Геномное типирование изолятов Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis из разных регионов России тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, кандидат биологических наук Никулина, Надежда Анатольевна

• Никулина, Надежда Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Никулина, Надежда Анатольевна

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1.Таксономия рода Echinococcus.

2.1.1. История открытия видов рода Echinococcus.

2.1.2. Штаммы и генотипы E.granulosus и E.multilocularis.

2.1.3. Гостальная специфичность и распространение генотипов E.granulosus и E.multilocularis.

2.2. Характеристика геномных маркеров штаммов E.granulosus и E.multilocularis.

2.2.1. Ядерная рибосомная ДНК (рДНК).

2.2.2. Митохондриальная ДНК (мтДНК).

2.3. Методы геномного типирования изолятов E.granulosus и E.multilocularis.

2.3.1. Сравнительный анализ структуры маркерных генов.

2.3.2. Оценка полиморфизма длин рестрикционных фрагментов продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ).

2.3.3. Оценка полиморфизма длин амплифицированных фрагментов (ПДАФ).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Геномное типирование изолятов Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis из разных регионов России»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Цистный и альвеолярный гидатидозы (эхинококкозы) являются тяжелыми паразитарными заболеваниями человека и животных, наносящими большой экономический ущерб. Заболевание гидатидозом у людей приводит к длительной нетрудоспособности и может закончиться летально, а единственным способом лечения до сего дня остается хирургическое вмешательство. Поэтому всестороннее изучение возбудителей гидатидозов является актуальной проблемой ветеринарной и гуманитарной медицины.

Эхинококкозы широко распространены во многих странах мира, в том числе и в России. Данные последних лет показывают, что в определенных регионах России активную роль в эпизоотическом процессе при эхинококкозах играют отдельные хорошо адаптированные к данному промежуточному хозяину штаммы паразита. В связи с этим исследование штаммов Echinococcus granulosus и E.multilocularis приобретает определенное практическое значение, создавая основу для изучения эпидемиологии и эпизоотологии эхинококкозов, совершенствования вакцин и диагностикумов. Теоретическая значимость таких исследований заключается в уточнении генетической структуры этих видов и прояснении характера внутривидовых и межвидовых филогенетических отношений (WHO, 1981; Thompson R.C.A. and Kumaratilake L.M., 1982; McManus D.P. and Macpherson, 1984; McManus D.P., 2000 и др.).

Существующие внутри видов Е.granulosus и E.multilocularis группы имеют свои биологические, морфологические и иммунологические характеристики, которые хорошо коррелируют с генетическими особенностями штаммов. Однако идентификация штаммов Echinococcus spp. по морфологическим, биологическим, биохимическим, культуральным и иммунологическим признакам часто дает неоднозначный результат и не всегда возможна, поэтому становится явной необходимость использования методов молекулярной биологии.

В качестве ДНК-маркеров для генотипов Echinococcus spp. обычно используют фрагменты митохондриальных генов цитохром-С-оксидазы субъединица 1 (COl) и NADH-дегидрогеназы субъединица 1 (ND1), а также фрагмент ядерного рибосомного гена-внутренний транскрибирующий спейсер субъединица 1 (ITS1). На основе сравнительного анализа структуры этих генов было показано существование на земном шаре девяти генотипов (штаммов, биотипов) E.granulosus и двух генотипов E.multilocularis.

К моменту начала работы по этой теме в доступной литературе отсутствовали данные по существованию и распространению генотипов E.granulosus и E.multilocularis на территории России. Поэтому идентификация важнейших в эпизоотологическом отношении генотипов (штаммов) возбудителей гидатидозов, циркулирующих на территории России, является актуальной проблемой.

Сравнительный анализ последовательностей нуклеотидов -это дорогостоящий, трудоемкий, требующий специального оборудования и реактивов метод, поэтому он не всегда применим. В связи с этим для геномного типирования требуется разработка более простых и доступных методов, каковым является метод оценки полиморфизма длин рестрикционных фрагментов продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ). Этот подход, благодаря своей простоте и достаточно высокой чувствительности и специфичности, находит очень широкое применение для выявления внутривидового полиморфизма у различных видов гельминтов (Brindley P.J. et al., 1993; Gasser R.B. et al., 1994; Gasser R.B. and Chilton N.B., 1995; Monis P.T. et al., 1996; Hashimoto K.et al., 1997; Newton L.A. et al., 1998; Keddie E.M. et al., 1999; Rozenzvit M.C. et al., 1999; S0rensen E. et al., 1999). Исходя из вышеизложенного, является целесообразной разработка для геномного типирования изолятов Echinococcus spp. метода ПЦР-ПДРФ.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Основная цель нашего исследования - выявление циркулирующих на территории России и сопредельных государств (Казахстан, Молдова) генотипов Е.granulosus и E.multilocularis. Для этого необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести анализ известных последовательностей генов и выбрать ДНК-маркеры наиболее удобные для геномного типирования изолятов E.granulosus и E.multilocularis.

2. На основе метода ПЦР-ПДРФ разработать схемы рестрикционного анализа маркерных последовательностей.

3. Изучить возможность использования разработанных на основе метода ПЦР-ПДРФ схем рестрикционного анализа для дифференциации генотипов Echinococcus spp.

4. Осуществить геномное типирование штаммов Echinococcus spp., циркулирующих на территории России, Казахстана и Молдовы.

5. Определить уровень родства между генотипами Echinococcus spp. циркулирующими на земном шаре и генотипами, обнаруженными на территории России, Казахстана и Молдовы.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые проведена работа по выявлению генотипов Echinococcus spp. циркулирующих на территории России и сопредельных государств (Казахстана и Молдовы). Установлено, что на этих территориях встречаются генотипы Gl, G2, G5, G6 и G7. Разработана методика дифференциации генотипов E.granulosus и E.multilocularis на основе метода ПЦР-ПДРФ. Проведена сравнительная оценка различных методов геномного типирования изолятов Echinococcus spp. Обобщены сведения по гостальной специфичности и распространению генотипов E.granulosus и E.multilocularis.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Предложены схемы идентификации генотипов Echinococcus spp. на основе анализа длин рестрикционных фрагментов продуктов полимеразной цепной реакции. На основе предложенных схем был разработан «Лабораторный регламент на способ выявления внутривидового ДНК - полиморфизма Echinococcus granulosus и Echinococcus multilocularis с помощью рестрикционного анализа продуктов ПЦР», утвержденный секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН.

Предложена методика выделения ДНК из протосколексов E.granulosus. Методика также была утверждена как лабораторный регламент секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН.

Результаты исследований могут быть использованы специалистами, работающими в области биотехнологии, молекулярной биологии, систематики, иммунологии, паразитологами общебиологического, ветеринарного и медицинского профиля.

Полученные результаты также могут быть использованы для разработки вакцин и диагностикумов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертационной работы доложены на:

1. П-ой международной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (г. Москва, 18-19 октября 2000 г.).

2. Школе молодых ученых «Биотехнология - стратегия развития биологии в XXI веке» (г. Санкт-Петербург, 12-21 ноября 2000 г.).

3. П-й Всероссийской школе по Экологической генетике (г. Санкт-Петербург, 10-26 июня 2001 г.).

4. Секциях «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (декабрь 2001; сентябрь 2002 г.).

5. Научной конференции Всероссийского общества гельминтологов «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 22-23 мая 2002 г.).

6. Координационном совещании по ветеринарной паразитологии (г. Москва, 20-21 февраля 2002г.).

7. I межрегиональной научной конференции, посвященной памяти профессора А.А.Мозгового «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» (г. Новосибирск, 8 -10 октября 2002- г.)

8. Ежегодных конференциях аспирантов ВИГИС и Ученых советах ВИГИС 1999 - 2002 гг.

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, 4 работы приняты к печати.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

• Разработанные на основе метода ПЦР-ПДРФ три схемы рестрикционного анализа могут быть использованы для геномного типирования штаммов E.granulosus и E.multilocularis. Из трех разработанных и апробированных схем геномного типирования изолятов Echinococcus spp. оптимальной является схема рестрикционного анализа, включающая три этапа: первый -параллельная рестрикция фрагмента С01 с использованием R.Fokl и R.Sfa N1; второй - рестрикция фрагмента COl R.Mael или фрагмента ND1 R.MwoI; третий- рестрикция фрагмента гена COl с помощью R.Tsp5091.

• Установлено, что на территориях России, Казахстана и Молдовы циркулируют генотипы Gl, G2, G5, G6, G7, G8 и М2. По гостальной специфичности обнаруженные нами на этих территориях генотипы Echinococcus spp. не отличаются от генотипов, ранее описанных в литературе.

• Обнаруженные на территории России и сопредельных государств (Казахстан, Молдова) генотипы по структуре фрагмента митохондриального гена COl идентичны генотипам циркулирующим на земном шаре.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Материал диссертации изложен на 135 страницах машинописного текста. Состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, разделов: материалы и методы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Список литературы включает 183 источника, в том числе 22 отечественных и 161 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 27 рисунками. Приложение на 10 страницах.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Никулина, Надежда Анатольевна

6. выводы

1. Фрагменты митохондриальных генов, кодирующих первую субъединицу цитохром-С-оксидазы (COl) и первую субъединицу NADH-дегидрогеназы (ND1), могут быть использованы для геномного типирования изолятов E.granulosus и E.multilocularis методом ПЦР-ПДРФ.

2. На основе метода ПЦР-ПДРФ разработаны и апробированы три схемы рестрикционного анализа для геномного типирования штаммов Echinococcus spp.

3. Проведено типирование сорока изолятов Echinococcus spp., собранных на территории России, Казахстана и Молдовы. Установлено, что на этих территориях циркулируют генотипы G1, G2, G5, G6, G7, G8 и М2.

4. Гостальная специфичность генотипов Echinococcus spp., обнаруженных нами на территории России, Казахстана и Молдовы, не отличается от гостальной специфичности генотипов, ранее описанных в литературе.

5. Наиболее распространенными на территории России и сопредельных государств (Казахстан, Молдова) являются генотипы Gl, G6 и G7, так как на их долю приходится 79,5% от общего числа зарегистрированных случаев.

6. Обнаруженные на территории России, Казахстана и Молдовы генотипы по структуре 5' концевого участка фрагмента митохондриального гена COl идентичны генотипам, циркулирующим на земном шаре.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Никулина, Надежда Анатольевна, 2003 год

1. Абуладзе К.И. О видовом составе возбудителей эхинококкозов // Матер, научи, конф. Всесоюз. о-ва гельминтологов. -М., 1957. -4.1. -С.3-4.

2. Абуладзе К.И. К вопросу классификации тениат И Матер, секции инфекц. и инваз. б-ней научн. конф., посвящ. 40-летию Моск. вет. акдемии. М., 1960. - С.66-70.

3. Абуладзе К.И. Тениаты ленточные гельминты животных и человека и вызываемые ими заболевания. Основы цестодологии. - М.: Наука. - 1964. - T.IV. - 530с.

4. Бессонов А.С. Эхинококкозы биология возбудителей, эпизоотология, профилактика и меры борьбы // Ветеринария. - 1999. - №4. - С.49-52.

5. Вейр Б.С. Анализ генетических данных. М.: Мир. -1995.-400с.

6. Вол ох Ю.А. Эхинококкоз и альвеококкоз человека. -Фрунзе: Кыргызстан. 1965. - 350с.

7. Зеньков А.В. Некоторые биологические особенности возбудителя эхинококкоза Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) Rudolphi, 1801 у овец и свиней // Дис. . канд. вет. наук. М., 1972. -151с.

8. Исаков С.И., Сафронов М.Г. Итоги исследований по эхинококкозу и альвеококкозу животных // Тр. Якутского НИИ сельск. хоз. 1983. - Т.23. - С.203-207.

9. Носик А.Ф. Эхинококкоз животных и меры борьбы с ним // Дис. . докт. вет. наук. М., 1953. 678с.

10. Петров A.M. Глистные инвазии собак и их санитарное и экономическое значение. М.: Сельхозгиз - 1931. - С.80-87.

11. Петров A.M. Глистные болезни пушных зверей. М.: Международная книга. - 1941. - 227с.

12. Петров A.M. Современные воззрения на эпизоотологию и эпидемиологию эхинококкозов // Мед. паразитол. 1958. - №2. -С.141-148.

13. Романова Е.А., Семенова С.К., Бенедиктов И.И., Рысков А.П. Использование полимеразной цепной реакции для идентификации ДНК гельминтов из родов Trichinella, Fasciola, Echinococcus, Nematodirus, Taenia // Паразитология. 1997. - T.31, вып. 1. — C.53-65.

14. Рысков А.П. Особенности организации генома эукариот // В сб. «Организация генома». М.: Наука. - 1989. - С.45-73.

15. Рысков А.П., Романова Е.А., Бенедиктов И.И., Пенькова Р.А. Анализ генетического полиморфизма возбудителей гельминтозных заболеваний // Вестник с.-х. науки. 1990. - №6. -С.147-149.

16. Сафронов М.Г., Исаков С.И. Подвиды и штаммы эхинококков и альвеококков в Якутии // Науч.-тех. бюллетень Якутского НИИ сельск. хоз. 1982. - №9. - С.29-31.

17. Скрябин К.И., Шульц Р.С. Гельминтозы крупного рогатого скота и его молодняка. М.: Сельхозгиз. - 1937. - 157с.

18. Слепнев Н.К. Зараженность животных Echinococcus granulosus larvae в южной зоне Белоруссии // Сб. «Достижения ветеринарной науки и передового опыта животноводству». - 1974. -Вып.1. - С.93-97.

19. Ястреб В.Б. Особенности развития свиного и овечьего штаммов Echinococcus granulosus у собак // Ветеринария. 1985. -№7. - С.42-44.

20. Ястреб В.Б. Биолого-эпизоотологические особенности штаммов Echinococcus granulosus и их использование в целях профилактики эхинококкоза // Дис. . канд. вет. наук. М., 1986. -151с.

21. Anderson F.L., Crellin J.R., Nichols C.R., Shantz P.M. Evolution of a program to control hydatid disease in Central Utah // Gr. Basin. Natur. 1983. - Y.43. - P.67-72.

22. Anderson T.J., Romero C., Abal M.E., Jaenike J. Mitochondrial DNA and Ascaris microepidemiology, the composition of parasite populations from individual hosts, families and villages // Parasitology. 1995. - V.101. - P.221-229.

23. Appels R., Gerlach W.L., Dennis E.S., Swift H., Peacock W.J. Molecular and chromosomal organization of DNA sequences coding for the ribosomal RNAs in cereals // Chromosoma. 1980. - V.78. -P.293-311.

24. Awad-EI-Kariem P.M., Robinson H.A., Petry F., McDonald V., Evans D., Casemore D. Differentiation between human and animalisolates of Cryptosporidium parvum using molecular and biological markers // Parasitol. research. 1998. - V.84. - P.297-301.

25. Baldock F.C., Thompson R.C.A., Kumaratilake L.M. Strain identification of Echinococcus granulosus in determining origin of infection in a case of human disease in Australia // Trans. Royal Soc. Trop. Med. and Hyg. 1985. - V.79. -P.238-241.

26. Balajee A. S., May A., Bohr V. A. DNA repair of pyrimidine dimers and 6-4 photoproducts in the ribosomal DNA // Nucl. Acids Res. -1999. V.27. -P.2511-2520.

27. Bandi C., La Rosa G., Comincini S., Damiani G., Pozio E. Random amplified polymorphic DNA technique for the identification of Trichinella species // Parasitology. 1993. -V.107. - P.419-424.

28. Bandi C., La Rosa G., Bardin M.G., Damiani G., Comincini S., Tasciotti L., Pozio E. Random amplified polymorphic DNA fingerprints of the eight taxa of Trichinella and their comparison with allozyme analysis // Parasitology. 1995. - V.l 10 - P.401-407.

29. Bardonnet K., Piarroux R., Schneegans F., Dia L., Beurdeley A., Vuitton D.A. Hydatidosis in Mauritania: a camel strain infectious to humans // XXth Inter. Congress of Hydatiology. Turkey, 2001. - P.209.

30. Barral V., This P., Imbert-Establet D., Combes C., Delseny M. Genetic variability and evolution of the Schistosoma genome analyzed by using random amplified polymorphic DNA markers // Mol. and Biochem. Parasitol. 1993. - V.59. - P.211 -222.

31. Beagley C.T., Okada N., Wolstenholme D.R. Two mitochondrial group I introns in a metazoan, the sea anemone Metridiumsenile: One intron contains genes for subunits 1 and 3 of NADH dehydrogenase // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1996. -V. 93. - P.5619-5623.

32. Benavente R., Rose K.M., Reimer G., Hugle-Dorr В., Scheer U. Inhibition of nucleolar reformation after microinjection of antibodies to RNA polymerase I into mitotic cells // J. Cell. Biol. 1987. - V.105. -P.1483-1491.

33. Bessonov A.S. Ways of increasing the effectiveness of antiechinococcosis measures // 2nd Inter. Symp. «Taeniasis/cysticercosis and Hydatidosis/echinococcosis». Czechoslovakia, 1985. - P.44.

34. Bessonov A.S. Echinococcus multilocularis infection in Russia and neighboring countries // Helminthologia. 1998. - Y.35. -P.73-78.

35. Blair D., Agatsuma Т., Watanobe Т., Okamoto M., Ito A. Geographical genetic structure within the human lung fluke, Paragonimus westermani, detected from DNA sequences // Parasitology. 1997. -Y.l 15. - P.411-417.

36. Boore J.L. Animal mitochondrial genomes // Nucl. Acids Res. 1999. - V.27. - P.1767-1780.

37. Bowles J., Blair D., McManus D.P. Genetic variants within the genus Echinococcus identified by mitochondrial DNA sequencing // Mol. and Biochem. Parasitol. 1992. - Y.54. - P. 165-174.

38. Bowles J., McManus D.P. NADH dehydrogenase 1 gene sequences compared for species and strains of the genus Echinococcus // Int. J. Parasitol. 1993a. -Y.23. - P.969-972.

39. Bowles J., McManus D.P. Rapid discrimination of Echinococcus species and strains using a polymerase chain reaction-based RFLP method // Mol. and Biochem. Parasitol. 1993b. - Y.57. - P.231-239.

40. Bowles J., Blair D., McManus D.P. Molecular genetic characterization of cervid strain («northern form») of Echinococcus granulosus // Parasitology. 1994. - V. 109. - P.215-221.

41. Bowles J., Blair D., McManus D.P. A molecular phylogeny of the genus Echinococcus // Parasitology. 1995. - V. 110. - P.317-328.

42. Brand M.D. Regulation analysis of energy metabolism // J. Exp. Biol. 1997. - V. 200. - P.193-202.

43. Bridge D., Cunningham C.W., Schierwater В., Desalle R., Buss L.W. Class-level relationships in the phylum Cnidaria: evidence from mitochondrial genome structure // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1992. Y.89. - P.8750-8753.

44. Brown W.M. The mitochondrial genome of animals // In: Molecular Evolutionary Genetics. Maclntyre R.J. (Ed.). N.Y.: Plenum Press. - 1985.-P.95-130.

45. Bryant C., Flockhart H.A. Biochemical strain variation in helminthes // Adv. Parasitol. 1986. - Y.25. - P.275-319.

46. Cameron T.W.M. Observations on the genus Echinococcus Rudolphi, 1801 // J. Helminthol. 1926. - V.4. - P. 13-22.

47. Campbell A.J.D., Gasser R.B., Chilton N.B. Differences in a ribosomal of strongylus species allows identification of single eggs // Int. J. Parasitol. 1995. - V.25. - P.359-365.

48. Cerrone G.E. Argentine Echinococcus granulosus strains molecular analysis // XIX Inter. Congress of Hydatiology. Argentina, 1999. -P.150-151.

49. Collins F.H., Paskewitz S.M. A review of the use of ribosomal DNA to differentiate among cryptic Anopheles species // Insect Mol. Biol. 1996. - V.5. - P. 1-9.

50. Chauwin J.F., Oster G., Glick B.S. Strong precursor pore interactions constrain models for mitochondrial protein import // Biophys. J. 1998.- V.74.- P. 1732-1743.

51. Dias-Neto E., Pereira de Souza C., Rollinson D., Katz N., Pena S.D.J., Simpson A.J.G. The random amplification of polymorphic DNA allows the identification of strains and species of schistosome // Mol. and Biochem. Parasitol. 1993. - V.57. - P.83-88.

52. Dortch C.E., Merrilees D. A salvage excavation in Devil's Lair, Wester Australia // J. Royal Soc. West. Austral. 1971. - V.54. -P.103-113.

53. Elder J.F., Turner B.J. Concerted evolution of repetitive DNA sequences in eukaryotes // Quart. Rev. Biol. 1995. - V.70. - P.297-320.

54. Echeguia A.A. Estudios sobre fertilidad у viabilidad de abasto de corientes // Gaseta veterinaria. 1971. - V.33. - P.369-378.

55. Eckert J. Echinokokkose bei Mensch und Tier // Schweiz. Azch. Tierheilk. 1970. - Bui. 112. - S.443-457.

56. Eckert J. Echinokokkose Berlin und Munchen tierarztl // Wocchenschr. - 1981. - Bul.94. - S.369-378.

57. Fasihi Harandi M., Mobedi I., Thompson A. Intraspeciflc variation of E.granulosus in Iran: a molecular study // XXth Inter. Congress of Hydatiology. Turkey, 2001. - P. 171.

58. Feagin J.E. Mitochondrial genome diversity in parasites // Int. J. Parasitol. 2000. - V.30. - P.371-390.

59. Felleisen R., Gottstein B. Arbitrary primed PCR // Schweiz. Archt. Tierheilk. 1996. - V.138. - S.139-143.

60. Felleisen. R.S.J. Comparative genetic analysis of trichomonadid protozoa by the random amplified polymorphic DNA technique // Parasitol. research. 1998. - V.84. - P.153-156.

61. Garner K.J. and Rider O.D. Mitochondrial DNA diversity in gorillas // Mol. Phylogenet. Evol. 1996. - У.6. - P.39-48.

62. Gasser R.B. PCR-based technology in veterinary parasitology //Yet. Parasitol. 1999. - V.84. - P.229-258.

63. Gasser R.B., Chillon N.B., Hoste H., Stevenson L.A. Species identification of trichostrongyle nematodes by PCR-linked RFLP // Int. J. Parasitol. 1994. - V.24. -P.291-293.

64. Gasser R.B., Chilton N.B. Characterisation of taeniid cestode species by PCR-RFLP of ITS2 ribosomal DNA // Acta Tropica. 1995. -V.59. - P.31-40.

65. Gasser R.B., Bao-Zhen Q., Nansen P., Johansen M.V., B0gh H.O. Use of RAPD for the detection of genetic variation in the human blood fluke, Schistosoma japonicum, from mainland China // Mol. Cell. Probes. 1996. - V.10. - P.353-358.

66. Gasser R.B., Xingquan Zhu, Mc Manus D.P. Dideoxy fingerprinting: application to genotyping of Echinococcus // Int. J. Parasitol. 1998. -V.28.- P.1775-1779.

67. Gasser R.B., Zhu X., McManus D.P. NADH dehydrogenase subunit 1 sequences compared for nine members of the genus Taenia (Cestoda) // Int. J. Parasitol. 1999. - V.29. - P. 1965-1970.

68. Gemmell M. A. Perspective on options for hydatidosis and cysticercosis control // Vet. Med. Rev. 1978. - V.l. - P.3-48.

69. Gerbi S.A. The evolution of eukaryotic ribosomal DNA // BioSystems. 1986. - V. 19. - P.247-258.

70. Gourse R.B., Gerbi S.A. Fine structure of ribosomal RNA IV. Extraordinary evolutionary conservation in sequences that flank introns in rDNA // Nucl. Acids Res. 1980. - V.8. - P.3623-3637.

71. Graeber M.B., MullerU. Recent developments in the molecular genetics of mitochondrial disorders // J. Neurol. Sci. 1998. -V.153. - P.251-263.

72. Graber R.P., Thai S.H. L'echinococcose des artiodactyles de la Republique Centrafricaine: Existence d'un cycle lion phacochere // Rev. Eler. Med. Vet. Pays. Trap. - 1980. - V.33. - P.51-59.

73. Guo Z.G., Johnson A.M. Genetic characterization of Toxoplasma gondii strains by random amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction // Parasitology. 1995. - V. 111. - P. 127-132.

74. Hashimoto K., Watanobe Т., Liu C.X., Init I., Blair D., Ohnishi S., Agatsuma T. Mitochondrial DNA and nuclear DNA indicate that the Japanese Fasciola species is F. gigantica // Parasitol. Res. 1997. - V.83.-P.220-225.

75. Herd R.P., Coman B.J. Transmition of Echinococcus granulosus from kangaroose to domestic dogs // Austral. Vet. J. 1975. -V.51. - P.591-597.

76. Hernandez-Verdun D. The nucleolus today // J. Cell. Sci. -1991.-V.99.-P. 465-471.

77. Hobbs R.P., Lymbery A.J., Thompson R.C.A. Rostellar hook morphology of Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) from natural and experimental Australian hosts, and implication for strain recognition // Parasitology. 1990. - V.101. - P.273-281.

78. Hosseini S.H., Eslami A. Morphological and genetical characteristics of Echinococcus granulosus in Iran // XXth Inter. Congress of Hydatiology. Turkey, 2001. - P.251.

79. Hoster H., Gasser R.B., Chilton N.B., Mallet S., Beveridge I. Lack of intraspecific variation in the second internal transcribed spacer (ITS-2) of Trichostrongylus columbriformis ribosomal DNA // Int. J. Parasitol. 1993. - V.23. - P.1069-1071.

80. Humbert J.F., Cabaret J. Use of random amplified polymorphic DNA for identification of ruminant trichostrongylid nematodes // Parasitol. Res. 1995. - V.81. - P.l-5.

81. Hung G-C., Chilton N.B., Beveridge I., Gasser R.B. Molecular delineation of Cylicocyclus nassatus from C.ashworthi by rDNA // Int. J. Parasitol. 1997. - V.27. - P.601-605.

82. Jantzen HM, Admon A, Bell SP, Tjian R. Nucleolar transcription factor hUBF contains a DNA-binding motif with homology to HMG proteins. // Nature. 1990. - V.26. - P.830-836.

83. Jacquiet P., Humbert J.F., Comes A.M., Cabaret J., Thiam A., Cheikh D. Ecological, morphological and genetic characterization of sympatric Haemonchus spp. parasites of domestic ruminants in Mauritania // Parasitology. 1995. - V.l 10. - P.483-492.

84. Jolly D.J., Thomas C.A. Nuclear RNA transcripts from Drosophila melanogaster ribosomal RNA genes containing introns // Nucl. Acids Res. 1980. - Y.8. - P.67-84.

85. Keddlie E.M., Higazi Т., Unnasch T.R. The mitochondrial genome of Onchocerca vulvulus, sequence, structure and philogenetic analysis // Mol. and Biochem. Parasitol. 1998. - V.95. - P.l 11-127.

86. Keddie E.M., Higazi Т., Boakye D., Merriweather A., Wooten M.C., Unnasch T.R. Onchocerca volvulus: limited heterogeneityin the nuclear and mitochondrial genomes // Exp. Parasite. 1999. - V.93. -P. 198-206.

87. Kroemer G., Dallaporta В., Resche-Rigon M. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis И Ann. Rev. Physiol. 1998. - V.60. - P.619-642.

88. Kumaratilake L.M., Thompson R.C.A. A review of the taxonomy and speciation of the genus Echinococcus Rudolphi, 1801 // Z. Parasitenk. 1982. - V.68. - P. 121-146.

89. Lazowska J., Jacq C., Slonimski P.P. Sequence of introns and flanking exons in wildtype and ЪохЗ mutants of cytochrome b reveals an interlaced splicing protein coded by in intron // Cell. 1980. - V.22. -P.333-348.

90. Lipps H.J., Steinbruck G. Free genes for rRNAs in the macronuclear genome of ciliate Stylonychia mytillis // Chromosoma. -1982. V.69. - P.21-26.

91. Lonergan K.M., Gray M.W. The ribosomal RNA gene region in Acanthamoeba cactellanii mitochondrial DNA. A case of evolutionary transfer of introns between mitochondria and plastids? // J. Mol. Biol. -1994. V.239. - P.476-499.

92. Luton K., Walker D., Blaeir D. Comparisons of ribosomal internal transcribed spacer from two congeneric species of flukes (Platyhelminthes; Trematoda; Digenea) // Molec. and Biochem. Parasitol. 1992. - V.56. - P.323-328.

93. Maniatis Т., Fritsch E.E., Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory Manual // Cold Spring Harbor Laboratory. 1982. - 48Op.

94. Matossian R.M., Rickard M.D., Smyth J.D. Hydatidosis: a global problem of increasing importance // Bull WHO. 1977. - Y.55. -P.499-507.

95. Mathis A., Weber R., Kuster H., Speich R. Simplified sample processing combined with a sensitive one-tube nested PCR assay for detection of Pneumocystis carinii in respiratory specimens H J. Clin. Microbiol. 1997. - V.35. -P.l691-1695.

96. Maxam A.M., Gilbert W. Sequencing end-labeled DNA with base-specific chemical cleavages // Methods enzymol. 1980. - V.65. -P.499-560.

97. McLain D.K., Wesson D.M., Collins F.H., Oliver J.H. Evolution of the rDNA spacer, ITS2, in the ticks Ixodes scapularis and I.pacificus (Acari: Ixodidae) // Herediti. 1995. - V.75. - P.303-319.

98. McManus D.P. A biochemical study of adult and cystic stages of Echinococcus granulosus of human and animal origin from Kenya // J. Helminthol. 1981. - V.55. - P.21-27.

99. McManus D.P. Molecular taxonomy and strain analysis // In abstract book «Cestode zoonoses an emergent and global problem». -Poland, 2000.-P.28

100. McManus D.P., Macpherson C.N.L. Strain characterization Echinococcus granulosus: current status and new perspectives // Trop. Med. Parasitol. 1984. - V.78. - P. 193-198.

101. Monis P.T., Mayrhofer G., Andrews R.H., Homan W.L., Limper L., Ey P.L. Molecular genetic analysis of Giardia inleslinalis isolates at the glutamate dehydrogenase locus // Parasitology. 1996. -V.112. - P.l-12.

102. Morgan J.A.T., Blair D. Relative merits of nuclear ribosomal internal transcribed spacer and mitochondrial COl and ND1 genes fordistinguishing among Echinostomes species 11 Parasitology. 1998. -V.l 16. -P.289-297.

103. Moritz C., Dowling Т.Е., Brown W.M. Evolution of animal mitochondrial DNA: relevance for population biology and systematics // Arnrn. Rev. Ecol. Syst. 1987. - V.l8. - P.269-292.

104. Murray V. Improved double-stranded DNA sequencing using the linear polymerase chain reaction // Nucl. Acids Res. 1989. - V. 17. -P.8889

105. Newton L.A., Chilton N.B., Beveridge I., Hoste H., Nansen P., Gasser R.B., Genetic markers of strongylid nematodes of livestock defined by PCR-based restriction analysis of spacer rDNA // Acta tropica. 1998.-V.69.-P.1-15.

106. Nicksch-Rosenegk M.V., Frank В., Lucius R. Discrimination of Echinococcus multilocularis strains by two different molecular biology methods // XVII Inter. Congress of Hydatidology. Cyprus, 1995. - P. 156.

107. Okimoto R., Macfarlane J.L., Clary D.O., Wolstenholme D.R. The mitochondrial genomes of two nematodes, Caenorhabditis elegans and Ascaris suum// Genetics. 1992. - V.130. - P.471-498.

108. Pawlowski Z.S. Echinococcosis due to Echinococcus granulosus pig biotype in Poland. A review // XVII Inter. Congress of Hydatidology. Cyprus, 1995. - P. 98.

109. Polidorou K. Echinococcus granulosus (Batsch, 1786) as a world problem // Bull. Office int. epizootol. 46-th General Session of the O.I.E. Committee. Paris, 1978. - P. 1-47.

110. Rausch R.L. The taxonomic value and variability of certain structures in cestode genus Echinococcus (Rud. 1801) and a review of recognized species // Thapar Commem. 1953. - V.Lucknow. - P.233-246.

111. Rausch R.L., Schiller E.L. Studies on the helminth fauna of Alaska. Echinococcus sibiricensis n.sp., from St. Lowrensis island // J. Parasitol. 1954. - V.6. - P.659-663.

112. Rausch R.L., Nelson G.S. A review of the genus Echinococcus Rudolphi 1801 И Trop. Med. Parasitol. 1963. - V.57. -P.127-135.

113. Rausch R.L. A consideration of intraspecific categories in the genus Echinococcus Rudolphi, 1801 (Cestoda: Taeniidae) // J. Parasitol. -1967. V.53. - P.484-491.

114. Rausch R.L., Bernstein J.J. Echinococcus vogeli spp. n. (Cestoda: Taeniidae) from the bush dog, Speothos venaticus (Lund.) // Z. Tropenmed. Parasitol. 1972. - V.23. - P.25-34.

115. Rausch R.L., Rausch V.R., D'Allessandro A. Discrimination of larval stages of Echinococcus oligarthrus (Diesing 1863) and E.vogeli Rausch and Bernstein, 1972 (Cestoda: Taeniidae) // Amer. J. Trop. Med. and Hyg. 1978. - V.27. - P. 1195-1201.

116. Reddy Y.A., Rao J.R., Butchaiah G., Sharma B. Random amplified polymorphic DNA for the specific detection of buboline Echinococcus granulosus by hybridization assay // Vet. Parasitol. 1998. -V.27. - P.315-323.

117. Roneus O. Prevalence of echinococcosis in reindeer (Rangifer tarandus) in Sweden // Acta Vet. Scand. 1974. - V.15. - P.170-178.

118. Rozenzvit M.C., Zhang L.H., Kamenetzky L., Canova S.G., Guarnera E.A., McManus D.P. Genetic variation and epidemiology of Echinococcus granulosus in Argentina // Parasitology. 1999. - V.l 18. -P.523-530.

119. Rozenzvit M.C. The Echinococcus granulosus strain situation in Argentine // XIX Int. Congress of Hydatidology. Argentina, 1999. -P.137-145.

120. Saccone D.C., De Giorgi c., Gissi c., Pesole G., Reyes A. Evolutionary genomics in metazoa: the mitochondrial DNA as a model system // Genetics. 1999. - Y.238. - P. 195-209.

121. Saperstein D., Nickerson J.M. Restriction fragment length polymorphism analysis using PCR coupled to restriction digests // BioTechniques. 1991. - V.10. - P.488-489.

122. Saraste M. Oxidative phosphorylation at the fin de siecle // Science. 1999.-V.238. - P. 1488-1493.

123. Senger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain terminating inhibitors // Proc. Nalt. Acad. Sci. U.S.A. 1977. -V.88. -P.2815-2819.

124. Schnapp A., Pfleiderer C., Rosenbauer H., Grummt I. A growth-dependent transcription initiation factor (TIF-IA) interacting with RNA polymerase I regulates mouse ribosomal RNA synthesis // EMBO J.- 1990. V.9. - P.2857-2863.

125. Schantz P.M., Schwabe C.W. Worldwide status of hydatid disease control // J. Amer. Vet. Med. Assoc. 1969. - V.155. - P.2104-2121.

126. Schulenburg J.H., Englisch U., Wagele J.W. Evolution of ITS1 rDNA in the Digenea (Platyhelminthes: Trematoda): 3' end sequence conservation and its phylogenetic utility // J. Molec. Evol. 1999. - V.48.- P.2-12

127. Scott J.C., McManus D.P. The random amplification of polymorphic DNA can discriminate species and strains of Echinococcus // Trop. Med. Parasitol. 1994. - V.45. -P.l-4.

128. Scott J.C., Stefaniak J., Pawlowski Z.S., McManus D.P. Molecular genetic analysis of human cystic hydatid cases from Poland: identification of new genotypic group (G9) of Echinococcus granulosus // Parasitology. 1997. - V.l 14. - P.37- 43.

129. Shadel G.S., Clayton D.A. Mapping promoters in displacement-loop region of vertebrate mitochondrial DNA // Methods Enzymol. 1996. - V.264. - P.139-148.

130. Shadel G.S., Clayton D.A. Mitochondrial DNA maintenance in vertebrates // Ann. Rev. Biochem. 1997. - Y.66. - P.409-435.

131. Siles-Lucas M., Benito M.C., Cuesta-Bandera C. Echinococcus granulosus: genomic and isoenzymatic study of Spanish strains isolated from different intermediate hosts // Vet. Parasitol. 1996.- V.63. P.273-282.

132. Smyth J.D., Smyth M.M. Natural and experimental hosts of Echinococcus granulosus and E.multilocularis with comments on the genetics of speciation in the genus Echinococcus // Parasitology. 1964. -V.54. -P.493-514.

133. Smyth J.D. Strain differences in Echinococcus granulosus, with special reference to the status of equine hydatidosis in the United Kingdom // Trans. Royal Soc. Trop. Med. and Hyg. 1977. - V.71. -P.75-101.

134. Smyth J.D. An in vitro approach to taxonomic problems in trematodes and cestodes, especially Echinococcus granulosus // Symp. British. Soc. Parasit.- 1979.-V.l 7.-P.75-101.

135. Snabel V., D'Amelio S., Mathiopoulos K., Turcekona L., Dubinsky P. Molecular evidence for the presence of a G7 genotype of Echinococcus granulosus in Slovakia // J. Helminthol. 2000. - V.74. -P.177-181.

136. Sorensen E., Bogh H.O., Johansen M.V., McManus D.P. PCR-based identification of individuals of Schistosoma japonicum representing different subpopulations using a genetic marker in mitochondrial DNA // Int. J. Parasitol. 1999. - V.29. - P.l 121-1128.

137. Stevenson L.A., Chilton N.B., Gasser R.B. Differentiation of Haemonchus placei from H. contortus (Nematoda: Trichostrongylida) by the ribosomal second internal transcribed spacer // Int. J. Parasitol. 1995. - V.25. - P.483-488.

138. Stoimenov K., Kaloyanov Z.N. Biological differences between Echinococcus granulosus obtained from sheep and pigs // Helm, abstr. 1980. - Y.49. - ab.№5394.

139. Stumph W.E., Wu J.R., Bonner J. Determination of the size of rat ribosomal DNA repeating units by electron microscopy // Biochemistry. 1979. - V.18. - P.2864-2871.

140. Sweatman G.K., Williams R.J. Wild animals in New Zeland as a host of Echinococcus granulosus and other taeniid tapeworm// Trans. Royal Soc. N. Z. Zool. 1962. - V.26. -P.221-250.

141. Szidat L. Echinococcus patagonicus sp. nov. (Cestoda) parasito del zorro Dusicyon culpaeus culpaeus (Mol.) // Neotropica. -I960.-V.13.-P.13-16.

142. Szidat L. Echinococcus pampeanus Una nueva especie de la Argentina, parasito de Felis colocolo pajeros Desmarest 1916 (Cestoda)// Neotropica. - 1967. - V.l3. - P.90-96.

143. Szidat L. Echinococcus cepanozoi sp. nov. (Cestoda, Taeniidae) del zorro gris, Dusicyon gymnocercus, de la provincia de Buenos Aires //Neotropica. 1971. - V.l7. - P.l-4.

144. Thanh H.Le., Blair D. and McManus D.P. Mitochondrial genome of human helminthes and their use as markers in population genetics and phylogeny // Acta tropica. 2000. - У.11. - P.243-256.

145. Thang J., Laurent Т., Back C., Unnasch T.R. Intraspecific heterogeneity of the ribosomal DNA internal transcribed spacer in the Simulium damnosum (Diptera: Simuliidae) complex // Molec. Biol, and Evol. 1996. - V. 13. - P.244-252.

146. Thompson R.C.A., Smyth J.D. Equine hydatidosis: a review of the current status in Great Britain and the results of en an epidemiological survey // Vet. Parasitol. 1975. - V.l. - P.107-127.

147. Thompson R.C.A. Aspect of speciation in Echinococcus granulosus // Vet. Parasitol. 1978. - V.4. - P. 121-125.

148. Thompson R.C.A. Biology and speciation of Echinococcus granulosus // Aus. Vet. 1979. - V.55. - P.93-98.

149. Thompson R.C.A. The biology of echinococcosis and hydatid disease. George Allen & Unwin Ltd. 1986. - 290p.

150. Thompson R.C.A., Kumaratilake L.M. Intraspecific variation in Echinococcus granulosus: the Australian situation and perspectives for the future // Trans. Royal Soc. Trop. Med. and Hyg. 1982. - V.76. -P.13-16.

151. Thompson R.C.A., Lymbery A.J. The nature, extent and significance of variation within the genus Echinococcus // Adv. Parasitol.- 1988. V.27. - P.209-258.

152. Thompson R.C.A., Lymbery A.J., Constantine C.C. Variation in Echinococcus: towards a taxonomic revision of the genus // Adv. Parasitol. 1995. - V.35. - P. 145-176.

153. Thompson R.C.A. The importance of taxonomy in echinococcosis // XIX Int. Congress of Hydatidology. Argentina, 1999.- P.137-145.

154. Turcekova L., Snabel V., Dubinsky P. Genetic variants of Echinococcus granulosus in Slovakia recorded by random amplification of polymorphic DNA // Helminthologia. 1998. - V.35. - P.179-183.

155. Turcekova L., Snabel V., Dubinsky P. Morphological and genetic characterization of Echinococcus in the Slovak republic // XXth Int. Congress of Hydatiology. Turkey, 2001. - P.90.

156. Van Herwerden L., Blair D., Agatsuma T. Intra- and interspecific variation in nuclear ribosomal internal transcribed spacer 1 of the S.japonicum species complex // Parasitology. 1998. - V.116. -P.311-317.

157. Van Herwerden L., Blair D., Agatsuma T. Intra- and interindividual variation in ITS 1 of Paragonimus westermani (Trematoda: Digenea) and related species: implications for phylogenetic studies // Mol. Phylogenet. Evol. 1999. - V.12. - P.67-73.

158. Van Herwerden L., Gasser R.B., Blair D. ITS-1 ribosomal DNA sequence variants are maintained in different species and strain of Echinococcus // Int. J. Parasitol. 2000. - V.30. - P. 157-169.

159. Van der Horst G., Tabak H.F. Self-splicing of yeast mitochondrial ribosomal and messenger RNA precursor // Cell. 1985. -V.40. - P.759-766.

160. Vogel H. Uber den Echinococcus multilocularis Suddeutslands. I. Das Bandwurmstadium von Stammen menschlicher und tierischer Herkunft // Tropenmed. Parasitol. 1957. - V.8. - S.404-454.

161. Vogel H. Uber den Echinococcus multilocularis Suddeutslands. II. Entwicklung der Larvenstadien und histoparthologische Reaktionen in der Feldmaus Microtus arvalis // Tropenmed. Parasitol. -1977. V.28. - S.409-427.

162. Wei Y.H. Oxidative stress and mitochondrial DNA mutations in human aging // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1998. - V.217. - P.53-63.

163. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers // Nucleic acids research. 1990. - V. 18. - P.7213-7218.

164. Wesson D.M., Porter C.H., Collins F.H. Sequence and secondary structure comparisons of internal transcribed spacer rDNA in mosquitoes (Diptera: Culicidae) // Mol. Phylogenet. Evol. 1992. - V. 1. -P.253-269.

165. WHO. Research needs in echinococcosis (hydatidosis). Bull WHO. 1968. - V.39. - P.101-113.

166. WHO. Parasitic zoonoses. Report of WHO expert committee with the participation of FAO. Geneva, 1979. - Tech.Rep.Ser.№ 637.

167. WHO. FAO/UNEP/WHO guidelines for surveillance, prevention and control of echinococcosis/hydatidosis. Geneva, 1981.

168. Williams J.F., Lopes Adaros H., Trejos A. Current prevalence and distribution of hydatidosis with special reference to the Americas II Amer. J. Trop. Med. and Hyg. 1971. - Y.20. - P.224-236.

169. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polymorphism amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids Res. 1990. - V. 18. - P.6531-6535.

170. Wolstenholm D.R. Animal mitochondrial DNA, structure and evolutionary//Int. Rev. Cytol. 1992. - V.141. - P.173-216.

171. Yao M.-C., Gall J.G. A single integrated gene for ribosomal RNA in a eucaryote, Tetrahymena pyriformis // Cell. 1977. - V.l2. -P.121-132.

172. Zhang L. (a), Eslami A., Hosseini S.H., McManus D.P. Indication of the presence of two distinct strains of Echinococcus granulosus in Iran by mitochondrial DNA markers // Amer. J. Trop. Med. and Hyg. 1998. - V.59. - P.171-174.

173. Zhang L. (b), Chai J J., Jiao W., Osman Y., MacManus D.P. Mitochondrial genomic markers confirm the presence of the camel strain-135

174. G6 genotype) of Echinococcus granulosus in north-western China // Parasitology. 1998. - V.l 16. - P.29- 33.

175. Zomerdijk J.C., Beckmann H., Comai L., Tjian R. Assembly of transcriptionally active RNA polymerase I initiation factor SL1 from recombinant subunits // Science. 1994. - V.23. - P.2015-2018.