.220-3.

195. Papadakis E.D. Promoters and control elements: designing expression cassettes for gene therapy / E.D. Papadakis, S.A. Nicklin, A.H. Baker, S.J. White // Curr Gene Ther. - 2004. - V.4, №1. - P. 89-113

196. Parent M. Substantia nigra and Parkinson's disease: a brief history of then-long and intimate relationship / M. Parent, A. Parent // Can J Neurol Sci. - 2010. -V.37, №3. - P.313-9.

197. Park J.E. The vascular endothelial growth factor (VEGF) isoforms: differential deposition into the subepithelial extracellular matrix and bioactivity of extracellular matrix-bound VEGF / J.E. Park, G.A. Keller, N. Ferrara // Mol Biol Cell. - 1993. -V.4, №3. - P. 1317-26.

198. Peel A.L. Adeno-associated virus vectors: activity and applications in the CNS / A.L. Peel, R.L. Klein // J Neurosci Methods. - 2000. - V.98, №2. - P.95-104.

199. Peister A. Stable transfection of MSCs by electroporation / A. Peister, J.A. Mellad, M. Wang, H.A. Tucker, D.J. Prockop // Gene Ther. - 2004. - V. 11, №2. -P.224-8.

200. Peretz D. Glycosylation of vascular endothelial growth factor is not required for its mitogenic activity / D. Peretz, H. Gitay-Goren, M. Safran, N. Kimmel, et al. // Biochem Biophys Res Commun. - 1992. - V. 182, №3. - P. 1340-7.

201. Perez L. Have we improved in preventing and treating acute graft-versus-host disease? / L. Perez, C. Anasetti, J. Pidala // Curr Opin Hematol. - 2011. -V.18,№6.-P.408-13.

202. Pfeifer K. Adult neural progenitor cells provide a permissive guiding substrate for corticospinal axon growth following spinal cord injury / K. Pfeifer, M. Vroemen, A. Blesch, N. Weidner // Eur J Neurosci. - 2004. - V.20, №7. -P. 1695-704.

203. Plasterer T.N. PRIMERSELECT. Primer and probe design / T.N. Plasterer // Methods Mol Biol. - 1997 - V.70. - P.291-302.

204. Politis M. Clinical application of stem cell therapy in Parkinson's disease / M. Politis, O. Lindvall // BMC Med. - 2012 - V. 10. - P. 1.

205. Pollard J.W. Basic cell culture protocols / J.W. Pollard, J.M. Walke // Humana Press, 1997.

206. Price D.L. Amyotrophic lateral sclerosis and Alzheimer disease. Lessons from model systems / D.L. Price, P.C. Wong, D.R. Borchelt, C.A. Pardo, et al. // Rev Neurol (Paris). - 1997. -V.153, №8-9. - P.484-95.

207. Prockop D.J. Isolation and characterization of rapidly self-renewing stem cells from cultures of human marrow stromal cells / D.J. Prockop, I. Sekiya, D.C. Colter // Cytotherapy. - 2001. - V.3, №5. - P.393-6.

208. Qu B. Gene vaccination to bias the immune response to amyloid-beta peptide as therapy for Alzheimer disease / B. Qu, R.N. Rosenberg, L. Li, P.J. Boyer, S.A. Johnston // Arch Neurol. - 2004. - V.61, №12. - P. 1859-64.

209. Ralph G.S. Gene therapy for neurodegenerative and ocular diseases using lentiviral vectors / G.S. Ralph, K. Binley, L.F. Wong, M. Azzouz, N.D. Mazarakis //ClinSci (Lond). -2006. - V.110, №1. -P.37-46.

210. Ralph G.S. Silencing mutant SOD1 using RNAi protects against neurodegeneration and extends survival in an ALS model / G.S. Ralph, P.A. Radcliffe, D.M. Day, J.M. Carthy, et al. // Nat Med. - 2005. - V.ll, №4. - P.429-

33.

211. Ramon-Cueto A. Long-distance axonal regeneration in the transected adult rat spinal cord is promoted by olfactory ensheathing glia transplants / A. Ramon-Cueto, G.W. Plant, J. Avila, M.B. Bunge // J Neurosci. - 1998. - V.18, №10. -P.3803-15.

212. Raoul C. Lentiviral-mediated silencing of SOD1 through RNA interference retards disease onset and progression in a mouse model of ALS / C. Raoul, T. Abbas-Terki, J.C. Bensadoun, S. Guillot, et al. // Nat Med. - 2005. - V.ll, №4. -P.423-8.

213. Reddy N.P. Isolation of stem cells from human umbilical cord blood / N.P. Reddy, M.C. Vemuri, R. Pallu // Methods Mol Biol. - 2007. - V.407. - P. 149-63.

214. Revest J.M. Fibroblast growth factor 9 secretion is mediated by a non-cleaved amino-terminal signal sequence / J.M. Revest, L. DeMoerlooze, C. Dickson // J Biol Chem. - 2000. - V.ll5, №11. - P.8083-90.

215. Rizvanov A.A. RNA interference and amyotrophic lateral sclerosis / A.A. Rizvanov, S. Gulluoglu, M.E. Yalvac, A. Palotas, R.R. Islamov // Curr Drug Metab. -2011. -V.12, №7. - P.679-83.

216. Rizvanov A.A. Human umbilical cord blood cells transfected with VEGF and L(1)CAM do not differentiate into neurons but transform into vascular endothelial cells and secrete neuro-trophic factors to support neuro-genesis-a novel approach in stem cell therapy / A.A. Rizvanov, A.P. Kiyasov, I.M. Gaziziov, T.S. Yilmaz, et al. // Neurochem Int. - 2008. - V.53, №6-8. - P.389-94.

217. Robinson C.J. The splice variants of vascular endothelial growth factor (VEGF) and their receptors / C.J. Robinson, S.E. Stringer // J Cell Sci. - 2001. -V.114. - P.853-65.

218. Rocha V. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia / V. Rocha, J. Cornish, E.L. Sievers, A. Filipovich et al. // Blood. - 2001. -V.97, №10. - P.2962-71.

219. Rophael J.A. Angiogenic growth factor synergism in a murine tissue engineering model of angiogenesis and adipogenesis / J.A. Rophael, R.O. Craft, J.A. Palmer, A.J. Hussey, et al. // Am J Pathol. - 2007. - V. 171, №6. - P.2048-57.

220. Rosen D.R. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis / D.R. Rosen // Nature. - 1993. - V.364, №6435. - P.362.

221. Rossi R. Functional characterization of the T4 DNA ligase: a new insight into the mechanism of action / R. Rossi, A. Montecucco, G. Ciarrocchi, G. Biamonti // Nucleic Acids Res. - 1997. - V.25, №11. - P.2106-13.

222. Rowland L.P. Amyotrophic lateral sclerosis / L.P. Rowland, N.A. Shneider // N Engl J Med. - 2001. - V.344, №22. - P.1688-700.

223. Ryan M.D. Foot-and-mouth disease virus 2A oligopeptide mediated cleavage of an artificial polyprotein / M.D. Ryan, J. Drew // EMBO J. - 1994. -V.13,№4. -P.928-33.

224. Saito Y. Transgenic small interfering RNA halts amyotrophic lateral sclerosis in a mouse model / Y. Saito, T. Yokota, T. Mitani, K. Ito, et al. // J Biol Chem. - 2005. - V.280, №52. - P.42826-30.

225. Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual / J. Sambrook, D.W. Russell // Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.

226. Sasaki M. BDNF-hypersecreting human mesenchymal stem cells promote functional recovery, axonal sprouting, and protection of corticospinal neurons after spinal cord injury / M. Sasaki, C. Radtke, A.M. Tan, P. Zhao, et al. // J Neurosci. -2009. - V.29, №47. - P. 14932-41.

227. Schagen F.H. Immune responses against adenoviral vectors and their transgene products: a review of strategies for evasion / F.H. Schagen, M. Ossevoort, R.E. Toes, R.C. Hoeben // Crit Rev Oncol Hematol. - 2004. - V.50, №1. - P.51-70.

228. Schwarz E.J. Multipotential marrow stromal cells transduced to produce L-DOPA: engraftment in a rat model of Parkinson disease / E.J. Schwarz, G.M. Alexander, D.J. Prockop, S.A. Azizi // Hum Gene Ther. - 1999. - V.10, №15. -P.2539-49.

229. Segerstrom L. The anti-VEGF antibody bevacizumab potently reduces the growth rate of high-risk neuroblastoma xenografts / L. Segerstrom, D. Fuchs, U. Backman, K. Holmquist, et al. // Pediatr Res. - 2006. - V.60, №5. - P.576-81.

230. Shih S.C. Regulation of human vascular endothelial growth factor mRNA stability in hypoxia by heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L / S.C. Shih, K.P. Claffey // J Biol Chem. - 1999. - V. 274, №3. - P. 1359-65!

231. Shin J.Y. Low molecular weight polyethylenimine for efficient transfection of human hematopoietic and umbilical cord blood-derived CD34+ cells / J.Y. Shin, D. Suh, J.M. Kim, H.G. Choi, et al. // Biochim Biophys Acta. - 2005. - V.1725, №3. - P.377-84.

232. Smadja D.M. Endothelial progenitor cells: characterization, in vitro expansion, and prospects for autologous cell therapy / Smadja D.M., Cornet A.,

Emmerich J., Aiach M., Gaussem P. // Cell Biol Toxicol. - 2007. - V.23, №4. -P.223-39.

233. Smith R. A. Antisense oligonucleotide therapy for neurodegenerative disease / R.A. Smith, T.M. Miller, K. Yamanaka, B.P. Monia, et al. // J Clin Invest. -2006. - V. 116, №8. - P.2290-6.

234. Solves P.Volume reduction in routine cord blood banking / P. Solves, V. Mirabet, R. Roig // Curr Stem Cell Res Ther. - 2010. - V.5, №4. - P.362-6.

235. Song Y.K. Characterization of cationic liposome-mediated gene transfer in vivo by intravenous administration / Y.K. Song, F. Liu, S. Chu, D. Liu // Hum Gene Ther. - 1997. - V.8, №13. - P. 1585-94.

236. Takahashi T. The 230 Kfla mature form of KDR/Flk-1 (VEGF receptor-2) activates the PLC-gamma pathway and partially induces mitotic signals in NIH3T3 fibroblasts / T. Takahashi, M. Shibuya // Oncogene. - 1997. - V.14, №17. -P.2079-89.

237. Tchantchou F. EGb 761 enhances adult hippocampal neurogenesis and phosphorylation of CREB in transgenic mouse model of Alzheimer's disease / F. Tchantchou, Y. Xu, Y. Wu, Y. Christen, Y. Luo // FASEB J. - 2007. - V.21, №10. - P.2400-8.

238. Teschendorf C. Comparison of the EF-1 alpha and the CMV promoter for engineering stable tumor cell lines using recombinant adeno-associated virus / C. Teschendorf, K.H. Warrington Jr., D.W. Siemann, N. Muzyczka // Anticancer Res. -2002. -V.22.-P.3325-30.

239. Tischer E. The human gene for vascular endothelial growth factor. Multiple protein forms are encoded through alternative exon splicing / E. Tischer, R. Mitchell, T. Hartman, M. Silva, et al. // J Biol Chem. - 1991. - V.266, №18. -P. 11947-54.

240. Tros de Ilarduya C. Gene delivery by lipoplexes and polyplexes / C. Tros de Ilarduya, Y. Sun, N. Duzgunes // Eur J Pharm Sci. - 2010. - V.40, №3. - P. 15970.

241. Turner N. Fibroblast growth factor signalling: from development to cancer / N. Turner, R. Grose // Nat Rev Cancer. - 2010. - V. 10, №2. - P. 116-29.

242. Valencia P. Splicing promotes rapid and efficient mRNA export in mammalian cells / P. Valencia, A.P. Dias, R. Reed // Proc Natl Acad Sci USA. -2008. - V.105, №9. - P.3386-91.

243. Vaziri H. Evidence for a mitotic clock in human hematopoietic stem cells: loss of telomeric DNA with age / H. Vaziri, W. Dragowska, R.C. Allsopp, T.E. Thomas, et al. // Proc Natl Acad Sci USA. - 1994. - V.91, №21. - P.9857-60.

244. Vergano-Vera E. Fibroblast growth factor-2 increases the expression of neurogenic genes and promotes the migration and differentiation of neurons derived from transplanted neural stem/progenitor cells / E. Vergano-Vera, H.R. Mendez-Gomez, A. Hurtado-Chong, J.C. Cigudosa, C. Vicario-Abejon // Neuroscience. - 2009. - V. 162, №1. - P.39-54.

245. Vincenti V. Assignment of the vascular endothelial growth factor gene to human chromosome 6p21.3 / V. Vincenti, C. Cassano, M. Rocchi, G. Persico // Circulation. - 1996. - V.93, №8. - P. 1493-5.

246. Voermans C. Increased migration of cord blood-derived CD34+ cells, as compared to bone marrow and mobilized peripheral blood CD34+ cells across uncoated or fibronectin-coated filters / C. Voermans, W.R. Gerritsen, A.E. von Borne, C.E. van der Schoot, // Exp Hematol. - 1999. - V.27, №12. - P. 1806-14.

247. von Levetzow G. Nucleofection, an efficient nonviral method to transfer genes into human hematopoietic stem and progenitor cells / G. von Levetzow, J. Spanholtz, J. Beckmann, J. Fischer, et al. // Stem Cells Dev. - 2006. - V. 15, №2. -P.278-85.

248. Vroemen M. Adult neural progenitor cell grafts survive after acute spinal cord injuiy and integrate along axonal pathways / M. Vroemen, L. Aigner, J. Winkler, N. Weidner // Eur J Neurosci. - 2003. - V. 18, №4. - P.743-51.

249. Wagner J.E. Successful transplantation of HLA-matched and HLA-mismatched umbilical cord blood from unrelated donors: analysis of engraftment

and acute graft-versus-host disease / J.E. Wagner, J. Rosenthal, R. Sweetman, X.O. Shu, et al. // Blood. - 1996. - V.88, №3. - P.795-802.

250. Wahlfors J. Green fluorescent protein (GFP) fusion constructs in gene therapy research / J. Wahlfors, S. Loimas, T. Pasanen, T. Hakkarainen // Histochem Cell Biol. - 2001. - V. 115, №1. - P.59-65.

251. Watanabe K. Protection against autoimmune myocarditis by gene transfer of interleukin-10 by electroporation / K. Watanabe, M. Nakazawa, K. Fuse, H. Hanawa, et al. // Circulation. - 2001. - V. 104, №10. - P. 1098-100.

252. Watts D. Automated fluorescent DNA sequencing on the ABI PRISM 310 Genetic Analyzer / D. Watts, J.R. MacBeath // Methods Mol Biol. - 2001. - V. 167 -P. 153-70.

253. Weydt P. Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS / P. Weydt, S.Y. Hong, M. Kliot, T. Moller // Neuroreport. - 2003.

- V.14, №7. - P. 1051-4.

254. Williams P.D. Plasmid-mediated gene therapy for cardiovascular disease / P.D. Williams, P.A. Kingston // Cardiovasc Res. - 2011. - V.91, №4. - P.565-76.

255. Wolff J. A. Direct gene transfer into mouse muscle in vivo / J.A. Wolff, R.W. Malone, P. Williams, W. Chong, et al. // Science. - 1990. - V.247. - P. 1465-8.

256. Wong P.C. An adverse property of a familial ALS-linked SOD1 mutation causes motor neuron disease characterized by vacuolar degeneration of mitochondria / P.C. Wong, C.A. Pardo, D.R. Borchelt, M.K. Lee, et al. // Neuron.

- 1995. - V. 14, №6. - P. 1105-16.

257. Wu M.H. Efficient expression of foreign genes in human CD34(+) hematopoietic precursor cells using electroporation / M.H. Wu, D.N. Liebowitz, S.L. Smith, S.F. Williams, M.E. Dolan // Gene Ther. - 2001. - Y.8, №5. - P.384-90.

258. Wu M.H. High efficiency electroporation of human umbilical cord blood CD34+ hematopoietic precursor cells / M.H. Wu, S.L. Smith, M.E. Dolan // Stem Cells. - 2001. - V.19, №6. - P.492-9.

259. Xenariou S. Low-frequency ultrasound increases non-viral gene transfer to the mouse lung / S. Xenariou, H.D. Liang, U. Griesenbach, J. Zhu, et al. // Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). - 2010. - V.42, №1. - P.45-51.

260. Xia H. RNAi suppresses polyglutamine-induced neurodegeneration in a model of spinocerebellar ataxia / H. Xia, Q. Mao, S.L. Eliason, S.Q. Harper, et al. //Nat Med. - 2004. - V. 10, №8. - P.816-20.

261. Xu Y. Increase in bFGF-responsive neural progenitor population following contusion injury of the adult rodent spinal cord / Y. Xu, M. Kitada, M. Yamaguchi, M. Dezawa, C. Ide // Neurosci Lett. - 2006. - V.397, №3. - P. 174-9.

262. Yalvac M.E. Comparison and optimisation of transfection of human dental follicle cells, a novel source of stem cells, with different chemical methods and electro-poration / M.E. Yalvac, M. Ramazanoglu, O.Z. Gumru, F. Sahin, et al. // Neurochem Res. - 2009. - V.34, №7. - P. 1272-7.

263. Yalvac M.E. Isolation and characterization of stem cells derived from human third molar tooth germs of young adults: implications in neo-vascularization, osteo-, adipo- and neurogenesis / M.E. Yalvac, M. Ramazanoglu, A.A. Rizvanov, F. Sahin, et al. // Pharmacogenomics J. - 2009. - V.10, №2. - P. 105-13.

264. Yamashita Y. In vivo gene transfer into muscle via electro-sonoporation / Y. Yamashita, M. Shimada, K. Tachibana, N. Harimoto, et al. // Hum Gene Ther. -2002. - V. 13, №17. - P.2079-84.

265. Yang W.Z. Safety evaluation of allogeneic umbilical cord blood mononuclear cell therapy for degenerative conditions / W.Z. Yang, Y. Zhang, F. Wu, W.P. Min, et al. // J Transl Med. - 2010 - V.8. - P.75.

266. Yin W. Investigations of the effect of DNA size in transient transfection assay using dual luciferase system / W. Yin, P. Xiang, Q. Li // Anal Biochem. -2005. - V.346, №2. - P.289-94.

267. Yong K. Cord blood progenitor cells have greater transendothelial migratory activity and increased responses to SDF-1 and MIP-3beta compared with mobilized adult progenitor cells / K. Yong, A. Fahey, L. Reeve, C. Nicholls, et al. // Br J Haematol. - 1999. - V.107, №2. - P.441-9.

268. Zacchigna, S. Neurovascular signalling defects in neurode generation / S. Zacchigna, D. Lambrechts, P. Carmeliet // Nat Rev Neurosci. - 2008. - V.9, №3. -P.169-81.

269. Zachary I. Therapeutic angiogenesis for cardiovascular disease: biological context, challenges, prospects /1. Zachary, R.D. Morgan // Heart. - 2011. - V.97, №3. - P.181-9.

270. Zeira E. Femtosecond infrared laser-an efficient and safe in vivo gene delivery system for prolonged expression / E. Zeira, A. Manevitch, A. Khatchatouriants, O. Pappo, et al. // Mol Ther. - 2003. - V.8, №2. - P.342-50.

271. Zetterstrom P. Soluble misfolded sub fractions of mutant superoxide dismutase-ls are enriched in spinal cords throughout life in murine ALS models / P. Zetterstrom, H.G. Stewart, D. Bergemalm, P.A. Jonsson, et al. // Proc Natl Acad Sei USA. - 2007. - V. 104, №35. - P. 14157-62.

272. Zhang S.C. In vitro differentiation of transplantable neural precursors from human embryonic stem cells / S.C. Zhang, M. Wernig, I.D. Duncan, O. Brustle, J.A. Thomson //Nat Biotechnol. - 2001. - V.19, №12. - P. 1129-33.

273. Zhang X. Receptor specificity of the fibroblast growth factor family. The complete mammalian FGF family / X. Zhang, O.A. Ibrahimi, S.K. Olsen, H. Umemori, et al. // J Biol Chem. - 2006. - V.281, №23. - P. 15694-700.

274. Zhong Z. ALS-causing SOD1 mutants generate vascular changes prior to motor neuron degeneration I Z. Zhong, R. Deane, Z. Ali, M. Parisi, et al. // Nat Neurosci. - 2008. - V. 11, №4. - P.420-2.

275. Zuccato C. Loss of huntingtin-mediated BDNF gene transcription in Huntington's disease / C. Zuccato, A. Ciammola, D. Rigamonti, B.R. Leavitt, et al. // Science. - 2001. - Y.293, №5529. - P.493-8.

276. Zuk P.A. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies / P.A. Zuk, M. Zhu, H. Mizuno, J. Huang et al. // Tissue Eng. - 2001. - V.7, №2. - P.211-28.