Экстрактивные вещества Primula Macrocalyx BGE. Химические трансформации риккардина C тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Косенкова, Юлия Сергеевна

• Косенкова, Юлия Сергеевна
• кандидат химических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат химических наук Косенкова, Юлия Сергеевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ИНГИБИТОРЫ NO-СИНТАЗЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

2; 1. Введение. Общие сведения.

2.2 Ингибиторы iNOS природного происхождения.

2.2.1 Алкалоиды, изопреноиды, стероиды.

2.2.2 Стильбены, бибензилы и бисбибензилы.

2.2.3 Диарилалканоиды и флавоноиды.

2.3 Функциолизированные природные агенты.

2.3.1 Производные аминокислот.

2.3.2 Халконы и кумарины.

2.3.3 Тритерпеновые кислоты, фенольные соединения.

2.4 Ингибиторы iNOS синтетического происхождения.40s

2.4.1 Амидины.

2.4.2 Азотсодержащие гетероциклические соединения.

2.5 Наиболее известные ингибиторы iNOS.48v

3. ВТОРИЧНЫЕ МЕТАБОЛИТЫ НАДЗЕМНОЙ И ПОДЗЕМНОЙ? ЧАСТЕЙ P. MACROCALYX. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1 Вторичные метаболиты рода Primula.

3.2 Подходы к экстракции*Р: macrocalyx.

3.3 Экстракция гексаном.

3.4 Экстракция диэтиловым эфиром.

3.5 Качественный и количественный состав жирных кислот в надземной части Р. macrocalyx.

3.6 Вторичные метаболиты P. macrocalyx.61'

3.6.1 Выделение салицилатов и примверина.

3.6.2 Выделение метоксифлавонов.:.

3.6:3 Выделение бисбибензилов.

4. СЕЗОННАЯ ДИНАМИКА НАКОПЛЕНИЯ РИККАРДИНА С В

НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ P. MACROCALYX.

5. ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ РИККАРДИНА С.

5.1 Получение сложных эфиров риккардина С.

5.2 Получение простых эфиров риккардина С.

6. ДАННЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЙ.

6.1- Тестирование сложных и простых эфиров риккардина С на способность ингибировать iNOS.

6.2 Тестирование некоторых вторичных метаболитов P. macrocalyx на зародышах морского ежа Paracentrotus lividus.

7. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

7.1- Экстракция гексаном.

7.2 Экстракция диэтиловым эфиром.91*

7.3 Количественное определение жирных кислот.

7.4 Выделение салицилатов и примверина.

7.5 Выделение метоксифлавонов.

7.6>Выделение бисбибензилов.

7.6.1 Выделение и очистка риккардина С.

7.6.2 Выделение перроттетина Е.

7.7 Сезонная^ динамика накопления риккардина С в надземной части P. macrocalyx.

7.7.1 Растительный материал.

7.7.2 Пробоподготовка и анализ образцов.

7.8 Химическая модификация риккардина.С.

7.8.1 Реакции с бензоилхлоридом.

7.8.2 Реакция с метакроилхлоридом.

7.8.3 Получение триизобутирилриккардина С.

7.8.4 Получение О1 ,Оп-дидигидробетулоноилриккардина С.

7.8.5 Реакция с бутилбромидом.

7.8.6 Получение триаллириккардина С.

8. ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экстрактивные вещества Primula Macrocalyx BGE. Химические трансформации риккардина C»

Богатая и разнообразная дикорастущая флора Алтая и Западной Сибири может быть источником доступного и дешевого сырья для-производства жизненно важных фитопрепаратов.широкого спектра действия. Однако состав многих лекарственных растений, широко используемых в народной медицине, практически не изучен. Выбранный нами объект исследований - Primula macrocalyx Bge. - произрастает в лесостепной и степной зонах Западной Сибирщ широко используется в народной медицине. Растение встречается в Крыму, на Кавказе, на Южном Урале, широко распространено на юге Западной Сибири и Красноярского края, восточнее' -очень редко. Корневища P. macrocalyx в народной медицине используются при бронхитах, воспалениях легких, эмфиземе легких и, других бронхолегочных заболеваниях; по данным тибетской медицины, это растение способно подавлять развитие опухолей* и излечивать заболевания крови. Кроме того, благодаря довольно высокому (до 2 %) содержанию витамина-С, листья^ первоцвета употребляют в < пищу в виде салатов, чаев' и приправ к различным блюдам. Растение прекрасно» культивируется, а потому сырье, богатое биологически активными веществами, становится еще более доступным. Но химический состав P. macrocalyx Bge. практически не изучен. Имеются* сведения по качественному составу растения, указывающие на наличие в P. macrocalyx тритерпеновых сапонинов, флавоноидов,, фенолкарбоновых кислот. Таким образом, есть основания считать, что Р. macrocalyx является ценным представителем флоры- Западной Сибири и изучение химического состава, этого растения актуально. Целью данной работы являлось изучение химического состава надземной и подземной частей Pi macrocalyx, выделение вторичных метаболитов из экстрактов растения, установление их строения, тестирование доступных метаболитов на биологическую активность и их последующая химическая модификация с биотестированием полученных производных.

Для реализации поставленной цели необходимым является решение следующих задач:

1. подбор условий экстракции надземной и подземной частей растения, выделение групп биологически активных соединений: жирных кислот, флавоноидов, гликозидов и др;

2. отработка методов выделения индивидуальных соединений, установление их структуры с применением современных физико-химических методов анализа;

3. проведение биологического скрининга индивидуальных соединений, полученных из.P. macrocalyx Bge;

4. разработка* и проведение химических трансформаций выделенных вторичных метаболитов с целью повышения их биологической активности.

Настоящая* работа состоит из восьми глав. Первая глава диссертации -это введение, которое отражает цели, основные задачи и содержание работы. Вторая глава - литературный,обзор, посвященный поиску и синтезу веществ, обладающих свойствами ингибиторов NO-синтазы, охватывающий химические и биохимические исследования 2003-2009 гг. До. 2003 года материал по этой теме широко освещается в обзоре В: F. Гранина-[1]. Выбор данной темы для литературного обзора обусловлен тем, что мажорный метаболит малополярных экстрактов P. macrocalyx Bge. - риккардин С, бисбибензильное соединение, выделенное нами из ацетонового экстракта растения, - является перспективным ингибитором NO-синтазы. В связи с этим, выявление последних общих тенденций в поиске ингибиторов NO-синтазы было для нас крайне актуальным. Проведенный, литературный поиск показал, что. огромный массив соединений, проявляющих ингибирующую активность по отношению к NO-синтазе, можно условно поделить на три группы:

1) ингибиторы NO-синтазы природного происхождения, в частности, соединения, полученные экстракцией растительного сырья;

2) соединения,, полученные на базе природных соединений путем их химической трансформации с целью увеличения биологической активности;

3) синтетические агенты.

На основании • анализа литературных источников; был сделан вывод о том, что наиболее: перспективными и селективными? ингибиторами. NO-синтазы являются соединения^ полученные на базе природных соединений и синтетические агенты.

Третья глава диссертации посвящена вторичным метаболитам надземной-и.подземной частей Р: macrocalyx Bge; Для экстракции надземной части было опробовано два. подхода — экстракция кипящими растворителями и экстракция настаиванием. Наиболее оптимальной схемой экстракции надземной части оказалась, экстракция настаиванием-. Именно эта схема позволила получить уже на стадии экстракции сырья максимально простые фракции для выделениям индивидуальных веществ- хроматографическими, методами. Так при экстракции • надземной? части эквимолярнош смесью* гексан-диэтиловый эфир был получен экстракт, в котором с помощью методов^ ГХ (газовой хроматографии) и ГХ/MG (хромато-масс-спектрометрии) были определены состав и содержание свободных жирных кислот в надземной части P. macrocalyx: Было показано, что доминантными: кислотами надземной части Р: macrocalyx являются пальмитиновая (С 16:0);, октадекатетраеновая (G 18:4А6,9,12,15), линолевая (С 18:2А9,12) и а-линоленовая; (С 18:3А9,12'15) кислоты.

Для подземной части растения нами проводилась дробная экстракция, большим; количеством; растворителей . различной полярности. Так из экстракта четыреххлористым' углеродом были выделены два соединения -метил-4-метоксисалицилат и пеонол^ из: ацетонового экстракта корней Р.1 macrocalyx был выделен5 гликозид метил-4-метоксисалицилата — примверин — одно из основных соединений полярных экстрактов растений рода

Primula.

Из ацетонового экстракта надземной части исследуемого растения колоночной хроматографией на силикагеле было выделено шесть метоксифлавонов и бисбибензильные соединения — перроттетин Е и риккардин С. Причем в дальнейшем было установлено, что последнее соединение - риккардин С — является мажорным компонентом малополярных экстрактов P. macrocalyx. Это соединение впервые было выделено из мха Reboulia hemispherica в 1982 году [2]. Как показал литературный поиск, риккардин С и подобные ему бисбибензильные системы* ранее выделялись только из бриофитов — мхов-печеночников (из родов Riccardia, Marchantia, Plagiochila и др.) [3, 4, 5], а в высших растениях, водорослях и грибах обнаружены не были. Выделение этого соединения из высшего растения P. macrocalyx стало своеобразным поворотным пунктом в нашей работе. По литературным данным, такие соединения проявляют широкий спектр цитотоксической, антибактериальной и фунгицидной активности [6]. Риккардин С увеличивает экспрессию генов8 АВСА1 и ABGG1, тем самым активируя обратный транспорт холестерина [7], и является ингибитором NO-синтазы [8], снижая выработку оксида азота в макрофагах. Известно, что накопление избыточного количества оксида азота (II) NO в организме приводит к целому ряду патологических состояний, к которым относятся септический шок, нейродегенеративные заболевания, острые и хронические воспалительные процессы [1]. Выделение веществ, отвечающих за ингибирование NO-синтаз и создание новых препаратов соответствующего действия является одной из важнейших проблем в медицине. Хотя риккардин С проявляет незначительную NO-ингибирующую активность, его природные метиловые эфиры высокоактивны [9]. В связи с этим, после анализа литературных данных, у нас возникла идея* трансформации риккардина С в различные простые и сложные эфиры.

Нами была отработана и запатентована методика выделения риккардина С из надземной и подземной частей дикорастущей P. macrocalyx [10] для проведения его химической модификации и получения производных. Но, так как природного сырья для осуществления химической трансформации риккардина С было недостаточно, сотрудниками ЦСБС СО РАН была выращена P. macrocalyx из семян дикорастущего растения. На образцах интродуцированной P. macrocalyx нами было проведено изучение сезонной динамики накопления риккардина С в растении. Именно этому аспекту работы посвящена четвертая глава диссертации. В ней, на основании анализа химического состава ацетонового экстракта надземной части, собиравшейся в течение двух лет на площадках ЦСБС в различные фенологические фазы развития примулы, было показано, что риккардин С не присутствует в растении постоянно. Так, в период бутонизации он вообще отсутствует, начинает появляться в период цветения, достигая своего максимума в период плодоношения. В результате было установлено, что оптимальным временем сбора растительного сырья для выделения из него риккардина С, является период плодоношения.

Пятая глава диссертации посвящена химическим трансформациям риккардина С. Согласно общеизвестным методикам, риккардин С вводили в реакции по получению сложных и простых эфиров по фенольным группам с различными алкилгалогенидами и галогенангидридами кислот в присутствии оснований. В результате проведенных превращений были получены простые и сложные эфиры риккардина С.

Шестая глава содержит результаты проведенного биологического скрининга риккардина С, его производных и некоторых метоксифлавонов, выделенных из P. macrocalyx. Производные риккардина С были протестированы на ингибирующую способность NOS сотрудником Института иммунологии и клинической медицины СО РАМН (г. Новосибирск) к.б.н. В. О. Ткачёвым. Стоит отметить, что все протестированные соединения проявили NOS-ингибирующую активность более высокую, чем исходный риккардин С, однако сделать однозначные выводы и вывести закономерность структура-ингибирующая активность на данном этапе испытаний не представляется возможным. Метоксифлавоны проверялись на антипролиферативную активность. Эти эксперименты были выполнены сотрудником Института биологии развития им. Н. К. Кольцова РАН (г. Москва) к.б.н. М. Н. Семёновой. Было показано, что метоксифлавоны (226, 212) обладают антипролиферативной активностью, не связанной с действием на тубулин (основной структурный компонент митотического веретена).

Седьмая глава представляет собой экспериментальную часть.

Подводя итог, можно сказать, что настоящая работа представляет собой целостное исследование, которое развивалось по двум основным направлениям: 1) фитохимическое направление, которое заключалось в выделении вторичных метаболитов P. macrocalyx, установлении их строения и в ряде случаев оценки количественного содержания м растительном сырье; 2) химическое направление, задачей которого было проведение химических трансформаций риккардина С с целью получения новых соединений, потенциальных ингибиторов NO-синтазы.

Результаты выполненной работы обсуждались- на семинарах Отдела природных и биологически активных веществ, молодежных конкурсах научных работ НИОХ СО РАН. Отдельные части работы были доложены на IV и V Всероссийских конференциях «Химия- и технология^ растительного сырья» (г. Сыктывкар, 2006; г. Уфа, 2008), VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина. Молодежная научная школа" (г. Уфа, 2007), Всероссийской научной конференции «Современные проблемы органической химии» (г. Новосибирск, 2007), а также на Международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы, 2007), VII Международной научно-практической-конференции «Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии» (г. Барнаул, 2008), X Международном симпозиуме "Эколого-популяционный анализ полезных растений: интродукция, воспроизводство, использование" (г. Сыктывкар, 2008), Международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 2009) и на VII Всероссийской конференции «Химия и медицина, 0рхимед-2009» (г. Уфа, 2009).

Автор выражает искреннюю благодарность к.х.н. Половинка М. П. за неоценимую помощь в процессе работы над диссертацией и постоянную поддержку, ведущему инженеру ЛЛиПБАС Комаровой Н. И. за выполнение хроматографических анализов и ценные советы, сотрудникам ЛФМИ и лично к.х.н. Корчагиной Д. В. за помощь в установлении структур выделенных соединений, сотрудникам ЛЭИХА НИОХ и лично Морозову С. В. за выполнение газохроматографических анализов и обсуждение полученных результатов. Отдельно автор благодарит д.м.н. Лифшиц Г. И., к.б.н. Ткачева В. О. и к.б.н. Семёнову М. Н. за проведенные биологические испытания выделенных и синтезированных соединений. Также автор благодарит научного руководителя д.х.н. Салахутдинова Н. Ф. за проявленное терпение и внимательное отношение.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Косенкова, Юлия Сергеевна

8. Выводы

1. Впервые проведено систематическое исследование качественного-и компонентного химического состава Первоцвета крупночашечкового (.Ргшш/а macrocalyx Bge.). Предложен результативный подход, позволяющий, получить простые для. хроматографического разделения экстракты, и выделить из них основные вторичные метаболиты P. macrocalyx.

2. Исследован- качественный состав и определено массовое содержание жирных кислот в надземной частиmacrocalyx. Показано, что в исследуемом растении присутствуют все монокарбоновые кислоты нормального строениям числом.атомов<углерода от 6 до^ЗО и незначительное количество- дикарбоновых кислот, причем, доминирующими кислотами надземной части P. macrocalyx являются- пальмитиновая» (С 16:0), октадекатетраеновая^ (С18:4Д6'9'12'15), линолевая (С18:2Д9'12) и ос-линоленовая (С 18:3 Д9'12'15)-кислоты.

3. Из. различных экстрактов', надземной- и подземой частей: Р. macrocalyx выделены-салицилаты-(225) • и (202), шесть метоксифлавонов (208, 209, 212, 226, 227, 228)*и гликозид.примвёрин (218). Метил-4-метоксисалицилат (225). и метоксифлавоны (227 и 228) ранее из* растений- рода Primula невыделялись.

4. Впервые из надземной и подземной частей* высшего-растения*Р. macrocalyx выделены соединения бисбибензильного типа, риккардин С (60) и перроттетин Е (229), проявляюшие NOS-ингибирующую активность. Разработана оригинальная, эффективнаяшетодика выделения риккардина С из надземной-и подземной частей растения (защшцено патентом РФ).

5. Изучена-сезонная динамика накопления риккардина С в надземной части Р: macrocalyx. Показано, что содержание последнего достигает максимума в период плодоношения.

6. Впервые получены сложные и простые эфиры риккардина С (243

254), проявляющие более высокую NOS-ингибирующую активность, чем исходный риккардин С.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Косенкова, Юлия Сергеевна, 2009 год

1. Граник, В. Г., Григорьев, Н. Б. Ингибиторы синтаз оксида азота -биология и химия // Известия АН. Серия химическая. 2002. - № 11.- С. 1819-1841.

2. Asakawa, Y., Matsuda, R. Riccardin С // Phytochemistry. 1982. - V. 21. -N 8.-P. 2143-2144.

3. Wu, C.-L., Lin, H.-R. Labdanoids and bis(bibenzyls) from Jungermannia species // Phytochemistry. 1995. - V. 44. -N 1. - P. 101-105.

4. Martini, U., Zapp, J., Becker, H. Chlorinated macrocyclic bis(bibenzyls) from the liverwort Bazzania Trilobata II Phytochemistry. 1998. - V. 47. - N 1. - P. 8996.

5. Toyota, M., Yoshida, Т., Matsunam, J., Asakawa, Y. Sesquiterpene and other constituents of the liverwort Dumortiera Hirsuta II Phytochemistry. 1997. - V. 44.-N2.-P. 293-298.

6. Zinsmeister, H.D1, Becker, H., Eicher, T. Rewiew. Bryophytes, a source of biologically active, naturally occurring material // Angew. Chem. — 1991. Vol. 3. -N2. -P.130-147.

7. Tamehiro, N., Sato, Y., Hashimoto, Т., Asakawa, Y. Riccardin C: A natural product that functions as a liver X receptor (LXR)a agonist and an LXRJ3 antagonist // FEBS Letters. 2005. - 579. - P. 5299-5304.

8. Пат. 2340350 РФ. Способ получения риккардина С / Половинка, М. П., Косенкова, Ю. С., Комарова Н. И., Салахутдинов, Н. Ф. Заявка № 2007129210; 30.07.07.

9. Furchgott, R. F., Zavadski, J. W. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of vascular smooth muscle by acetylholine // Nature. 1980. - V. 286.-P. 373-376.

10. Малкоч, А. В., Майданник, В. Г., Курбанова, Э. Г. Физиологическая роль оксида азота в организме (часть 1) // Нефрология и диализ. 2000. - Т. 2. - № 1-2. - С. 69-75.

11. Palmer, R. М. J., Ferigge, A. G., Moncada, S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium derived relaxing factor // Nature. 1987. -V. 327.-P. 534-526.

12. Nathan, C., Hibbs, J. B. Role of nitric oxide synthesis in> macrophage antimicrobial activity // Curr. Opin. Immunol. 1991. -N 3. - P. 65-70.

13. Palmer, R. M., Ferrige, A. G., Moncada, S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor // Nature. 1987. -N 327.-P. 524-526:

14. Nakaki, T. Phisiological and clinical significance of NO (nitric oxide) a review // Keio J. Med. - 1994. - V.43. - P. 15-26.

15. Culotta, E., Koshland, D. E. NO news is good news // Science. 1992. - V. 258.-P. 1862-1865.

16. Kerwin, J. F., Lancaster, J. R., Feldman, P. L. Nitric oxide: a new paradigm for second messengers // J. Med. Chem. 1995. - 38 (22). - P. 4343-^1362.

17. Stamler, J. S. Redox signaling: nitrisylation and related target interactions of nitric oxide // Cell. 1994. - 78. - P. 931-936.

18. Kikuchi, K., Nagano, Т., Hayakawa, H., Hirata, Y., Hirobe, M. Real time measurement of nitric oxide produced ex vivo by luminol-H202 chemiluminescence method // Ji Biol. Chem. 1993. - V. 268 (31). - P. 23106 -23110.

19. Gow, A. J., Stamler, J. S. Reactions between nitric oxide and haemoglobin under physiological conditions // Nature. 1998. - V. 391(6663): - P! 169-173.

20. Schmidt, H. H., Walter, U. NO at work // Cell. 1994. - 78. - P. 919-925.

21. Nitric oxide donors. For pharmaceutical and biological applications / Edited by Wang P.G., T.B. Cai, N. Taniguchi / Wiley. 2004 - 390 p.

22. Nathan, C., Xie, Q.-W. Nitric oxide synthases: roles, tolls, and controls // Cell. 1994. - 78 - P. 915-918.

23. Менщикова, E. Б., Ланкин, В. 3., Зенков, H. К., Бондарь, И. А., Круговых,

24. H. Ф., Труфакин, В. А. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. -М.: Слово, 2006. 556 с.

25. Forstermann, U., Closs, Е. I., Pollock, J. S., Nakane, M., Schwarz, P., Gath,1., Kleinert, H. Nitric oxide synthase isozymes. Characterization, purification; molecular cloning, and functions // Hypertension. 1994. -23.-P. 1121 - 1131.

26. Busse, R., Mulsch, A. Induction of nitric oxide synthase by cytokines in vascular smooth muscle cells // FEBS Lett. 1990. - V. 275. - P. 87-90.

27. Solhaug,,M. J., Ballevre, L. D., Guignard, J.-P. Nitric oxide in the developing kidney // Pediatr. Nephrol. 1996. - V.10 (4). - P. 529-539.

28. Geller, D}: A., Billiar, T. R. Molecular biology of nitric oxide synthases // Cancer Metastasis Rev. 1998. .- 17. — P. 7—23

29. Shirato, Ml, Sakamoto; 'Г., Uchida, Y., Nomura, A., Ishii, Y., Iijima, H., Goto,1. Л I

30. Marietta;. Mi A. Nitric oxide synthase: structure: and; mechanism II J. Biol. Chem. 1993.-268.- 17.-P. 12231-12234.

31. Groves, J.T., Watanabe, Y. Reactive iromporphyrin; derivatives relatedltorthe catalytic cycles of cytochrome P-450 and peroxidase. Studies of the mechanism of oxygen activation // J. Am: Chem. Soc. 1988'. - 110 - P. 8443.

32. Yamaguchi, К., Watanabe, Y., Morishima, I. Direct observation of the push effect on the O-O bond cleavage of acylperoxoiron (111) porphyrin complexes // J. Am. Chem. Soc. 1993. - 115. - PI 4058.

33. Huang, H., Hah, J.-M., Silverman, R. B. Mechanism of nitric oxide synthase. Evidence that direct hydrogen atom abstraction from the О—H bond of NG-hydroxyarginine is not relevant to the rechanism // J. Am. Chem. Soc. — 2001. — 123 (11).-P. 2674-2676.

34. Babu, B. R.; Griffith, O. W. Design of isoform-selective inhibitors of nitric oxide synthase // Curr. Opin. Chem. Biol. 1998. - 2. - P: 491-500.

35. Moore, W. M., Webber, R. K., Jerome, G. M., Tjoeng, F. S., Misko, T. P., Currie, M. G. l-N6-(l-Iminoethyl)lysine: a selective inhibitor of inducible nitrictoxide synthase // J. Med. Chem. 1994. - 37. - P. 3886-3888.

36. Fast, W., Nikolic, D., Van Breemen, R. В., Silverman, R. B. Mechanisticчstudies of the inactivation of inducible nitric oxide synthase by N5-(l-Iminoethyl)1.ornithine (1-NIO) //J. Am. Chem. Soc. 1999. - 121 (5). - P. 903-916.

37. Jin, H. Z., Lee, J. H., Lee, D., Hong, Y. S., Kim, Y. H., Lee, J. J. Inhibitors of the LPS-induced NF-kB activation from Artemisia sylvatica II Phytochemistry. — 2004. 65(15). - P. 2247-2253.

38. Zhang, X., Xu, J.-K., Wang, J., Wang, N.-L., Kurihara, H., Kitanaka, S., Yao, X.-S. Bioactive bibenzyl derivatives and fluorenones from Dendrobium nobile II J. Nat. Prod. 2007. - 70(1). - P. 24-28.

39. Yoshida, Т., Hashimoto, Т., Takaoka, S., Kan, Y., Tori, M., Asakawa, Y. Phenolic constituents of the liverwort: four novel cyclic bisbibenzyl dimers from Blasiapusilla L. // Tetrahedron. 1996. - 52(46). - P. 14487-14500.

40. Taira, J., Nanbu^ H;, Ueda, K. Nitric oxide-scavenging compounds in Argimonia pilosa Lebed on LPS-induced RAW 264.7 macrophages-// Food Chemistry. 2009. ~ 115(4). - P: 1221-1227.

41. Wolff, D. J., Luberskie, A., Gauld, D. S., Neulander, M. J: Inactivation of nitric oxide synthases and cellular nitric formation by: NMminoethyl-l'-lysine and N5-iminoethyl-l-ornithine ;// Eur. Ji Pharmacol; 1998: - 350; - 325-3341

42. Moore; W. Ml, Webber, R. K., Jerome, G; M;, Tj oeng; F. S., Misko, Т. P., Gurrie, Mi G. l-N6-(r-Iminoethyl)lysine: A selective inhibitor of inducible: nitric: oxide synthase // JtMed; Chem. 1994. -37. — P13886—3888.

43. Komori, Y., Wallage, G. C., Fukuto, Л M! Inhibition of purified nitric oxide synthase from rat cerebellum; and macrophage by L-arginine analogs' // Arch.' Biochem. Biophys. 1994. - 315. - P. 213-218.

44. Fishlock, D., Perdicakis, В., Montgomery, Hi J;,:Guillemette, JiG., Jervis, E;, Lajoie, G. A. Synthesis and evaluation' of ^ra«5-3,4-cyclopropyl L-arginine analogues as isoform selective inhibitors of nitric oxide synthase // Bioorg. Med.

45. Chem. 2003. - 11(6). - P. 869-873.

46. Wolff, D: J.,Gauld, D. S., Neulander, M. J., Southan, G. Inactivation of nitric oxide synthase by substituted aminoguanidines and aminoisothioureas // J.Pharmacol. Exp. Ther. 1997. - 283. - P. 265-273.

47. Martin, N. I., Beeson, W. Т., Woodward, J. J., Marietta, M: A. №-Aminoguanidines from primary amines and the preparation of nitric oxide synthase inhibitors // J. Med. Chem. 2008. - 51 (4). - P: 924-931.

48. Rossiter, S., Smith, C. L., Malaki, M., Nandi, M.-, Gill, H., Leiper, J. M., Vallance, P., Selwood, D: L. Selective substrate-based inhibitors of mammalian dimethylarginine dimethylaminohydrolase // J. Med. Chem. 2005. - 48 (14). - P. 4670^4678.

49. Differential binding modes dependent on nitrogen substitution // J. Med. Chem. -2004. 47 (12). - P. 3320-3323.

50. Beaton H. G., Hamley P., Nicholls D. J., Tinker A. C., Wallace A. V. 3,4-Dihydro-l-isoquinolinamines: a novel class of nitric oxide synthase inhibitors with a range of isoform selectivity and potency // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000. -11.-P. 1023-1026.

51. Oh; H., Shin, H., Oh, G.-S., Рае, H.-O., Chai, K.-Y., Chung, H.-T., Lee, H.-S. The absolute configuration of prunioside A from Spiraea prunifolia and biological-activities of related compounds // Phytochemistry. 2003. - 64 (6). - P. 1113-1118.

52. Honda, Т., Rounds, В. V., Bore, L., Finlay, H. J., Favaloro F. G., Suh, Jr. N.,

53. Wang, Y., Sponv M. В.", Gribble, G. W. Synthetic oleanane and ursanetriterpenoids with modified rings A and C: a series of highly active inhibitors-ofnitric oxide production in mouse macrophages // J. Med. Chem. 2000. - 43. - P. 4233-4246.

54. Fast, W., Nikolic, D., Van Breemen, R. В., Silverman, R. B. Mechanistic studies of the inactivation of inducible nitric oxide synthase by N5-(l-Iminoethyl)-1-ornithine (1-NIO) //J. Am. Chem. Soc. 1999. - 121 (5). - P. 903-916.

55. Zhu, Y., Nikolic, D., Van Breemen, R. В., Silverman R. B. Mechanism of inactivation of inducible nitric oxide synthase by amidines. Irreversible enzyme inactivation without inactivator modification // J. Am. Chem. Soc. 2005. - 127 (3).-P. 858-868.

56. Hutzler, J. M., Melton, R. J., Rumsey, J. M., Schnute, M. E., Locuson, C. W., Wienkers, L. C. Inhibition* of cytochrome P450 3A4 by a pyrimidineimidazole: evidence for complex heme interactions // Chem. Res. Toxicol. 2006: - 19 (12). -P.1650-1659.

57. Kawanaka, Y., Kobayashi, K., Kusuda, S., Tatsumi, Т., Murota, M.,

58. Ahmad, V. U., Shah, M. G., Mohammad, F. V., Ismail, N., Noorwala, M. Macrophylloside, a flavone glucoside from Primula macrophylla II Phytochemistry.- 1991.-V. 30.-N 12.-P. 4206-4208.

59. Goris, Albert;-Canal, Henri. Chemical composition of the essential oil of Primula farinosa L // Compt. Rend. 1945. - N 220: - P. 925-926.

60. Биоактивные вещества растительного происхождения, М.: Наука, 2001. — 189 с.

61. Pharmacognosy. Phytochemistry. Medical Plants / Jean Bruneton, New York, 1999: 847 p.

62. Budzianowski, J., Morozowska, Ml, Wesolowska, M. Lipophilic'flavones of Primula veris L. from field cultivation and in vitro cultures // Phytochemistry. -2005.-V. 66. — № 9: — P.5 1033-1039.

63. The chemistry of flavonoid* compounds / Edited by T. A. Geissman. Los-Angeles: Department of Chemistry University of California, Pergamon Press, 1962.-666 p.

64. Harborne, J. B. Anthocyanidins of the Primulaceae // Nature. 1958. - N 460.-P. 126-27.

65. Kendrick, L., Marr, Bruce., Bohm, A. et. al. Flavonoids of Hawaiian endemic Lysimachia// Phytochemistry. 1998. - V. 49. -N 2. - P. 553-557.

66. Kitagawa, I., Matsuda, A., Yosioka, I. Saponin and sapogenol. Sapogenol constituents of five Primulaceous plants. // Chem. Pharm. Bull. 1972. - 20(10). — P. 2226-2234.

67. Ульченко; Н. Г., Беккер, Н. П., Глушенкова, А. И: Липиды и липофильные компоненты надземной части Daucus sativus II Хим. прир. соед. 2000; - № 6. - С. 29-32. ■:••■.".

68. Zinsmeister, Hi D., Becker, Hi, Eicher, Т., Bryophytes, as source of biologically active, naturally occuring material // Angew. Chem. Int. Ed. Engl. -1991.-Vol. 30.-P. 134-151.

69. Qu, J., Xie, C., Guo, H., Yu, W., Lou, H. Antifungal dibenzofiiran bis(bibenzyl)s from the liverwort Astrella angusta II Phytochemistry. — 2007. — 68. -P. 1767-1774.

70. Erba, E., Pocar, D., Possi, L. M. New esters of R-(+)-usnic acid // II farmaco. -1998. Vol. 53. -№ 10-11. - P. 718-720.

71. Semenova, M. N., Kiselyov, A., Semenov, V. V. Sea urchin embryo as a model organism for the rapid functional' screening of tubulin modulators // BioTechniques. 2006. - Vol. 40. - № 6. - P. 765-773.

72. Препаративная органическая химия; под общ. ред. Н. С. Вульфсона. -М. -Л., Химия, 1964. 907 с.

73. Физер, JL, Физер, М. Реагенты для органического синтеза. т. 1. - М.: Мир, 1970.-445 с.

74. Fourie, Т. G., Ferreira, D., Roux, D. G. Flavonoid* synthesis based, on photolysis of flavan-3-ols, 3-hydroxy-flavanones, and 2-benzylbenzofuranones // J. Chem. Soc. Perkin Tr. 1 EN. 1977. - P. 125-133.

75. Sadtler standard spectra: Nuclear magnetic resonance spectra. V. 30. -19659. Philadelphia: Sadtler research lab., 1974.

76. Wannab, A., Ottosen, M., Bachelor, F. W. The synthesis of nor- and bisnorlupanes // Can. J. Chem. 1991. - Vol. 69, - P. 570-577.