Helicobacter pylori: возможности уреазного дыхательного теста для диагностики и контроля терапии, внежелудочные проявления. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.04, кандидат наук Тагирова, Оксана Борисовна

• Тагирова, Оксана Борисовна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Тагирова, Оксана Борисовна

Введение. .........................5

Глава I. Обзор литературы. ........................10

1.1 Проблемы инвазивных методов диагностики Helicobacter pylori.......10

1.2. Методы неинвазивной диагностики Helicobacter pylori......................21

1.2.1. Иммунологические методы диагностики Helicobacter pylori.......21

1.2.2. Определение ДНК Helicobacter pylori в кале методом ПЦР.......25

1.2.3. Дыхательные тесты для диагностики Helicobacter pylori............28

1.3. Аммиачный уреазный дыхательный тест для диагностики Helicobacter pylori. ........................32

1.4. Возможные внежелудочные проявления Helicobacter pylori...........35

1.4.1. Возможная взаимосвязь Helicobacter pylori с ишемической болезнью сердца. ........................38

1.4.2. Возможная взаимосвязь Helicobacter pylori с циррозом печени..41

Глава II. Материалы и методы исследования. .......................46

Глава III. Результаты исследования. .......................55

3.1. Пациенты с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта. ......................55

3.1.1. Клинико-демографическая характеристика больных с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта.......................55

3.1.2. Диагностические характеристики методики обнаружения Helicobacter pylori в выдыхаемом воздухе с помощью прибора "HelicoSense"................61

3.1.3. Диагностические характеристики методики обнаружения Helicobacter pylori серологическим методом. .......................65

3.1.4. Сравнение чувствительности, специфичности, точности, прогностической ценности положительного и отрицательного результатов

дыхательного теста на приборе "HelicoSense" и серологического метода до и после лечения у пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта. ......................71

3.1.5. Зависимость выраженности жалоб пациентов, с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта, от уровня показателя инфицированности, полученного на приборе "HelicoSense".....................77

3.1.6. Зависимость локализации и глубины повреждения стенки желудочно-кишечного тракта пациентов, с эрозивно-язвенным поражением, от уровня показателя инфицированности, полученного на npH6ope"HelicoSense". .............................79

3.2. Взаимосвязь Helicobacter pylori с ишемической болезнью сердца и циррозом печени. .......................80

3.2.1. Пациенты с ишемической болезнью сердца........................80

3.2.1.1. Клинико-демографическая характеристика больных с ишемической болезнью сердца. ......................81

3.2.1.2. Взаимосвязь Helicobacter pylori с ишемической болезнью сердца. .....................82

3.2.2. Пациенты с циррозом печени. .....................85

3.2.2.1. Клинико-демографическая характеристика больных с циррозом печени. .....................85

3.2.2.2. Взаимосвязь Helicobacter pylori с циррозом печени...........85

Глава IV. Обсуждение полученных результатов. ....................88

Выводы. .....................98

Практические рекомендации. .....................99

Список литературы. ....................101

Список сокращений

,3С-УДТ - 13С уреазный дыхательный тест

CagA- cytotoxin-associated marker gene

ЫН3-УДТ - аммиачный уреазный дыхательный тест

VacA - vacuolating-associated cytotoxin

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ИК - инфракрасный

ИО - истинно отрицательный

ИП - истинно положительный

ИПП - ингибитор протонной помпы

ИФА - иммуноферментный анализ

КФК - креатинфосфокиназа

ДО - ложноотрицательный

ЛП - ложноположительный

МС - масс-спектрометр

Н11ВП — нестероидные противовоспалительные препараты

Hp - Helicobacter pylori

ПИ - показатель инфицированности

ПЦР - полимеразная цепная реакция

СОЖ - слизистая оболочка желудка

ЦП - цирроз печени

ЭГД - эрозивный гастродуоденит

ЭГДС - эзофагогастродуоденоскопия

ЯБ - язвенная болезнь

ЯБДПК — язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки ЯБЖ - язвенная болезнь желудка

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Helicobacter pylori: возможности уреазного дыхательного теста для диагностики и контроля терапии, внежелудочные проявления.»

Актуальность проблемы.

Helicobacter pylori (Нр)-инфекция является одной из наиболее широко распространенных инфекций на земном шаре. По оценкам различных авторов, во всем мире инфицированность этим микроорганизмом достигает 60% [49, 66, 111]. В России процент инфицированных, по данным Российской группы по изучению Helicobacter pylori, составляет 80-90%.

Helicobacter pylori-ассоциированные заболевания (язвенная болезнь, хронический гастродуоденит, рак желудка) занимают значительную долю в структуре болезней органов пищеварения, представляя собой важную медико-социальную проблему [17]. Этими заболеваниями страдают преимущественно лица молодого и среднего возраста, представляющие основную часть трудоспособного населения, что приводит к значительным экономическим потерям.

Согласно отчетам МЗ и социального развития РФ, заболеваемость язвенной болезнью в Российской Федерации составила в 2010 году 96,3 на 100 тысяч населения, заболеваемость в Центральном Федеральном округе -75,0 на 100 тысяч населения, причем в Московской области 72,0 на 100 тысяч населения [18].

К наиболее актуальным проблемам относится диагностика Нр-инфекции. На сегодняшний день для обнаружения Helicobacter pylori используют большое количество методов, как инвазивных, так и неинвазивных. Вместе с тем, с течением времени выяснилось, что ни один из этих методов не обладает 100% чувствительностью и специфичностью [137], и у каждого метода есть свои преимущества и недостатки. В соответствии с IV Маастрихтским соглашением (2011) диагностика Нр-инфекции должна проводиться с помощью неинвазивных методов,

преимущественно — уреазного дыхательного теста на основе нерадиактивного изотопа

13С (13С_удТ)

и иммуноферментного анализа в кале [109, 110]. В отечественной медицине эти методы практически не применяются из-за высокой стоимости, и для использования в клинической практике они остаются недоступным.

Чаще всего при диагностике Hp-инфекции применяют морфологическое исследование и уреазный тест (Clo-test). Эти методы являются инвазивными, что приводит к увеличению количества эндоскопических исследований. Кроме того, при проведении эзофагогастородуоденоскопии увеличивается и вероятность реинфицирования хеликобактериозом в случае недостаточной обработки эндоскопического оборудования. В России также проводились единичные исследования аммиачного уреазного дыхательного теста (ИНз-УДТ) на основе мочевины нормального изотопного состава.

Поэтому чрезвычайно актуальным является исследование диагностических характеристик различных методов, а также совершенствование и внедрение в практическую медицину новых неинвазивных высокоинформативных методов диагностики хеликобактериоза, в том числе аммиачного уреазного дыхательного теста, основанного на использовании мочевины нормального изотопного состава, проводимого на приборе "HelicoSense".

Другим актуальным вопросом является взаимосвязь Helicobacter pylori с внежелудочными проявлениями. Широко обсуждалось, что Helicobacter pylori, помимо поражения желудочно-кишечного тракта, может вызывать ряд патологических изменений в других органах и системах. При этом, поражения носят как органный, так и системный характер. Перечень этих заболеваний довольно обширен (поражения сердечно-сосудистой системы, головного мозга, заболевания легких, заболевания крови, аутоиммунную патологию, заболевания печени, кожных покровов и некоторые другие

заболевания) [5, 37, 39, 67]. В генезе некоторых из них роль Helicobacter pylori можно считать доказанной (в соответствии с рекомендациями Маастрихт IV, 2011г., это относится к идиопатической тромбоцитопенической пурпуре и идиопатической железо- и Bi2-дефицитной анемии) [109, 110], в генезе других заболеваний - роль инфекции предполагается, но имеющиеся научные данные противоречивы и требуют дальнейшего изучения. В частности, существуют теории участия Helicobacter pylori в патогенезе ишемической болезни сердца и цирроза печени. В связи с большой распространенностью этих заболеваний, данная проблема не утрачивает своей актуальности на протяжении многих лет.

Целью настоящего исследования является определение возможностей аммиачного уреазного дыхательного теста на приборе "HelicoSense" для диагностики и контроля терапии у пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта, и взаимосвязи Helicobacter pylori с развитием ишемической болезни сердца и цирроза печени.

Задачи исследования.

1. Определить диагностические характеристики методики обнаружения Helicobacter pylori в выдыхаемом воздухе с помощью прибора "HelicoSense" (аммиачного уреазного дыхательного теста) до и после лечения у пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта.

2. Определить диагностические характеристики методики полуколичественного определения антител IgG к Helicobacter pylori в сыворотке крови иммунохемилюминесцентным методом с помощью анализатора IMMULITE 2000 (серологического метода) до и после лечения у пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта.

3. Сравнить чувствительность, специфичность, точность, прогностическую ценность положительного и отрицательного результатов аммиачного уреазного дыхательного теста и серологического метода до и после лечения у пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта.

4. Оценить зависимость выраженности жалоб пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта и показателем инфицированности более 1,1 от уровня показателя инфицированности, полученного при помощи аммиачного уреазного дыхательного теста.

5. Оценить зависимость локализации и глубины повреждения стенки желудочно-кишечного тракта пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта и показателем инфицированности более 1,1 от уровня показателя инфицированности, полученного при помощи аммиачного уреазного дыхательного теста.

6. Сравнить процент и показатель инфицированности, полученный при помощи аммиачного уреазного дыхательного теста, в группах пациентов с ишемической болезнью сердца и без ишемической болезни сердца, с циррозом печени и без цирроза печени.

Научная новизна.

Впервые изучена прогностическая ценность положительного и отрицательного результатов аммиачного уреазного дыхательного теста, полученных на приборе "НеПсоБепБе". Впервые при сравнении серологического метода и аммиачного уреазного дыхательного теста выявлено, что для контроля эрадикационной терапии более точными диагностическими характеристиками обладает аммиачный уреазный дыхательный тест. Впервые изучена связь количественного результата показателя инфицированности с жалобами пациентов и глубиной и

локализацией повреждения желудочно-кишечного тракта. Установлено, что статистически значимой ассоциации между наличием Helicobacter pylori и развитием ишемической болезни сердца и цирроза печени нет.

Практическая значимость.

Результаты настоящего диссертационного исследования свидетельствуют о возможности использования неинвазивного аммиачного уреазного дыхательного теста на приборе "HelicoSense", основанного на применении мочевины нормального изотопного состава, для скрининга хеликобактериоза у пациентов с эрозивно-язвенным поражением желудочно-кишечного тракта. Возможно использование данного теста для контроля эрадикации Helicobacter pylori. Данные исследования также подтверждают возможность использования методики полуколичественного определения антител IgG к Helicobacter pylori в сыворотке крови иммунохемилюминесцентным методом с помощью анализатора IMMULITE 2000 (серологический метод) для скрининга хеликобактериоза. Получены аргументы, в пользу того, что следует обращать внимание на количественный результат дыхательного теста, так как он может быть ассоциирован с локализацией и глубиной повреждения слизистой желудочно-кишечного тракта и с выраженностью жалоб пациентов. Данные, полученные в ходе настоящего исследования, обосновывают нецелесообразность изучения роли Helicobacter pylori в развитии ишемической болезни сердца и цирроза печени.

1.1. Проблемы инвазивных методов диагностики Helicobacter pylori.

Методы диагностики хеликобактериоза разделяют на 2 группы: инвазивные, которые требуют проведения эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС) и биопсии, и неинвазивные, при которых ЭГДС и биопсия не проводят.

К инвазивным методам относят:

- бактериологический метод;

- быстрый уреазный метод;

- определение ДНК Н. pylori слизистой оболочки желудка методом ПЦР;

морфологический метод (гистологическое, цитологическое исследование).

Необходимо отметить, что инвазивные методы диагностики использовать можно не у всех пациентов, к недостаткам инвазивных методов можно отнести риск и дискомфорт для пациента при проведении ЭГДС и взятии биоптата, возможность получения неинфицированных биоптатов, вследствие взятия материала вне места расположения колоний [46, 139]. Результаты исследования во многом зависят от соблюдения правил взятия биопсии, условий и сроков хранения полученного материала, а также от условий консервации и транспортировки материала в лабораторию.

Тем не менее, эзофагогастродуоденоскопия является одним из

важнейших методов диагностики заболеваний желудочно - кишечного

10

тракта. Наиболее полно роль ЭГДС проявляется при заболеваниях, связанных с Helicobacter pylori, которые могут не иметь собственных клинических проявлений и скрываться под «маской» гастритов и язвенной болезни.

Методы диагностики заболеваний желудочно-кишечного тракта, основанные на эндоскопии (ЭГДС) с биопсией, по-прежнему являются базовыми при диагностике Hp-инфекции в отечественной медицине [5]. И, хотя главной целью инвазивных методов является выяснение причины симптомов, а не только диагностика Helicobacter pylori [137], эти методы имеют ряд недостатков.

Необходимо соблюдение правил забора биологического материала, его транспортировки, условий и сроков хранения. Однако и в случае соблюдения этих правил, у каждого из методов есть свои пределы диагностических возможностей, которые отражены в их основных характеристиках.

Особо следует подчеркнуть необходимость строгого соблюдения правил стерилизации и дезинфекции эндоскопической аппаратуры, поскольку несоблюдение последних чревато переносом хеликобактерной инфекции, снижением эффективности или неудачей противобактериальной терапии, ложноположительными результатами диагностики. Благодаря ЭГДС с биопсией, возможно выполнение инвазивных методов, один из которых считается «золотым стандартом» диагностики Н. pylori, тем не менее, у всех методов помимо достоинств есть и свои отрицательные стороны, изложенные далее более подробно.

Бактериологический метод.

Выделение и идентификация Helicobacter pylori из биологического материала является сложным и трудоемким исследованим. Вместе с тем, в

настоящее время это исследование является единственным, позволяющим получить наиболее полную информацию о Helicobacter pylori. Материалом для бактериологического метода являются биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Данный метод диагностики является инвазивным и прямым. Он позволяет культивировать штаммы микроорганизмов, наблюдать за динамикой их роста и определять устойчивость микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Кроме того, этот метод позволяет изготавливать препараты для серологической диагностики [28].

Проведение бактериологического исследования подразумевает получение не менее 2-х биоптатов из тела и антрального отдела желудка. Для того, чтобы максимально исключить ошибки исследования (гипо- или гипердиагностика инфекции), оптимальным является взятие трёх биопсийных образцов. Изъязвления после биопсии успешно и достаточно быстро заживают. При биопсии, взятой из здоровой слизистой, риск кровотечения невелик. Но некоторые язвы иногда кровоточат, что может привести к кровотечению.

Для бактериологического исследования берется определенное количество биоптатов (таблица 1).

Таблица 1. Характеристика биопсийного материала для бактериологического исследования.

Вид исследования Количество биоптатов

Первичное обследование Средняя часть желудка - 1 Антральный отдел (вдоль большой кривизны) - 2

Повторное обследование (после лечения) Средняя часть желудка - 2 Антральный отдел (вдоль большой кривизны) - 1

Бактериальное исследование включает в себя следующие этапы:

1) сбор и транспортировка проб в лабораторию;

2) посев материала, инкубация посевов, выделение и идентификация Н. pylori;

3) выделение культур [17,38].

Helicobacter pylori является микроаэрофилом. Содержание кислорода в атмосферном воздухе слишком велико и действует на него губительно. Поэтому для того, чтобы сохранить микроорганизм в жизнеспособном состоянии, необходимо строго соблюдать правила транспортировки биопсийного материала к месту бактериологического исследования. Для продления времени транспортировки и хранения биописйного материала (до 4-5 дней) используются специальные транспортные среды - Стюарта, Кэри-Блер, Био Мерьо, Portagem pylori [28].

При получении колоний на селективной питательной среде проводится их идентификация. Она заключается в окраске мазка по Грамму и проведении 3-х биохимическиих тестов (уреазного, каталазного и оксидазного), а также использование метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) [28]. Бактериологический метод, по сравнению с другими диагностическими методами, обладает наибольшей специфичностью (до 100%), для него не характерны ложноположительные результаты. Однако чувствительность этого метода существенно ниже его специфичности и составляет, по данным разных авторов, от 56% до 81% [17, 19, 40].

Согласно данным, полученным в ведущих лабораториях мира, высеваемость Helicobacter pylori составляет не болеет 70%, а в клинических лабораториях находится в пределах 30-50% [42].

Таким образом, бактериологический метод обладает как достоинствами, так и недостатками. К недостаткам метода относятся сложные условия культивирования, длительное ожидание результата, которое составляет от

трёх до пяти дней, а в случае необходимости получения информации о чувствительности микроорганизма к антибактериальным препаратам до шести - семи дней. Кроме того, широкое применение метода в клинической практике резко ограничивают его дороговизна и инвазивность. С учётом этих недостатков возникает необходимость в использовании более дешевых методов диагностики, по информативности не уступающих бактериологическому.

Быстрый уреазный метод.

Метод основан на высокой уреазной активности хеликобактерий. На сегодняшний день нашли применение различные модификации уреазных тестов, которые преимущественно выполняются на жидкой или гелевой основе (CLO-test, Tri-Med Specialities, Osborne Park, Western Australia, Хелпил-тест и т. д.). К достоинствам этих методов относятся простота использования, отсутствие необходимости в дополнительных исследованиях и достаточно высокая точность при идентификации Helicobacter pylori на основании изменения цвета индикатора, реагирующего на повышение щёлочности среды за счёт аммиака, который выделился при разложении мочевины микробной уреазой. Как правило, в качестве индикатора применяется феноловый красный, изменяющий свой цвет с желтого на красный в период от 20 мин. до 24 часов. При низкой степени обсемененности ткани уреазная активность может быть невысокой, что может привести к ложноотрицательному результату. Кроме того, наряду с уреазопозитивными могут встречаются уреазонегативные штаммы Helicobacter pylori [59], обнаружить которые с использованием уреазного теста не представляется возможным. Другой причиной ложноположительного результата теста может являться транзиторная флора, среди которой могут встречаться протей, псевдомонады,

стрептококки и другие менее активные уреазопродуценты, присутствие которых особенно сильно сказывается при длительной экспозиции в термостате [22]. Поэтому "холодные" тесты, проводимые без инкубации в термостате при комнатной температуре, имеют большую специфичность.

Одним из "холодных" тестов является быстрый уреазный тест, который выполняется на основе твердого волокнистого носителя и носит название «Хелпил-тест». Он был разработан в 1998 г. [25] и отличается дешевизной и быстротой получения результата (от одной до трёх минут). Ещё одним важным достоинством этого теста является возможность использовать один и тот же биоптат для дальнейшего гистологического исследования. Такими свойствами не обладает ни один из существующих ныне уреазных тестов. Чувствительность и специфичность Хелпил-теста, например, у детей составляют 95%.

Количество бактерий определяет уреазную активность, которая влияет на быстроту изменения окраски индикатора. По времени изменения окраски индикатора с жёлтой на малиновую косвенно можно судить о количестве микроорганизмов:

• (+) - незначительная инфицированность - малиновое окрашивание к концу суток;

• (++) - умеренная инфицированность - малиновое окрашивание в течение 2 часов);

• (+++) - значительная инфицированность - малиновое окрашивание появляется в течение первого часа);

• (-) отрицательный результат (малиновое окрашивание не наступает). Чувствительность и специфичность метода зависят от применяемой тест-системы и связаны с характером распределения бактерий по слизистой оболочке желудка. Согласно литературным данным, Чувствительность и

специфичность составляют ответственно 75-95% и 85-100% [20, 103]. Недостатками метода являются:

• инвазивность;

• возникновение ложноотрицательных результатов после эрадикационной терапии из-за невозможности определения кокковой формы Helicobacter pylori (поскольку эта форма не проявляет ферментативной активности) [28, 38,59].

С целью более эффективной диагностики Helicobacter pylori уреазные тесты применяют совместно с гистологическим методом. Такая комбинация методов является стандартом для инвазивной диагностики Нр-инфекции.

Определение ДНК Helicobacter pylori слизистой оболочки желудка методом ПЦР.

В мире накоплен обширный клинико-лабораторный опыт по использованию метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) для идентификации видоспецифичного для Helicobacter pylori фрагмента ДНК в любой биологической среде: биоптате слизистой оболочки желудка, желудочном соке, слюне, зубном налете, смывах ротовой полости и кале [10]. Тест применяется при научных исследованиях, поскольку с его помощью можно типировать штаммы бактерий и дифференцировать их. Он позволяет выполнять эпидемиологические исследования, отличать случаи рецидива инфекции от реинфицирования, особенно при внутрисемейном заражении.

Методика ПЦР состоит из 3-х последовательных этапов:

• выделение ДНК из клинического образца;

• амплификация специфических фрагментов ДНК;

• определение продуктов амплификации.

Если нет возможности провести исследование сразу, образцы помещаются в морозильную камеру и хранятся при температуре - 20°С и ниже.

Многочисленные исследования подтвердили высокие показатели чувствительности и специфичности ПЦР (до 100%) [28, 101]. Однако, частота обнаружения микробного антигена в различных биологических материалах, может быть значительно ниже по сравнению с результатами исследования биоптатов. Так, в исследовании Sahin F.I. и соавт. [128], хеликобактерии были обнаружены лишь в 45% образцов зубном налета по сравнению со 100% в биоптате слизистой оболочки желудка. Специфичность метода также может существенно варьировать в зависимости от используемого праймера и условий проведения реакции, что объясняет довольно широкий разброс точности ПЦР в разных исследованиях.

Для оценки генетических характеристик необходимо изучение специфических генов Helicobacter pylori. Геном Helicobacter pylori содержит приблизительно 1600 генов [83]. Ряд генов Helicobacter pylori определяет продукцию одноименных специфических белков, которые относят к факторам патогенности. Чем больше таких генов, тем выше патогенность и агрессивность микроорганизма. Большое значение при формировании патогенности Helicobacter pylori имеют гены, находящиеся на островке патогенности - области хромосомы, концентрирующей большое количество генов, фланкированных генетическими повторами. Островок патогенности Н. pylori содержит приблизительно 20 генов [75]. Следует заметить, что с выявлением новых генов и их продуктов, спектр факторов патогенности Helicobacter pylori постоянно расширяется.

Необходимо особо отметить способность ПЦР распознавать любой носитель генетической информации. Это относится и к активной или

кокковая формам микроорганизма. Однако именно это обстоятельство может приводить к ложноположительным результатам, так как даже часть нежизнеспособного микроорганизма может приводить к положительному результату. Возможность идентифицировать возбудителя инфекции в интервале времени 4,5-5 часов делает ПЦР диагностику наиболее приемлемой в клинической практике. Вместе с тем, препятствием на пути широкого использования ПЦР-диагностики во врачебной практике является слабое оснащенности лабораторий.

Морфологический метод.

Существует два варианта метода: гистологический и цитологический. Гистологический метод - наиболее достоверный при диагностике Нр-инфекции. Он является инвазивным и прямым. Использование этого метода позволяет обнаружить бактериальные тела в слизи, которая покрывает слизистую оболочку желудка; установить характер и степень взаимного влияния микроба и ткани макроорганизма (выраженность атрофии слизистой оболочки, воспаления, дисплазии и метаплазии эпителия и.т.д) [26, 35]. Благодаря этим несомненным достоинствам гисторогический метод получил название "золотой стандарт" [22, 46].

Важно отметить, что Helicobacter pylori впервые был обнаружен именно в гистологическом препарате Warren R. Чувствительность и специфичность метода зависит от метода окраски. Существует несколько методик, которые применяют с целью селективной окраски Helicobacter pylori. В зависимости от метода окраски, чувствительность и специфичность теста, по литературным данным, составляет соответственно 69-100% и 55-100%. Считается, что для обнаружения Helicobacter pylori достаточно окраски гематоксилин-эозином, но для того, чтобы характеризовать морфологию бактерии, рекомендуется использовать окраску по Гейте, обеспечивающую

отличную визуализацию Helicobacter pylori и основных изменений слизистой оболочки желудка, а также толуидиновым синим имеющим высокую чувствительность [17].

Морфологические изменения слизистой оболочки оцениваются с использованием Модифицированной Сиднейской Системы, которая была принята в 1996 году [61]. При изучении Helicobacter pylori на слизистой оболочке в гистологических и цитологических препаратах выделяют три степени обсеменения. Первая степень - слабая (+), до 20 микроорганизмов в поле зрения; вторая степень - средняя (++), от 20 до 50 микробных тел в поле зрения; третья степень - высокая (+++), 50 и более микроорганизмов, которые находятся в одном поле зрения.

Следует обратить внимание и на то, что в процессе приготовления гистологических препаратов частично отмывается слой поверхностной слизи, в результате чего возможна элиминация Helicobacter pylori, поскольку слизь для этого микроорганизма является зоной обитания. Для устранения этого недостатка, И.А. Морозов предложил покрывать слоем агарового геля поверхность биоптата [31].

Для увеличения специфичности гистологического метода используется иммуногистохимический метод, который позволяет обнаружить клеточные антигены. Фиксированный в формалине и залитый в парафин биопсийный материал обрабатывают моноклональными антителами против Helicobacter pylori. Этот метод хорошо зарекомендовал себя при низкой степени обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori, когда как гистологический метод, так и уреазный тест дают ложноотрицательные результаты. Кроме того, иммуногистохимический метод используется для выявления кокковых форм Helicobacter pylori. С помощью моноклональных антител можно проводить количественные исследования обсемененности [38].

При цитологическом методе производится бактериоскопия пристеночной слизи желудка. Существует 3 варианта метода: imprint, crush и brush cytology. Imprint cytology - прикосновение и отпечаток люминальной поверхности биоптата к предметному стеклу. Во втором случае (crush) биоптат раздавливают на предметном стекле. По методу brush cytology слизь получают с помощью специальной щеточки, которая входит в комплект эндоскопа. Фиксированные препаратоы окрашиваются по Романовскому-Гимзе и по Паппенгейму, однако в ряде литературных источников предпочтение отдаётся окрашиванию по Грамму [32]. Наряду с Helicobacter pylori, цитологический метод позволяет позволяетобнаружить клеточную инфильтрацию, которая представлена нейтрофилами, лимфоцитами, эозинофилами и плазматическими клетками. Существенным недостатком метода является то, что он способен дать высокий процент ложноположительных результатов до и после лечения [17, 21], в связи с чем как Российская группа по изучению Helicobacter pylori, так и ряд зарубежных авторов относятся к этому методу негативно [29]. Ввиду низкой чувствительности (в среднем составляющей 18-20%), этот метод в большинстве европейских стран не используется.

Еще один метод морфологической диагностики - фазово-контрастная микроскопия. Чувствительность метода 91%, специфичность 100% [138]. Обнаружение Helicobacter pylori до гистологического исследования возможно с помощью фазово-контрастной микроскопии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тагирова, Оксана Борисовна, 2013 год

Список литературы.

1. Акопян И.Г. и др. Методы диагностики хеликобактериоза : учеб. пособие. - СПб.: Издательство «Диалект», 2008. - 88 е., ил.

2. Акопян И.Г., Васильева Е.А., Евстратова Ю.С., Козлов А.В., Кукушкина И.А., Новикова В.П. Применение газоанализаторов серии «HelicoSense» для неинвазивной дыхательной диагностики Хеликобактериоза // Методические рекомендации для врачей и руководителей лечебно-профилактических учреждений. Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Москва, 2011. - 48 с.

3. Акопян И.Г., Евстратова Ю.С., Козлов А.В., Новикова В.П., Ткаченко Е.И. Применение газоанализаторов серии «HelicoSense» для неинвазивной дыхательной диагностики хеликобактериоза // Методические рекомендации. Комитет по здравоохранению администрации Санкт-Петербурга, 2007. - 35 с.

4. Аруин Л.И. Helicobacter pylori в этиологии и патогенезе гастрита и язвенной болезни //Арх. пат. - 1990. - Т.52, №10. - С. 3-8.

5. Бардахчьян Э.А. Роль Helicobacter pylori при развитии экстрагастродуоденальных заболеваний//Экспериментальная и клиничская гастроэнтерология. - 2005. № 3. - С. 20-27.

6. Беккер М.И., Бурцева Т.И., Новикова В.П., Козлов А.В. Газоанализатор «HelicoSense» в диагностике геликобактериоза в условиях амбулаторно-поликлинических учреждений // Материалы XVI Конгресса детских гастроэнтерологов России. Актуальные проблемы абдоминальной патологии у детей. - Москва, 2009. - С. 152-153.

7. Бугаева О.И., Гречушников В.Б., Дудаева Н.Г., Нелюбин В.Н. Helicobacter pylori: современная диагностика и терапия // Издательство Саратовского медицинского университета. — 2008. - С. 105.

8. Васильева Е.А., Евстратова Ю.С., Козлов А.В., Кукушкина И.А., и др., Применение газоанализаторов серии «HelicoSense» для неинвазивной дыхательной диагностики Хеликобактериоза // Методические рекомендации для врачей и руководителей лечебно-профилактических учреждений. Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Москва, 2011. - 48 с.

9. Веливецкая Т.А. 13С-уреазный дыхательный тест на базе прецизионной масс-спектрометрии/Т.А. Веливецая, А.В. Игнатьев//Электронный журнал «Исследовано в России». - 2003. №126.-18 с.

10. Говорун В.М., Гушин А.Е., Исаков В.А., и др. Молекулярная диагностика и генотипирование Helicobacter pylori в биоптатах слизистой оболочки желудка//Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2000. - Т10. №2. - С. 12-15.

11. Говорун В.М., Гущин А.Е., Кудрявцева JI.B., и др. Диагностика Н. pylori молекулярным методом и с помощью количественного ИФА анализа концентрации антиген Н. Pylori в кале: результаты сравнительного исследования // Материалы 3-й Всероссийской научно-практической конференции Генодиагностика в современной медицине. - М., 2000. - С. 295-296.

12. Далин М.В., Кукушкина И.А., Васильева Е.А. и др. Диагностика хеликобактериоза с помощью газоанализатора «HelicoSense»//BecTHHK Российского университета дружбы народов. Серия «Медицина: Микробиология и иммунология» - 2007. - №2 - С. 5-9.

13. Дурова О. М., Исаков В. А., Иваненко Т. В. и др. // Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori: 2-й Международный симпозиум "Современные проблемы физиологии и патологии пищеварения". - М., 1999. - С. 60-63.

14. Евстратова Ю.С., Козлов А.В., Новикова В.П., Ткаченко Е.И. Применение газоанализаторов серии «HelicoSense» для неинвазивной дыхательной диагностики хеликобактериоза // Методические рекомендации. Комитет по здравоохранению администрации Санкт-Петербурга, 2007. - 35 с.

15. Ивашкин В.Т., Лапина Т.Л. Хронический гастрит: современные представления, принципы диагностики и лечения//Русский медицинский журнал. - 2002. - №10. - С. 44-50.

16. Ивашкин В.Т., Маев И.В., Лапина Т.А. и др. Рекомендации Российской Гастроэнтерологической Ассоциации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых/УРоссийский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2012. - №1. - С.87-89.

17. Исаков В.А., Домарадский И.В. Хеликобактериоз. - М.:ИД Медпрактика, 2003. - 412 с.

18. Какорина Е.П., Михайлова Л.А., Огрызко Е.В. и др. Заболеваемость населения России в 2010 году. // Статистические материалы Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Департамента развития медицинской помощи и курортного дела. ФГУ «Центральный научно-исследовательский институт организации и информатизации здравоохранения» Росздрава. Часть 1. Москва, 2011.- 124 с.

19. Кишкун АА., Садоков В.М. Значение операционных характеристик теста при выборе метода диагностики инфекции Н. pylori/УЭкспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2002. -№4. - С. 24-28.

20. Кишкун А.А., Садоков В.М., Арсенин С.Л. и соавт. Значение диагностических характеристик теста в выборе метода выявления

инфекции, вызванной Helicobacter ру1оп//Клиническая лабораторная диагностика. - 2003 - №1. - С. 36-39.

21. Ковалев H.A., Аванян H.JI., Тимченко H.A. Сравнительная оценка уреазного теста и цитологического исследования в диагностике инфекции Н.ру1оп//Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 1999. - Т.9. №5. ( Приложение №8 ):29.

22. Кожанова М.Г. Helicobacter pylori: роль в развитии гастродуоденальных заболеваний и методы диагностики//Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - № 11. - С. 52-55.

23. Козлов A.B., Томский К.А. Проведение комплексных испытаний газоанализаторов выдыхаемого воздуха «HelicoSense» для определения инфицирования бактерией Helicobacter pylori //Заключительный отчет по НИОКР. Москва: ВНТИЦ, 2007. - 77 с.

24. Корниенко Е.А. и соавт. Аммиачный дыхательный тест в диагностике инфекции Н.ру1оп.//Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. -№1.-С. 41-43.

25. Корниенко Е.А., Милейко В.Е., Гольбиц С.В. и др. О диагностике инфекции Helicobacter pylori у детей//Российский вестник перинатол. педиатрии. - 1998. - №5. - С. 34-38.

26. Корсунский A.A., Щербаков П.Л. Исаков В.А. Хеликобактериоз и болезни органов пищеварения у детей -М.: ИД,- Медпрактика-М. - 2002. -168 с.

27. Кудрявцева Л.В., Говорун В.М., Мисюрина О.Ю. и соавт. Новый неинвазивный тест для диагностики Helicobacter pylori-инфекции //Кремлевская медицина. Клинический вестник. - 2002. - №1. - С. 15— 17.

28. Кудрявцева Л.В., Щербаков П.Л., Иванников И.О. и соавт. Helicobacter pylori -инфекция: современные аспекты диагностики и терапии. Пособие для врачей. Москва. - 2005. - 78 с.

29. Лапина Т.Л. "Российские рекомендации по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori" // В кн.: Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии/Под ред. Ивашкин В.Т., Мегро Ф., Лапина Т.Л. - М.: "Триада-Х". - 1999. - С. 161-174.

30. Манилова A.A., Гетьман К.В. Роль Helicobacter pylori в патогенезе ишемической болезни сердца // Вестник РГМУ. - 2009. - №3. С. 34-35.

31. Морозов И. А. Морфологические аспекты Hp-инфекции в желудке. -Материалы V сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. - Омск. - 1997. - С. 62-66.

32. Морозов И.А. Цитологическая диагностика инфекции Helicobacter pylori в желудке/УРоссийский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2000. - Т.10. №2. - С. 7-10.

33. Морозов И.А., Матушевская В.П., Пустовойтов В.В. и соавт. Оценка надежности некоторых используемых на практике методов выявления Helicobacter pylori в желудке. Диагностика и лечение. Архангельск. -1996. - Т2. №12. - С. 22-25.

34. Пасечников В. Д., Чуков С. 3., Правдина И. А. Использование Вестерн блотанализа в диагностике Н. pylori-ассоциированной патологии гастродуоденальной зоны//Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2000. - Т. 10. № 2. - С. 63-65.

35. Поташев Л.В., Морозов В.П. Савранский В.М. и соавт. Хеликобактериоз в хирургической гастроэнтерологии. - СПб.: Судостроение, 1999. - 143 с.

36. Тагирова О.Б., Поликарпова Т.С., Огурцов П.П. Диагностические характеристики методики обнаружения Helicobacter pylori в кале методом полимеразной цепной реакции. // Материалы XIII Съезда

Научного общества гастроэнтерологов России с международным участием, 17-й Северо-Западной научной конференции «Санкт-Петербург - Фармакотерапия-2013» и 7-го Санкт-Петербургского гепатологического конгресса. - Санкт-Петербург. - 2013. - 28 с.

37. Фадеенко Г.Д. Внежелудочные эффекты инфекции Helicobacter ру1оп//Здоровье Украины. - 2006. - №21. - С. 1-5.

38. Ценева Г.Я., Рухляда Н.В., Назаров В.Е. и соавт. Патогенез, диагностика и лечение инфекции, обусловленной Helicobacter pylori. -СПб.: Человек, 2003. - 96 с.

39. Циммерман Я.С. Helicobacter pylori-инфекция: внежелудочные эффекты и заболевания (критический анализ)//Клиническая медицина. - 2006; 4: 63-67.

40. Щербаков П.Л., Вартапетова Е.Е. Современная диагностика инфекции Н. pylori. Педиатрия. 2003; 6: 87-91.

41.Яковенко A.B., Григорьев П.Я., Обуховский Б.И. и др. Helicobacter pylori-инфекция у больных циррозом печени: диагностика и вопросы терапии//Эксп. клин, гастроэнтерол. - 2006. - № 1. - С. 84-88.

42. AI-Ali J., Al-Asfar F., Dhar R., Dhar P.M., Kusum K. Diagnostic performance of gastric imprint smear for determination of Helicobacter pylori infection//World J. Gastroenterol. - 2010. - Vol.10. - P. 603-606.

43. Alem M, Alem N, Cohen H. Diagnostic value of detection of IgM antibodies to Helicobacter pylori//Exp Mol Pathol., 2002 Feb;72(l):77-83.

44. Apostolov E., AbuAl-Soud W., Nilsson I. et al. Helicobacter pylori and other Helicobacter species in gallbladder and liver of patients with chronic cholecystitis detected by immunological and molecular methods // Scand. J. Gastroenterol. - 2005. - Vol. 40. - P. 96-102.

45. Auer J., Berent R., Weber Т., Eber В. Helicobacter pylori infection, infectious burden, and coronary artery disease/Mm. J. Cardiol. - 2002. - 90. - P. 87.

46. Barther J.S., Everett E.D. Diagnosis of Campylobacter pillory infections: The «Gold standard» and the alternatives//Rev. Infect. Dis. - 1990. - Vol. 12. - P. 107-114.

47. Basso D., Stefani A., Brigato L. et al. Production of pro-inflammatory cytokines correlates to the severity of gastritis//J. Clin. Lab. Anal. - 1999. -Vol. 13, N4.-P. 194-198.

48. Bell G.D., Well W., Harrison C., Moden A., Jones P.W., Trowell J.E., Yoong A.K., Danashmend T.K., Logan R.F. 14C-urea breath analisis, a non-invasive test for Campylobacter pylori in the stomach// Lancet 1987; 6: 1367-1368.

49. Beizer C., Stoof J., Beckwith C.S. et al. Differential regulation of urease activity in Helicobacter hepaticus and Helicobacter pylori// Microbiology. -2006.-Vol. 151, N 12.-P. 3989-3995.

50. Brown P., Salmon P.R., Alvarenga C., Neumann C.S., and Read AMountford.E. Gastric cancer detection in gastric ulcer disease// Gut 1980 January; 21(1): 9-17.

51. Bulajic M., Maisonneuve P., Schneider-Brachert W. et al. Helicobacter pylori and the risk of benign and malignant biliary tract disease // Cancer. - 2002. -Vol.95.-P. 1946-1953.

52. Caldwell M.T.P., McDermott M., Jazrawi S. et al. Helicobacter pylori infection increases following cholecystectomy // Ir. J. Med. Sei. - 1995. - Vol. 164.-P. 52-55.

53. Camorlinga-Ponce M., Romo C., Gonzalez-Valencia G. et al. Topographical localisation of cagA positive and cagA negative Helicobacter pylori strains in the gastric mucosa; an in situ hybridisation study // J. Clin. Pathol. - 2004. -Vol.57.-P. 822-828.

54. Carloni E., Cremonini F., Di Caro S. et al. Helicobacter pylori related extradigestive diseases and effects of eradication therapy // Dig. Liver Dis. -2000.-32.-P. 214-216.

55. Cave D.R. How is Helicobacter pylori transmitted // Gastroenterology 1997; 113: 9-14.

56. Chen D.F., Hu L., YÍ P., Fang D.C. et al. H. pylori exist in the gallbladder mucosa of patients with chronic cholecystitis // World J. Gastroenterol. -2007.-Vol. 13, N10.-P. 1608-1611.

57. Chen D.F., Hu L., Yi P., Liu W.W. et al. H. pylori are associated with chronic cholecystitis // World J. Gastroenterol. - 2007. - Vol. 13, N 7. - P. 1119-1122.

58. Cockburn M., Collett J., Cox B. Validation of the saliva-based H. pylori test, heliSAL, and its use in prevalence surveys. - Epidemiol.Infect., - 2001. - v. 26(2).-p. 191-196.

59. Cox D.M., McLaren A., Snowden M.A. The isolation and characteristics of urease-negative variants of Helicobacter pylori. - Rev.Esp.Enf.Digest., -1990. -v.78.-s.L-p.29.

60. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection - the Maastricht III Consensus Report. // Gut 2007; 56:772-781.

61. Dixon M.F., Genta R.M., Yardley J.H. et al. Classification and grading of gastritis. The updated Sydney System. International Work shop on the Histopatholoy of Gastritis, Houston 1994//Amer. J. Surg. Pathol. - 1996. -Vol. 20. — P. 1161-1181.

62. Dore M.P., Graham D.Y. Pathogenesis of duodenal ulcer disease: the rest of story Baillieres Best Pract. Res.// Clin. Gastroenterol. - 2000. - Vol. 14, N 1. -P. 97-107.

63. Dzierzanowska-Fangrat K., Lehours P. Diagnosis of Helicobacter pylori infection // Helicobacter. Volume 11.Supplement 1, 2006, p 6-10.

64. Espinóla K.C., Rupprecht HJ., Blankenberg S. et al. Impact of infectious burden on progression of carotid atherosclerosis//Stroke. - 2002. - 33. - P. 2581-2586.

65. Faigel D.O., Magaret N., Corless C. et al. Evaluation of rapid antibody tests for the diagnosis of Helicobacter pylori infection // Am. J. Gastroenterol., -2000. - v.95. - p.72-77.

66. Feldman R.A., Eccersley A.J.R, Hardie J.M. Epidemiology of Helicobacter pylori: acguisition, transmission, population prevalence and disease - to infecton ratio. Brit.Med.Bull. 1998:54:39-53.

67. Figura N., Franceschi F., Santucci A., Bernardini G. Extragastric manifestation of Helicobacter pylori intection // Helicobacter 2010;15: 60-68.

68. Figura N., Palazzuoli A., Faglia S. et al. Infection by CagA positive Helicobacter pylori strains in patients with ischemic heart disease — Prevalence and association with exercise_induced electrocardiographic abnormalities // Dig. Dis. Sri. - 2002. - 47. - P. 831-836.

69. Franceschi F., Leo D., Fini L. Helicobacter pylori infection and ischaemic heart disease: an overview of the general literature // Dig Liver Gis. - 2005. -№37.-p. 301-308.

70. Franceschi F., Sepulveda A.R., Gasbarrini A. et al. Cross-reactivity of Anti-CagA antibodies with vascular wall antigens - Possible pathogenic link between Helicobacter pylori infection and atherosclerosis // Circulation. -2002.- 106.-P. 430-434.

71. Gabrielli M., Pola P., Gasbarrini A. Helicobacter pylori, CagA_positive strains, and ischemic stroke // Stroke 2002. - 33. - P. 1453.

72. Gasbarrini A., Franceschi F., Armuzzi A. et al. Extradigestive manifestations of Helicobacter pylori gastric infection // Gut. - 1999. - 45. - P. 19-112.

73. Gatta L., Ricci C., Tampieri A., Vaira D. Non-invasive techniques for the diagnosis of Helicobacter pylori infection// Clinical Microbiology and Infection 2003; 9(6): 489-496.

74. Gatta L., Vaki N., Ricci C, et al. Effect of Proton Pump Inhibitors and Antacid Therapy on C Urea Breath Tests and Stool Test for Helicobacter

Pylori Infection // American Journal of Gastroenterology. - 2004. - V. 99. -P. 823.

75. Ghoul L. AI., Wessler, S., Hundertmark T. Analysis of the type IV secretion system dependent cell motility of Helicobacter pylori infected epithelial cells // Biochemical and biophysical research communications. - 2004. - Vol. 322. -P. 860-866.

76. Gisbert J.T., Olivares D., Jimenez I. et al. Long-term follow-up of 13C-urea breath test results after Helicobacter pylori eradication: frequency and T-significance of borderline 6 C02 values // Aliment Pharmacol Ther. 2006. -V.23, 275-280.

77. Gonciarz M, Wloch M, Gonciarz Z. Helicobacter pylori in liver diseases. // J Physiol Pharmacol. - 2006. - 57 Suppl 3. - p. 155-61.

78. Goo M., Ki M., Lee H. Helicobacter pylori promotes hepatic fibrosis in the animal model // Lab Invest. - 2009. - №89(11). - p. 1175-1179.

79.Graham D.Y, Klien P.D, Evans D.J. et al. Campylobacter pylori detected non-invasively by 13C-urea breath test //Lancet 1985. P. 1443-1446.

80. Graham D.Y., Klein P.D., Evans D.J. et al. Campylobacter pylori detected noninvasively by the 13C-urea test//Lancet. 1987. № l.P. 1174-1177.

81. Graham D.Y., Opekun A.R., Jogi M., et al. False Negative Urea Breath Tests with H2-Receptor Antagonists: Interactions Between Helicobacter pylori Density and pH // Helicobacter. - 2004. - V. 9 (Issue 1) P. 17.

82. Graham D., Go M., Genta R. Helicobacter pylori, duodenal ulcer, gastric cancer: tunnel vision or blinders. Ann Med 1995; 27: 331-6.

83. Gressman H., Linz B., Ghai L., et. al. Gain and loss of multiple genes during the evolution of Helicobacter pylori // PLoS Genetics, 2005. - Vol. 1 (4). - P. 0419-0428.

84. Haider A.W., Wilson P.W.F., Larson M.G. et al. The association of seropositivity to Helicobacter pylori, Chlamydia pneumoniae, and

cytomegalovirus with risk of cardiovascular disease: a prospective study // J. Am Coll. Cordiol. -2002. -40. - P. 1408-1413.

85. Hanninen M.L. Sensitivity of Helicobacter pylori to different bile salts // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 1991. - Vol. 10. -P. 515-518.

86. Harvey RF, Lane JA, Nair P et al. Clinical trial: prolonged beneficial effect of Helicobacter pylori eradication on dyspepsia consultations - the Bristol Helicobacter Project //Aliment Pharmacol Ther. 2010; 32: 394^400.

87. Hirschi A.M., Makristathis A. Methods to detect Helicobacter pylori: from culture to molecular biology // Helicobacter . - 2007. - Vol.12, suppl.2. - P.6-11.

88. Hörne B.D., Muhlestein J.B., Strobel G.G. et al. Greater pathogen burden but not elevated C-reactive protein increases the risk of clinical restenosis after percutaneous coronary intervention // Am. Heart J. - 2002. - 144. - P. 491500.

89. Hynes S.O., Teneberg S., Roche N. et al. Glycoconjugate binding of gastric and enterohepatic Helicobacter spp. // Infect. Immun. - 2003. - Vol. 71. -P.2976-2980.

90. Jianzhong M., Chengdang W. Effects of several oral medications on he results of the 13C-urea breath test // Chinese Journal of Digestive Diseases. -2001.-V. 2 P. 142.

91. Jones PJ, Leatherdale ST. Stable isotope in clinical reseach: Safety reaffirmed(editorial). // Clin Sei. - 1991; 80(4): 277-280.

92. Kato M., Asaka M., Saito M. et al. Clinical usefulness of urine-based enzyme-linked immunocorbent assay for detection of antibody to Helicobacter pylori; a collaborative study in nine medical institutions in Japan // Helicobacter, - 2000. - v.5. - p. 109-119.

93. Kim D., Kim H., Kim S. Helocobacter pylori infecthion and peptic ulcer disease in patients with liver cirrhosis // The Korean Journal of Internal Medicine.-2008.-23.-p. 16-21.

94. Kosunen T.U., Seppala K., Sarna S. et al. Diagnostic value of decreasing IgG, IgA, and IgM antibody titres after eradication of Helicobacter pylori.// Lancet. - 1992;339(8798):893-5.

95. Kowalski M., Rees W., Konturek RC. et al. Detection of Helicobacter pylori specific DNA in human atheromatous coronary arteries and its association to prior myocardial infarction and unstable angina // Dig. Liver Dis. - 2002. -34.-P. 398-402.

96. Krumbiegel P., Herbarth O., Kiess W. et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection in children: Is the 15N-urine test more reliable than the 13C breath test // Scand.J. Gastroent. - 2000. - № 4. - P. 353-358.

97. Kuntz E., Kuntz H.D. Hepatology. Principles and practice. - Heidelberg: Springer Medizin Verlag, 2002. - p. 544.

98. Laine L., Estrada R., Trujillo M., et al. Effect of proton-pump inhibitor therapy on diagnostic testing for Helicobacter pylori // Ann Intern Med. -1998;129:547-50.

99. Lee A., Fox J., Hazell S. Pathogenicity of Helicobacter pylori: a perspective. - Infect.and Immun., 1993,v.61.p. 1601-1610.

100. Lee A., Megraud F. Helicobacter pylori: Techniques for Clinical Diagnosis & Basic Research. London, 1996. p. 176.

101. Lehours P, Siffre E, Megraud F. DPO multiplex PCR as an alternative to culture and susceptibility testing to detect Helicobacter pylori and its resistance to clarithromycin. // BMC Gastroenterol. - 2011. Oct 17;11:112. doi: 10.1186/1471—230X—11—112.

102. Leodolter A., Megraud F. Diagnosis of Helicobacter pylori infection.-in "The Year in Helicobacter pylori 2001", Current Opinion in Gastroenterology, -V.17. supp.l, - 2001. - p. 19-23.

103. Leodolter A., WoUe K. JVIalfertheiner P. Current Standards in the Diagnosis of Helicobacter pylori infection. - Dig. Diseases, - 2001. - v. 19. -p. 116-122.

104. Logan R. P. H., Rathbone E.B.J., Heartley V. R. Helicobacter pylori and Gastroduodenal Disease. - 2-nd Ed. - Oxford, 1992. - P. 88-107.

105. Loy C.T., Irwig L.M., Katelaris P.H. et al. Do commercial serological kits for Helicobacter pylori infection differ in accuracy? A meta-analysis // Am.J.Gastroenterol. - 2000. - v. 91. - p. 1138-1144.

106. Luzza F., Imeneo M., Marasco A. et al. Evaluation of a commercial serological kit for detection of salivary immunoglobulin G to Helicobacter pylori: a multicentre study // Eur.J. Gastroenterol.Hepatol, - 2000. - v. 12. - p. 1117-1120.

107. Magalhaes Q.D., Santos A. Isolation of a Helicobacter strain from the human liver // Gastroenterology. - 2001. - Vol. 121. - P. 1023-1024.

108. Malaistathis A., Pasching E., Schutse K., Wimmer M„ Rotter M.L., and Hirschl A.M. Detection of Helicobacter pylori in stool specimens by PCR and antigen enzyme immunoassay//J. Clin. Microbiol., 1998, 36:2772-2774.

109. Malfertheiner P., Megraud F., О'Mori an C.A., Atherton J., Axon A.T.R., Bazzoli F., Gensini G.F., Gisbert J.P., Graham D.Y., Rokkas Т., El-Omar Е.М., Kuipers E.J., European Helicobacter Pylori study group (Европейская группа по изучению Helicobacter Pylori, EHSG) Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori - отчет о согласительной конференции Маастрихт IV. Флоренция. Вестник практического врача. Спецвыпуск. 2012;1:6-22.

110. Management of Helicobacter pylori infection—the Maastricht IV/ Florence Consensus Report // Gut 2012; 61:646-664.

111. Matysiak-Budnik T, Mégraud F. Review Epidemiology of Helicobacter pylori infection with special reference to professional risk // J Physiol Pharmacol. 1997 Sep; 48 Suppl 40:3-17.

112. McNulty C.A., Nair P., Watson B.E., Uff J.S., Valori R.M. A comparison of six commercial kits for Helicobacter pylori detection // Comm. Dis. Public. Health. - 1999. - Vol.2. № 1. - P. 59-63.

113. Megraud F. Advantages and disadvantages of current diagnostic tests for the detection of Helicobacter pylori // Scand J. Gastroenterol. - 1996, - 31 suppl 215:57-62.

114. Miehlke S., Go M.F., Graham D.Y. et al. Serologic detection of Helicobacter pylori infection with cagA-positive strains in duodenal ulcer, gastric cancer, and asymptomatic gastritis // J. Gastroenterol. - 1998. -Vol.33, Suppl.l 0.-P. 18-21.

115. Neithercut W.D., El Nujumi A.M., McColl K.E.L. Measurement of urea and ammonium concentrations in gastric juice // J.Clin.Pathol.1993. № 4. P. 462-464.

116. Nieuwkerk C.M.J., Kuipers E.J. Liver cirrhosis and pepric ulcer disease: a correlation with Helicobacter pylori // Neth. J. Med. - 2000. - Vol. 56. - P. 203-205.

117. Nijevitch A.A., Yelicheva Z.M. Intragastric urea hydrolisis in children infected with Helicobacter pylori // J.Clin.Pathol. - 1995. - № 48. - P. 187.

118. Oderda G., Rapa A., Boldorini R. et al. Non-invasive tests to diagnose Helicobacter pylori infection in very young children // Gut, abstracts of XIV International Workshop on Gastroduodenal Pathology and Helicobacter pylori, Strasbourg, September 5-8. 2001. № 14/01. A75.

119. Park M., Choi S., Kim D. et al. Association between Helicobacter pylori seropositivity and the coronary artery calcium score in a screening population // Gut Liver. - 2011. - № 5. — p. 321-327.

120. Perez-Perez G., Maw A., Feingold-Link L. Longitudinal analysis of serological responses of adults to Helicobacter pylori antigens // J Infect Dis., 2010 September 15; 202(6): 916-923.

121. Prasad A., Zhu J.H., Halcox J.P.J. et al. Predisposition to atherosclerosis by infections role of endothelial dysfunction // Circulation. - 2002. - 106. - P. 184-190.

122. Purk S. M., Hong S., Jung H. Y. et al. Antigenic diversity and serotypes of Helicobacter pylori associated with peptic ulcer diseases // X EHPSG International Workshop: Abstracts-On-Disk, 1997.

123. Rasmi Y., Seyyed-Mohammadzad M. Frequency of Helicobacter pylori and cytotoxine associated gene A antibodies in patients with cardiac syndrome X // Journal of Cardiovascular Disease and Research. - 2012. -Volume 3, Issue 1 , P. 19-21.

124. Rinaldo P., Armelle M., Rizzetto M. Helicobacter species and liver diseases: association or causation? // The Lancet Infectious Diseases. - 2008. - V.8. - S.4. - p. 254-260.

125. Rogha M., Dadkhah G., Pourmoghaddas Z. Association of helicobacter pylori infection with severity of coronary heart disease // ARYA Atheroscler. -2012.-№7.-p. 138-141.

126. Rogha M., Nikvarz M., Pourmoghaddas Z. Is helicobacter pylori infection a risk factor for coronary heart disease? // ARYA Atheroscler. -2012.- №8.-p. 5-8.

127. Ruiz-Palacios G.M., Guerrero M.L., Luqueno V. et al. The role of noninvasive tests, immunoblot and the 13C-urea breath test, for the diagnosis

of Helicobacter pylori infection in epidemiologic studies of infants and children // Int.J.Med.Microb.- 2001. - № 291 (31), F-17. - P. 49.

128. Sahin F.I., Tinaz A,C., Simsek I.S. et al. Detection of Helicobacter pylori in dental plaque and gastric biopsy samples of Turkish patients by PCR-RFLP. - Acta Gastroenterol.Belg., - 2001. - v.64(2). - p. 150-152.

129. She R., Wilson A., Litwin C. Evaluation of Helicobacter pylori Immunoglobulin G (IgG), IgA, and IgM Serologic Testing Compared to Stool Antigen Testing//Clin. Vaccine Immunol. - 2009; 16(8): 1253-1255.

130. Singh R.K., McMahon A.D., Patel H. et al. Prospective analysis of the association of infection with CagA bearing strains of Helicobacter pylori and coronary heart disease // Heart. - 2002. - 88. - P. 43-46.

131. Smieja M., Gnarpe J., Lonn E. et al. Multiple infections and subsequent cardiovascular events in the Heart Outcomes Prevention Evaluation (HOPE) study // Circulation. - 2003. - 107. - P. 251-257.

132. Stalke P., Abu Al-Soud W., Bielawski K.P. et al. Detection of Helicobacter species in liver and stomach tissues of patients with chronic liver disease using polymerase chain reaction - denaturing gradient gel electrophoresis and immunohistochemistry // Scand. J. Gastroenterol. - 2005. -Vol. 40.-P. 1032-1041.

133. Stone A.F.M., Mendall M.A., Kaski J.C. et al. Effect of treatment for Chlamydia pneumoniae and Helicobacter pylori on markers of inflammation and cardiac events in patients with acute coronary syndromes - South Thames trial of antibiotics in myocardial infarction and unstable angina (STAMINA) // Circulation. - 2002. - 106. - P. 1219-1223.

134. Takashima T., Adachi K., Kawamura A. et al. Cardiovascular risk factors in subjects with Helicobacter pylori infection // Helicobacter. - 2002. -7.-P. 86-90.

135. Tamura A., Fujioka T., Nasu M. Relation of Helicobacter pylori infection to plasma vitamin B12, folic acid, and homocysteine levels in patients who underwent diagnostic coronary arteriography // Am. J. Gastroenterol. - 2002. - 97. - P. 861-866.

136. The European Helicobacter Pylori Study Group: Current European concepts in management of Helicobacter pylori infection. The Maastricht Consensus Report // Gut. - 1997. - 41. - P. 8-13.

137. Tonkic A., Tonkic M., Lehours P., Mégraud F. Epidemiology and Diagnosis of Helicobacter pylori Infection // Helicobacter. Volume 17. Supplement 1, 2012, p. 1-8.

138. Trebesius K., Panthel K. , Strobel S. Rapid and specific detection of helicobacter pylori macrolide resistance in gastric tissue by fluorescent in situ hybridization // Gut., - 2000 - v. 46. - p. 608-614.

139. Vaira D., Vakil N. Blood, urine, stool, breath, money, and Helicobacter pylori // Gut, - 2001. - v.48. - p. 287-289.

140. Wanebo H., Kennedy B., Chmiel J. et al. Cancer of the stomach. A patient care study by the American College of Surgeons // Ann Surg 1993; 218:583-92.

141. Wong B.C., Wong W, Tang VS. et al. An evaluation of whole blood testing for helicobacter pylori infection in the Chinese population // Aliment.Pharmacol.Ther. - 2000. - v. 14. - p. 331-335.

142. Wu X.T., Xiao L.J., Li X.Q., Li J.S. Detection of bacterial DNA from cholesterol gallstones by tested primers polymerase chain reaction // World J. Gastroenterol. - 1998. - Vol.4. - P. 234-237.