Доклиническое изучение фармакокинетики и фармакодинамики нового антиаритмического средства III класса - кардиоциклида тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат биологических наук Кабанова, Ирина Александровна

• Кабанова, Ирина Александровна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кабанова, Ирина Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОСНОВНЫЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ В ПОКАЗАТЕЛЯХ ФАРМАКОКИНЕТИКИ И ФАРМАКОДИНАМИКИ

АНТИАРИТМИЧЕСКИХ СРЕДСТВ III КЛАССА. (ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Современное состояние проблемы сердечных аритмий.

1.2Сравнительные особенности некоторых антиаритмических средств III класса.

1 .ЗФармакокинетика основных антиаритмических средств

Шкласса.

1.3.1 Фар м а коки нетика бретилиума.

1.3.2Фармакокинетика N - ацетилпрокаинамида

NAPA).

1.3.ЗФармакокинетика соталола.

1,3.4Фармакокинети1?а амиодарона.

1,3.5Фармакокинетика азимилида.

1,4Антиаритмическая активность дициклогексиламидов N замещенных аминокислот.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1Физико - химические свойства кардиоциклида.

2.2Метод количественного определения кардиоциклида на

ВЭЖХ.

2.2.1Условия проведения анализа.

2.2.2Валидация метода.

2.3 Под готовка проб.

2.3.1 Подготовка животных к эксперименту и взятие биологического материала.

2.3.2Подготовка биологических проб для анализа на ВЭЖХ.

2.4Анализ фармакокинетических данных.

2.5.Метод изучения взаимодействия фармакокинетики и динамики развития антиаритмического эффекта кардиоциклида.

2.6Статистическая обработка данных.

Глава 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1 Экспериментальное изучение фармакокинетики кардиоциклида в опытах на крысах.

3.1,1Фармакокинетика кардиоциклида в крови крыс после однократного введения.

3.1.2Фармакокинетика кардиоциклида в крови крыс после многократного введения.

3.1 .ЗФармакокинетика распределения кардиоциклида в ткани органов крыс.

3.1.4Кинетика выведения кардиоциклида из организма крыс и метаболизм.

3.2Изучение фармакокинетики кардиоциклида в опытах на кроликах и взаимодействие фармакокинетических пока зателей с динамикой развития эффекта.

3.2.1Фармакокинетика кардиоциклида в опытах на кроликах.

3.2.2Измерение фармакодинамических показателей кардиоциклида в опытах на кроликах.

З.ЗИзучение фармакокинетики кардиоциклида в опытах на собаках.

Глава 4.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1 Результаты фармакокинетического исследования кардиоциклида после внутривенного введения крысам дозы 10 мг/кг.

4.2Результаты фармакокинетического исследования кардиоциклида после введения внутрь крысам дозы 20 мг/кг.

4.3Результаты фармакокинетического исследования кардиоциклида после шестикратного введения внутрь крысам дозы 20 мг/кг.

4.4Результаты исследования влияния введения различ- ных доз на фармакокинетику кардиоциклида.

4.5 Результаты фармакокинетического исследования распределения кардиоциклида в органы и ткани крыс после внутрибрюшинного введения крысам дозы

10 мг/кг.

4.6Изучение коэффициента распределения кардиоциклида в органах и тканях крыс после внутрибрюшинного введения крысам дозы 10 мг/кг.

4.7 Результаты фармакокинетического исследования динамики тотального содержания кардиоциклида в крови, органах и тканях крыс после внутрибрюшинного введения крысам дозы 10 мг/кг.

4.8Результатыизучения кинетики выведения кардиоциклида с мочой.

4.9Результаты изучения биотрансформации кардиоциклида.

4.10Результаты изучения динамики развития противо-аритмического эффекта у кроликов после введения кардиоциклида внутривенно в дозе 5 мг/кг и введения внутрь в дозе 10 мг/кг.

4.11 Результаты изучения фармакокинетики кардиоциклида в опытах на кроликах.

4.12Результаты изучения фармакокинетики кардиоциклида в опытах на собаках.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Доклиническое изучение фармакокинетики и фармакодинамики нового антиаритмического средства III класса - кардиоциклида»

При изучении лекарственных средств на доклиническом и клиническом этапах, большое значение уделяется их фармакокинетике, то есть исследованию закономерностей распределения веществ в организме животных и человека, их биологической трансформации и выведения. Знание фармакокинетики, как показывают многочисленные исследования, обеспечивают возможность более эффективного и, вместе с тем, более безопасного использования лекарственных средств в клинической практике. Фармакологическая активность антиаритмических препаратов, как и других лекарственных средств, определяется не только их взаимодействием со специфическими рецепторами, но также в значительной мере зависит от способности этих веществ достигать места их действия в концентрациях, необходимых для проявления эффекта (Лысковцев В.В 1995). Эта концентрация в свою очередь зависит от ряда факторов - физико-химических свойств исследуемого вещества, абсорбции, распределения в органах и тканях, сродства к соответствующим рецепторным структурам, биотрансформации, скорости выведения из организма. Важную роль играют состояние организма, возможные патологические изменения обменных или выделительных систем, факторы внешней среды. Превращения, которым лекарственное вещество подвергается в организме, могут иметь следствием образование метаболитов, обладающих большей или меньшей фармакологической активностью. (Seymour K.S. 1984). Все сказанное свидетельствует о важности изучения фармакокинетики нового лекарственного средства, то есть всей суммы факторов, определяющих, в конечном счете, его судьбу в организме. Практическое значение фармакокинетики, ее прикладная цель заключается в том, чтобы на основе данных о судьбе лекарственного средства в организме рекомендовать оптимальную схему его дозирования и применения, обеспечивающую поддержание эффективной концентрации препарата в пределах терапевтического диапазона. С другой стороны фармакокинетические данные позволяют объяснить различия в реакции больного на лекарственное вещество, предупредить возникновение нежелательных эффектов препарата (Мазур Н.А. 1982).

Актуальность проблемы. В течение последних лет развитие знаний в области антиаритмических средств оказало существенное влияние на принципы терапии аритмий. После исследования CAST (Cardiac Arrhythmias Suppression Trial investigators 1989, 1992), показавшего, что длительное применение антиаритмических препаратов 1С класса по классификации Vaughan Williams Е.М. (1984) увеличивает смертность пациентов, перенесших инфаркт миокарда, значительно возрос интерес к препаратам III класса -блокаторам калиевого канала (Каверина Н.И. Лысковцев В.В. и соавт. 2000; Roden D.M. 1994Каверина Н.В. 1982). Действие этих препаратов связано с удлинением реполяризации желудочков, результатом этого является увеличение рефрактерности.

Основным механизмом действия большинства антиаритмиков III класса (сематилид, дофетилид и d-соталол) является блокада быстрого компонента калиевого тока задержанного выпрямления (I к г). С этим связана их способность увеличивать эффективный рефрактерный период в большей степени при низкой частоте сердечных сокращений, чем при высокой. Поэтому они недостаточно эффективны при тахиаритмиях и могут проявлять аритмогенное действие при брадикардиях, что связано с удлинением интервала

QT(Mclntosh М.А. 1994; Groh'W.J. 1997).

Все сказанное делает особенно актуальным поиск новых фармакологически активных средств в ряду и изучение III класса антиаритмических препаратов, действие которых, в отличие от имёющихся лекарственных средств не ослабевает при тахиаритмиях (Каверина Н.В. и соавт.1998). В НИИ фармакологии РАМН из большого ряда производных дициклогексиламидов аминокарбоновых кислот было отобрано и исследовано наиболее активное соединение AJ1-275, проявляющее свойства антиаритмических препаратов III класса, получившее название Кардиоциклид (Sauer W et al. 1995; Каверина Н.В. с соавт. 1998).

Химическое название: Гидрооксалат N1 N дициклогексиламида - N'- ( 3 - диэтиламинопропил)- N' - ( п -нитробензоил ) аминоуксусной кислоты.

Установлено, что это вещество проявляет свойства, типичные для антиаритмических средств III класса. Механизм действия Кардиоциклида обусловлен блокадой быстро активируемого (Ikr) и медленно активируемого (Iks) компонентов калиевого тока задержанного выпрямления. Вместе с тем известно, что именно Iks участвует в процессе реполяризации при высокой частоте сердечного ритма.

Проведенные исследования фармакологических свойств и электрофизиологических механизмов действия подтвердили принадлежность лекарственного вещества к III классу антиаритмических средств.

Представилось актуальным изучить фармакокинетические параметры этого соединения в эксперименте на животных, определить, какими факторами в большей степени обусловлена продолжительность действия Кардиоциклида -особенностями его распределения или интенсивными метаболитическими превращениями. Именно эти исследования обеспечивают анализ закономерностей функционирования лекарственного вещества в организме, служат научной основой рациональной и безопасной терапии и являются неотъемлемой частью общей характеристики лекарственных средств. Результаты позволяют получить совокупность количественных характеристик поведения Кардиоциклида в организме, на основании которых могут быть разработаны оптимальные схемы назначения препарата, обеспечивающие максимальный терапевтический эффект при минимальном риске побочных действий.

Цель исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение фармакокинетики Кардиоциклида в эксперименте, взаимосвязи фармакокинетики с динамикой развития эффекта, выявления эффективных концентраций, кинетикой выведения исследуемого вещества из организма и его биотрансформации. Задачи исследования:

1. Изучение фармакокинетики на крысах для выяснения особенностей распределения и выведения Кардиоциклида после внутривенного введения и введения внутрь.

2. Выявление линейной зависимости между уровнями содержания Кардиоциклида в крови и вводимой дозой.

3. Изучение выведения Кардиоциклида с мочой, путей биотрансформации и установление химической структуры возможных метаболитов.

4. Изучение фармакокинетики на крысах/собаках и кроликах с целью выявления межвидовых различий.

5. Изучение взаимосвязей между динамикой развития эффекта и уровнями концентраций Кардиоциклида в крови. Нахождение эффективных концентраций лекарственного вещества у разных видов животных.

Научная новизна. Впервые разработаны оригинальные высокочувствительные и селективные методы количественного и качественного определения

Кардиоциклида с использованием ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии), позволившие провести исследования фармакокинетики его в эксперименте.

Показаны межвидовые различия в фармакокинетике субстанции Кардиоциклида при разных способах введения его трем видам животных (крысам, кроликам и собакам).

Найдена линейная зависимость между уровнями Кардиоциклида в крови крыс и вводимой дозой.

Расчет фармакокинетических параметров Кардиоциклида после многократного введения крысам и доказательство соответствия экспериментальных данных и теоретически рассчитанных концентраций его в крови позволили сделать вывод о том, что шестикратный прием Кардиоциклида не влияет на активность метаболизирующих систем организма.

Впервые изучены пути превращения Кардиоциклида у крыс и установлены химические структуры возможных метаболитов. /

На основании изучения распределения Кардиоциклида по тканям органов доказана тропность его к тканям сердца, и тот факт, что продолжительность циркуляции его в организме связана со скоростью высвобождения его из тканей мышц. Выявлена зависимость антиаритмического эффекта от концентрации кардиоциклида в крови.

Научно - практическая значимость. Разработан метод анализа Кардиоциклида в биологических жидкостях с использованием ВЭЖХ, на основании разработаной методики проведено изучение экспериментальной фармакокинетики.

Изучение фармакокинетики Кардиоциклида на животных позволило: выявить сорбционные свойства тканей организма; установить характер выведения его с мочой; доказать линейность зависимости между уровнями содержания Кардиоциклида в крови и вводимой дозой; подобрать параметры для математической модели и создать алгоритм позволяющий прогнозировать уровень концентрации в любой момент времени после однократного и многократного введения; установить концентрации его в крови, при которых наблюдается антиаритмический эффект Кардиоциклида у кроликов.

Найденные фармакокинетические закономерности позволяют дать некоторые практические рекомендации при создании лекарственной формы и режиму дозирования его при клиническом изучении.

• Для поддержания эффективных концентраций Кардиоциклида в крови его достаточно принимать не чаще 2-Зраза в день.

• Дозами, при которых наблюдается в крови необходимый уровень концентрации Кардиоциклида и проявляется желаемый антиаритмический эффект, могу быть - 1 -2,5мг/кг

• Многократное применение Кардиоциклида не должно сказаться на основных параметрах фармакокинетики.

• Кардиоциклид не обладает необратимыми кумулятивными свойствами.

Связь с планами научных исследований.

Исследование выполнено в рамках плановой тематикой НИИ фармакологии РАМН и проекта «Разработка фармакологических средств регуляции сердечно - сосудистой системы» подпрограммы «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза» ФЦНТП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения».

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Кабанова, Ирина Александровна

126 ВЫВОДЫ:

1. Разработана и апробирована в эксперименте методика количественного определения кардиоциклида в биологическом материале с использованием хорошо воспроизводимой техники экстракции и селективного анализа на высокоэффективном жидкостном хроматографе.

2. Анализ результатов изучения фармакокинетических параметров Кардиоциклида при однократном введении различных доз позволил установить линейную зависимость между вводимой дозой и концентрацией вводимого вещества в крови.

3. Изучение шестикратного введения Кардиоциклида позволило установить, что его многократное введение не изменяет фармакокинетические параметры фармакологического средства.

4. Выявлены межвидовые различия фармакокинетических параметров Кардиоциклида. Быстрее всего лекарственное вещество распределяется в органах крыс и собак и в два раза медленнее у кроликов.

5. Минимально эффективные уровни концентраций для кроликов составляют 200 - 400 нг/мл, для собак 120 - 200 нг/мл.

6. Выделены основные метаболиты Кардиоциклида и установлена их химическая структура:

М - 1 - Дициклогексиламид оксиуксусной кислоты

М - 2 - NN - Дициклогексиламид N' - метил - N'(3 - окси - 4 - нитрозобензоил) аминоуксусной кислоты

М - 3 - Диэтиламинопропиламид 4 - нитро бензойной кислоты

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При изучении фармакокинетики кардиоциклида на трех видах животных (крысах, кроликах и собаках) получены межвидовые различия после внутривенного введения дозы 5 мг/кг всем видам экспериментальных животных; введения внутрь дозы 10 мг/кг кроликам и собакам и дозы 20 мг/мл крысам. На рисунке 20 представлены концентрационные кривые после внутривенного введения раствора субстанции кардиоциклида крысам, собакам и кроликам.

Альфа фаза, характеризующая процесс распределения исследуемого вещества после внутривенного введения (таб.34) наименьшая у кролика Ка=1,083. У крыс Ка имеют значения 1,145 час"1 , а у собак скорость распределения почти в 2 раза выше и равна Ка=2,311 час"1. Концентрации на терминальном участке фармакокинетической кривой остаются на высоком уровне у кроликов, что и характеризуется фармакокинетическим параметром -объемом распределения в квазистационарном состоянии (Vss). Для кроликов Vss=10,5E^/Kr, в то же время у крыс и собак значения этого параметра почти в 2 раза выше (соответственно 18,6 и 19,8л/кг). Более низкие значения объема распределения указывают на большое содержание кардиоциклида в тканях. С этим связано, по-видимому, то, что кролики хуже переносят исследуемые дозы вещества.

Скорость выведения кардиоциклида, характеризующая терминальный участок на фармакокинетических кривых на рисунке 20 (таб. 34) указывает на то, что у крыс ( Т-|/2р= 4,72ч ) он выходит в 1.6 раза быстрее чем у собак ( Т1/2р= 7,72 ч ) и быстрее чем у кроликов в 1.9 раза (Ti/2p= 8,95ч).

Рис. 20 Концентрационные профили Кардиоциклида после внутривенного введения дозы 5 мг/кг крысам, кроликам и собакам.

Таб. 34. Усредненные фармакокинетические параметры кардиоциклида у крыс, кроликов и собак после введения внутривенно в дозе 5 мг/кг.

Пар ам. К а 1/4 кр 1/4 T-I/2CC час Т "|/2 Р час MRT Час CI мл/ мин /кг V1 л/кг Vss л/кг AUC Нг*ч /мл

Кры сы 1,145 ± ,102 0,147 ±0,11 0,606 ±0.08 4,72 ±1,04 5,91 ±0,95 49,7 ±4,6 7,18 ±0.9 18,6 + 2,7 1680 ±113

Крол ики 1,083 ±0,039 0,077 ±0,02 0,638 ±0,02 8,95 ± ,66 10,21 ±0,75 24,3 ± 17,7 4,7 ±,6 10,6 ±6,3 3416 ±459

Соб аки 2,311 ±1,03 0,089 ±0,01 0,302 ±0,09 7,72 ±2,76 7,89 ±3,38 34,5 ±8,7 5,11 ±1,5 19,83 ±5,99 2410 ±550

Среднее время нахождения кардиоциклида в крови (MRT) у исследуемых животных располагается в следующем порядке:

Крысы (5,91часа) < Собаки (7,89часа) < Кролики (10,21часа). Такая последовательность расположения указывает на то, что кардиоциклид выводится из организма кролика почти в 2 раза медленнее, чем у крыс.

При введении внутрь водного раствора субстанции вещества наблюдается быстрое всасывание кардиоциклида из ЖКТ у всех животных. Максимальный уровень концентрации у кроликов после введения дозы кардиоциклида 10 мг/кг достигается к первому часу и составляет 514нг/мл (рис. 21). У крыс максимальный уровень концентрации (Стах = 636,3 нг/мл) наблюдается на 30 минут позже (Ттах = 1,5 часа) после введения внутрь дозы 20 мг/кг. В крови собак кардиоциклид проявляет себя аналогично. Максимум концентрации приходится к 1,5 часам и составляет 262 нг/мл (доза Юмг/кг)., что почти в два раза меньше, чем у кроликов.

У собак наблюдается ярко выраженный второй подъем концентрации, который приходится в среднем к 4 часу. Это, по-видимому, связано с процессами перераспределением кардиоциклида по тканям органов и с внутрипеченочной рециркуляцией. Сравнительное изучение абсолютной биодоступности кардиоциклида на трех исследуемых видах животных показало, что абсолютная биодоступность у крыс и кроликов имеют близкие значения и составляют, соответственно, 0,548 и 0,507. Абсолютная биодоступность субстанции кардиоциклида у собак (f = 0,76) почти в 1,3 и 1,5 раза выше, чем у крыс и кроликов.

700 ч

600

500с; 2 400

С X 300

200

100

0<!

О— крьсы р.о. (20л/г/кг) —о— собаки р.о. 10мг/кг

30 часы кролики р.о. (10л/1"/кг)

Рис. 21. Концентрационные профили Кардиоциклида после введения внутрь кроликам и собакам дозы 10 мг/кг, крысам -20 мг/кг.

Для возможности определения влияния многократного введения кардиоциклида на фармакокинетические параметры проводились изучение фармакокинетики его после шестикратного введения. Крысам с интервалом 24 часа вводился внутрь кардиоциклид в дозе 20 мг/кг (рис.7). Экспериментально найденные концентрации хорошо согласуются с теоретически рассчитанными значениями. Это указывает на то, что шестикратное введение кардиоциклида не влияет на основные фармакокинетические параметры.

Неизменность фармакокинетических параметров и разработанная математическая формула позволяют теоретически предсказывать уровни концентрации после многократного введения кардиоциклида у животных.

Было проведено исследование влияния введения различных доз кардиоциклида на фармакокинетику у крыс. Расчет фармакокинетических параметров доказывает линейность в дозо-зависимых фармакокинетических параметрах. В опытах такая линейная зависимость концентраций кардиоциклида в крови крыс наблюдалась при увеличении дозы от 5 до 15 мкг/мл. В значениях дозонезависимых параметров не наблюдалось достоверных различий.

Были проведены исследования пораспределению кардиоциклида в органах и тканях крыс после введения внутрибрюшинно дозы 10 мг/кг. Для тканей сердца обнаруживаются высокие значения концентраций, близкие к значениям его в печени, что свидетельствует о селективном захвате вещества тканями сердца.

Характер распределения кардиоциклида по органам и тканям указывает на то, что исследуемое вещество, по-видимому, подвергается и внутрипеченочной рециркуляции (рис 8). Об этом свидетельствуют подъемы в уровнях концентраций на фармакокинетических кривых плазмы, селезенки и печени.

О скорости освобождения тканей от кардиоциклида (таб. 25) можно судить по увеличению периода полувыведения из тканей органов, находящихся в следующем порядке: - печень, селезенка, сердце, почки и мышцы( 1.32, 1.63, 2.35, 2.73 и 3,12 часа соответственно).

Показано, что скорость выведения вещества кровью в 1.5-2 раза медленнее, чем освобождение кардиоциклида из исследуемых тканей органов (таб.25). Однако, выведение вещества из мышечной ткани соизмеримо аналогичной константе для крови.

Таким образом, результаты изучения распределения кардиоциклида по органам крыс позволяют заключить, что продолжительность действия его в большей степени связана с общим содержанием неизмененного вещества в скелетной мускулатуре. Значения константы скорости высвобождения кардиоциклида из мышечной ткани близки значениям константы элиминации крови.

Для выяснения сорбционных свойств тканей органов и ткани скелетной мышцы к кардиоциклиду был рассчитан коэффициент распределения (Кр).

Наблюдая динамику коэффициента распределения (табл. 26) по тканям органов крыс, легко заметить, что кардиоциклид после окончания распределения остается в тканях органов в концентрациях, в 6-17 раз превышающих содержание его в крови, и сохраняется такая пропорция на протяжении всей терминальной фазы исследования.

• Анализ динамики изменения коэффициента распределения кардиоциклида указывает на то, что вымывание его кровью из тканей органов происходит быстрее, чем из тканей сердца.

• Высокие значения коэффициента распределения для тканей сердца (К=5.3-6,3) подтверждают тропность кардиоциклида к тканям сердца.

• Скорость выведения кардиоциклида из тканей близка или равна скорости выведения его из крови, так как значения коэффициента распределения остаются на одном уровне на терминальном участке. • Кардиоциклид хорошо связывается с белками тканей, на что указывают высокие значения коэффициента распределения в тканях органов (они значительно выше единицы). Лимитирующей стадией выведения из организма кардиоциклида является высвобождение его из тканей(Таб. 26).

Чтобы оценить вклад каждого органа в общий процесс распределения, связывания кардиоциклида тканями и выведения его были проведены расчеты тотального содержания кардиоциклида в пересчете на весь орган и скелетную мускулатуру. Максимальные концентрации кардиоциклида в тканях органов (таб.27) наблюдаются в следующей последовательности: ткани мышц, печени, сердца, почек, селезенки.

Продолжительность циркуляции кардиоциклида в организме связана с выведением его из тканей скелетных мышц.

Был проведен анализ данных тотального содержания кардициклида во всех изучаемых тканях и крови крыс в «проценте от дозы» вводимого лекарственного вещества в течение 7 часов.

Результаты показывают, что максимальное значение уровня свободного кардиоциклида после внутрибрюшинного введения наблюдается только к 30-ой минуте (5,0%) и держится на одном уровне почти 3 часа (3,9%), затем происходит уменьшение общего содержания свободного кардиоциклида в тканях органов (Таб.27), Малый процент содержания свободного действующего вещества в тканях органов, позволяет сделать вывод, что кардиоциклид претерпевает метаболитическое превращение в организме.

Кинетика выведения кардиоциклида с мочой после введения внутрь крысам в дозе 10мг/кг (рис. 6) свидетельствует о том, что только 7,38 мкг вещества выделяется в неизмененном виде за 48 часов, что составляет 0,63% от введенной дозы. В первые сутки неизмененного вещества выделяется 2,94 мкг. Время полувыведения кардиоциклида составляет 5.1,7 часа, а почечный клиренс - CI = 4,69л/кг.

Были выделены основные метаболиты и с помощью метода масс - спектрометрии и ЯМР спекроскопии установлено их строение: М - 1 - Дициклогексиламид оксиуксусной кислоты, М - 2 - NN - Дициклогексиламид N' -метил - N'(3 - окси - 4 - нитрозобензоил) аминоуксусной кислоты, М - 3 - Диэтиламинопропиламид 4 - нитробензойной кислоты. Можно предположить, что некоторые из исследуемых метаболитов участвуют в формировании антиаритмического эффекта (рис.17).

Была изучена динамика развития антиаритмического эффекта после введения кардиоциклида в опытах на кроликах. Кардиоциклид относится к антиаритмическим препаратам III класса. Основным механизмом его действия является блокада выходящих калиевых токов задержанного выпрямления. Основой его электрофизиологического механизма является удлинение процесса реполяризации, результатом чего является увеличение рефрактерных периодов предсердия и желудочков, от которых зависит антиаритмическое действие препарата. Так как электрофизиологический процесс реполяризации отражает интервал QT, то изменение этого показателя считают основой действия препарата.

Изучалась динамика развития противоаритмического эффекта у кроликов и его фармакокинетика после введения кардиоциклида внутривенно в дозе 5 мг/кг и внутрь в дозе 10 мг/кг.

После введения внутривенно кроликам в дозе 5мг/кг происходило быстрое нарастание значений Qtcorr, и их значения оставались на высоком уровне продолжительное время и, только к 2,5 - 3 часам значения показателя QTcorr возвращались к исходному уровню. Введение кроликам внутрь дозы 10 мг/кг увеличивало длительность интервала QTcorr через 5 - 10 мин, что свидетельствует о быстром проникновении препарата через слизистые оболочки рта и желудка.(таб. 18, рис. 19).

Так как уровень концентраций препарата в крови находится в линейной зависимости от дозы, можно было ожидать, что при возрастании концентрации в крови будет наблюдаться и линейное увеличения значений Qtcorr. Однако удлинение интервала QTcorr наблюдается только до момента достижения кардиоциклидом определенной концентрации в крови - в пределах 300 - 400нг/мл. При дальнейшем увеличении концентрации, даже в 2-3 раза(1176нг/мл), значение показателя QTcorr остается на том же уровне до снижения концентрации вплоть до пороговых значений 300 -400нг/мл. Дальнейшее уменьшение интервала QTcorr до исходных значений наблюдается при концентрации кардиоциклида в крови в среднем 200-240нг/мл

Убедительно доказано, что время реполяризации может увеличиваться только до определенного предела. Приведенные данные позволяют сделать вывод, о том, что для достижения необходимого антиаритмического эффекта следует подбирать дозу кардиоциклида, при приеме которой в крови

125 обнаруживалась бы концентрация препарата в пределах 200 -400 нг/мл. Дальнейшее увеличение дозы не будет приводить к увеличению длительности интервала QT.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кабанова, Ирина Александровна, 2001 год

1. Abrahamsson С, Carisson L, Duker G. Action potential prolongation and early afterdepolarizations induced by class III antiarrhythmic agents in the fetal but not in the adult rat heart. J Mol Cell Cardiol 1992:24(suppl V):S33.

2. Adams PC, Nichoison MR. Storey GCA, et al: Amiodarone tissue dis tribution: relation to adverse effects. Br Heart J 49:297, 1983.

3. Anastasiou-Nana M, Levis GM. Moulopoulos SD: Pharmacokinetics of amiodarene after intravenous and oral administration, int J Clin Pharmacol Ther Tozicoi 20:524, 1982.

4. Anderson JL, Patterson E, Conlon M, et al: Kinetics of antifibrillat-ory effects ofbretylium: Correlatiun with myocardial drug concentrations. Am J Cardiol 46:583, 1980. -----------------------------

5. Anderson JL, Patterson E, Wagner JG. et al: Oral and intravenous bretyliura disposition. Clin Pharmacol Ther 28:468. 1980.

6. Andreasen F, Agerback H, Bjerregaard P, et al: Pharmacokinetics of araiodarone after intravenous and oral administration. Eur J Clin Pharmacol 19:293, 1981.

7. Anttila M. Arstila M, PfefFer M. et al: Human pharmacokinetics of sotalol. Acta Pharmacol et Toxicol 39:118. 1976.

8. Atkinson AJ Jr, Krumlosky FA, Huang CM. et al: Hemodialysis for severe procainamide toxicity: Clinical and pharmacokinetic observations. Clin Pharmacol Ther 20:585, 1976.

9. Bacaner MB. Clay JR, Shrier A, Brochu RM. Potassium channel blockade: a mechanism for suppressing venlricular fibrillation. Proc Nad Acad Sci USA 1985:82:2223-2227

10. Balser JR, Bennett PB, Hondeghem LM, Roden DM. Suppression of time-dependent outward current in guinea pig ventricular myocytes: actions of quinidine and amiodarone. Circ Res 1991:69:519-529.

11. Balser JR, Bennett PB, Roden DM. Time-dependent outward current in guinea pig myocytes: gating kinetics of the delayed rectifier. J Gen Pfysiol 1990,96:835-863.

12. Berglund GG. Descamps R, Thomis JA: Pharmacokinetics of socalol after chronic administration to patients with renal insufficiency. Eu.r J Clin Pharmacol 18:321. 1980.

13. Blair AD. Burgess ED. Maxwell BM. et al: Sotaiol kinetics in renal insufficiency. Clin Pharm Ther 29:457. 1981.

14. Bonati M, Gaspari F, D'Aranno V, et al: Physicochemical and analytical characteristics of amiodarone. J Pharm Sci 73:329. 1984.

15. Breithardt, F Loogan (eds): New Aspects in the Medical Treatment of Arrhythmias: Role of Amiodarone. Munchen, Wien, and Baltimore, Urban and Schwarzenberg p 46, 1983.

16. Brien JP, Jinuno S, Armstrong PW: Rapid high performance liquid chromatographic analysis of amiodarone and N-desethylamiodarone in serum. Can J Physiol Pharmacol 61:245, 1983.

17. Brown HC, Carruthers SG, Kelly JG, et al: Observations on the efficacy and pharmacokinetics of sotaiol after oral administration. Europ J Clin Pharmacol 9:49, 1979.

18. Butcher JS, Strong JM, Lucas SV, et al: Pi-ocainamide and N-acetylprocainamide kinetics investigated simultaneously with stable isotope methodology. Clin Pharmacol Ther 22:447, 1977.

19. Carlson L., Almrgen 0., Durker G. QTU — prolongation and torsade de pointes induced by putetive class III agent in rabbit: Etiology and interventions. Cardiovasc Pharmacol 1990:16:276-285.

20. Camus P. Mehendale HM: Pulmonary sequestration of amiodarone and desethylamiodarone- J Pharmacol Exp Ther 237:867, 1986. Cantor JR, Olman M, Cerreta JM, et al: Amiodarone induced pulmonary fibrosis in hamsters. Exp Lung Res 6:1, 1984.

21. Charier R.Daltur G.// A new antagonist of adrenergic exitation not producing competitive receptor blocade Arch. Jnt. Pharmacodyn. 1962, 139,255.

22. Chi L, Mu D, Driscoll EM, Lucchesi BR. Antiarrhythmic and electrophysiologic actions of CK-3579 and sematilide in a conscious canine model of sudden coronary death. J Cardiovasc Pharmacol 1990; 16:312-324.

23. Coumel PL, Bourain Y: Etude Clinique de effects, phannaeodynamiques et antiarrhychmiques de I'amiodarone. J Agreges 6:69, 1973.

24. Creamer JE, Nathan AW, Shennan A, et al: Acute and chronic effects of sotalol and propranolol on ventricular repolarization using constant rate pacing, act J Cardiol 57:1092, 1986.

25. Cruickshank JM: The clinical importance ofcardioselectivity and lip-ophiiicity in beta-blockers. Am Heart J 100:160, 1980.

26. Dangman KH, Hoffiman BF. in vivo and in vitro antiarrhythmic and arrhythmogenic effects of N-acctyl procainamide. J Pharmacol Exp Ttier 1981;217:851-862

27. Debbas NMG, Bexton RS, dn Cailar C. et al: Relation between myocardial amiodarone concentration and QT interval. Br Heart J: 49:297, 1983.

28. Dorian R, Fain ES, Davy JM, Winkle RA. Udocaine cawies a reversible, conccntratiori-dependent increase in defibrillation energy requirements. J Am Coil Cardiol 1986:8:327-332

29. Drayer DE: Clinical consequences of the lipophilicity and plasma protein binding of antiarrhythmic drugs and active metabclkes in man. Ann NY Acad Sci 432:45, 1984.

30. Echt DS, Black JN. Barbey JT, Coxe DR, Cato EL. Evaluation of antiarrhythmic drugs on defibrillation energy requirements in dogs: sodium channel block and action potential prolongation. Circulation 1989:79.1106-1117.

31. Eichelbaum M, Gross AS. The genetic polymorphism of debrisoquine/ sparteine metabolism—clinical aspects. Pharmaticol Ther 1990:46:377394.

32. Erkkola R, Lamintausta R, Linkko P, et al: Transfer of propranolol and sotalol across the human placenta. Acta Obstet Syn Scan 61:31, 1982.

33. Fain ES, Dorian P, Davy JM, Kates RE, Winkle RA. Effects of encainide and its. metabolites on energy requirements for defibrillation. Circulation 1986:73:1334-1341.

34. Flanagan RJ, Storey GCA, Holt DW, et al: Identification and measurement of desethylamiodarone in blood plasma specimens from amiodarone-treated patients. J Pharm Pharmacol 34:638, 1982.

35. Galeazzi RL, Sheiner LB, Lockwood T, et al: The renal elimination of procainamide. Clin Pharmacol Ther 19:55, 1981.

36. Garrett ER. Gren DR. Bialer .M: Bretylium pharmacokineucs and bioavailabilities in man with various doses ana modes of administration. Blopharm Drulj Disp 3:129-164. 1982.

37. Gintant GA. Two components ofdelayefl rectiner current in canine atrium and ventricle: does Iks play a role in the reverse rate dependence of Class III agents? Circ Res 1996:78:26-37.

38. Groh WJ, Gibson KJ. Maylie JG. Hypotonic-induced stretch counteracts the efficacy of the class III antiarrhythmic agent E-4031 in euinea pie myocytes. "Cardiovusc Res 1996:31:237-245.

39. Hafiajee CI. Love JC, Canada AT, et al: Clinical pharmacokinencs and efficacy of amiodarone for refractory tachyarrhythmia. Circulation67:1347. 1983.

40. Harron DWG, Balnave K. Kinney CD, et al: Effects of exercise tachycardia during 48 hours of a series of doses of atenolol, sotalol and metoprolol. Clin. Pharmacol Ther 29:295, 1981.

41. Heger J J, Prystowsky EN. Zipes DP: Relationship between amiodarone dosage, drug concentrations, and adverse side effects. Am Heart J 106:931. 1983.

42. Heger JJ, Solow EB, Prystowsky EN. et al: Plasma and red blood ceil concentrations of amiodarone during chronic therapv. Am J Cardiol 53:912, 1984.

43. Holt DW. Tucker GT. Jackson PR et al: Amiodarone pharmacokinetics. Am Heart J 106:840, 1983.

44. Jaillon P, Winkle RA. Electrophysiologic comparative study of procainamide and N-acetylprocainamide in anesthetized dogs: concentration-response relationships. Circulation 1979:60:1385-1394.

45. Johansson SR, McCall M, Wilhelmsson J, et al: Duration of action ofbeta-olockers. Clin Pharmacol Ther 27:593, 1980.

46. Johnson G, Regardh CG: Clinical pharmacokinetics of beta-adrenoceptor blocking drugs: Clin Pharmacol Ther 27:593, 1979.

47. Josselson J. Narang PK, Adir J, et al: Bretylium pharmacokinetics in renal insufficiency. Clin Pharmacol Ther 33:144, 1983.

48. Kahela P. Antilla M. Sundquist H: Antacids and sotaiol absorption. Acta Pharmacol et Toxicol 49:181. 1981.

49. Kahela P. Antilla M. Tikkanen R. et al: Effect of food and food constituents and fluid volume on the bioavailability of sotaloi- Acta Pharmacol et Toxicol 44:7. 1979.

50. Kannan R, Dceda N, Wagner R, et al: Serum and myocardial kinetics of amiodarone and its deethylmetabolite after intravenous administration in rabbits. J Pharmw Sci 73:1208, 1984.

51. Kannan R, Nademanee K, Hendrickson J, et al: Amiodarone kinetics after oral doses. Clin. Pharmacol Ther 31:438, 1982.

52. Kannan R, Miller 3, Singh BN: A sensitive HPLC method for the measurement of amiodarone and desethylamiodarone in serum and tissues and its application to disposition studies. J Chromatos 385:225, 1987.

53. Kannan R, Miller 3, Singh BN: Tissue uptake and metabolism of amiodarone after chronic administration in rabbits. Drug MetaS Dispos 13:646, 1985.

54. Karkkainen S: High performance liquid chromatographic determination of sotaloi in biological fluids. J Chromatog 336:313, 1984.

55. Kates RE, Jaillon P, Rubenson DS, et al: Intravenous N-acetylprocainamide disposition kinetics in coronary artery disease. Clin. Pharmacol Ther 28:52, 1980.

56. Maggioni AP, Maggi A, Volpi A. et al: Amiodarone distribution in human tissue after sudden death during Holter monitoring. Am J. Cardiol 52:217, 1983.

57. Marchiset D, Egre A, Bailie Y, et al: Taux myocardiques et plasmatiques de I'amiodarone et de son metabolite n-monodesthyle'. Therapie 38:107, 1983.

58. McJntosh M.A., Tanira M., Pacini D., Kane K.A Comparison of cardiac electrophisiologic effects of NE 10064 with sotalol and E-4031 and their modification by simalation ischemia. J Cardiovasc Pharmacol 1994:23:653—657.

59. Meier J: Pharmacokinetic comparison of pindolol with other beta-adrenoceptor blocking agents. Am Heart J 104:364. 1982.

60. Mostow NB, Noon DL, Myers LM, et al: Determination of amiodarone and its N-deethylated metaboltte in serum by high performance liquid chromatography. J Chromatog 227:229, 1983.

61. Nademanee K, Feld G, Hendrickson J, et al: Electrophysiologic and antiarrhythmic effects of sotalol in patients with life-threatening ventricular tachyarrhythmias. Circulation. 72:555, 1985.

62. Nishimura M, Follmer CH, Singer DH. Amiodarone blocks calcium current in single guinea pig ventricular myocytes. J Pharmacol Exp Tfier 1989;251:650-659.

63. Ochs HR. Greenbiatt DJ. Arendt RM. et al: Single-dose kinetics of oralpropranolol, melroproloi. atenolol and sotaiol: Relation to licoph-ilicity. Arzneimittei Forschung 35:1580. 1985.

64. O'Hare MF, Leahey W, Murnaghan GA, et al: Pharmacokinetics of sotaiol during pregnancy. Eur J Clin Pharmacol 24: 521, 1983.

65. Plomp ТА, Engles M, Robles de Medina EO, et al: Simultaneous determination of amiodarone and its major metaoolite desethylaaiod-arone in plasma, urine and tissues by high performance liquid chromatography. J Chromatog 273:379, 1983.

66. Plomp ТА, Wiersinga WM. Maes RAA: Tissue distribution ofamiod. arone and desethyiamiodarone in rats after multiple mtraperitoneal administration of various amiodarone dosages. Drug Res 35-122-1985.

67. Poirier JM, Aubry JP, Cheymol G. ec al: Pharmacokinetic study of sotaiol administered intravenously to healthy men. Application of high performance liquid chromatography. Therapie 36:465. 1981.

68. Pourbaix S, Berger Y, Desager JP, et al: Absolute bioavailability of amiodarone in normal subjects. Clin Pharmacol Ther 37:118, 1985.

69. Reidenberg MM, Drayer DE, Ley M, et al: Polymorphic acetylation of procainamide in man. Clin Pharmacol Ther 17:722. 1975.

70. Rendt RM. Greenblatt DJ. de Jong et al: Pharmacokinetics, central nervous system uptake and lipid solubility ofpropranolol, acebuiolot and sotaiol. Cardiology 71:307, 1984.

71. Ritschel WA: Compilation of pharmacokinetic parameters of beta-drenergicblocking agents. Drug Inletl Clin Pharm 14:746- 1980.

72. Riva E. Gerna M. Neyroz P. et al: Pharmacokinetics of amiodarone in rats. J Cardiouasc Pharmacol 4:270. 1982.

73. Riva E, Gema M. Latini R, et al: Pharmacoldnetics of aniiodarone in man. J Cardiouasc Pharmocol 4:264, 1982.

74. Roden DM, Reele SB. Higgins SB, Smith R. Oates JA, Woosley RL. Antiarrhythmic efficacy, pharmacokinetics and safety of N-acelylprocainamide in man: Comparison to procninamide. Am J Cardiol 1980:46:463-468.

75. Roden DM, Reele SB, Higgins SB, et al: Antiarrhythmic efficacy, pharmacokinetics and safety of N-acetylprocainamide in human subjects: Comparison with procainamide. Am J Cardiol 46:463, 1980.

76. SalataJJ, Brooks RR. Pharmacology of azimilide dihydrochloride (NE-10064). Cardiovasc Drug Rev 1997,15:137-156.

77. Schnelle K. Garrett ER. Phannacokinetics of the beta-adrenergic blocker sotalol in dogs. J Pharm Sci 62:363, 1973.

78. Shand DG: Phannacokinetic properties of the beta-adrenergic receptor blocking drugs. Drugs 7:39, 1984.

79. Singh B.N. // A simpos. Cardiac arrhytmias with sotalol Am. J/ Cardiol/ 1990.65/2.3.

80. Singh B.N., Williams E.M.// The effects of amiodaron a newel antianginal drugs on cardiac muscle.// Br. J. Pharmacol/1970.39.653 /

81. Singh BN. Deedwania P. Nademanee K: Sotalol: A review of Pharmacodynamics and therapeutic applications. Drugs 34:311. 1987

82. Singh BN. Vaugh.in Williams EM. A third class of antiarrhythmic action: effects on atrial and ventricular intracellular potentials, and other pharmacological actions on cardiac muscle, of MJ 1999 and AH 3747.

83. Br J Pharmacol 1970:39:675-689.

84. Singh BN, Nademanee K, Ikeda N, et al: Pharmacology and electro-physiology of amiodarone: Experimental and clinical correlations.

85. Slaubli M, Bircher J, Galeaz2i RL. et al: Serum concentrations of amiodarone during long term therapy: Relation to dose, efficacy and toxicity. Eur J din Pharmacol 24:485, 1983.

86. Socaniemi EA, Anttiia M. Pelkonen 0, et al: Plasma clearance of propranolol and sotalol and hepatic drug-metabolizing enzyme activity. Clin Pharmacol Ther 26:153, 1979.

87. Sotaniemi EA. Anttiia M, Rautio A, et al: Propranolol and sotalol metabolism after a drinking party. Clin Pharmacol Ther 29:705, 1981.

88. Staubli M, Troendle A, Schmid B, et al: Pharmacokinetics of amiodarone, desethylamiodarone and other iodine-containing amiodarone metabolites. Ear J Clin. Pharmacol 29:417, 1985.

89. Stec GP, Atkinson AJ, Nevin MJ, et al: N-acetylprocainamide pharmacokinetics in functionally anephric patients before and after per-tnbation by hemodialysis. Clin Pharmacol Ther 26:618, 1979.

90. Stec GP, Ruo Tl. Thenot JP, et al: Kinetics of N-acetylprocainamide deacetylation. Clin. Pharmacol Ther 28:659, 1980.

91. Storey GCA, Holt P, Curry PVL. et al: High performance liquid chromatographic measurements of amiodarone and its desethylmetabol-ite: Methodology and preliminary observations. Ther Drug Afonit 4:385, 1982.

92. Sundquist H. Anttiia MS. Simon A. et al: Comparative bioavailability and pharmacokinetics of sotaloi alone and in combination with hydrochlorothiazide. J Clin. Pharmacol 19:557. 1979.

93. Sundquist H, Anttila M. Arstila M: Antihypertensive effects of prac-tolol and sotaloi. Clin Pharmacoi Ther 16:465. 1974.

94. Sundquist H: Basic review and comparison ofbeta-blocker pharmacokinetics. Curr Ther Res 28:388, 1980.

95. Sundquist HK. Anttiia M. Forsstrom J. et al: Serum levels and half-life of sotaloi in chronic renal failure. Ann Clin Res 7:442. 1975.

96. Tande PM, Refsum H. Class III antiarrhythmic action linked with positive inotropy: effects of the d- and /-isomer of sotaloi on isolated rat atria at threshold and suprathreshold stimulation. Plwmwcol Toxicol 1988:62:272-277.

97. Taylor PJ, Cruickshank JM: Distribution coefficients ofatenolol and sotaiol. J Pharm Pharmacol 36:118. 1984.

98. Teo KK, Harte M, Horgan JH: Sotaloi infusion in the treatment of supraventricular tachyarrhythmias. Chest 87:113. 1985.

99. Tjandramaga ТВ. Thomas J, Verbeeck R. et al: The effect of end-stage renal failure and hemodialysis on the elimination kinetics of sotaloi. fir J C!m Pharmacol 3:259. 1976.

100. Truelove JF Van Petten GR. Willes RF: Action several beta-adrenuceptor blocking drugs in the pregnant sheep and fetus. В -j Pharmacol 47:161. 1973.

101. Tucker GT, Jackson RR, Storey GCA, et al: Bioavailability of amiodarone. Ear-. Clin Pharmacoi 26:533,1984.

102. Waldo A.L., Camm A.J., De Ruyter H. et al. The Sword investigations effects of d-sotalol on mortality in patients with left ventricularis function after recent, and remote myocardial infarction. Survival with dsotalol. Lancet 1996:348:7—12.

103. Winkle RA, Jaillon P, Kates RE, et al: Clinical pharmacology and antiarrhythmic efficacy of N-acetylprocainamide. Am. J Cardiol 47:123, 1981.

104. Woosley RL, Stots B, Reeie MD, et al: Pharmacologic reversal of hypotensive effect complicating antiarrhythmic therapy with brety!-ium. Clin Pharmacol Ther 32:313, 1982

105. Zachary CB, Slater DN, Holt DW, et al: The pathogenesis of amiodarone- induced pigmentation and photosensitivity. Br J Dermatol 110:451, 1984.

106. Zipes DP, Prystowsky EN, Heger JJ: Amiodarone: Electrophysiologic actions, pharmacokinetics and clinical effects. J Amer Coil Cardiol 3:1059,1984.

107. Беленький М.Л. // Элементы количественной оценки фармакологического эффекта.// Москва 1960.

108. Дощипин В.Л.//Лечение аритмий сердца. Москва Медицина 1993.

109. Дощипин В.Л.// Внезапная аритмическая смерть. Клин. Мед. 1992.70

110. Думанис М.А., Кудряшов Н.И.// Антиаритмические средства. Классификация, структура и механизм действия. Хим.фарм. журнал. 1983. 10.1159 1169.

111. Кабанова И.А., Родионов А.П., Каверина Н.В., Нечаева Е.Б. //Изучение биодоступности Кардиоциклида в экспериментах на собаках // Тезисы докладов VIII Российского национального конгресса «Человек и Лекарство». Москва, 2001 стр.480

112. Каверина Н.В., Лысковцев В.В., Соколов С.Ф., Кищук Е.П., //Новый антиаритмический препарат III класса. Фармакологические свойства и электрофизиологические механизмы.//Вестник аритмологии № 9., Москва, 1998 стр. 39 42.

113. Каверина Н.В., Сенова З.П. // Методические указания по поиску препаратов, предлагаемых для клинических испытаний в качестве средств для профилактики и лечения нарушений ритма сердца.// Москва 1981.

114. Каверина Н.В.// Современныеаспекты поиска и доклиническогоизучения антиаритмических средств./ Ереван., 1982 стр. 129 130.

115. Каркищенко Н.Н., Хоронько В.В., Сергеева С.А. Каркищенко В.Н. // Кн. Фармакокинетика//Ростов-на-Дону «Феникс» 2001.

116. Лысковцев В.В. // Трициклическиеазотосодержащие системы и производные дициклогексиламида N-замещенных аминокислот как основа для создания новых антиаритмических средств Докт. Диссертация 1997.

117. Мазур Н.А. // Современное состояние и задачи клинико -фармакологического изучения антиаритмических и антиангинальных препаратов. Кардиология 1982. 5.42 47.

118. Машковский М.Д. //Лекарственные средства Москва. 1993.

119. Метелица В.И. //Справочник кардиолога. Москва, Медицина1980.

120. Недоступ А.В. //Выбор препарата для лекарственной терапии144аритмий.// Экспер.и клин. Фармакол. Москва 1992. 4. 77 79.

121. Новиков Е.А. //«Применение методов ватиационной статистики в биологии и медицине» Проблема репродукции, 1. 1995 стр. 2.

122. Полякова А.А. //Молекулярный масс спектральный анализ органических соединений.// Москва «Химия» 1983.

123. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. // Математическая статистика в клинических исследованиях // Москва «Гэотар медицина» 2000

124. Ундеровинас А.И. Бурнашов Н.В. Юшманова А.В. и др.// Нарушение балланса ионных токов сердечных клеток как один из механизмов аритмий.// Кардиология 1990. 30. Стр. 69 73.

125. Ходеев Ю.С. //Современный уровень и тенденции развития масс -спектрометрии для научных исследований .//Москва, ЦНИ ЙТЭИ приборостроения, 1980. 31 с