Экспериментальное (доклиническое) изучение оригинального репаранта на основе альгиновой кислоты тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат наук Зеленцов Роман Николаевич

• Зеленцов Роман Николаевич
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Зеленцов Роман Николаевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Литературный обзор

1.1. Раны и травмы: актуальность в России и мире

1.2. Механизмы заживления ран

1.3. Направления фармакологической коррекции раневого 18 процесса

1.3.1. Лекарственные препараты на основе компонентов 21 крови животных

1.3.2. Витамины и витаминоподобные препараты

1.3.3. Препараты на основе дезоксирибонуклеиновой 31 кислоты

1.3.4. Группа производных пиримидинов

1.3.5. Фитопрепараты и продукты пчеловодства

1.3.6. Гиалуроновая кислота и ее производные

1.3.7. Применение альгинатов в лечении ран 38 ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Предмет исследования

2.2. Методы изучения репаративной активности

2.3. База эксперимента

2.4. Расчет размера выборки

2.5. Изучение профиля безопасности

2.5.1. Методика изучения «острой» токсичности

2.5.2. Исследование «хронической» токсичности

2.6. Методика изучения репаративной активности на 57 экспериментальной модели асептической плоскостной кожно-фасциальной раны

2.6.1. Планиметрия экспериментальных ран

2.6.2. Методы обзорного гистологического исследования

2.6.3. Количественные гистоморфологические методы

2.6.4. Статистические методы

61

62

59

2.7. Оценка фармакокинетических свойств оригинальной 62 субстанции на основе деструктурированной альгиновой кислоты

2.8.1. Методика выполнения иммуногистохимического 66 исследования

2.8.2. Методика количественной оценки результатов 67 иммуногистохимического исследования

ГЛАВА 3. Определение профиля безопасности субстанции на основе 70 деструктурированной альгиновой кислоты

3.1. Изучение «острой» токсичности

3.2. Изучение «хронической» токсичности 71 ГЛАВА 4. Определение эффективной дозы субстанции на основе 75 деструктурированной альгиновой кислоты

4.1. Визуальная и планиметрическая оценка

4.2. Данные обзорного патоморфологического исследования

4.3. Результаты окулярного морфометрического исследования 82 ГЛАВА 5. Оценка репаративной активности энзиматически 86 деструктурированной альгиновой кислоты

5.1. Визуальная и планиметрическая оценка

5.2. Результаты окулярного морфометрического исследования

5.3. Результаты оценки фармакокинетических свойств 94 энзиматически деструктурированной альгиновой кислоты

5.4. Результаты оценки пролиферативной активно сти

2.8. Метод оценки пролиферативной активности.

64

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспериментальное (доклиническое) изучение оригинального репаранта на основе альгиновой кислоты»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Для нашей страны, испытывающей выраженный дефицит в современных отечественных высокоэффективных лекарственных препаратах (ЛП), очень важен поиск и разработка собственных ЛП, базирующихся на местных природных источниках, в том числе, обладающих репаративной активностью.

В Российской Федерации (РФ) ежегодно в лечебных учреждениях регистрируется более 13 млн. новых случаев травм [33]. Ведущее место среди всех повреждений занимают поверхностные травмы, которые составляют более 34% [33], а вместе с ранами и травмами кровеносных сосудов, на которые приходится более 18% [33], составляют больше половины всей травматической патологии. По данным Министерства здравоохранения РФ количество травм и повреждений остается стабильно высоким [33], что может быть связано с комплексом социально-экономических причин.

Распространенность повреждений травматической этиологии в структуре общей заболеваемости высока и имеет отчетливую тенденцию к росту. Вышесказанное делает крайне актуальным вопрос поиска и разработки оригинальных фармсубстанций, влияющих на раневой процесс.

На Севере Европейской части РФ большой интерес в отношении ресурсоведения и фармакоэкономики представляют природные запасы Белого и Баренцева морей, в том числе, ламинария (Laminaria saccharina). Ламинария является источником альгиновой кислоты, сульфатированных полисахаридов (фукоидан), нейтральных полисахаридов (ламинарин), многоатомных спиртов (маннит) и др., имеющих выраженную фармакологическую активность. Стоит отметить, что по данным Министерства природных ресурсов РФ, в Белом море сосредоточены

существенные запасы ламинариевых водорослей, а их использование осуществляется не в полном объеме [22].

Вышеизложенное, позволяет говорить о перспективе углубленного изучения фармсубстанции на основе регионального биоресурса Архангельской области - ламинарии (Laminaria saccharina) и исследования ее репаративного (ранозаживляющего) потенциала.

Степень разработанности темы. Применение морских бурых водорослей для лечения раневого процесса берет свое начало в глубине веков. Одним из наиболее значимых в данном плане химических веществ являются альгиновые кислоты. Наиболее изученной является абсорбционная активность альгинатов в области раневого процесса [5]. Альгинаты биосовместимы и не вызывают реакций на подлежащие ткани, они нетоксичны, биодеградируют [26] и гиппоаллергенны [26]. Использование солей альгиновой кислоты не наносит ущерба окружающей среде. Таким образом, описанные свойства позволяют охарактеризовать альгинаты как средство многогранного воздействия на раневой процесс.

На сегодняшний день имеется представление о том, что воздействие солей альгинатов на рану происходит в трех основных направлениях:

1. Физическое: способность к термоизоляции, абсорбированию и сохранению влаги в ране.

2. Химическое: гемостатический эффект, вследствие замены ионов кальция ионами натрия из раневого экссудата и крови.

3. Биологическое: клеточная миграция и изоляция бактерий, за счет обволакивания их гелем.

Клиническими исследованиями, посвященными альгинатам, как средствам лечения ран, признаны труды B. Gilchrist и A. Martin [80], а также R.Fraser и T. Gilchrist [73], увидевшие свет в 1983 году. Полученные исследователями результаты полностью подтвердили данные G. Blaine, полученные более полувека назад [47].

Британский ученый Attwood [42] исследовал заживление ран под повязкой на основе альгинатов у 107 пациентов с ожогами. Было определено, что под повязкой на основе альгинатов раневой процесс купировался на 3 дня быстрее, чем под традиционными повязками. В это же время инфильтрированность ран у группы пациентов, пролеченных повязками на основе альгинатов, была ниже, чем в контрольной. Покрытые альгинатами раны кровоточили меньше, чем под другими традиционными покрытиями, такими как марлевые [42]. Так же исследователями было отмечено, что пребывание пациентов в стационаре при лечении повязками на основе альгинатов сокращалось в среднем на 3 дня [42].

Все проведенные ранее исследования делают перспективным применение альгиновой кислоты в качестве репаративного агента. Однако, исследований позволяющих оценить взаимосвязь между молекулярной массой альгиновой и кислоты и ее репаративной активностью выполнено не было.

Цель исследования. Обоснование репаративной активности оригинальной фармсубстанции на основе альгиновой кислоты в эксперименте.

Предмет исследования. Полученная путем биотехнологии оригинальная фармацевтическая субстанция с потенциальной высокой репаративной активностью.

Задачи исследования:

1. Оценить в ходе эксперимента безопасность применения тестируемого потенциального лекарственного вещества (определение острой и хронической токсичности).

2. Определить эффективную дозу исследуемой фармацевтической субстанции.

3. Исследовать влияние фармсубстанции на основе альгиновой кислоты в остром эксперименте на процессы репаративной регенерации.

4. Изучить механизм ранозаживляющего эффекта тестируемой субстанции.

Научная новизна. Изучаемая в эксперименте фармацевтическая субстанция получена в лабораторных условиях впервые и не имеет аналогов в мире, что подтверждено патентным поиском. Методика выделения оригинальной молекулы является ноу-хау исследования.

Теоретическая и практическая значимость работы. Возможность создания опытного образца инновационной фармацевтической продукции (лекарственное вещество), который ориентирован на пилотное, а затем массовое производство широкого потребления в различных областях медицины. Потенциальные потребители продукции как в розничном секторе (жители Архангельской области и других регионов РФ), так и в оптовом (больничные аптеки).

Методология исследования. В диссертационном исследовании использованы фармакологические, гистологические и статистические методы исследования.

Методология исследования базируется на принципах экспериментального (доклинического) изучения новых фармакологических веществ. Рассмотрены возможности использования оригинального соединения на основе альгиновой кислоты для ускорения процессов репаративной регенерации на модели раневого процесса.

Положения, выносимые на защиту:

1. Оригинальное соединение на основе альгиновой кислоты обладает благоприятным профилем безопасности - относится к веществам малоопасным (ГОСТ 12.1.007-76 [6]).

2. Эффективная доза оригинальной субстанции на основе альгиновой кислоты составляет 2 мг/мл.

3. Оригинальная молекула на основе деструктурированной альгиновой кислоты обладает выраженной репаративной (ранозаживляющей) активностью.

4. Энзиматически деструктурированная альгиновая кислота обладает пролиферативной активностью.

5. Энзиматически деструктурированная альгиновая кислота способна аккумулироваться в области тканевого дефекта (при наличии раневого повреждения), а также в области коллагеновых волокон интактной кожи.

Степень достоверности результатов. Достоверность результатов проведенного исследования подтверждается достаточным объемом лабораторного материала, использованием современных

высокоинформативных методов исследования и адекватным выбором методов статистического анализа.

Реализация результатов. Произведена пилотная партия образца геля для наружного применения "Ламидин" (в алюминиевых тубах по 15,0 г) на базе ООО "Малое инновационное предприятие "СГМУ". в 2018 году запланировано масштабирование данного производства.

Апробация результатов. Основные положения настоящего диссертационного исследования доложены: в рамках XLII Ломоносовских чтений Итоговой научной сессии "СГМУ" и "СНЦ СЗО РАМН" «Северная хирургическая школа: к 100-летию со дня рождения Н.М. Амосова» (г. Архангельск, 2013 г.), Межвузовская научной конференции «Медицина и гуманитарные знания: области соприкосновения» (г. Архангельск, 2013 г.), V Международной заочной научно-практической конференции «Научные аспекты инновационных исследований» (г. Самара, 2014 г.), I Международном молодежном медицинском форуме «Медицина будущего -Арктике» (г. Архангельск, 2014 г.), II Международном молодежном медицинском форуме «Медицина будущего - Арктике» (г. Архангельск, 2015

г.) V Международного молодежного инновационного форума «Молодежный инновационный центр-2014» (г. Нижний Новгород, 2014 г.)

Публикации. Материалы диссертации отражены в 18 публикациях, из них 3 - в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Личный вклад автора. Состоит в планировании и проведении экспериментальных исследований, составлении протоколов исследований, анализе полученных результатов. Автором написана диссертация и автореферат.

Практическая реализация результатов. Произведена пилотная партия образца геля для наружного применения "Ламидин" (в алюминиевых тубах по 15,0 г) на базе ООО "Малое инновационное предприятие "СГМУ". в 2018 году запланировано масштабирование данного производства.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 134 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературных источников, описание материалов и методов исследования, главу собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключение, выводы, списка литературы и приложения. Диссертация проиллюстрирована 13 таблицами и 27 рисунками. Литературный указатель содержит ссылки на 163 научных публикаций, источники данных, а также нормативно-правовую документацию.

ГЛАВА 1. Литературный обзор 1.1. Раны и травмы: актуальность в России и мире

Актуальность повышения скорости процессов репаративной регенерации неизменно сохраняется и носит междисциплинарный характер [9, 12, 16]. Травмы, полученные в результате дорожно-транспортных происшествий (ДТП), утоплений, падений, ожогов, военных действий ежегодно приводят к смерти более пяти миллионов людей во всем мире и причиняют вред здоровью многих миллионов [156]. Значительная доля лиц, выживших после полученных травм, страдает от временной или постоянной утраты трудоспособности [156]. По данным Росстата в РФ распространенность травм составляет 9078,3 на 100 тысяч населения (13291,2 тысячи в абсолютных цифрах (рис. 1) [33]. По данным Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (РФ) количество травм и повреждений остается стабильно высоким (рис. 1 и 2) [33].

В тоже время в структуре травм и повреждений поверхностные травмы занимают первое место, а вместе с открытыми ранами занимают более половины (рис. 3) [33].

В глобальном понимании проблемы травматизма решающее значение имеют сразу несколько причин развития различного вида ран: чрезмерное употребление алкоголя [19], дорожно-транспортный травматизм, укусы животных, рост насилия, воздействие климатических факторов (ожоги и криотравмы) [19].

13600000 13400000 13200000 13000000 12800000 12600000 12400000

2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015

Рис. 1. Инцидентность травм и некоторых других последствий воздействия внешних причин среди населения Российской Федерации (в

абсолютных числах) [33].

Рис. 2. Инцидентность травм и некоторых других последствий воздействия внешних причин среди населения Российской Федерации

(на 100 000) [33].

Внутричерепные травмы

Вывихи, растяжения, травмы мышц и сухожилий

14%

Переломы костей нижних конечностей 8%

Рис. 3. Структура травм и некоторых других последствий воздействий внешних причин в Российской Федерации в 2015 году [33].

По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в результате ДТП ежегодно 50 миллионов человек получают несмертельные травмы, которые часто приводят к стойкой утрате трудоспособности [155, 156].

Нередко причиной травм становятся домашние животные, в частности собаки. Сведений о распространенности укусов собак в научной литературе не встречается, но данные исследований, проводимые ВОЗ, позволяют предполагать, что на них приходятся десятки миллионов ежегодных травм. Например, в Соединенных Штатах Америки (США) около 4,5 миллиона людей ежегодно подвергаются укусам собак [158]. Из них около 885 000 человек обращаются за медицинской помощью; 30 000 человек проводятся реконструктивные операции; у 3-18% людей развиваются инфекции, а от 10 до 20 случаев заканчиваются смертельным исходом. В других странах с высоким уровнем дохода, таких как Австралия, Канада и Франция,

отмечаются аналогичные показатели распространенности и летальности [158].

Выше обозначенная проблема ещё более актуальна в педиатрической практике, так как в большинстве случаев укусам собак подвергаются дети с высоким риском получения травм головы и шеи, при этом травмы являются особо тяжелыми и жизнеопасными [158].

В мире ежегодно более 10 миллионов человек получают ожоговые травмы, так в 2004 году почти 11 миллионов человек в мире получили ожоги такой степени тяжести, что потребовалась медицинская помощь [157].

Несмертельные ожоги часто приводят к развитию состояний, ведущих к длительной госпитализации, нередко сопровождаемые развитием у пострадавших инвалидности. Отсюда медико-санитарные потери стран в связи с ними. Таким образом, ожоги являются одной из основных причин сокращения лет жизни, скорректированных на инвалидность, что в большей степени проявляется в странах с низким и средним уровнем дохода [157].

Нередко причиной замедления процессов репаративной регенерации являются такие физиологические состояния пациентов, как пожилой возраст, либо хронические заболевания - сахарный диабет [40, 52, 66, 97], анемизация [68], гипопротеинемия [147], состояние гормональной системы [74], влияние высокой [101] и пониженной температур [43], авитаминоз [117, 39], общие интоксикации организма [19] и многие другие причины, которые изменяют активность тканевых окислительных процессов. По оценкам экспертов, более 347 миллионов человек во всем мире страдает сахарным диабетом [57], а к 2030 г. прогнозируется увеличение этого числа вдвое [114]. Сахарный диабет и его многочисленные осложнения в настоящее время являются существенным обременением для здравоохранения и экономики всех стран. Так, например, на лечение поражений ног вследствие сахарного диабета в странах с высоким уровнем дохода расходуется до 15-25% всех средств здравоохранения, предназначенных для лечения этой патологии [154]. Это

колоссальные потери не только ограниченных финансовых ресурсов системы здравоохранения. Подсчитано, что можно избежать до 80% ампутаций нижних конечностей при надлежащем контроле сахарного диабета и соответствующем медицинском уходе больных данным заболеванием [30]. Стоит отметить, что использование высокоэффективных ЛП, обладающих репаративной активностью, позволяет оптимизировать медикаментозную терапию и сократить сроки заживления трофических язв при сахарном диабете [95, 116, 137].

В недавнем выпуске ВОЗ [51] обращается внимание на продолжающуюся тенденцию демографического старения населения: в странах Европейского союза число людей в возрасте старше 65 лет превысило число детей в возрасте до 15 лет. Эти демографические изменения характерны не только для Европейских стран, но носят глобальный характер. В этой связи ВОЗ призывает научных исследователей в области фармакологии учитывать в своих исследованиях и разработках описанную тенденцию. В этом ключе обращает на себя внимание актуальность геронтофармакологического направления, поскольку замедление естественных процессов репаративной регенерации у пожилых пациентов требует более частого применения репарантов [9, 90, 161].

Все вышеизложенное обусловливает необходимость

фармакологического поиска, разработки, апробации инновационных безопасных потенциальных ЛП с высоким репаративным потенциалом. Причем приоритет в отношении источника сырья должен быть отдан региональным природным ресурсам Российской Федерации, что позволило бы существенно сократить затраты на производство репаративных агентов.

1.2. Механизмы заживления ран

Естественной универсальной защитной реакцией организма на травматическое повреждение является его способность к скорейшей

локализации последствия воздействия травмирующего фактора [26], что достигается путем образования в тканях, окружающих очаг воспаления, соответствующих сосудистых, биохимических и клеточных реакций [87].

Заживление раны включает в себя комплекс динамических изменений, таких как коагуляция и установка гемостаза, острое воспаление (клеточную миграцию, пролиферацию, дифференцировку клеток, ангиогенез, реэпителизацию, синтез и организацию соединительной ткани) [134]. Данные изменения условно можно разделить на дегенеративные и регенеративные процессы [26]. Первый воспалительно-дегенеративный период сопровождается воспалительными явлениями. В свою очередь, во втором регенеративном периоде, преобладают репаративные процессы. Воспаление -это комплекс нескольких связанных между собой процессов: повреждения клеток [86], синтез медиаторов [140, 71], нарушения микроциркуляции [38] с изменением реологических свойств крови [42], экссудации [109], миграции [119] и пролиферации [58, 89, 128].

На сегодняшний день существует множество классификаций раневого процесса. Одни авторы выделяют 4 фазы раневого процесса: (1) гемостаз, (2) воспаление, (3) пролиферация и (4) заполнение раны рубцовой тканью [59]. Другие выделяют три фазы: воспаления (1), пролиферации (2), заполнения и созревания соединительной ткани (3) [77]. В свою очередь, в классификации, предложенной И.Г. Руфановым (1954 г.), выделялись только две фазы -гидратация и дегидратация [25].

Наиболее популярной в нашей стране среди клиницистов стала классификация раневого процесса М.И. Кузина [16], предложенная им в 1977 году, в которой выделены три стадии: фаза воспаления, фаза регенерации и созревания грануляционной ткани, фаза эпителизации и реорганизации рубца.

Выделяют три основных типа процесса ранозаживления - под струпом, первичного и вторичного натяжения [50]. При всех типах заживления имеют

место все стадии течения раневого процесса, но выраженные в различной степени. При заживлении раны вторичным натяжением также присутствуют все компоненты раневого процесса.

Сразу после повреждения вступают в действие механизмы гемостаза, минимизирующие потери крови. Каскад реакций коагуляции, активизирующий свертывающую систему крови, ведет к агрегации тромбоцитов и образованию сгустка [148].

После установления гемостаза начинается первая фаза раневого процесса - фаза воспаления. В рану поступает жидкость, содержащая клетки крови, белки плазмы крови, антитела и фибрин. Нейтрофильный ряд является преобладающим в ближайшие 24-36 часов после повреждения. Нейтрофилы уничтожают микроорганизмы, бактерии, инородные тела и погибшие клетки в ране.

Моноциты, предшественники макрофагов, из костного мозга, достигают область раны позднее (через 48-72 часа). Они превращаются в макрофаги и фагоцитируют оставшийся в ране клеточный детрит, а также выделяют противовоспалительные ферменты [37, 129].

Вместе с этим происходит распад белков. В больших количествах высвобождаются биогенные амины: гистамин [98], серотонин [138], брадикинин [63]. Это вызывает повышение проницаемости капилляров, клеточную инфильтрацию и образование воспалительного экссудата [26, 45].

В первой, ведущей, фазе заживления раны процессы направлены на очищение очага воспаления от образовавшихся в ране токсических продуктов и разрушенных тканей [60, 102, 111].

В скором времени начинается вторая фаза раневого процесса, когда развивается бурная пролиферация в пределах воспалительного экссудата. В ее основе лежит размножение клеток местных тканей и форменных элементов крови, мигрирующих из капилляров [26].

В ближайшие двое суток среди них появляются фибробласты [60]. Начинают образовываться новые капиллярные петли, и фибробласты заполняют пространство между ними. Фибробласты синтезируют коллаген и мукополисахариды - основные компоненты межуточного вещества соединительной ткани. В ране начинают появляться беспорядочно расположенные нежные коллагеновые волокна. Формируется молодая грануляционная ткань [145], которая постепенно созревает: уплотненные коллагеновые волокна собираются в параллельные пучки, капиллярная сеть, сильно развитая в первое время, постепенно запустевает [159].

Возрастает митотическая активность эпителиальных клеток, за счет чего происходит эпителизация дефекта. Эти процессы сопровождаются формированием и ростом вновь образующихся капилляров и восстановлением сосудистой сети [152].

Фаза реорганизации рубца, финальная, третья стадия в процессе заживления ран, начинается со второй недели после воздействия повреждающего фактора и может длиться до 1-2 лет и даже дольше [127]. Грануляционная ткань рубцуется и превращается в зрелую фиброзную ткань [44]. Когда уровень коллагена достигает устойчивого уровня, между коллагеновыми волокнами образуются новые перекрестные связи и накапливается фиброзная ткань, что вместе приводит к сокращению объема раны [105].

1.3. Направления фармакологической коррекции раневого процесса

На процесс заживления ран большое влияние оказывают множество факторов общего и частного порядка, способных снижать скорость образования рубца - финального результата заживления тканей. Выделяют общие и местные факторы, влияющие на ранозаживление [93]. Так, к общим относят: возраст больного, состояние пациента на момент операции,

длительность предоперационной госпитализации, увеличение продолжительности и травматичности операции, нерациональное ведение послеоперационного периода. Местными факторами являются: нарушения асептики и техники операции, такие как оставление участков нежизнеспособных тканей, инородных тел, образование гематом. В тоже время, замедляют заживление ран: сахарный диабет [40, 52, 66, 97], анемизация [68], гипопротеинемия [148], состояние гормональной системы [74], влияние высокой [100] и пониженной температур [43], авитаминоз [39, 117], общие интоксикации организма [6] и многие другие причины, которые изменяют активность тканевых окислительных процессов.

Нередко, даже устранив вредное экзогенное влияние, не удается создать благоприятные условия для течения раневого процесса, тогда может понадобиться коррекция процесса ранозаживления, в том числе -медикаментозная.

Фармакологическая регуляция замедленного раневого процесса крайне разнообразна по применяемым с этой целью препаратам. Так, согласно АТХ классификации (Реестр лекарственных средств, 2017 г.) среди средств для лечения язв и ран выделяют: препараты, способствующие нормальному рубцеванию (декспантенол и гиалуроновая кислота) и ферментные препараты (протеолитические ферменты, такие как трипсин, коллагеназа и клостридиопептидаза в комбинации с другими препаратами).

Также в реестре лекарственных средств в классификации, учитывающей фармакологическое действие ЛП, выделяют группу репарантов, обладающих способностью стимулировать регенерацию (репаративную регенерацию) тканей.

По локализации действия репаранты разделяют на общеклеточные (универсальные) и тканеспецифические [78]. Общеклеточные стимуляторы действуют на любую регенерирующую ткань. Тканеспецифические репаранты - это ЛП с разнообразным механизмом действия, которые

объединены в подгруппы по направленности действия на ту или иную ткань, либо систему органов [78].

Среди тканеспецифических репарантов наибольшее число ЛП влияет на репарацию и регенерацию кожи. Главной целью применения этих ЛП является стимуляция репаративной регенерации дермальной и мезенхимальной ткани в области раневого дефекта. Репаранты назначаются при трофических язвах, труднозаживающих ранах, пролежнях, ожогах и др. У ряда ЛП данной фармакологической группы, в том числе и растительного происхождения, репаративная активность сочетается с другими видами фармакологической активности: противовоспалительной (мазь календулы, окопника) [78], стимуляцией трофики и локальной микроциркуляции кожного покрова (ксимедона таблетки, Гепатромбин и др.) [145, 150], антибактериальной (гиалуронат цинка, поливинокс, Фитостимулин и др.) [151, 165]. Учитывая высокий риск инфицирования поврежденных участков кожного покрова, наиболее значимым представляется наличие антибактериальной активности.

Следует отметить, что ранозаживление с последующей эпителизацией раневого дефекта возможно только при поверхностных процессах (язвах, эрозиях, ожогах и др.). При глубоких повреждениях кожного покрова в ходе раневого процесса происходит образование соединительно-тканного рубца [93]. Таким образом, в отношении качества лечения большое значение оказывает формирование нежного и малозаметного рубца. Особого внимания в этом отношении заслуживают препараты, оказывающие не только выраженный эффект в плане ускорения процессов регенерации и репарации, но и в тоже время способствующие нормальному рубцеванию.

1.3.1. Лекарственные препараты на основе компонентов крови животных

В процессе репаративной регенерации во время биосинтеза белков и фосфолипидов затрачивается огромное количество энергии, поэтому для его стимуляции необходимо дополнительное энергообеспечение (энергетические материалы). К ЛП, энергетически и субстратно обеспечивающим процессы репаративной регенерации относятся диализаты из крови крупного рогатого скота: Актовегин (Никомед Австрия ГмбХ, Австрия), Солкосерил (Valeant Pharmaceuticals Switzerland GmbH), Адгелон (Эндо-Фарм-А, Россия), хотя эффект этих препаратов зачастую трудно отдифференцировать.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зеленцов Роман Николаевич, 2018 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Автандилов Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии // М.: Медицина.- 1984.

2. Алфимов М. В., Разумов В. Ф. Доклад рабочей группы "Индустрия наносистем и материалов"/ Российские нанотехнологии. - Январь-февраль. -Том 2.- №1-2. - 2007.- с. 12-26.

3. Борисов Д. А., Проценко М. В., Печенкин А. В. Перспективы развития рынка биотехнологических лекарственных средств в России // Фармакоэкономика №3 Том 4, 2011.

4. Буянов В.М., Егиев В.Н., Акимова А.Я., Грицкова И.В. Влияние абсорбирующих материалов с лекарственными препаратами на раневой процесс / Хирургия. - №11. - 1993. - с.7-10.

5. Горюнов С.В. Гнойная хирургия: атлас // М.: БИНОМ. - 2004.

6. ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - Москва: Стандартинформ. - 2007. - 7 с.

7. Гундорова Р.А., Хорошилова-Маслова И.П., Ченцова Е.В. и др./ Вопросы офтальмологии.- т. 113.- № 2.- 1997.- с.12-15.

8. Данилина Е.М., Писаржевский С.А., Дудникова Г.Н., Карелин А.А. Роль микробного фактора, некротических масс и инородного тела в развитии гнойного процесса в ранах/ Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - №3.- 1983.- с.31-35.

9. Дворецкий Л.И., Абакарова П.Р., Алексеева Н.С., Баранская Е.К. и др. Рациональная фармакотерапия. Справочник терапевта// М.: 2010. - 976 с.

10. Досье препарата: Nycomed Актовегин: http://medi.ru/doc/a792700.html

11. Зайцева Е.Л., Доронина Л.П., Молчков Р.В., Воронкова И.А., Токмакова А.Ю. Морфологическая и иммуногистохимическая

характеристика интенсивности репаративных процессов в мягких тканях нижних конечностей у лиц с нейропатической и нейроишемической формами синдрома диабетической стопы / Сахарный диабет.-18(4).- 2015.- с. 66-71.

12. Егоров Е.А., Астахов Ю.С., Ставицкая Т.В. Офтальмофармакология 2-е изд. испр. / М.: ГЭОТАР-Медиа.- 2005.- с. 161, 269.

13. Калашников Р.Н., Мартынова Н.А. Особенности регенерации кожной раны в зависимости от способа ее нанесения / Тезисы VII зональной научно-практической конференции травматологов-ортопедов «Травматизм, ортопедические заболевания и их лечение в условиях Крайнего Севера».-1988.- с. 39-41.

14. Коржевский Д.Е., Кирик О.В., Карпенко М.Н. Теоритические основы и практическое применение методов иммуногистохимии: руководство/ под ред. Коржевского Д.Е. - СПб:СпецЛит.- 2012.- 110 с.

15. Королев Д.В. Комбинированное применение комплексной озонотерапии и магнито-инфракрасно-лазерного излучения в лечении больных с синдромом диабетической стопы / Международный эндокринологический журнал.- 1(13).- 2008.

16. Кузин М.Н. Раны и раневая инфекция / М.Н. Кузин, Б.Н. Костюченок. - М., 1990. - 592 с.

17. Лебедев А.А., Симерзина Л.В., Лебедев П.А. Средство, обладающее разнозаживляющим и гепатопротекторным действием. - Пат. РФ 2014840. - A 61 K 35/78. - 1994.

18. Лебединская E.A., Макаренкова И.Д., Лебединская О.В. и др., Влияние сульфатированного полисахарида из бурой водоросли Laminaria japónica на морфологию лимфоидных органов и функциональную характеристику иммунокомпетентных клеток/ Биомед. химия. -60 (5).-2014.- 581-590.

19. Мартынова Н.А. Особенности заживления кожных ран в условиях острой и хронической алкогольно-суррогатной интоксикации в сочетании с холодовым воздействием/ Автореферат.- СПб.- 1992.

20. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп.- М.: ООО "Издательство Новая Волна", 2014. - 1200с.

21. О состоянии и об охране окружающей среды Российской Федерации в 2007: государственный доклад Минприроды Российской Федерации / М., Министерство природных ресурсов и экологии Российской Федерации.-2008.

22. О состоянии и об охране окружающей среды Российской Федерации в 2010: государственный доклад Минприроды Российской Федерации / М., Министерство природных ресурсов и экологии Российской Федерации, 2011.

23. Патент 2152929 RU. Белова В. М. и др. Способ очистки технического Р-каротина.- 2000.

24. Попова, Л.Н. Как измениться границы вновь образующегося эпидермиса при заживлении ран: [дис. ...: док.мед. наук] / Л.Н. Попова. -Воронеж.мед. акад. - Воронеж.- 1942.

25. Петров С.В. Общая хирургия / СПб.- 1999. - 672 с.

26. Раневой процесс: нанобиотехнологии оптимизации/ под ред. В.А. Попова - СПб: СпецЛит..- 2013.- 199 с.

27. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/ Под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: ОАО Издательство «Медицина».- 2012 - 832 с.: ил.

28. Сааков В. С. Альтернативные пути биосинтеза каротиноидов у Procaryota и Eucaryota / Докл. АН России. - 2003. - Том 392. - № 6. - с. 825831.

29. Седларик К.М. Альгинаты для лечения ран: обзор / Хирургия. -№1.- 1993.- с. 62-65.

30. Совместный выпуск новостей Всемирной организации здравоохранения и Международной федерации диабета от 11 ноября 2005 г., Женева.

31. Сулейманов С.М., Гребенщиков А.В., Михайлов Е.В. и др., Методы морфологических исследований/ Воронежский ЦНТИ.- 2007.

32. Усов А.И. Альгиновые кислоты и альгинаты: методы анализа, определения состава и установления строения / Успехи химии.- №68. -1999.- с. 1051-1058.

33. Федеральная служба государственной статистики (Росстат) сборник «Здравоохранение в России», 2017.

34. Ямскова В.П., Резникова М.М. / Ж. общей биологии.- т. 52.- № 2.1991.- с. 181-191.

35. Ямскова В.П., Туманова Н.Б. / Успехи современной биологии.- т. 116.- вып. 2.- 1996.- с. 194-205.

36. Abdelhamid A.O., El Sayed I.E., Hussein M.Z., Mangoud M.M. Synthesis and Antimicrobial Activity of Some New Thiadiazoles, Thioamides, 5-Arylazothiazoles and Pyrimido[4,5-d] [1,2,4]triazolo [4,3-a]pyrimidines/ Molecules.- 21(8).-2016.

37. Adamson R. Role of macrophages in normal wound healing: an overview/ J Wound Care. - 2009. - р. 349-351.

38. Adini I., Ghosh K., Adini A., Chi Z.L., Yoshimura T., Benny O., Connor K.M., Rogers M.S., Bazinet L., Birsner A.E., Bielenberg D.R., D'Amato R.J. Melanocyte-secreted fibromodulin promotes an angiogenic microenvironment/ J Clin Invest.- 124(1).- 2014. - р. 425-436.

39. Ahmad I., Mirza T., Qadeer K., Nazim U., Vaid F.H. Vitamin B6: deficiency diseases and methods of analysis/ Pak J Pharm Sci. - 26(5). - 2013.-р.1057-1069.

40. Alavi A., Sibbald R.G., Mayer D., at all Diabetic foot ulcers: Part II. Management/ J Am Acad Dermatol. - 70(1).- 2014.- р.21.

41. Almeida I.V., Dusman E., Heck M.C., Pamphile J.A., Lopes N.B., Tonin L.T., Vicentini V.E. Cytotoxic and mutagenic effects of iodine-131 and radioprotection of acerola (Malpighia glabra L.) and beta-carotene in vitro/ Genet Mol Res.- 12(4).- 2013.- p.6402-6413.

42. Attwood A. / Brit. J. Plast. Surg. - 1989. - Vol. 42. - p.373.

43. Banka K., Teresinski G., Buszewicz G. Free fatty acids as markers of death from hypothermia/ Forensic Sci Int.- 234.- 2014.- p.79-85.

44. Baum C.L., Arpey C.J. Normal cutaneous wound healing: clinical correlation with cellular and molecular events/ Dermatol Surg.- 2005.- 31(6).-p.674-686

45. Beckert S., Coerper S. The physiology of wound healing/ Ther Umsch. -64(9).- 2007.- p.467-472.

46. Biro K., Tha?i D., Ochsendorf F.R., Kaufmann R., Boehncke W.H. Efficacy of dexpanthenol in skin protection against irritation: a double-blind, placebo-controlled study. / Contact Dermatitis.-49(2).- 2003.- p.80-84.

47. Blaine G. / Ann. Surg. - 1947. - Vol. 125 - p.102.

48. Boiarinov G.A., Mukhina I.V., Penknovich A.A., Snopova L.B., Zimin I.V., Balandina M.V., Radaev A.M., Mechanisms of actovegin effect on the central nervous system during postischemic period/ Biull Eksp Biol Med.- 126(10).-

1998.- p.395-398.

49. Boiarinov G.A., Penkovich A.A., Mukhina I.V. The metabolic effects of the neurotropic action of actovegin during hypoxia/ Eksp Klin Farmakol.- 62(2).-

1999.- p.61-63.

50. Broughton G., Janis J.E., Attinger C.E. The basic science of wound healing/ Plast Reconstr Surg. - 117(7). - 2006. - p. 12-34.

51. Bulletin of the World Health Organization Past issues.- Vol. 88.- 2010.-p.401-480.

52. Cavanagh P.R., Lipsky B.A., Bradbury A.W., Botek G. Treatment for diabetic foot ulcers/ Lancet.- 366(9498). - 2005. - p.1725-1735.

53. Celebi S., Tepe C., Yelken K., Celik O. Efficacy of dexpanthenol for pediatric post-tonsillectomy pain and wound healing /Ann Otol Rhinol Laryngol.-2013.

54. Chandrakanthan V., Yeola A., Kwan J.C., Oliver R.A., Qiao Q., Kang Y.C., Zarzour P., Beck D., at all PDGF-AB and 5-Azacytidine induce conversion of somatic cells into tissue-regenerative multipotent stem cells/ Proc Natl Acad Sci U S A. - 113(16).- 2016.

55. Chougala B.M., Samundeeswari S., Holiyachi M., Shastri L.A., Dodamani S., Jalalpure S., Dixit S.R., Joshi S.D., Sunagar V.A. Synthesis, characterization and molecular docking studies of substituted 4-coumarinylpyrano[2,3-c]pyrazole derivatives as potent antibacterial and antiinflammatory agents / Eur J Med Chem.- 125.- 2016.- p.101-116.

56. Connective Tissue Desease, Molecular Pathology of the Extracellular Matrix/ Ed. J.Uitto A. Perejda. Basel.- v. 12.- 1987.- p. 473.

57. Danaei G., Finucane M.M., Lu Y., Singh G.M., Cowan M.J., Paciorek C.J. et al. National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2.7 million participants/ Lancet.- 378(9785).- 2011.- p.31-40.

58. Darby I.A., Hewitson T.D. Fibroblast differentiation in wound healing and fibrosis/ Int Rev Cytol.- 257.- 2007.- p. 143-179.

59. Diegelmann R.F., Evans M.C. Wound healing: an overview of acute, fibrotic and delayed healing/ Front Biosci.- 9.-2004.- p.283-289.

60. DiPietro L.A. Wound healing: the role of the macrophage and other immune cells/ Shock. - 4.- 1995.- p.233-240.

61. Dorr W., Schlichting S., Bray M.A., Flockhart I.R., Hopewell J.W. Effects of dexpanthenol with or without Aloe vera extract on radiation-induced oral mucositis: preclinical studies / Int J Radiat Biol. - 81(3). - 2005. - p.243-250.

62. Egger S.F., Huber-Spitzy V., Alzner E., Scholda C., Vecsei V.P. Corneal wound healing after superficial foreign body injury: vitamin A and dexpanthenol versus a calf blood extract. A randomized double-blind study/ Ophthalmologica.-213(4).- 1999.- p.246-249.

63. El-Kady M.M., Girgis Z.I., Abd El-Rasheed E.A., Shaker O., Attallah M.I., Soliman A.A. Role of selective blocking of bradykinin receptor subtypes in attenuating allergic airway inflammation in guinea pigs/ Eur J Pharmacol.- 788.2016.- p. 152-159.

64. Elmlinger M.W., Kriebel M., Ziegler D. Neuroprotective and anti-oxidative effects of the hemodialysate actovegin on primary rat neurons in vitro./ Neuromolecular Med.- 13(4).- 2011.- p.266-274.

65. Ermis H., Parlakpinar H., Gulbas G., Vardi N., Polat A., Cetin A., Kilic T., Aytemur Z.A. Protective effect of dexpanthenol on bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats / Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol.- 386(12).-2013.- p.1103-1110.

66. Falanga V. Wound healing and its impairment in the diabetic foot./ Lancet.- 366(9498).- 2005.- p.1736-1743.

67. Fernandes S., Macias V., Cravo M., Amaro C., Santos R., Cardoso J. Allergic contact dermatitis caused by dexpanthenol: report of two cases./ Contact Dermatitis.- 66(3).- 2012.- p.160-161

68. Fischer J.P., Wink J.D., Nelson J.A., Kovach S.J. Among 1,706 cases of abdominal wall reconstruction, what factors influence the occurrence of major operative complications?/ Surgery.- 155(2).- 2014.- p.311-319.

69. Fomicheva E.E., Filatenkova T.A., Shanin S.N., Rybakina E.G. Stress-induced changes in the functional activity of the neuroendocrine system: the modulatory activity of derinat/ Neurosci Behav Physiol.- 40(4).-2010.- p.397-401.

70. Franchini S., Battisti U.M., Sorbi C., Tait A., Cornia A., Jeong L.S., Lee S.K., Song J., Loddo R., Madeddu S., Sanna G., Brasili L. Synthesis, structural

characterization and biological evaluation of 4'-C-methyl- and phenyl-dioxolane pyrimidine and purine nucleosides./ Arch Pharm Res.- 2016.

71. Frank S., Madlener M., Werner S. Transforming Growth Factors ßl, ß2 and ß3 and their Receptors are differentially regulated during normal and impaired wound healing/ J Biological Chemistry.- 271(17).- 1996.- p.10188-10193.

72. Frantz V.K. / Ann. Surg. - 1948. - Vol. 127. - p. 1165.

73. Fraser R., Gilchrist T. / Biomaterials. - 1983. - Vol. 4. - p. 222.

74. Garber J.R., Cobin R.H., Gharib H., Hennessey J.V., Klein I., Mechanick J.I., Pessah-Pollack R., Singer P.A., Woeber K.A.; American Association of Clinical Endocrinologists; American Thyroid Association Taskforce on Hypothyroidism in Adults./Endocr Pract.- 2013.

75. Garg S., Shakya N., Srivastav N.C., Agrawal B., Kunimoto D.Y., Kumar R. Investigation of C-5 alkynyl (alkynyloxy or hydroxymethyl) and/or N-3 propynyl substituted pyrimidine nucleoside analogs as a new class of antimicrobial agents / Bioorg Med Chem. -2016.

76. Gazim Z.C., Rodrigues F., Amorin A.C., Rezende C.M., Cortez L.E., Colauto N.B., Linde G.A., Cortez D.A. New Natural Diterpene-Type Abietane from Tetradenia riparia Essential Oil with Cytotoxic and Antioxidant Activities./Molecules.- 19(1).- 2014.- p.514-524.

77. Gethin G. Understanding the inflammatory process in wound healing / Br J Community Nurs.- 2012.- p. 20-22.

78. Ghosh P.K., Gaba A. Phyto-extracts in wound healing/J Pharm Pharm Sci. 16(5).- 2013.- p.760-820.

79. Gilbert S., Gary E., Mark D. Thornquist, John Balmes, Mark R. Cullen, Andrew Glass, James P. Keogh, Frank L. Meyskens Jr., Barbara Valanis, James H. Williams Jr., Scott Barnhart, Martin G. Cherniack, Carl Andrew Brodkin and Samuel Hammar /Oxford Journals Medicine JNCI J Natl Cancer Inst.- Volume 88, Issue 21.- 2013.- p. 1550-1559.

80. Gilchrist B., Martin A.M. / Biomaterials. - 1983. - Vol. 4. - p. 317.

81. Goralczyk R. / Nutr Cancer.- 61(6).- 2009.- p.767-774.

82. Grace V.M., Rimashree B. Liposome encapsulated all trans retinoic acid (ATRA) has enhanced immunomodulatory and inflammation reducing activities in mice model / Anticancer Agents Med Chem. - 15(2).- 2015.- p.196-205.

83. Gromov M.I., Pivovarova L.P. Use of immunomodulator derinat in the treatment of patients with surgical sepsis in traumatic shock/ Vestn Khir Im I I Grek.- 161(6).- 2002.- p.45-48.

84. de Groot A.C. Propolis: a review of properties, applications, chemical composition, contact allergy, and other adverse effects./Dermatitis. - 24(6).-2013.- p.263-282.

85. Gosset M., Martin J. / Communication pour Academie de chirurgie (Paris). - 1949.

86. Guo S., Pietro L.A. Factors Affecting Wound Healing/ J Dent Res.-89(3).- 2010.- p.219-229.

87. Gurtner G.C., Werner S., Barrandon Y., Longaker M.T. Wound repair and regeneration/ Nature.- Vol. 453.- 2008.- p.314-321.

88. Halevy O., Sklan D. Inhibition of arachidonic acid oxidation by beta-carotene, retinol and alpha-tocopherol/ Biochim Biophys Acta.- 918(3).- 1987.-p.304-307.

89. Hart J. Inflammation. 1: Its role in the healing of acute wounds/ J Wound Care.- 6.- 2002.- p.205-209.

90. Hashizume K. Endocrinological aspects of diabetes mellitus in the elderly / Nihon Rinsho.- 71(11).- 2013.- p. 1941-1947.

91. Heise R., Skazik C., Marquardt Y., Czaja K., Sebastian K., Kurschat P., Gan L., Denecke B., Ekanayake-Bohlig S., Wilhelm K.P., Merk H.F., Baron J.M.. Dexpanthenol modulates gene expression in skin wound healing in vivo/ Skin Pharmacol Physiol.- 25(5).- 2012.- p.241-248.

92. Islam S.N., Nusrat T., Begum P., Ahsan M. Carotenoids and ß-carotene in orange fleshed sweet potato: A possible solution to vitamin A deficiency / Food Chem. - 199.- 2016.- p.628-631.

93. Jagadish M., McNally M.M., Heidel R.E., Teffeteller S., Arnold J.D., Freeman M., Stevens S.L., Grandas O.H., Goldman M.H. Diabetic Foot Ulcers: The Importance of Patient Comorbidity Recognition and Total Contact Casting in Successful Wound Care / Am Surg.- 82(8).- 2016.- p.733-736.

94. Kehrl W., Sonnemann U. Improving wound healing after nose surgery by combined administration of xylometazoline and dexpanthenol/ Laryngorhinootologie.- 79(3).- 2000.- p.151-154.

95. Khardori R. Changing paradigms in type 2 diabetes mellitus/ Indian J Endocrinol Metab.- 2013.- p. 68-71

96. Khomutov V.A., Panteleev A.V., Shchegolev A.V., Kotov V.I. Prolonged regional intra-arterial therapy in multimodal treatment of patients with severe skeletal trauma. / Anesteziol Reanimatol.- 2.- 1999.- p. 19-22.

97. Kim P.J., Steinberg J.S. Complications of the diabetic foot. / Endocrinol Metab Clin North Am.- 42(4).- 2013.- p.833-847.

98. Kinbara M., Bando K., Shiraishi D., Kuroishi T., Nagai Y., Ohtsu H., Takano-Yamamoto T., Sugawara S., Endo Y. Mast cell histamine-mediated transient inflammation following exposure to nickel promotes nickel allergy in mice/ Exp. Dermatol.- 25(6).- 2016.- p. 466-471.

99. Kiokias S., Varzakas T. Activity of flavonoids and ß-carotene during the auto-oxidative deterioration of model food oil-in water emulsions/ Food Chem.-150.- 2014.- p.280-286.

100. Kleine-Tebbe J., Wabmann-Otto A., Monnikes H.. Food Allergy and Intolerance : Distinction, Definitions and Delimitation / Bundesgesundheitsblatt Gesundheitsforschung Gesundheitsschutz. -59(6).- 2016.- p.705-722.

101. Kreydin E.I., Eisner B.H. Risk factors for sepsis after percutaneous renal stone surgery/ Nat Rev Urol. - 10(10).- 2013.- p. 598-605.

102. Ku S.K., Yang E.J., Song K.S., Bae J.S. Rosmarinic acid down-regulates endothelial protein C receptor shedding in vitro and in vivo/ Food Chem Toxicol.- 59.- 2013.- p.311-315.

103. Lazaro-Martínez J.L., Cecilia-Matilla A., Aragón-Sánchez J., García-Morales E., Garcia-Alvarez Y., Alvaro-Afonso F. Treatment of infected diabetic foot ulcers clinical effectiveness of a dressing of alginate and hydrocolloid, with silver fiber. Analysis of results of a series of cases/ Rev Enferm.- 2013.

104. Lee P., Rattenberry A., Connelly S., Nokes L. Our experience on Actovegin, is it cutting edge?/ Int J Sports Med.-32(4).- 2011.- p.237-241.

105. Li J., Chen J., Kirsner R. Pathophysiology of acute wound healing/ Clin Dermatol. - 25(1).-2007.- p.9-18.

106. von Lintig J., Sies H. Carotenoids/ Arch Biochem Biophys.- 539(2).-2013.- p.99-101.

107. Lo H.M., Wang S.W., Chen C.L., Wu P.H., Wu W.B. Effects of alltrans retinoic acid, retinol, and ß-carotene on murine macrophage activity/ Food Funct.- 5(1).- 2013.- p. 140-148.

108. Lominadze A.A., Sharvashidze N.K. Assessment of fetus' hypoxia treatment with actovegin/ Georgian Med News.- Vol. 138.-2006.- p.65-68.

109. Lorenz H.P., Longaker M.T. Wounds: Biology, Pathology and Management/ Stanford UniveristyMedical Centre.- 2003.- p. 77-88.

110. Machicao F., Muresanu D.F., Hundsberger H., Pflüger M., Guekht A. Pleiotropic neuroprotective and metabolic effects of Actovegin's mode of action./ J Neurol Sci.- 322(1-2).-2012.- p.222-227.

111. Mahdavian Delavary B., van der Veer W.M., van Egmond M., Niessen F.B., Beelen R.H. Macrophages in skin injury and repair/ Immunobiology.-216(7).- 2011.- p.753-762.

112. Maillo L. Anaphylactic shock with multiorgan failure in a cyclist after intravenous administration of Actovegin./ Ann Intern Med.-148(5).-2008.- p. 407.

113. Mangushev A.R., Rafailov V.V., Svatko L.G.. Clinical efficiency of derinat used to treat chronic adenoiditis in children/ Vestn Otorinolaringol.-6.-2008.- p.33-40.

114. Mathers C.D., Loncar D. Projections of global mortality and burden of disease from 2002 to 2030/ PLoS Med.- 3(11).- 2006.

115. McCartney K.L., Ligon R.A., Butler M.W., Denardo D.F., McGraw K.J. The effect of carotenoid supplementation on immune system development in juvenile male veiled chameleons (Chamaeleo calyptratus) / Front Zool. -11(1): 2014.- p. 26.

116. Metelko Z., Brkljacic Crkvencic N. Prevention of diabetic foot/ Acta Med Croatica.-67.- 2013.- p.35-44.

117. Michelazzo F.B., Oliveira J.M., Stefanello J., Luzia L.A., Rondó P.H. The influence of vitamin A supplementation on iron status./ Nutrients.- 5(11).-2013.- p. 4399-4413.

118. Moor A.N., Tummel E., Prather J.L., Jung M., Lopez J.J., Connors S., Gould L.J. Consequences of age on ischemic wound healing in rats: altered antioxidant activity and delayed wound closure./ Age (Dordr).- 2014.

119. Noli C., Miolo A. The mast cell in wound healing/ Vet Dermatol.- 12.2001.- p. 303-313.

120. Nowak D., Gomulka K., Dziemieszonek P., Panaszek B. Systemic contact dermatitis / Postepy Hig Med Dosw.- Vol. 70.- 2016.- p. 124-134.

121. Nykula T.D., Shevchuk S.H., Moíseienko V.O., Kazimka L.O. The use of actovegin in peptic ulcer / Lik Sprava.- Vol. 9.- 1993.-p. 94-96.

122. Oliver I. C., Blaine G. / Brit. J. Surg. - 1950. - Vol. 37. - p. 307.

123. Pavlov O.O. Effect of aktovegin on dynamics of the oxygen methabolism in tissues / Klin Khir.- Vol. 1.- 2009.- p.32-34.

124. Pavlov O.O. Effect of antihypoxant actovegin on dynamics of markers of the oxygen cascade / Klin Khir.- Vol. 9.- 2008.- p.57-59.

125. Petrov V.I., Ponomarev É.A., Maskin S.S., Strepetov N.N. Pharmacological neuroprotection against brain damage in ischemiai/reperfusion experiment./ Eksp Klin Farmakol.-74(8).-2011.- p. 13-16.

126. Prasanta K. Ghosh L., Anjali Gaba Phyto-Extracts in Wound Healing/ J Pharm Pharm Sci.- 16(5).-2013.- p. 760 - 820.

127. Ramasastry S.S. Acute wounds/ Clin Plast Surg.- 32(2).- 2005.- p.195-

208.

128. Rangaraj A., Harding R., Leaper D. Role ofcollagen in wound management/ Wounds UK.- 7(2).- 2011.- p. 54-63.

129. Reinke J.M., Sorg H. Wound repair and regeneration/ Eur Surg Res.-49(1).- 2012.- p.35-43.

130. Rockmann H., Goerdt S., Bayerl C. Anaphylaxis after dexpanthenol exposure by multivitamin tablets./ Clin Exp Dermatol.- 30(6).- 2005.- p.714-716.

131. Romantsov M.G., Sologub T.V., Goriacheva L.G., Kovalenko S.N., Sukhanov D.S., Shul'diakov A.A., Bondarenko A.N., Kovalenko A.L., Petrov A.I. Pathogenetically substantiated therapy of patients with virus hepatitis C, quality of life, and the disease outcome risk (clinical survey)/ Antibiot Khimioter. - 55(3-4).-2010.- p. 45-55.

132. Sackstein R. The biology of CD44 and HCELL in hematopoiesis: the 'step 2-bypass pathway' and other emerging perspectives / Curr Opin Hematol. - 4 (18).- 2011. - p. 239-248.

133. Sarkar I., Garg R., van Drunen Littel-van den Hurk S. Formulation of the respiratory syncytial virus fusion protein with a polymer-based combination adjuvant promotes transient and local innate immune responses and leads to improved adaptive immunity / Vaccine.- 34(42).- 2016.- p. 5114-5124.

134. Scott Maxson, Erasmo A. Lopez, Dana Yoo, Alla Danilkovitch-Miagkova, LeRoux Concise Review: Role of Mesenchymal Stem Cells in Wound Repair / Stem Cells Transl Med.- 1(2).- 2012.- p. 142-149.

135. Shete V., Quadro L. Mammalian metabolism of P-carotene: gaps in knowledge/ Nutrients.- 5(12).- 2013.- p.4849-4868.

136. Skoog I., Korczyn A.D., Guekht A. Neuroprotection in vascular dementia: a future path./ J Neurol Sci.- 322(1-2).- 2012.- p. 232-236.

137. Sonal Sekhar M., Unnikrishnan M.K., Vijayanarayana K., Rodrigues G..S., Mukhopadhyay C. Topical application/formulation of probiotics: Will it be a novel treatment approach for diabetic foot ulcer?/ Med Hypotheses.- 82(1).-

2014.- p. 86-88.

138. Shajib M.S., Khan W.I. The role of serotonin and its receptors in activation of immune responses and inflammation/Acta Physiol (Oxf).-213(3).-

2015.- p. 561-574

139. Stahl W., Sies H. Review Bioactivity and protective effects of natural carotenoids/ Biochim Biophys Acta.- 1740(2.- 2005.- p. 101-107.

140. Steven B.L., DeGuzman L,. Lee W.P., Xu Y., Siegel M.W., Amento E.P./ J Clinical Invest.- Vol. 92.- 1993.- p. 2841- 2849.

141. Stozkowska W., Piekos R. Investigation of some topical formulations containing dexpanthenol/ Acta Pol Pharm.-61(6).-2004.- p.433-437.

142. Suarez E.C., Schramm-Sapyta N.L. Race differences in the relation of vitamins A, C, E, and P-carotene to metabolic and inflammatory biomarkers/ Nutr Res.- 34(1).- 2014.- p. 1-10.

143. Sviatkina O.I., Balashov V.P., Balykova L.A., Shchukin S.A. Anti-arrhythmia activity of derinat in an experiment/ Eksp Klin Farmakol.- 2004.-67(1).- p.22-24.

144. Tauschel H.D., Bonacina F., Galetti F. The percutaneous action of a heparin-allantoin-dexpanthenol combination in a specific ointment base. Thrombolytic action on the rabbit ear / Arzneimittelforschung.- 34(12).- 1984.-p.1768-1772.

145. The Effect of Vitamin E and Beta Carotene on the Incidence of Lung Cancer and Other Cancers in Male Smokers The Alpha-Tocopherol Beta Carotene Cancer Prevention Study Group/ N. Engl. J. Med.- Vol. 330.-1994.-p.1029-1035.

146. Tsang M.W., Wong W.K., Hung C.S., Lai K.M., Tang W., Cheung E.Y., Kam G., Leung L., Chan C.W., Chu C.M., Lam E.K. Human epidermal growth factor enhances healing of diabetic foot ulcers / Diabetes Care.- 26(6).-2003.-p.1856-1861.

147. Uppal S., Al-Niaimi A., Rice L.W., Rose S.L., Kushner D.M., Spencer R.J., Hartenbach E. Preoperative hypoalbuminemia is an independent predictor of poor perioperative outcomes in women undergoing open surgery for gynecologic malignancies/ Gynecol Oncol.- 2013.

148. Urano H., Karasaki Y., Shirahata A. Progress in research of the blood coagulation system/ J UOEH.- 21(3).- 1999.- p.241-251.

149. Valeeva I.K., Titarenko A.F., Khaziakhmetova V.N., Ziganshina L.E., Antioxidant activity of xymedone in rats with chronic autoimmune inflammation / Eksp Klin Farmakol.- 79(1).- 2016.- p. 33-37.

150. Vasile C., Pieptu D., Dumitriu R.P., Panzariu A., Profire L. Chitosan/hyaluronic acid polyelectrolyte complex hydrogels in the management of burn wounds/ Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi.- 117(2).- 2013.- p.565-571.

151. Vaskova M., Fronkova E., Starkova J., Kalina T., Mejstrikova E., Hrusak O. CD44 and CD27 delineate B-precursor stages with different recombination status and with an uneven distribution in nonmalignant and malignant hematopoiesis / Tissue Antigens.- 1(71).- 2008.- p. 57-66.

152. Velnar T., Bailey T., Smrkolj V. The wound healing process: an overview of the cellular and molecular mechanisms/ J Int Med Res.- 37(5).-2009.- p. 1528-1542.

153. Wang D., Hu K., Gao N., Zhang H., Jiang Y., Liu C., Wang S., Zhao Z. High throughput screening of cytokines, chemokines and matrix

metalloproteinases in wound fluid induced by mammary surgery/ Oncotarget.-6(30).- 2015.- p.29296-29310.

154. World Health Organization Fact sheet N° 312, Oct. 2013.

155. World Health Organization Fact sheet N°345, Aug. 2011.

156. World Health Organization Fact sheet N°358, Mar. 2013

157. World Health Organization Fact sheet N°365, May 2012

158. World Health Organization Fact sheet N°373, Feb. 2013

159. Willenborg S., Eckes B., Brinckmann J., Krieg T., Waisman A., Hartmann K., Roers A., Eming S.A., Genetic ablation of mast cells redefines the role of mast cells in skin wound healing and bleomycin-induced fibrosis/ J Invest Dermatol.- 134(7).- 2014.- p. 2005-2015.

160. Williams K., Motiani K., Giridhar P. V., Kasper S. CD44 integrates signaling in normal stem cell, cancer stem cell and (pre)metastatic niches / Exp Biol Med (Maywood). 3(238).- 2013.- p. 324-338.

161. Yokono K. Concept and clinical characteristics of diabetes mellitus in the elderly. / Nihon Rinsho.-71(11).- 2013.- p.1893-1898.

162. Zhang Z., Wu Y,. Wang Z., Zou X., Zhao Y., Sun L. Fabrication of silver nanoparticles embedded into polyvinyl alcohol (Ag/PVA) composite nanofibrous films through electrospinning for antibacterial and surface-enhanced Raman scattering (SERS) activities/ Mater Sci Eng C Mater Biol.- Vol. 69.-2016.-p. 462-469.

163. Zubeev P.S., Strakhov A.V., Maksimychev V.N., Motylev I.M. // Khirurgiia.- Vol. 5.- 2007.- p. 56-59.

Приложение 1

! PL Северный (Арктический) федеральный

Qfl^Kf университет имени М.В. Ломоносова

ИМвЩ ЦЕНТР КОЛЛЕКТИВНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ НАУЧНЫМ

ОБОРУДОВАНИЕМ «Арктика»

163002, Архангельск, ул. Северодвинская, 14, тел : [phone] доб.1721

ПРОТОКОЛ №123-13 аналитических работ

Заказчик: ООО «Фармтехкомппекс» Наименование объекта: альгинат

Обозначение анализируемой пробы: 1566-Р-разрушенный образец

Дата поступления: 02.12.2013

Дата выполнения анализа: 09,12-20,12.2013

Дата оформления протокола: 23,12.2013

Результаты исследовании методом ЯМР-спектроскопии:

Анализ образца 1966-Р проведен с использованием спектрометра ЯМР Вгакег Avance III с рабочей частотой дня протонов 600 МГц.

Для этого проба растворялась в IhO. раствор объемом 0.6 мл помешался в ампулу диаметром 5 мм. Тяжелая вода применялась для регистрации опорного сигнала ядер дейтерия с целью настройки однородности магнитного поля спектрометра. Спектры ЯМР регистрировались на ядрах 13С.

Образец 1966-Р представляет собой натриевую соль альгиновой кислоты (рис, 1):

H H

Рис. 1. Структура альгиновой кислоты.

13

Спектр С-ЯМР (рис. 2) регистрировали с развязкой от протонов для подавления нежелательных спин-спиновых взаимодействий С-Н и улучшения отношения «сигнал/шум». Длительность импульса составляла 12 мкс, время задержки между импульсами - 16 с. Число накоплений -4096.

Сигналы с химическими сдвигами 175 м.д. в обоих спектрах отвечают атомам углерода, входящим в состав групп СООН (положение I на рис. 1). Для более точного отнесения остальных сигналов был дополнительно зарегистрирован спектр 13С-ЯМР раствора глюкозы в В->0 (рис. 3).

Сопоставление спектров пробы 1966-Р со спектром глюкозы (рис. 4) позволяет определить, что в спектре исследуемого образца в области ~100 м.д. наблюдаются сигналы, соответствующие, вероятно, атомам углерода углеводного кольца, связанным с двумя атомами кислорода (положение II на рис. 1). Группы сигналов в области 65-80 м.д, соответствуют остальным атомам углерода углеводного кольца (положения III-VI).

Стр. 1 иг 3

Приложение 1 (продолжение)

Приложение 1 (продолжение)

.............; [ЧЬо- 1 1 1 !..'.-,,,.!:: 11* с |ЖИ и 1 Ь^зц^сссьС! ТШ1Е : ч.за

......т.

Рис, 4. Сопоставление спектров С-ЯМР глюкозы (внизу) и 1966-Р (вверху)

Таким образом, можно сделать вывод о том. что в пробе 1966-Р отсутствуют боковые ответвления в цепи, присоединенные к атомам углерода в положениях V и VI [рис, 1).

Результаты исследований методом эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии:

Анализ проведен с использованием В'ЗЖХ системы ГС-20 Рготтепсе (ЗЫшабгп. Япония), состоящей из автосамплера 51Ь-20А. лвухплунжсрного насоса11С-20АГ). вакуумного дегазатора ВСШ-АЗ, термостата колонок ЬЮ-20А н рефрактометрического детектора РГО-ЮА. Разделение проводилось при температуре 50°С на колонках д.ля анализа водорастворимых полимеров МСХ 300x8 мм с размером пор 1000-1ООООООА (РЯЬ. Германия). В качестве элюента использовался водный раствор нитрата калия (0.2 моль/л) н дигидрофосфага натрия (0,01 моль/л) с рН8. Градуировка системы проводилась по моно дисперсным стандартным образцам полистиролсуль ф он а тов натрия (РЭЪ, Германия) с известной молекулярной массой в диапазоне от 891 до 976000 Да. Сбор и обработка данных осуществлялись с помошью ПО \VinGPC (РЯЙ. Германия).

Полученные результаты расчетп среднечисловой (Ми), среднемассовой (М») н г-средней (Мг) масс, а также полидисперсностп исследованных образцов (Мц,'М0) приведены в таблице.

Таблица - Результаты анализа исследуемых образцов

Шифр образца Мо м* Мх МР

1966-Р 3134 7581 1607 4288 2.42

Директор

Управляющий по качеству, с.н.с.

^Д.С. Косяков Д.Е. Кошелева

Стр 3 из 3