ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВАКЦИН МЕТОДОМ ELISpot тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат медицинских наук Никитин, Кирилл Дмитриевич

• Никитин, Кирилл Дмитриевич
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Никитин, Кирилл Дмитриевич

СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Иммунотерапия злокачественных новообразований (обзор литературы).

1.1. Современное состояние иммунотерапии злокачественных опухолей.

1.2. Дендритные клетки.

1.3. Дендритомы.

1.4. Меланома — клиническая и иммунологическая характеристика.

1.5. Опухолевый маркер Б100.

1.6. Методы исследования иммунного ответа.

1.6.1. Метод ЕЬКро!.

1.6.2. Исследования иммунного ответа методом ЕЫ8ро1.

ГЛАВА 2. Использованные материалы и методы исследования.

2.1. Список использованных реагентов.

2.2. Методы получения клеточного материала.

1.6.3. Получение периферической крови и лейкоцитарной массы.

1.6.4. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови и лейкоцитарной массы.

1.6.5. Культивация незрелых дендритных клеток.

1.6.6. Культивация опухолевых клеток линии Ме1Ког.

2.3. Методы криоконсервации клеточного материала.

2.3.1. Замораживание мононуклеарных клеток периферической крови

2.3.2. Размораживание мононуклеарных клеток периферической крови

2.4. Методы получения опухолевого лизата.

2.4.1. Получение опухолевого лизата.

2.4.2. Определение концентрации белка в опухолевом лизате.

2.5. Методы получения дендритноклеточных вакцин.

2.5.1. Индукция терминальной дифференцировки дендритных клеток

2.5.2. Нагрузка дендритных клеток опухолевым лизатом.

2.5.3. Слияние опухолевых и дендритных клеток (получение дендритом)

2.5.3.1. Об лучение опухолевых клеток.

2.5.3.2.Получение дендритом.

2.6. Методы иммунологической оценки.

2.6.1. Проточная цитофлуориметрия.

2.6.1.1. Окрашивание клеток витальным красителем РКН67.

2.6.1.2. Реакция прямой поверхностной иммунофлуоресценции.

2.6.1.3. Проточная цитофлуориметрия.

2.6.2. Исследование уровня белка S100.

2.6.3. Оценка числа ИФН-у-продуцирующих лейкоцитов методом ELISpot.

2.7. Методы статистического анализа результатов работы.

ГЛАВА 3. Оценка изменений числа ИФН-у-продуцирующих лимфоцитов в ответ на стимуляцию дендритноклеточными вакцинами in vitro.

3.1. Схема эксперимента.

3.2. Исследование эффективности слияния опухолевых и дендритных клеток.

3.3. Исследование активации лимфоцитов.

ГЛАВА 4. Оценка иммунного ответа методом ELISpot у больных меланомой, получающих противоопухолевую вакцину на основе аутологичных дендритных клеток, нагруженных аллогенным опухолевым лизатом.

4.1. Краткое описание организации клинического исследования.

4.2. Критерии включения/невключения больных в исследование.

4.3. Цели исследования.

4.4. Исследование иммунного ответа на вакцинацию.

4.5. Характеристика больных.

4.6. Критерии оценки иммунного ответа.

4.7. Оценка иммунологических изменений.

4.8. Реакция гиперчувствительности замедленного типа и иммунный ответ.

4.9. Прогрессировать заболевания и иммунный ответ.

4.10. Уровень ЭКЮ у больных, получающих иммунотерапию.

ГЛАВА 5. Исследование иммунного ответа у больных меланомой, получающих противоопухолевую вакцину на основе опухолевых клеток, модифицированных геном СМ-С8Г.

5.1. Краткое описание организации клинического исследования.

5.2. Характеристика больных.

5.3. Исследование иммунного ответа на вакцинацию.

5.4. Уровень 8100 и иммунный ответ.

ГЛАВА 6. Обсуждение результатов исследования.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВАКЦИН МЕТОДОМ ELISpot»

Многочисленные исследования биологии опухолей и взаимоотношений между злокачественными новообразованиями и организмом в целом показали, что опухоли иммуногенны, но антигенный состав каждой конкретной опухоли уникален и индивидуален. Это свойство злокачественных новообразований легло в основу специального метода терапии — иммунотерапии. Иммунотерапия в онкологии изучает возможность лечения злокачественных новообразований за счет активизации и/или усиления противоопухолевого иммунного ответа в организме больного.

Среди современных методов иммунотерапии значительное внимание уделяется применению дендритных клеток (ДК) и препаратов на их основе. Пилотные клинические исследования показали, что ДК, нагруженные опухолевыми антигенами, вызывают развитие иммунного ответа, специфичного против опухолеассоциированных антигенов. Для нагрузки ДК опухолевыми антигенами разработаны различные методы, включая нагрузку синтетическими пептидами, опухолевыми лизатами, опухолевой РНК (Mayordomo J. et al., 1995; Celluzzi С. et al., 1996; Hsu F. et al., 1996; J. et al., 1997; Nestle F. et al., 1998; Gong Koido S. et al., 2000; Paglia P. et al., 2000; Russo V et al., 2000).

Принципиальным преимуществом иммунотерапии с применением ДК является теоретическая возможность индукции противоопухолевого ответа против всех антигенов, имеющихся в опухоли, без необходимости их идентификации. Тем не менее, остается ряд нерешенных вопросов. Так, традиционные критерии оценки эффективности лечения (опухолевый ответ, выживаемость и тому подобные), применяющиеся при исследовании лучевых, хирургических и химиотерапевтических методов лечения, недостаточно чувствительны для оценки эффективности иммунотерапевтических препаратов (Hoos et al., 2010). Кроме того, исследования новых противоопухолевых препаратов проводятся в первую очередь у больных поздними стадиями онкологических заболеваний, после того, как остальные методы лечения себя исчерпали, — то есть у людей с высокой вероятностью иммунологических нарушений.

В связи с этим приобретает особую важность разработка новых методов для оценки эффективности иммунотерапии онкологических заболеваний.

Предложено несколько методов оценки иммунного ответа у онкологических больных — исследование иммунного статуса, пролиферативные и цитотоксические тесты с лимфоцитами, тетрамерный анализ. Одним из наиболее удобных в практическом отношении и при этом высокоточным методом представляется реакция ELISpot — Enzyme-Linked ImmunoSpot — твердофазная модификация метода иммуноферментного анализа, позволяющая идентифицировать изменения иммунореактивности организма на уровне отдельных клеток. Однако, методика ELISpot изначально предложена для выявления В-лимфоцитов, продуцирующих специфические антитела, и широко используется для оценки вакцин для профилактики инфекционных заболеваний. Применение метода ELISpot для исследования противоопухолевых вакцин остается недостаточно изученным.

Цель исследования

Оценить с помощью метода ELISpot иммунный ответ при использовании терапевтических противоопухолевых вакцин.

Задачи исследования

• адаптировать методику ELISpot для оценки иммунного ответа у больных, получавших противоопухолевую иммунотерапию вакцинами на основе аутологичных дендритных клеток (аутоДК), нагруженных опухолевым лизатом, или аллогенных генно-модицифированных опухолевых клеток (гм-ОпК — вакцина «Мелавак»);

• изучить in vitro активацию лимфоцитов (увеличение числа интерферон [ИФН]-у-продуцирующих лимфоцитов) в ответ на стимуляцию аутологичными ДК, нагруженными опухолевыми антигенами;

• предложить критерии оценки иммунного ответа у больных злокачественными новообразованиями и оценить на их основе активацию лимфоцитов больных меланомой кожи, получаюших противоопухолевые вакцины на основе аутоДК или гм-ОпК в рамках клинического исследования;

• оценить связь между иммунным ответом на вакцинотерапию и другими клиническими и иммунологическими показателями.

Научная новизна работы

Впервые адаптирована методика ELISpot для исследования иммунных реакций у больных, получающих противоопухолевые вакцины на основе аутоДК и гм-ОпК.

Впервые с помощью метода ELISpot проведено исследование активации лимфоцитов in vitro в ответ на применение противоопухолевых вакцин на основе аутоДК.

Впервые предложены критерии оценки иммунологических изменений, выявляемых методом ELISpot у больных, получающих вакцинацию противоопухолевыми вакцинами на основе аутоДК и гм-ОпК.

Впервые оценен иммунный ответ у больных меланомой, получающих вакцины на основе аутоДК или гм-ОпК, в рамках клинического исследования.

Впервые исследована связь иммунного ответа с рядом клинических и иммунологических показателей.

Научно-практическая значимость работы

Результаты работы свидетельствуют о перспективности исследования новых иммунотерапевтических препаратов с помощью метода ЕЫБро!. Получены важные сведения об исследованных вакцинах, показана целесообразность проведения клинического исследования противоопухолевой вакцины на основе ДК, слитых с опухолевыми клетками (дендритом).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста, включая библиографию и иллюстрации. Состоит из введения, литературного обзора, общей характеристики материалов и методов исследования, двух глав описания собственных исследований, главы обсуждения результатов и выводов. Список литературы включает 162 источника, в том числе 146 публикаций зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 14 рисунками и сопровождается 20 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Никитин, Кирилл Дмитриевич

ВЫВОДЫ

1. В результате проведенной работы метод ELISpot был успешно адаптирована и внедрена для оценки иммунного ответа у больных, получающих противоопухолевую вакцинотерапию.

2. Исследование in vitro показало статистически значимую активацию мононуклеарных клеток периферической крови (увеличение числа ИФН-у-продуцирующих лейкоцитов) в ответ на стимуляцию аутологичными дендритными клетками, нагруженными опухолевым лизатом, и дендритомами.

3. Исследование иммунного ответа методом ELISpot у больных меланомой кожи, получавших противоопухолевую вакцинотерапию, выявило активацию мононуклеарных клеток периферической крови у 30-40% больных (в зависимости от типа вакцины).

4. Связи между развитием иммунного ответа и временем до прогрессирования не выявлено; однако, отмечена статистически значимая связь между иммунным ответом и реакцией гиперчувствительности замедленного типа.

5. Выявлено увеличение частоты иммунного ответа у больных с низким уровнем опухолевого маркера S100 (то есть с наименьшей опухолевой нагрузкой) и значительное увеличение уровня S100 на протяжении вакцинации у больных без иммунного ответа, что может служить критерием для отбора кандидатов на проведение иммунотерапии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Никитин, Кирилл Дмитриевич, 2011 год

1. Барышников, А.Ю. Вакцинотерапия рака: от эксперимента к клинике / А.Ю. Барышников, Л.В. Демидов, И.Н. Михайлова, H.H. Петенко // Вестник Российской академии медицинских наук. 2007. - № 10. - С. 4648.

2. Демидов, Л.В. Профилактическая иммунотерапия метастатической меланомы (N1-2 МО) препаратом POLY-A/POLY-U после радикального хирургического лечения / Л.В. Демидов, И.Г. Богуш // Вестник РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. 1994. - Т. 5, № S. - С. 80-82.

3. Михайлова, И.Н. Первая фаза клинических испытаний противоопухолевой геномодифицированной вакцины, оценка иммунного статуса / И.Н. Михайлова, К.А. Барышников, О.С. Бурова, М.И. Лукашина, А.Л.

4. Смирнова, H.H. Петенко, И.А. Утяшев, JI.B. Демидов, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. 2006. - Т. 5, № 3. - С. 51-54.

5. Бурова, A.B. Караулов, С.Л. Киселев, Л.В. Демидов, А.Ю. Барышников и1др. // Российский биотерапевтический журнал. 2009. - Т. 8, № 4. - С. 1316.

6. Михайлова, И.Н. Вакцинотерапия меланомы дендритными клетками / И.Н. Михайлова, H.H. Петенко, Л.В. Демидов // Российский биотерапевтический журнал. 2007. - Т. 6, № 3. - С. 8-18.

7. Хатырев, Т.К. Харатишвили, К.А. Парсункова, М.Д. Алиев, А.Ю. Барышников, JI.B. Демидов и др. // Российский биотерапевтический журнал. 2007. - Т. 6, №2. - С. 39-44.

8. Харкевич, Г.Ю. Интерфероны альфа в адъювантной терапии меланомы кожи неблагоприятного прогноза: проблемы и перспективы высокодозных режимов / Г.Ю. Харкевич, JI.B. Демидов // Фарматека. 2008. - № 18. - С. 34-41.

9. Шубина, И.Ж. Адоптивная иммунотерапия злокачественных новообразований / И.Ж. Шубина, А.Г. Блюменберг, С.М. Волков, JI.B. Демидов, М.В. Киселевский // Вестник Российской академии медицинских наук. 2007. - № 11.-С. 9-15.

10. Akasaki Y. Antitumor effect of immunizations with fusions of dendritic and glioma cells in a mouse brain tumor model. / Akasaki Y., Kikuchi Т., Homma S., Abe Т., Kofe D. and Ohno T. // J. Immunother. — 2001 — 24, 106-113

11. Akiyama Y. Clinical response in Japanese metastatic melanoma patients treated with peptide cocktail-pulsed dendritic cells /Akiyama Y, Tanosaki R, Inoue N et al. // J Transí Med — 2005 3:4

12. Avigan D. Fusion cell vaccination of patients with metastatic breast and renal cancer induces immunological and clinical responses / Avigan D, Vasir B, Gong J et al. // Clin. Cancer Res. 2004; 10: 4699-708.

13. Avigan D.E. Phase I/II study of vaccination with electrofused allogeneic dendritic cells/autologous tumor-derived cells in patients with stage IV renal cell carcinoma / Avigan D.E., Vasir В., George D.J., Oh W.K., Atkins M.B.,

14. McDermott D.F, Kantoff P.W, Figlin R.A, Vasconcelles M.J, Xu Y, Kufe D, Bukowski R.M. // J Immunother. 2007 0ct;30(7):749-61

15. Azuma T. Dendritic cell immunotherapy for patients with metastatic renal cell carcinoma: University of Tokyo experience / Azuma T, Horie S, Tomita K et al. // Int. J. Urol. 2002; 9: 340-6.

16. Balch CM. Prognostic factors analysis of 17,600 melanoma patients: validation of the American Joint Committee on Cancer melanoma staging system. / Balch CM, et al // J Clin Oncol — 2001 —19: 36223634

17. Baldo M. Spontaneous regression of subcutaneous metastasis of cutaneous melanoma / Baldo M, Schiavon M. // Plast. Reconstr. Surg. 1992. - 90. - P. 1073-6

18. Banchereau J. Immune and clinical responses in patients with metastatic melanoma to CD34(+) progenitor-derived dendritic cell vaccine. / Banchereau J, Palucka AK, Dhodapkar M et al. // Cancer Res — 2001 — 61:6451-6458

19. Banchereau J. Dendritic cells and the control of immunity / Banchereau J, Steinman RM // Nature 1998, 392:245-252.

20. Barbuto J. Dendritic cell-tumor cell hybrid vaccination for metastatic cancer / Barbuto JA, Ensina LF, Neves AR et al. // Cancer Immunol. Immunother. 2004; 53: 1111-18.

21. Bastiaannet E. Level of fluorodeoxyglucose uptake predicts risk for recurrence in melanoma patients presenting with lymph node metastases / Bastiaannet E, Hoekstra OS, Oyen WJ, Jager PL, Wobbes T, Hoekstra HJ. // Ann Surg Oncol. 2006;13:919-26

22. Bedrosian I. Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients / Bedrosian I, Mick R, Xu S et al // J Clin Oncol — 2003 —21:3826-3835

23. Boczkowski D. Dendritic cells pulsed with RNA are potent antigen-presenting cells in vitro and in vivo / Boczkowski D, Nair SK, Snyder D, Gilboa E. // J Exp Med 1996; 184:465-72.

24. Bodurtha A. Spontaneous regression of malig nant melanoma / Bodurtha A. // In: Clarke WH, Goldman M, Mastrangelo JM (eds) Human malignant melanoma. Grune & Stratton, New York, 1979. 227

25. Boon T. Human T cell responses against melanoma / Boon T, Coulie PG, Van den Eynde BJ, et al. // Annu Rev Immunol 24:175-208, 2006

26. Boon T. Human T-Cell Responses Against Melanoma / Boon T., Pierre C., Benoiit J. et al. // Annu. Rev. Immunol. 2006. - 24. - 6.1-6.3

27. Bruggen P. Tumor-specific shared antigenic peptides recognized by human T cells / Bruggen P., Zhang Y., Chaux P. et al. // Immunol. Rev. 2002. - 188. -P. 51-64;

28. Celluzzi C. Peptide-pulsed dendritic cells induce antigen-specific; CTL-mediated protective tumor immunity. / Celluzzi CM, Mayordomo JI, Storkus WJ, et al. // J Exp Med 1996;183:283-7

29. Cerundolo V. Dendritic cells: a journey from laboratory to clinic. / Cerundolo V, Hermans IF, Salio M. // Nat Immunol 2004;5:7-10

30. Chang AE. A phase I trial of tumor lysate-pulsed dendritic cells in the treatment of advanced cancer / Chang AE, Redman BG, Whitfield JR et al. // Clin. Cancer Res. 2002; 8: 1021-32.

31. Copier J. Improving the efficacy of cancer immunotherapy. / Copier J, Dalgleish AG, Britten CM, et al. // Eur J Cancer. 2009;45(8): 1424-1431.

32. Czerkinsky C. A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells. / Czerkinsky C, Nilsson L,

33. Nygren H, Ouchterlony O, Tarkowski A. // J Immunol Methods — 1983 — 65 (1-2): 109-21

34. Dhodapkar MV. Antigen-bearing immature dendritic cells induce peptide-specific CD8(-)regulatory T cells in vivo in humans / Dhodapkar MV, Steinman RM. //Blood 2002;100:174-177

35. Dutoit V. Degeneracy of antigen recognition as the molecular basis for the high frequency of naive A2/Melan-A peptide multimer+ CD8+ T cells in humans / Dutoit V., Rubio-Godoy V., Pittet M. et al. // J. Exp. Med. 2002. -196.-P. 207-16

36. Eggermont MM. Randomized trials in melanoma: An update. / Eggermont MM // Surg Oncol Clin N Am 15:439-451, 2006

37. Eigentler TK. Palliative treatment of disseminated malignant melanoma: A systemic review of 41 randomised clinical trials / Eigentler TK, Caroli UM, Radny P, et al // Lancet Oncol 4:748-759, 2003

38. Escobar A. Dendritic cell immunizations alone or combined with low doses of interleukin-2 induce speciWc immune responses in melanoma patients / Escobar A, Lopez M, Serrano A et al. // Clin Exp Immunol — 2005 — 142:555-568

39. Eynde B.J. T cell defined tumor antigens / Eynde B.J., Bruggen P. // Curr. Opin. Immunol. 1997. - 9(5). - 684-93;

40. Finke LIT. Lessons from randomized phase III studies with active cancer immunotherapies—outcomes from the 2006 meeting of the Cancer Vaccine Consortium (CVC) / Finke LH, Wentworth K, Blumenstein B, et al. // Vaccine. 2007;25(suppl 2):B97-B109.

41. Gitlitz BJ. A pilot trial of tumor lysate-loaded dendritic cells for the treatment of metastatic renal cell carcinoma / Gitlitz BJ, Belldegrun AS, Zisman A et al. // J. Immunother. 2003; 26: 412-19.

42. Gogas H. Prognostic significance of autoimmunity during treatment of melanoma with interferon / Gogas, H., Ioannovich, J., Dafni, U., et al. // N Engl J Med 2006;354:709-18

43. Gong J. Induction of antigen-specific antitumor immunity with adenovirus transduced dendritic cells / Gong J, Chen L, Chen D, et al. // Gene Ther 1997;4:1023-8

44. Gong J. Reversal of tolerance to human MUC1 antigen in MUC1 transgenic mice immunized with fusions of dendritic and carcinoma cells / Gong J., Chen D., Kashiwaba M., et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998; 95:6279-83

45. Gong J. Induction of antitumor activity by immunization with fusions of dendritic and carcinoma cells. / Gong J., Chen D., Kashiwaba M., Kufe D. // Nat. Med., 1997; 3:558-61

46. Gong J. Fusions of human ovarian carcinoma cells with autologous or allogeneic dendritic cells induce antitumor immunity / Gong J., Nikrui N., Chen D., et al. //J. Immunol., 2000; 165:1705-11

47. Guo G. Antitumor activity of a fusion of esophageal carcinoma cells with dendritic cells derived from cord blood / Guo G., Chen S., Zhang J., Luo L., Yu J., Dong H., Xu H., Su Z. Wu L. // Vaccine — 2005 — 23, 5225-5230

48. Guo HB. Clinical significance of serum SI00 in metastatic malignant melanoma / Guo HB, Stoffel-Wagner B, Bierwirth T, Mezger J, Klingmuller D. // Eur J Cancer. 1995;31 A:924-8

49. Hanagiri T. Analysis of one of the rare melanoma patients with a spontaneous CTL response to a MAGE-A3 peptide presented by HLA-A1 / Hanagiri T., Bar en N., Neyns B. et al. // Cancer Immunol Immunother. 2006. -55(2).-P. 178-8

50. Harris M. Monoclonal antibodies as therapeutic agents for cancer. / Harris M. // Lancet Oncol 2004; 5:292-302

51. Hauschild A. Predictive value of serum S100B for monitoring patients with metastatic melanoma during chemotherapy and/or immunotherapy / Hauschild A, et al. // Br J Dermatol — 1999 — 140: 1065-1071

52. Hersey P. Phase I/II study of treatment with dendritic cell vaccines in patients with disseminated melanoma / Hersey P, Menzies SW, Halliday GM et al. // Cancer Immunol Immunother — 2004 — 53:125-134

53. Hirschowitz EA. Immunization of NSCLC patients with antigen-pulsed immature autologous dendritic cells. / Hirschowitz EA, Foody T, Hidalgo GE, Yannelli JR. // Lung Cancer. 2007 Sep;57(3):365-72.

54. Hobeika AC. Enumerating antigen-specific T-cell responses in peripheral blood: a comparison of peptide MHC Tetramer, ELISpot, and intracellular cytokine analysis. / Hobeika AC, Morse MA, Osada T, et al. // J Immunother. 2005;28(l):63-72.

55. Holtl L. Allogeneic dendritic cell vaccination against metastatic renal cell carcinoma with or without cyclophosphamide / Holtl L, Ramoner R, Zelle-Rieser C et al. // Cancer Immunol. Immunother. 2005; 54: 663-70.

56. Holtl L. Immunotherapy of metastatic renal cell carcinoma with tumor lysate-pulsed autologous dendritic cell / Holtl L, Zelle-Rieser C, Gander H et al. // Clin. Cancer Res. 2002; 8: 3369-76.

57. Hoos A. A clinical development paradigm for cancer vaccines and related biologies. / Hoos A, Parmiani G, Hege K et al. // J Immunother — 2007 — 30:1-15

58. Hoos A. Improved Endpoints for Cancer Immunotherapy Trials. / Hoos, A., Eggermont, A., Janetzki, S., Wolchok, J. et al. // J Natl Cancer Inst. 2010 Sep 22; 102(18): 1388-1397.

59. Houghton N. Immunity against cancer: lessons learned from melanoma / Houghton N., Gold J., Blachere N. et al //Curr. Opin. Immunol. 2001. - 13(2). -P. 134-40

60. Hsu FJ. Vaccination of patients with B-cell lymphoma using autologous antigen-pulsed dendritic cells / Hsu FJ, Benike C, Fagnoni F, et al. // Nat Med 1996;2:52-8

61. Iinuma T. Prevention of gastrointestinal tumors based on adenomatous polyposis coli gene mutation by dendritic cell vaccine. / Iinuma T., Homma S., Noda T., Kufe D., Ohno T. and Toda G. // J. Clin. Invest. — 2004 — 113, 1307-1317

62. Jackel A. S-100 beta protein in serum, a tumor marker in malignant melanoma — current state of knowledge and clinical experience. / Jackel A, Deichmann M, Waldmann V, Bock M, Naher H. // Hautarzt. 1999;50:250-6

63. Janetzki S. MIATA—minimal information about T cell assays. / Janetzki S, Britten CM, Kalos M, et al. // Immunity. 2009;31(4):527-528.

64. Keilholz U. Immunologic monitoring of cancer vaccine therapy: results of a workshop sponsored by the Society for Biological Therapy. / Keilholz U, Weber J, Finke LH, et al. // J Immunother. 2002;25(2):97-138.

65. Kikuchi T. Results of a phase I clinical trial of vaccination of glioma patients with fusions of dendritic and glioma cells. / Kikuchi T, Akasaki Y, Irie M, Homma S, Abe T, Ohno T. // Cancer Immunol Immunother. 2001 Sep;50(7):337-44

66. Koido S. Induction of antitumor immunity by vaccination of dendritic cells transfected with MUC1RNA. / Koido S, Kashiwaba M, Chen D, et al. // J Immunol 2000;165:5713-9

67. Koido S. Dendritic cells fused with human cancer cells: morphology, antigen expression and T cell stimulation. / Koido S., Ohana M., Liu C., Nikrui N., Durfee J., Lerner A., Gong J. // Clin. Immunol., 2004; 113, 261-269

68. Koido S. The kinetics of in vivo priming of CD4 and CD8 T cells by dendritic/tumor fusion cells in MUC1 -transgenic mice. / Koido S., Tanaka Y., Chen D., Kufe D., Gong J. // J. Immunol. 2002; 168:2111-7

69. Kruijff S. S-100B concentrations predict disease-free survival in stage III melanoma patients. / Kruijff S, Bastiaannet E, Kobold AC, van Ginkel RJ, Suurmeijer AJ, Hoekstra HJ.// Ann Surg Oncol. 2009 Dec;16(12):3455-62

70. Kyte J. T cell responses in melanoma patients after vaccination with tumor-mRNA transfected dendritic cells. / Kyte JA, Kvalheim G, Lislerud K. //Cancer Immunol Immunother 56:659-675, 2007

71. Linette GP. Immunization using autologous dendritic cells pulsed with the melanoma-associated antigen gplOO-derived G280-9V peptide elicits CD8+ immunity. / Linette GP, Zhang D, Hodi FS et al // Clin Cancer Res — 2005 — 11:7692-7699

72. Liu Y. Hierarchy of alpha fetoprotein (AFP)-specific T cell responses in subjects with AFP-positive hepatocellular cancer. / Liu Y, Daley S, Evdokimova VN, Zdobinski DD, Potter DM, Butterfield LH. // J Immunol 2006; 177: 712-721

73. Lonchay C. Correlation between tumor regression and T cell responses in melanoma patients vaccinated with a MAGE antigen / Lonchay C., Bruggen P., Connerotte T. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. - 101 (Suppl.2).-P. 14631-8

74. Lotze MT. Clinical effects and toxicity of interleukin-2 in patients with cancer. / Lotze MT, Matory YL, Rayner AA et al. // Cancer 1986; 58:2764-72.

75. Maecker HT. The role of immune monitoring in evaluating cancer immunotherapy. / Maecker HT. // In: Disis ML, eds. Cancer Drug Discovery and Development: Immunotherapy of Cancer.Totowa, NJ: Humana Press; 2005:5972.

76. Märten A. Allogeneic dendritic cells fused with tumor cells: preclinical results and outcome of a clinical phase I/II trial in patients with metastatic renal cell carcinoma. / Märten A., Renoth S., Heinicke T. et al. // Human Gene Therapy 14:483-494

77. Mayordomo JI. Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity. / Mayordomo JI, Zorina T, Storkus WJ, et al. // Nat Med 1995; 1:1297-302

78. Moore A. Clinical significance of serum SI00 in metastatic malignant melanoma. / Moore et al. // Eur J Cancer — 1995 — 31A: 1898-1902

79. Morton D. Vaccine Therapy for Malignant Melanoma / Morton D., Barth A. // CA Cancer J. Clin. 1996. - 46(4). - P. 225A4

80. Nestle FO. Vaccination of melanoma patients with peptide-or tumor lysate-pulsed dendritic cells. / Nestle FO, Alijagic S, Gilliet M et al. // Nat. Med. 1998; 4: 328-32.

81. O'Neill D. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer. / O'Neill DW, Adams S, Bhardwaj N. // Blood 2004;104:2235-2246.

82. O'Rourke MG. Durable complete clinical responses in a phase I/II trial using an autologous melanoma cell/dendritic cell vaccine. / O'Rourke MG, Johnson M, Lanagan C, et al.// Cancer Immunol Immunother 52:387-395, 2003

83. Osanto S. Vaccine Trials for the Clinician: Prospects for Tumor Antigens/ Osanto S. // The Oncologist. 1997. - 2. - P. 284-99

84. Paglia P. Murine dendritic cells loaded in vitro with soluble protein prime cytotoxic T lymphocytes against tumor antigen in vivo. / Paglia P, Chiodoni C, Rodolfo, M, et al. // J Exp Med 183:317-322, 1996

85. Paglia P. Murine dendritic cells loaded in vitro with soluble protein prime cytotoxic T lymphocytes against tumor antigen in vivo. / Paglia P, ChiodoniC, Rodolfo M, Colombo MP. // J Exp Med, 1996; 183:317-22

86. Palucka AK. Single injection of CD34+ progenitor-derived dendritic cell vaccine can lead to induction of T-cell immunity in patients with stage IV melanoma. / Palucka AK, Dhodapkar MV, Paczesny S et al. // J Immunother — 2003 — 26:432—439

87. Palucka AK. Dendritic cells loaded with killed allogeneic melanoma cells can induce objective clinical responses and MART-1 specific CD8T-cell immunity. / Palucka AK, Ueno H, Connolly J, et al. // J Immunother 29:545557, 2006

88. Pandha HS. Dendritic cell immunotherapy for urological cancers using cryopreserved allogeneic tumour lysate-pulsed cells: a phase I/II study. / Pandha HS, John RJ, Hutchinson J et al. // BJU Int. 2004; 94: 412-18.

89. Porgador A. Bone marrow generated dendritic cells pulsed with a class I-restricted peptide are potent inducers of cytotoxic T lymphocytes. / Porgador A, Gilboa E. // J Exp Med 182:255-260, 1995

90. Rapoport AP. Restoration of immunity in lymphopenic individuals with cancer by vaccination and adoptive T-cell transfer. / Rapoport AP, Stadtmauer EA, Aqui N et al. // Nat Med — 2005—11:1230-1237

91. Reis e Sousa C. Dendritic cells as sensors of infection. / Reis e Sousa C. // Immunity —2001 — 14:495-498

92. Ribas A. Role of dendritic cell phenotype, determinant spreading, and negative costimulatory blockade in dendritic cell-based melanoma immunotherapy. / Ribas A, Glaspy JA, Lee Y et al // J Immunother. — 2004 — 27:354-367

93. Ribas A. Update on immunotherapy for melanoma. / Ribas A. // J Natl Compr Cane. Netw 2006, 4:687-694.

94. Ridolfi R. Improved overall survival in dendritic cell vaccination-induced immunoreactive subgroup of advanced melanoma patients. / Ridolfi R, Petrini M, Fiammenghi L et al. // J Transl Med — 2006 — 4:36

95. Romero P. Monitoring tumor antigen specific T-cell responses in cancer patients and phase I clinical trials of peptide-based vaccination. / Romero P, Cerottini JC, Speiser DE. // Cancer Immunol Immunother. 2004 Mar;53(3):249-55.

96. Roncarolo MG. Differentiation of T regulatory cells by immature dendritic cell. / Roncarolo MG, Levings MK, Traversari C. // J. Exp. Med. 2001; 193: F5-9.

97. Rosenberg SA. Observations on the systemic administration of autologous lymphokine-activated killer cells and recombinant interleukin-2 to patients with metastatic cancer. / Rosenberg SA, Lotze MT, Muul LM et al. // N Engl J Med 1985;313:1485-92.

98. Rosenberg SA. Combination therapy with interleukin-2 and alpha-interferon for the treatment of patients with advanced cancer. / Rosenberg SA, Lotze MT, Yang JC et al. // J Clin Oncol 1989; 7:1863-74.

99. Rosenberg SA. A new approach to the adoptive immunotherapy of cancer with tumour-infiltrating lymphocytes. / Rosenberg SA, Spiess P, Lafreniere R. // Science 1986; 233:1318-22.

100. Rosenberg SA. Cancer immunotherapy: moving beyond current vaccines. / Rosenberg SA, Yang JC, Restifo NP // Nat Med. 2004;10(9):909-915.

101. Rowse G. Tolerance and immunity to MUC1 in a human MUC1 transgenic murine model. / Rowse G. J., Tempero R. M., VanLith M. L., Hollingsworth M. A. and Gendler S. J. // Cancer Res. — 1998 — 58, 315-321

102. Russo V. Dendritic cells acquire the MAGE-3 human tumor antigen from apoptotic cells and induce a class I-restricted T cell response. / Russo V, Tanzarella S, Dalerba P, et al. // Proc Natl Acad Sci US A 2000;97:2185-90

103. Salcedo M. Vaccination of melanoma patients using dendritic cells loaded with an allogeneic tumor cell lysate. / Salcedo M, Bercovici N, Taylor R et al. // Cancer Immunol Immunother. — 2006 — 55:819-829

104. Salcedo M. Vaccination of melanoma patients using dendritic cells loaded with an allogeneic tumor cell lysate. / Salcedo M, Bercovici N, Taylor R, et al. // Cancer Immunol Immunother 55:819-829, 2006

105. Salcedo M. Vaccination of melanoma patients using dendritic cells loaded with an allogeneic tumor cell lysate / Salcedo M., Bercovici N., Taylor R. et al. // Cancer Immunol.Immunother. 2006. - 55. - P. 819-29

106. Schuler G. The use of dendritic cells in cancer immunotherapy. / Schuler G, Schuler-Thurner B, Steinman RM. // Curr. Opin. Immunol. 2003; 15: 138^7

107. Schultze JL. DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy. / Schultze JL, Grabbe S, von Bergwelt-Baildon MS // Trends Immunol 2004, 25:659-664.

108. Schumacher L. Human dendritic cell maturation by adenovirus transduction enhances tumor antigen-specific T-cell responses. / Schumacher L, Ribas A, Dissette VB, McBride WH, Mukherji B, Economou JS, et al. // J Immunother 2004;27: 191-200

109. Smit LH. Normal values of serum S-100B predict prolonged survival for stage IV melanoma patients. / Smit LH, Korse CM, Hart AA, Bonfrer JM, Haanen JB, Kerst JM, et al. // Eur J Cancer. 2005;41:386-92

110. Song W. Crystal dendritic cells genetically modified with an adenovirus vector encoding the cDNA for a model antigen induce protective and therapeutic antitumour immunity. / Song W, Kong HL, Carpenter H et al. // J Exp Med 1997; 186:1247-56.

111. Su Z. Immunological and clinical responses in metastatic renal cancer patients vaccinated with tumor RNA-transfected dendritic cells. / Su Z, Dannull J, Heiser A et al. // Cancer Res. 2003; 63: 2127-33.

112. Takahashi T. Dendritic cell vaccination for patients with chronic myelogenous leukemia. / Takahashi T, Tanaka Y, Nieda M et al. // Leuk. Res. 2003; 27: 795-802.

113. Tanaka Y. Vaccination with allogeneic dendritic cells fused to carcinoma cells induces antitumor immunity in MUC1 transgenic mice. / Tanaka Y., Koido S., Chen D., Gendler S. J., Kufe D. and Gong J. // Clin. Immunol. — 2001 — 101, 192-200

114. Trefzer U. Tumour-dendritic hybrid cell vaccination for the treatment of patients with malignant melanoma: Immunological effects and clinical results. / Trefzer U, Herberth G, Wohlan K, et al // Vaccine 23:2367-2373, 2005

115. Walker EB. Monitoring immune responses in cancer patients receiving tumor vaccines. / Walker EB, Disis ML. // Int Rev Immunol. 2003;22(3-4):283-319.sf/7 &

116. Wang J. Eliciting T cell immunity against poorly immunogenic tumors by immunization with dendritic cell-tumor fusion vaccines. / Wang J., Saffold S., Cao X. T., Krauss J. and Chen W. // J. Immunol. — 1998 — 161, 5516-5524

117. Wei Y. Dendritoma vaccination combined with low dose interleukin-2 in metastatic melanoma patients induced immunological and clinical responses. / Wei Y., Sticca R.P., Holmes L.M. et al. // International Journal Of Oncology 28: 585-593, 2006

118. Wheeler CJ. Vaccination elicits correlated immune and clinical responses in glioblastoma multiforme patients. / Wheeler CJ, Black KL, Liu G, et al. // Cancer Res 2008;68(14):5955-64.

119. Wierecky J. Immunologic and clinical responses after vaccinations with peptide-pulsed dendritic cells in metastatic renal cancer patients. / Wierecky J, Muller MR, Wirths S. // Cancer Res. 2006; 66: 5910-18.

120. Zippelius A. Thymic selection generates a large T-cell pool recognizing a self-peptide in humans / Zippelius A., Pittet M., Batard P. et al. // J. Exp. Med. -2002.- 195(4).-P. 485-94.

121. Zorn E. A MAGE-6-encoded peptide is recognized by expanded lymphocytes infiltrating a spontaneously regressing human primary melanoma lesion. / Zorn E, Hercend T. // Eur. J.Immunol. 1999. - 29. - P. 602-7.