Особенности экспрессии изоформ мРНК лейкемия-ингибирующего фактора и фактора стволовых клеток в фетальных тканях и мононуклеарных клетках человека на разных стадиях онтогенеза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Садовская, Вера Анатольевна

• Садовская, Вера Анатольевна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Садовская, Вера Анатольевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 ЦИТОКИНОВАЯ СЕТЬ - УНИВЕРСАЛЬНЫЙ

МЕХАНИЗМ РЕГУЛЯТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ МЕЖДУ КЛЕТКАМИ

1.2 АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ СПЛАЙСИНГ - СПОСОБ

ФОРМИРОВАНИЯ ПОЛИМОРФИЗМА ЦИТОКИНОВОЙ СЕТИ

1.2.1. ТИПЫ АЛЬТЕРНАТИВНОГО СПЛАЙСИНГА пре-мРНК

1.2.2. БИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АЛЬТЕРНАТИВНОГО

СПЛАЙСИНГА ЦИТОКИНОВ И ИХ РЕЦЕПТОРОВ

1.3 ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЙКЕМИЯ-ИНГИБИРУЮЩЕГО

ФАКТОРА

1.3.1. Роль LIF в регуляции иммунных реакций

1.3.2. Ген lif и его экспрессия

1.3.3. Характеристика белка LIF

1.3.4. Рецептор LIFR и пути сигнальной трансдукции

1.3.5. Механизм альтернативного сплайсинга мРНК LIF

1.3.6. Характеристика изоформ мРНК LIF

1.4. ХАРАКТЕРИСТИКА ФАКТОРА СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

1.4.1. Характеристика гена scf

1.4.2. Рецептор c-kit и пути трансдукции сигнала

1.4.3. Биологическая роль SCF

1.4.4. Механизм альтернативного сплайсинга мРНК SCF

1.4.5. Роль альтернативного сплайсинга мРНК SCF в регуляции развития организма

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Экспрессия изоформ мРНК LIF в различных фетальных тканях человека

3.2. Экспрессия изоформ мРНК LIF в мононуклеарных клетках человека на разных этапах развития

3.3. Экспрессия изоформ мРНК SCF в различных фетальных тканях человека

3.4. Экспрессия изоформ мРНК SCF в мононуклеарных клетках

человека на разных этапах развития

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ЛПС - липополисахарид

МНК - мононуклеарные клетки

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

ОТ - обратная транскрипция

ПК - периферическая кровь

П.н. - пары нуклеотидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

Ь.р. - пары нуклеотидов

IL - интерлейкин

LIF - лейкемия-ингибирующий фактор

rhIL - рекомбинантный интерлейкин человека

SCF - фактор стволовых клеток

TGF - трансформирующий ростовой фактор

TNF - фактор некроза опухоли

TREC - кольцевая ДНК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности экспрессии изоформ мРНК лейкемия-ингибирующего фактора и фактора стволовых клеток в фетальных тканях и мононуклеарных клетках человека на разных стадиях онтогенеза»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Одним из важных направлений исследований молекулярной иммунологии является изучение структуры и функционирования систем регуляции иммунопоэза и иммунного ответа, поскольку в первую очередь они являются одной из фундаментальных основ функционирования организма, а во вторую (не менее важную) интересны с практической точки зрения как близкий к естественному способ системного и местного воздействия на организм при проведении терапии.

Одной из важнейших систем регуляции является цитокиновая сеть. Цитокиновая сеть представляет собой универсальную, полиморфную, регуляторную сеть медиаторов, предназначенных для контроля процессов пролиферации, дифференцировки, апоптоза и функциональной активности клеточных элементов в кроветворной, иммунной и в других гомеостатических системах организма [Oppenheim, 2001; Сенников С.В., 2002]. На сегодняшний день к системе цитокинов относят интерлейкины, цитокины семейства TNF, интерфероны, факторы роста и ангиогенеза, хемокины и ряд других регуляторных молекул, а так же их рецепторы. Цитокиновая сеть охватывает большинство типов клеток в организме, контролируя их пролиферацию, дифференцировку и эффекторные функции, участвует в развитии самого

организма с самых начальных этапов. Распространенность цитокиновой

регуляции обусловлена экспрессией рецепторов на большинстве типов клеток в организме, что позволяет цитокинам осуществлять свои эффекты как на местном, так и на системном уровне [Кетлинский, 1992; Oppenheim, 2001].

Одним из основных механизмов формирования полиморфизма

цитокиновой сети является альтернативный сплайсинг. Альтернативным

сплайсингом мРНК называется регулируемый процесс

дифференцированного включения или выключения регионов пре-мРНК,

являющийся важным источником разнообразия белков у большинства

эукариот. Альтернативный сплайсинг регулируется как временной или

тканеспецифический процесс, в результате которого синтезируется

широкий ряд разнообразных изоформ в различных тканях или стадиях

развития [Hanke, 1999; Mironov, 1999]. Известно, что более 90% генов

человека подвергается альтернативному сплайсингу [Boue, 2003; Eric,

2008]. Большинство генов иммунной системы вовлекается в

альтернативный сплайсинг. Например, гены HLA, TCRÇ, цитокинов и их

рецепторов [Evsyukova, 2010]. Некоторые аутоиммунные заболевания

являются результатом мутаций цис- и транс-регуляторных элементов

альтернативного сплайсинга. Например, было показано, что аллельный

полиморфизм гена а-цепи рецептора к IL-7 (IL-7R) ассоциирован с

предрасположенностью к заболеванию рассеянным склерозом, при этом

эта замена переключает альтернативный сплайсинг гена субъединицы

рецептора. Такие аутоиммунные заболевания, как неспецифический

язвенный колит и системная красная волчанка, связаны с нарушениями альтернативного сплайсинга мРНК вовлеченных в патогенез белков. Селективное повышение экспрессии растворимой изоформы субъединицы рецептора к 1Ь-6 (1Ь-6Я) коррелирует с повышением тяжести течения таких заболеваний как ревматоидный артрит, астма, системная склеродермия и множественная миелома. Высокое содержание растворимой изоформы рецептора к 1Ь-5 (1Ь-5Я) регистрировалось у пациентов с бронхиальной астмой [Еузуикоуа, 2010]. В настоящее время разрабатываются подходы специфической терапии, направленной на коррекцию процессинга мРНК при различных заболеваниях с использованием олигонуклеотидов, РНК-интерференции и других молекулярно-генетических методов. Поэтому многие современные исследования направлены на выявление особенностей альтернативного сплайсинга различных медиаторов иммунного ответа.

Несомненно, является важным так же изучение особенностей альтернативного сплайсинга цитокинов, участвующих в развитии иммунной системы и органогенеза на ранних этапах развития, чтобы расширить представления о значении, распространении альтернативного сплайсинга в этих процессах, найти возможности поиска ранних маркеров нарушений развития.

Многие цитокины вовлечены в процессы пролиферации

иммунокомпетентных клеток в тканях, органогенез, поддержание

плюрипотентности стволовых гемопоэтических клеток. Они

синтезируются различными видами клеток, составляющих микроокружение стволовых клеток, а так же других активнорастущих клеток (макрофагами, эпителиальными клетками, моноцитами, дендритными клетками). Одними из основных факторов, участвующих в регуляции раннего иммунопоэза, являются лейкемия-ингибирующий фактор (LIF) и фактор стволовых клеток (SCF). Оба эти фактора играют важнейшую роль в пролиферации и созревании иммунокомпетентных клеток в печени, тимусе, костном мозге, а так же в процессах органогенеза. Эти факторы являются ключевыми в регуляции раннего иммунопоэза во внутриутробном периоде развития [Broudy, 1997; Metcalf, 2003].

LIF является секретируемым гликопротеином, принадлежащим

цитокинам семейства IL-6 (CNTF, oncostatin М, IL-11, cardiotropic 1),

проявляющим активность в разнообразных клеточных системах in vitro

и in vivo. Многие члены этого семейства, включая LIF, действуют как

модуляторы гемопоэза и иммунного ответа [Auerhhammer and Melmed,

2000]. В различных исследованиях была показана роль LIF в

пролиферации тимоцитов, в регуляции количества миелоидных

предшественников в костном мозге, активации гипоталамо-

гипофизарно-адреналовой системы, при воспалении, стрессе и травме, в

поддержании функций моторных нейронов [Escary, 1993; Patterson,

1994]. При изучении процессов регуляции дифференцировки CD4+

клеток в разные классы Т-хелперов было показано, что LIF стимулирует

образование регуляторных Т-клеток и подавляет индуцированную IL-6 продукцию IL-17 в Тх17, что является основой применения его в терапии аутоиммунных заболеваний [Gao, 2009; Metcalfe, 2011].

Показано, что в тимусе уровень мРНК LIF, других цитокинов семейства IL-6 и SCF повышается с возрастом и коррелирует со снижением количества TREC в клетках тимуса. Предположительно, LIF и SCF участвуют в регуляции процессов инволюции тимуса [Sempowski, 2000].

В дополнении к этому LIF играет важную роль в образовании децидуальной ткани в эндометрии и имплантации, используется при лечении бесплодия [Dimitriadis, 2007].

При изучении экспрессии LIF у млекопитающих в различных тканях in vitro и in vivo было показано, что в результате транскрипции гена lif могут получаться три продукта. Эти транскрипты содержат альтернативные первые экзоны, соединенные с идентичными вторым и третьим экзонами [Rathjen, 1990].

Впервые существование альтернативных транскриптов обнаружили у мышей. При исследовании транскриптов lif в клеточных линиях эмбриональной карциномы было показано наличие изоформ и у человека. Компартментализация этих белков достоверно коррелирует со сравнительно высоким, средним и незначительным уровнем внеклеточной активности LIF при экспрессии hLIF-D, hLIF-M и hLIF-T

соответственно [Haines, 2000]. Транскрипты LIF-M и LIF-T у человека и

мыши имеют значительную гомологию. Сравнение LIF-M и LIF-T

человека и мыши с аналогичными других млекопитающих выявляют

консервативный характер последовательности этих транскриптов. Это

свидетельствует в пользу того, что образование таких изоформ имеет

собственное биологическое значение, сложившееся в результате

эволюционного процесса [Haines, 1999; Voyle, 1999]. Основные

исследования экспрессии изоформ мРНК LIF проводились на мышах и

клеточных линиях. Анализ транскриптов hLIF в культурах клеток

человека выявил значительную вариабельность в профилях экспрессии

LIF. В некоторых клеточных линиях, например 293Т (клетки

эмбриональной почки), hLIF-M был преобладающим транскриптом,

уровни которого значительно превышали количество hLIF-D и hLIF-T. В

других линиях мРНК LIF-M вообще не определялась (HeLa, клетки

цервикальной карциномы) или был сравнимым с hLIF-D (GCT 27/С4,

клетки эмбриональной карциномы). LIF-T экспрессировался в

различных, как правило низких, количествах в разных клетках 293Т,

GCT 27/С4. Другие линии (HeLa) не экспрессировали эту изоформу

вообще [Hisaka, 2004]. У человека и других млекопитающих характер

экспрессии изоформ может отличаться от такового у мышей в связи с

низкой гомологией в участках генов, содержащих регуляторные

последовательности для сплайсинга мРНК. Исследований экспрессии

сплайс-вариантов мРНК LIF у человека в период внутриутробного

развития ранее не проводилось. Такие данные могли бы прояснить спектр альтернативного сплайсинга LIF человека в этот период, его особенности в период раннего иммунопоэза в таких органах, как тимус, селезенка и печень.

Другим важным фактором роста является фактор стволовых клеток (stem cell factor, SCF). Анализ экспрессии гена scf в развивающихся эмбрионах показал, что этот цитокин играет важную и разнообразную роль в онтогенезе иммунопоэза и кроветворения. SCF так же экспрессируется в компартментах развития стволовых клеток и участвует в регуляции развития, пролиферации и миграции клеток иммунопоэза, меланоцитов и половых клеток [Sette, 2000; Toksoz, 1992]. Экспрессия SCF наблюдается в стромальных и добавочных клетках из микроокружения гематопоэтических клеток, включая клетки эндотелия, моноциты, фибробласты.

Вместе с LIF SCF является необходимым фактором для раннего развития Т-лимфоцитов [Liu, 2012]. Этот фактор вместе с IL-7 стимулирует пролиферацию CD4"CD8"CD3" тимоцитов [Broudy, 1997]. Особую роль играет SCF в В-лимфопоэзе. Он участвует в регуляции ранних этапов развития В-клеток (продукция про-В-клеток и пре-В-клеток), усиливая ответ на IL-7, но не оказывает влияния на дальнейшее созревание В-лимфоцитов. Взаимодействие между SCF и рецептором с-kit является важным так же для нормального функционирования

иммунной системы желудочно-кишечного тракта [Broudy, 1997]. Известна способность SCF усиливать пролиферацию незрелых дендритных клеток in vitro. Фактор стволовых клеток в совокупности с GM-CSF и TNFa способен в сотни раз увеличивать количество дендритных клеток, образованных из CD34+ клеток костного мозга человека. В присутствии SCF и IL-2 из CD34+ клеток образуются НК-клетки. SCF усиливает пролиферативный ответ НК-клеток на IL-2 in vitro, но не влияет на цитотоксичность клеток этой популяции [Anderson, 1990; Broudy, 1997; Takatsu, 1997; Ashman, 1999 ]. Проводились клинические исследования рекомбинантного SCF при раке легкого и раке молочной железы для повышения количества С034+-клеток в костном мозге при проведении высокодозной химиотерапии [Glaspy, 1996].

Белок SCF человека синтезируется в двух формах - мембранно-ассоциированной и растворимой. Эти изоформы образуются из двух сплайсированных мРНК, в одной из которых отсутствует шестой экзон.

В большинстве исследований особенности экспрессии изоформ

мРНК SCF человека изучались на клеточных линиях и в тканях во

взрослом периоде в норме и при различных патологиях [Huang, 1992;

Marziali, 1993]. Известно, что у взрослых растворимая изоформа

экспрессируется преимущественно фибробластами, в тканях мозга,

тимуса, селезенки и в красном костном мозге. Тогда как транскрипт

мембранной изоформы чаще встречается в плаценте, тканях мозжечка и

семенниках [Huang, 1992]. В некоторых исследованиях показаны различия в функциональных особенностях изоформ [Miyazawa, 1995; Mauduit, 1999; Hütt, 2006]. Остаются неясными особенности синтеза разных изоформ мРНК SCF и их значение на этапе внутриутробного развития человека.

Представляется актуальным изучить особенности экспрессии сплайс-изоформ этих двух ростовых факторов в тканях человека, участвующих в формировании гемо- и иммунопоэза во внутриутробном периоде, и определить спектр и характер экспрессии изоформ в мононуклеарных клетках крови в течение онтогенеза.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель работы: Изучить экспрессию сплайс-вариантов мРНК лейкемия-ингибирующего фактора и фактора стволовых клеток в фетальных тканях человека и в мононуклеарных клетках периферической крови на разных этапах онтогенетического развития.

Задачи исследования:

1. Определить наличие сплайс-вариантов мРНК лейкемия-ингибирующего фактора в образцах фетальных тканей человека.

2. Выявить наличие и спектр экспрессии сплайс-вариантов мРНК лейкемия-ингибирующего фактора в мононуклеарных клетках периферической крови человека в пренатальный, неонатальный и постнатальный этапы развития.

3. Исследовать экспрессию сплайс-вариантов мРНК фактора стволовых клеток в различных фетальных тканях человека.

4. Изучить особенности экспрессии сплайс-вариантов мРНК фактора стволовых клеток в мононуклеарных клетках периферической крови человека на разных этапах онтогенетического развития: пренатальном, неонатальном и во взрослом периоде.

Научная новизна работы

Впервые изучен тканеспецифический характер экспрессии изоформ мРНК LIF в различных фетальных тканях человека. В тканях, участвующих в формировании, гемо- и иммунопоэза (печень, селезенка и тимус), выявлены достоверные различия в экспрессии изоформ. Так, в печени, являющейся центральным органом гемопоэза во внутриутробном периоде, обнаружен высокий уровень встречаемости экспрессии обоих сплайс-вариантов мРНК LIF, в селезенке определялся промежуточный уровень встречаемости экспрессии и встречалась только мембранная изоформа мРНК LIF-M, в тимусе уровень встречаемости экспрессии LIF был низким и определялась только растворимая форма мРНК LIF-D.

В работе впервые охарактеризован спектр экспрессии изоформ мРНК LIF в мононуклеарных клетках крови человека в разные периоды онтогенетического развития. Показано достоверное

снижение частоты встречаемости экспрессии изоформ мРНК ЬШ в клетках новорожденных по сравнению с клетками плодов 22-х недель гестации. У взрослых доноров экспрессии не выявлено. Впервые показано широкое распространение экспрессии изоформ мРНК ВСБ в различных типах тканей на этапе внутриутробного развития человека. Это дополняет имеющиеся данные об экспрессии изоформ мРНК 8СР в тканях во взрослом периоде развития. Впервые продемонстрирована стадиеспецифичность для экспрессии изоформ мРНК ЭСИ в мононуклеарных клетках периферической крови человека на разных этапах развития. Уровень встречаемости экспрессии изоформ мРНК БСР в этих клетках снижается от пренатального периода к неонатальному и исчезает во взрослом периоде развития.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе продемонстрировано, что экспрессия генов цитокинов ЫБ и БОБ в фетальных тканях человека происходит с участием альтернативного сплайсинга. При этом наблюдается тканеспецифический характер экспрессии. Полученные результаты изучения экспрессии генов цитокинов позволяют расширить представления о полиморфизме цитокиновой сети, демонстрируя широкое распространение альтернативного сплайсинга ЫБ и БСР в различных компартментах экспрессии этих цитокинов.

Предоставленные в работе факты экспрессии генов ЬШ и 8СР человека в виде нескольких изоформ дополняют представления об особенностях альтернативного сплайсинга этих цитокинов в период внутриутробного развития и в течение онтогенеза. Данные о тканеспецифическом и стадиеспецифическом характере экспрессии этих ростовых факторов у человека позволяют дифференцировать подходы к применению их рекомбинантных форм в терапии, учитывая характер альтернативного сплайсинга мРНК.

Положения, выносимые на защиту:

1. Экспрессия генов цитокинов И/ и эс/ в фетальных тканях и мононуклеарных клетках периферической крови человека происходит с участием альтернативного сплайсинга.

2. Экспрессия изоформ мРНК цитокинов ЫР и БСР человека имеет тканеспецифический и стадиеспецифический характер в онтогенезе.

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации доложены и обсуждены на : 1)

Межрегиональной научно-практической конференции «Дни

иммунологии в Сибири» (Омск, 2007 г.); 2) Всероссийской научной

конференции "Объединенный Иммунологический Форум" (Санкт-

Петербург, 2008 г.); по теме диссертации опубликовано 4 работы, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для кандидатских диссертаций.

Самостоятельность выполненной работы

Результаты, представленные в работе, получены лично автором на базе лаборатории молекулярной иммунологии НИИ КИ СО РАМН.

Автор выражает благодарность д.м.н. Селедцовой Г.В. и сотрудникам лаборатории клеточных биотехнологий ИКИ СО РАМН за предоставленные образцы фетальных тканей человека.

Так же автор выражает благодарность проф. д.м.н. Останину A.A. (лаб. клеточной иммунотерапии) за предоставленные образцы пуповинной крови.

Большую признательность автор выражает научному руководителю работы профессору, д.м.н. C.B. Сенникову за подробное конструктивное обсуждение полученных результатов, а также всем сотрудникам лаборатории молекулярной иммунологии за благожелательное отношение в ходе выполнения работы.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Садовская, Вера Анатольевна

выводы

1. Показано, что экспрессия гена lif в фетальных тканях человека проходит с участием альтернативного сплайсинга с образованием изоформ мРНК LIF-D и LIF-M и имеет качественные отличия в разных тканях, что свидетельствует о тканеспецифическом характере альтернативного сплайсинга этого гена.

2. В мононуклеарных клетках периферической крови человека частота встречаемости экспрессии изоформ мРНК LIF снижается в течение онтогенетического развития, что свидетельствует о снижении экспрессии мРНК LIF в этих клетках в онтогенезе.

3. Продемонстрировано, что экспрессия обеих изоформ мРНК SCF широко распространена во многих типах фетальных тканей человека и имеет разные частоты встречаемости в зависимости от типа тканей, что указывает на гетерогенность клеток-продуцентов и тканеспецифический характер экспрессии этого цитокина.

4. При изучении экспрессии изоформ мРНК SCF в мононуклеарных клетках периферической крови на разных этапах онтогенеза было выявлено достоверное снижение частоты встречаемости мРРГК как мембраносвязанной, так и растворимой форм SCF, что свидетельствует о снижении активности экспрессии этого фактора в клетках-продуцентах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Обобщая полученные результаты можно заключить, что экспрессия ростовых факторов LIF и SCF в фетальных тканях человека происходит с участием альтернативного сплайсинга и имеет тканеспецифический характер.

Экспрессия LIF наиболее часто встречается в печени, являющейся основным органом гемо- и иммунопоэза в пренатальный период развития организма человека. С такой же частотой экспрессия изоформ мРНК LIF наблюдалась в тканях головного мозга и зачатков зубов, где, вероятно, изоформы мРНК LIF выполняют важные регуляторные функции в органогенезе. При этом мы предполагаем, что растворимая и мембранная формы имеют различное биологическое значение в этих процессах. В таких тканях, как селезенка и тимус, уровень экспрессии LIF имел промежуточные и низкие значения соответственно. Это может быть связано как с частичным участием LIF в регуляции раннего иммунопоэза, так и с низкой активностью этих процессов на изучаемом сроке гестации.

По результатам изучения экспрессии изоформ мРНК LIF в клетках периферической крови можно заключить, что частота встречаемости экспрессии изоформ в этих клетках снижается в течение онтогенетического развития. По данным литературы известно, что в некоторых тканях во взрослом периоде изоформы мРНК LIF присутствуют [Metcalf, 2003; Abir, 2004]. Это свидетельствует о том, что продукция ЫБ в постнатальном периоде в основном осуществляется в тканях. Таким образом, можно предположить, что наличие клеток-продуцентов ЬШ в периферической крови обусловлено миграцией этих клеток в ткани во внутриутробном периоде, снижается к моменту рождения и исчезает во взрослом периоде. Так же снижается активность пролиферативных процессов, связанных с органогенезом, что и приводит, вероятно, к уменьшению встречаемости экспрессии ЬШ в клетках крови.

Внутриклеточная изоформа ЬШ-Т определялась только в одном из образцов МНК крови плода. Вероятно, что уровень активности экспрессии внутриклеточной изоформы в разных тканях и клетках зависит от различных стимулирующих факторов со стороны микроокружения. То есть ее экспрессия не является конститутивной, а начинается только в ответ на какие-то сигналы.

В отличие от ЬШ при изучении экспрессии фактора стволовых клеток обе его изоформы мРНК были обнаружены в большинстве изученных образцов тканей. В тканях фетального гемо- и иммунопоэза наиболее часто экспрессия обеих изоформ мРНК 8СР выявлялась в образцах печени. Это соответствует данным о том, что БСР является ключевым регулятором гемопоэза и наиболее интенсивно экспрессируется в печени - центральном органе гемопоэза в изучаемый период. В то же время высокий уровень встречаемости (66,7%) экспрессии ЭСР наблюдается и в тимусе - где, как известно, этот ростовой фактор играет ключевую роль в ранней активации тимоцитов. Известно, что наряду с этим, повышается экспрессия фактора стволовых клеток в тимусе с возрастом при инволюции [8етро\узк1,2000]. В изучаемый период в тимусе преобладает экспрессия растворимой изоформы, что может указывать, что в инволюции тимуса и в активации тимоцитов участвуют разные изоформы цитокина.

В селезенке регистрируется невысокая встречаемость экспрессии (40%) изоформ фактора стволовых клеток в сравнении с печенью и тимусом. Эти данные свидетельствуют, что уже в период гестации 20-22 недель экспрессия этого фактора наблюдается в периферических органах иммунной системы и вероятно активирует процессы раннего иммунопоэза.

Частоты встречаемости экспрессии изоформ мРНК 8СР в надпочечниках и тканях мозга сопоставимы и в некоторых случаях даже превышают таковые для тканей печени и семенников, где 8СР несет одну из ключевых регуляторных функций, что может свидетельствовать о значимой роли 8СБ и в регуляции развития органов нервной и эндокринной систем на ранних этапах онтогенеза. Так как было показано, что экспрессия 8СБ имеет неоднородный характер не только в разных тканях от одного плода, но и от образца к образцу одной ткани, мы можем заключить, что альтернативный сплайсинг транскриптов гена scf имеет гетерогенный характер в разных типах клеток-продуцентов.

Определение обеих изоформ мРНК 8СР в большинстве типов исследованных фетальных тканей может свидетельствовать о гетерогенности клеток, его продуцирующих и их широком распространении в пренатальный период развития.

При изучении экспрессии изоформ мРНК 8СР в клетках периферической крови на разных этапах онтогенеза было выявлено закономерное снижение частоты встречаемости мРРПС как мембраносвязанной, так и растворимой форм 8СР. Наличие изоформ мРНК фактора стволовых клеток в периферической крови в антенатальный и неонатальный периоды и отсутствие их во взрослом периоде объясняется более активными процессами пролиферации и развития во внутриутробный период, а так же переключением органов гемопоэза, миграцией предшественников в костный мозг и преимущественной локализацией клеток-продуцентов во взрослом периоде в тканях. Причем, небольшое преобладание мембранной изоформы в неонатальный период может быть связано с функциональными особенностями мигрирующих клеток, и свидетельствует о различном биологическом значении изоформ. Возможно, преобладание клеток, экспрессирующих эту изоформу, в периферической крови свидетельствует об активной миграции эритроидных предшественников или клеток, регулирующих активность эритропоэза, так как в этот период внутриутробного развития происходит процесс переключения с фетального эритропоэза на неонатальный.

В результате анализа проведенных исследований можно утверждать, что экспрессия сплайс-вариантов мРНК БСР имеет дифференцированный тканеспецифический характер в пределах одного организма и широко распространена во многих типах тканей в пренатальный период развития человека. Частота и спектр экспрессии изоформ мРНК 8СР в мононуклеарных клетках крови указывает на стадиеспецифичность экспрессии этого цитокина и наиболее выражены во внутриутробный период и в периоде новорожденности. Это связано, прежде всего, с тем, что с возрастом основная продукция этого фактора происходит в тканях.

Таким образом, процессы альтернативного сплайсинга изучаемых факторов роста в пренатальный период характеризуются тканеспецифичностью и в целом широким распространением в тканях плодов. Изучение экспрессии в разные периоды показало зависимость наличия клеток-продуцентов изоформ мРНК цитокинов в периферической крови от стадии онтогенеза. Тканеспецифичность экспрессии мРНК этих факторов свидетельствует о разной биологической роли изоформ, вероятно связанной с компартментализацией в клетке и тканях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Садовская, Вера Анатольевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., Воробьев A.A. Эндогенные иммуномодуляторы. С-Пб.: Гиппократ, 1992. - 256 с.

2. Козлов В.А., Сенников C.B., Якушенко Е.В., Хрипко Ю.И., Лопатникова Ю.А., Филиппенко М.Л., Сенникова Н.С., Хрипко О.П. Аллельный полиморфизм промотора гена интерлейкина-18 при хроническом гепатите В. // Эпидемиология и инфекционные болезни, 2009.-N 1.-С. 18-20.

3. Сенников C.B., Силков А.Н., Козлов В.А. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний. // Иммунология. 2002, в.7, №4, стр. 243-250.

4. Силков А.Н., Шкаруба Н.С., Калашникова Т.А., Сизякина Л.П., Шульман Ю.Б., Долгих C.B., Мазуров В.И., Герцог O.A., Сизиков А.Э., Козлов В.А., Сенников C.B. Полиморфизм -857С>Т промотора гена фактора некроза опухоли-альфа и эффективность антицитокиновой терапии у больных ревматоидным артритом. // Медицинская иммунология, 2012.-N 1-2.-С.33-42.

5. Сингер М., Берг П. Гены и геномы . В 2-х т. Пер. с англ. -М.: Мир, 1998. Т. 2. - С. 104-125.

6. Ярилин А.А. Основы иммунологии. -М.: Медицина, 1999. - С. 237-277.

7. Яценко О.П., Силков А.Н., Храпов Е.А., Филиппенко М.Л., Козлов В.А., Сенников С.В. Тканеспецифическая экспрессия сплайс-вариантов мРНК генов IL-4 и IL-6 человека. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 201 l.-N 9.-С.298-301.

8. Abell К., Watson C.J. The Jak/STAT pathway.//Cell Cycle-2005.-V.4(7). P.897-900.

9. Abir R, Fisch B, Jin S, Barnnet M, Freimann S, Van den Hurk R, Feldberg D, Nitke S, Krissi H, Ao A. Immunocytochemical detection and RT-PCR expression of leukaemia inhibitory factor and its receptor in human fetal and adult ovaries. // Mol. Hum. Reprod. -2004. V.10(5). P.313-319.

10. Adachi, S., Ebi, Y., Nishikawa, S., Yamazaki, M., and Kasugai, T. Necessity of extracellular domain of W (C-KIT) receptors for attachment of murine cultured mast cells to fibroblasts // Blood -1992. - V.79. P. 650.

11. Agarwal P., Oldenburg M.C., Czarneski J.E., Morse R.M., Hameed M.R. Comparison study for identifying promoter allelic polymorphism in interleukin 10 and tumor necrosis factor alpha genes // Diagn Mol Pathol. -2000. -V. 9. -P. 158-64.

12. Aghajanova L. Leukemia inhibitory factor and human embryo implantation.// Ann. N.Y. Acad. Sci.-2004.- V.1034. P.176-183.

13. Allan E.H., Hilton D.J., Brown M.A. Osteoblasts display receptors for and response to leukemia inhibitory factor.// J. Cell. Physiol. -1990,- V.145. P.110-119.

14. Allen R.D. Polymorphism of the human TNF-alpha promoterrandom variation or functional diversity? // Mol Immunol. -1999. -V. 36. -P. 1017-27.

15. Alms W.J., Atamas S.P., Yurovsky V.V., White B. Generation of a variant of human interleukin-4 by alternative splicing // Mol Immunol. -1996. -V. 33. -P. 361-70.

16. Amalric F., Bouche G., Bonnet H., Brethenou P., Roman A.M., Trughet I., Quarto N. Fibroblast growth factor-2 (FGF-2) in the nucleus: translocation process and targets.// Biochem. Pharmacol.-1994.-V.47. P. 111—115.

17. Anderson, D. M., Lyman, S. D., Baird, A., Wignall, J. M., Eisenman, J., Rauch, C., March, C. J., Boswell, H. S., Gimpel, S. D., and Cosman, D. Molecular cloning of mast cell growth factor, a hematopoietin that is active in both membrane bound and soluble forms // Cell - 1990. - V.63. P. 235-243.

18. Araria-Goumidi L., Lambert J.C., Mann D.M., Lendon C., FrigardB. Association study of three polymorphisms of TGF-betal gene with Alzheimer's disease // J Neurol Neurosurg Psychiatry. -2002. -V. 73. -P. 62-4.

19. Arzt E., Pereda M.P., Castro C.P., Pagotto U., Renner U., Stalla G.K. Pathophysiological role of the cytokine network in the anterior pituitary gland.// Front Neuroendocrinol.- 1999-V. 20. P.71-95.

20. Atamas S.P. Alternative splice variants of cytokines: making a list // Life Sci. -1997. -V. 61. -P. 1105-12.

21. Auernhammer C.J.,Melmed S. Leukemia inhibitory factor-Neuroimmune modulator of endocrine function.//Endocrine Reviews-2000.-V.21(3). P.313-345.

22. Avraham, H., Vannier, E., Cowley, S., Jiang, S. X., Chi, S., Dinarello, C. A., Zsebo, K. M., and Groopman, J. E. Effects of the stem cell factor, c-kit ligand, on human megakaryocytic cells. Blood -1992. - V. 79. P. 365.

23. Barut B., Chauhan D., Ushiyama H., Anderson K.C. Interleukin-6 functions as an intracellular growth factor in hairy cell leukemia in vitro. //J. Clin. Invest.-1993.-V.92. P.2346-2352.

24. Baumann H., Ziegler S.G., Mosley B., Morella K.K., Pajovic S.,Gearing D.P. Reconstitution of the response to leukemia inhibitory

factor, oncostatin M, and ciliary neurotrophic factor in hepatoma cells.//J. Biol. Chem.-1993.-V.268. P.8414-8417.

25. Bedell, M. A., Copeland, N. G., and Jenkins, N. A. Multiple pathways for Steel regulation suggested by genomic and sequence analysis of the murine Steel gene // Genetics - 1996. V. 142. P. 927.

26. Bellido T, Stahl N, Farruggella TJ, Borba V, Yancopoulos GD, Manolagas SC. Detection of receptors for interleukin-6, interleukin-11, leukemia inhibitory factor, oncostatin M, and ciliary neurotrophic factor in bone marrow stromal/osteoblastic cells. // J. Clin. Invest. -1996.V. 97(2). P. 431-437.

27. Bhatt H., Brunet L.J. and Stewart C.L. Uterine expression of leukemia inhibitory factor coincides with the onset of blastocyst implantation. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA-1991.-V.88. P. 1140811412.

28. Bidwell J., Keen L., Gallagher G., Kimberly R., Huizinga T. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases, supplement 1 // Genes Immun. -2001. -V. 2. -P. 61-70.

29. Bihl M.P., Heinimann K., Rudiger J.J., Eickelberg O., Perruchoud A.P. Identification of a novel IL-6 isoform binding to the endogenous IL-6 receptor // Am J Respir Cell Mol Biol. -2002. -V. 27. -P. 48-56.

30. Block K. L., Shou Y., Poncz M. An Ets/Spl interaction in the 59-flanking region of the megakaryocyte-specific allb gene appears to stabilize Spl binding and is essential for expression of this TATA-less gene.// Blood-1996.-V.88. P.2071.

31.Brannan, C. I., Lyman, S. D., Williams, D. E., Eisenman, J., Anderson, D. M., Cosman, D., Bedell, M. A., Jenkins, N. A., and Copeland, N. GSteel-dickie mutation encodes a C-KIT ligand lacking transmembrane and cytoplasmic domains // Proc. Natl Acad. Sci. USA - 1991. V. 88. P. 4671.

32. Broudy V.C. Stem cell factor and hematopoiesis // Blood. - 1997. -V. 90. No. 4. P. 1345-1364.

33. Broxmeyer, H. E., Hangoc, G., Cooper, S., Anderson, D., Cosman, D., Lyman, S. D., and Williams, D. E. Influence of murine mast cell growth factor (C-KIT ligand) on colony formation by mouse marrow hematopoietic progenitor cells // Exp. Hematol. - 1991. - V. 19. P. 143.

34. Burstein S.A., Mei R.L., Henthorn J., Friese P. and Turner K. Leukemia inhibitory factor and interleukin-11 promote maturation of murine and human megakaryocytes in vivo.//J. Cell. Physiol.-1992.-V.153. P.305-312.

35. Butcher C., Steinkasserer A., Tejura S., Lennard A.C. Comparison of two promoters controlling expression of secreted or intracellular IL-1 receptor antagonist// J Immunol. -1994. -V. 153. -P. 701-11.

36. Caruana G., Cambareri A.C., Ashman L.K. Isoforms of c-KIT differ

in activation of signalling pathways and transformation of NIH3T3

fibroblasts//Oncogene. -1999. -V. 18. -P. 5573-81.

/

37. Chabaud M., Fossiez F., Taupin J.L., Miossec P. Enhancing effect of IL-17 on IL-1-induced IL-6 and leukemia inhibitory factor production by rheumatoid arthritis synoviocytesand its regulation by Th2 cytokines.//! Immunol.-1998.-V.161. P.409-414.

38. Chalaris A, Garbers C, Rabe B, Rose-John S, Scheller J. The soluble Interleukin 6 receptor: generation and role in inflammation and cancer. // Eur. J. Cell Biol. - 2011. V. 90(6-7). P.484-94.

39. Collins J.S., Perry R.T., Watson B. Jr, Harreil L.E., Acton R.T. Association of a haplotype for tumor necrosis factor in siblings with late-onset Alzheimer disease: the NIMH Alzheimer Disease Genetics Initiative // Am J Med Genet. -2000. -V. 96. -P. 823-30.

40. Cooper T.A., Wan L., Dreyfuss G.. RNA and disease. // Cell. - 2009. V.136. P.777-93.

41.Copeland, N. G., Gilbert, D. J., Cho, B. C., Donovan, P. J., Jenkins, N. A., Cosman, D., Anderson, D., Lyman, S. D., Williams, D. E. Mast

cell growth factor maps near the steel locus on mouse chromosome 10 and is deleted in a number of steel alleles // Cell - 1990.- V.63. P. 175-180.

42. Cullinan E.B., Abbondanzo S.J., Anderson P.S., Pollard J.W., Lessey B.A., Stewart C.L. Leukemia inhibitory factor (LIF) and LIF receptor

. expression in human endometrium suggests a potential autocrine/paracrine function in regulating embryo implantation.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA-1996.-V.93. P.3115.

43. Curtis B.M., Widner M.B., Roos P.D., Qwarnstorm E.E. IL-1 and its receptor are translocated to the nucleus.// J. Immunol.-1990.-V. 144. P.1295-1303.

44. Curtis R., Scherer S.S., Somogyi R., Adryan K.M., Ip N.Y., Zhu Y., Lindsay R.M. and DiStefano P.S. Retrograde axonal transport of LIF is increased by peripheral nerve injury correlation with increased LIF expression in distal nerve.// Neuron.-1994.-V. 12. P. 191-204.

45. Debili N., Masse J.M., Katz A., Guichard J., Breton-Gorius J. and Vainchenker W. Effects of the recombinant hematopoetic growth factors interleukin-3, interleukin-6, stem cell factor and leukemia inhibitory factor on the megakaryocyte differentiation of CD34+ cells.//Blood-1993.-V.82. P.84-95.

46. deCastro, C. M., Denning, S. M., Langdon, S., Vandenbark, G. R., Kurtzberg, J., Scearce, R., Haynes, B. F., and Kaufman, R. E. The C-KIT proto-oncogene receptor is expressed on a subset of human CD3-CD4-CD8- (triple-negative) thymocytes // Exp. Hematol. - 1994. - V. 22. P. 1025.

47. Deichmann K., Bardutzky J., Forster J., Heinzmann A., Kuehr J. Common polymorphisms in the coding part of the lL4-receptor gene // Biochem Biophys Res Commun. -1997. -V. 231. -P. 696-7.

48. Deshanet J., Taupin J.L., Chomarat P., Rissoan M.C., Moreau J.F., Banchereau J., Miossec. Interleukin-4 but not interleukin-10 inhibits the production of leukemia inhibitory factor by rheumatoid synovium and synoviocytes.//Eur.J. Immuol.-1994.-V.24. P.3222-3228.

49. Diamant M., Rieneck K., Mechti N., Zhang X.G., Svenson M. Cloning and expression of an alternatively spliced mRNA encoding a soluble form of the human interleukin-6 signal transducer gpl30 // FEBS Lett. -1997. -V. 412. -P. 379-84.

50. DiSanto J.P., Dautry-Varsat A., Certain S., Fischer A., de Saint Basile G. Interleukin-2 (IL-2) receptor gamma chain mutations in X-linked severe combined immunodeficiency disease result in the loss of high-affinity IL-2 receptor binding // Eur J Immunol. -1994. -V. 24. -P. 475-9.

51.Escary, J. L., J. Perreau, D. Dumenil, S. Ezine, and P. Brulet. Leukemia inhibitory factor is necessary for the maintenance of hematopoetic stem cells and thymocyte stimulation.// Nature.- 1993.363:361.

52. Eskdale J., Gallagher G. A polymorphic dinucleotide repeat in the human IL-10 promoter// Immunogenetics. -1995. -V. 42. -P. 444-5.

53. Evsyukova I., Somarelli J.A., Gregory S.G., Garcia-Blanco M.A. Alternative splicing in multiple sclerosis and other autoimmune diseases. // RNA Biology. - 2000. - V.7:4. P.462-473.

54. Eric T. Wang, R. Sandberg, S. Luo, I. Khrebtukova, L. Zhang, C. Mayr, S. F. Kingsmore, G. P. Schroth, C. B. Burge. Alternative isoform regulation in human tissue transcriptomes. // Nature. Advance online publication 2 November 2008.

55.Faustino N., Cooper T. Pre-mRNA splicing and human disease. // Genes and Development. - 2003. - V. 17. - P. 419-437.

56. Feng Z., Zhang C., Kang H.J., Sun Y., Wang H., Naqvi A., Frank A.K., Rosenwaks Z., Murphy M.E., Levine A.J., Hu W. Regulation of female reproduction by p53 and its family members.// FASEB J. -2011.- V.- 25(7). P. -2245-55.

57. Finotto, S., Mekori, Y. A., and Metcalfe, D. D. Glucocorticoids decrease tissue mast cell number by reducing the production of the C-

KIT ligand, stem cell factor, by resident cells: in vitro and in vivo evidence in murine system // J. Clin. Invest. - 1997. - V. 99. P. 1721.

58. Flannagan J.G., Chan D.C., Leder P. Transmembrane form of.the kit ligand growth factor is determined by alternative splicing and is missing in the Sid mutant // Cell - 1991. V. 64. P. 1025 - 1030.

59. Foster C.B., Lehrnbecher T., Samuels S., Stein S., Mol F. An IL6 promoter polymorphism is associated with a lifetime risk of development of Kaposi sarcoma in men infected with human immunodeficiency virus // Blood. -2000. -V. 96. -P. 2562-7.

60. Freeburn R.W., Gale R.E., Linch D.C. Activating point mutations in the betaC chain of the GM-CSF, IL-3 and IL-5 receptors are not a major contributory factor in the pathogenesis of acute myeloid leukaemia//Br J Haematol. -1998. -V. 103.-P. 66-71.

61. Frydman J., Hohfeld J. Chaperones get in touch: the Hip-Hop connection. //Trends Biochem. Sci.-1997.-V.22. P.87-92.

62. Furnham N., Ruffle S., Southan C. Splice variants: a homology modeling approach // Proteins. -2004. -V. 54. -P. 596-608.

63. Gagari E., Rand M.K., Tayari L., Vastardis H., Sharma P., Hauschka P. V., Damoulis P.D. Expression of stem cell factor and its receptor, c-kit, in human oral mesenchymal cells // Eur. J. Oral. Sci. -2006. V.114. P. 409-415.

64. Gao W., Thompson L., Zhou Q., Putheti P., Fahmy T.M., Strom T.B., Metcalfe S.M. Treg versus Thl7 lymphocyte lineages are cross-regulated by LIF versus IL-6.// Cell Cycle.- 2009.-V.8(9). P. 14441450.

65.Glaspy J. Clinical applications of stem cell factor. // Curr. Opin. Hematol. - 1996,- V.3. P. 223.

66.Gregory S.G., Schmidt S., Seth P., Oksenberg J.R., Hart J., Prokop A., et al. Interleukin 7 receptor chain (IL7R) shows allelic and functional association with multiple sclerosis.// Nature Genetics. -2007. V.39. P. 1083-91.

67.Grenier A., Dehoux M., Boutten A., Arce-Vicioso M., Durrand G., Gougerot-Pociadelo M.-A., Chollet-Martin S. Oncostatin M production and regulation by human polymorphonuclear neutrophils.//Blood- 1999.-V.93. P. 1413-1421.

68. Guillet C., Fourcin M., Chevalier S., Pouplard A., Gascan H. ELISA detection of circulating levels of LIF, OSM, and CNTF in septic shock. //Ann NY Acad Sci.- 1995.-V.762. P.407-409.

69. Haines B.P., Voyle R.B., Pelton T.A., Forrest R., Rathjen P.D. Complex conserved organization of the mammalian leukemia inhibitory factor gene: regulated expression of intracellular and extracellular cytokines.// J. Immunol.-1999.-V. 162 P.4637-4646.

70. Haines B.P., Voyle R.B., and Rathjen P. Intracellular and Extracellular Leukemia Inhibitory Factor Proteins Have Different Cellular Activities That Are Mediated by Distinct Protein Motifs.// Molecular Biology of the Cell.-2000. - Vol. 11; P. 1369-1383.

71. Hamilton J.A., Waring P.M., Filonzi E.L. Induction of leukemia inhibitory factor in human synovial fibroblasts by IL-1 and tumor necrosis factor-a.//J.Imuunol.-1993.-V. 150. P. 1496-1502.

72. Hanke J., Brett D., Zastrow I., Aydin A., Delbrück S. Alternative splicing of human genes: more the rule than the exception? // Trends Genet.-1999. -V. 15.-P. 389-90.

73. Haskill S., Martin G., Le L.V., Morris J., Pearce A., Biggier C. F., Jaffe G.J., Hammerberg C., Sporn S. A., Fong S., Arend W. P., Ralph P. cDNA cloning of an intracellular form of the human interleukin 1 receptor antagonist associated with epithelium.// Proc. Natl. Acad. Sei. USA-1991.- V.88. P.3681.

74. Haskill S., Martin G., Van Le L., Morris J., Peace A. cDNA cloning of an intracellular form of the human interleukin 1 receptor antagonist associated with epithelium // Proc Natl Acad Sei U S A. -1991. -V. 88. -P. 3681-5.

75. Haukim N., Bidwell J.L., Smith A.J., Keen L.J., Gallagher G. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases, supplement 2 // Genes Immun. -2002. -V. 3. -P. 313-30.

76. Heaney M.L., Golde D.W. Soluble cytokine receptors // Blood. -1996. -V. 87. -P. 847-57.

77. Hodges D., Bernstein S.I. Genetic and biochemical analysis of alternative RNA splicing// Adv Genet. -1994. -V. 31. -P. 207-81.

78. Hsu L.W., Heath J.K. Identification of two elements involved in regulating expression of murine leukemia inhibitory factor gene.// J.Biochem.- 1994.-V.302 P.103-110.

79. Hu W., Feng Z., Levine A.J. The regulation of human reproduction by p53 and its pathway.// Cell Cycle.- 2009. V.- 15;8(22). P.-3621-2.

80. Huang E, Nocka K, Beier DR, Chu TY, Buck J, Lahm HW, Wellner D, Leder P, Besmer P. The hematopoietic growth factor KL is encoded by the SI locus and is the ligand of the c-kit receptor, the gene product of the W locus.// Cell. 1990 V.63(l). P.225-233.

81. Huang E.J., Nocka K.H., Buck J., Besmer P. Differential expression and processing of two cell associated forms of the kit-ligand: KL-1 and KL-2 // Molecular biology of the Cell - 1992. - V. 3. P. 349-362.

82. Hudson K.R., Vernallis A.B., Heath J.K. Characterization of the receptor binding sites of human leukemia inhibitory factor and creation of antagonists.//! Biol. Chem.-1996.-V. 271. P. 11971— 11978.

83. Humphrey R.K., Beattie G.M., Lopez A.D., Bucay N., King C.C., Firpo M.T., Rose-John S., Hayek A. Maintenance of pluripotency in human embryonic stem cells is STAT3 independent.//Stem cells-2004.-V.22. P.522-530.

84. Hunt, P., Zsebo, K. M., Hokom, M. M., Hornkohl, A., Birkett, N. C., del Castillo, J. C., and Martin, F. Evidence that stem cell factor is involved in the rebound thrombocytosis that follows 5-Fluorouracil treatment // Blood - 1992. - V. 80. P. 904.

85. Hutt K.J., McLaughlin E.A., Holland M.K. Kit ligand and c-Kit have diverse roles during mammalian oogenesis and folliculogenesis // Mol. Hum. Reproduction-2006.-V. 12. No.2. P. 61-69.

86. Inaba T., Inukai T., Yoshihara T., Seyschab H., Ashmun R.A., Canman C.E., Laken S.J., Kastan M.B., Look, A.T. Reversal of apoptosis by the leukemia-associated E2A-HLF chimeric transcription factor.//Nature- 1996.-V.382. P.541-544.

87. Jans D.A., Hassan, G. Nuclear targeting by factors, cytokines, and their receptors: a role in signaling. //Bioessays -1998.-V.20. P.400-411.

88. Jiang, C., Hall, S. J., and Boekelheide, K. Cloning and characterization of the 50 flanking region of the stem cell factor gene in rat Sertoli cells// Gene - 1997. V.185. P. 285 -290.

89. Johnstone R.W., et al. A novel repressor, par-4, modulates transcription and growth suppression functions of the Wilm's tumor suppressor WTl.//Mol. Cell. Biol.-1996.-V.16. P.6945-6956.

90. Kaneko, Y., Takenawa, J., Yoshida, O., Fujita, K., Sugimoto, K., Nakayama, H., and Fujita, J. Adhesion of mouse mast cells to fibroblasts: Adverse effects of steel (SI) mutation // J. Cell Physiol. -1991. -V. 47. P. 224-230.

91. Kang H.J, Feng Z., Sun Y., Atwal G., Murphy M.E., Rebbeck T.R., Rosenwaks Z., Levine A.J., Hu W. Single-nucleotide polymorphisms in the p53 pathway regulate fertility in humans. // Proc Natl Acad Sci USA.- 2009,- V.-16;106(24). P.9761-6.

92. Kapur R, Majumdar M., Xiao X., McAndrews-Hill M., Schindler K. and Williams D.A. Signaling through the interaction of membrane-restricted stem cell factor and c-kit receptor tyrosine kinase: genetic

evidence for a differential role in erythropoiesis 11 Blood. - 1998. - V. 91. No. 3. P. 879-889.

93. Kato H., Youn H.Y., Ohashi T., Watari T., Goitsuka R. Identification of an alternatively spliced transcript of equine interleukin-1 beta // Gene. -1996. -V. 177. -P. 11-6.

94. Kelemen O., Convertini P., Zhang Z., Wen Y., Shen M., Falaleeva M., Stamm S. Function of alternative splicing.// Gene.- 2012. Augl5.

95.Keller G., Wall C., Fong A.Z., Hawley R.G. Overexpressionof HOX11 leads to the immortalization of embryonic precursors with both primitive and definitive hematopoetic potential.// Blood.-1998.-V.92. P.877-887.

96. Keller, J. R., Jacobsen, Se. E., Dubois, C. M., Hestdal, K., and Ruscetti, F. W. Transforming growth factor-beta: A bidirectional regulator of hematopoietic cell growth // Int. J. Cell Cloning - 1992. -V. 10. P. 2.

97. Kerppola T.K., Curran T. Transcription factor interactions: basics on leucine zippers. //Curr. Opin. Struct. Biol.- 1991.-V.1. P.71-79.

98. Kestler D.P., Agarwal S., Cobb J., Goldstein K.M., Hall R.E. Detection and analysis of an alternatively spliced isoform of interleukin-6 mRNA in peripheral blood mononuclear cells.// Blood-1995.-V.86. P.4559-4567.

99. Kissler S., Fischer K., Zheng P., Rainbow D., Wicker L. The soluble CTLA-4 splice variant affects the function of CD4+ CD25+ regulatory T cells. //J. Immunol. - 2009. V. 182. P.49-10.

100. Klein S.C., Golverdingen J.G., Bouwens A.G., Tilanus M.G., de Weger R.A. An alternatively spliced interleukin 4 form in lymphoid cells // Immunogenetics. -1995. -V. 41. -P. 57.

101. Klimpel, G. R., Chopra, A. K., Langely, K. E., Wypych, J., Annable, C. A., Kaiserlian, D., Ernst, P. B., and Peterson, J. W. A role for stem cell factor and C-KIT in the murine intestinal tract secretory response to cholera toxin // J. Exp. Med. - 1995. - V. 182. P. 1931.

102. Koenig, A., Yakisan, E., Reuter, M., Huang, M., Sykora, K. W., Corbacioglu, S., and Welte, K. Differential regulation of stem cell factor mRNA expression in human endothelial cells by bacterial pathogens: an in vitro model of inflammation // Blood - 1994. - V. 83. P. 2836.

103. Kojima K., Kanzaki H., Iwai M. Expression of leukemia inhibitory factor in human endometrium and placenta.//Biol. Reprod.-1994.-V.50. P.882-887.

104. Kola, I., Davey A., Gough N. M.. Localisation of the murine leukemia inhibitory factor gene near the centomere on chromosome 11. //Growth Factors.- 1990.-V.2. P.235.

105. Kolpakova E., Wiedlocha A., Stenmark H., Klingenberg 0.,Falnes P.O., Olsnes S. Cloning of an intracellular protein that binds selectively to mitogenic acidic fibroblast growth factor.//Biochem J.-1998.-V.336. P.213-222.

106. Komiyama T., Ray C.A., Pickup D.J., Howard A.D., Thornberry N.A., Peterson E.P., Salvesen, G. Inhibition of interleukin- lb converting enzyme by the cowpox virus serpin CrmA. //J. Biol. Chem.- 1994.-V.268. P. 19331-19337.

107. Kordula T., Bokira H., Kol A., Fiers W., Gauldie J., Baumann H. Effects of interleukin-6 and leukemia inhibitory factor on the same acute phase response and DNA synthesis in cultured rat hepatocytes.//Lymphocytes Cytokine Res.-1991.-V.10. P.23-26.

108. Ku, H., Yonemura, Y., Kaushansky, K., and Ogawa, M. Thrombopoietin, the ligand for the Mpl receptor, synergizes with steel factor and other early acting cytokines in supporting proliferation of primitive hematopoietic progenitors of mice // Blood - 1996. - V. 87. P. 4544.

109. Lass A, Weiser W, Munafo A et al. Leukemia inhibitory factor in human reproduction. //Fertil Steril -2001.-V.76 P. 1091-1096.

110. Leary A.G., Wong G.C., Clark S.C., Smith A.G., Ogawa M. Leukemia inhibitory factor differentiation- inhibiting activity/ human interleukin for DA cells augments proliferation of human hematopoetic stem cells.//Blood-1990.-V.75. P. 1960-1964.

111. Levine S.J. Molecular mechanisms of soluble cytokine receptor generation//J. of Biol. Chem. - 2008. - No. 6. P. 1-14.

112. Limmani, A., Baker, W. H., Change, C. M., Seemann, R., Williams, D. E., and Patchen, M. L. C-KIT ligand gene expression in normal and sublethally irradiated mice // Blood - 1995. - V. 85. P. 2377.

113. Lin, L.-F.H., Mismer D., Lile J.D., Armes L.G., Butler E.T., III, Vannice J.L., Collins F. Purification, cloning, and expression of ciliary neurotrophic factor (CNTF).// Science- 1989.-V.246. P. 10231025.

114. Linenberger M.L., Jacobsen F.W., Bennett L.G., Broudy V.C., Martin F.H., Abkowitz J.L. Stem cell factor production by human marrow stromal fibroblasts // Exp. Hematol. - 1995 - V.23 P. 1104.

115. Linenberger, M. L., Jacobson, F. W., Bennett, L. G., Broudy, V. C., Martin, F. H., and Abkowitz, J. L. Stem cell factor production by

human marrow stromal fibroblasts // Exp. Hematol.- 1995. - V. 23. P. 1104.

116. Liu B., Ohishi K., Orito Y., Nakamori Y., Nishikawa H., Ino K., Suzuki K., Matsumoto T., Masuya M., Hamada H., Mineno

J., Ono R., Nosaka T., Shiku H., Katayama N. Manipulation of human early T lymphopoiesis by coculture on human bone marrow stromal cells: Potential utility for adoptive immunotherapy.// Experimental Hematology.- 2012. - pii: S0301-472X(12)00595-4.

117. Lobie P.E., Mertani H., Morel G., Morales-Bustos O., Norstedt G., Waters M.J. Receptor-mediated nuclear translocation of growth hormone. //J. Biol. Chem.-1994.-V.269. P.21330-21339.

118. Long, M. W., Briddell, R., Walter, A. W., Bruno, E., and Hoffman, R. Human hematopoietic stem cell adherence to cytokines and matrix molecules//J. Clin. Invest. - 1992.-V. 90. P. 251.

119. Longley, B.J. Jr,, Morganroth, G. S., Tyrrell, L., Ding, T. G., Anderson, D. M., Williams, D. E., and Halaban, R. Altered metabolism of mast-cell growth factor (C-KIT ligand) in cutaneous mastocytosis//N. Engl. J. Med. - 1993. V. 328. P. 1302.

120. Lopez A.J. Alternative splicing of pre-mRNA: developmental consequences and mechanisms of regulation // Annu Rev Genet. -1998. -V. 32. -P. 279-305.

121. Lu C., Kerbel R.S. Interleukin-6 undergoes transition from paracrine growth inhibitor to autocrine stimulator during human melanoma progression.//]. Cell Biol.-1993.-V.120. P.1281-1288.

122. Lynch KW. Consequences of regulated pre-mRNA splicing in the immune system. //Nature Reviews. - 2004. -V. 4. P.931-40.

123. Marziali G, Lazzaro D, Sorrentino V. Binding of germ cells to mutant Sid Sertoli cells is defective and is rescued by expression of the transmembrane form of the c-kit ligand. // Dev. Biol. - 1993. V.157(1). P.182-190.

124. Masutani K., Miyake K., Nakashima H., Hirano T., Kubo M. Impact of interferon-gamma and interleukin-4 gene polymorphisms on development and progression of IgA nephropathy in Japanese patients//Am J Kidney Dis.-2003. -V. 41.-P. 371-9.

125. Matos ME, Schnier GS, Beecher MS, Ashman LK, William DE, Caligiuri MA. Expression of a functional c-kit receptor on a subset of natural killer cells. //J. Exp. Med. - 1993. V. 178(3). P. 1079-1084.

126. Matsui, Y., Zsebo, K. M., and Hogan, B. L. M. Embryonic expression of a haematopoietic growth factor encoded by the SI locus and the ligand for C-KIT // Nature - 1990. - V. 347. P. 667.

127. Mauduit C, Hamamah S, Benahmed M. Stem cell factor/c-kit system in spermatogenesis. // Hum Reprod Update. 1999 V. 5(5). P. 535-545.

128. McNiece, I. K., Langley, K. E., and Zsebo, K. M. Recombinant human stem cell factor synergizes with GM-CSF, G-CSF, IL-3 and Epo to stimulate human progenitor cells of the myeloid and the erythroid lineages//Blood - 1991. -V. 19. P. 226.

129. Meazza R., Verdiani S., Biassoni R., Coppolecchia M., Gaggero A. Identification of a novel interleukin-15 (IL-15) transcript isoform generated by alternative splicing in human small cell lung cancer cell lines//Oncogene.-1996. -V. 12.-P. 2187-92.

130. Messer G., Spengler U., Jung M.C., Honold G., Blomer K. Polymorphic structure of the tumor necrosis factor (TNF) locus: an Ncol polymorphism in the first intron of the human TNF-beta gene correlates with a variant amino acid in position 26 and a reduced level of TNF-beta production // J Exp Med. -1991. -V. 173. -P. 209-19.

131. Metcalf D. The Unsolved enigmas of leukemia inhibitory factor.//Stem cells-2003.-V.21. P.5-14.

132. Metcalfe S.M. LIF in the regulation of T-cell fate and as a potential therapeutic.// Genes and immunity. - 2011. - V. 12(3).- P. 157-168.

133. Mironov A.A., Fickett J.W., Gelfand M.S. Frequent alternative splicing of human genes // Genome Res. -1999. -V. 9. -P. 1288-93.

134. Moon T.C., Lee E., Baek S.-H., Murakami M., Kudo I., Kim N.S., Lee J.M., Min H.-K., Kambe N., Chang H.W. Degranulation and cytokine expression in human cord blood-derived mast cells cultured in serum-free medium with recombinant human stem cell factor // Mol/Cells. -2003. -V. 16(2). P. 154-160.

135. Mori M., Yamaguchi K., Honda S. Cancer cachexia syndrome developed in nude mice bearing melanoma cells producing leukemia inhibitory factor.//Cancer Res.-1991,- V51. P.6656-6659.

136. Nishimura H., Yajima T., Naiki Y., Tsunobuchi H., Umemura M. Differential roles of interleukin 15 mRNA isoforms generated by alternative splicing in immune responses in vivo // J Exp Med. -2000. -V. 191. -P. 157-70.

137. Niwa H. Molecular mechanism to maintain stem cell renewal of ES cells.//Cell Structure and Function- 2001.-V.26. P. 137-148.

138. O'Brien, S.J., and Graves, J.A.M. (1990). Geneticists converge on divergent mammals: an overview of comparative mammalian genetics. In: Mammals from Pouches and Eggs: Genetics, Breeding and Evolution of Marsupials and Monotremes, ed. J. A. M. Graves,

R.M. Hope, and D.W. Hooper, Canberra, Australia: Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization, 5-12.

139. Oppenheim J.J., Feldmann M. Cytokine Reference. Academic Press, 2001. T. 1. - P. 3-47.

140. Pennica, D., et al. Expression cloning of cardiotrophin 1, a cytokine that induces cardiac monocyte hypertrophy.//Proc. Natl. Acad. Sci. USA- 1995-V.92, P. 1142-1146.

141. Prinz M., Hanisch U.K., Kettenmann H., Kirchhoff F. Alternative splicing of mouse IL-15 is due to the use of an internal splice site in exon 5 // Brain Res Mol Brain Res. -1998. -V. 63. -P. 155-62.

142. Puck J.M., Pepper A.E., Henthorn P.S., Candotti F., Isakov J. Mutation analysis of IL2RG in human X-linked severe combined immunodeficiency//Blood. -1997. -V. 89. -P. 1968-77.

143. Ramsfjell, V., Borge, O. J., Cui, L., and Jacobsen, S. E. Thrombopoietin directly and potently stimulates multilineage growth and progenitor cell expansion from primitive (CD34+CD38) human bone marrow progenitor cells: Distinct and key interactions with the ligands for C-KIT and flt3, and inhibitory effects of TGF- and TNF // J. Immunol. - 1997. V. 158. P. 5169.

144. Ratajczak, M. Z., Kuczynski, W. I., Sokol, D. L., Moore, J. S., Pletcher, C.H. Jr., and Gewirtz, A. M. Expression and physiologic

significance of Kit ligand and stem cell tyrosine kinase-1 receptor ligand in normal human CD34, C-KIT marrow cells // Blood - 1995. V. 86. P. 2161.

145. Rathjen P.D., Toth S., Willis A., Heath J.K., Smith A.G. Differentiation inhibiting activity is produced in matrix-associated and diffusible forms that are generated by alternate promoter usage.//Cell-1990.-V. 62. P.1105-1114.

146. Reith AD, Ellis C, Lyman SD, Anderson DM, Williams DE, Bernstein A, Pawson T. Signal transduction by normal isoforms and W mutant variants of the Kit receptor tyrosine kinase. // EMBO J. 1991 V.10(9). P.2451-2459.

147. Ren S.G., Seliktar J., Li X., Braunstein G.D., Melmed S. Measurement of leukemia inhibitory factor in biological fluids by radioimmunoassay.// J. Clin. Endocrinol. Metab.- 1998.-V.83. P.1275-1283.

148. Robertson M., Chambers I., Rathjen P., Nichols J. Expression of alternative forms of differentiation inhibiting activity (DIA/LIF) during murine embryogenesis and in neonatal and adult tissues.// Dev. Genet.- 1996.-V. 14.-P. 165-173.

149. Rodewald HR, Kretzschmar K, Swat W, Takeda S. Intrathymically expressed c-kit ligand (stem cell factor) is a major factor driving

expansion of very immature thymocytes in vivo. 11 Immunity. 1995 V.3(3). P.313-319.

150. Rolink A., Melchers F. Molecular and cellular origins of B lymphocyte diversity // Cell. - 1991. - V. 66. P. 1081-1086.

151. Roth M., Nauck M., Tamm M., Perruchoud A.P., Ziesche R., Block L.H. Intracellular interleukin 6 mediates platelet-derived growth factor-induced proliferation of nontransformed cells. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1995.-V.92. P. 1312-1316.

152. Sempowski G.D., Hale L.P., Sundy J.S., Massey J.M., Koup R.A., Douek D.C., Patel D.D., Haynes B.F. Leukemia Inhibitory Factor, Oncostatin M, IL-6, and StemCell Factor mRNA Expression in Human Thymus Increaseswith Age and Is Associated with Thymic Atrophy.// The Journal of Immunology. - 2000. V. - 164. P. 21802187.

153. Sette C., Dolci S., Geremia R., Rossi P. The role of stem cell factor and of alternative c-kit gene products in the establishment, maintenance and function of germ cells. // Int. J. Dev. Biol. - 2000. -V.44. P.599-608.

154. Sims N.A., Johnson R.W. Leukemia inhibitory factor: A paracrine mediator of bone metabolism. // Growth factors. - 2012. - Early online: 1-12.

155. Singh R.K., Cooper T.A. Pre-mRNA splicing in disease and therapeutics. // Trends in molecular medicine. - 2012. - V. 18(8). P.472-82.

156. Smith A.G., Heath J.K., Donaldson D.D., Wong G.G., Moreau J., Stahl M., Rogers D. Inhibition of pluripotential embryonic stem cell differentiation by purified polypeptides.//Nature.- 1988.-V.336. P.688-690.

157. Sorg R.V., Enczmann J., Sorg U.R., Schneider E.M., Wernet P. Identification of an alternatively spliced transcript of human interleukin-4 lacking the sequence encoded by exon 2 // Exp Hematol. -1993. -V. 21. -P. 560-3.

158. Stahl J., Gearing D.P., Willson T.A., Brown M.A., King J.A., Gough N.M. Structural organization of the genes for murine and human leukemia inhibitory factor.//J. Biol. Chem.-1990.-V.265. P.8833-8841.

159. Stewart C.L., Kaspar P., Brünes L.J. Blastocyst implantation depends on maternal expression of leukemia inhibitory factor.// Nature-1992.-V.359. P.76-79.

160. Taga T., Kishimoto T. Gpl30 and the interleukin-6 family of cytokines.//Annu. Rev. Immunol.- 1997.-V. 15. P.797-819.

161. Tagaya Y., Kurys G., Thies T.A., Losi J.M., Azimi N., Hanover J.A., Bamford R. N., Waldmann T. A.. Generation of nonsecretable interleukin-15 isoforms through alternate usage of signal peptides. //Proc. Natl. Acad. Sci.USA.-1997.-V.94. P. 14444.

162. Tajima, Y., Huang, E. J., Vosseller, K., Ono, M., Moore, M. A., and Besmer, P. Role of dimerization of the membrane associated growth factor kit ligand in juxtacrine signaling: The S117H mutation affects dimerization and stability-phenotypes in hematopoiesis // J. Exp. Med. - 1998. V. 187. P. 1451.

163. Tajima, Y., Onoue, H., Kitamura, Y., and Nishimune, Y. Biologically active kit ligand growth factor is produced by mouse Sertoli cells and is defective in Sid mutant mice // Development -1991. V. 113. P. 1031.

164. Takeda S., Shimizu S., Rodewald H-R. Interactions between c-kit and stem cell factor are not required for B-cell development in vivo // Blood. 1997-V.89. P. 518.

165. Tarkowski E., Liljeroth A.M., Nilsson A., Ricksten A., Davidsson P. TNF gene polymorphism and its relation to intracerebral production of TNFalpha and TNFbeta in AD // Neurology. -2000. -V. 54. -P. 2077-81.

166. Tavernier J., Tuypens T., Plaetinck G., Verhee A., Fiers W., Devos R. Molecular basis of the membrane-anchored and two soluble isoforms of the human interleukin 5 receptor alpha subunit // Proc Natl Acad Sci USA. -1992. -V. 89. -P. 7041-5.

167. Tewari M., Dixit V.M. Fas- and tumor necrosis factorinduced apoptosis is inhibited by the poxvirus CrmA gene product.// J. Biol. Chem.- 1995.-V.270. P.3255-3260.

168. Toksoz D., Zsebo K.M., Smith K.A., Hu S., Brankow D., Suggs S.V., Martin F.H., Williams D.A. Support of human hematopoiesis in long-term bone marrow cultures by murine stromal cells selectively expressing the membrane-bound and secreted forms of the human homolog of the steel gene product, stem cell factor // Cell Biology -1992.-V.89. P. 7350-7354.

169. Voyle R.B., Haines B.P., Pera M.F., Forrest R., Rathjen P.D. Human germ cell tumor cell lines express novel leukemia inhibitory factor transcripts encoding differentially localized proteins.// Exp.Cell Res.-1999.-V.249 P. 199-211.

170. Voytyuk O., Lennartsson J., Mogi A., Caruana G., Courtneidge S., Ashman L.K., Ronnstrand. Src family kinases are involved in the differential signaling from two splice forms of c-kit // J/ of Biol. Chem. -2003. -V. 278. P. 9159-9166.

171. Weissbach L., Tran K., Colquhoun S.A., Champliaud M.F., Towle C.A. Detection of an interleukin-1 intracellular receptor antagonist mRNA variant // Biochem Biophys Res Commun. -1998. -V. 244. -P.

172. Xu X., Liao J., Creek K.E., Pirisi L. Human keratinocytes and tumor-derived cell lines express alternatively spliced forms of transforming growth factor-alpha mRNA, encoding precursors lacking carboxyl-terminal valine residues // Oncogene. -1999. -V. 18. -P. 5554-62.

173. Young JW, Szabolcs P, Moore MA. Identification of dendritic cell colony-forming units among normal human CD34+ bone marrow progenitors that are expanded by c-kit-ligand and yield pure dendritic cell colonies in the presence of granulocyte/macrophage colony-stimulating factor and tumor necrosis factor alpha. // J. Exp. Med. -1995. V. 182(4). P. 1111-1119.

174. Zhang JG, Zhang Y, Owczarek CM, Ward LD, Moritz RL, Simpson RJ, Yasukawa K, Nicola NA. Identification and characterization of two distinct truncated forms of gpl30 and a soluble form of leukemia inhibitory factor receptor alpha-chain in normal human urine and plasma. // J. Biol. Chem. - 1998,- Apr 24; V. 273(17). P.10798-10805.

91-5.