Эколого-биологическая характеристика рудеральных видов агарикоидных грибов лесостепи правобережного Поволжья (Пензенская область) и перспективы их использования тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.24, кандидат биологических наук Иванова, Вера Анатольевна

• Иванова, Вера Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Иванова, Вера Анатольевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

I. ПРИРОДНЫЕ УСЛОВИЯ РАЙОНА ИССЛЕДОВАНИЙ

II ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Состояние изученности видового состава агарикоидных 8 грибов рудеральных местообитаний на территории России и сопредельных стран

2.2 Экология рудеральных видов агарикоидных грибов в 9 природных условиях

2.3 Культурально-морфологические особенности агарико- 10 идных грибов

2.4 Воздействие агарикоидных грибов на лигноцеллюлоз- 13 ные субстраты и перспективы их использования для биоконверсии

2.5 Использование грибов для биоконверсии

2.6 Виды субстратов, используемые для культивирования 20 перспективных съедобных грибов

2.7 Расширение спектра видов культивируемых грибов за 21 счет доместикации новых видов

П1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

IV. ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

РУДЕРАЛЬНЫХ ВИДОВ АГАРИКОИДНЫХ ГРИБОВ В

ПРИРОДНЫХ УСЛОВИЯХ

4.1 Особенности видового состава макромицетов руде- 34 ральных местообитаний

4.2 Группировки агарикоидных грибов, свойственные от- 36 валам различных органических отходов

V. ВИДЫ И ШТАММЫ РУДЕРАЛЬНЫХ ВИДОВ

АГАРИКОИДНЫХ ГРИБОВ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ

VI. КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА 59 МИЦЕЛИАЛЬНЫХ КУЛЬТУР

6.1 Особенности морфологии мицелиальных культур изу- 59 чаемых видов

6.2 Скорость роста на агаризованных питательных средах

6.3 Скорость роста мицелиальных культур и ее зависимость 67 от температуры

6.4 Влияние рН - среды на рост мицелиальных культур

6.5 Влияние концентрации NaCl на скорость роста мицели- 71 альных кулыур

6.6 Рост мицелиальных культур рудеральных видов на раз- 74 личных лигно-целлюлозных отходах сельскохозяйственного производства

VII. ЦЕЛЛЮЛОЗО-ЛИГНОЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ 79 МИЦЕЛИАЛЬНЫХ КУЛЬТУР

7.1 Целлюлозолитическая активность

7.2 Лигнолитическая активность

VIII. ПРОЯВЛЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА У РУДЕРАЛЬНЫХ 86 ВИДОВ АГАРИКОИДНЫХ ГРИБОВ

IX. ПЕРСПЕКТИВЫ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ 90 РУДЕРАЛЬНЫХ ВИДОВ НАПОЧВЕННЫХ САПРОТРОФОВ

9.1 Использование для биоконверсии

9.2 Обогащение субстратов протеином

9.3 Возможности использования мицелия Agrocybe dura как 97 витаминной добавки к рациону птицы

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА Ю7

ПРИЛОЖЕНИЕ 1?1

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Эколого-биологическая характеристика рудеральных видов агарикоидных грибов лесостепи правобережного Поволжья (Пензенская область) и перспективы их использования»

ВВЕДЕНИЕ

Одной из важнейших проблем агроэкологии в настоящее время является создание безотходных технологий переработки сельскохозяйственной продукции. Рециклизация отходов переработки пищевого и технического сырья представляет собой очень серьезную задачу, так как биоконверсия лигно - целлюлозных комплексов этих материалов позволяет получать корма и пищевые продукты без расширения посевных площадей. Резервы последних на Земле почти исчерпаны, поэтому весьма актуальным становится поиск путей использования всех продуктов фотосинтеза, которые дают агроэкосистемы, а не только той их части, которая потребляется традиционно. В решении этой проблемы большую роль могут сыграть агарикоидные грибы, включение которых в производственные циклы агропромышленного комплекса могли бы поднять их на качественно новый уровень. Однако круг видов агарикоидных грибов, используемых в настоящее время для получения съедобных плодовых тел и биоконверсии, еще очень узок. Поэтому для решения указанных выше задач необходим поиск новых видов, перспективных с точки зрения доместикации.

Целью данной работы было изучение возможности расширения круга видов агарикоидных грибов, перспективных с точки зрения биоконверсии отходов сельскохозяйственного производства и лесопереработки и изучение их эколого - биологических особенностей. В ходе выполнения исследований были поставлены следующие задачи:

1) изучить видовой состав агарикоидных грибов, осуществляющих деструкцию лигно - целлюлозных отходов в отвалах в природных условиях;

2) выяснить возможность выделения их мицелиальных культур и отобрать виды с быстрорастущим мицелием;

3) изучить культурально - морфологические особенности перспективных видов, определить их отношение к температуре, рН среды, к концентрации ЫаС1, выявить целлюлозолитическую и лигнолитическую активность;

л t

4) изучить проблему обогащения лигно - целлюлозных отходов грибным протеином;

5) определить возможность использования обогащенных мицелием отходов шелушения овса как витаминной добавки к рациону птицы.

Полученные результаты содержат существенный элемент научной новизны работы:

1) впервые подробно исследуется и оценивается с позиции практического использования видовой состав агарикоидных грибов, осуществляющих разложение отходов сельскохозяйственного производства и лесопереработки в условиях свалок в природных условиях;

2) получены новые данные о культурально-морфологических, целлюло-зо- и лигнолитической активности ряда малоизученных видов макромицетов, относимых обычно к трофичекой группе гумоеовых сапротрофов, что представляет большой интерес с точки зрения экологии агарикоидных грибов;

3) установлено, что некоторые виды грибов, обитателей рудеральных местообитаний, перспективны в плане доместикации и использования для биоконверсии лигно-целлюлозных отходов;

Полученные результаты имеют практическое значение:

1) для каждого типа изученных лигно-целлюлозных отходов выявлены комплексы видов агарикоидных грибов наиболее эффективно осуществляющих их биоконверсию;

2) в ходе исследований определено перспективное направление использования мицелии агарикоидного гриба Agrocybe dura в качестве витаминной добавки к рациону птицы, позволяющей заменить дорогостоящие фармакопейные витамины;

3) установлено, что эффективным способом утилизации отходов шелушения овса для кормовых целей на птицефабриках является их биоконверсия с использованием мецелия гриба Agrocybe dura.

I, ПРИРОДНЫЕ УСЛОВИЯ РАЙОНА ИССЛЕДОВАНИЙ

Пензенская область расположена на Восточно-Европейской, или Русской, равнине и занимает среднюю или западную часть Приволжской возвышенности и восточную окраину Окско-Донской низменности. Область лежит в умеренном географическом поясе на стыке лесной, лесостепной и лесной природных зон. Поэтому природные условия ее довольно разнообразны. Область граничит с Мордовской, Саратовской, Тамбовской и Рязанской областями.

Рельеф области создан в результате тектонических движений, переноса продуктов разрушения в понижения и расчленения поверхности реками (Мар-денский, 1970г).

Крупные долины рек Суры, Узы, Мокши, Хопра отмечаются пойменной и двумя надпойменными террасами. Наиболее крупные реки Сура, Мокша, Хо~ пёр. Всего в области свыше 300 рек.

Пензенская облать в основном расположена в зоне лесостепи правобережного Поволжья. Протяжённость её с запада на восток 325 км, с севера на юг около 200 км, общая площадь - 43,3 тыс. квадратных километров.

Основными типами почв области являются чернозёмы, серые лесные и почвы речных долин. Более 200 тыс. га занято эродированными почвами. Менее других распространены болотные, засоленные почвы.

Климат Пензенской области умеренно-континентальный. Средняя температура января -12,5 °С, средняя температура июля +19,5 °С. Осадки по области распределяются неравномерно. Наименьшее количество осадков (<550 мм) выпадает в долинах рек Узы и Хопра. Наибольшее количество осадков (>650 мм) выпадает на возвышенном лесистом северо-востоке - в Засурье. Один раз в 10 лет годовые суммы осадков в Пензе могут снижаться до 500 мм и увеличиваться до 900 мм, т.е. годы относительно влажные сменяются

засушливыми. Годовая сумма осадков около 620 мм в год. Сильные засухи повторяются примерно раз в четыре года. Их развитию способствуют суховеи, связанные с вторжением континентального тропического воздуха. Вегетационный период имеет продолжительность около пяти месяцев. Безморозный период значительно короче - не более трех месяцев (ЖаковД970).

Почвенный покров Пензенской области довольно разнообразен. По занимаемой площади преобладают выщелоченные черноземы, развивающиеся обычно на легких глинах и тяжелых суглинках (рН 5,5-6,5).Серые лесные почвы распространены несколько реже. По механическому составу они супесчаные или легко суглинистые, обычно со значительным включением опоки в виде щебня (рН 5,8-6,9) .На песчаных отложениях древних надпойменных террас крупных рек Пензенской области формируются очень бедные гумусом кислые (рН 4,4-4,9) подзолистые почвы. В поймах на аллювиальных отложениях распространены темно-серые лесные, дерново-луговые и лугово-болотные почвы. В связи с подтоплением жесткими грунтовыми водами их реакция щелочная (рН 7,2 и более) (Кузнецов, 1970).

Естественная растительность в области сохранилась на третьей части ее площади. Во флоре области насчитывается 1170 видов цветковых растений и 850 видов базидиальных грибов. Основным типом растительных сообществ в области является степная растительность, состоящая преимущественно из лугового разнотравья, мезофильных корневищных злаков и дерновинных злаков. Степные участки в Пензенской области сохранились на очень ограниченной площади. Они приурочены главным образом к склонам балок и речных долин, а также к заповедным территориям (Попереченская и Кунчеровская степь). Эти участки представляют собой луговую степь, в покрове которой наряду с дер-новинными злаками большое значение имеют корневищные злаки и многочисленные виды разнотравья (Спрыгин, 1923; Уранов, 1925). Лесная растительность представлена в центральной и южной частях области кленово-

липовыми дубняками с участием ясеня и ильма, в восточной части области -сосновыми лесами. Широко распространены осиновые и березовые леса, липняки. Растительность речных пойм представлена дубравами, черноольховыми лесами на подтопляемых участках пойм, и лугами, состоящими из многолетних трав, требующих для себя средних условий увлажнения. Среди лугов следует отметить разнотравно-злаковые луга, расположенные на более приподнятых участках поймы. В притеррасной пойме, на более увлажненных дерново-луговых почвах, распространены щучковые луга. В западинах их сменяют осоковые болота. Рудеральная и сорная растительность характеризуется обилием заносных видов. Среди них: ослинник двулетний, ромашка безъязычковая, дурнишник, имеющие американское происхождение. К рудеральным местообитаниям приспосабливаются и некоторые местные виды: белена чёрная, бодяк полевой, вьюнок полевой, крапива жгучая и двудомная, лопух паутинистый, марь белая, одуванчик лекарственный, паслен черный, подорожник большой, синяк обыкновенный, трехреберник непахучий. Следует отметить, что рудеральные компоненты флоры являются наименее постоянными и более изменчивыми во времени (Спрыгин 1986; Иванов, Антонов, Власова, 1989).

II ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Состояние изученности видового состава агарикоидных грибов рудеральиых местообитаний на территории России и сопредельных стран

Формирование культурной флоры покрытосеменных растений теснейшим образом связано с рудеральными местообитаниями. Одни из них первоначально были сорняками. Другие - спутниками поселения человека. Они встречались в местах свалки мусора и навоза, откуда были перенесены в огороды, чтобы служить растительной приправой к пище. Здесь следует в первую очередь отметить такие нитрофильные виды, как свекла, шпинат, горчица и другие. (Тишлер, 1971). Если процесс доместикации покрытосеменных растений в основном завершился, то процесс доместикации агарикоидных грибов имеет место в настоящее время. Здесь можно проследить те же закономерности. Например, важнейший культивируемый вид - А§апсш Ызропш - типичный нит-рофил, тяготеющий в природных условиях к отвалам навоза. Сходную биологию имеют также кольцевик (81горЫапа г^озоапшЫа) и вольвариелла (Уо1-уапеПа уо!уасеае), связанные с соломистыми субстратами. Таким образом, ру-деральные местообитания уже дали человечеству некоторые культивируемые грибы. Однако, есть основания предполагать, что резервы видов, перспективных для выращивания, еще далеко не исчерпаны, в связи с чем видовой состав агарикоидных грибов, населяющих рудеральные местообитания, представляет собой большой научный и практический интерес.

Систематизированный материал по видовому составу агарикоидных макро-мицетов на территории России и сопредельных стран имеется лишь в работах К.А. Каламеэса (1975) и А.И. Иванова (1992). Кроме того, разрозненные сведения о рудеральных видах макромицетов имеются в работах таксономического и флористического плана. Среди таксономических групп агарикоидных грибов, виды которых легко приспосабливаются к рудеральным местообитаниям, наиболее

изучено семейство А^апсасеае и РМеасеае. Их систематике и географии посвящены работы С.П. Вассера (1980; 1985; 1990). Из отечественных работ но систематике и географии грибов семейства Во1Ьйасеае следует упомянуть работу Р. А. Зингера (1961), в которой приводятся подробные сведения о распространении, биологии и внутривидовом полиморфизме видов, относящихся к родам А^осуЬе и СопосуЬе.

Сведения о видах агаршоидных грибов, адаптирующихся к рудеральным местообитаниям имеются также в региональных флористических сводках (Васильева, 1973; Мелик - Хачатрян, 1980; Сержанина, 1984; Выщепан, 1990; Пе-реведенцева, 1977,1997 и др.). Следует подчеркнуть, что в большинстве указанных работ видовой состав рудеральных видов, относящихся к семействам ВоШШасеае и Соргшасеае, представлен с недостаточной полнотой. Причиной этого является в первую очередь отсутствие монографических работ на русском языке по данным таксонам.

2.2 Экология рудеральных видов агарикоидных грибов в природных условиях

Сведения об экологии рудеральных видов агарикоидных грибов в природных условиях в основном ограничиваются материалами о представителях рода А§апсш. Наиболее детально этот вопрос рассматривает Л.В. Гарибова (1964; 1975; 1982;), анализируя трофические особенности различных видов рода Agaricus. В работе А.И. Иванова (1989) рассматривается проблема закономерностей расселения грибов семейства А§апсасеае в рудеральных местообитаниях.

Подробные сведения о химических особенностях субстратов Agaricus Ыз-рогш? и А. Ькощ1Ш имеются в работах П. В. Москальца (Москалец, Иванов,! 995; 1996; Москалец, 1997). Установлено, что для всех местообитаний характерна хорошая обеспеченность азотом и фосфором. Реакция рН среды от слабокислой до нейтральной. Для большинства видов макромицетов, прони-

кающих в рудеральные местообитания, характерен сильный полиморфизм (Иванов, 1992). Проблемы популяционной генетики Agaricus bisporus поднимаются в работах Ю. Т. Дьякова сотрудниками (Грубе, Камзолкина, Дьяков, 1993) и М. С. Фериал (1992).

Краткие сведения об эколого-биологических особенностях Coprinus со-matus приводятся в работе А. И. Иванова (1991), Lepista saeva - К.А. Каламеэса и А.Е. Иванова (1975).

2.3 Культурально-морфорлогические особенности агарикоидных грибов

Среди агарикоидных грибов с точки зрения исследования культурально-морфологических свойств в основном изучены виды, находящиеся в промышленной культуре. Это Agaricus bisporus (Гарибова, 1964; 1975, 1982; Гарибова, Сафрай, 1974). О культурально-морфологических особенностях видов рода Pleurotos имеются сведения в работах А. И. Иванова, Т. Н. Барсуковой и др., 1987; JL В. Гарибовой и др.,1989). Краткие сведения о мицелиальных культурах видов рода Coprinus, Lepista, Lyophyllum имеются в работе А. С. Бухало (1988).

Tv Семирджиева и К. Цейп (Semerdzieva, 1965; Semerdzieva,Cejp,l966) для характеристики роста колонии на агаризованной среде предложили учитывать, помимо диаметра колонии, также ее высоту (мм) и плотность, которая оценивается по трехбальной системе (редкая, средняя, плотная).

По скорости роста высшие базидиомицеты подразделяют на три основные группы (Nobles,1965; Semerdzieva, Cejp,1966; Бухало, 19816 ; Stalpers, 1978): быстрорастущие - многие лигнотрофные виды: Pleurotos ostreatos и др., а также сапротрофные виды: Agaricus subperonatus, Coprinus comatos и др.; грибы со средней скоростью роста - многие гумусовые сапротрофы, а также некоторые лигнотрофы: Agaricus arvensis, Lepista nuda и др.; медленно растущие -большинство видов с повышенными требованиями к составу питательных сред (в основном микоризообразующие).

О специфической реакции разных видов высших базидиальных грибов на температуру и возможности использования этого критерия для таксономической оценки культур на уровне вида существуют противоречивые точки зрения, что связано, очевидно, с недостаточной изученностью данного вопроса. Так, М. Ноблз (№>Ыез,1971) считает, что отношение к температуре - существенный признак при идентификации культур, а В. Рипачек (1967) высказывает мнение, что деление базидиальных грибов на группы по температурному фактору является искусственным, так как значения температурного оптимума и максимума для культур одного и того же вида гриба, взятого из разных мест обитания, не всегда одинаковые.

Одним из важнейших факторов, регулирующих рост и метаболизм высших базидиомицетов в культуре, является рН питательной среды. Многие виды способны расти при значительных изменениях показателей кислотности, хотя оптимальные значения для большинства видов находятся в пределах рН 5-6 (Шиврина и др.,1970). Имеются литературные сведения, что микоризообразо-ватели хорошо растут при кислых значениях рН среды, хуже - при нейтральных, а при щелочных совсем не развиваются (Ме1т, 1922, 1923; Шемаханова, 1962). Базидиальные макромицеты, принадлежащие к одной и той же экологической группе могут значительно отличаться по отношению к исходному рН среды, изменяя его в благоприятную для роста сторону. Это зависит от состава питательной среды и от физиологических особенностей гриба (Шиврина, 1965).

Сведения о способности грибов регулировать рН и методике процессов регуляции подробно изложены в работах В. Рипачек (1939, 1940, 1967), который указывает на свойство видов, способных разрушать целлюлозу, регулировать кислотность среды до более низких значений рН по сравнению с лигно-разрушающими грибами. По его мнению, штаммы одного и того же вида, выделенные из разных местообитаний, различаются по отношению к рН среды.

О. П. Низковская и Н. М. Милова (1973), изучавшие влияние исходного рН питательной среды на образование мицелия культурами базидиомицетов, установили, что имеются культуры как с высокой, так и с низкой оптимальной кислотностью, у некоторых видов отмечено два оптимума кислотности.

Концентрация водородных ионов в среде оказывает существенное влияние на характер метаболических процессов. В связи с этим важно установить пределы рН, в которых происходит активный рост исследуемых штаммов. Учитывая при этом, что оптимальный рН среды будет различным на разных средах и будет зависеть от других условий культивирования, может быть точно определен лишь для конкретных условий проведения ферментационного процесса.

Среди представителей порядка Agaricales в диапазоне рН от 1-3 до 10 растут преимущественно лигнотрофные виды Pleurotus ostreatus, Panus tigrinus, a также некоторые виды сапротрофов: Lepista nada, Agaricus arvensis, Coprinus comatus.

В узких границах кислотности среды растет Coprinus ephemeras. У Agaricus bisporas, Coprinus ephemerus максимальное количество мицелия образуется при кислых исходных значениях рН среды. В процессе роста эти грибы подкисляют среду (Бухало, 1988).

В соответствии с литературными данными целлюлозоразрушающие грибы регулируют кислотность среды до более низких значений рН, чем лигнинраз-рушающие, которые лучше всего растут в среде, кислотность которой соответствует кислотности живого дерева (Rypacek, 1939; 1940).

Целлюлозоразрушающие грибы заметено и необратимо окисляют среду и лучше всего растут на более кислом субстрате, зачастую выделяют значительное количество органических кислот. Установлено, что свободная щавелевая кислота накапливается только при разложении древесины целлюлозоразрушающими грибами (Шимазоно, 1955). В случае лигнинразрушающих грибов она сразу же раз»

латается специфически энзимом - декарбоксилазой щавелевой кислоты. Поэтому лигнинразрушаюпще грибы меньше подкисляют субстрат, чем целлюлозоразру-шающие.

Имеются сведения о влиянии кислотности среды субстратов на дикорастущие шампиньоны (Москалец, 1997). Оптимальный рН среды для А£апсш Ызрогаз является нейтральная среда. Такие виды, как А.ап/еш15, А. сатре$1ег, предпочитают слабокислые субстраты.

В литературе имеются сведения о том, что гифы грибов выносят высокое осмотическое давление и засоленность, в связи с чем их симбионты могут значительно расширить свой ареал за счет тех районов, которые характеризуются недостатком почвенно-грунтовой и атмосферной влаги и физиологической сухостью почв (Бурова, 1986). Вопросы о влиянии концентрации КаС1 на рост мицелиаль-ных культур напочвенных еалротрофов в отечественных и зарубежных источниках литературы освещены недостаточно полно. Однако известно, что А§апсш Ыз-рошз является довольно солеустойчивым видом. Рост его мицелия замедляется при содержании 0,3% НаС1 в питательной среде. Отдельные штаммы проявляют повышенную устойчивость к данному фактору и не прекращают рост даже при концентрации 0,5%ЫаС1, что указывает на высокое осмотическое давление внутри гиф. Возможно, это связано с засухоустойчивостью вида (Москалец, 1993,1997).

2.4 Воздействие агарикоидных грибов на лигноцеллюлозные субстраты и перспективы их использования для биоконверсии

Проблема деструкции лигно-целлюлозных субстратов агарикоидными грибами изучена довольно слабо. Имеющиеся данные касаются, главным образом, представителей трофической группы ксилотрофов (Бадалян, Геворкян, Амбарцумян, 1997), среди которых в наибольшей степени исследованы виды рода

ИеигоШв (Бисько, Дудка, 1987; Нанагюлян, Таслахчьян, Осипян,1997; и др.). Кроме того, с этой точки зрения изучались виды рода Иатти1та (Негруцкий,

1997; Сухомлин, 1997; и др.). Сведения о воздействии грибов напочвенных са-протрофов на субстрат очень ограничены.

Современные представления о лигнолитической и целлюлозолитической активности высших базидиомицетов базируются главным образом на материалах, связанных с изучением афилофоровых грибов (Фальк, 1926; и др.).

Установлено, что лакказа и пероксидаза относятся к конституционным энзимам и активность их может уменьшаться или с помощью соответствующих воздействий извне повышаться. Так, у многих грибов, выращиваемых долгое время на искусственных субстратах, снижается активность разложения лигнина (Дэй и др., 1949).

Дигнинразрушающие грибы выделяют наряду с гидролитическими экзо-энзимами специфические оксидазы, разрушающие лигнин, т.е. они разлагают как полисахаридную часть клеточной оболочки, так и лигнин, находящийся в тесной связи с целлюлозой или с другими полисахаридами. Лигнин и фенол-лигнин некоторые лигнинразрушающие грибы могут использовать как источник углерода.

Разделение грибов на целлюлозоразрушающие или лигнинразрушающие в культуре можно произвести на основе того, выделяет ли гриб оксидазы или нет. При исследовании влияния дубильных веществ на рост грибов было установлено, что лигнинразрушающие грибы выделяют энзимы типа фенолокси-даз. На агар-солодовой среде при добавлении к ней танина и галловой кислоты выделение фенолоксидаз характеризуется появлением коричневой окраски в субстрате вблизи растущего мицелия (Бавендамм, 1928; Лир, 1958; Хигухи и Китамура, 1953; Хигухи и Хаяти, 1956; Лир, 1956, 1958).

Наличие фенолоксидаз в чистой культуре высших бизидиомицетов может служить важной характеристикой на видовом уровне при идентификации культур в отсутствии плодовых тел (Вгеэ^ку е1 а1., 1977). Фенолоксидазы определяются различными методами, в том числе и с помощью характерных цвето-

вых химических реакций на поверхности мицелиальной колонии (81а1рег8, 1978; Магг,1979).

2.5 Использование грибов для биоконверсии

К грубым лигнинсодержащим кормам, включающим одревесневшие стенки растительных клеток относятся сено, солома, мякина (полова), шелуха (лузга) подсолнуха, коробочки хлопчатника, костра, стержни початков кукурузы, корзинки подсолнечника, веточный корм и др.

В среднем грубые корма содержат: углерода - около 50%, водорода - 6%, кислорода - 44%, азота - 0,1%. На долю оболочек клеток приходится около 25% всей массы.

На главную составную часть клеточных оболочек - целлюлозу ( клетчатку) приходится от 30 до 55 %, на лигнин - около 15-25 %. Из других веществ клеточные оболочки содержат гемицеллюлозы, пектиновые вещества, различные минеральные вещества и др.

Для всех клеток грубых кормов характерно одревеснение - пропитывание оболочек лигнином. Клетчатка этих кормов имеет низкую переваримость в связи с наличием в стенках различных инкрустирующих веществ, главным образом лигнина.

Многие исследователи (Кормщиков, 1974 и др.) считают, что лигнин является балластным веществом в грубых кормах, поскольку он не переваривается в пищеварительном тракте животных. Некоторые ученые (Прянишников и др., 1935) утверждают, что лигнин не только сам непереварим, но и тормозит переваримость других питательных веществ соломы, препятствуя действию на них ферментов.

Проникновение целлюлазы в клеточную стенку корма и контакт ее с целлюлозой затрудняется лигнином. Поэтому для повышения переваримости питательных веществ грубых кормов необходимо их делигнифицировать. Существует много различных химических способов делигнификации грубых кор-

мое, которые в некоторой степени деструктору ют клеточную стенку, но полностью ее не разрушают, обеспечивая повышение питательных свойств соломы.

Большинство авторов (Авров, Мороз, 1979; Айбазов, 1984; Бойко, 1980; Дудкин, 1986; Сабиров, 1984 ) указывают, что в последние годы в связи с нарастающим дефицитом и удорожанием фуражного зерна во всех странах мира исследователи и практики в области животноводства большое внимание стали обращать на значительное использование соломы в кормлении животных. Наряду с химическим способом обработки грубых кормов используется биологический (ферментный) способ.

После того, как было установлено, что некоторые ферментные препараты могут разрушать протопектины, гемицелюлозу, целлюллозу и лигнин, входящие в структуру клеточной стенки грубых кормов, наука стала разрабатывать способы использования их в качестве средств, повышающих питательность грубых кормов.

К сложным способам обработки соломы относится также биоконверсия. Имеются публикации о том, что биоконверсию соломы после соответствующей физико-химической обработки можно осуществлять с помощью культивирования на ней грибов (Гноевой, Закордонец, Булах, 1983).

Другие исследователи установили, что культивирование дрожжевых и дрожжеподобных грибов на соломе повышает в ней содержание белка до 37%. Получаемый корм в результате такой биоконверсии соломы по своей питательности не уступает гидролизным дрожжам (Бекер и др., 1976). Грибы могут подвергать биоконверсии солому после ее пропаривания. С помощью культивирования дереворазрушающих грибов, разрушающих стенки одревесневших клеток, в том числе соломы, как указывает исследователи, можно получать значительное количество белкового кормового продукта (Кузубова и др., 1982).

Имеются сведения по изучению внеклеточных фенооксидаз (лакказы, ти-розиназы, пероксидазы) у Coprinus comatus, C.domesticus в работе С.Н. Нана-гюлян, М.Г. Таслахчьян, JI.JI. Осипян (1997).

Установлено, что в такой соломе содержание липидов возрастает на 12-25 мг/г, протеина - в 4-6 раз, витаминов группы В - в 40-50 раз, аминокислотный состав соломы изменяется в сторону повышения незаменимых аминокислот. Однако важный вывод этих авторов состоит в том, что предварительная физико-химическая обработка соломы не всегда улучшает рост микроми-цетов на нет, иногда и ухудшает. Поэтому необходимы дальнейшие исследования.

Переваримость растительных материалов с/х животными зависит от количества и качества содержащихся в этих материалах природных полимеров (лигнина и целлюлозы) и количества легко растворимых веществ, таких как углеводы и аминокислоты.

Существуют различные химические и биохимические методы для увеличения переваримости растительных субстратов: обработка щелочью, кислотой, у-лучами и другими агентами (Pritchard et al., 1962; Donefer et al., 1969; Han et al., 1975) с последующим культивированием на них грибов.

И.Хелтай и С.Петефи (Heltay, Petefy, 1965) в 1965 году первыми предложили использовать субстрат после культивирования съедобного гриба Agaricus bisporus в качестве корма для крупного рогатого скота, предложив для него термин "микокорм".

Растительная биомасса является практически неисчерпаемым источником сырья для получения белка, ферментов и других физиологически активных соединений, поэтому исследования в области биоконверсии сельскохозяйственных и промышленных отходов в настоящее время актуальны.

Наиболее адаптированными к конверсии лигноцеллюлозных материалов являются мицелиальные грибы, которые, благодаря синтезу широкого спектра

гидролитических и окислительных ферментов, высокой проникающей способности мицелия в субстрат, обеспечивают наиболее эффективную деградацию всех компонентов растительного сырья(Маттисон, Фалина и др., 1965). Однако использование потенциала грибов на практике всё ещё затруднено из-за недостатка высокопродуктивных, быстрорастущих, непатогенных и нетоксичных штаммов (Бабицкая, 1993).

Применение макромицетов, в том числе и рудеральных видов напочвенных санротрофов, в хозяйстве мало изучено. Однако имеющиеся в литературе сведения указывают на то, что использование грибов в обеспечении животноводства кормами и в повышении плодородия сельскохозяйственных угодий перспективно. Ксилотрофы (Pleurotus ostreatus, Flammulina velutipes) используются при разложении соломы на корм и удобрения (Zadrazil, 1976).

Имеются сведения об использовании Coprinus domesticus при компостировании опилок, которые используются в качестве удобрений (Зарудная, 1971). В литературе имеется также информация о культивировании грибов для биоконверсии таких субстратов, как виноградная лоза, торф (Соловьев и др., 1984), виноградные выжимки (Клечак, Бисько и др., 1997). Проводились исследования по использованию древесины в качестве корма для животных (Baker et, al., 1975). Грибной белок может быть использован в качестве примеси к мясным и овощным блюдам (Торев и др., 1975). Обладая большим набором аминокислот и витаминов (Зерова и др., 1970; Бисько, Дудка, 1987), он является перспективным и в сельском хозяйстве,так как увеличивается привес бройлеров на 12 - 23% (в сравнении с привесом на кормовых дрожжах) и яйценоскость кур увеличивается на 16% (Торев и др., 1970). Однако сведения по использованию в биоконверсии мицелиаль-ных культур рудеральных видов напочвенных сапротрофов крайне ограничены. И.Хелтай и С.Петефи (Heltay, Petefi, 1965) первыми предложили использовать субстрат после культивирования Agaricus bisporus в качестве корма для крупнорогатого скота. Целенаправленное изучение видов ценных съедобных грибов в ка-

честве возможных продуцентов пищевой биомассы начаты в 60-х годах украинскими микологами (Дудка, Бухало, Чернуха, 1985).

В большинстве случаев перевариваемость in vitro различных растительных субстратов увеличивается после культивирования видов рода Pleurotus. Исключение составляет рисовая шелуха (Zadrazil, 1980в). Скармливание свиньям, овцам, телятам и курам 5 - 10% суточного рациона пропастеризованного в течение 2 суток субстрата после сбора плодовых тел P. ostreatus не оказало отрицательного влияния на состояние животных. Напротив, у свиней уменьшился каннибализм (Herzig et. al.,1968). Также по литературным данным добавка 200 г субстрата после культивирования P. ostreatus в рацион телят увеличивала ежесуточный привес животных до 17% . Растворение около 30% субстрата после плодоношения Р. ostreatus при 100° С позволяет использовать его для приготовления жидкого корма (Zadrazil, 1975).

Субстрат после плодоношения видов рода Pleurotus применяется не только в качестве удобрений, но и для изготовления торфоперегнойных горшочков (Schanel et. al,, 1966; Zadrazil, 1976; Kaneshiro, 1977). Чешские ученые используют такой субстрат в качестве основы для выращивания огурцов в теплице (Kriz et. al., 1980). Кроме этого, субстрат после культивирования Р. ostreatus, прошедший пастеризацию, может быть использован для выращивания Agaricus bisporus (Brislit, Harsh, 1985). Большую ценность для получения заменителя кедровой древесины при производстве карандашей представляет собой древесина бука после экстенсивного культивирования на ней P. ostreatus. Имеются сведения о том, что мицелий P. ostreatus является перспективным источником белка и витаминов для обогащения продуктов питания (Васюкова, Трискиба, 1997). Интересные данные о содержании в P. ostreatus незаменимых жирных кислот (до 70%), аминокислот, витаминов С; В1; В2; В6 и РР и их использовании имеются в работе В. Н. Ежова, С. В. Барановой, И. Ф. Кольцовой, Э. П. Тарховой, А. Н. Погорельской (1997).

2.6 Виды субстратов, используемые для культивирования перспективных съедобных грибов

Более надежным способом определения вида в культуре является идентификация образующихся при культивировании нормально развитых плодовых тел. При культивировании в лабораторных условиях получены телеоморфы некоторых видов грибов - представителей родов Agaricus, Agrocybe, Coprimis, Lepista, Pleurotus, Flammulina и flp.(Gaileiimore, 1949; Fries, 1953; Aschan, 1954 a, 6; Kinugawa, Kinugawa, 1977; Bigelow, 1970; Eilers, 1973; Гарибова и др., 1974; Трембач, 1974; Vetter, 1977; Brain et. al., 1979; Гарибова, 1989). Такие виды, как Coprinus cinerius, C.congregatus, Schizophyllum commune, ввиду их способности легко плодоносить в лабораторных условиях служат модельными объектами при изучении биологии плодоношения (Niederpruem, 1963; Wessels, 1969; Се-мерджиева, 1977; Esser, 1978; Horrire, 1979).

Наиболее полно изучены условия плодоношения видов съедобных грибов, которые культивируются в промышленных масштабах для получения плодовых тел: Agaricus bisporus, Pleurotus ostreatus, Flammulina velutipes, Volvariella volvaceae и ¿q>.(Singer,1961; Гарибова и др., 1974; Дудка и др., 1976-а; Дудка, Вассер, Бухало 1978; Chang, Haues, 1978; Гаврилова, 1982; Гарибова, 1982; Бисько, Бухало, Вассер, Дудка, 1983). Попытки получения в культуре плодовых тел многих грибов, в том числе и микоризообразующих, были неудачны. Об образовании в культуре плодовых тел Boletus edulis сообщают И. Карпинский (Karpinski, 1961).

В экспериментах Л.В.Гарибовой (1982), Н.Д. Нугаевой (1994) доказано, что плодообразование у гумусовых сапротрофов Agaricus bisporus и других видов возможно только при гобтировке нестерильной почвой с места их произрастания, что позволило предположить о необходимости для индукции плодоношения присутствия некоторых почвенных микроорганизмов, причем в определённый период развития исследуемых грибов.

В качестве субстратов, перспективных для промышленного выращивания съедобных грибов, могут быть свекловичная меласса, различные отходы сельского хозяйства, в том числе отходы переработки картофеля, молочная сыворотка (Бухало и др., 1978; Вечер и др., 1979; Бисько, Бухало, Вассер, Дудка, 1983; и др., 1984). Используется также виноградная выжимка, лоза (Ежов и др., 1997).

2.7 Расширение спектра видов культивируемых грибов за счет доместикации новых видов

В настоящее время в мировой практике грибоводства имеется тенденция к расширению спектра видов культивирования съедобных грибов, хотя пока ещё наибольший объём выращиваемой продукции приходитсяна Agaricus bisporus (Гарибова, 1982; Бухало, 1988). Большой опыт накоплен по культивированию Pleurotus ostreatus (Бисько, Дудка, 1987; Ежов, Баранова и др., 1997; Кипень, Полях, 1993). В литературных источниках имеются сведения по перспективному культивированию грибов шии - таке (Попушой, Дворнина, 1993), Flammu-lina velutipes (Псурцева, 1993). За рубежом успешно культивируется на промышленной основе Agrocybe praecox (Michel, Henning, Kriesel, 1979). Этот гриб обладает хорошими вкусовыми качествами, тонким грибным ароматом и используется в пищевой промышленности.

В Чехословакии для промышленного культивирования грибов используется Coprinus comatus (Jablonsky и SRB, Sasek, 1985) из-за относительно простой технологии выращивания, высокой скорости роста, устойчивости к болезням и вредителям, хороших вкусовых качеств и питательной ценности плодовых тел. Для культивирования Coprinus comatus в качестве субстратов также используются отходы сельского хозяйства, лесной промышленности и шампиньонный компост. В Германии в качестве субстрата при культивировании Coprinus comatus используют солому и подстилку от кур-бройлеров, опавшие листья де-

ревьев. Для покрытия грядок применяют почву. Навозник белый можно выращивать круглый год в теплице или сезонно в открытом грунте.

В лабораторных условиях выгонку плодовых тел С. lagopos удалось получить на агаризованной питательной среде, состоящей из 10 г глюкозы, 1 г аланина, 500 мг тиамингидрохлорида, 2 г Кг НР04, 0,2 r MgSCU *7 НЮ, 20 г агара (Tuite, 1978).

III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалом для данной работы послужили полевые и лабораторные исследования, проводившиеся на кафедре биологии Г1ГСХА с 1992 по 1997 гг.. Полевые наблюдения осуществлялись в различных районах Пензенской области (рис 1), в ходе которых изучался видовой состав макромицетов рудеральных местообитаний, а также экология отдельных видов: сроки плодоношения, приуроченность к тем или иным субстратам.

Объектами исследования были агарикоидные грибы - напочвенные са-протрофы, адаптировавшиеся к рудеральным местообитаниям, и мицелиаль-ные культуры этих видов, выделенные в условиях Пензенской области. В ходе выполнения работы нами были выделены мицелиальные культуры 9 видов, всего 33 штамма. В качестве вида, служившего базой для сравнения, был использован ксилотроф Р!еиго1ш оз1геаШз, широко используемый для биотехнологических целей.

Мицелиальные культуры выделяли по общепринятой методике (Бухало, 1988) из молодых неповрежденных плодовых тел в день сбора. Перед выделением плодовое тело очищали от растительных остатков и почвы, обрабатывали 96% спиртом. Затем плодовое тело разламывали над пламенем горелки и кусочек ткани гриба переносили стерильным скальпелем на питательную среду в пробирки. В качестве питательной среды использовали 3 % пшеничный агар. Пробирки и чашки Петри инкубировали в термостате при + 20° - + 25° С. Культуры хранили в холодильнике. Периодически проводили пересев - 1 раз в 3 месяца. Для получения большого количества инокулюма мицелий выращивали на пшеничном зерне, предварительно простерилизованном в автоклаве.

Культурально - морфологические особенности колоний мицелиальных культур, выращенных на пшеничном агаре в чашках Петри, описывали по методике (31а1рег8, 1978; Бухало, 1988). При этом учитывали особенности воздушного мицелия, наличие тяжей, цвет колонии, зональность.

Скорость роста на агаризованных питательных средах проводили по методикам (Кашкин, Блинов, 1968; Дудка, Вассер и др., 1982; Бухало, 1988). Культуру гриба инокулировали на питательные среды: пшеничный агар, кар-тофельно-глюкозный и сусло-агар в центр чашки Петри. Повторность опытов 3 - х кратная. Каждые 3 суток в течение 15 дней измеряли диаметр колонии в трех направлениях. Отмечали плотность колонии по трехбальной системе: 1 -редкая, 2 - средняя, 3 - плотная. На основании полученных данных вычисляли ростовой коэффициент (РК) по предложенной формуле А. С. Бухало (1988). Рк = dhg: t, где d - диаметр колонии, мм; h - высота колонии, мм; g - плотность колонии, балл; t - возраст колонии, сутки. Также определяли ростовой коэффициент для мицелиальных культур, выращенных на различных субстратах (пшеничной соломе, конопляной костре, лузге подсолнечника, просяной полове, овсяной шелухе, опилках). Опыты проводили в пробирках, заполненных стерильным субстратом на 1/3 часть. Инокулюм гриба помещали в пробирки под ватные пробки. Инкубировали в термостате при температуре +23° С. Измерения проводили через каждые 3 дня в течение 15 суток. Следует отметить, что пробирки с опилками стерилизовали в термостате при температуре + 105°С в течение 5-6 часов. Выдерживали их при комнатной температуре 24 часа и повторяли еще стерилизацию дважды (Робак, 1942; Бавендамм, 1943; Гойман, 1953).

До настоящего времени нет единого мнения по поводу разделения грибов на группы в зависимости от их отношения к температуре. Крайне недостаточно изучен вопрос зависимости роста культур высших базидиомицетов от температурного фактора. Для некоторых видов такие данные вообще отсутствуют. Поэтому возможности использования температурного критерия в качестве таксономического остается нерешенным (Рипачек, 1967; Nobles, 1971). В связи с этим представляет интерес определить температурные границы и оптимальные температуры роста культур нашей коллекции. Культуры выращива-

ли в диапазоне температур от +8° до +35° С в термостате. Наблюдения и измерение диаметра колоний проводили через каждые 3 дня в течение 15 дней. По-вторность опыта трехкратная.

Для создания необходимого рН среды добавляли 1% раствор NaOH и НС1 (Бухало, 1988) и измеряли кислотность среды на потенциометре MV 87 DIGITAL - рН - MESSGERAT. Границы рН 5,0; 6,8; 8,0 определяли до и после стерилизации. Затем среду инокулировали культурой гриба в чашках Петри. Опыт проводился в трехкратной повторности.

Для изучения влияния NaCl на рост и развитие мицелиальных культур их выращивали на питательной среде с добавлением различных концентраций данной соли. В качестве питательной среды использовали 3% пшеничный агар. Концентрации соли в среде были от 0,1 до 1,8%. Повторность опыта 3-х кратная. Культуры инкубировали при +23°С. Измерения диаметра колонии проводили по указанной выше методике.

Рост мицелиальных культур на различных лигно-целлюлозных отходах изучали, выращивая культуры в пробирках на стерильных органических субстратах (пшеничной соломе, конопляной костре, лузге подсолнечника, просяной полове, овсяной шелухе, опилках смешанных пород деревьев). Субстраты измельчали, увлажняли в течение 4-х часов в горячей воде, подвергали стерилизации в автоклаве при температуре 120°С и 2-х атмосферах, кроме опилок, которые подвергались дробной стерилизации при температуре +60°-70° (рис. 2). Субстрат при этом подвергался частичному разрушению и размягчению .целлюлозо-лигниновых оболочек растительных отходов, максимально насыщался водой и обеззараживался. Инокуляцию производили после остывания субстрата. Инкубировали культуры в термостате при +25°С. Наблюдения и измерения роста мицелия проводили через каждые 3 дня в течение месяца. Измеряли высоту столбика обрастания субстрата мицелием, учитывая воздушный

Рис. 2 Опыт по изучению развития мицелиальной культуры ЬерШа на различных оводах сельскохозяйственного производства

мицелий. Скорость роста и ростовой коэффицент вычисляли по методике А. С. Бухало (1988). Повторность - 5-ти кратная.

Наличие у исследуемых мицелиальных культур ферментов группы окси-даз (лакказы, тирозиназы, пероксидазы) устанавливали с помощью качественных цветовых химических реакций, которые проводили путем нанесения капли раствора на поверхность растущей на агаризованной среде колонии (81а1регз, 1978). Изменение окраски отмечали через 30 минут, 3 и 24 часа.

1. Реакция с а - нафтолом на наличие лакказы проводили при помощи спиртового водного раствора ( 2,5 г а - нафтола, 50 мл 96 % этилового спирта, 50 мл воды). При положительной реакции наблюдали фиолетовое или темно-пурпурное окрашивание мицелия.

2. Реакция с р - крезолом на наличие тирозиназы. При положительной реакции наблюдали оранжевое или красно - коричневое окрашивание мицелия.

3. Реакция с пирогаллолом и перекисью водорода на наличие пероксидазы. При положительной реакции наблюдали оранжево - коричневое или мор-ковно - красное окрашивание.

Для обнаружения ферментов, разрушающих лигнин, нами применялся оксидазный тест - один из наиболее надежных методов выявления у грибов этой способности (Давыдкина, 1980; Решетникова, Успенская, 1984; Вауепёашш, 1928; Ьуг, 1958). Для этого культуры выращивали на агаризованной питательной среде с добавлением фенольных соединений (галловая кислота, танин, гваякол, гидрохинон). При положительной реакциии на 6 - 9 день культивирования вокруг колонии появлялось темноокрашенное кольцо.

Для обнаружения ферментов целлюлаз мы использовали качественный метод для их тестирования (Билай, 1982). Для этого культуры выращивали на измельченной, расфасованной в пробирки и простерилизованной фильтровальной бумаге (рис. 3). По способности мицелиальных культур расти на данном

Рис. 3 Опыт по обнаружению целлюлаз с мицелиальными культурами: Соргтш сотаШэ, С. 1о§ори5 и С. domesticus

субстрате судили о наличии целлюлаз. Рост на целлюлозном субстрате оценивали визуально по 5 -ти бальной системе:

1 - 2 - балла - слабый рост мицелия, отсутствие разрушения участков целлюлозы;

3 - 4 - балла - наличие обильного и хорошо развитого мицелия, обволакивающего целлюлозный субстрат;

5 - наличие признаков деградации субстрата.

Определяли также скорость роста мицелиальных культур на данном субстрате путем измерения столбика растущего мицелия.

Скорость разложения клетчатки определяли по методу И.С. Шумилина и др. (ГОСТ 13596.2 - 91). Вопрос о полиморфизме у рудеральных видов агари-коидных грибов является очень широким и интересным и представляет собой тему для особых исследований. Так нами он изучен недостаточно поэтому мы констатируем только отдельные результаты и в цели и задачи его не выносили и никаких выводов по нему не делаем. Может быть нам и не следовало этот вопрос выносить совсем. Однако, нами были отмечены культурально-морфологические признаки агарикоидных грибов и в зависимости от субстрата, температуры, рН среды и других условий роста и развития мицелиальных культур.

Термин "активность" по отношению скорости роста и накоплению белка следовало заменить на "способность".

Для определения клетчатки исследуемых субстратов применялся метод И.С.Шумилина и другие (ГОСТ 13496.2-91). Метод основан на удалении из продукта кислотощелочерастворимых веществ и определении массы остатка, условно принимаемого за клетчатку. Берется навеска испытуемой пробы массой до 1,5 г и помещают в стакан вместимостью 300-400 см3 , приливают 200 см' 4-%-ного раствора серной кислоты и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Доводят до слабого кипения на электрической плитке.

Кипячение продолжают 5 минут, считая от начала кипения, при периодическом помешивании, при сильном кипении под стакан подкладывают слой асбеста. Стакан снимают с плитки, смывают со стенок приставшие частицы, дают отстояться осадку и ещё горячий раствор отсасывают с помощью вакуумного насоса или насоса Комовского. Для этого используют воронку диаметром 5 см, обтянутую шелковой тканью, диаметр отверстий не должен превышать 0,1 мм. Эти воронки посредством изогнутой стеклянной трубки соединяют с колбой Бунзена вместимостью 3-5 дм3. Колба Бунзена в свою очередь соединена с вакуумным насосом или насосом Комовского. Затем воронку осторожно вводят в стакан до соприкосновения с поверхностью горячей жидкости (погружать глубоко в жидкость не рекомендуется) и отсасывают раствор в колбу Бунзена. Отсасывание продолжают до тех пор, пока слоя жидкости над осадком не остается примерно 10 мм.

По окончанию отсасывания воронку вынимают из стакана, перевёртывают фильтром вверх и дают оставшейся жидкости в воронке стечь в колбу Бунзена. После отсасывания удаляют из стакана промытый фильтр, в стакан наливают горячую дистиллированную воду до метки, перемешивают, осадку дают отстояться и снова отсасывают раствор. Отсасывание проводят 3 раза, каждый раз с новым бумажным фильтром. После промывания осадком дистиллированной водой от серной кислоты в стакан наливают 100 см3 5-%-ного раствора 200

л

см (концентрация щелочи в стакане составляет 2,5%). Затем содержимое стакана тщательно перемешивают и кипятят в течение 5 минут на электрической плитке. После кипячения осадок переносят на воронку Бюхнера с бумажным фильтром, предварительно высушенным в сушильном шкафу при температуре 160 °С в течение 15 минут и взвешенным вместе с бюксом на весах 2 класса точности.

Осадок на фильтре последовательно отмывают горячей дистиллированной водой от щелочи (проба по лакмусу), 15 см3 спирта и 15 см3 диэтилового

эфира. Промытый таким образом осадок переносят вместе с фильтром из воронки Бюхнера в тот же бюкс, в котором высушивали пустой фильтр, и высушивают в сушильном шкафу при температуре 160 °С в течении 2-х часов. Затем охлаждают в эксикаторе и взвешивают на лабораторных весах второго класса точности, (допускается высушивать осадок с фильтром при температуре 105 °С в течении четырех часов).

Обработка результатов: массовую долю клетчатки (X) в процентах в испытуемой пробе вычисляют по формуле

Ай! 100

X —-

т

где Ш} — масса навески, г;

т - масса полученного сухого остатка, вычисленная по разности между массой бюкса с фильтром и клетчаткой и массой фильтра и бюкса, или масса сухого остатка, полученного в приборе ВЧМ, г 100 - коэффициент пересчёта в проценты.

Массовую долю сырой клетчатки (XI) в процентах в сухом веществе вычисляют по формуле

„ Х-100

XI —-,

1 100-г

где X - массовая доля сырой клетчатки в испытуемой пробе, % \¥ - влажность испытуемой пробы, %.

Для определения содержания протеина в субстратах с мицелием гриба по сравнению с исходным субстратом применяли метод С.Г.Самохвалова и др. (ГОСТ 13496.4 - 84). Сущность метода заключается в разложении органического вещества пробы кипящей концентрированной серной кислотой с образованием солей аммония, переведения аммония в аммиак, отгонки его в раствор кислоты, количественном учете аммиака титрометрическим методом (по Кьельдалю) и фотометрическим методом определения азота с последующим пересчетом результатов на сырой протеин.

С целью выяснения эффективности использования мицелия гриба Agrocybe dura в кормлении цыплят - бройлеров в качестве источника витаминов группы В нами в условиях вивария ПГСХА был проведен зоотехнический опыт. Были сформированы 4 группы цыплят - бройлеров суточного возраста по 50 голов в каждой группе. Первая группа служила отрицательным контролем. Из рациона этой группы были исключены витамины Bi, В2, В3, В4, В5, Вб. В рацион второй группы вводили 1% от массы корма мицелия гриба вместе с субстратом и также исключали ввод фармакопейных витаминов Bj, В2 , В3, В4, В5, В6. Третья группа получала 2% мицелия гриба Agrocybe dura вместе с субстратом. Четвертая группа служила положительным контролем, в рационе этих цыплят содержался весь комплекс витаминов, согласно рецептуре. Содержание основных питательных веществ во всех исследуемых группах было одинаково. Контроль за ростом и развитием цыплят проводили путем взвешивания в начале опыта, на 7, 14, 28 и 39 сутки. Учитывалось также наличие клинических признаков авитаминоза (порез конечностей, запрокидывание головы и др), процент падежа.

Математическая обработка результатов исследования проводилась по методике Б.А.Доспехова (1985). Использованная методика Доспехова Б.А. легла в основу компьютерной программы математической обработке статистических данных, разработана в Пензенской государственной сельскохозяйственной академии. Она позволяет оценить степень достоверности опыта, сравнивая его с табличным значением при уровне значимости 0,05 (что значит 95% достоверности по Стьюденту). Используя вычисленный результат, если он меньше значения 0,05 уровня значимости можно определить по таблице процент достоверности.

В наших опытах полученные значения имели степень достоверности до 95 %. Кроме того, данная программа определяет НСР (наименьшая существенная разность), что позволяет оценить степень достоверности отличий в каждом

варианте опыта в сравнении с контролем. Это позволяет определить вид субстрата, концентрацию соли, рН, состав питательной среды и т.д.), которые наиболее существенно влияют на скорость роста и другие культурально-морфологические признаки мицелиальных культур агарикоидных базидиоми-цетов.

IV, ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РУДЕРАЛЬНЫХ ВИДОВ АГАРИКОИДНЫХ ГРИБОВ В ПРИРОДНЫХ УСЛОВИЯХ 4.1 Особенности видового состава макромицетов рудеральных местообитаний

За период работы в районе исследований было выявлено 57 видов и 4 внутривидовых таксона агарикоидных грибов, адаптирующихся к рудеральным местообитаниям. Как показывает анализ таксономической структуры видового состава (табл. 1), спектр родов и семейств агарикоидных грибов в этих условиях существенно отличается от такового в природных экосистемах рассматриваемого региона (Иванов, 1992).

Таблица 1

Таксономическая структура видового состава агарикоидных грибов рудеральных местообитаний

Семейства Количество видов и внутривидовых таксонов Доля в %

Ро1урогасеае 1 1.83

Тпс1ю1ота1асеае 7 10

РЫеасеае 4 6.66

А§апсасеае И 18.33

Сорппасеае 22 38.33

Во1ЬШасеае 12 20

З^орЬапасеае 4 6.66

Всего 61 100

По количеству видов здесь ведущее положение занимает семейство Сорп-пасеае. За ним следуют семейства А§апсасеае и Во1ЬШасеае. На перечисленные семейства приходится 76,66% выявленных видов. Подобный спектр семейств биоты макромицетов рудеральных местообитаний сближает их с таковым в

аридных областях и полупустынях. (Каламеэс, Ваасма, 1978, Халикова, 1989). Такое сходство оказывается не случайным, так как к рудеральным местообитаниям адаптируются в основном гумусовые сапротрофы, герботрофы и копро-трофы - типичные обитатели безлесных пространств. На них приходится 95% выявленного видового состава. Ксилотрофы же составляют всего 5% изученной микобиоты.

Как показали наблюдения, семейство Сорппасеае в микобиоте рудераль-ных местообитаний занимает ведущее положение не только по видовому разнообразию. Виды, относящиеся к нему, встречаются практически на всех изученных субстратах, на разных этапах их разложения. Многие из них имеют высокую численность. Это делает рассматриваемое семейство наиболее перспективным с точки зрения поиска видов, представляющих интерес для биоконверсии.

Семейство ВоШШасеае по видовому разнообразию в рудеральных местообитаниях находится на втором месте. Следует подчеркнуть, что входящие в него виды по своей биологии близки к представителям семейства Сорппасеае. Однако в их изучении имеются большие сложности из-за трудности определения видов, особенно рода СопосуЬе. Как показывают наблюдения, грибы, рассматриваемого семейства, очень активны в плане заселения органических субстратов, в связи с чем они также перспективны с точки зрения практического использования.

Семейство Адапсасеае по видовому составу в рудеральных местообитаниях находится на третьем месте. Однако большинство видов, входящих в него, на отходах встречаются редко и осуществляют, главным образом, заключительные стадии разложения лигно-целлюлозных субстратов. Широко распространенными являются лишь Agaricus Ызропш и Ьеисоа§апсш ЬисоШИш, перспективные с точки зрения получения плодовых тел для пищевых целей.

Семейство ТпсЬо1оша1асеае в рудеральных местообитаниях представлено всего шестью видами. Несмотря на то, что эта очень богатая видами группа грибов включает в себя большое количество представителей гумусовых сапротрофов (роды Ме1апо1еиса, ЬеисорахШш), подстилочных сапротрофов и герботрофов (роды СоПуЫа, Магаяпиш, Мусепа), большинство из них избегают рудеральных местообитаний. Только очень немногие из них приспосабливаются к этим условиям.

Особо следует остановиться на семействе РМеасеае, представленном в рассматриваемых местообитаниях 4 видами. Из обширной трофической группы ксилотрофов в природных условиях к измельченному древесному субстрату - опилкам - приспосабливаются два вида этого семейства - РЫеш айгсарШдо и Р. ашжЛюпщоБш. Еще один ксилотроф из семейства Ро1урогасеае - Р1еигоШ8 оз^еайхэ, изредка обитающей на свалках отходов деревообработки, оказывается всегда связан не с измельченной древесиной, а с обрезками бревен, досок и т.п.

Представители семейства ЗЬюрИапасеае мало активны в плане заселения рудеральных местообитаний. В них они представлены всего 4 видами, численность которых не велика.

Примечательно, что гумусовые сапротрофы из семейств Ну^орЬогасае и ЕпгоЬпШасеае, нередки в степях изучаемого региона (Иванов, 1992), в рудеральных местообитаниях не найдены.

4.2 Группировки агарикоццных грибов, свойственные отвалам различных органических отходов

Рудеральные местообитания в изучаемом регионе довольно разнообразны в связи с тем, что они формируются под воздействием различных экологических факторов антропогенного характера. Они отличаются по химическому составу склада-

руемых на них отходов, а также по видовому разнообразию и обилию агарикоидных грибов.

Наиболее богаты макромицетами участки земель, прилегающие к крупным животноводческим фермам. Здесь концентрируется огромное количество навоза, находящегося на разных стадиях разложения. На свежем навозе, содержащем солому, используемую для подстилки, массово развиваются три вида - Coprinus cinereus, С. lagopus, С. miser. Если в качестве подстилки применяются опилки, на навозе, содержащем их, очень обильно появляются С. niveus, Panaeolus ater и P. fimicola. По мере перепревания навоза обилие перечисленных видов снижается. На второй год хранения его в буртах появляются такие грибы, как Agaricus bispoms и Leiicoagaricus leucothitus, для которых характерно очень высокая урожайность, особенно для первого. Широко распространены в этих условиях Endoptychum agaricoides, Macrolepiota rhacodes var. hortensis, Lepista saeva, L. sórdida.

Своеобразная экологическая зона образуется около навозных куч, где почва пропитывается вымываемыми из них веществами. Здесь обитают Agaricus arvensis, A. fissuratus, A. nivescens, Agrocybe dura, A. praecox, Conocybe leu-copus,

C. macrocephala, Panaeolus fimicola, Pholiotina vestita.

Несколько иная сукцессия видов наблюдается на соломе злаков, излишки которой обычно разлагаются естественным путем. На данном субстрате плодоношение макромицетов начинается обычно после зимнего хранения - в конце апреля - начале мая. Пионером среди них является Coprinus lagopus. В середине лета к нему обычно присоединяются С. cinereus, С. lagopides и Volvariella speciosa. Еще через год, когда солома потемнеет и сильно осядет, виды рода Coprinus исчезают, а обилие Volvariella speciosa увеличивается, появляются также Bolbitius vitellinus, Panaeolus ater и P. fimicola. На данном субстрате обнаружены также редкие виды грибов: Bolbitius demangei и Panaeolus leucophanes.

На четвертый год, когда солома разложится почти полностью, на ней появляются Agaricus bisporus, Clitocybe rivulosa, Lepista saeva, L. sórdida. Хотя эти виды встречаются здесь довольно часто, обилие их значительно ниже, чем на кучах перепревшего навоза. Наряду с перечисленными видами на остатках перепревшей соломы отмечены единичными находками такие грибы, как Agaricus nivescens и Conocybe inocyboides.

Своеобразный комплекс видов агарикоидных грибов развивается на гороховой соломе, в которой содержится больше азота, чем в соломе хлебных злаков. На данном субстрате, пролежавшем в течение зимы, уже в первой половине лета появляются Coprinus bisporus, С. brassica, С. cinereus, С. lagopus, С. poliomallus, С. subdisseminatus. Таким образом, повышенное содержание азота благоприятно для видов рода Coprinus. Позднее как и на пшеничной соломе с сукцессии включаются: Agaricus bisporus, Clitocybe rivulosa, Lepista saeva и L. sórdida.

Наряду с соломой зерновых и крупяных культур в районе исследований имеются большие отвалы отходов переработки технических культур. Среди них по объему выделяются отвалы конопляной костры. Это богатый питательными веществами субстрат, по содержанию Р и К существенно превосходящей солому злаков. На свежей костре массово развивается Coprinus lagopus. Несколько реже на ней встречаются Agrocybe putaminum, Bolbitius vitellinus var. titubans, Volvariella speciosa, а также Bolbitius demangei и Panaeolus papiliona-ceus, отмеченные единичными находками. С полуразложившейся кострой связан Coprinus romagnesianus. Этот вид развивается очень обильно на поверхности отвалов полуперепревшей костры, которые обычно вскрываются при перемешивании куч бульдозерами. Наряду с ним на данном субстрате встречается Agaricus bisporus. В старых отвалах, состоящих из полностью разложившейся костры, самым массовым видом является Lepista saeva. Наряду с этим видом

обычны Agaricus arvensis, Leucoagaricus leucothitus, Pholiotina vestita. Единичными находками отмечены Agaricus bitorquis, Calocybe gambosa.

Несколько иной видовой состав макромицетов формируется на отходах переработки хмеля. Первым, как и на других субстратах, здесь появляется Со-prinus iagopus. На полуперепревших отходах массово развиваются A. bisporus, Coprinus domesticus, С. flocculosus, Lepista sórdida, Panaeolus fímicola, Síropharia aeruginosa.

Большое количество органических отходов дает не только сельское хозяйство, но и деревообрабатывающая промышленность. Ее отходы также обычно концентрируются в крупных отвалах. На свежих опилках макромицеты, как правило, отсутствуют. Их массовое развитие начинается обычно, когда полуперепревшие кучи разравниваются бульдозерами и смешиваются с землей. На данном субстрате очень высокое обилие характерно только для двух видов -Coprinus atramentarius и С. comatus . Эти грибы образуют обычно плотные куртины по 30-50 базидиом в каждой (рис. 4, 5). На 100 м2 приходится до 10-12 таких куртин. Остальные виды плодоносят менее обильно. Среди них наиболее обычны Agrocybe dura, A. praecox, Collybia sp., Coprinus Iagopus, Lyophyllum fumosum, Pluteus atricapillus, Psathyrella gracilis, P. microrhiza, Psilocybe bullacea. Такие грибы, как Pluteus aurantiorungosus и P. curtisii, отмечены единичными находками.

Иногда на свалках отходов деревообработки сваливаются и недревесные материалы. Так, на опилках, смешанных со строительным мусором, содержащим известь, отмечены Agaricus bisporus и Panaeolus uliginosus; на коре с примесью навоза - Psathyrella longicauda. В связи с тем, что опилки часто загораются, в рассматриваемых местообитаниях накапливается большое количество углей и золы. На этих материалах, перемешанных с почвой и опилками, обитают Conoeybe anthracophila и Pholiota carbonaria.

Рис.4 Copiynus atramentarius

fOQ&tflt: ÍAS

^Ьсударс ■■

Таким образом, в разложении отходов сельскохозяйственного производства в условиях свалок принимают участие базидиальные макромицеты - гумусовые сапротрофы. Каждому типу субстрата характерен специфичный набор видов этих грибов, среди которых целесообразен поиск объектов, перспективных для биоконверсии.

V. ВИДЫ И ШТАММЫ РУДЕРАЛЬНЫХ ВИДОВ АГАРИКОИДНЫХ ГРИБОВ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЯХ

Для экспериментальных исследований нами были отобраны виды по следующим принципам :

1) отсутствие токсинов и наличие съедобных плодовых тел;

2) высокая активность роста мицелиальных культур.

Именно эти показатели являются важнейшими с точки зрения использования грибов для биотехнологических целей. Всего нами было изучено 9 видов грибов (33 штамма) - напочвенных сапротрофов.

Agrocybe praecox (Pers: Fr.) Fayed (рис. 6) из плодовых тел выделено 4 штамма:

АГЦ - плодовое тело собрано в лесопосадках в окр. г. Пензы, май 1994 г.;

АПз - плодовое тело собрано на лугу поймы р. Суры, Бессоновский р-он, май 1994 г.;

АП19 - плодовое тело собрано в Арбековском лесу на вырубке окр. г. Пензы, май 1995 г.;

АП26 - плодовое тело собрано на пастбище в окр. п. Шемышейка, май 1995 г.

С точки зрения биоконверсии представляют интерес крупноплодные виды рода Agrocybe. Для Agrocybe praecox характерен полиморфизм плодовых тел, что связано с местообитанием. Грибы с размером шляпки 8 - 12 см встречаются на богатых органикой субстратах, навозном перегное, перепревших опилках. В лесах обитают виды со средним размером шляпки (4-8 см) и более высокой ножкой до 9 см. Мелкоплодные формы обычно обитают на лугах и в ивовых кустарниках. Диаметр шляпки 2 - 4 см, длина ножки до 5 см. Плодоносит с мая по август.

Phc. 6 Agrocybe praecox

Agrocybe dura (Fr) Sing (рис. 7) из плодовых тел выделено 4 штамма:

АД} - плодовое тело собрано на свалке в окр. п. Ахуны, на отвалах опилок, июнь 1994 г.;

АД2 - плодовое тело собрано в луговой степи в окр. учхоза Рамзай, июнь 1994 г.;

АДз - плодовое тело собрано в окр. п. Шемышейка, на отвалах просяной половы, август 1995 г.;

АД4 - плодовое тело собрано в окр. с. Чемодановка, на отвалах овсяной шелухи, близ птицефабрики "Пензенская", июнь 1996 г.

Agrocybe dura обитает на лугах, в степях, встречается на отвалах отходов сельского хозяйства и лесопереработки. Плодоносит с июня по август.

Coprinus comatus (Fr.) S.F. Gray (рис. 8) из плодовых тел выделено 4 штамма: СС5 - плодовое тело собрано в парке около полотна детской железной дороги, окр. п. Сосновка, май 1993 г.;

СС7 - плодовое тело собрано на свалке в окр. п. Ахуны, июнь 1994;

СС9 - плодовое тело собрано на газоне в г. Пензе, авгутс 1995 г.;

ССц - плодовое тело собрано в березовом лесу Башмаковского р - она, п. Знаменка, август 1995г.

СС5 - плодовое тело собрано в лесу на обочине дороги Кузнецкого района, конец августа 1996 года.

Среди видов рода Coprinus самым перспективным с точки зрения практического использования является именно С. comatus (Jablonsky et al. 1985). Этот крупный гриб имеет белые мясистые плодовые тела, съедобные в молодом возрасте. В изучаемом регионе он распространен очень широко. Популяции свойственен определенный полиморфизм. Наряду с типовой формой, имеющей высоту плодового тела до 20 см, встречается гигантская, высотой до 35 - 40 см, и мелкоплодная - высотой до 10 см. Кроме того, отмечены фенотипы не с типичной цилиндрической шляпкой, а с яйцевидной. Некоторые исследователи придают этим фенотипам таксономический статус С. comatus (Fr.)

Phc. 7 Agrocybe dura

Рис. 8 Coprinus comaíus

S.F. Gray var.ovatus Schff.: Fr (Moser, 1983). С. comatus в Пензенской области предпочитает рудеральные местообитания: свалки, газоны, отвалы отходов деревообработки и конопляной костры. С наибольшим обилием он плодоносит на свалках отходов деревообработки, где его постоянным спутником является С. atramentarius (приложение рис.34 ). Общей особенностью местообитаний С.comatus является наличие свежего органического мусора, смешанного с почвой. В естественных местообитаниях он также выбирает подобные ситуации. Например, в степях он держится около сурчин, где остатки подземных органов трав оказываются перемешанными с выбросами из нор. Мицелий С.comatus распределяется в почве в виде тяжей и образует скопления гиф близ погребенных частиц органики. В связи с этим, к гумусовым сапротрофам в полном смысле слова его причислять нельзя. Однако почва, как и погребенные в ней частицы, необходима для его существования. С.comatus никогда не встречается непосредственно на перепревшей органике - навозе, конопляной костре и т.п. Вероятно, он оказывается зависимым от ее микрофлоры, образующей , как и у шампиньонов, необходимую для нормального роста и развития гифосферу (Гарибова, 1974).

С.comatus устойчив к загрязнению воздуха, в связи с чем он является типичным "городским" грибом. В благоприятную погоду он нередко создает сплошной белый аспект на газонах близ напряженных автострад (рис. 8).

Плодоносит рассматриваемый вид с конца апреля до ноября. Однако наиболее массовый урожай характерен для середины сентября. Летом его плодоношение наблюдается обычно после похолодания, что указывает на то, что для образования плодовых тел требуется небольшой температурный стресс.

Coprinus domesticus (Bolt.: Fr.) S.F. (рис. 9) Gray из плодовых тел выделено 3 штамма: СДз - плодовое тело собрано у входа близ деревянных стен овощехранилища ПГСХА, июль 1994 г.;

СДб - плодовое тело собрано на свалке около плодово-ягодного сада п. Беково, середина мая 1996 года.

СД8 - плодовое тело собрано в теплице ПГСХА, апрель 1995 г.;

Рис. 9 Coprinus domeslicus

СД13 - плодовое тело собрано на перепревшем навозе, смешанном с почвой, недалеко от коровника, п. Мокшан, май 1995 г.

Сорппш скяпезйсш - типичный обитатель теплиц, газонов, цветочных горшков, где обитает на свежей органике, обычно перемешанной с почвой. Как и предыдущий вид, он интересен с точки зрения биоконверсии.

Соргшш Ь^орш Рг. (рис. 10) из плодовых тел выделено 3 штамма: СЛ2 - плодовое тело собрано в теплице ПГСХА, апрель 1994 г.; СЛ15 - плодовое тело собрано в теплице п.Мичурино, май 1995г.; СЛ16 - плодовое тело собрано в поле на прошлогодних кучах соломы, окр. п. Колышлей, конец апреля 1995г;

СЛп - плодовое тело собрано в посадке Кондальского района в мае 1996

года.

Сорппив ^орш относится к числу мелкоплодных видов рода. Представляет интерес с точки зрения биоконверсии, т.к. осуществляет первую стадию деструкции большинства органических отходов в природных условиях. Он отмечался нами на соломе, опилках, конопляной костре, отходах переработки хмеля и т.п. Плодовые тела его обычно развиваются массово в течение всего вегетационного периода, если для этого достаточно влаги. В природных экосистемах этот гриб встречается редко. Здесь он обычно приурочен к древесной трухе сильно разложившихся пней.

ЬерЫа Баеуа (й.) Ойоп из плодовых тел выделено 2 штамма: ЛС1 - плодовое тело собрано на перепревшем навозе, окр. п. Александ-ровка, сентябрь 1995 г.;

ЛСи - плодовое тело собрано на перепревшем навозе, окр. г. Каменка, конец августа 1996 года;

ЛС14 - плодовое тело собрано на свалке, окр. с. Грабово, сентябрь 1995 г. Ьер181а ваеуа (Рг.) Ойоп. (рис. 11) - крупноплодный съедобный гриб, по

органолептическим свойствам плодовых тел не уступающий видам рода

Agaricus.

В регионе представлен двумя варитетами: Ь.Баеуа (Рг.) ОПоп уаг. Баеуа и Ь.Баеуа (Гг.) ОПоп уаг. атеппа Ка1аш е! 1уэпоу. Первый варитет имеет коричне-

Рис. 10 Coprinus lagopus

Заключение диссертации по теме «Микология», Иванова, Вера Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. В природных условиях для отвалов различных видов лигноцеллюлоз-ных отходов характерен специфичный видовой состав агарикоидных грибов -сапротрофов.

2. В рудеральных местообитаниях по количеству видов преобладают семейства Coprmaceae (22 вида), Bolbitiaceae (12 видов) и Agaricaceae (11 видов), что делает трофическую структуру свойственной им микобиоты сходной с таковой в областях сухих степей и пустынь.

3. Разложение различных органических отходов в природных условиях осуществляется преимущественно видами агарикоидных грибов, относимых обычно к трофической группе гумусовых-сапротрофов. Микобиота рудеральных местообитаний представляет собой источник ценного исходного материала для поиска видов, перспективных для биотехнологических целей.

4. Среди макромицетов, населяющих рудеральные местообитания, нами выделены грибы по скорости роста на искусственных питательных средах, не уступающие Pleurotos ostreatos, широко используемому для биотехнологических целей. Это Agrocybe dura, A. praecox, Coprinus comatus, С. domesticus, С. lagopus, Lepista saeva, L. sórdida, Leucoagaricus leucothitos, Lyophyllum fumosum.

5. Установлено, что температурный оптимум для роста мицелиальных культур грибов семейства Tricholomataceae составляет от +20° до +23°. Представители семейств Bolbitiaceae и Coprmaceae оказываются более термофильными. Температурный оптимум для них составляет от +23 ° до +27°.

6.Все изученные нами виды обладают целлюлозо- и лигнолитической способностью.

7. Для изученных нами мицелиальных культур рудеральных видов макромицетов установлены специфичные для каждого вида культурально - морфологические признаки, которые могут служить дополнительным критерием при идентификации мицелиальных культур в коллекциях.

8. Различные типы органических отходов утилизируются макромицетами с неодинаковой скоростью. Пшеничную солому с наибольшей скоростью утилизируют Agrocybe dura, Coprinus comatus, С. lagopus; конопляную костру -Pleurotos ostreatus, Agrocybe dura и Coprinus lagopus; подсолнечную лузгу -Coprinus domesticus; просяную полову - Pleurotos ostreatus, Coprinus domesticus, C. lagopus; опилки - Agrocybe dura.

9. Установлено, что клетчатку пшеничной соломы наиболее активно разрушают Leucoagaricus leucothitus, Coprinus lagopus, С. domesticus, Lepista saeva и L. sórdida; конопляной костры - Lepista sórdida, Leucoagaricus leucothitus; лузги - Coprinus comatus, C. domesticus, Pleurotos ostreatus; просяной половы -Coprinus domesticus, Leucoagaricus leucothitus; овсяной шелухи - Agrocybe dura, Coprinus lagopus; опилок - Agrocybe dura, Coprinus lagopus, C. comatus, Pleurotos ostreatus. Таким образом, для уменьшения содержания клетчатки в каждом типе отходов перспективно использовать определенные виды грибов.

10. Выявлено, что все изученные виды напочвенных сапротрофов активно накапливают в субстрате протеин. С наибольшей активностью обогащают протеином конопляную костру Agrocybe dura и Leucoagaricus leucothitus; лузгу подсолнечника Agrocybe praecox; просяную полову - Pleurotos ostreatus, Lyophyllum fumosum, Lepista saeva, L. sórdida, Leucoagaricus leucothitus; овсяную шелуху - Lyophyllum fumosum, Coprinus domesticus; пшеничную солому -Lyophyllum fumosum, Coprinus lagopus, Pleurotos ostreatus; опилки - Agrocybe praecox, A. dura, Coprinus lagopus, Pleurotos ostreatus.

11. Среди изученных видов наиболее конкурентоспособным по отношению к посторонней микрофлоре является Agrocybe dura, что представляет его наиболее перспективным для биотехнологических целей.

12.Обогащенные мицелием Agrocybe dura отходы переработки овса перспективны как витаминные добавки в птицеводстве.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Иванова, Вера Анатольевна, 1998 год

ЛИТЕРАТУРА

Авров O.E., Мороз З.М. Использование соломы в сельском хозяйстве. -М.: Колос, 1979.-239 с.

Айбазов O.A. Ферментативный способ обработки соломы. - М.: Россель-хозиздат, 1984. - 185 с.

Бабицкая В.Г. Грибы - эффективные деструкторы лигноцеллюлозных субстратов: их морфологическая и физиолого - биохимическая характеристика // микол. и фитопат. - 1993. - Т. 27, вып. 5. - С. 38 - 43.

Бадалян С.М., Геворкян С.А., Амбарцумян Л.А. Значение межвидовой конкуренции в популяционной структуре ксилотрофов. // Метологичесие основы познания биологических особенностей грибов - продуцентов физиологически активных соединений и пищевых продуктов: Тез. докл. 1 международной конф. 1-4 окт. 1997 г. - Донецк, 1997 - С. 96 - 99.

Бекер В.Ф. Биохимия лизина и использование его препаратов в питании животных. - Рига: Зинатне, 1976. - 69 с.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии: Справочник. - Киев: Наук, думка, 1982. - 550 с.

Бисько H.A., Бухало A.C., Вассер С.П. и др. Высшие съедобные бази-диомицеты в поверхностной и глубинной культуре. /Под ред. Дудки И.А. - Киев: Наук, думка, 1983. - 312 с.

Бисько H.A., Дудка И.А. Биология и культивирование съедобных грибов рода вешенка. - Киев: Наук, думка, 1987. - 148с.

Бурова Л.Г. Экология грибов макромицетов. М.: Наука, 1986. - 203с.

Бухало A.C., Соломко Э.Ф., Пархоменко Л.П. и др. Опыт глубинного выращивания мицелия Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm. на комлексных средах. //' Про-зводство высших съедобных грибов в СССР. - Киев: Наук, думка, 1978. - С. 29 -32.

Бухало A.C., Вассер С.П. Значения кулыурально - морфолопчних однак вищих Basidiomyceles для таксином1чних i яволюцшних побудов // Укр. ботан. журн. - 1981-6. - 37, 1. - С. 93 - 99.

Бухало A.C. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. - Киев: Наук, думка, 1988. - 144с.

Васильева JI.H. Агариковые шляпочные грибы (пор. Agaricales) Приморского края. - Л.: Наука, 1973. - 330 с.

Вассер С.П. Флора грибов Украины: Агариковые грибы. Киев: Наук, думка, 1980.-328 с.

Вассер С.П. Агариковые грибы СССР. - Киев: Наук, думка, 1985. - 184 с.

Вассер С.П. Семейство Agaricaceae // Низшие растения, грибы и мохообразные советского Дальнего Востока. Базидиомицеты. Л.: Наука - Ленинградское отделение, - 1990. - Т. 1. - С. 118-207.

Васюкова А.Т., Трискиба С.Д. Использование мицелия гриба Pleurotos ostreatus в качестве белкового и витаминного обогатителя рубленных изделий // Материалы 1-й Международный конференции. Донецк, 1997. - С. 37 - 38.

Вечер A.C., Соломка Э.Ф., Бухало A.C. и др. Концентрат картофельного сока как субстрат для культивирования мицелия высших съедобных грибов, i i Докл. АН БССР. - 1979. - Т.23 №9. - С. 855- 858.

Выщепан С.Л. Макромицеты низовий Дона и северного Приозовья (в пределах Ростовской области): Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Киев, 1990. -26 с.

Гаврилова Л.П. Биоэкологические особенности съедобного дереворазру-шающего гриба Flammulina velutipes (Fr.) Sing. // Экология и биология низших растений: Тез. докл. 9 симпоз. микологов и лихенологов Прибалт, сов. республик и БССР, 17-19 нояб. 1982г. - Минск, 1982,- С. 38 - 39.

Гарибова Л.В. Биологические особенности различных штаммов культивируемого шампиньона и их связь с урожайностью: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Москва, 1964. - 23 с.

Гарибова Л.В., Об антагонистической активности мицелия культивируемого шампиньона Agaricus bisporus (J.Lange) Imbach // Микология и фитопатология. 1968. - Т. 2, № 2. - С. 81 - 87

Гарибова Л.В., Сафрай А.И. Оценка некоторых таксономических признаков видов рода Agaricus Fr. // Микология и фитопатология. - 1972. - Т. 6. № 5. - С. 440 -443.

Гарибова Л.В., Сафрай А.И. Влияние микрофлоры почвы на плодоношение некоторых видов рода Agaricus. Fr. emend. Karst. // Микология и фитопатология. - 1974. - Т.8, №3. - С. 259-264.

Гарибова Л.В., Сафрай А.И., Шалашова Н.Б. Условия плодоношения некоторых видов рода Agaricus Fr. emend. Karst. // Микология и фитопатология. -1974. - Т. 8, №6. - С. 259 - 264.

Гарибова Л.В. Макеева В.Я. О различных методах и последовательности их применения в систематике (на примере рода Agaricus Fr.) // Микология и фитопатология. - 1974. -Т. 8, № 6. - С. 553 - 536.

Гарибова Л.В. Физиология питания некоторых видов рода Agaricus Fr/ Emend. Karst. // Научные доклады высшей школы. Биологические науки. Физиология и биохимия растений. - 1975. №9 - С. 78-82.

Гарибова Л.В. Морфология, биология и систематика рода Agaricus Fr. Emend. Karst.: Автореф. дис.... д-ра биол. наук. - М., 1982. - 360с.

Гноевой В.И., Закордонец Л.А., Булак В.И. Питательность соломы в связи с ее физико-химической обработкой и культивированием гриба Fusarium SP51 // Научно-технический бюллетень. - Харьков, 1983. - №37. С. 27-29.

Давыдкина Т.А. Стереумовые грибы Советского Союза. - Л.: Наука, 1980. -150с.

Доспехов Б. А. Методика полевого опыта. - М.: "Агропромиздат", 1985. -351с.

Дудка И.А., Щепа В.В., Вассер С.П. и др. Вешенка обыкновенная. - Киев: Наук, думка, 1976-а. - 110с.

Дудка И.А., Вассер С.П., Бухало A.C. и др. Промышленное культивирование съедобных грибов. - Киев: Наук, думка, 1978. - 264 с.

Дудка И.А., Вассер С.П., Элланская И.А. Методы экспериментальной микологии: Справочник, - Киев: Наук, думка, 1982. - 550 с.

Дудка И.А., Бухало A.C., Чернуха Б.А. Получение пищевой биомассы на основе глубинного культивирования высших съедобных базидиомицетов //Производство высших съедобных грибов в СССР. Тез. докл. Всесоюзного совещания. -Чернигов, 1985г.

Дудка И.А., Дворнина A.A., Бисько H.A. и др. Lentinus edodis (Berk) sing (сии-таке) - перспективный объект современной биотехнологии. Методологи-чесие основы познания биологических особенностей грибов - продуцентов физиологически активных веществ и пищевых продуктов. // Материалы 1-й Международной конференции. - Донецк. 1997. - С. 77 - 78.

Дьяков Ю.Т., Трубе Е.Т., Камзолкина О.В. Критерии отбора и гибридизации гомокариотических штаммов Agaricus bisporus // Промышленное культивирование съедобных грибов. Тез. докл. IV Совещания 5-6 окт. 1993. - Донецк. 1993 - С.6.

Ежов В.Н., Баранова С.В., Кольцова И.Ф. и др. Качество плодовых тел вешенки, выращенных на различных субстратах с использованием посевного мицелия на виноградной выжимке. // Материалы 1-й Международной конференции. - Донецк. 1997. -С. 57 - 60

Жаков С.И. Климат // Природа Пензенской области. - Саратов, 1970. - С. 47

Зарудная Г.И. Влияние различных источников углерода и азота на рост некоторых видов грибов рода Coprinus // Микология и фитопатология. - 1971. -Т. 5, №2. - С.133 - 136.

Зерова М.Я., Дудченко Л.Г., Роженко Г.Л. Види роду Marasmius в умовых культурах як джерело б1яка та вгтамишв // Укр. ботан. журн. - 1970. - Т. 27, №6. С. 126 - 132.

Иванов А.И. Макромицеты Пензенской области ( порядки Polyporales s. str. Boietales, Agaricales, Russulales и группа порядков Gasteromycetes ) : Авто-реф. дис. ... канд. биол. наук. - Л.: ЛГУ, 1983. - 15с.

Иванов А.И., Барсукова Т.Н. Pleirotus cornucopiae (Paulet) Rolland - перспективный вид для искусственного культивирования. // Микология и фитопатология. - 1987. - Т.21, №2. - С. 113-117.

Иванов А.И. Грибы семейства Agaricaeeae в условиях Приволжской возвышенности // Микология и фитопатология. - 1989. Т. 23. № 1. - С. 28 - 33

Иванов А.И., Антонов И.С., Власова Т.Г. Растительность Пензенской области. -Саратов, 1989. - 40с.

Иванов А.И., Вы щепан С.Л. Поощрение макромицетгв на меж! лесостепо-Boi та степово! зон // Украшсыкий ботаничный журнал, - 1990. - № 6. - С. 44 -46.

Иванов А.И., Гарибова Л.В. К вопросу о дикорастущем шампиньоне дву-споровом // Проблемы культивирования съедобных грибов в СССР: Тез. Докл. III Всесоюз. Совещ. - Пущино: Путь, - 1991. - С. 16 - 17.

Иванов А.И. Биота макромицетов лесостепи правобережного Поволжья : Автореф. дис.... докт. биол. наук. - Москва, - 1992. - 34с.

Иванов А.И., Иванова В. А. Макромицеты рудеральных местообитаний Пензенской области. 1. Видовой состав // Микология и фитопатология. - 1997. - Т.31. вып.4 - С.10-13.

Каламеэс К.А. Агариковые грибы Эстонии : Автореф. дис. ... д-ра биол. наук. -Таллин. 1975. - 110с.

Каламеэс К.А., Ваасма М. Грибы песчаных пустынь Средней Азии // Материалы VI конференции по споровым растениям Средней Азии и Казахстана. -Алма-Ата. 1978.-С. 168-169.

Каламеэс К.А., Иванов А.И. Lepista saeva var. anserma (Fr.) comb, nova found in Russia. // Folia cryptogamica Estonica. - Tartu. 1992. - 32 c.

Кашкин H.H., Блинов H.H., Кашкин К.П. Микробиология. - Л.: Медицина, 1968. - 362с.

Кипень А.Н. Полях В.А. Из опыта работы негосударственной специализированной лаборатории по производству мицелия и выращиванию грибов ве-шенки обыкновенной // Промышленное культивирование съедобных грибов. Тез. Докл. IV совещания. - Донецк. 1993. - С. 67 - 69.

Клечак И.Р., Бисько H.A., Ежов В.Н., Танащук Т.Н. Физиология роста сиитаки на экстракте из виноградных выжимок // Материалы 1-й Международной конференции. - Донецк. 1997. - С. 60 - 63.

Кормщиков П.А. Кальцинирование соломы. - М.: Россельхозиздат, 1974. -

69с.

Кузнецов К.А. Почвы // Природа Пензенской области . -Саратов, 1970. -С. 114-129.

Кузубова И.А., Леванова В.П., Пармасто и др. Получение белкового кормового продукта путем культивирования дереворазру шающих грибов на растительных субстратах. // Биоконверсия растительного сырья. - Рига, 1982. - С 240-243.

Маттисон Н.Л., Фалина H.H., Якимов В.П., Маслова P.A. Протеолитиче-ская активность дереворазрушающих грибов в связи с синтезом белка и биомассы // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. - М.: Л.: Наука, 1965. - С. 33-38.

Мейыелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. -М.: мир, 1967.-347с.

Мелик - Хачатрян Дж.Г. Агариковые ( шляпочные ) грибы // Микофлора Армянской ССР. - Ереван, 1980. - Т.5. - 543с.

Москалец П.В., Иванов А.И. Влияние повышенных концентраций солей на рост мицелиальных культур А. bisporus, А. bitorguis. // Промышленное культивирование съедобных грибов Тез. докл IV совещания.. - Донецк, 1993. - С. 42-43.

Москалец П.В., Иванов А.И. Экологические особенности шампиньона двукольцового (Agaricus bitorguis). // Экология и охрана окружающей среды. 2 Международная научно-практическая конф. Тез. докл. - Пермь, 1995. - С. 1415.

Москалец П.В. Изучение полиморфизма Приволжской популяции шампиньоны двуспорового (Agaricus bisporus). // Проблемы охраны биоразнообразия России. Тез. докл. Всероссийской научно-практической конф - Пенза, 1996. - С. 31-32.

Москалец П.В. Экология дикорастущего Agaricus bisporus (I. Lange ) Imbach в лесостепи правобережного Поволжья (Пензенская область ). Автореферат. дис.... канд. биол. наук. -М. 1997, - 16с.

Мухин В.А. Разложение древесины базидиальными грибами: Автореф. дис. канд. биол. наук. - Свердловск: ИЭРЖ АН СССР, 1977. - 28 с.

Нанагюлян С.Н., Таслахчьян М.Г. Осипян Л.Л. Лигноцеллюлозолитиче-ская активность некоторых базидиальных грибов Армении // Материалы 1-й Международной конф. - Донецк, 1997. - С. 111-114.

Негруцкий C.O.Flammulma velutipes и возможные перспективы его использования. // Методологические основы познания биологических особенностей грибов - продуцентов физиологически активных соединений и пищевых

продуктов: Тез. докл. 1 международной конф. 1-4 окт. 1997 г. - Донецк, 1997 -С. 6-8.

Низковская О.П., Милова Н.М. К сравнительно - физиологической характеристике грибов из порядка афиллофоровых и агариковых в культуре // Кормовые белки и физиологически активные соединения. - JL: Наука, 1973. - С. 13-19.

Нугаева Н.Д., Томилин Б.А. Микромицеты покровной почвы и субстрата, используемых при культивировании шампиньона двуспорового // Микроорганизмы в сельском хозяйстве. Тез. докл. IV Всесоюзной научн. конф. - Пущине, 1992.-С. 153.

Нугаева Н.Д. Микромицеты субстратов, используемых при культивировании Agaricus bisporus ( I. Lange ) Imbach.: Автореф., дис. ... канд. биол. наук. -С.Петербург. 1994. -21 с.

Переведенцева Л.Г. Напочвенные макромицеты в лесных ценозах Прикамья // Микориза и другие формы консортивных отношений в природе. -Пермь, 1977. - С. 67-77.

Переведенцева Л.Г. Агариковые грибы как компоненты лесных биогеоценозов (Центральное Прикамье) : Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Свердловск : ИЭРЖ УНЦ АН СССР, 1980. - 21с.

Переведенцева Л.Г. Конспект агарикоидных грибов грибов (пор. Agarica-less.lat.) Пермской области, Коми-Пермяцкого национального округа. - Пермь. 1997. - 76 с.

Попушой И.С., Дворнина A.A. Перспективы культивирования гриба шии-таке в Республике Молдова // Промышленное культивирование съедобных грибов. Тез. Докл. IV Совещания. -Донецк. 1993. - С. 15 - 16.

Прянишников Н.Д. и др. К изучению влияния лигнина на переваримость грубых кормов. // Успехи зоотехнической науки. - 1935, -Т.1, вып. 1. - С. 1416.

Псурцева Н.В. Flammulma velutipes (Fr.) Sing, как перспективный объект для промышленного культивирования // Промышленное культивирование съедобных грибов. Тез. IV Совещания. - Донецк. 1993 - С. 18 - 19.

Решетникова И.А., Успенская Г.Д. Оксидазная активность некоторых грибов порядка Sphaeropsidales. II Биологические науки. - 1984. - №3. - С. 85 - 88.

Рипачек В. Биология дереворазрушающих грибов. - М.: Лесн. Пром-сть, 1967,-274с.

Самохвалов С.Г., Горшкова Г.И. и др. ГОСТ 13496.4 - 84. - М.: Издательство стандартов, 1984. - 15 с.

Сафрай А.И., Гарибова Л.В. Взаимосвязь почвенных микро - и макроми-цетов в биогеоценозах // Изучение грибов в биогеоценозах. Сим поз. - Л.: Наука, 1977. - С. 105-107.

Семерджиева М. Генетический анализ мицелиальных культур гименоми-цетов // Микология и фитопат. - 1977. - T.l 1, №3 - С. 199 - 206.

Сержанина Г.И. Шляпочные грибы Белорусии : Определитель и конспект флоры. - Минск : Наука и техника, 1984. - 407с.

Соловьев В.А., Гашкова М.Я., Мацкова Е.Ф и др. Улучшение кормовых свойств торфа путем выращивания на нем дереворазрушающих грибов // Экология и защита леса. - Л., 1984. - С. 129 - 132.

Спрыгин И.И. Описание степи около д. Поперечной Пензенского у. и заповедного участка на ней. // Работа по изучению Пензенских заповедников. -Пенза, 1923.-С. 1-45.

Спрыгин И.И. Растительный покров Пензенской губернии. // Материалы к познанию растительности Среднего Поволжья: Научн. наследство. - М.: 1986. -Т.П.-С. 254-269.

Сухомлин М.Н. Плодоношение моноспоровых культур Flammulina velutipes // Материалы 1-й Международной конф. - Донецк. 1997 - С. 63 - 65.

Тишлер В. Сельскохозяйственная экология: Пер с нем. / Под ред. М.С Ги-лярова. - М.: Колос. 1971. -434 с.

Торев А., Михайлов П., Стефанов С. И др. Белтьчният проблем и мицельт на няком видове висши Гьби // Научн. тр. Висш. селлскостоп. ин-т в Коларов -Пловдив, 1970. - Т. 19, №4. - С. 143 - 147.

Торев А., Михайлов П., Стефанов С. Мицельт от висши гьбибетьчен концентрат за хранительни цели // 3 конгр. по микробиологии. - София, 1975. - С. 145 -148.

Трембач О.Г. Плодоношение некоторых агариковых грибов в культуре, в зависимости от температуры и освещения // Микология и фитопатология. -1974. - Т.8, №6. - С. 528 - 530.

Уранов А.А. Материалы к фитосоциалогическому описанию заповедной степи Пензенской губ. В связи с законом константности. // Тр. по изуч. Заведн. Отд. Охраны природы Главнауки НКП РСФСР, 1925, Вып. 7. - С. 1 - 40

Фериаль Маавад И. С. Изоферментные маркеры штаммов Agaricus bis-porus (Lange) Imbach. : Автореф. дис. канд. биол. наук. - М.,1992. - 20 с.

Халикова М.М. Макромицеты . Ташкентской области : Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Ташкент, 1989. - 16с.

Шемаханова М.Н. Микотрофия древесных пород. - М.: Изд-во АМ СССР, 1962.-276с.

Шиврина А.Н. Биологически активные вещества высших грибов. - JL: Наука, 1965. - 199с.

Шиврина А.Н., Черотченко Ю.П. Изучение стеринов грибов семейства Boletaceae // Микология и фитопатология. - 1970. - Т.4, № 2. - С. 187-193.

Шумилин И.С. и др. ГОСТ 13496.2 - 91. - М.: Издательство стандартов, 1991.-13 с.

Aschan К. The production of fruit bodies in Collybia veletipes. I. Influence of différent culture conditions // Physiol. plant. - 1954a. - 7, №3. - P. 571 - 591.

Baker A.I. , Millett M.A., Satte L.D. Wood and wood - based regidues in animal feeds // Cellulose technology research Ed. A. F. Iurbak. ACS Symposium. -1975. Ser. 10. - S. 75 - 105.

Bavendamm W. Uber den Einfluss des Darrens von Holz auf seine Pilranfallig-keit. Holz als Roh - und Werkstoff. - 1943. - P. 161 -166.

Bavendamm W. Neue Untersuchungen über die Lebensbedingungen holzzersto-render Rilze. Zentralbit. Bakter. - 1928. - S. 172 - 452.

Bigelow H.E. On basidiocarp production by cultured Jlitocybe // Mycologia. -1970. -62,№1. -P. 203-205.

Brain C., Juinberteau I., Pirobe L. Obtention de fructification du pied bleu, Ro-dopaxillus nudus. (Fr. ex Bul.) en conditions artificiellts // C.r. Acad. Agr, France. -1979. №16.-P. 65-68.

Brischt N.S., Harsh N.S.K. Biodegradation of Lantana camara and Waste-paper to cultivate Agaricus bisporus (Lange) Singer. - 1985. - Vol.12, № 2. - P. 167 - 172.

Chang S.T., Hayes W.A. The biology and cultivation of edible mushrooms. New Vork etc. : Acad. Press, - 1978. - 819p.

Day W.C., Pelczar M.I. and Jottlieb S. The biological degradation of lignin. I. Utilisation of lignin by fungi. Arch. Biochem. - 1949 - S. 360 - 369.

Donefer E., Edeleye I.O.A., lones T.A.O.C. Effect of urea supple mentation on the nutri-tive value of NaOH - treated oat straw // Adv. Chem. - 1969. - 95, №2. -P. 238 - 342.

Eilers F.I. Jrowth regulation in Coprinus radiatus // Arch. Microbiol. - 1973. -96, №4.-P. 353-364.

Esser K. Jenetic control of fruit body formation in higher Basidiomyctes // Symp. summar. commun. 1 Oth Intern, congr. sei. and cultivât, edible fungi. Agui-taine etc., Iune 5-15, 1978. - Bordeaux, 1978. - P. 1 - 2.

Falck R. Uber korrosive und destructive Holzzersetzung und ihre biologische Bedeutung. Ber. Dtutsch. Bot. Jes. 1926. - S. 652 - 664.

Freis N. Factors promoting Coprinus fimentarius under hing temperature conditions // Physiol. Plant. - 1953. - 6, №4. - P. 551 - 563.

Galleymore B. The development of fructifications of Lentinus tuberregium Fries in culture // Trans. Brit. Mycol. Soc. - 1949. - 32, № 3/4. - P. 315-317.

Han I.W., Schyten H.A.I., Callihan C.D., Anderson A.W. Semisolid fermentation of rye-grass straw // Ibid. - 1975b. - 30, №6. - P.930 - 934.

Heltay I, Petofi S. Mycofutter // Mushrom Sciense, 7: Proc. Seventh Intern Sei. Congr. Cultivat Edible Fungi. - Phyladelphia, 1965. - P.287- 296.

Herzig I., Dvorak M., Veznik Z. Tratment of liter straw by splication of the fangus Pleuro-tus ostreatus (Jacg.) Fr. // Biol. Chem. Viz. Hospod. Zvirat. - 1968. - 3, №3. - P. 249-253.

Higuchi T. and Hayashi I. The enzymatic oxidation of lignin. I.Iap. Wood Res. Soc.,-1956.-2-S. 31-37.

Higuchi T. and Kitamura K. Biochemicai study of wood - rotting fungi. 2. Re-latio between Bavendamreaktion and tyrosinase. I.Iap. Forestry Soc. 35, 1953. S. 350-357.

Horriere F. Etude comparative des exigences trophigues de guelgues basidiomy-cetes super-ieurs fructifiant sur milieux synthetigues. Analyse bibliograhigue // Muschroom Sei. - 1979. - 10, pt.l. - P. 665-683.

Jablonsky J., SRB A., Sasek. Pestovani jedlych hub, Vidalo Statni zemedelske nakladatel-stvi Praha roku. 1985. - P. 256

Kaneshiro T. Lignocellulosic agricultural waste degraded by Pleorotus ostreatus // Develop. Ind. Microbicl. - 1977. - 18, № 4. - P. 591-597.

Kinugawa K. Collybia velutipes can fruit under total darkness // Irans. Mycol. Soc. lap. - 1977. - 18. - P. 353-356.

Lyr H. Uber den Nachweis von Oxydases und Peroxydasen bei höheren Pilzen und die Be-deutung dieser Enzyme fur die Bavendamm - Reaktion. Planta, 1958. -50. - S. 359-370.

Lyr H. Untersuchngen über Peroxydasen höherer Pilze. Planta. - 1956. -48 - S. 239-265.

Lyr H. Die Induktion der Laccase - Bildung bei Collybia velutipes Curt. Arch. Mikrobiol. 1958.-28. -S. 310-324.

Marr C.D. Laccase and tirosinase oxidation of spot - test reagents // Myco-taxon. - 1979. - 9, №1. - P. 244-276.

Melin E. Experimentalle Untersuchungen über die Konstitution und okologie der Mykorrhizen von Pinus silvestris L. und Picea abies (L.) Karst. // Mykol. Untersuch. Und Ber. - 1923. №2. - P. 73-335.

Melin E. Untersuchungen über die Larix - Mykoirhiza. I. Synthese der Mykor-rhiza in Reinkultur // Sven. bot. Tidsskr. - 1922. - 16, № 2. -P. 161-196.

Michael E., Hennig B., Kreisel H. Handbuch fur Pilzfreunde, VEB Gustav Fischer Verlag Jena, 1979. - S. 382

Moser. Die Rohrlinge und Blatterpilze (Poliporales, Boletales, Agaricoles, Rus-sulales). 5 Aufl. Stutgart. - 1983. -N. V. - 172 p.

Niederpruem D.I. Role of carbon dioxide in the control of fruiting of Schizo-phyllum com-mune //1. Bacteriol. - 1963. - 85, №6. - P. 1300-1308.

Nobles M.K. Cultral characters as a guide to the taxonomy of Polyporaceae // Evolution in the Higher Basidiomycetes: An Int. Symp./ Ed. R. Peterson. - Knox-ville: Univ. Ienn. press, 1971. - P. 169-192.

Nobles M.K. Identification of cultures of wood - inhabiting Hymenomycetes // Ibid. - 1965. - 43, №9. - p. 1097-1139.

Pritchard J.I., Pidgen W.I., Minson D.I. Effect of gamma radiation on the utilization of wheat straw by rumen microorganisms // Can. I. Anim. Sei. - 1962. - 42, №2,-P. 215-217.

Robak H. Cultural studies in sone Norwegian wood deatroying fungi. Vest. Forst. For-soksstst. Bergen. 1942. -№25. -p 125.

Rypacek V. Die pH - Regulation des Mediums als Vitalitatsindikator der pflanzengewebe. Studia Bot. Cech. 1939. - 2. -S. 6 - 22,

Rypacek V. Studien über die pH - Regulation durch Pflanzegewebe. Studia Bot. Cech. 1940.-3. - S. 81-129.

Schanel L., Herzig I., Dvorak M., Veznik Z. Zpusob vyuziti mene hodnotnych druhu slamy ke krmnem ucelum // Zleps. Navrh. - 1966. - 13, № 1/4. - S. 15-20.

Schimazono H. Oxalic acid decarboxylase, a new enzyme from the mycelium of wood - deutroying fungi. I. Biochen. (Iapan) 1955. - 42. -S. 321-340.

Semerdzieva M. Pestovani a morfologicka pozorovani nekterych nub celedi Agaricaceae in vitro // Ces. mykol. - 1965. - 19, №4. - P. 230-239.

Semerdziewa M., Cejp K. Investigation of mycelial growth in some gill fungi under labo-ratory conditions // Folia microbiok. - 1966. - 11, №2. - P. 146-154.

Singer R. Mushrooms and Iruffles. - London etc., 1961. - 272p.

Stalpers I.A. Identification of wood - inhabiting Aphyllophorales in puze culture //Stud. Mycol. - 1978. - №16. - 248p.

Tuite J. Natuaral and Sinthetic Culture Media: Fungi. Jn: CRC Handbook Series in Nutrition and Food. - 1978, vol. Ill, sect. G, - P. 427-507.

Vetter I. A tapkozeg szenes nitrogenfrrasainak hatasa az Agrocybe aegeriza in vitzo teimot-estkepze - sere // Bot. kozl. - 1977. - 64, №2. - P. 93 - 99.

Wessels I.J.H. Biochemistry of sexual morpholenesis in Schizophyllum commune: effect of mutations affecting the incompatibility system on cellwall metatoliam //1. Bacteriol. - 1969. - 98, №2. - P. 697 - 704.

Zadrazil F. Influence of C02 concentration on the mycelium growth of the Pleu-rotus species // Eur. J. Appl. Microbiol. - 1975.- 1, №4. - P. 327-335

Zadrazil F. The use of plant wasite for production of feed and edible fungi // 5-th Intern. Ferment symp., 4 th Intern spec symp.yeasts.: Abstr. Pap -Berlin, 1976. -P. 23-25

Zadrazil F., Conversion of different plant waste into feed by Basidiomycetes // Europ. J. Appl. Microbiol, and Biotechnol. - 1980. Vol.9, №3. - P. 243 -248.