Экспрессия изоформ сурвивина при немелкоклеточном раке легкого и ее влияние на свойства неопластических клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Ковалева, Ольга Владимировна

• Ковалева, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ковалева, Ольга Владимировна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Сурвивин и его роль в канцерогенезе

2.1.1 Белки семейства IAP

2.1.2 Строение сурвивина и его изоформы.

2.1.3 Локализация сурвивина в клетке

2.1.4 Регуляция экспрессии сурвивина

2.1.5 Функции сурвивина

2.1.5.1 Участие в митозе

2.1.5.2 Участие в апоптозе

2.2 Основные представления о метастазировании 25 2.2.1 Участие сурвивина в процессах метастазирования

2.3 Исследование экспрессии сурвивина в клинической практике

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1 Клеточные линии

3.2 Выделение нуклеиновых кислот

3.2.1 Выделение плазмидной ДНК

3.2.2 Выделение РНК из образцов тканей легкого

3.2.3 Выделение фрагментов ДНК для клонирования из агарозных гелей

3.3 Аналитический электрофорез ДНК в агарозных гелях

3.4 Молекулярное клонирование

3.4.1 Получение компетентных клеток Е. coli

3.4.2 Трансформация компетентных клеток E.coli

3.4.3 Обработка ДНК рестрицирующими эндонуклеазами

3.4.4 Реакция лигирования

3.5 Обратная транскрипция РНК

3.6 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

3.7 Трансфекция

3.8 Инфицирование клеток

3.9 Анализ белков

3.9.1 Приготовление клеточных лизатов

3.9.2 Приготовление лизатов из образцов тканей легкого

3.9.3 Вестерн-блот гибридизация

3.9.4 Приготовление образцов для определения ферментативной активности протеиназ

3.9.5 Анализ желатиназной активности 47 3.9.6Анализ активности иРА

3.10 Исследование клеточных характеристик в культурах in vitro

3.10.1 Анализ динамики роста клеток

3.10.2 Анализ клеточной подвижности методом «зарастания раны» in vitro (wound healing assay)

3.10.3 Тест на образование колоний в условиях разреженной популяции

3.10.4 Тест на образование колоний в полужидкой среде

3.10.5 Тест на движение по градиенту концентраций факторов роста

3.10.6 Тест на инвазию in vitro

3.11 Определение экспериментальной метастатической активности

3.12 Статистическая обработка результатов

3.13 Растворы, реагенты и среды

4. РЕЗУЛЬТАТЫ

4.1 Анализ экспрессии изоформ сурвивина в образцах HMPJI

4.2 Исследование влияния сурвивина дикого типа на свойства клеток в культуре in vitro

4.2.1 Получение ретровирусных векторов и клеточных линий, экспрессирующих сурвивин

4.2.2 Исследование характеристик, ассоциированных с опухолевой прогрессией, в полученных клеточных линиях в культуре in vitro.

4.2.2.1 Исследование динамики роста полученных культур

4.2.2.2 Анализ влияния сурвивина на клоногенность исследуемых клеточных линийбб

4.2.2.3 Анализ способности к неприкрепленному росту

4.2.2.4 Исследование миграционной способности полученных клеточных линий ("wound healing assay")

4.2.2.5 Анализ движения по градиенту концентрации ростовых факторов

4.2.2.6 Анализ инвазивных свойств полученных клеточных линий

4.2.2.7 Исследование экспериментальной метастатической активности (ЭМА) полученных клеточных линий

4.3 Исследование влияния сурвивина дикого типа на экспрессию белков, вовлеченных в процесс опухолевой прогрессии

4.3.1 Анализ активности секретируемых протеиназ, ремоделирующих ВКМ

4.3.1.1 Анализ уровня секреции матриксных металлопротеиназ (ММР)

4.3.1.2 Анализ уровня секреции урокиназа-подобного активатора плазминогена (иРА)

4.3.2 Анализ экспрессии белков фокальных контактов

4.3.3 Анализ экспрессии МАР-киназ

4.4 Исследование влияния сурвивина-2а на клеточные характеристики и экспрессию белков, вовлеченных в процесс опухолевой прогрессии

5. ОБСУЖДЕНИЕ

6. ВЫВОДЫ 108 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Список

APAF

Bcl-2 bFGF BRCA1 Cdc

Cdkl DAG EGF EGFR

ERK1/

FAK HGF HSP hTERT использованных сокращении аденокарцинома внеклеточный матрикс немелкоклеточный рак легкого плоскоклеточный рак легкого рак легкого рак молочной железы экспериментальная метастатическая активность apoptosis-inducing factor (фактор, вызывающий апоптоз) adaptor protein 1 (адапторный белок 1)

Apoptotic protease activating factor 1 (фактор, активирующий апоптозную протеазу)

B-cell lymphoma-2 protein (белок В-клеточной лимфомы) Basic fibroblast growth factor (фактор роста фибробластов) Breast cancer 1 (рак молочной железы)

Cell division control protein 42 homolog (гомолог белка контролирующего деление клеток 42) Cyclin dependent kinase 1 (циклин-зависимая киназа 1) diacylglicerol (диацилглицерол) epidermal growth factor (эпидермальный фактор роста) epidermal growth factor receptor (рецептор эпидермального фактора роста extracellular signal-regulated kinase 1/2 (киназа регулируемая внеклеточными факторами 1/2)

Focal Adhesion Kinase (киназа фокальной адгезии)

Hepatocyte growth factor (фактор роста гепатоцитов)

Heat shock proteins (белки теплового шока) human Telomerase reverse transcriptase (обратная транскриптаза теломер)

Inhibitor Apoptosis Protein (белки ингибиторы апоптоза)

INCEPT Inner centrosome protein (внутренний белок центросом) JNK с-Jim N-terminal kinases (c-Jun киназы)

МАРК mitogen-activated protein kinase (киназа, активируемая митогенами)

ММР matrix metalloprotease (матриксная металлопротеиназа) mTOR mammalian target of rapamycin (мишень рапамицина млекопитающих)

NES nuclear export signal (последовательность ядерного экспорта)

NFkB nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells (ядерный фактор энхансера к легкой полипептидной цепи в В-клетках)

NLS nuclear localization signal (последовательность ядерной локализации) р38 38-kDa stress-activated kinase (38 кДа стресс-активируемая киназа)

PAI Plasminogen activator inhibitor (ингибитор активатора плазминогена)

PDGF platelet derived growth factor (факрор роста, полученный из тромбоцитов)

PIP2 phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (фосфатидил инозитол-(4,5)-бифосфат)

IP3 inositol-(3,4,5)-trisphosphate (инозитол-(3,4,5)-трифосфат)

РКА. protein kinase А (протеиновая киназа А) РКС protein kinase С (протеиновая киназа С) PLC-yl phospholipase yl (фосфолипаза yl)

Racl Ras-related СЗ botulinum toxin substrate 1 (ассоциированный с Ras субстрат СЗ бутулинового токсина) Rho Ras homolog gene family member (член семейства Ras гомологов)

Smac Second mitochondria-derived activator of caspases митохондриальный активатор каспаз) TCF4 Transcription factor 4 (транскрипционный фактор 4)

TGFß Transforming growth factor ß (трансформирующий ростовой фактор ß)

TIMP Tissue inhibitors of metalloproteinases (тканевые ингибиторы металлопротеиназ) TNFa Tumor necrosis factor а (фактор некроза опухоли) uPA urokinase-type plasminogen activator (урокиназаподобный активатор плазминогена) tPA tissue plasminogen activator (тканевый активатор плазминогена) uPAR urokinase-type plasminogen activator receptor (рецептор урокиназаподобного активатора плазминогена) VEGF Vascular endothelial growth factor (эндотелиальный фактор роста сосудов)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия изоформ сурвивина при немелкоклеточном раке легкого и ее влияние на свойства неопластических клеток»

Изучение молекулярных механизмов опухолевой прогрессии, приводящих к возникновению у клеток метастатического фенотипа - одна из важнейших задач молекулярной онкологии. Метастазирование, как основной этап прогрессии онкологических заболеваний, включает в себя целый ряд сложных процессов, детальные механизмы которых начали проясняться только сейчас.

В последние 10 лет все больше внимания уделяется изучению роли белков семейства ингибиторов апоптоза, и в частности, сурвивину в процессах опухолевой трансформации и прогрессии. Отличительной особенностью данного белка является характер его экспрессии. Сурвивин экспрессируется, в основном, во время эмбриогенеза и практически отсутствует во всех дифференцированных клетках взрослого организма. В опухолевых клетках различных типов экспрессия сурвивина обычно возобновляется. В связи с этим были предприняты многие попытки использования этого белка в качестве диагностического онкомаркера, а также в качестве маркера течения болезни и мишени противоопухолевой терапии. Совсем недавно начали появляться сведения о возможном участии сурвивина непосредственно в метастазировании, что делает вопрос его изучения еще более актуальным.

Ген сурвивина (BIRC5) интенсивно подвергается альтернативному сплайсингу с образованием нескольких белковых изоформ, каждая из которых может выполнять различные и, в то же время, пересекающиеся функции. Предполагается, что изоформы сурвивина локализуются в нескольких внутриклеточных компартментах и вносят разный вклад в течение заболевания, а значит, имеют различное прогностическое значение. Сурвивин может фосфорилироваться киназами Cdkl, Aurora В и РКА., и эти посттрансляционные механизмы обеспечивают белковую стабильность сурвивина и контролируют его транспорт между клеточными компартментами. Многие известные онкогены могут активировать экспрессию сурвивина и влиять на уровень содержания данного белка. Кроме того, некоторые химические вещества, например никотин (Dasgupta et al., 2006), связанный с возникновением одного из самых неблагоприятно текущих и сложно поддающихся лечению онкологических заболеваний -рака легкого (PJI), также могут активировать экспрессию и продукцию сурвивина.

Данная работа посвящена изучению путей внутриклеточной передачи сигналов, ассоциированных с сурвивином, на моделях клеточных линий PJI в поисках новых потенциальных сурвивин-зависимых маркеров прогноза и течения болезни и сравнительному анализу уровня продукции данного белка в коллекции образцов опухолевой и нормальной ткани легкого.

Целью работы является исследование экспрессии различных изоформ сурвивина при немелкоклеточном раке легкого (HMPJI) и их влияние на клеточные характеристики, ассоциированные с процессом опухолевой прогрессии.

В соответствии с указанной целью предполагается решить следующие экспериментальные задачи:

1. Провести анализ уровня экспрессии различных изоформ сурвивина на уровне мРНК и белка в коллекции образцов HMPJI с последующим анализом полученных результатов в отношении клинико-морфологических критериев: гистологического типа опухоли, ее дифференцировки, наличия регионарных и отдаленных метастазов у пациентов.

2. Получить производные клеточных линий рака легкого человека, стабильно экспрессирующие сурвивин дикого типа и сурвивин-2а.

3. Изучить влияние экспрессии экзогенного сурвивина дикого типа и сурвивина-2а на важнейшие свойства трансформированных клеток, ассоциированные с процессом опухолевой прогрессии (уровень пролиферации, подвижность (тест на «зарастание раны» in vitro), способность к колониеобразованию в условиях прикрепленного и неприкрепленного роста, инвазия in vitro и др.).

4. Сравнить метастатический потенциал полученных клеточных линий in vivo.

5. Исследовать влияние экзогенного сурвивина дикого типа и сурвивина-2а на экспрессию и функциональную активность белков, потенциально вовлеченных в процесс опухолевой прогрессии.

Таким образом, данное исследование представляется чрезвычайно актуальным, поскольку позволяет обнаружить сурвивин-зависимые изменения молекулярно-биологических характеристик трансформированных клеток при опухолевой прогрессии и сопоставить эти данные с результатами, полученными при исследовании клинического материала.

2. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Онкология», Ковалева, Ольга Владимировна

6. Выводы

1. Экспрессия мРНЕС и белка сурвивина увеличивается в 83% и 70% случаев НМРЛ соответственно, что позволяет считать экспрессию сурвивина возможным маркером опухолевого роста при РЛ.

2. Впервые показано, что экспрессия сурвивина дикого типа оказывает комплексное, но разнонаправленное влияние на уровень "агрессивности" фенотипа клеточных линий аденокарцином легкого.

3. Экспрессия сурвивина дикого типа увеличивает подвижность и способность к направленной миграции клеточной линии Н1299, что коррелирует с повышением экспрессии интегрина-(31 и фибронектина, а также статусом фосфорилирования белков фокальных контактов (БАК, паксиллина, РЬСу1).

3. Показано сурвивин - зависимое усиление инвазивного потенциала клеточной линии Н1299, что коррелирует с активацией внеклеточной протеазы иРА.

4. Показано сурвивин - зависимое повышение скорости пролиферации клеточной линии Н1299, что коррелирует с увеличением уровня фосфорилирования ЕЯК1/2.

6. Впервые показано влияние экспрессии сурвивиин-2а на инвазивную способность клеток НМРЛ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ковалева, Ольга Владимировна, 2010 год

1. Adida С., Berrebi D., Peuchmaur М., Reyes-Mugica М., Altieri DC. (1998) Anti-apoptosis gene, survivin, and prognosis of neuroblastoma. Lancet 351: 882-3.

2. Altieri DC. (2003) Survivin, versatilemodulation of cell division and apoptosis in cancer. Oncogene 22:8581-9.

3. Altieri DC. (2003) Validating survivin as a cancer therapeutic target. Nat. Rev. Cancer 3(1): 46-54.

4. Altieri DC. (2008) Survivin, cancer networks and pathway-directed drug discovery. Nat Rev Cancer 8: 61-70.

5. Ambrosini G., Adida C., Altieri DC. (1997) A novel anti-apoptosis gene, survivin, expressed in cancer and lymphoma. Nature Med. 3: 917-921.

6. Andreasen PA., Kjoller L., Christensen L., Duffy MJ. (1997) The urokinase-type plasminogen activator system in cancer metastasis: a review. Int. J. Cancer 72: 1-22.

7. Avraamides CJ., Garmy-Susini В., Varner AJ. (2008) Integrins in angiogenesis and lymphangiogenesis. Nature Reviews Cancer 8: 604-617.

8. Ballestrem C., Hinz В., Imhof BA., Wehrle-Haller BJ. (2001) Marching at the front and dragging behind: differential alphaVbeta3-integrin turnover regulates focal adhesion behavior. Cell Biol. 155(7):1319-32

9. Banks DP., Plescia J., Altieri DC. (2000) Survivin does not inhibit caspase-3 activity. Blood 96: 4002

10. Baran M., Möllers LN., Andersson S., Jonsson IM., Ekwall AK., Bjersing J., Tarkowski A., Bokarewa M. (2009). Survivin is an essential mediator of arthritis interacting with urokinase signalling. J Cell Mol Med. 13(9B):3797-808.

11. Bellis SL., Miller JT., Turner CE. (1995) Characterization of tyrosine phosphorylation of paxillin in vitro by focal adhesion kinase. J. Biol. Chem. 270: 17437-17441.

12. Calalb MB, Polte TR and Hanks SK. (1995) Tyrosine phosphorylation of focal adhesion kinase at sites in the catalytic domain regulates kinase activity: a role for Src family kinases. Mol. Cell. Biol. 15: 954-963.

13. Caldas H., Jiang Y., Holloway MP., Fangusaro J., Mahotka C., Conway EM., Altura RA. (2005) Survivin splice variants regulate the balance between proliferation and cell death. Oncogene 24(12): 1994-2007).

14. CaldasH., Honsey L., Altura R. (2005) Survivin 2a: a novel Survivin splice variant expressed in human malignancies. Molecular Cancer 4:11

15. Chakravarti A., Noll E., Black PM., et al. (2002) Quantitatively determined survivin expression levels are of prognostic value in human gliomas. JClinOncol 20:1063-8.

16. Chang C., Werb Z., (2001) The many faces of metalloproteases: cell growth, invasion, angiogenesis and metastasis. Trends Cell Biol 11(11): 37-43.

17. Chantalat L., Skoufias DA., Kleman LP., Jung B., Dideberg O., Margolis RL. (2000) Crystal structure of human survivin reveals a bow tie-shaped dimer with 2 unusual alpha-helical extensions. Mol. Cell 6: 183-189.

18. Cheung P., Allis CD., Sassone-Corsi P. (2000) Signaling to chromatin through histone modifications. Cell, 13: 263-271.

19. Chiang GC., Sefton BM.(2000) Phosphorylation of a Src kinase at the autophosphorylation site in the absence of Src kinase activity. J. Biol. Chem. 275: 6055-6058.

20. Clark SJ., Melki J. (2002) DNA methylation and gene silencing in cancer: Which is the guilty party? Oncogene 21: 5380-5387.

21. Cosgrave N., Hill AD., Young LS. (2006) Growth factor-dependent regulation of survivin by c-myc in human breast cancer. J Mol Endocrinol 37: 377-90.

22. D'Alessio S, Blasi F. (2009) The urokinase receptor as an entertainer of signal transduction. Front Biosci. 14:4575-87.

23. Dasgupta P., Kinkade R., Joshi B., DeCook C., Haura E., Chellappan S. (2006) Nicotine inhibits apoptosis induced by chemotherapeutic drugs by up-regulating XIAP and survivin. PNAS 103(16):6332-6337.

24. Delacour-Larose M., Thi MN., Dimitrov S., Molla A. (2007) Role of survivin phosphorylation by aurora B in mitosis. Cell Cycle 6(15):1878-85.

25. Dohi T., Beltrami E., Wall NR., Plescia J., Altieri DC. (2004a) Mitochondrial survivin inhibits apoptosis and promotes tumorigenesis. J Clin Invest 114: 1117-1127.

26. Dohi T., Okada K., Xia F., et al. (2004) An IAP-IAP Complex Inhibits Apoptosis. J Biol Chem 279(33): 34087-90. a

27. Dohi T., Okada K., Xia F., Wilford CE., Samuel T., Welsh K., Marusawa H., Zou H., Armstrong R., Matsuzawa S., Salvesen GS., Reed JC., Altieri DC. (2004) An IAP-IAP complex inhibits apoptosis. J. Biol. Chem. 279: 34087-34090.

28. Du C., Fang M., Li Y., Li L., Wang X. (2000) Smac a mitochondrial protein that promotes cytochrome C-dependent caspase activation by eliminating IAP inhibition. Cell 102: 33-42.

29. Duffy MJ. (2002) Urokinase-type plasminogen activator: a potent marker of metastatic potential in human cancers. Biochem. Soc. Trans. 30: 207-210.

30. Endoh T., Tsuji N., Asanuma K., Yagihashi A., Watanabe N. (2005) Survivin enhances telomerase activity via up-regulation of specificity protein 1- and c-Myc-mediated human telomerase reverse transcriptase gene transcription.

31. Fidler,I.J., Kripke,M.L. (1977). Metastasis results from preexisting variant cells within a malignant tumor. Science 197:893-895.

32. Fortugno P., Beltrami E., Plescia J., et al. (2003) Regulation of survivin function by Hsp90. Proc Natl Acad Sei USA 100(24): 13791-6.

33. Ghosh JC., Dohi T., Kang BH., Altieri DC. (2008) Hsp60 regulation of tumor cell apoptosis. J Biol Chem 283: 5188-5194.

34. Grossman D., Kim PJ., Blanc-Brude O., Brash DE., Tognin S., Marchisio PC., Altieri DC. (2001) Transgenic expression of survivin in keratinocytes counteracts UVB-induced apoptosis and cooperates with loss of p53. J. Clin. Invest. 108:991-999.

35. Grossman D., McNiff JM., Li F., Altieri DC. (1999) Expression and targeting of the apoptosis inhibitor, survivin, in humanmelanoma. J Invest Dermatol 113:1076-81.

36. Guha M., Altieri DC. (2009) Survivin as a global target of intrinsic tumor suppression networks. Cell Cycle 8:17, 2708-2710.

37. Harfouche R., Hassessian HM., GuoY., et al. (2002) Mechanisms which mediate the antiapoptotic effects of angiopoietin-1 on endothelial cells. Microvasc Res 64:135-47.

38. Harrell PC., McCawley LJ., Fingleton B., Mclntyre JO., Matrisian LM. (2005) Proliferative effects of apical, but not basal, matrix metalloproteinase-7 activity in polarized MDCK cells. Exp. Cell Res. 303: 308-320.

39. Hinnis AR., Luckett JC.,Walker RA. (2007) Survivin is an independent predictor of short-term survival in poor prognostic breast cancer patients. Br J Cancer 96:639-45.

40. Hsu MY., Meier F., Herlyn M. (2002) Melanoma development and progression: a conspiracy between tumor and host. Differentiation 70: 522536.

41. Hu Y., Benedict MA., Ding L., Nunez G. (1999) Role of cytochrome c and dATP/ATP hydrolysis in Apaf-1-mediated caspase-9 activation and apoptosis. EMBO J., 18: 3586-3595.

42. Jiang Y., Saavedra HI., Holloway MP., Leone G., Altura RA. (2004) Aberrant regulation of survivin by the RB/E2F family of proteins. J Biol Chem 279: 40511-20.

43. Jin Q., Menter GD., Mao L., Hong W., Lee H. (2008) Survivin expression in normal human bronchial epithelial cells: an early and critical step in tumorigenesis induced by tobacco exposure. Carcinogenesis 29(8): 16141622.

44. John C. Reed JC. (2001) The Survivin saga goes in vivo. J. Clin. Invest. 108: 965-969.

45. Jones P., Peak J., Brader S., Eccles S., Katan M. (2005) PLC 1 is essential for early events in integrin signalling required for cell motility. Journal of Cell Science 118: 2695-2706.

46. Kang BH., Altieri DC. (2006) Regulation of survivin stability by the aryl hydrocarbon receptor-interacting protein. J Biol Chem 281: 24721-24727.

47. Kappler M., Bache M., Bartel F., et al. (2004) Knockdown of survivin expression by small interfering RNA reduces the clonogenic survival of human sarcoma cell lines independently of p53. Cancer Gene Ther 11: 18693.

48. Kawakami H., Tomita M., Matsuda T., Ohta T., Tanaka Y., Fujii M., et al.2005) Transcriptional activation of survivin through the NFkappaB pathway by human T-cell leukemia virus type I tax. Int J Cancer

49. Kim PJ., Plescia J., Clevers H., Fearon ER., Altieri DC. (2003) Survivin and molecular pathogenesisof colorectal cancer. Lancet 362: 205-9.

50. Kopfstein L., Christofori G. (2006) Metastasis: Cell autonomous versus stroma-contributed mechanisms. Cell. Mol. Life Sci. 63(4):449-68.

51. Lee CW., Raskett CM., Prudovsky I., Altieri DC. (2008) Molecular dependence of estrogen receptor-negative breast cancer on a notch-survivin signaling axis. Cancer Research 68: 5273-81.

52. Lens SM., Rodriguez JA., Vader G., Span SW., Giaccone G., Medema RH.2006) Uncoupling the central spindle-associated function of the chromosomal passenger complex from its role at centromeres. Mol Biol Cell 17:1897-1909---------------

53. Lens SM., Wolthuis RM., Klompmaker R., Kauw J., Agami R., Brummelkamp T., Kops G., Medema RH. (2003) Survivin is required for a112sustained spindle checkpoint arrest in response to lack of tension. EMBO J 22: 2934-2947

54. Li F. (2003) Survivin study: what is the next wave? J Cell Physiol. 197: 829.)

55. Li F. (2005) Role of survivin and its splice variants in tumorigenesis. British Journal of Cancer 92: 212 — 216.

56. Liu T., Brouha B., Grossman D. (2004) Rapid induction ofmitochondrial events and caspase-independent apoptosis in Survivin-targeted melanoma cells. Oncogene 23(l):39-48.

57. Loesch M, Chen G. (2008) The p38 MAPK stress pathway as a tumor suppressor or more? Front Biosci. 13:3581-93.

58. Mahotka C., Wenzel M., Springer E., Gabbert HE., Gerharz CD. (1999) Survivin- deltaEx3 and survivin-2B: two novel splice variants of the apoptosis inhibitor survivin with different antiapoptotic properties. Cancer Research. 59: 6097-6102.

59. Mareel M., Leroy A. (2003) Clinical, cellular, and molecular aspects of cancer invasion. Physiol Rev. 83(2):337-76.

60. Marioni G., Bertolin A., Giacomelli L., et al. (2006) Expression of the apoptosis inhibitor protein survivin in primary laryngeal carcinoma and cervical lymph node metastasis. Anticancer Res 26:3813-7.

61. Marusawa H., Matsuzawa S., Welsh K., Zou H., Armstrong R., Tamm I., Reed J.C. (2003) HBXIP functions as a cofactor of surviving in apoptosis suppression. EMBO J. 22: 2729-2740.

62. McNeish IA., Lopes R., Bell SJ., et al. (2005) Survivin interacts with Smac/DIABLO in ovarian carcinoma cells but is redundant in Smac-mediated apoptosis. Exp Cell Res 302(1): 69-82.

63. Mehrotra S., Languino LR., Raskett MC, Mercurio AM., Dohi T., Altieri DC. (2010) IAP Regulation of Metastasis. Cancer Cell 17: 53-64.

64. Mera S., Magnusson M., Tarkowski A., Bokarewa M. (2008) Extracellular survivin up-regulates adhesion molecules on the surface of leukocytes changing their reactivity pattern. Journal of Leukocyte Biology 83:149-155

65. Mesri M., Wall NR., Li J., Kim RW., Altieri DC. (2001) Cancer gene therapy using a survivin mutant adenovirus. J. Clin.Invest. 108:981-990.

66. Mita AC., Mita MM., Nawrocki ST., Giles FJ. (2008) Survivin: Key Regulator of Mitosis and Apoptosis and Novel Target for Cancer Therapeutics Clin Cancer Res 14(16).

67. Mizejewski JG. (1999) Role of Integrins in Cancer: Survey of Expression. Patterns Exp. Biol Med. 222: 124-138

68. Nakamura K, Yano H, Schaefer E and Sabe H.(2001). Multiple stimuli induce tyrosine phosphorylation of the Crk-binding sites of paxillin. Oncogene. 20: 2626-2635.

69. Parise LV., Lee J., Juliano RL. (2000) New aspects of integrin signaling in cancer. Semin. Cancer Biol. 10: 407-414

70. Parsons JT., Slack-Davis J., Tilghman R., Roberts WG. (2008) Focal adhesion kinase: targeting adhesion signaling pathways for therapeutic intervention. Clin. Cancer Res. 14: 627—632.

71. Romanova YL., Hashimoto S., Chay K., Blagosklonny M., Sabe H., Mushinski J. F. (2004) Journal of Cell Science 117: 3759-3768.

72. Salvesen GS., Abrams JM. (2004) Caspase activation stepping on the gas or releasing the brakes? Lessons from humans and flies. Oncogene 23(16): 2774-84.

73. Samuel T., Okada K., Hyer M., Welsh K., Zapata JM., Reed JC. (2005) cIAPl Localizes to the nuclear compartment and modulates the cell cycle. Cancer Research 65(1): 210-8 .

74. Satoh K., Kaneko K., Hirota M., Masamune A., Satoh A., ShimosegawaT. (2001) Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand and its receptor expression and the pathway of apoptosis in human pancreatic cancer. Pancreas 23: 251-8.

75. Schimmer A. (2004) Inhibitor of Apoptosis Proteins: Translating Basic Knowledge into Clinical Practice. Cancer Research 64: 7183-7190.

76. Sekimura A., Konishi A., Mizuno K., Kobayashi Y., Sasaki H., Yano M.,Fujii Y. (2004). Expression of Smac/DIABLO is a novel prognostic marker in lung cancer. Oncology Reports 11: 797-802.

77. Semba S., Trapasso F., Fabbri M., McCorkell KA., Volinia S., Druck T., et al. (2006) Fhit modulation of the Akt-survivin pathway in lung cancer cells: Fhit-tyrosine 114 (Y114) is essential. Oncogene 25: 2860-72.

78. Span P., Tjan-Heijnen V., Heuvel J., de Kok J., Foekens J., Sweep F. (2006) Do the Survivin (BIRC5) Splice Variants Modulate or Add to the

79. Prognostic Value of Total Survivin in Breast Cancer? Clinical Chemistry 52:9 1693-1700.

80. Srinivasula S.M., Ashwell J.D. (2008) IAPs: what's in a name? Mol Cell 30:123-135

81. Stauber RH., Wolf Mann., Knauer KS. (2007) Nuclear and Cytoplasmic Survivin: Molecular Mechanism, Prognostic, and Therapeutic Potential. Cancer Research 67(13):5999-6002.

82. Stupack DG., Cheresh DA. (2002) Get a ligand, get a life: integrins, signaling and cell survival. J. Cell Sei. 115: 3729-3738

83. Suga K., Yamamoto Т., Yamada Y., Miyatake S., Nakagawa Т., Tanigawa N. (2005) Correlation between transcriptional expression of survivin isoforms and clinicopathological findings in human colorectal carcinomas. Oncol Rep 13(5): 891-897.

84. Sun C., Nettesheim D., Liu Z., Olejniczak ET. (2005) Solution structure of human survivin and its binding interface with Smac/Diablo. Biochemistry 44: 11-17.

85. Tamm I., Wang Y., Sausville E., Scudiero D.A., Vigna N., Oltersdorf Т., Reed JC. (1998) IAP-family protein surviving inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas (CD95), Bax, caspases and anticancer drugs. Cancer Research 58:5315—5320

86. Tanaka K., Iwamoto S., Gon G., NoharaT., IwamotoM., Tanigawa N. (2000) Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas. Clin Cancer Res 6:127-34.

87. Terada Y. (2001) Role of Chromosomal Passenger Complex in Chromosome Segregation and Cytokinesis. Cell structure and function 26: 653-657.11 l.Tolcher AW., Antonia S., Lewis LD., Mita A., Mahany J., Reddy NJ et al. (2006) ASCO Annual Meeting, 3014.

88. Tran J., Rak J., Sheehan C., et al. (1999) Marked induction of the IAP family antiapoptotic proteins survivin and XIAP by VEGF in vascular endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun 264:781 -8.

89. Uren AG., Coulson EJ., Vaux DL. (1998). Conservation of baculovirus inhibitor of apoptosis repeat proteins (BIRPs) in viruses, nematodes, vertebrates and yeasts. Trends Biochem Sei 23:159-62.

90. Vaira V., Lee CW., Goel HL., Bosari S., Languino LR., Altieri DC. (2006) Regulation of survivin expression by IGF-l/mTOR signaling. Oncogene 26(19): 2678-84.

91. Vegran F., Boidot R., Oudin C., Riedinger JM., Lizard-Nacol S. (2005) Distinct expression of Survivin splice variants in breast carcinomas. Int J Oncol 27(4): 1151-1157.

92. Vischioni B., Van der Valk P., Span s., Kruyt F., Rodriguez J., Giaccone G. (2004) Nuclear localization of survivin is a positive prognostic factor for survival in advanced non-small-cell lung cancer. Annals of Oncology 15(11): 1654-1660.

93. Vong QP., Cao K., Li HY., Iglesias PA., Zheng Y. (2005) Chromosome alignment and segregation regulated by ubiquitination of survivin. Science 310: 1499-1504.

94. Wang T., Qian X., Liu B. (2007) Survivin: Potentional role in diagnosis, prognosis and targeted therapy of gastric cancer. World J of gastroenterol 13(20): 2784-2790.

95. Wang RH., Zheng Y., Kim HS., Xu X., Cao L., Luhasen T., et al. (2008) Interplay among BRCA1, SIRT1 and Survivin during BRCA1-associated tumorigenesis. Mol Cell 32: 11-20.

96. Yano M., Terada K., Mori M. (2003) AIP is a mitochondrial import mediator that binds to both import receptor Tom20 and preproteins. J Cell Biol 163: 45-56.

97. Young JC., Hoogenraad NJ., Hartl FU. (2003) Molecular chaperonesHsp90 and Hsp70 deliver preproteins to the mitochondrial import receptor Tom70. Cell 112: 41-50.

98. Zaffaroni N., Pennati M., Daidone MG. (2005) Survivin as a target for new anticancer interventions. J. Cell. Mol. Med. 9(2):360-372.

99. Zhang T., Otevrel T., Gao Z., Ehrlich SM., Fields JZ., Boman BM. (2001) Evidence that APC regulates survivin expression: a possible mechanism contributing to the stem cell origin of colon cancer. Cancer Research 61: 8664-7.

100. Zhang X., Chattopadhyay A., Ji Q., Owen J., Ruest P., Carpenter G., Hanks S. (1999) Focal adhesion kinase promotes phospholipase C-gl activity. Proc. Natl. Acad. Sci. 96: 9021-9026.

101. Zhu N., Gu L., Findley HW., Li F., Zhou M. (2004) An alternatively spliced survivin variant is positively regulated by p53 and sensitizes leukemia cells to chemotherapy. Oncogene 23: 7545-7551.