Экспрессия рафт-образующих белков при немелкоклеточном раке легкого и ее влияние на свойства неопластических клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Шнейдерман, Анастасия Николаевна

• Шнейдерман, Анастасия Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шнейдерман, Анастасия Николаевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИПИДНЫЕ РАФТЫ И РАФТ-ОБРАЗУЮЩИЕ БЕЛКИ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. липидные рафты - микродомены в составе клеточных мембран.

1.2. Общие представления о строении и функционировании липидных рафтов.

1.3. Рафт-образующие белки: разнообразие и отдельные представители

1.4. Структура и локализация рафт-образующих белков.

1.4.1. Строение кавеолинов и каееод.

1.4.2. Строение и локализация флотиллинов.

1.4.3. Семейство стоматинов: строение и локализация.

1.5. Функции рафт-образующих белков.

1.5.1. Везикулярный транспорт.

1.5.2. Миграция и образование клеточных контактов.

1.5.3. Деградация внеклеточного матрикса.

1.5.4. Гомеостаз холестерола.

1.5.5. Транспорт глюкозы.

1.5.6. Роль флотиллинов в активации Т-лимфоцитов.

1.5.7. Участие стоматина в регуляции активности натриевых каналов

1.6. Роль рафт-образующих белков в опухолевой трансформации и прогрессии.

1.6.1. Двоякая роль кавеолина-1 в канг{ерогенезе.

1.6.2. Роль флотиллинов в канцерогенезе.

1.6.3. Роль стоматин-подобных белков в канцерогенезе.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика исследованных опухолевых образцов.

2.2. Клеточные линии.

2.3. Выделение нуклеиновых кислот.

2.3.1. Выделение плазмидной ДНК.

2.3.2. Выделение РНК из клеточных культур и образцов опухолевых тканей.

2.3.3. Выделение фрагментов ДНК из агарозных гелей.

2.4. Аналитический электрофорез ДНК в агарозных гелях.

2.5. Молекулярное клонирование.

2.5.1. Получение компетентных клеток Е. coli.

2.5.2. Трансформация компетентных клеток E.coli.

2.5.3. Обработка ДНКрестрицирующими эндонуклеазами.

2.5.4. Реакция лигирования.

2.5.5. Клонирование кодирующей последовательности генов с кДНК.

2.5.6. Клонирование предшественников малых шпилечных РНК.

2.6. Обратная транскрипция РНК.

2.7. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

2.7.1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени.

2.7.2. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) на плазмидных ДНК.

2.8. Трансфекция.

2.9. Инфекция псевдовирусными частицами.

2.10. Анализ белков.

2.10.1. Приготовление белковых лизатов.

2.10.2. Вестерн-блот гибридизация.

2.10.3. Приготовление образцов для определения ферментативной активности протеиназ.

2.10.4. Анализ желатиназной активности.

2.10.5. Анализ активности иРА.

2.11. Исследование клеточных характеристик in vitro.

2.11.1. Анализ динамики роста клеток.

2.11.2. Анализ клеточной подвижности в тесте на зарастание «раны» in vitro (wound healing assayj.

2.11.3. Анализ клеточной подвижности в камерах Бойдена.

2.11.4. Выделение ядер клеток и проведение исследования клеточного цикла на проточном цитофлуориметре.

2.12. Статистическая обработка результатов.

2.13. Список растворов, сред и реактивов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Анализ продукции рафт-образующих белков в образцах НМРЛ.

3.1.1. Определение продукции белков флотиллин-1, флотиллин-2 и стоматин методом Вестерн-блот анализа.

3.1.2. Корреляционный анализ изменения продукции флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина.

3.1.3. Определение уровня относительной экспрессии гена FL0T-2 в груше АК с помощью ПЦР в реальном времени.

3.1.4. Обсу.ждение результатов исследования клинических образцов.

3.2. Анализ продукции рафт-образующих белков в клеточных линиях НМРЛ.

3.3. Получение ретровирусных векторов и клеточных линий А549 и Н358 с гиперэкспрессией генов FLOT-l, FLOT-2 и STOM.

3.4. Получение лентивирусных векторов с мшРНК к генам FL0T-1 и FLOT-2 и клеточных линий А549 и Н460 с подавленной экспрессией данных генов.

3.5. Исследование характеристик полученных клеточных линий в культуре in vitro.

3.5.1. Изучение экспрессии рафт-образующих белков в клеточных линиях с гиперэкспрессией генов FLOT-l, FLOT-2 и STOM.

3.5.2. Изучение экспрессии рафт-образующих белков в клеточных линиях с подавленной экспрессией генов FLOT-1 и FLOT-2.

3.5.3. Изучение динамики роста полученных клеточных линий.

3.5.4. Анализ клеточного цикла линий с подавленной экспрессией флотиллина-2.

3.5.5. Исследование миграционной активности полученных клеточных линий.

3.5.6. Изучение активности протеаз, разрушающих внеклеточный матрикс.

3.5.7. Влияние изменения экспрессии флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина на экспрессию и активность некоторых белков, участвующих в регуляции внутриклеточных сигнальных путей.

3.5.8. Обсуждение результатов исследования клеточных линий НМРЛ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия рафт-образующих белков при немелкоклеточном раке легкого и ее влияние на свойства неопластических клеток»

Актуальность. В последние годы в молекулярной биологии все больший интерес вызывает изучение липидных рафтов - микродоменов в составе клеточных мембран, богатых холестеролом и сфинголипидами, а также различными сигнальными белковыми молекулами. Липидные рафты могут представлять собой чрезвычайно маленькие, лабильные и короткоживущие структуры, но наряду с такими существуют и гораздо более крупные и стабильные микродомены, которые поддерживаются особыми рафт-образующими белками. Особой и наиболее значимой функцией рафт-образующих белков является их способность формировать «сигнальные платформы», и тем самым регулировать передачу клеточных сигналов. В настоящее время известно большое количество рафт-образующих белков, но наиболее изученными среди них являются белки семейства кавеолинов, основным представителем которых является кавеолин-1. Роль кавеолина-1 в канцерогенезе обусловлена его способностью влиять на пролиферацию, клеточную миграцию, программируемую гибель клеток, ангиогенез и другие процессы, имеющие важнейшее значение при опухолевой трансформации и прогрессии, а изменения его экспрессии фиксируются во многих типах опухолей человека [1;2].

До настоящего времени изучению других семейств рафт-образующих белков, среди которых наибольший интерес представляет группа БРРН ^отайпб, РгоЫЬШпб, ЕЫШшб, НАК/С), уделялось значительно меньше внимания. Одними из представителей этой группы являются белки семейства флотиллинов. Они широко экспрессируются в тканях человека, локализуются в клетках преимущественно на плазматической мембране, способны к олигомеризации и принимают участие в регуляции многих сигнальных путей, часто пересекаясь в своих функциях с кавеолинами [3]. На сегодняшний день роль флотиллинов в канцерогенезе практически не изучена, что делает их особенно привлекательными объектами для исследования. Кроме того, 8 различные рафт-образующие белки могут являться функциональными аналогами друг друга, что наводит на мысль о их возможной взаимозаменяемости. Однако до сих пор не проводилось совместных скрининговых исследований экспрессии различных рафт-образующих белков в опухолях человека.

В качестве объекта исследования экспрессии некоторых представителей группы 8РРН белков нами был выбран немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ). Исследование молекулярных механизмов возникновения и прогрессии опухолевого роста на модели рака легкого, как одного из самых распространенных, неблагоприятно текущих и сложно поддающихся лечению онкологических заболеваний [4], предоставляет возможность в полной мере оценить значимость изменения тех или иных факторов, ассоциированных с канцерогенезом. На сегодняшний день важнейшими факторами прогноза для больных НМРЛ остаются клинические параметры, и в первую очередь степень дифференцировки опухолевых клеток и статус метастазирования. Некоторые успехи достигнуты и в изучении молекулярных маркеров, однако поиск дополнительных факторов представляет собой одну из наиболее актуальных проблем современной молекулярной онкологии.

Целью данной работы являлось изучение экспрессии флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ) и исследование возможных механизмов влияния данных рафт-образующих белков на свойства опухолевых клеток.

В соответствии с указанной целью были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Оценить продукцию флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина в образцах первичных опухолей НМРЛ.

2. Сопоставить изменения продукции флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина с клинико-морфологическими показателями, такими как гистологический тип опухолей, степень дифференцировки опухолевых клеток, статус метастазирования.

3. Исследовать влияние гиперэкспрессии генов FLOT-1, FLOT-2 и STOM, а также подавления экспрессии генов FLOT-1 и FLOT-2 на характеристики клеточных линий А549 (АК легкого) и Н460 (крупноклеточная карцинома легкого) человека.

4. Изучить влияние изменения экспрессии генов FLOT-1, FLOT-2 и STOM на уровень продукции и статус фосфорилирования некоторых белков, участвующих в передаче клеточных сигналов.

5. Оценить взаимное влияние изменения экспрессии различных рафт-образующих белков в клеточных линиях А549 и Н460.

Научная новизна. В данной работе проведено скрининговое исследование продукции флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина при HMPJI, которое впервые показало, что содержание стоматина снижается в большинстве исследованных случаев HMPJI человека.

На модельных системах клеточных линий PJI показано влияние флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина на такие важнейшие свойства клеток, как пролиферация, миграция, способность к деградации внеклеточного матрикса. Получены приоритетные данные о существовании взаимного влияния изменения экспрессии рафт-образующих белков. Изменение экспрессии одного из рафт-образующих белков может сопровождаться изменением эндогенного уровня и других представителей этой группы белков, что, очевидно, изменяет структуру и функционирование мембранных рафтов. Возможные механизмы взаимного влияния рафт-образующих белков являются одной из неисследованных на сегодняшний день, но крайне актуальных проблем, поскольку данные изменения могут приводить к модификации важнейших путей передачи сигналов, ассоциированных с опухолевой трансформацией и прогрессией.

Научно-практическая значимость. Исследование экспрессии рафтобразующих белков флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина, а также определение молекулярных механизмов их влияния на свойства опухолевых клеток открывает новые перспективы для поиска дополнительных маркеров

10 одного из самых прогностически неблагоприятных онкологических заболеваний - рака легкого.

Анализ полученных результатов позволил выявить корреляционные связи между уровнем продукции рафт-образующих белков и клинико-морфологическими показателями опухолевого роста при НМРЛ человека. Так, обнаруженная в исследуемой выборке НМРЛ корреляционная связь между уровнем продукции флотиллина-2 и степенью дифференцировки опухолевых клеток позволяет использовать этот белок в качестве маркера дифференцировки при данном онкологическом заболевании.

Изучение рафт-образующих белков разных семейств и возможных путей их взаимной регуляции позволит расширить фундаментальные знания о механизмах опухолевой трансформации и прогрессии, что крайне актуально и представляет не только большой теоретический научный интерес, но и может широко применяться при решении проблем современной молекулярной онкологии.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Шнейдерман, Анастасия Николаевна

Выводы

1) Впервые выявлено изменение содержания рафт-образующих белков флотиллина-1, флотиллина-2 и стоматина в образцах НМРЛ по сравнению с условно нормальной тканыо.

2) Обнаружена статистически значимая связь между содержанием флотиллина-2 и степенью дифференцировки опухолевых клеток: опухоли с высокой или умеренной степенью дифференцировки характеризуются равным или повышенным уровнем белка, в низко дифференцированных опухолях уровень флотиллина-2 чаще снижается.

3) Рост клеток линий А549 и Н460 НМРЛ усиливается при гиперэкспрессии стоматина, снижается при гиперэкспрессии флотиллина-1, а также при подавлении экспрессии флотиллина-2.

4) Миграционная способность клеток линий А549 и Н460 прямо пропорциональна уровню экспрессии флотиллина-2, но не зависит от флотиллина-1 и стоматина.

5) Гиперэкспрессия флотиллина-2 приводит к снижению фосфорилирования киназ ЕЮС-1/2 и р38, а подавление экспрессии флотиллина-1 усиливает фосфорилирование ЕКК-1/2. Гиперэкспрессия флотиллина-1, а также подавление экспрессии флотиллина-2 сопровождается увеличением продукции белков р53 и р21. Подавление экспрессии флотиллина-2 увеличивает фосфорилирование РАК киназы.

6) Подавление экспрессии флотиллина-2 в клеточных линиях А549 и Н460 НМРЛ сопровождается снижением содержания флотиллина-1 и возрастанием уровня стоматина и кавеолина-1. Подавление экспрессии флотиллина-1 не влияет на уровень других рафт-образующих белков. Обнаруженная взаимосвязь между рафт-образующими белками действует на посттранскрипционном уровне.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шнейдерман, Анастасия Николаевна, 2012 год

1. Koleske, A. J. Reduction of caveolin and caveolae in oncogenically transformed cells / A. J. Koleske, D. Baltimore, M. P. Lisanti // Proc Natl Acad Sci USA.- 1995. 92(5). - P. 1381-1385.

2. Williams, Т. M. Caveolin-1 in oncogenic transformation, cancer, and metastasis / Т. M. Williams, M. P. Lisanti // Am J Physiol Cell Physiol. 2005. -288(3). - P. 494-C506.

3. Browman, D. T. The SPFH domain-containing proteins: more than lipid raft markers / D. T. Browman, M. B. Hoegg, S. M. Robbins // Trends Cell Biol. 2007. - 17(8).-P. 394-402.

4. Давыдов, M. И. Смертность от злокачественных заболеваний / М. И. Давыдов, Е. М. Аксель // Вестник РОЩ имени Н. Н. Блохина РАМН. 2008. -т. 19, №2, Приложение 1.-С. 91-119.

5. Singer, S. J. The fluid mosaic model of the structure of cell membranes / S. J. Singer, G. L. Nicolson // Science. 1972. - 175(23). - P. 720-731.

6. Mellman, I. Membranes and sorting / I. Mellman // Curr Opin Cell Biol. -1996.- 8(4). P. 497-498.

7. Lingwood, D. Lipid rafts as a membrane-organizing principle / D. Lingwood, K. Simons // Science. 2010. - 327(5961). - P. 46-50.

8. Simons, K. Functional rafts in cell membranes / K. Simons, E. Ikonen // Nature. 1997. - 387(6633). - P. 569-572.

9. Brown, D.A. Functions of lipid rafts in biological membranes / D. A. Brown, E. London//Annu Rev Cell Dev Biol. 1998. - 14. - P. 111-136.

10. Munro, S. Lipid rafts: elusive or illusive? / S. Munro // Cell. 2003. - 115(4). -P. 377-388.

11. Simons, K. Lipid rafts and signal transduction / K. Simons, D. Toomre // Nat Rev Mol Cell Biol. 2000. - 1(1). - P. 31-39.

12. Simons, K. Revitalizing membrane rafts: new tools and insights / K. Simons, M. J. Gerl //Nat Rev Mol Cell Biol. 2010. - 11(10). - P. 688-699.

13. Seminario, M. C. Signal initiation in T-cell receptor microclusters / M. C. Seminario, S. C. Bunnell // Immunol Rev. 2008. - 221. - P. 90-106.

14. Lajoie, P. Lattices, rafts, and scaffolds: domain regulation of receptor signaling at the plasma membrane / P. Lajoie, J. G. Goetz, J. W. Dennis, I. R. Nabi // J Cell Biol. 2009. - 185(3). - P. 381-385.

15. Razani, B. Caveolae: from cell biology to animal physiology / B. Razani, S. E. Woodman, M. P. Lisanti // Pharmacol Rev. 2002. - 54(3). - P. 431-467.

16. Lindner, R. Domains in biological membranes / R. Lindner, H. Y. Nairn // Exp Cell Res. 2009. - 315(17). - P. 2871-2878.

17. Yanez-Mo, M. Tetraspanin-enriched microdomains: a functional unit in cell plasma membranes / M. Yanez-Mo, O, Barreiro, M. Gordon-Alonso, M. Sala-Valdes, F. Sanchez-Madrid // Trends Cell Biol. 2009. - 19(9). - P. 434-446.

18. Tang, Z. Molecular cloning of caveolin-3, a novel member of the caveolin gene family expressed predominantly in muscle / Z. Tang, P. E. Scherer, T. Okamoto, K. Song, C. Chu, D. S. Kohtz // J Biol Chem. 1996. - 271(4). - P. 22552261.

19. Parton, R. G. Biogenesis of caveolae: a structural model for caveolin-induced domain formation / R. G. Parton, M. Hanzal-Bayer, J. F. Hancock // J Cell Sci. -2006. 119 (Pt 5). - P. 787-796.

20. Navarro, A. A role for caveolae in cell migration / A. Navarro, B. nand-Apte, M. O. Parat//FASEB J. 2004. - 18(15). -P. 1801-1811.

21. Sanguinetti, A. R. Fyn is required for oxidative- and hyperosmotic-stress-induced tyrosine phosphorylation of caveolin-1 / A. R. Sanguinetti, H. Cao, M. C.

22. Corley//Biochem J.-2003.-376 (Pt 1).-P. 159-168.130

23. Radel, C. Integrin mechanotransduction stimulates caveolin-1 phosphorylation and recruitment of Csk to mediate actin reorganization / C. Radel, V. Rizzo // Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2005. - 288(2). - P. 936-945.

24. Yamada, E. The fine structure of the gall bladder epithelium of the mouse / E. Yamada // J Biophys Biochem Cytol. 1955. - 1(5). - P. 445-458.

25. Sandvig, K. Clathrin-independent endocytosis: from nonexisting to an extreme degree of complexity / K. Sandvig, M. L. Torgersen, H. A. Raa, D. B. van // Histochem Cell Biol. 2008. - 129(3). - P. 267-276.

26. Hill, M. M. PTRF-Cavin, a conserved cytoplasmic protein required for caveola formation and function / M. M. Hill, M. Bastiani, R. Luetterforst, M. Kirkham, A. Kirkham, S. J. Nixon//Cell. 2008. - 132(1).-P. 113-124.

27. Sowa, G. Caveolae, caveolins, cavins, and endothelial cell function: new insights / G. Sowa // Front Physiol. 2012. - 2. - P. 120.

28. Bucci, M. In vivo delivery of the caveolin-1 scaffolding domain inhibits nitric oxide synthesis and reduces inflammation / M. Bucci, J. P. Gratton, R. D. Rudic, L. Acevedo, F. Roviezzo, G. Cirino // Nat Med. 2000. - 6(12). - P. 13621367.

29. Yamamoto, M. Caveolin is an activator of insulin receptor signaling / M. Yamamoto, Y. Toya, C. Schwencke, M. P. Lisanti, M. G. Myers, Y. Ishikawa // J Biol Chem. 1998. - 273(41). - P. 26962-26968.

30. Lisanti, M. P. Caveolae, caveolin and caveolin-rich membrane domains: a signalling hypothesis / M. P. Lisanti, P. E. Scherer, Z. Tang, M. Sargiacomo // Trends Cell Biol. 1994. - 4(7). - P. 231-235.

31. Morrow, I. C. Flotillins and the PHB domain protein family: rafts, worms and anaesthetics /1. C. Morrow, R. G. Parton // Traffic. 2005. - 6(9). - P. 725-740.

32. Langhorst, M. F. Scaffolding microdomains and beyond: the function of reggie/flotillin proteins / M. F. Langhorst, A. Reuter, C. A. Stuermer // Cell Mol Life Sci. 2005. - 62(19-20). - P. 2228-2240.

33. Babuke, T. Dissecting the molecular function of reggie/flotillin proteins / T. Babuke, R. Tikkanen // Eur J Cell Biol. 2007. - 86(9). - P. 525-532.

34. Langhorst, M. F. Trafficking of the microdomain scaffolding protein reggie-l/flotillin-2 / M. F. Langhorst, A. Reuter, F. A. Jaeger, F. M. Wippich, G. Luxenhofer, H. Plattner // Eur J Cell Biol. 2008. - 87(4). - P. 211-226.

35. Yao, Y. The differential protein and lipid compositions of noncaveolar lipid microdomains and caveolae / Y. Yao, S. Hong, H. Zhou, T. Yuan, R. Zeng, K. Liao // Cell Res. 2009. - 19(4). - P. 497-506.

36. Li, Y. DHHC5 palmitoylates flotillin-2 and is rapidly degraded on induction of neuronal differentiation in cultured cells / Y. Li, B. R. Martin, B. F. Cravatt, S. L. Hofmann // J Biol Chem. 2011. - 567. - P. 245-247.

37. Solis, G. P. Reggie/flotillin proteins are organized into stable tetramers in membrane microdomains / G. P. Solis, M. Floegg, C. Munderloh, Y. Schrock, E. Malaga-Trillo, E. Rivera-Milla // Biochem J. 2007. - 403(2). - P. 313-322.

38. Ludwig, A. Flotillin microdomains interact with the cortical cytoskeleton to control uropod formation and neutrophil recruitment / A. Ludwig, G. P. Otto, K. Riento, E. Hams, P. G. Fallon, B. J. Nichols // J Cell Biol. 2010. - 191(4). - P. 771-781.

39. Neumann-Giesen, C. Role of EGF-induced tyrosine phosphorylation of reggie-l/flotillin-2 in cell spreading and signaling to the actin cytoskeleton / C. Neumann-Giesen, I. Fernow, M. Amaddii, R. Tikkanen // J Cell Sci. 2007. -120(Pt3).-P. 395-406.

40. Lande, W. M. Missing band 7 membrane protein in two patients with high Na, low K erythrocytes / W. M. Lande, P. V. Thiemann, W. C. Mentzer // J Clin Invest. 1982. - 70(6). - P. 1273-1280.

41. Fricke, B. The "stomatin" gene and protein in overhydrated hereditary stomatocytosis / B. Fricke, A. C. Argent, M. C. Chetty, A. R. Pizzey, E. J. Turner, M. M. Ho // Blood. 2003. - 102(6). - P. 2268-2277.

42. Wang, D. Purification of band 7.2b, a 31-kDa integral phosphoprotein absent in hereditary stomatocytosis / D. Wang, W. C. Mentzer, T. Cameron, R. M. Johnson // J Biol Chem. 1991. - 266(27). - P. 17826-17831.

43. Stewart, G. W. Hemolytic disease due to membrane ion channel disorders / G. W. Stewart // Curr Opin Hematol. 2004. - 11(4). - P. 244-250.

44. Zhu, Y. Stomatocytosis is absent in "stomatin"-deficient murine red blood cells / Y. Zhu, C. Paszty, T. Turetsky, S. Tsai, F. A. Kuypers, G. Lee // Blood. -1999.-93(7).-P. 2404-2410.

45. Gallagher, P. G. cDNA structure, tissue-specific expression, and chromosomal localization of the murine band 7.2b gene / P. G. Gallagher, M. Romana, J. H. Lieman, D. C. Ward // Blood. 1995. - 86(1). - P. 359-365.

46. Salzer, U. Stomatin, flotillin-1, and flotillin-2 are major integral proteins of erythrocyte lipid rafts / U. Salzer, R. Prohaska // Blood. 2001. - 97(4). - P. 11411143.

47. Snyers, L. Oligomeric nature of the integral membrane protein stomatin / L. Snyers, E. Umlauf, R. Prohaska // J Biol Chem. 1998. - 273(27). - P. 1722117226.

48. Umlauf, E. Association of stomatin with lipid bodies / E. Umlauf, E. Csaszar, M. Moertelmaier, G. J. Schuetz, R. G. Parton, R. Prohaska // J Biol Chem. 2004. -279(22). - P. 23699-23709.

49. Snyers, L. Cysteine 29 is the major palmitoylation site on stomatin / L. Snyers, E. Umlauf, R. Prohaska // FEBS Lett. 1999. - 449(2-3). - P. 101-104.

50. Umlauf, E. Characterization of the stomatin domain involved in homo-oligomerization and lipid raft association / E. Umlauf, M. Mairhofer, R. Prohaska // J Biol Chem. 2006. - 281(33). - P. 23349-23356.

51. Goldstein, B. J. Cloning and characterization of SLP3: a novel member of the stomatin family expressed by olfactory receptor neurons / B. J. Goldstein, H. M. Kulaga, R. R. Reed // J Assoc Res Otolaryngol. 2003. - 4(1). - P. 74-82.

52. Wang, Y. Identification and characterization of human SLP-2, a novel homologue of stomatin (band 7.2b) present in erythrocytes and other tissues / Y. Wang, J. S.Morrow / J Biol Chem. 2000. - 275(11). - P. 8062-8071.

53. Strauss, K. Exosome secretion ameliorates lysosomal storage of cholesterol in Niemann-Pick type C disease / K. Strauss, C. Goebel, H. Runz, W. Mobius, S. Weiss, I. Feussner // J Biol Chem. 2010. - 285(34). - P. 26279-26288.

54. Schubert, W. Caveolae-deficient endothelial cells show defects in the uptake and transport of albumin in vivo / W. Schubert, P. G. Frank, B. Razani, D. S. Park, C. W. Chow, M. P. Lisanti // J Biol Chem. 2001. - 276(52). - P. 48619-48622.

55. Frank, P. G. Caveolin, caveolae, and endothelial cell function / P. G. Frank, S. E. Woodman, D. S. Park, M. P. Lisanti // Arterioscler Thromb Vase Biol. 2003. -23(7).-P. 1161-1168.

56. Minshall, R. D. Caveolin regulation of endothelial function / R. D. Minshall, W. C. Sessa, R. V. Stan, R. G. Anderson, A. B. Malik // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2003. - 285(6). - P. 1179-1183.

57. Frick, M. Coassembly of flotillins induces formation of membrane microdomains, membrane curvature, and vesicle budding // M. Frick, N. A. Bright, K. Riento, A. Bray, C. Merrified, B. J. Nichols // Curr Biol. 2007. - 17(13). - P. 1151-1156.

58. Ait-Slimane, T. Basolateral internalization of GPI-anchored proteins occurs via a clathrin-independent flotillin-dependent pathway in polarized hepatic cells / T.

59. Ait-Slimane, R. Galmes, G. Trugnan, M. Maurice // Mol Biol Cell. 2009. - 20(17). - P. 3792-3800.

60. Glebov, O. O. Flotillin-1 defines a clathrin-independent endocytic pathway in mammalian cells / O. O. Glebov, N. A. Bright, B. J. Nichols // Nat Cell Biol. -2006.- 8(1).-P. 46-54.

61. Riento, K. Endocytosis of flotillin-1 and flotillin-2 is regulated by Fyn kinase / M. Frick, T. Schafer, B. J. Nichols J // Cell Sci. 2009. - 122(Pt 7). - P. 912-918.

62. Babuke, T. Hetero-oligomerization of reggie-l/flotillin-2 and reggie-2/flotillin-l is required for their endocytosis / T. Babuke, M. Ruonala, M. Meister, M. Amaddii, C. Genzler, A. Esposito // Cell Signal. 2009. - 21(8). - P. 1287-1297.

63. Nevins, A. K. Caveolin-1 functions as a novel Cdc42 guanine nucleotide dissociation inhibitor in pancreatic beta-cells / A. K. Nevins, D, C. Thurmond // J Biol Chem. 2006. - 281(28). - P. 18961-18972.

64. Lin, M. Regulation of pancreatic cancer cell migration and invasion by RhoC GTPase and caveolin-1 / M. Lin, M. M. DiVito, S. D. Merajver, M. Boyanapalli, K. L. van Golen // Mol Cancer. 2005. - 4(1). - P. 21.

65. Shakirova,Y. Increased Rho activation and PKC-mediated smooth muscle contractility in the absence of caveolin-1 / Y. Shakirova, J. Bonnevier, S. Albinsson, M. Adner, B. Rippe, J. Broman // Am J Physiol Cell Physiol. 2006. -291(6)-P. 1326-1335.

66. Haglund, K. Recruitment of Pyk2 and Cbl to lipid rafts mediates signals important for actin reorganization in growing neurites / K. Haglund, I. Ivankovic-Dikic, N. Shimokawa, G. D. Kruh, I. Dikic // J Cell Sci. 2004. - 117(Pt 12). - P. 2557-2568.

67. Lopez-Casas, P. P. Regulation of flotillin-1 in the establishment of NIH-3T3 cell-cell interactions / P. P. Lopez-Casas, J. del Mazo // FEBS Lett. 2003. -555(2). - P. 223-228.

68. Kioka, N. Vinexin, CAP/ponsin, ArgBP2: a novel adaptor protein familyregulating cytoskeletal organization and signal transduction / N. Kioka, K. Ueda, T.

69. Amachi // Cell Struct Funct. 2002. - 27(1). - P. 1-7.136

70. Solis, G. P. Reggies/flotillins regulate E-cadherin-mediated cell contact formation by affecting EGFR trafficking / G. P. Solis, Y. Schrock, N. Hulsbusch, M. Wiechers, H. Plattner, C. A. Stuermer // Mol Biol Cell. 2012. - 23(10). - P. 1812-1825.

71. Meyer, A. Integrin-linked kinase complexes with caveolin-1 in human neuroblastoma cells / A. Meyer, C. M. van Golen, M. Boyanapalli, B. Kim, M. E. Soules, E. L. Feldman // Biochemistry. 2005. - 44(3). - P. 932-938.

72. Chun, J. The subcellular localization control of integrin linked kinase 1 through its protein-protein interaction with caveolin-1 / J. Chun, S. Hyun, T. Kwon,

73. E. J. Lee, S. K. Hong, S. S. Kang// Cell Signal. 2005. - 17(6). - P. 751-760.

74. Schrock, Y. Regulation of focal adhesion formation and filopodia extension by the cellular prion protein (PrPC) / Y. Schrock, G. P. Solis, C. A. Stuermer // FEBS Lett. 2009. - 583(2). - P. 389-393.

75. Williams, T. M. Caveolin-1 gene disruption promotes mammary tumorigenesis and dramatically enhances lung metastasis in vivo. Role of Cav-1 in cell invasiveness and matrix metalloproteinase (MMP-2/9) secretion / T. Williams,

76. F. M. Medina, I. Badano, R. B. Hazan, J. Hutchinson, W. J. Muller // J Biol Chem. 2004. - 279(49). - P. 51630-51646.

77. Cornfine, S. The kinesin KIF9 and reggie/flotillin proteins regulate matrix degradation by macrophage podosomes / S. Cornfine, M. Himmel, P. Kopp, A. K. El, C. Wiesner, M. Kruger // Mol Biol Cell. 2011. - 22(2). - P. 202-215.

78. Uittenbogaard, A. Characterization of a cytosolic heat-shock protein-caveolin chaperone complex. Involvement in cholesterol trafficking / A. Uittenbogaard, Y. Ying, E. J. Smart // J Biol Chem. 1998. - 273(11). - P. 6525-6532.

79. Roitbak, T. A polycystin multiprotein complex constitutes a cholesterol-containing signalling microdomain in human kidney epithelia / T. Roitbak, Z. Surviladze, R. Tikkanen, A. Wandinger-Ness // Biochem J. 2005.- 392(Pt 1). - P. 29-38.

80. Ge, L. Flotillins play an essential role in Niemann-Pick CI-like 1-mediated cholesterol uptake / L. Ge, W. Qi, L. J. Wang, H. H. Miao, Y. X. Qu, B. L. Li // Proc Natl Acad Sci U S A. 2011. - 108(2). - P. 551-556.

81. Thorens, B. Glucose transporters in the 21st Century / B. Thorens, M. Mueckler // Am J Physiol Endocrinol Metab. 2010. - 298(2). - P. 141-145.

82. Mueckler, M. Facilitative glucose transporters / M. Mueckler // Eur J Biochem. 1994. - 219(3). - P. 713-725.

83. Zhang, J. Z. Overexpression of stomatin depresses GLUT-1 glucose transporter activity / J. Zhang, Z. W. Abbud, R. Prohaska, F. Ismail-Beigi // Am J Physiol Cell Physiol. 2001. - 280(5). - P. 1277-1283.

84. Czech, M. P. Signaling mechanisms that regulate glucose transport / M. Czech, P. S. Corvera//J Biol Chem. 1999. - 274(4). - P. 1865-1868.

85. Baumann, C. A. CAP defines a second signalling pathway required for insulin-stimulated glucose transport / C. A. Baumann, V. Ribon, M. Kanzaki, D. C. Thurmond, S. Mora, S. Shigematsu // Nature 2000. 407(6801). - P. 202-207.

86. Jiang, M. Protein disregulation in red blood cell membranes of type 2 diabetic patients / M. Jiang, L. Jia, W. Jiang, X. Hu, H. Zhou, X. Gao // Biochem Biophys Res Commun. 2003. - 309(1). - P. 196-200.

87. Langhorst, M. F. Preformed reggie/flotillin caps: stable priming platforms for macrodomain assembly in T cells / M. Langhorst, F. A. Reuter, G. Luxenhofer, E. M. Boneberg, D. F. Legler, H. Plattner // FASEB J. 2006. - 20(6). - P. 711-713.

88. Rajendran, L. Flotillins are involved in the polarization of primitive and mature hematopoietic cells / L. Rajendran, J. Beckmann, A. Magenau, E. M. Boneberg, K. Gaus, A. Viola//PLoS One. 2009. - 4(12). - P. 8290.

89. Affentranger, S. Dynamic reorganization of flotillins in chemokine-stimulated human T-lymphocytes / S. Affentranger, S. Martinelli, J. Hahn, J. Rossy, V. Niggli // BMC Cell Biol. 2011. - 12. - P. 28.

90. Price, M. P. Stomatin modulates gating of acid-sensing ion channels / M. P. Price, R. J. Thompson, J. O. Eshcol, J. A. Wemmie, C. J. Benson // J Biol Chem.2004. 279(51). - P. 53886-53891.

91. Stewart G. Stomatin / G. Stewart // Int J Biochem Cell Biol. 1997. - 29(2). -P. 271-274.

92. Mark P.Mattson. Membrane Microdomain Signaling: Lipid Rafts in Biology and Medicine / Mark P.Mattson // Humana Press. 2005. - P. 161-203.

93. Ross, D. T. Systematic variation in gene expression patterns in human cancer cell lines / D. T. Ross, U. Scherf, M. B. Eisen, C. M. Perou, C. Rees, P. Spellman // Nat Genet. 2000. - 24(3). - P. 227-235.

94. Ravid, D. Caveolin-1 inhibits anoikis and promotes survival signaling in cancer cells / D. Ravid, S. Maor, H. Werner, M. Liscovitch // Adv Enzyme Regul. -2006.-46.-P. 163-175.

95. Zenklusen, J. C. Mutational and functional analyses reveal that ST7 is a highly conserved tumor-suppressor gene on human chromosome 7q31 / J. C. Zenklusen, C. J. Conti, E. D. Green // Nat Genet. 2001. - 27(4). - P. 392-398.

96. Hayashi, K. Invasion activating caveolin-1 mutation in human scirrhous breast cancers / K. Hayashi, S. Matsuda, K. Machida, T. Yamamoto, Y. Fukuda, Y. Nimura//Cancer Res. 2001. - 61(6). - P. 2361-2364.

97. Chen, S. T. Mutational, epigenetic and expressional analyses of caveolin-1 gene in breast cancers / S. T. Chen, S. Y. Lin, K. T. Yeh, S. J. Kuo, W. L. Chan, Y. P. Chu // Int J Mol Med. 2004. - 14(4). - P. 577-582.

98. Cui, J. Hypermethylation of the caveolin-1 gene promoter in prostate cancer / J. Cui, L. R. Rohr, G. Swanson, V. O. Speights, T. Maxwell, A. R. Brothman // Prostate. 2001. - 46(3). - P. 249-256.

99. Sanna, E. Binding of nuclear caveolin-1 to promoter elements of growth-associated genes in ovarian carcinoma cells / E. Sanna, S. Miotti, M. Mazzi, S. G. De, S. Canevari, A. Tomassetti // Exp Cell Res. 2007. - 313(7). - P. 1307-1317.

100. Feng, X. Caveolin-1 associates with TRAF2 to form a complex that is recruited to tumor necrosis factor receptors / X. Feng, M. L. Gaeta, L. A. Madge, J. H. Yang, J. R. Bradley, J. S. Pober // J Biol Chem. 2001. - 276(11). - P. 83418349.

101. Zundel, W. Caveolin 1-mediated regulation of receptor tyrosine kinase-associated phosphatidylinositol 3-kinase activity by ceramide / W. Zundel, L. M. Swiersz, A. Giaccia // Mol Cell Biol. 2000. - 20(5). - P. 1507-1514.

102. Woodman, S. E. Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenicresponse to exogenous stimuli / S. E. Woodman, A. W. Ashton, W. Schubert, H.1.e, T. M. Williams, F. A. Medina // Am J Pathol. 2003. - 162(6). - P. 2059-2068.141

103. Yang, G. Caveolin-1 expression in clinically confined human prostate cancer: a novel prognostic marker / G. Yang, L. D. Truong, T. M. Wheeler, T. C. Thompson // Cancer Res. 1999. - 59(22). - P. 5719-5723.

104. Tahir, S. A. Preoperative serum caveolin-1 as a prognostic marker for recurrence in a radical prostatectomy cohort / S. A. Tahir, A. Frolov, T. G. Hayes, M. P. Mims, B. J. Miles, S. P. Lerner // Clin Cancer Res. 2006. - 12(16). - P. 4872-4875.

105. Suzuoki, M. Impact of caveolin-1 expression on prognosis of pancreatic ductal adenocarcinoma / M. Suzuoki, M. Miyamoto, K. Kato, K. Hiraoka, T. Oshikiri, Y. Nakakubo // Br J Cancer. 2002. - 87(10). - P. 1140-1144.

106. Tanase, C. P. Caveolin-1: a marker for pancreatic cancer diagnosis / Tanase, C. P. // Expert Rev Mol Diagn. 2008. - 8(4). - P. 395-404.

107. Joo, H. J. Increased expression of caveolin-1 and microvessel density correlates with metastasis and poor prognosis in clear cell renal cell carcinoma / H. J. Joo, D. K. Oh, Y. S. Kim, K. B. Lee, S. J. Kim // BJU Int. 2004. - 93(3). - P. 291-296.

108. Yoo, S. H. Expression of caveolin-1 is associated with poor prognosis ofpatients with squamous cell carcinoma of the lung / S. H. Yoo, Y. S. Park, H. R.142

109. Kim, S. W. Sung, J. H. Kim, Y. S. Shim // Lung Cancer. 2003. - 42(2). - P. 195202.

110. Делекторская, В. В. Иммуногистохимическое исследование экспрессии кавеолина-1 при плоскоклеточном раке пищевода / В. В. Делекторская, Г. Ю. Чемерис, П. В. Кононец, Ю. В. Бондаренко, И. Б. Зборовска // Технологии живых систем. 2012. - №3. - С. 8-13.

111. Cho, D. S. Impact of caveolin-1 expression on the prognosis of transitional cell carcinoma of the upper urinary tract / D. S. Cho, H. Yim, K. S. Cho, S. J. Hong, N. H. Cho, S. I. Kim // J Korean Med Sci. 2008. - 23(2). - P. 296-301.

112. Lin, C. Knockdown of FLOT1 impairs cell proliferation and tumorigenicity in breast cancer through upregulation of F0X03a / C. Lin, Z. Wu, X. Lin, C. Yu, T. Shi, Y. Zeng // Clin Cancer Res. 2011. - 17(10). - P. 3089-3099.

113. Gomez, V. Regulation of aurora В kinase by the lipid raft protein flotillin-1 / V. Gomez, M. Sese, A. Santamaria, J. D. Martinez, E. Castellanos, M. Soler // J Biol Chem. 2010. - 285(27). - P. 20683-20690.

114. Chang, D. SLP-2 overexpression is associated with tumour distant metastasis and poor prognosis in pulmonary squamous cell carcinoma / D. Chang, К. Ma, M. Gong, Y. Cui, Z. H. Liu, X. G. Zhou //Biomarkers. 2010. - 15(2). - P. 104-110.

115. Cui, Z. Stomatin-like protein 2 is overexpressed and related to cell growth in human endometrial adenocarcinoma / Z. Cui, L. Zhang, Z. Hua, W. Cao, W. Feng, Z. Liu // Oncol Rep. 2007. - 17(4). - P. 829-833.

116. Cao, W. High-level SLP-2 expression and HER-2/neu protein expression are associated with decreased breast cancer patient survival / W. Cao, B. Zhang, Y. Liu, H. Li, S. Zhang, L. Fu // Am J Clin Pathol. 2007. - 128(3). - P. 430-436.

117. Cao, W. SLP-2 overexpression could serve as a prognostic factor in node positive and HER2 negative breast cancer / W. Cao, B. Zhang, J. Li, Y. Liu, Z. Liu, B. Sun // Pathology. 2011. - 43(7). - P. 713-718.

118. Архипова, К. А. Координированное изменение экспрессии кавеолина-1 и других рафт-образующих белков в опухолевых клетках человека: Дис. канд. биол. наук: 14.00.06 / К. А. Архипова. Москва, 2010. - 64-73 с.

119. Stuermer, С. A. The reggie/flotillin connection to growth / С. A. Stuermer // Trends Cell Biol. 2010. - 20(1). - P. 6-13.

120. Wei, J. p53 Family: Role of Protein Isoforms in Human Cancer / J. Wei, E.

121. Zaika, A. Zaika // J Nucleic Acids. 2012. - 2012. - P. 687359.144

122. Feng, Z. p53 regulation of the IGF-1 /AKT/mTOR pathways and the endosomal compartment / Z. Feng // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2010. - 2(2). -P. 001057.

123. Yu, X. The regulation of the endosomal compartment by p53 the tumor suppressor gene / X. Yu, T. Riley, A. J. Levine // FEBS J. 2009. - 276(8). - P. 2201-2212.

124. Sasaki, Y. Identification of flotillin-2, a major protein on lipid rafts, as a novel target of p53 family members / Y. Sasaki, Y. Oshima, R. Koyama, R. Maruyama, H. Akashi, H. Mita // Mol Cancer Res. 2008. - 6(3). - P. 395-406.

125. Duffy, M. J. The urokinase plasminogen activator system: role in malignancy / M. J. Duffy // Curr Pharm Des. 2004. - 10(1). - P. 39-49.

126. Hanahan, D. Hallmarks of cancer: the next generation / D. Hanahan, R. A. Weinberg Cell. 2011. - 144(5). - P. 646-674.

127. Garces, C. A. Vascular endothelial growth factor receptor-3 and focal adhesion kinase bind and suppress apoptosis in breast cancer cells / C. A. Garces, E. V. Kurenova, V. M. Golubovskaya, W. G. Cance // Cancer Res. 2006. - 66(3). -P. 1446-1454.

128. Mitra, S. K. Focal adhesion kinase: in command and control of cell motility / S. K. Mitra, D. A. Hanson, D. D. Schlaepfer // Nat Rev Mol Cell Biol. 2005. -6(1).-P. 56-68.

129. Calalb, M. B. Tyrosine phosphorylation of focal adhesion kinase at sites in the catalytic domain regulates kinase activity: a role for Src family kinases / M. B. Calalb, T. R. Polte, S. K. Flanks // Mol Cell Biol. 1995. - 15(2). - P. 954-963.

130. Harris, S. L. The p53 pathway: positive and negative feedback loops / S. L. Harris, A. J. Levine // Oncogene. 2005. - 24(17). - P. 2899-2908.

131. Matsuoka, M. Phosphorylation of p53 protein in A549 human pulmonary epithelial cells exposed to asbestos fibers / M. Matsuoka, H. Igisu, Y. Morimoto // Environ Health Perspect. 2003. - 111(4). - P. 509-512.

132. Malumbres, M. To cycle or not to cycle: a critical decision in cancer / M.

133. Barbacid // Nat Rev Cancer. 2001. - 1(3). - P. 222-231.145

134. Fernow, I. Reggie-1 and reggie-2 localize in non-caveolar rafts in epithelial cells: cellular localization is not dependent on the expression of caveolin proteins / I. Fernow, A. Icking, R. Tikkanen // Eur J Cell Biol. 2007. - 86(6). - P. 345-352.

135. Frame, M. C. The FERM domain: organizing the structure and function of FAK / H. Patel, B. Serrels, D. Lietha, M. J. Eck // Nat Rev Mol Cell Biol. 2010. -11(11). - P. 802-814.

136. Gupta, P. B. Cancer stem cells: mirage or reality? / P. B. Gupta, C. L. Chaffer, R. A. Weinberg // Nat Med. 2009. - 15(9). - P. 1010-1012.