Иммунорегуляторные белки и цитокины при беременности на фоне носительства антител к Chlamydia trachomatis тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат наук Ботвиньева, Ирина Анатольевна

• Ботвиньева, Ирина Анатольевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Ботвиньева, Ирина Анатольевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Chlamydia trachomatis - распространенность, особенности па- 11 тогенеза

1.2. Современные представления о патогенезе и диагностике 18 внутриутробной инфекции плода у носительниц Chlamydia trachomatis

1.3. Роль белковых компонентов врожденного иммунитета в па- 30 тогенной инвазии

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика групп обследованных женщин 3

2.2. Методы получения образцов биологического материала

2.3. Алгоритм лабораторного исследования

2.4. Биохимические и иммунохимические методы исследований

2.5. Метод твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА)

2.6. Методы иммунопреципитации (иммуноэлектрофореза)

2.7. Методы статистической обработки данных 45 ГЛАВА 3. Иммунорегуляторные белки и цитокины в крови ро- 46 жениц-носительниц IgG AT к Chlamydia trachomatis

3.1. Иммунорегуляторные белки в сыворотке крови рожениц с 46 антителами к Chlamydia trachomatis

3.2. Уровень иммунокомплексов a2-MT-IgG в сыворотке крови 53 рожениц с антителами к Chlamydia trachomatis и возможность прямого взаимодействия а2-МГ и ЛФ с возбудителем

3.3. Уровни некоторых реактантов острой фазы в сыворотке кро- 57 ви рожениц с IgG антителами к Chlamydia trachomatis

3.4. Про-, противовоспалительные и иммунорегуляторные цито- 59 кины в сыворотке крови рожениц с циркулирующими IgG антителами к Chlamydia trachomatis

ГЛАВА 4. Иммунорегуляторные белки и цитокины в пуповин- 63 ной сыворотке при родах, осложненных носительством IgG антител к Chlamydia trachomatis

4.1. Иммунорегуляторные белки пуповинной сыворотки при на- 63 личии IgG антител к Chlamydia trachomatis при беременности

4.2. Уровни альбумина и С-реактивного белка в пуповинной кро- 67 ви ребенка, рожденного от матери имеющей IgG антитела

к Chlamydia trachomatis

4.3. Цитокины в пуповинной крови новорожденных, рожденных 69 от матерей с циркулирующими IgG антителами к Chlamydia trachomatis

ГЛАВА 5. Иммунорегуляторные белки и цитокины в около-

плодных водах при родах, осложненных носительством IgG антител к Chlamydia trachomatis

5.1. Концентрации белков в околоплодных водах при антитело- 76 носительстве к Chlamydia trachomatis

5.2. Содержание специфических иммунокомплексов a2-MT-IgG 80 в околоплодных водах у рожениц, имеющих IgG антитела к Chlamydia trachomatis

5.3. Уровни некоторых цитокинов в околоплодных водах в труп- 82 пах рожениц с IgG антителами к Chlamydia trachomatis

ГЛАВА 6. Соотношение содержания изученных показателей в

различных биологических жидкостях в норме и на фоне носи-тельства антител к Chlamydia trachomatis

Глава 7. ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АБГ - ассоциированный с беременностью альфа-2-гликопротеин AT - антитела

а2-МГ - альфа-2-макроглобулин

ВАК - высшая аттестационная комиссия

ВОЗ - всемирная организация здравоохранения

ВС - венозная сыворотка

ВУИ - внутриутробная инфекция

ИППП - инфекции, передающиеся половым путем

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛРП - низкоплотностный липопротеин рецептор-ассоциированный протеин (Low-Density Lipoprotein Receptor-Related Protein) или основной рецептор эндоцитоза ЛФ - лактоферрин OB - околоплодные воды

ПВИ - признаки внутриутробного инфицирования

ПС - пуповинная сыворотка

РТ - ретикулярные тельца Chlamydia trachomatis

СРБ - С-реактивный белок

ЭТ - элементарные тельца Chlamydia trachomatis

Chi. tr. - Chlamydia trachomatis

HSP - белок теплового шока

IFN-y - интерферон - гамма

IgG, IgM, IgA - иммуноглобулины класса G, M, А

IL- интерлейкины

МАРК - mitogen-activated proteinkinase каскад

МОМР - Mayor Outer Membrane Protein (белок клеточной стенки)

NFkB - ядерный транскрипционный фактор

РАМР - pathogen-associated molecular patterns

TGF - трансформирующий фактор роста

TNF-a - фактор некроза опухоли - альфа

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунорегуляторные белки и цитокины при беременности на фоне носительства антител к Chlamydia trachomatis»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

Особенности жизненного цикла Chlamydia trachomatis (способность длительно персистировать в неактивной форме, низкая иммуногенность и стертость клинических проявлений), вкупе с увеличением количества врожденных и функциональных иммунодефицитов и изменениями сексуального поведения в популяциях {Taylor B.D., et. al., 2011) привели к широкому распространению заболевания во всем мире. Диагностика хламидиоза при беременности затруднена, поскольку повышает риск выкидыша и не является достаточным критерием для прогноза состояния новорожденного - инфицированные женщины нередко рожают здорового ребенка. В то же время наличие антител класса G к Chlamydia trachomatis во время беременности, при отсутствии клинических признаков инфекции и отрицательных результатах ПЦР, не является показанием для проведения специфической терапии, однако нередко приводит к рождению ребенка с признаками внутриутробной инфекции. Более того, антитела к антигенам хла-мидии (в т.ч. гомологичные человеческому HPS-60 по данным Stephens A.J., et. al, 2011) могут оказать негативное влияние на плод и при отсутствии активного возбудителя. Поскольку при беременности адаптивный иммунитет подвержен супрессии, актуальным является изучение роли компонентов врожденного иммунитета в патогенетических процессах {Макаров О.В. и др., 2008), приводящих к рождению антителоносительницами детей с осложненным течением раннего неонатального периода. В их числе полифункциональные белковые компоненты врожденного иммунитета - лактоферрин (ЛФ) и альфа-2-макроглобулин (а2-МГ). Эти белки принимают активное участие в оплодотворении и развитии плода, задействованы в воспалительных и аутоиммунных реакциях, участвуют в распознавании и элиминации патогенов, оказывают модулирующее воздействие на синтез цитокинов, транспортируют цитокины, металлы, гормоны и другие биологически активные вещества к клеткам-мишеням.

Цель исследования состояла в сравнительном изучении содержания им-мунорегуляторных белков (а2-МГ, ЛФ), иммунокомплекса a2-MT-IgG и некоторых цитокинов у беременных женщин, носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis, для уточнения их роли в иммунопатогенезе процессов, оказывающих негативное влияние на плод.

Задачи исследования:

1. Оценить содержание ЛФ и а2-МГ в сыворотке венозной и пуповинной крови, а также в околоплодных водах рожениц - носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis в зависимости от состояния новорожденного в раннем не-онатальном периоде. Исследовать взаимодействие а2-МГ и ЛФ с антигенами Chlamydia trachomatis in vitro.

2. Изучить уровень иммунокомплекса a2-Mr-IgG в сыворотке венозной и пуповинной крови, в околоплодных водах рожениц, а также наличие антител к HSP-60 к Chlamydia trachomatis в сыворотке крови во II триместре беременности у антителоносительниц.

3. Исследовать в сыворотке венозной и пуповинной крови, околоплодных водах рожениц - антителоносительниц (Ch. trachomatis) содержание цитокинов (TNF-a, IL-6, IL-8, IL-10, IFN-y IL-18, IL-IRA) в зависимости от состояния новорожденного.

4. Определить концентрации острофазовых белков - альбумина и СРБ в сыворотке венозной и пуповинной крови у рожениц - носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis, а также альбумина в околоплодных водах.

5. Провести коррелятивный анализ полученных результатов для уточнения роли ЛФ и а2-МГ в патогенезе процессов, оказывающих негативное влияние на плод. Определить их диагностическую и прогностическую значимость в оценке состояния новорожденного.

Научная новизна исследования

Впервые получены данные по сравнительному содержанию ЛФ, а2-МГ и иммунокомплексов a2-MT-IgG в сопоставлении с уровнями различных цитоки-нов, С-реактивного белка и альбумина в сыворотке венозной крови, пуповинной крови и в околоплодных водах женщин, имеющих антитела класса G к Chlamydia trachomatis и к MOMP+pgp3 Ch. tr., позволяющие уточнить роль ЛФ и а2-МГ в иммунопатогенезе процессов, приводящих к рождению ребенка с признаками внутриутробного инфицирования и осложненным течением раннего неонаталь-ного периода.

Впервые установлено, что наличие признаков внутриутробного инфицирования у новорожденных ассоциировано с повышенными сывороточными концентрациями ЛФ и а2-МГ у рожениц-антителоносительниц. При этом оценка содержания ЛФ в крови во II триместре беременности не имеет диагностической либо прогностической ценности. Повышение уровней ЛФ и а2-МГ сопровождается статистически значимым увеличением сывороточных концентраций TNF-a, IL-6 и IL-8 и снижением альбумина в группе женщин, родивших детей с осложнениями в раннем неонатальном периоде.

Впервые обнаружено повышение сывороточных концентраций иммунокомплексов a2-MT-IgG, в дополнение к появлению аутоантител к HSP-60 Ch. trachomatis, у трети беременных антителоносительниц.

Показано дозозависимое связывание ЛФ и а2-МГ с антигенами Chlamydia trachomatis в эксперименте in vitro.

Установлено, что повышение содержания ЛФ, IL-6, IL-8 и IL-10 в пуповинной сыворотке при антителоносительстве не зависит от состояния новорожденного.

Помимо статистически значимого увеличения содержания TNF-a, IL-8 и IL-18 в околоплодных водах рожениц - носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis, родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования,

впервые выявлено значительное повышение концентраций а2-МГ, его иммуно-комплекса с IgG и альбумина, а также снижение уровня ЛФ, что свидетельствует об увеличениии проницаемости и нарушении функций фетоплацентарного комплекса.

Активное участие а2-МГ и ЛФ в развитии локальных иммунопатогенетиче-ских процессов подтверждается результатами корреляционного анализа, выявившего наибольшее количество значимых взаимосвязей между содержанием а2-МГ и ЛФ с цитокинами в околоплодных водах.

Практическая значимость работы

Выявленные изменения свидетельствуют об участии иммунорегуляторных ЛФ и а2-МГ в процессах, приводящих к повреждению фетоплацентарного барьера и плода у женщин-носительниц антител к Chlamydia trachomatis: локальный дефицит ЛФ, заброс а2-МГ в околоплодные воды с локальным повышением количества иммунокомплексов a2-MT-IgG, а также гиперсинтез ЛФ и накопление а2-МГ в сыворотке крови беременной способны не только оказать прямое негативное влияние на плод, но и влиять на синтез цитокинов. Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры акушерства и гинекологии ГБОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Определение повышенных концентраций а2-МГ, ЛФ и сниженных концентраций альбумина в венозной крови беременных носительниц антител к Chlamydia trachomatis в III триместре, а также высоких уровней а2-МГ, альбумина и сниженного содержания ЛФ в околоплодных водах (в родах) может быть использовано в прогнозе состояния новорожденного в раннем неонатальном периоде. Определение уровней ЛФ в сыворотке беременных антителоносительниц (Chi. tr.) в III триместре внедрено в практику МБЛПУ «Зональный перинатальный центр» и МБЛПУ «Клинический родильный дом №3» г. Новокузнецка.

Положения, выносимые на защиту:

1. В сыворотке венозной крови рожениц, имеющих антитела к Chlamydia trachomatis и родивших детей с клиническими признаками внутриутробного инфицирования, статистически значимо повышены уровни лактоферрина и альфа-2-макроглобулина, а также С-реактивного белка, цитокинов TNF-a, IL-6, IL-8 и снижено содержание альбумина, что свидетельствует о наличии воспалительных процессов с аутоиммунными проявлениями в III триместре, при отсутствии клинических проявлений заболевания, и может быть использовано для прогнозирования состояния новорожденного. При этом определение содержания ЛФ во II триместре не имеет диагностической либо прогностической значимости. Повышенные уровни иммунокомплексов a2-Mr-IgG и наличие IgG антител к HSP-60 Chlamydia trachomatis обнаруживаются в крови у трети антителоноси-тельниц. Экспериментально (in vitro) установлено дозозависимое взаимодействие высокоочищенных препаратов а2-МГ и лактоферрина с антигенами Chlamydia trachomatis.

2. В сыворотке пуповинной крови рожениц с антителами к Ch. trachomatis статистически значимо увеличены концентрации ЛФ, IL-6, IL-10, вне зависимости от состояния ребенка в раннем неонатальном периоде. При этом содержание а2-МГ, его иммунокомплексов с IgG и острофазового альбумина при антитело-носительстве не отличается от контроля.

3. В околоплодных водах женщин, имеющих антитела к Chlamydia trachomatis и родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования, значительно увеличено содержание а2-МГ и альбумина, что свидетельствует о нарушении проницаемости фетоплацентарного барьера, а также статистически значимо увеличены концентрации TNF-a, IL-8, IL-18 и иммунокомплекса a2-MT-IgG на фоне снижения уровней IFN-y и ЛФ, что способствует развитию локальных воспалительных и аутоиммунных процессов, негативно влияющих на плод. Данные изменения цитокинового профиля взаимосвязаны и зависят от измене-

ний локальных уровней иммунорегуляторных а2-МГ и ЛФ - наибольшее количество значимых коррелятивных взаимосвязей между содержанием этих белков и других изученных показателей было выявлено в околоплодных водах, что подтверждает участие а2-МГ и ЛФ в развитии процессов, приводящих к рождению ребенка с осложнениями в раннем неонатальном периоде.

Апробация работы: Основные результаты работы доложены на XVII международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, (Нью-Йорк, США, 2012); Объединенном иммунологическом форуме (Нижний Новгород, 2013).

Диссертационная работа обсуждена на межкафедральном заседании апро-бационной комиссии ГБОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения Российской Федерации (далее ГБОУ ДПО НГИУВ) 21.01.2014г., протокол № 1.

Публикации: по теме диссертации получены 2 патента РФ и опубликовано 8 печатных работ, из них 5 в рецензируемых журналах, включенных в перечень журналов, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации: Диссертационная работа изложена на 126 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, самостоятельных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 25 таблицами и 13 рисунками. Список цитируемой литературы включает 115 источников, в т.ч. 81 зарубежных авторов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Chlamydia trachomatis - распространенность,

особенности патогенеза

Хламидийная инфекция (возбудитель - Chlamydia trachomatis) - одно из самых распространенных заболеваний передающихся половым путем {Howie S.E., et. al., 2011). Данная инфекция характеризуется многоочаговостью поражения с вовлечением в воспалительный процесс органов половой сферы, а иногда суставов, органов зрения и дыхательных путей. В структуре всех инфекций передающихся половым путем (ШИШ) она занимает одно из первых мест. По наблюдениям европейских исследователей, 80% случаев острых воспалительных процессов в органах малого таза развивается в результате ИППП, причем 60% вызывает Chlamydia trachomatis.

В целом, распространённость урогенитального хламидиоза колеблется в значительных пределах среди различных возрастных групп населения в разных 1 регионах мира. ВОЗ регистрирует до 92 миллионов новых случаев заражения

каждый год, в т.ч. 3-4 млн. в США, 5 млн. в Западной Европе и до 16 млн. в Африке. Особенно часто Ch. trachomatis обнаруживается в группах молодых женщин (15-24 года) {Torre Е., et. al., 2009, Dielissen P.W., et. al, 2013). В Европе Ch. trachomatis выявляется у 5-8% женщин репродуктивного возраста {Howie S.E., et. al., 2011), в США определяется в 4,1% случаев {Stephens A. J., et. al., 2011), а в Нигерии -у 29,4% женщин {Ikeme А.С., et. al., 2011), в России -12-19% {Малкова Е.М., и др., 2001). В США зарегистрировано 409 случаев на 100 тыс. за 2009 год {Stephens A.J., et. al., 2011). В Российской Федерации в 2009 году заболеваемость хламидийной инфекцией составила 80,3 на 100 000 населения {Михнина Е.А., 2012). По данным I Taylor B.D.(2011) Ch. trachomatis выявляется в 11,4-20% у женщин в группах

высокого риска заражения урогенитальной инфекцией, в 3% в общей популяции и в 9,5% случаев среди учащихся (студентов).

I (

Такому широкому распространению заболевания способствуют изменения в сексуальном поведении людей, наблюдаемые в последние десятилетия: раннее вступление в половую жизнь, частая смена партнёров, применение оральных контрацептивов, снижающих опасение за возникновение беременности, высокая мобильность населения и многочисленные сексуальные контакты. В числе других факторов повышающих риск - употребление наркотиков {Haar К., et. al., 2013), которые не только притупляют осторожность, но и подавляют иммунитет. При этом, клинические проявления заболевания развиваются медленно, в 80% случаев заболевание протекает бессимптомно {Torre Е., et. al., 2009, Stephens A.G., et. al., 2011; Taylor B.D., et. al., 2011), что приводит к запоздалому обращению к врачу либо к случайному установлению диагноза во время осмотров, особенно во время беременности.

Основные пути передачи инфекции при урогенитальном хламидиозе - половой, контактно-бытовой (редко), вертикальный (от матери плоду в родах или антенатально). Ввиду общности путей передачи возбудителей при ИППП, хла-мидии часто встречаются в ассоциации с другими микроорганизмами, такими, как гонококки, трихомонады, микоплазмы, уреаплазмы и др. {JalalH, et. al., 2013).

Chlamydia trachomatis - грамотрицательная облигатная внутриклеточная бактерия. При анализе антигенного строения хламидий различают родоспеци-фические, видоспецифические и типоспецифические антигены. Родоспецифиче-ский антиген, общий для хламидий видов: Ch.psittaci, Ch. trachomatis, Ch.pneumoniae, представлен липополисахаридом наружной мембраны. Липид-ная часть липополисахаридного комплекса ответственна за перекрёстные реакции с антителами к липополисахаридам некоторых грамотрицательных энтеро-бактерий (Re-мутанты Salmonella, Acinetobacter calcoaceticus). Из видоспецифи-ческих белков наиболее важен стрессовый белок, выполняющий функцию защиты и сопровождения, — белок теплового шока - HSP (Heat shock protein) с молекулярным весом 60 кДа. Количество белков теплового шока в клетке со-

ставляет 1-2% от общего количества белков, но при стрессе или воспалении их количество увеличивается в 4-5 раз. В наружную мембрану интегрированы и другие специфичные для Ch.trachomatis белки (протеины наружной мембраны

— ОМР). На основной белок наружной мембраны — Major Outer Membrane Protein (MOMP) приходится 61% общего количества белка. МОМР имеет функции структурного белка и порина (по аналогии со сходными белками наружной мембраны грамотрицательных бактерий). Также антигены хламидий представлены наружными мембранными протеинами 1, 2 и 3 типов, имеющих различный молекулярный вес (от 38 до 60 кДа). Наличие полипептидных белков с молекулярной массой от 27 до 37 к Да, свойственных пептидогликану грамотрицательных бактерий, обусловливает чувствительность хламидий к пенициллину и другим беталактамным антибиотикам {Михнина Е.А., 2012).

Характерной особенностью Ch. trachomatis является наличие в жизненном цикле двух различных морфологических форм: элементарных (ЭТ) и ретикулярных (РТ) телец: ЭТ - небольшие (200 - ЗООнм), метаболически неактивные инфекционные формы возбудителя, адаптированные к внеклеточному существованию, ответственные за передачу инфекции от одного хозяина к другому; РТ

- метаболически активные неинфекционные внутриклеточные формы, обеспечивающие репродукцию Ch. trachomatis (Флакс Г.А. и др., 2009), по размеру в 5-8 раз больше ЭТ {Кухтинова Н.В. и др., 2004). Уникальным свойством хламидий является состояние персистенции, характеризующееся появлением и длительным сохранением в макроорганизме жизнеспособных атипичных форм возбудителя, способных к реверсии в обычные формы с последующим рецидивом заболевания {Флакс Г.А., и др., 2009; Stephens A. J., et. al., 2011).

Существуют различные серотипы Chlamydia trachomatis. Серотипы А-С приводят к заболеваниям глаз, D-K - к патологии урогенитального тракта, L провоцирует развитие лимфогрануломы Вернера. Скорость распространения и «агрессивность» процесса у них различаются {Флакс Г.А. и др., 2009).

Патоген способен поражать различные клетки - фибробласты, моноциты, эпителиальные клетки, клетки плаценты и пр. (Torre Е. et. al., 2009). На первом этапе заражения происходит адгезия элементарных телец на мембране клетки-хозяина и проникновение их внутрь. Внедряются элементарные тельца в клетку путём пиноцитоза (фагоцитоза), защищаясь от деструкции фагосомной мембраной: хламидии препятствуют слиянию лизосомы с фагоцитарной вакуолью проникая через фагосомы в аппарат Гольджи, избегая, таким образом, разрушения в лизосомах (■Stephens A.J., et. al., 2011). Находясь в эндосоме, элементарные тельца последовательно через стадию промежуточных телец трансформируются в ретикулярные тельца, которые, в свою очередь, подвергаются бинарному делению. Далее Ch. trachomatis видоизменяет клетку-хозяина путем секреции вирулентных факторов в ее цитоплазму, используя систему секреции третьего типа. Часть из этих факторов препятствует апоптозу и разрушению «внутриклеточных очагов» в лизосомах клетки, часть работает как протеазы, разрушающие, в числе прочего, транскрипционные факторы, активирующие МНС класса I, класса II и кератина, а также влияющие на систему передачи сигналов через NFkB {Torre Е., et. al., 2009). По завершении периода роста и деления, ретикулярные тельца подвергаются обратной трансформации в элементарные тельца. Новообразованные элементарные тельца выходят из клетки, разрушая её, и инфицируют новые клетки. Полный внутриклеточный цикл развития при исследовании in vivo продолжается 48-72 ч и зависит от нескольких факторов, в частности от штамма хламидий, природы клеток-хозяев и условий среды.

Инфицирование часто приводит к развитию уретрита и воспалению в цер-викальном канале {Taylor B.D., et. al., 2011), оказывает несомненное влияние на репродуктивный потенциал и в 40% случаев приводит к развитию воспалительных заболеваний органов малого таза {Флакс Г.А. и др., 2009; Srivastava Р, et. al., 2012). Исходом воспалительного процесса при хламидиозе является утолщение пораженной слизистой оболочки, метаплазия эпителиоцитов в многослойный

плоский эпителий с последующим разрастанием рубцовой соединительной ткани. Не менее 1% женщин становятся инфертильными, увеличивается частота эктопических беременностей, замерших плодов, спонтанных выкидышей и Преждевременных родов {Torre Е„ et. al, 2009, Srivastava Р, et. al, 2012). До 30% женщин с Ch. trachomatis имеют осложнения, влияющие на репродуктивную функцию - бесплодие, спонтанные аборты. Хотя около 20% отличаются отсутствием каких-либо клинических проявлений, персистирующая инфекция может приводить к структурному повреждению воспаленных тканей, что повышает риск возникновения осложнений {Agrawal T., et. al., 2008). В то же время, у 20% женщин наблюдается спонтанная элиминация хламидийной инфекции из нижних отделов половых путей без каких-либо последствий {Agrawal T., et. al., 2008).

Изучение иммунного ответа при хламидийной инфекции показало, что многие осложнения сочетаются с выраженными нарушениями иммунорегуляции. Иммунный ответ на хламидии многообразен и характеризуется продукцией IgM, IgG, секретируемых IgA. Одним из наиболее важных показателей иммунитета при инфекционных и иммунопатологических заболеваниях является потенциальная способность клеток к секреции цитокинов - медиаторов воспаления {Рыжикова Л.С., 2009). Согласно полученным результатам, заражение различных клеток человека Chlamydia trachomatis приводит к активации синтеза IL-6, IL-8, IL-1 р, IL-18 {Mpiga P,et. al, 2006, Torre E., et. al, 2009).

Помимо гипериммуноглобулинемии в патогенезе хламидийной инфекции большую роль играют поликлональная активация В-лимфоцитов и реакция гиперзамедленного типа (ГЗТ). При этом хламидии поглощаются периферическими фагоцитами. Моноциты оседают длительно в тканях, превращаясь в тканевые макрофаги, а находящиеся в них хламидии становятся антигенным стимулятором. Тип развития заболевания зависит от состояния иммунитета человека, массивности инфицирования, патогенности и вирулентности инфекционного агента, а также многих других причин {Agrawal T., et. al., 2008).

Активированные макрофаги продуцируют TNF-a, который опосредованно через IL-1 активирует пролиферацию основных клеток соединительной ткани, способствует фибринообразованию, а также повышает адгезивную способность 1 лимфоцитов по отношению к эндотелию сосудов и реактивирует макрофаги

(BaudD., et. al.,2011).

Иммунный ответ может уничтожить возбудитель, но привести к развитию массированного воспаления. В некоторых случаях антитела на возбудитель не образуются, в других - длительно циркулируют уже после лечения антибиоти-1 ками {Stephens A.J., et. al., 2011).

При приеме антибактериальных препаратов малоактивных в отношении Ch. trachomatis {Флакс Г.А., и др., 2009), происходит задержка созревания ретикулярных телец и их превращение в элементарные, что приводит к снижению экспрессии основных антигенов Ch. trachomatis, уменьшению иммунного ответа, I изменению чувствительности к антибиотикам и переходу инфекции в персисти-

рующую форму. Реактивация персистирующей инфекции может произойти под действием изменения иммунного или гормонального статуса, травмы, операции, стресса. При этом, значительно повышается риск повторного заражения при контакте с носителем, и при повторном заражении осложнений больше, чем при | первичном {Agrawal Т., et. al., 2008, Taylor B.D., et. al., 2011).

У персистентных форм изменена не только морфология, но и экспрессия основных хламидийных антигенов: обнаружено уменьшение синтеза основных клеточных компонентов, придающих особую прочность клеточной стенке: ли-пополисахаридов и Mayor Outer Membrane Protein (MOMP) - белка клеточной

; стенки.

!

На этом фоне идёт непрерывный синтез белка теплового шока HSP 60, который играет значительную роль в иммунопатогенезе персистирующей инфекции, поддержании постоянной воспалительной реакции, а так же провоцирует ! развитие воспалительного ответа {Stephens A.J., et. al., 2011). Избыток HSP 60 не

приводит к гибели инфицированных клеток, поскольку его функции блокируются продуктами жизнедеятельности патогена (Torre Е., et. al., 2009). Молекулы HSP 60 крайне эволюционно консервативны, гомологи обнаруживаются у человека и у бактерий, что приводит к запуску аутоиммунного перекрёстного ответа и синтезу аутоантител. Активируется вторичный гуморальный ответ с гиперпродукцией IgG, IgA, реакция гиперчувствительности замедленного типа, обусловливающая инфильтрацию слизистых оболочек лимфоцитами и моноцитами, развивается эффект «теплового шока» у клетки-хозяина, стимулируется развитие стресс-реакции у микроорганизма с остановкой клеточного цикла на стадии ретикулярных телец. Этот белок стимулирует синтез провоспалительных цитокинов макрофагами и эпителиальными клетками, в первую очередь TNF-a и IFN. Интерферон играет значительную роль в патогенезе, с одной стороны, контролируя распространение инфекции, а с другой, участвуя в повреждении тканей и способствуя длительной персистенции неактивной формы. Под воздействием HSP 60 происходит активация NF/cB, стимуляция эндотелиальных клеток, активация синтеза факторов адгезии. Культивирование эмбрионов в среде с аутоантителами к HSP 60 приводит к задержке развития эмбриона. Наличие подобных антител также подавляет имплантацию эмбриона. Их обнаружение часто взаимосвязано с эктопической беременностью, осложнениями при родах, снижением спонтанной фертильности (Stephens A. J., et. al., 2011).

Помимо аутонтителогенеза на гомологи HSP 60, аналог протеолитической субъединицы АТР-зависимого С1р протеиназного комплекса (ClpP) также обнаруживается у бактерий (45% идентичности при сравнении с человеческой). Stephens A.J., 2011 и соавт предполагают, что эта гомологичность приводит к дополнительному формированию антител сначала на бактериальные субъединицы, а затем и к синтезу аутоантител на человеческий гомолог.

1.2 Современные представления о патогенезе и диагностике внутриутробной инфекции плода у носительниц Chlamydia trachomatis

Встречаемость хламидийной инфекции у беременных варьирует от 0 до 37% в зависимости от возраста и социального статуса обследуемых. К примеру, в Голландии она составляет около 2,5%. {Rours G„ et. al„ 2011), а в странах со слаборазвитыми экономикой и здравоохранением - на порядок выше. Острое течение заболевания у беременных наблюдается редко, чаще имеет место хроническое, при котором происходит постоянное активное размножение возбудителя, но клинические проявления инфекции могут отсутствовать {Антонова С.С., 2005, Torre Е., et. al., 2009). Поскольку основная масса инфекционных заболеваний уро-генитального тракта остаётся нераспознанной, большинство беременных и новорождённых с инфекционной патологией не получают адекватной этиотроп-ной терапии {Виноградова КВ., 2004).

Беременность на фоне хламидиоза нередко заканчивается развитием пре-эклампсии {Haggerty C.L., et. al, 2013), преждевременными родами, самопроизвольными абортами, замершей беременностью {Виноградова КВ., 2004, Torre Е., et. al., 2009, Taylor B.D., et. al, 2011), выкидышами {Виноградова КВ., 2004, Torre Е., et. al., 2009, Howie S.E., et. al, 2011), снижением массы плода {Howie S.E., et. al, 2011; Rours G., et. al, 2011), внутриутробным инфицированием плода {Rastogi S., et. al, 1999, Howie S.E., et. al, 2011, Taylor B.D., et. al, 2011), пневмонией у новорожденного {Turren-tine M.A., et. al., 1995; Taylor B.D., et. al, 2011), развитием коньюктивита и воспалительных заболеваний у новорожденных, наблюдается рост уровня перинатальной, неонатальной и младенческой смертности {Виноградова КВ., 2004, Rours G., et. al., 2011). При изучении неонатальной смертности более чем в 30% у плода выявляется Chlamydia trachomatis в различных органах {Hernartdez-Trejo М, et al., 2013). Из новорожденных с персистирующей хламидийной инфекцией развиваются ослабленные, часто болеющие дети. Цинзерлинг A.B. (1989) и Rastogi S. с

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ботвиньева, Ирина Анатольевна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анохин В.А., Хасанова Г.Р. проблемы и новые направления в диагностике инфекционных заболеваний у детей // Рос.педиатр.журнал. - 2000.- №4.-С.32-38.

2. Антонова С.С. Особенности течения беременности, родов и состояния новорождённых при различных формах хронического урогенитального хлами-диоза. Автореферат дисс. канд. мед. наук, Томск, 2005

3. Бахарева И.В. Прогностическое значение исследования амниотической жидкости у беременных с высоким риском развития внутриутробной инфекции // Росс. Мед. Журнал.-2009.- №4.- С.31-36.

4. Болотских В.М., Селютин A.B., Сельков С.А. Прогностическое значение определения интерлейкинов - 6,8 и фактора некроза опухоли-а в сыворотке крови и околоплодных водах у пациенток с преждевременнм излитием вод //

1 Ак. и гин. - 2012. - №3.- С.32-36.

5. Вееке Б. под редакцией Аксельсона Н., Крелля Й., Вееке Б. Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу: Методы и применение. М., Мир., 1977,41-73.

6. Виноградова И.В. Эпидемиология, диагностические критерии и течение хламидийной инфекции у новорождённых детей. Автореферат дисс. канд.

I

мед. наук, Москва, 2004

7. Ганковская Л.В., Ковальчук Л.В., Бахарева И.В., Грищук А.Ю., Долгина E.H., Ганковская O.A., Макаров О.В. Цитокины у беременных с вирусной инфекцией // Росс.мед. журнал. - 2008.- №6.- С.22-24.

I

8. Евсюкова И.И. Хламидийная инфекция у новорожденных // Педиатрия. -1997.- №3.- С.77-80.

9. Евсюкова И.И., Королева Л.И., Савичева A.M., Фоменко Б.А. Особенности клинического состояния и персистенция Chlamydia trachomatis у детей, перенесших внутриутробную хламидийную инфекцию // Рос.вестн. перинатол. - 2000.-№1.-С. 14-17.

I

j

Ю.Зорин H.A. Высокочувствительные варианты количественного иммуноэлек-трофореза//Лабораторное дело - 1983 - №10 - с.40-43.

П.Зорин H.A., Левченко В.Г., Зорина P.M., Зорина В.Н. Роль макроглобулинов в репродуктивной функции (Обзор литературы)// Акушерство и гинекология - 2005 - №4 - с.7-9

12.Зорина В.Н., Зорина P.M., Левченко В.Г., Воронина Е.А, Зорин H.A. Концентрация комплексов макроглобулин - IgG, как возможный критерий для прогнозирования гестоза и оценки степени его тяжести// Клиническая и лабораторная диагностика - 2001 - №8 - С.48-49.

13.Зорина В.Н. Комплексы альфа-2-макроглобулина с иммуноглобулином G и другими белками крови человека в норме и при патологии// Автореф. Канд. дис. Москва, 2001, 20 с.

14.Зорина В.Н., Зорин Н.А Белковые компоненты врожденного иммунитета в защите от патогенной инвазии (Обзор)// ЖМЭИ-2013 - №3 - с. 111-117

15.Казанцев А.П., Попова Н.И. Внутриутробные инфекционные заболевания детей и их профилактика. -М.: Медицина, 1980. - С. 187-188.

16.Кулаков В.И., Сухих Г.Т., Кан И.Е., Верясов В.Н., Орджоникидзе Н.В. Содержание цитокинов в амниотической жидкости, пуповинной крови и сыворотке крови женщин с внутриутробной инфекцией //Ак. и гин. - 2005. - №5.-С.14-17.

17.Кухтинова Н.В., Кротов С.А., Кротова В.А. Рецидивирующие и хронические формы хламидофилеза у детей: современные стандарты диагностики, клинические особенности, схемы семейной реабилитации // Информационно-методическое пособие. Кольцово, 2004. С. 15-17.

18.Ломова H.A., Кан Н.Е., Донников А.Е., Зубков В.В., Тютюнник В.Л., Сухих Г.Т. Клинические и молекулярно-генетические предикторы реализации врожденной инфекции у новорожденных с задержкой внутриутробного развития// Акушерство и гинекология. 2013. № 8. С.35-39.

19.Макаров О.В., Бахарева И.В., Ганковская Л.В., Романовская В.В., Ганковская O.A. То11-подобные рецепторы в генезе невынашивания беременности //Акушерство и гинекология - 2008 - №2- с.22-28.

20.Макаров О.В., Ганковская Л.В., Бахарева И.В., Мезенцева М.В., Кузнецов П.А., Романовская В. В., Магомедова A.M., Ковальчук Л.В. Способ прогнозирования преждевременных родов и внутриутробного инфицирования плода // Патент RU 2486519 от 15.11.2011.

21.Макогон A.B., Вараксин H.A., Рябичева Т.Г. Уровни цитокинов при синдроме воспалительного ответа у плода //Новости «Вектор-Бест». 2007. № 3 (45). С. 9-12.

22.Макогон A.B., Вараксин H.A., Андрюшина И.В., Рябичева Т.Г. Изменение профиля цитокинов в зависимости от этиологии синдрома воспалительного ответа у плода // Новости «Вектор-Бест». 2011. № 3 (61). С. 7-12.

23.Малиновская В.В. Виферон - новый противовирусный и иммуномодули-рующий препарат // Лечащий врач. 1998. №1. С.34-37.

24.Малиновская В.В. Новый комплексный препарат Виферон и его применение в иммунореабилитации и акушерской практике // International. J. of Immuno-reabilitation. 1998. № 10. P.76-81.

25. Малкова E.M., Гавалов C.M., Гришаева O.H. Хламидийная инфекция у новорожденных детей. Кольцово. 2001.- С.3-10.

26.Маркина Л.А., Зорина В.Н., Шрамко C.B., Зорина P.M., Архипова C.B., Баженова Л.Г. Содержание реактантов воспаления в сыворотке крови женщин при воспалительных заболеваниях придатков матки и участвующих в программе экстракорпора-льного оплодотворения // Клиническая лабораторная диагностика - 2008 - №2 - с.15-17.

27.Михнина Е.А. тактика ведения женщин с хламидийной инфекцией в соответствии с современными зарубежными и российскими рекомендациями // материалы 5-й междисциплинарной научно-практической конференции «Уро-

i генитальные инфекции и репродуктивное здоровье: клинико-лабораторная

диагностика» г. Санкт-Петербург 10.06.12 http://mikhnina.ru/blog/taktika-vedeniya-zhenshhin-s-hlamidiynoy-infektsiey-v- /

28.Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир, 2000. С. 592.

29.Рыжикова JI.C., Дружинина Ю.Г., Рябичева Т.Г. и др. Новый набор реагентов

! для культивирования и митогенной активации клеток цельной крови // Ново-

сти «Вектор-Бест». 2009. № 4 (54). С. 8-12.

30.Сидорова И.С., Черниенко И.Н. Внутриутробные инфекции: хламидиоз, ми-коплазмоз, герпес, цитомегалия // Рос.вестн. перинатол. - 1998. - № 3. - С. 713.

I 31.Тареева Т.Г., Малиновская В.В., Шугинин И.О. и др. Система иммунокор-

рекции при хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях у беременных // Росс. Вестник акушера-гинеколога. 2004. Т. 4. № 5. С. 82-87.

32. Флакс Г.А., Островская П.Ю., Кантин О.М., Корсунская И.М. Влияние уро-генитальных инфекций на течение беременности и родов. Журнал «Трудный пациент» № 1 -2, 2009, с. 17-19

I

33.Цинзерлинг А.В. Хламидиозы: диагностика, роль в патологии человека // Арх.патол.- 1989.- Вып. 1. - С.3-9.

34.Ярилин А.А. Иммунология.//М.: Геотар-Медиа, 2010. 752с.

35.Abrahams VM, Visintin I, Aldo PB, Guller S, Romero R, Мог G. A role for TLRs

, in the regulation of immune cell migration by first trimester trophoblast cells. J

t

Immunol. 2005;175:8096-8104.

36.Agrawal Т., Vats V., Wallace P., Salhan S., Mittal A. Role of cervical dendritic cell subsets, co-stimulatory molecules, cytokine secretion profile and beta-estradiol in development of sequalae to Chlamydia trachomatis infection// Reprod Biol Endocrinol. 2008; 6: 46.

!

37. Armstrong PB. Proteases and protease inhibitors: a balance of activities in host-pathogen interaction.//Immunobiology. 2006; 211 (4): 263-281.

38.Baker E.N., Baker H.M. Molecular structure, binding properties and dynamics of lactoferrin// Cell. Mol. Life Sci. 2005; 62: 2531-2539.

39.Bas.S., muzzin p., vi schor TL. Chlamydia trachomatis serology: diagnostic value of outer membrane pro tein 2 compared with that of other antigens// I.Clin. Micro-biol.-2001.vol.39.-P .4082-5

40.Baud D., Goy G., Jaton K., Osterheld M., Blumer S., Borel N., Vial Y., Hohfeld P., Pospischil A., Greub G. Role of Chlamydia trachomatis in Miscarriage// Emerg Infect Dis. 2011, 17(9): 1630-1635

41.Berlutti F., Pantanella F., Natalizi T., et. al. Antiviral properties of lactoferrin - a natural immunity molecule. //Molecules. 2011; 16(8): 6992-7018.

42.Birkenmeier G. Targetting the proteinase inhibitor and immune modulatory function of human alpha-2-macroglobulin.// Modern. Asp. Immunobiol. 2001; 3: 3236.

43.Bowers E.V., Horvath J.J., Bond J.E., et. al. Antigen delivery by alpha(2)-macro-globulin enhances the cytotoxic T lymphocyte response.// J Leukoc Biol. 2009; 86(5): 1259-1268.

44.Budd A., Blandin S., Levashina E.A., Gibson T.J. Bacterial alpha2-macroglobu-lins: colonization factors acquired by horizontal gene transfer from the metazoan genome?// Genome Biol. 2004; 5(6): R38.

45.Carter C.J. APP, APOE, complement receptor 1, clusterin and PICALM and their involvement in the herpes simplex life cycle.//Neurosci Lett. 2010; 483(2): 96-100.

46.Chen F, Cheng W, Zhang S, Zhong G, Yu P. Induction of IL-8 by Chlamydia trachomatis through MAPK pathway rather than NF-kappaB pathway.//Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 2010 Apr;35(4):307-13.

47.Chiabrando, G.A. Vides, M.A Sanchez, M.C. Differential binding properties of human pregnancy zone protein- and alpha2-macroglobulin-proteinase complexes to low-density lipoprotein receptor-related protein. J. Arch. Biochem. Biophys., 2002, 398(1), 73-78.

48.Christian J, Vier J, Paschen SA, Häcker G. Cleavage of the NF-kB family protein p65/RelA by the chlamydial protease-like activity factor (CPAF) impairs proinflammatory signaling in cells infected with Chlamydiae. //J Biol Chem. 2010 Dec 31 ;285(53):41320-7.

49.Cunningham K., Stansfield S.H., Patel P., Kienzle V., Allan J.A., Huston W.M. The IL-6 response to Chlamydia from primary reproductive epithelial cells is high-

i

ly variable and may be involved in differential susceptibility to the immunopatho-logical consequences of chlamydial infection. BMC Immunol. 2013 Nov 15;14(1):50.

50.Daponte A, Pournaras S, Deligeoroglou E, Skentou H, Messinis IE. Serum inter-leukin-lß, interleukin-8 and anti-heat shock 60 Chlamydia trachomatis antibodies

i

as markers of ectopic pregnancy.// J Reprod Immunol. 2012 Mar;93(2): 102-8. 51 .Darville T, O'Neill JM, Andrews CW, Jr, Nagarajan UM, Stahl L, Ojcius DM. Toll-like receptor-2, but not toll-like receptor-4, is essential for development of oviduct pathology in chlamydial genital tract infection. J Immunol. 2003;171:6187-6197.

1 52.Dielissen PW, Teunissen DA, Lagro-Janssen TL. Chlamydia prevalence in the

general population: is there a sex difference? a systematic review. BMC Infect Dis. 2013 Nov 11;13(1):534. 53.Dieterle S. Chlamydia infections in gynecology and obstetrics // Geburtshilfe. Frauenheilkd. - 1995. - Vol. - 55. - № 9. - P. 510-517. [ 54.Dimayuga FO, Reed JL, Carnero GA, wang C, Dimayuga ER, Dimayuga VM,

Perger A, Wilson ME, Keller JN, Bruce-Keller AJ. Estrogen and brain inflammation: effects on microglial expression of MHC, costimulatory molecules and cytokines. J Neuroimmunol. 2005;161:123-136. 55.Dinkla K., Sastalla I., Godehardt A.W., et. al. Upregulation of capsule enables

J Streptococcus pyogenes to evade immune recognition by antigen-specific antibo-

i

i

i

dies directed to the G-related alpha2-macroglobulin-binding protein GRAB located on the bacterial surface.// Microbes Infect. 2007; 9(8): 922-931.

56.Doan N., Gettins P.G. Human alpha2-macroglobulin is composed of multiple domains, as predicted by homology with complement component C3.// Biochem J. 2007; 407(1): 23-30.

57.Doan N., Gettins P.G. alpha-Macroglobulins are present in some gram-negative bacteria: characterization of the alpha2-macroglobulin from Escherichia coli.// J Biol Chem. 2008; 283(42): 28747-28756.

58.Dolmer K., Gettins P.G. Three complement-like repeats compose the complete al-pha2-macroglobulin binding site in the second ligand binding cluster of the low density lipoprotein receptor-related protein.// J Biol Chem. 2006; 281(45): 3418934196.

59.Fest S, Aldo PB, Abrahams VM, Visintin I, Alvero A, Chen R, Chavez SL, Romero R, Mor G. Trophoblast-macrophage interactions: a regulatory network for the protection of pregnancy. Am J Reprod Immunol. 2007;57:55-66.

60.Franke G.C., Bockenholt A., Sugai M., et. al. Epidemiology, variable genetic organization and regulation of the EDIN-B toxin in Staphylococcus aureus from bac-teraemic patients.//Microbiology. 2010; 156(Pt 3): 860-872.

61.Franciosa G., Maugliani A., Scalfaro C., et. al. Expression of internalin A and biofilm formation among Listeria monocytogenes clinical isolates.//Int J Immunopa-thol Pharmacol. 2009; 22(1): 183-193.

62.Frazer L.C., Scurlock A.M., Zurenski M.A., Riley M.M., Mintus M., Pociask D.A., Sullivan J.E., Andrews C.W., Darville T. IL-23 Induces IL-22 and IL-17 Production in Response to Chlamydia muridarum Genital Tract Infection, but the Absence of these Cytokines does not Influence Disease Pathogenesis. //Am J Re-prod Immunol. 2013 Dec;70(6):472-84.

i i

63.French K., Yerbury J.J., Wilson M.R. Protease activation of alpha2-macroglobulin modulates a chaperone-like action with broad specificity.// Biochemistry. 2008; 47(4): 1176-1185.

64.Gammazza AM, Bucchieri F, Grimaldi LM, Benigno A, de Macario EC, Macario AJ, Zummo G, Cappello F. The molecular anatomy of human Hsp60 and its similarity with that of bacterial orthologs and acetylcholine receptor reveal a potential pathogenetic role of anti-chaperonin immunity in myasthenia gravis. Cell Mol Neurobiol. 2012 Aug; 32(6): 943-7.

65.Gonzalez-Gronow M., Selim M.A., Papalas J., Pizzo S.V. GRP78: a multifunctional receptor on the cell surface.// Antioxid Redox Signal. 2009; 11(9): 22992306.

66.Haar K., Bremer V., Houareau C., Meyer T., Desai S., Thamm M., Hamouda O. Risk factors for Chlamydia trachomatis infection in adolescents: results from a representative population-based survey in Germany, 2003-2006.// Euro Surveill. 2013 Aug 22;18(34). pii: 20562

67.Haggerty C.L., Klebanoff M.A., Uldum S.A., Bass D.C., Olsen J., Roberts J.M., Ness R.B. Prenatal Chlamydia trachomatis infection increases the risk of preeclampsia Pregnancy Hypertens 2013 Jul 1;3(3):151-154.

68.Hajikhani B Motallebi T Norouzi J Bahador A Bagheri R Asgari S Chamani-Tabriz L. Classical and Molecular Methods for Evaluation of Chlamydia trachomatis Infection in Women with Tubal Factor Infertility.//! Reprod Infertil. 2013 Jan;14(l):29-33.

69.Hall JV, Schell M, Dessus-Babus S, Moore CG, Whittimore JD, Sal M, Dill BD, Wyrick PB. The multifaceted role of oestrogen in enhancing Chlamydia trachomatis infection in polarized human endometrial epithelial cells.// Cell Microbiol. 2011 Aug; 13(8): 1183-99.

70.Hernandez-Trejo M, Herrera-Gonzalez NE, Escobedo-Guerra MR, de Haro-Cruz MD, Moreno-Verduzco ER, Lopez-Hurtado M, Guerra-Infante FM. Reporting de-

tection of Chlamydia trachomatis DNA in tissues of neonatal death cases. J Pediatr (Rio J). 2013 Oct 30. pii: S0021-7557(13)00201-5.

71.Hjelholt A , Christiansen G , Johannesson TG , Ingerslev HJ , Birkelund S . Tubal factor infertility is associated with antibodies against Chlamydia trachomatis heat shock protein 60 (HSP60) but not human HSP60. Hum Reprod. 2011 Aug;26(8):2069-76.

72.Howie S.E., Horner P.J., Home A. Chlamydia trachomatis infection during pregnancy - known unknowns.// Discov Med. - 2011. - Vol. 12(62). - p.57-64.

73.Hoyme U.B. Chlamydia infection and salpingitis // Zentralbl. Gynacol.-1992.-Vol. 114.- № 11.-P. 525-532.

74.Hueston W.J., Lenhart J.G., A decision analysis to guide antibiotic- selection for Chlamydia infection during pregnancy. // Arch.Fam.Med -1997, 6(6): 551-555.

75.Huson L.E., Authie E., Boulange A.F., et. al. Modulation of the immunogenicity of the Trypanosoma congolense cysteine protease, congopain, through complexa-tion with alpha(2)-macroglobulin.// Vet Res. 2009; 40(6): 52.

76.1keme A.C., Ezegwui H.U., Ikeako L.C., Agbata I., Agbata E. Seroprevalence of Chlamydia trachomatis in Enugu, Nigeria.// Niger J Clin Pract. 2011 Apr-Jun; 14(2): 176-80.

77.Jalal H, Delaney A, Bentley N, Sonnex C, Carne CA Molecular epidemiology of selected sexually transmitted infections// Int J Mol Epidemiol Genet. 2013 Sep 12;4(3): 167-74.

78.Kantyka T., Rawlings N.D., Potempa J. Prokaryote-derived protein inhibitors of peptidases: A sketchy occurrence and mostly unknown function.// Biochimie. 2010; 92(11): 1644-1656.

79.Kavathas P.B., Boeras C.M., Mulla M.J., Abrahams V.M. Nodi, but not the ASC inflammasome, contributes to induction of IL-lß secretion in human trophoblasts after sensing of Chlamydia trachomatis.// Mucosal. Immunol. 2013 Mar;6(2):235-

80.Kolodziej S.J., Klueppelberg H.U., Nolasco N., Ehses W., Strickland D.K., Stoops J.K. Three-dimensional structure of the human plasmin alpha2-macroglobulin complex. J. Struct. Biol., 1998, 123(2), 124-133.

81.Kuzanovic J.P., Romero R., Mazaki-Tovi S. Resistin in amniotic fluid and its association with intra-amniotic infection and inflammation// J. Matern. Fetal. Neonatal. Med. 2008. V. 21. N. 12. P. 902-916.

82.Legrand D., Elass E., Carpenter M., Mazurer J. Lactoferrin: a modulator of immune and inflammatory responses// Cell. Mol. Life Sei. 2005; 62: 2549-2559.

83.Majeroni B.A. Chlamydial cervicitis: complication and treatment options // Am. Fam.Physician. - 1994. - Vol. 49. - № 8. - P. 1825-1829.

84.Merrill E., Crowle AJ. Crossed Immunoelectrophoresis: qua-litative and quantitative considerations. J.Immunol.Meth., 1982, 50, R65-R83.

85.Michou IV Constantoulakis P Makarounis K Georgoulias G Kapetanios V, Tsili-vakos V Molecular investigation of menstrual tissue for the presence of Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis collected by women with a history of infertility. J Obstet Gynaecol Res. 2013 Oct 7. doi: 10.1111/jog.l2165.

86.Miller J.M., Martin D.H. Treatment of Chlamydia trachomatis infections in pregnant women // Drugs. - 2000. - Vol. 60. - № 3. - P. 597-605.

87.Mirza S., Wilson L., Benjamin W.H. Jr., et. al. Serine protease PrtA from Streptococcus pneumoniae plays a role in the killing of S. pneumoniae by apolactoferrin.// Infect Immun. 2011; 79(6): 2440-2450.

88.Moore A.R., Appelboam A., Kawabata K, Da Silva J.A., D'Cruz D., Gowland G., Willoughby D.A. Destruction of articular cartilage by alpha 2 macroglobulin elas-tase complexes: role in rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis., 1999, 58(2), 109113.

89.Mpiga P, Mansour S, Morisset R, Beaulieu R, Ravaoarinoro M. Sustained inter-leukin-6 and interleukin-8 expression following infection with Chlamydia tra-

choamtis serovar L2 in a HeLa/THP-1 cell co-culture model. Scand J Immunol. 2006;63:199-207.

90.0sman I., Young A., Ledingham M. et al. Leukocyte density and proinfl ammato-ry cytokine expression in human fetal membranes, decidua, cervix and myometrium before and during labour at term // Mol. Hum. Reprod. 2003. V. 9. № 1. P. 41-45.

91.Petersen C.M. Alpha-2-macroglobulin and pregnancy zone protein. Serum level, alpha-2-macroglobulin receptors, cellular synthesis and aspects of function in relation to immunology//Dan.Med.Bull. - 1993. - V. 40. - p. 409-446.

92.Puddu P., Latorre D., Carollo M., et. al. Bovine lactoferrin counteracts Toll-like receptor mediated activation signals in antigen presenting cells.// PLoS One. 2011; 6(7): e22504.

93.Rastogi S., Kapur S., Salhan S. et al. Chlamydia trachomatis infection in pregnancy: Risk factor for an adverce outcome. // Brit.J.Biomed.Seien. 1999. 56:94-98

94.Robertson S.A., Skinner R.J., Care A.S. Essential role for interleukin-10 in resistance to LPS-induced preterm labour in mice // J. Immunol. 2006. V. 177. P. 48884896.

95.Rours G.I.J.G., Duijts L.,Moll H.A., Arends L.R., de Groot R., Jaddoe V.W., Hof-man A., Steegers E.A.P., Mackenbach J.P., Ott A., Willemse H.F.M., van der Zwaan E.A.E., Verkooijen R.P., Verbrugh H.A. Chlamydia trachomatis infection during pregnancy associated with preterm delivery: a population-based prospective cohort study Eur J Epidemiol. 2011; 26(6): 493-502.

96.Rours G.I.J.G., Duijts L.,Moll H.A., Arends L.R., de Groot R., Jaddoe V.W., Hof-man A., Steegers E.A.P., Mackenbach J.P., Ott A., Willemse H.F.M., van der Zwaan E.A.E., Verkooijen R.P., Verbrugh H.A. Chlamydia trachomatis infection during pregnancy associated with preterm delivery: a population-based prospective cohort study Eur J Epidemiol. 2011; 26(6): 493-502.

97.Scharfstein J. Parasite cysteine proteinase interactions with alpha 2-macroglobulin or kininogens: differential pathways modulating inflammation and innate immunity in infection by pathogenic trypanosomatids.// Immunobiology. 2006; 211(1-2): 117-125.

98.Shariat H., Young M., Abedin M. An interesting case presentation: a possible new route for perinatal acquisition of Chlamydia //J. Perinatol. - 1992. - Vol. - 12. -№3.-P. 300-302.

99.Shaw E., Roberts D., Connor P.D. Prevalence of and risk factors for Chlamydia in a rural pregnant population // J. Fam. Pract. - 1995. - Vol. 41. - № 3. - P/ 257260.

100. Smith D.C., Spooner R.A., Watson P.D., et. al. Internalized Pseudomonas exotoxin A can exploit multiple pathways to reach the endoplasmic reticulum.// Traffic. 2006; 7(4): 379-393.

101. Sollecito D., Midulla M., Bavastrelli M. et al. Chlamydia trachomatis in neonatal respiratory distress of very preterm babies:biphasic clinical picture // Acta-Paediatr. - 1992. - Vol. 81. - № 10. - P. 788-791.

102. Speer E.M., Gentile D.A., Zeevi A. et al. // Hum. Immunol. 2006. V. 67. P. 915-923.

103. Srivastava P, Bhengraj AR, Jha HC, Vardhan H, Jha R, Singh LC, Salhan S, Mittal A. Differing effects of azithromycin and doxycycline on cytokines in cells from Chlamydia trachomatis-infected women.// DNA Cell Biol. 2012 Mar;31 (3):392-401.

104. Stief T.W., Kropf J., Kretschmer V., Doss M.O., Fareed J. Singlet oxygen ((1)02) inactivates plasmatic free and complexed alpha2-macroglobulin. Thromb Res., 2000, 98(6), 541-547

105. Suzuki Y.A., Lopez V., Lonnerdal B. Mammalian lactoferrin receptors: structure and function// Cell. Mol. Life Sci. 2005; 62: 2560-2575.

106. Stephens A J. , Aubuchon M. , Schust DJ. Antichlamydial Antibodies, Human Fertility, and Pregnancy Wastage// Infectious Diseases in Obstetrics and Gynecology, 2011 -Vol. 2011 (2011), Published online Article ID 525182, 9 pages, doi:10.1155/2011/525182- 525182

107. Taylor B.D., Haggerty C.L. Management of Chlamydia trachomatis genital tract infection: screening and treatment challenges.// Infect Drug Resist. 2011; 4: 19-29.

108. Torre E., Mulla M.J., Yu A.G., Lee S-J., Kavathas P.B., Abrahams V.M. Chlamydia trachomatis infection modulates trophoblast cytokine/chemokine production//J Immunol. 2009; 182(6): 3735-3745

109. Turrentine M.A., Newton E.R. Amoxicillin or erythromycin for the treatment of antenatal chlamydial infection: a meta-analysis. Obstet Gynecol. 1995; 86(6): 1021-5

110. Wan C, Latter JL, Amirshahi A, Symonds I, Finnie J, Bowden N, Scott RJ, Cunningham KA, Timms P, Beagley KW. Progesterone Activates Multiple Innate Immune Pathways in Chlamydia trachomatis-Infected Endocervical Cells. Am J Reprod Immunol. 2013 Nov 11. doi: 10.111 l/aji.12168

111. Winkler M. Role of cytokines and other inflammatory mediators// BJOG. 2003. V. 110. Suppl. 20. P. 118-123.

112. Wu S.M., Patel D.D., Pizzo S.V. Oxidized alpha2-macroglobulin (alpha 2M) differentially regulates receptor binding by cytokines/growth factors: implications for tissue injury and repair mechanisms in inflammation. J. Immunol. 1998, 161(8): 4356-4365.

113. Yu JL, Yu P, Li LX. HeLa cells secrete interleukin-8 and interlukin-10 response to Chlamydia trachomatis entry. Hunan Yi Ke Da Xue Xue Bao. 2003;2:174-176.

114. Zaretsky M.V., James M.A., Byrd W. et al. Transfer of inflammatory cytokines across the placenta//Obstet. Gynecol. 2004. V. 103. P. 546-550.

115. Zumoffen CM, Gil R, Caille AM, Morente C, Munuce MJ, Ghersevich SA. A protein isolated from human oviductal tissue in vitro secretion, identified as human lactoferrin, interacts with spermatozoa and oocytes and modulates gamete interaction// Hum Reprod. 2013-28(5). P. 1297-308.