Экспрессия и функции генов семейства p53 в опухолях желудочно-кишечного тракта тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Вильгельм, Анна Эдгартовна

• Вильгельм, Анна Эдгартовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Вильгельм, Анна Эдгартовна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Цель и задачи исследования.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Семейство р53.

Организация-генов семейства р53 и изоформы их белковых продуктов.

Транскрипционная активность белков семейства р53.

Роль белков семейства р53 в онкогенезе и опухолевой прогрессии.

Первичные опухоли.

Мышиные модели.

ТА изоформы белковрбЗ ир73 и опухолевая супрессия.

Дельт aN — онкоген.

Баланс TA/AN.

Белки семейства р53 и противоопухолевая терапия.

Семейство р53 - интерактивная система.

Множественная лекарственная устойчивость опухолей.

Р-гликопротеин: механизм действия и функции.

Регуляция экспрессии гена mdrl.

Опухолевый супрессор Hicl.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Реактивы.

Образцы ткани человека, получение МТП.

Линии эукариотических клеток и условия их культивирования, получение стабильных клеточных линий.49"

Плазмидные векторы.

Интерференция РНК.

Анализ содержания мРНК.

Выделение РНК.

Обратная транскрипция РНК.

ПЦР с детекцией в режиме реального времени.

Определение содержания мРНК р73, кодирующих белки с различным строением С-концов молекулы.

Анализ содержания исследуемых белков.

Определение содержания исследуемых белков в первичных опухолях.

Содержание исследуемых белков в культивируемых клетках, иммуноблоттинг.

Выделение белков из линейных клеток.

Электрофорез белков.

Перенос белков с геля на мембрану.

Гибридизагщя мембраны с антителами.

Анализ ДНК-белковых взаимодействий.

Иммуноблоттинг белков, аффинных к ДНК (DNA-affinity immunoblotting,

DAI).

Приготовление зондов для DAI.

Порядок проведения DAI.

Иммунопреципитация хроматина.

Последовательная иммунопреципитация хроматина.

Анализ активности Р-гликопротеина (Pgp).

Анализ регуляции промоторов.

Измерение общей транскрипционной активности эндогенных белков семейства р53.

Анализ способности клеток к неприкрепленному росту.

Оценка чувствительности клеток к действию 5-FU.

МТТ тест.

Детекция апоптоза.

Анализ распределения клеток по фазам клеточного цикла.

Статистическая обработка данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Экспрессия генов семейства р53 в опухолях ЖКТ человека.

Экспрессия генов семейства р53 в колоректальных карциномах.

Содержание белка и мРНК ANp73 в опухолях желудка и пищевода.

Белок ANp73 придает неопухолевым клеткам эпителия желудка способность к неприкрепленному росту.

Регуляция синтеза мРНК ANp73.

Анализ промотора Р2 in silico.

Белок Hicl подавляет синтез мРНК ANp73.

Белок Hicl связывается с промотором Р2 гена ТР73.

Белок Hicl блокирует активацию промотора Р2 гена ТР73 белками р53 и

ТАр73.

Регуляция транскрипции мРНК ANp73 in vivo.

Белки семейства р53 и эффективность противоопухолевой химиотерапии

Роль белка р73 в регуляции экспрессии гена mdrl.

Белок ANp7За активирует экспрессию гена mdrl.

Белок ANp7За увеличивает Pgp-опосредованный транспорт.

Белок ANp73a подавляет р53-опосредованную транскрипционную репрессию гена mdrl.

Белки семейства р53 и их взаимодействия определяют химиотерапевтическую чувствительность опухолевых клеток.

Белки р73 и рбЗ принимают участие в ответе клеток на воздействие противоопухолевого препарата 5-фторурацил (5-ФУ).

Белкир53, рбЗ ир73 попарно связываются с промоторами генов-мишеней р53 под действием противоопухолевого препарата 5-ФУ.

Суммарная транскрипционная активность белков семейства р53 определяет чувствительность клеток к воздействию 5-ФУ.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Вильгельм, Анна Эдгартовна

Выводы

1. Охарактеризована экспрессия генов семейства р53 в первичных опухолях ЖКТ. Обнаружено, что наряду с мутациями р53, в аденокарциномах желудка и пищевода и в колоректальном раке часто наблюдается увеличение синтеза ТА и АИ изоформ белка р73. Показано, что каждая опухоль характеризуется уникальным набором изоформ мРНК и белков семейства р53. Выявлено, что высокое содержание белка АКр73 в клетках опухоли коррелирует со сниженной выживаемостью пациентов с аденокарциномой желудка.

2. Определен новый механизм регуляции транскрипции мРНК АМр73 в эпителиальных клетках ЖКТ. Показано, что снижение экспрессии опухолевого супрессора Ню1 приводит к увеличению синтеза мРНК ДЫр73.

3. Установлено, что белок АЫр73а увеличивает экспрессию гена тс1г1 и уровень его белкового продукта Р-гликопротеина за счет подавления р53-зависимой транскрипционной репрессии.

4. Показано, что белки рбЗ и р73, наряду с р53, принимают участие в регуляции апоптоза и ареста клеточного цикла злокачественных клеток ЖКТ в ответ на воздействие 5-ФУ.

5. С помощью разработанного нами метода определения общей транскрипционной активности белков семейства р53 показано, что чувствительность злокачественных клеток ЖКТ к воздействию 5-ФУ находится в прямой зависимости от суммарной транскрипционной активности белков р53, рбЗ и р73.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние несколько лет в научной литературе стали * появляться свидетельства того, что белки семейства р53 интенсивно »взаимодействуют друг с другом. В соответствии с этим было выдвинуто1 предположение, что семейство р53 функционирует как единая интерактивная- белковая сеть («р53 family network»). Наши экспериментальные данные подтверждают эту гипотезу, показывая, что все образующиеся в клетке белки этого семейства вовлечены в формирование ответа клеток на действие химиотерапевтических средств.

Данная работа является первым многоплановым исследованием роли генов семейства р53 в опухолях ЖКТ. В рамках представленной работы был проведен подробный анализ более 350 образцов злокачественных и нормальных тканей ЖКТ человека, который показал, что характер экспрессии генов семейства р53 в опухолевом и в нормальном неопухолевом эпителии различается. Наряду с мутациями гена ТР53, в опухолях ЖКТ часто наблюдается увеличение содержания ТА и AN изоформ р73, а также различных вариантов 3'-концевого сплайсинга мРНК р73. Впервые ' обнаружено, что высокое содержание белка ANp73 в клетках опухоли является неблагоприятным прогностическим фактором для пациентов с аденокарциномой желудка. Показано, что повышение содержания белка ANp73a в неопухолевых клетках эпителия желудка приводит к приобретению ими неопластического фенотипа, в частности способности к пролиферации независимо от прикрепления к внеклеточному матриксу. Эти данные свидетельствуют о том, что белок ANp73a может играть значительную роль в онкогенезе.

Также в нашей работе получены новые данные, указывающие на взаимосвязь белка ANp73a и важного эффектора множественной лекарственной устойчивости - гена MDR1. Было показано, что белок ANp73a связывается с промотором гена mdrl и активирует его экспрессию. При этом активирующий эффект ANp73a связан с его способностью блокировать р53-зависимую репрессию промотора MDR1. Таким образом, наши данные являются первым опубликованным примером того, что белок ANp73a подавляет активность р53 как транскрипционного, репрессора. Эти данные указывают на то, что увеличение синтеза белка ANp73 может значительно усложнить течение онкологического заболевания. Однако о механизмах, приводящих к увеличению синтеза белка ANp73 в опухолевых клетках, практически ничего не известно. В нашей работе впервые показано, что1 снижение экспрессии гена опухолевой супрессии Hid, характерное для злокачественных новообразований человека, может приводить к увеличению содержания мРНК ANp73.

Было установлено, что функции различных белков семейства р53 в регуляции клеточного ответа на химиотерапию взаимосвязаны. Под действием широко применяемого в химиотерапии опухолей ЖКТ препарата 5-фторурацил (5-ФУ) эндогенные белки р53 и р73 или рбЗ и р73 попарно связываются с промоторами генов-мишеней, белковые продукты которых активируют процессы апоптоза и ареста клеточного цикла. Эти данные являются первым свидетельством того, что под действием химиотерапевтических агентов белки семейства р53 взаимодействуют друг с другом на промоторах генов-мишеней. Также обнаружено, что чувствительность опухолевых клеток к воздействию химиотерапевтического агента 5-ФУ зависит от суммарной транскрипционной активности всех присутствующих в клетке белков семейства р53.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Вильгельм, Анна Эдгартовна, 2010 год

1. Аксель И.М., Давыдов М:И. Статистика заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований в 20001 году. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2000. М.: РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. 2002, с. 85-106.

2. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. Биохимия. 2000. Т. 65, №1, с. 5-33.

3. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир. 1984.

4. Орлова Р.В. Лекарственное лечение опухолей желудочно-кишечного тракта. Практическая онкология. 2005, Т.6, №1.

5. Чумаков П.М., Иоцева B.C., Георгиев Г.П. Выделение плазмидного клона, содержащего последовательности мРНК для невирусного Т-антигена мыши. Доклады АН СССР. 1982, Т. 267, с. 1272-1275

6. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью. Биохимия. 2000. Т. 65, №1, с. 34-47.

7. Чумаков П.М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме. Успехи биологической химии. 2007, Т. 47, с. 3-52.

8. Штиль A.A. Развитие множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток при воздействии химиопрепаратов: биологические механизмы и возможности предотвращения. Российский биотерапевтический журнал. 2003, Т. 2, №1, с. 50-51.

9. Agami R., Blandino G., Oren M. and Shaul Y. Interaction of c-Abl and p73alpha and their collaboration to induce apoptosis. Nature. 1999, V. 399, no. 6738, pp. 809-813.

10. Bahr O., Wick W. and Weller M: Modulation of MDR/MRP by wild-type and mutant p53. J Clin Invest. 2001, V. 107, no. 5, pp. 643-646.

11. Barrera F. N., Poveda J. A., Gonzalez-Ros J. M. and Neira J. L. Binding of the C-terminal sterile alpha motif (SAM) domain of human p73 to lipid membranes. J Biol Chem. 2003, V. 278, no. 47, pp. 46878-46885.

12. Belyi V. A. and Levine A. J. One billion years of p53/p63/p73 evolution. Proc Natl Acad Sci USA. 2009, V. 106, no. 42, pp. 17609-17610.

13. Brandt T., Petrovich M., Joerger A. C. and Veprintsev D. B. Conservation of DNA-binding specificity and oligomerisation properties within the p53 family. BMC Genomics. 2009, V. 10, no., pp. 628.

14. Briggs K. J., Corcoran-Schwartz I. M., Zhang W., Harcke T., Devereux W. L., Baylin S. B., Eberhart C. G. and Watkins D. N. Cooperation between the Hicl and Ptchl tumor suppressors in medulloblastoma. Genes Dev. 2008, V. 22, no. 6, pp. 770-785.

15. Briggs K. J., Eberhart C. G. and Watkins D. N. Just say no to ATOH: how HIC1 methylation might predispose medulloblastoma to lineage addiction. Cancer Res. 2008, V. 68, no. 21, pp. 8654-8656.

16. Briones V. R., Chen S., Riegel A. T. and Lechleider R. J. Mechanism of fibroblast growth factor-binding protein 1 repression by TGF-beta. Biochem Biophys Res Commun. 2006, V. 345, no. 2, pp. 595-601.

17. Chen W. Y., Wang D. H., Yen R. C., Luo J., Gu W. and Baylin S. B. Tumor suppressor HIC1 directly regulates SIRT1 to modulate p53-dependent DNA-damage responses. Cell. 2005, V. 123, no. 3, pp. 437-448.

18. Chen X., Zheng Y., Zhu J., Jiang J. and Wang J. p73 is transcriptionally regulated by DNA damage, p53, and p73. Oncogene. 2001, V. 20, no. 6, pp. 769-774.

19. Chin K. V., Ueda K., Pastan I. and Gottesman M. M. Modulation of activity of the promoter of the human MDR1 gene by Ras and p53. Science. 1992, V. 255, no. 5043, pp. 459-462.

20. Collavin L., Lunardi A. and DeF Sal G. p53-family proteins and their regulators: hubs andspokes in tumor suppression. Cell Death Differ. 2010, V. 17, no. 6, pp. 901-911.

21. Cui R., He J., Mei R., de Fromentel C. C., Martel-Planche G., Taniere P. and Hainaut P. Expression of p53, p63, and p73 isoforms in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of esophagus. Biochem Biophys Res Commun. 2005, no.

22. Dai J. M., Wang Z. Y., Sun D. C., Lin R. X. and Wang S. Q. SIRT1 interacts with p73 and suppresses p73-dependent transcriptional activity. J Cell Physiol. 2007, V. 210, no. 1, pp. 161-166.

23. Daschner P. J., Ciolino H. P., Plouzek C. A. and Yeh G. C. Increased AP-1 activity in drug resistant human breast cancer MCF-7 cells. Breast Cancer Res Treat. 1999, V. 53, no. 3, pp. 229-240.

24. Davison T. Si, Vagner C., Kaghad M., Ayed A., Caput D. and Arrowsmith C. H. p73 and p63 are homotetramers capable of weak heterotypic interactions with each other but not with p53. J Biol Chem. 1999, V. 274, no. 26, pp. 18709^-18714.i A

25. Deltour S., Pinte S., Guerardel C., Wasylyk B. and Leprince D. The human candidate tumor suppressor gene HIC1 recruits CtBP through a degenerate GLDLSKK motif. Mol Cell Biol. 2002, V. 22, no. 13, pp. 4890-4901.

26. Deyoung M. P. and Ellisen L. W. p63 and p73 in human cancer: defining the network. Oncogene. 2007, V. 26, no. 36, pp. 5169-5183.

27. DeYoung M. P., Johannessen C. M., Leong C. O., Faquin W., Rocco J. W. and Ellisen L. W. Tumor-specific p73 up-regulation mediates p63 dependence in squamous cell carcinoma. Cancer Res. 2006, V. 66, no. 19, pp. 9362-9368.

28. Di Como C. J., Gaiddon C. and Prives C. p73 function is inhibited by tumor-derived p53 mutants in mammalian cells. Mol Cell Biol. 1999, V. 19, no. 2, pp. 1438-1449.

29. Dittmer D., Pati S., Zambetti,G., Chu S., Teresky A. K., Moore M., Finlay C. and Levine A. J. Gain of function mutations in p53. Nat Genet. 1993, V. 4, no. l,pp. 42-46.

30. Dohn M., Zhang S. and Chen X. p63alpha and DeltaNp63alpha can induce cell cycle arrest and apoptosis and differentially regulate p53 target genes. Oncogene. 2001, V. 20, no. 25, pp. 3193-3205.

31. Donehower L. A., Harvey M., Slagle B. L., McArthur M. J., Montgomery C. A. Jr., Butel J. S. and Bradley A. Mice deficient for p53 are developmentally normal but susceptible to spontaneous tumours. Nature. 1992, V. 356, no. 6366, pp. 215-221.

32. Femandes A. D. and Atchley W. R. Biochemical and functional evidence of p53 homology is inconsistent with molecular phylogenetics for distant sequences. J Mol Evol. 2008, V. 67, no. 1, pp. 51-67.

33. Fleuriel C., Touka M., Boulay G., Guerardel G., Rood B. R. and Leprince D. HIG1 (Hypermethylated in Cancer 1) epigenetic silencing in tumors. Int J Biochem Cell Biol. 2009,- V. 41, no. 1, pp. 26-33.

34. Flores E. R., Tsai K. Y., Crowley D., Sengupta S., Yang A., McKeon F. and Jacks T. p63 and p73 are required for p53-dependent apoptosis. in response to DNA damage. Nature. 2002, V. 416, no. 6880, pp. 560-564.

35. Frebourg T., Malkin D. and Friend S. Cancer risks from germ line tumor suppressor gene mutations. Princess Takamatsu Symp. 1991, V. 22, no., pp. 6170.

36. Garcia-Manero G., Daniel J., Smith T. L., Kornblau S. M., Lee Ml S., Kantarjian H. M. and Issa J. P. DNA methylation of multiple promoter-associated CpG islands in adult acute lymphocytic leukemia. Clin Cancer Res. 2002, V. 8, no. 7, pp. 2217-2224.

37. Ghosh A., Stewart D. and Matlashewski G. Regulation of human p53 activity and cell localization by alternative splicing. Mol Cell Biol. 2004, V. 24, no. 18, pp. 7987-7997.

38. Gong J. G., Costanzo A., Yang H. Q., Melino G., Kaelin W. G. Jr., Levrero M. and Wang J. Y. The tyrosine kinase c-Abl regulates p73 in apoptotic response to cisplatin-induced DNA damage. Nature. 1999, V. 399, no. 6738, pp. 806-809.

39. Gottesman M. M. Mechanisms of cancer drug resistance. Annu Rev Med. 2002, V. 53, no., pp. 615-627.

40. Gottesman M. M., Ambudkar S. V., Xia D. Structure of a multidrug transporter. Nat Biotechnol. 2009, V. 27, no. 6, pp. 546-547.

41. Guo X., Keyes W. M., Papazoglu C., Zuber J., Li W., Lowe S. W., Vogel H. and Mills A. A. TAp63 induces senescence and suppresses tumorigenesis in vivo. Nat Cell Biol. 2009, V. 11, no. 12, pp. 1451-1457.

42. Hamer G., Gademan I. S., Kal H. B. and de Rooij D. G. Role for c-Abl and p73 in the radiation response of male germ cells. Oncogene. 2001, V. 20, no. 32, pp. 4298-4304.

43. Hamroun D.vKatoS., Ishioka C., Claustres Mi, Beroud G. and Soussi T. The UMD TP53 database and website: update and, revisions. Hum Mutat. 2006, V. 27, no. 1«, pp.- 14-20.

44. Hu Z., Jin S. and Scotto K. W. Transcriptional activation of the MDR1 gene by UV irradiation. Role of NF-Y and Spl. J Biol Chem. 2000, V. 275, no. 4, pp. 2979-2985.

45. Irwin M. S., Kondo K., Marin M. C., Cheng L. S., Hahn W. C. and Kaelin W. G. Jr. Chemosensitivity linked to p73 function. Cancer Cell. 2003, V. 3, no. 4, pp. 403-410.

46. Ishimoto O., Kawahara C., Enjo K., Obinata M., Nukiwa T. and Ikawa S. Possible oncogenic potential of DeltaNp73: a newly identified isoform of human p73. Cancer Res. 2002, V. 62, no. 3, pp. 636-641.

47. Joerger A. C. and Fersht A. R. Structure-function-rescue: the diverse nature of common p53 cancer mutants. Oncogene. 2007, V. 26, no. 15, pp. 2226-2242.

48. Johnson1 J., Lagowski J"., Sundberg A., LawsomS., Liu Y. and Kulesz-Martin-Mi. p73' loss triggers conversion« to squamous cell carcinoma; reversible upon? reconstitution-with TAp73alpha; CancerRes. 2007b, V. 67, no. 16, pp. 77237730; •

49. Johnson R* A., Ince T. A. and;-ScottotK. W. Transcriptional I repression? by p53 through direct binding to a novel DNA element. J Biol; Chem: 2001, V. 276, no. 29, pp. 27716-27720.

50. Johnson R: A., Shepard E. M. and Scotto K. W. Differential regulation of MDR1 transcription by the p53 family members. Role of the DNA binding domain. J Biol Chem. 2005, V. 280, no. 14, pp. 13213-13219.

51. Johnstone R. W., Cretney E. and Smyth M. J. P-glycoprotein protects leukemia cells against caspase-dependent, but not caspase-independent, cell death. Blood. 1999, V. 93, no. 3, pp. 1075-1085.

52. Kanai Y., Hui A. M., Sun L., Ushijima S., Sakamoto M., Tsuda H. and Hirohashi S. DNA hypermethylation at the D17S5 locus and reduced HIC-1 mRNA expression are associated with hepatocarcinogenesis. Hepatology. 1999, V. 29, no. 3, pp. 703-709.

53. Kartasheva N. N., Lenz-Bauer C.5 Hartmann O., Schafer 1-L, Eilers M. and Dobbelstein M. DeltaNp73 can modulate the expression of various genes in a p53-independent fashion. Oncogene. 2003- V. 22, no. 51, pp. 8246-8254.

54. Katoh E,. Aisaki K. I., Kurata S. I., Ikawa S. and Ikawa. Y. p51A (TAp63gamma), a p53 homolog, accumulates in response to DNA damage for cell regulation. Oncogene. 2000j V. 19, no. 27, pp. 3126-3130.

55. Keyes W. M., Wu Y., Vogel H., Guo X., Lowe S. W. and Mills A. A. p63 deficiency activates a program of cellular senescence and leads to accelerated aging. Genes Dev. 2005, V. 19, no. 17, pp. 1986-1999.

56. Khoury M. P. and Bourdon J. C. The isoforms of the p53 protein. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2010, V. 2, no. 3, pp. a000927.

57. Kim S. H., Hur W. Y., Kang C. D., Lim Y. S., Kim D. W. and Chung B. S. Involvement of heat shock factor in regulating transcriptional activation of MDR1 gene in multidrug-resistant cells. Cancer Lett. 1997, V. 115, no. 1, pp. 914.

58. Knezevic D. and Brash D. E. Role of E2F1 in apoptosis: a case study in feedback loops. Cell Cycle. 2004, V. 3, no. 6, pp. 729-732.

59. Lane D. P. Cancer. p53, guardian of the genome. Nature. 1992, V. 358, no. 6381, pp. 15-16.

60. Leong C. O., Vidnovic N., DeYoung M. P., Sgroi D. and Ellisen L. W. The p63/p73 network mediates chemosensitivity to cisplatin in a biologically defined subset of primary breast cancers. J Clin Invest. 2007, V. 117, no. 5, pp. 13701380.

61. Li Y. and Prives C. Are interactions with p63 and p73 involved in mutant p53 gain of oncogenic function? Oncogene. 2007, V. 26, no. 15, pp. 2220-2225.

62. Lin K. W., Nam S. Y., Toh W. H., Dulloo I. and Sabapathy K. Multiple stress signals induce p73beta accumulation. Neoplasia. 2004, V. 6, no. 5, pp. 546-557.

63. Lin Y. L., Sengupta S., Gurdziel K., Bell G. W., Jacks T. and Flores E. R. p63 and p73 transcriptionally regulate genes involved in DNA repair. PLoS Genet: 2009, V. 5, no. 10, pp. el000680.

64. Liu G. and Chen X. The C-terminal sterile alpha motif and the extreme C-terminus regulate the transcriptional activity of the alpha isoform of p73. J Biol Chem. 2005, no.

65. Liu G., Nozell S., Xiao H. and Chen X. DeltaNp73beta is active in transactivation and growth suppression. Mol Cell Biol. 2004, V. 24, no. 2, pp. 487-501.

66. Loots G. G. and; Ovcharenko I. rVISTA 2.0: evolutionary analysis of transcription factor binding sites. Nucleic Acids Res. 2004,. V. 32, no. Web Server issue, pp. W217-221.

67. Maisse C., Munarriz E., Barcaroli D., Melino G. and De Laurenzi V. DNA damage induces the rapid and selective degradation of the DeltaNp73 isoform, allowing apoptosis to occur. Cell Death Differ. 2004, V. 11, no. 6, pp. 685-687.

68. Makos M., Nelkin B. D., Lerman M. I., Latif F., Zbar B. and Baylin S. B. Distinct hypermethylation patterns occur at altered chromosome loci in human lung and colon cancer. Proc Natl Acad Sci USA. 1992, V. 89, no. 5, pp. 19291933.

69. Mantovani R. The molecular biology of the CCAAT-binding factor NF-Y. Gene. 1999, V. 239, no. 1, pp. 15-27.

70. McCoy C., McGee S. B. and Cornwell M. M. The Wilms' tumor suppressor, WT1, inhibits 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate activation of the multidrug resistance-1 promoter. Cell Growth Differ. 1999, V. 10, no. 6, pp. 377-386.

71. Melino G., De Laurenzi V. and Yousden K. H. p73: Friend or foe in tumorigenesis. Nat Rev Cancer. 2002, Y. 2, no. 8, pp. 605-615.

72. Melino G., Lu X., Gasco M., Crook T. and Knight R. A. Functional regulation of p73 and p63: development and cancer. Trends Biochem Sci. 2003, V. 28, no. 12, pp. 663-670.

73. Menendez D., Inga A. and Resnick M. A. The expanding universe of p53 targets. Nat Rev Cancer. 2009; V. 9, no. 10, pp. 724-737.

74. Mills A. A., Zheng B., Wang X. J., Vogel H., Roop D. R. and Bradley A. p63 is ap53 homologue required for limb and'epidermal morphogenesis. Nature. 1999; V. 398, no. 6729; pp. 708-713.j

75. Moll U. M. and Slade N. p63 and p73: roles in development and tumor formation. Mol Cancer Res. 2004, V. 2, no. 7, pp. 371-386.

76. Muller M., Schleithoff E. S., Stremmel W., Melino G., Krammer P. H. and Schilling T. One, two, three~p53, p63, p73 and chemosensitivity. Drug Resist Updat. 2006, V. 9, no. 6, pp. 288-306.

77. Munro A. J., Lain S. and Lane D. P. P53 abnormalities and outcomes in colorectal cancer: a systematic review. Br J Cancer. 2005, V. 92, no. 3, pp. 434444.

78. Negrini S., Gorgoulis V. G. and Halazonetis T. D. Genomic instability—an evolving hallmark of cancer. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010, V. 11,, no. 3, pp. 220-228:

79. Nemajerova A., Palacios G., Nowak N. J., Matsui S. and Petrenko O. Targeted deletion of p73 in mice reveals its role in T cell development and' lymphomagenesis. PLoS One. 2009, Y. 4, no. 11, pp. e7784.

80. Oren M:, and Levine A. J. Molecular cloning of a cDNA specific for theinurine* p53 cellular tumor antigen Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983, V. 80, no. 1, pp. 56-59.

81. Osbom M. T. and Chambers T. C. Role of the stress-activated/c-Jun NH2-terminal protein kinase pathway in the cellular response to adriamycin and other chemotherapeutic drugs. J Biol Chem. 1996, V. 271, no. 48, pp. 30950-30955.

82. Perez C. A., Ott J., Mays D. J. and Pietenpol J. A. p63 consensus DNA-binding site: identification, analysis and application into a p63MH algorithm. Oncogene. 2007, V. 26, no. 52, pp. 7363-7370. '

83. Perez C. A. and Pietenpol J. A. Transcriptional programs regulated by p63 in normal epithelium and tumors. Cell Cycle. 2007, V. 6, no. 3, pp. 246-254.

84. Peters M. A., Janer M., Kolb S., Jarvik G. P., Ostrander E. A. and Stanford J. L. Germline mutations in the p73 gene do not predispose to familial prostate-brain cancer. Prostate. 2001, V. 48, no. 4, pp. 292-296.

85. Petitjean A., Cavard C., Shi H., Tribollet V., Hainaut P. and Caron de Fromentel C. The expression of TA and DeltaNp63 are regulated by different mechanisms in liver cells. Oncogene. 2005, V. 24, no. 3, pp. 512-519.

86. Petrenko O., Zaika A. and Moll U. M. deltaNp73 facilitates cell immortalization and cooperates with oncogenic Ras in cellular transformation in vivo. Mol Cell Biol. 2003, V. 23, no. 16, pp. 5540-5555.

87. Pluta A., Nyman U., Joseph B., Robak T., Zhivotovsky B. and Smolewski P. The role of p73 in hematological malignancies. Leukemia. 2006, V. 20, no. 5, pp. 757-766.

88. Polager S. and Ginsberg D. p53 and E2f: partners in life and death. Nat Rev Cancer. 2009, V. 9, no. 10, pp. 738-748.

89. Riley T., Sontag E., Chen P. and Levine A. Transcriptional control of human p53-regulated genes. Nat Rev Mol Cell Biol. 2008, V. 9, no. 5, pp. 402-412.

90. Rocco J. W., Leong C. O., Kuperwasser N., DeYoung M. P. and Ellisen L. W. p63 mediates survival in squamous cell carcinoma by suppression of p73-dependent apoptosis. Cancer Cell. 2006, V. 9, no. 1, pp. 45-56.

91. Rosenbluth J. M., Mays D. J., Pino M. F., Tang L. J. and Pietenpol J. A. A gene signature-based approach identifies mTOR as a regulator of p73. Mol Cell Biol. 2008, V. 28, no. 19, pp. 5951-5964.

92. Sampath J., Sun D., Kidd V. J., Grenet J., Gandhi A., Shapiro L. H., Wang Q., Zambetti G. P. and Schuetz J. D. Mutant p53 cooperates with ETS and selectively up-regulates human MDR1 not MRP1. J Biol Chem. 2001, V. 276, no. 42, pp. 39359-39367.

93. Sarkadi B., Homolya L., Szakacs G. and Varadi A. Human multidrug resistance ABCB and ABCG transporters: participation in a chemoimmunity defense system. Physiol Rev. 2006, V. 86, no. 4, pp. 1179-1236.

94. Schavolt K. L. and Pietenpol J. A. p53 and Delta Np63 alpha differentially bind and regulate target genes involved in cell cycle arrest, DNA repair and apoptosis. Oncogene. 2007, V. 26, no. 42, pp. 6125-6132.

95. Schwartz D. I., Lindor N. M., Walsh-Vockley C., Roche P. C., Mai M., Smith D. I., Liu W. and Couch F. J. p73 mutations are not detected^ in sporadic and» hereditary breast cancer. Breast Cancer Res Treat. 1999, V. 58, no. 1, pp. 25-29.

96. Scotto, K. W. Transcriptional regulation of ABC drug transporters: Oncogene.2003; V. 22, no: 47, pp. 7496-7511.4

97. Senoo M:, Manis J. P., Alt F. W. and McKeon F. p63 and p73 are not required for the development and p53-dependent apoptosis of T cells. Cancer Cell. 2004, V. 6, no. l,pp. 85-89.

98. Sheps J. A. and Ling V. Preface: the concept and consequences of multidrug resistance. Pflugers Arch. 2007, V. 453, no. 5, pp. 545-553.

99. Speidel D. Transcription-independent p53 apoptosis: an alternative route to death. Trends Cell Biol. 2010, V. 20, no. 1, pp. 14-24.

100. Stanley L. A., Horsburgh B. C., Ross J., Scheer N. and Wolf C. R. Drug transporters: gatekeepers controlling access of xenobiotics to the cellular interior. Drug Metab Rev. 2009, V. 41, no. 1, pp. 27-65.

101. Stefansson I. M., Salvesen H. B. and Akslen L. A. Loss of p63 and cytokeratin 5/6 expression is associated with more aggressive tumors in endometrial carcinoma patients. Int J Cancer. 2006, V. 118, no. 5, pp. 1227-1233.

102. Stiewe T. and Putzer B. M. Role of p73 in malignancy: tumor suppressor or oncogene? Cell Death Differ. 2002, V. 9, no. 3, pp. 237-245.

103. Stiewe T., Theseling C. C. and Putzer B. M. Transactivation-deficient Delta TA-p73 inhibits p53 by direct competition for DNA binding: implications for tumorigenesis. J'Biol Chem. 2002, V. 277, no. 16, pp. 14177-14185.

104. Stiewe T., Tuve S., Peter M., Tannapfel A., Elmaagacli A. H. and Putzer B. M. Quantitative TP73 transcript analysis in hepatocellular carcinomas. Clin Cancer Res. 2004, V. 10, no. 2, pp. 626-633.

105. Szakacs G., Paterson J. K., Ludwig J. A., Booth-Genthe C. and Gottesman M. M. Targeting multidrug resistance in cancer. Nat Rev Drug Discov. 2006, V. 5, no. 3, pp. 219-234.

106. Talos F., Nemajerova A., Flores E. R., Petrenko O. and Moll U. M. p73 suppresses polyploidy and aneuploidy in the absence of functional p53. Mol Cell. 2007, V. 27, no. 4, pp. 647-659.

107. Tanaka Y., Kameoka M., Itaya A., Ota K. and Yoshihara K. Regulation of HSF1 -responsive gene expression by N-terminal truncated form of p73alpha. Biochem Biophys Res Commun. 2004, V. 317, no. 3, pp. 865-872.

108. Tannapfel A., John K., Mise N., Schmidt A., Buhlmann S., Ibrahim S. M. and Putzer B. M. Autonomous growth and hepatocarcinogenesis in transgenic mice expressing the p53 family inhibitor DNp73. Carcinogenesis. 2008, V. 29, no. 1, pp. 211-218.

109. Thottassery J. V., Zambetti G. P., Arimori K., Schuetz E. G. and Schuetz J. D. p53-dependent regulation of MDR1 gene expression causes selective resistance to chemotherapeutic agents. Proc Natl Acad Sci USA. 1997, V. 94, no. 20, pp. 11037-11042.

110. Ueda Y., Hijikata M., Takagi S., Chiba T. and Shimotohno K. New p73 variants with altered C-terminal structures have varied transcriptional activities. Oncogene. 1999, V. 18, no. 35, pp. 4993-4998.

111. Uramoto H., Sugio K., Oyama T., Nakata S., Ono K., Morita M., Funa K. and Yasumoto K. Expression of deltaNp73 predicts poor prognosis in lung cancer. Clin Cancer Res. 2004, V. 10, no. 20, pp. 6905-6911.

112. Urist M. J., Di Como C. J., Lu M. L., Charytonowicz E., Verbel D., Crum C. P., Ince T. A., McKeon F. D. and Cordon-Cardo C. Loss of p63 expression is associated with tumor progression in bladder cancer. Am J Pathol. 2002, V. 161, no. 4, pp. 1199-1206.

113. Vayssade M., Haddada H., Faridoni-Laurens L., Tourpin S., Valent A., Benard J. and Aliomadegbe J. C. P73 functionally replaces p53 in Adriamycin-treated, p53-deficient breast cancer cells. Int J Cancer. 2005, V. 116, no. 6, pp. 860-869.

114. Vella V., Puppin C., Damante G., Vigneri R., Sanfilippo M., Vigneri P., Tell G. and Frasca F. DeltaNp73alpha inhibits PTEN expression in thyroid cancer cells. Int J Cancer. 2009, V. 124, no. 11, pp. 2539-2548.

115. Vilgelm A., El-Rifai W. and Zaika A. Therapeutic prospects for p73 and p63: rising from the shadow of p53. Drug Resist Updat. 2008, V. 11, no. 4-5, pp. 152-163.

116. Vincenzi B., Cesa A. L., Santini D., Schiavon G., Grilli C., Graziano F. and Tonini G. Predictive factors for response to chemotherapy in colorectal cancer patients. Crit Rev Oncol Hematol. 2004, V. 52, no. 1, pp. 45-60.

117. Vogelstein B. Cancer. A deadly inheritance. Nature. 1990,- V. 348, no. 6303, pp. 681-682.

118. Vossio S., Palescandolo E., Pediconi N., Moretti F., Balsano C., LevreroM. and Costanzo A. DN-p73 is activated after DNA damage in a p53-dependent manner to regulate p53-induced cell cycle arrest. Oncogene. 2002, V. 21, no. 23, pp. 3796-3803.

119. Vousden К. H. Outcomes of p53 activation—spoilt for choice. J Cell Sci. 2006, V. 119, no. Pt 24, pp: 5015-5020.

120. Vousden, К. H. and Prives, C. Blinded by the Light: The Growing Complexity of p53. Cell. 2009, V. 137, no. 3, pp. 413-431.

121. Wales M. M., Biel M. A., el Deiry W., Nelkin B. D., Issa J. P., Cavenee W. K., Kuerbitz S. J. and Baylin S. B. p53 activates expression of ШС-1, a new candidate tumour suppressor gene on 17pl3.3. Nat Med. 1995, V. 1, no. 6, pp. 570-577.

122. Wallner J., Depisch D., Gsur A., Gotzl M., Haider K. and Pirker R. MDR1 gene expression and its clinical relevance in primary gastric carcinomas. Cancer. 1993, V. 71, no. 3, pp. 667-671.

123. Wang J., Liu Y. X., Hande M. P., Wong A. C., Jin Y. J. and Yin Y. TAp73 is a downstream target of p53 in controlling the cellular defense against stress. J Biol Chem. 2007, V. 282, no. 40, pp. 29152-29162.

124. Wang S. and El-Deiry W. S. p73 or p53 directly regulates human p53 transcription to maintain cell cycle checkpoints. Cancer Res. 2006, V. 66, no. 14, pp. 6982-6989.

125. Yuan Z. M., Shioya H., Ishiko T., Sun X., Gu J., Huang Y. Y., Lu H., Kharbanda S., Weichselbaum R. and Kufe D. p73 is regulated by tyrosine kinase c-Abl in the apoptotic response to DNA damage. Nature. 1999, V. 399, no. 6738, pp. 814-817.

126. Zaika A. I., Kovalev S., Marchenko N. D. and Moll U. M. Overexpression of the wild type p73 gene in breast cancer tissues and cell lines. Cancer Res. 1999, V. 59, no. 13, pp. 3257-3263.

127. Zaika A. I., Slade N., Erster S. H., Sansome C., Joseph T. W., Pearl M., Chalas E. and Moll U. M. DeltaNp73, a dominant-negative inhibitor of wild-type p53 and TAp73, is up-regulated in human tumors. J Exp Med. 2002, V. 196, no. 6, pp. 765-780.

128. Zastawny R. L., Salvino R., Chen J., Benchimol S. and Ling V. The core promoter region of the P-glycoprotein gene is sufficient to confer differential responsiveness to wild-type and mutant p53. Oncogene. 1993, V. 8, no. 6, pp. 1529-1535.

129. Zeng Y. X., Somasundaram K. and el-Deiry W. S. AP2 inhibits cancer cell growth and activates p21WAFl/CIPl expression. Nat Genet. 1997, V. 15, no. 1, pp. 78-82.

130. Zhang B., Chambers K. J., Leprince D., Faller D. V. and Wang S. Requirement for chromatin-remodeling complex in novel tumor suppressor HIC1-mediatedtranscriptional repression and growth control. Oncogene. 2009, V. 28, no. 5, pp. 651-661.

131. Zhang Q., Wang S. Y., Fleuriel C., Leprince D., Rocheleau J. V., Piston D. W. and Goodman R. H. Metabolic regulation of SIRT1 transcription via a fflCl:CtBP corepressor complex. Proc Natl Acad Sci USA. 2007, V. 104, no. 3, pp. 829-833.1. БЛАГОДАРНОСТИ

132. Выражаю особую признательность Александру Ивановичу Заике за сотрудничество.

133. Благодарю всех сотрудников Лаборатории биологии гена ИМБ РАН за дружеское отношение, помощь и ценные советы.