Токсикологическая характеристика и фармакокинетика ацикловира и его лекарственных форм тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат биологических наук Шустова, Любовь Игоревна

• Шустова, Любовь Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шустова, Любовь Игоревна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Ацикловир (Зовиракс): история создания, особенности и механизмы противовирусного действия. Экспериментальная терапия вирусных инфекций, токсикологическая характеристика и фармакокинетика, клиническое применение и нежелательные побочные эффекты.

1. Краткая история создания ацикловира (зовиракса).

2. Особенности и механизмы противовирусного действия ацикловира.

3. Экспериментальная терапия вирусных инфекций ацикловиром.

4. Токсикологическая характеристика ацикловира.

5. Фармакокинетика и метаболизм ацикловира.

6. Клиническое применение ацикловира и нежелательные побочные эффекты.

ГЛАВА I. Материалы и методы исследований.

ГЛАВА II. Исследование токсичности ацикловира, зовиракса и их натриевых солей при однократном введении лабораторным животным.

2.1. Исследование токсичности ацикловира и зовиракса при однократном введении животным.

2.2. Исследование токсичности натриевых солей ацикловира и зовиракса при однократном введении животным.

ГЛАВА III. Изучение токсичности субстанций ацикловира в условиях 8-недельного субхронического эксперимента на крысах.

3.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

3.2. Оценка влияния ацикловира на организм крыс в условиях субхронического эксперимента.

ГЛАВА IV. Токсикологическая характеристика 5% мази ацикловира для наружного применения и исследование ее биоэквивалентности.

4.1. Изучение токсичности 5% мази ацикловира в условиях 8-недельного субхронического эксперимента на кроликах.

4.1.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

4.1.2. Оценка влияния 5% мази ацикловира на организм кроликов в условиях субхронического эксперимента.

4.2. Исследование аллергизирующих свойств 5% мази ацикловира.

4.2.1. Реакция гиперчувствительности замедленного типа у мышей.

4.2.2. Метод накожных аппликаций у морских свинок-альбиносов.

4.2.3. Влияние мази ацикловира на уровень эозинофиллов и базофиллов в крови кроликов.

4.3. Исследование биоэквивалентности 5% мази ацикловира.

4.3.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

4.3.2. Результаты исследований.

ГЛАВА V. Изучение токсичности таблеток ацикловира по 0,2 г при назначении собакам внутрь в условиях 8-недельного субхронического эксперимента, исследование их фармакокинетики и биоэквивалентности.

5.1. Изучение токсичности таблеток ацикловира по 0,2 г для приема внутрь в условиях 8-недельного субхронического эксперимента на собаках.

5.1.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

5.1.2. Оценка влияния таблеток ацикловира на организм собак в условиях субхронического эксперимента.

5.2. Изучение фармакокинетики и биоэквивалентности таблеток ацикловира по 0,2 г для приема внутрь.

5.2.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

5.2.2. Результаты исследований.

ГЛАВА VI. Изучение токсичности натриевой соли ацикловира при внутривенном введении собакам в условиях 4-недельного субхронического эксперимента, исследование ее фармакокинетики и биоэквивалентности.

6.1. Изучение токсичности натриевой соли ацикловира при внутривенном введении собакам в условиях 4-недельного субхронического эксперимента.

6.1.1. Условия проведения эксперимента и методы исследований.

6.1.2. Оценка влияния готовой лекарственной формы натриевой соли ацикловира на организм собак в условиях субхронического эксперимента.

6.2. Изучение фармакокинетики и биоэквивалентности натриевой соли ацикловира для внутривенного введения.

6.2.1 Условия проведения эксперимента и методы исследований.

6.2.2 Результаты исследований.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Токсикологическая характеристика и фармакокинетика ацикловира и его лекарственных форм»

Актуальность работы

Заболевания, вызванные вирусами группы герпес (Herpesviridae) относятся к одним из наиболее распространенных вирусных инфекций человека. По данным ВОЗ, заболевания, вызванные вирусом простого герпеса, занимают второе место (15,8%) после гриппа (35,8%) как причина смертности от вирусных инфекций. По данным медицинских центров только в США ежегодно регистрируется 98 млн. средних и тяжелых случаев герпеса слизистой губ, 8,5 - 9,0 млн. -рецидивирующего герпеса гениталий, более 5 ООО - герпетического энцефалита и около 50 ООО случаев офтальмогерпеса. Аналогичная ситуация наблюдается и в России, где по мнению ведущих специалистов, число больных офтальмогерпесом составляет примерно 400 ООО - 500 000 и число госпитализированных в стационары превышает 2,5 млн. Серологические исследования показали, что к 1314 годам около 70-83% детей уже инфицированы вирусом простого герпеса, а население в возрасте 50 лет и старше в 90% случаев имеет антитела к вирусам простого герпеса. Среди множества возбудителей инфекций, вызывающих у больных со сниженным иммунитетом тяжелые острые или рецидивирующие заболевания, вирусы группы герпес занимают 3-4 место. Вирус варицелла зостер поражает до 30 - 50% больных с тяжелыми нарушениями иммунной системы, а первичная латентная цитомегаловирусная инфекция выявляется у 60% детей второго полугодия жизни [Глинских Н.П, 1998].

Лечение указанных герпетических инфекций проводится с помощью различных противовирусных средств, среди которых наиболее важное место занимают аналоги природных нуклеозидов, сходные по структуре с промежуточными продуктами синтеза ДНК и РНК и вмешивающиеся в процессы репродукции вирусов. Широкое применение находят также индукторы интерферона и вирулициды [Баринский И.Ф., Шубладзе А.К. и др., 1986].

Одним из наиболее активных из всех синтезированных до настоящего времени соединений - аналогов природных нуклеозидов с противовирусной активностью является ацикловир - 9-[(2-гидроксиэтокси) метил] гуанин, впервые полученный и внедренный в широкую медицинскую практику фирмой "Wellcome" (Великобритания) под коммерческим названием "Zovirax".

Препарат обладает уникальной избирательностью действия в отношении инфицированных вирусом простого герпеса клеток и, одновременно, низкой токсичностью для клеток организма хозяина [Shaeffer H.J., 1983]. Наиболее чувствительными к зовираксу являются вирусы простого герпеса 1 и 2 типов, далее (в порядке снижения чувствительности) располагаются вирусы варицелла и Эпштейн-Барр. Значительно менее чувствителен к действию препарата цитомегаловирус человека [Shaeffer H.J., 1983, Balfour Н.Н., 1983]. Зовиракс широко используется для лечения герпетической инфекции различной локализации, вызванной этими вирусами, в виде таблеток и суспензии для приема внутрь, лиофилизированного порошка для приготовления растворов для внутривенного введения, в виде крема и мази для наружного применения при поражении кожи и слизистых, а также при лечении офтальмогерпеса.

ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) был разработан и осуществлен синтез отечественного противовирусного препарата "Ацикловир" - аналога Зовиракса фирмы "Wellcome" (Великобритания). Доклиническое токсикологическое исследование ацикловира и его лекарственных форм, их фармакокинетическое изучение (исследование биоэквивалентности в эксперименте на животных) имеют актуальное значение и позволяют сделать научно обоснованное заключение о качестве и безопасности препарата, его лекарственных форм и о перспективности их клинического применения.

Цели исследования

Целями данной работы явилось изучение в экспериментах на животных токсичности субстанции и лекарственных форм препарата ацикловир, исследование фармакокинетики его трех лекарственных форм: таблеток по 0,2 г для приема внутрь, стерильного лиофилизированного порошка натриевой соли ацикловира по 0,25 г для приготовления раствора для внутривенного введения и 5% мази для наружного применения.

Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительное изучение токсичности субстанций ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) и зовиракса фирмы "Wellcome" (Великобритания) при однократном внутрибрюшинном и внутрижелудочном способах введения мышам и крысам.

2. Провести сравнительное изучение токсичности натриевых солей ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" и зовиракса фирмы

Wellcome" при однократном внутрибрюшинном введении мышам и крысам.

3. Изучить токсичность субстанций и готовых лекарственных форм ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ": таблеток по 0,2 г для приема внутрь, стерильного лиофилизированного порошка натриевой соли ацикловира по 0,25 г во флаконах для приготовления растворов для внутривенного введения и 5% мази для наружного применения в условиях субхронического эксперимента на крысах, кроликах и собаках. Исследовать возможные аллергизирующие свойства 5% мази ацикловира.

4. Провести сравнительное изучение фармакокинетических параметров (биоэквивалентности) трех лекарственных форм ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" и зовиракса фирмы 'Wellcome": таблеток по 0,2 г, при введении в желудок кроликам, растворов, приготовленных из стерильных лиофилизированных порошков натриевых солей препаратов во флаконах по 0,25 г, при внутривенном введении кроликам, а также 5% мази при накожном нанесении крысам.

Научная новизна

Получены данные о низкой токсичности субстанции ацикловира и его натриевой соли, об отсутствии различий параметров ЛД50 для мышей и крыс субстанций ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) и зовиракса фирмы "Wellcome" (Великобритания), а также натриевых солей препаратов при различных способах однократного введения лабораторным животным.

Показана хорошая переносимость и отсутствие токсических эффектов субстанции ацикловира при введении в желудок крысам, таблеток препарата по 0,2 г при назначении внутрь собакам, растворов, приготовленных из стерильных лиофилизированных порошков натриевой соли ацикловира во флаконах по 0,25 г, при внутривенном введении собакам и 5% мази ацикловира при нанесении на кожу и слизистую губ кроликам в условиях субхронических экспериментов.

В сравнительных фармакокинетических исследованиях указанных двух лекарственных форм ацикловира (таблетки по 0,2 г для приема внутрь, 5% мазь для наружного применения) производства ОАО "Ассоциация АЗТ" и зовиракса фирмы "Wellcome" в экспериментах на животных установлено соответствие их фармакокинетических параметров. В тоже время, лекарственная форма для внутривенного введения (стерильный лиофилизированный порошок натриевой соли ацикловира по 0,25 г во флаконах по 10 мл для приготовления растворов) производства ОАО "Ассоциация АЗТ" превосходит по биодоступности аналогичную лекарственную форму фирмы "Wellcome".

Практическая значимость

На основании экспериментальных данных, полученных при проведении токсикологических и фармакокинетических исследований, показана идентичность ацикловира и его лекарственных форм производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) и зовиракса фирмы "Wellcome" (Великобритания).

Это позволило получить разрешение Фармакологического Государственного Комитета Министерства Здравоохранения России на проведение клинических испытаний на биоэквивалентность трех лекарственных форм ацикловира: таблеток по 0,2 г для приема внутрь, стерильного лиофилизированного порошка натриевой соли ацикловира по 0,25 г во флаконах по 10 мл для приготовления растворов для внутривенного введения и 5% мази ацикловира для наружного применения.

По результатам успешно проведенных клинических испытаний на биоэквивалентность, ацикловир и его указанные три лекарственные формы были зарегистрированы Министерством Здравоохранения России в качестве противовирусного средства и разрешены для широкого медицинского применения.

Основные положения выносимые на защиту

1. Субстанции ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) и зовиракса фирмы "Wellcome" (Великобритания) характеризуются низкой токсичностью и не отличаются по показателям токсичности при однократном внутрибрюшинном и внутрижелудочном способах введения мышам и крысам.

2. Лиофилизированные натриевые соли ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" и зовиракса фирмы "Wellcome", предназначенные для приготовления растворов для внутривенного введения, обладают низкой токсичностью для мышей и крыс при внутрибрюшинном введении и не отличаются друг от друга по показателям токсичности.

3. Разработанные ОАО "Ассоциация АЗТ" субстанция ацикловира и лекарственные формы препарата: таблетки по 0,2 г для приема внутрь, лиофилизированный порошок натриевой соли ацикловира по 0,25 г во флаконах по 10 мл для приготовления растворов для внутривенного введения и 5% мазь ацикловира для наружного применения в испытанных доза хорошо переносятся животными и не вызывают нежелательных побочных эффектов в условиях субхронического эксперимента на крысах, кроликах и собаках.

4. Лекарственные формы ацикловира (таблетки по 0,2 г для приема внутрь, 5% мазь для наружного применения) производства ОАО "Ассоциация АЗТ" в экспериментах на лабораторных животных существенно не отличаются по фармакокинетическим параметрам от лекарственных форм зовиракса фирмы "Wellcome". Лекарственная форма для внутривенного введения (лиофилизированный порошок натриевой соли ацикловира по 0,25 г во флаконах по 10 мл для приготовления растворов) производства ОАО "Ассоциация АЗТ" обладает более высокой биодоступностью по сравнению с аналогичной лекарственной формой фирмы "Wellcome".

5. Низкая токсичность субстанции ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" и отсутствие различий показателей ее токсичности и токсичности субстанции зовиракса фирмы "Wellcome", хорошая переносимость субстанций и лекарственных форм ацикловира в условиях субхронических экспериментов, совпадение фармакокинетических параметров двух лекарственных форм с параметрами аналогичных лекарственных форм зовиракса и большая биодоступность натриевой соли ацикловира позволяют рекомендовать клинические испытания на биоэквивалентность указанных лекарственных форм изучаемого препарата.

Сведения об апробации работы.

Основные результаты диссертационной работы докладывались на

1. Межинститутской научно-теоретической конференции посвященной памяти академика РАМН проф. Сидоренко Г.И. "Актуальные вопросы вузовской медицинской науки и педагогики на рубеже третьего тысячелетия", Москва, 2000г;

2. VII и VIII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", Москва, 2000, 2001г.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Ацикловир (Зовиракс): история создания, особенности и механизмы противовирусного действия. Экспериментальная терапия вирусных инфекций, токсикологическая характеристика и фармакокинетика, клиническое применение и нежелательные побочные эффекты.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Шустова, Любовь Игоревна

выводы

1. Субстанции ацикловира и его натриевой соли производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) являются малотоксичными веществами и по показателям токсичности при однократном внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении мышам BALB/c и крысам Wistar не отличаются от субстанций зовиракса и его натриевой соли фирмы "Wellcome" (Великобритания).

2. Субстанция ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" характеризуется хорошей переносимостью и отсутствием нежелательных токсических эффектов при ежедневном в течение 8 недель введении в желудок крысам Wistar в дозе 75 и 300 мг/кг (5- и 20-кратные суточные дозы, рекомендованные для человека при приеме внутрь).

3. При ежедневных, в течение 8 недель, аппликациях на депилированную кожу и слизистую губ кроликов Шиншилла 5% мазь ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" не оказывает токсического действия и не проявляет местно-раздражающих и аллергизирующих свойств. По показателям резорбции (биодоступность) при накожном нанесении крысам Wistar 5% мазь ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" и 5% мазь зовиракса биоэквивалентны.

4. В условиях 8-недельного субхронического эксперимента на собаках при ежедневном назначении им внутрь таблеток ацикловира по 0,2 г производства ОАО "Ассоциация АЗТ" в дозе 150 мг/кг (10-кратная суточная доза, рекомендованная для человека) не выявлено токсического повреждения внутренних органов и токсико-аллергических реакций, связанных с действием изучаемого препарата.

5. Таблетки ацикловира по 0,2 г для приема внутрь при назначении кроликам характеризуются быстрой распадаемостью, всасываемостью, хорошим проникновением в органы и ткани, а также сравнительно длительным поддержанием высоких концентраций препарата в сыворотке крови животных. По биоэквивалентности таблетки ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" не отличаются от таблеток виролекса фирмы "KRKA" (Словения), изготовленных из субстанции зовиракса фирмы "Wellcome"

6. Ежедневное, в течение 4 недель внутривенное введение собакам натриевой соли ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" в готовой лекарственной форме (стерильные лиофилизированные порошки во флаконах по 0,25 г для по приготовления растворов для внутривенных инфузий) не влияет на общее состояние и поведение животных, на гематологические показатели и функциональное состояние внутренних органов, не вызывает их токсического повреждения и токсико-аллергических реакций, обусловленных действием препарата.

7. Относительная биодоступность лекарственной формы ацикловира для внутривенного введения ОАО "Ассоциация АЗТ" и зовиракса для внутривенных инфузий фирмы "Wellcome" составляет 132,4%. Преимущество указанной лекарственной формы ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" зависит от различий таких важных фармакокинетических параметров, как более высокая начальная концентрация, быстрое проникновение в периферическую камеру, длительное время удерживания и более низкий общий клиренс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведены сравнительные токсикологические и фармакокинетические исследования субстанций и трех готовых лекарственных форм (таблетки по 0,2 г для приема внутрь, 5% мазь для наружного применения и стерильные лиофилизированные порошки натриевых солей по 0,25 г во флаконах для приготовления растворов для внутривенного введения) отечественного противовирусного препарата ацикловира, полученного по оригинальной технологии ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия), и его зарубежного прототипа -препарата зовиракс фирмы "Wellcome" (Великобритания).

На первом этапе экспериментальных исследований в опытах на мышах BALB/c и крысах Wistar изучены токсичность субстанций ацикловира и его натриевой соли производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия), а также токсичность субстанции зовиракса и его натриевой соли фирмы "Wellcome" (Великобритания) при однократном внутрибрюшинном и внутрижелудочном способах введения указанным видам лабораторных животных.

На следующем этапе в опытах на крысах, кроликах и собаках в условиях 4-и 8-недельных субхронических экспериментов предусматривалось изучение токсичности субстанций и готовых лекарственных форм ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) при их длительном назначении животным в дозах в 5 - 30 раз превышающих терапевтические дозы рекомендованные для человека.

При этом, при ежедневном в течение 8 недель введении в желудок крысам Wistar (самцам и самкам) изучена токсичность субстанции ацикловира в дозах 75 и 300 мг/кг (5- и 20-кратные суточные дозы, рекомендованные для человека).

В опытах на кроликах Шиншилла исследована токсичность 5% мази ацикловира при ее ежедневной в течение 8 недель аппликации на кожу и слизистую губ в дозах 750 и 250 мг/кг (30-кратные суточные дозы, рекомендованные для человека при данных способах применения).

В условиях 8-недельного субхронического эксперимента на собаках изучена токсичность таблеток ацикловира по 0,2 г для приема внутрь при их ежедневном назначении животным в дозе 150 мг/кг (10-кратная суточная доза препарата для человека при приеме внутрь).

В условиях субхронического эксперимента на собаках изучена также токсичность лекарственной формы ацикловира для внутривенного введения -стерильный лиофилизированный порошок натриевой соли ацикловира во флаконах по 0,25 г для приготовления растворов для внутривенных инфузий при ежедневном, в течение 4 недель, внутривенном введении животным в дозах 125 мг/кг (10-кратная суточная доза препарата для человека при этом способе применения).

Основными задачами фармакокинетических исследований готовых лекарственных форм ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) в опытах на животных при различных способах введения в организм являлось: установление фармакокинетических параметров для каждой лекарственной формы - 5% мазь для наружного применения, таблетки для приема внутрь по 0,2 г, стерильный лиофилизированный порошок натриевой соли ацикловира во флаконах по 0,25 г для приготовления растворов для внутривенных инфузий;

- сравнение полученных данных с фармакокинетическими параметрами аналогичных коммерческих лекарственных форм зовиракса фирмы "Wellcome" (Великобритания), установленными в параллельных экспериментах на животных;

- определение относительной биоэквивалентности соответствующих лекарственных форм ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) и зовиракса фирмы 'Wellcome" (Великобритания).

Анализ проведенных исследований по токсикологической характеристике субстанций ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" (Россия) и зовиракса фирмы 'Wellcome", их натриевых солей при однократном введении мелким лабораторным животным с установлением показателей ЛД50 и других параметров токсичности, экспериментов по изучению токсичности и переносимости субстанций и лекарственных форм ацикловира при 4- и 8-недельном назначении животным, а также опытов по изучению фармакокинетики и биоэквивалентности ацикловира и зовиракса, позволяет обсудить некоторые полученные результаты.

Эксперименты по изучению токсичности субстанций ацикловира и зовиракса, а также их натриевых солей при однократном введении, выполненные на мышах BALB/c и крысах Wistar, показали, что исследуемые противовирусные препараты являются малотоксичными.

Показатели средних смертельных доз (ЛД5о) для субстанций ацикловира и зовиракса при внутрибрюшинном введении мышам BALB/c были установлены на уровне 1 360 - 1 510 мг/кг. При этом не выявлено статистически достоверных различий таких параметров токсикометрии, как ЛД16, ЛД50±т, ЛДз4, а также половых различий в чувствительности самцов и самок мышей к токсическому действию изучаемых препаратов.

Крысы Wistar по показателям ЛД50 (1165 - 1280 мг/кг) при внутрибрюшинном введении были несколько более чувствительными, по сравнению с мышами BALB/c, к токсическому действию ацикловира и зовиракса. Однако, достоверных различий показателей ЛД50 для крыс и мышей при этом установлено не было.

При однократном введении в желудок мышам BALB/c и крысам Wistar, ацикловира и зовиракса, токсичность препаратов по показателям ЛД50 (23 600 -28 500 мг/кг) снижалась в 18 - 20 раз, по сравнению с внутрибрюшинным способом введения. При этом не установлено достоверных различий параметров токсикометрии для ацикловира и зовиракса, а также видовых и половых различий в чувствительности указанных видов лабораторных животных к токсическому действию изучаемых препаратов.

При изучении "острой" токсичности натриевых солей ацикловира и зовиракса при внутрибрюшинном введении мышам BALB/c и крысам Wistar наблюдалось увеличение токсичности по показателям ЛД50 (580 - 700 мг/кг), по сравнению с основаниями препаратов при аналогичном способе введения лабораторным животным. Не выявлено заметных видовых и половых различий в чувствительности мышей BALB/c и крыс Wistar к токсическому действию натриевых солей изучаемых препаратов.

Исследование токсичности субстанции ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" в условиях 8-недельного субхронического эксперимента на крысах Wistar (самцы и самки) предусматривало ее ежедневное введение в желудок в дозах 75 и 300 мг/кг. Указанные дозы в 5 и 20 раз превышали суточные дозы, рекомендованные для человека при приеме внутрь.

Ежедневное в течение 8 недель введение в желудок крысам ацикловира в испытанных дозах не влияло на общее состояние, поведение и динамику массы тела подопытных животных. В условиях 8-недельного субхронического эксперимента не выявлено достоверных различий в количестве эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и уровня гемоглобина в крови животных, подвергавшихся воздействию ацикловира, по сравнению с контролем.

Результаты динамического исследования в сыворотке крови животных ряда "печеночных" ферментов (щелочная фосфатаза, лактатдегидрогеназа, аспартат-и аланинаминотрансфераза), а также уровня общего белка и билирубина, использованных для выявления наиболее ранних (функциональных) изменений в печени, показали, что у крыс, подвергавшихся воздействию ацикловира в испытанных дозах 75 и 300 мг/кг, не выявлено достоверных изменений активности ферментов и биохимических показателей по сравнению с контрольными животными. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии повреждающего действия ацикловира на печень.

Длительное введение кроликам в желудок субстанции ацикловира не вызывало изменения уровня глюкозы в сыворотке крови и не влияло на функцию поджелудочной железы.

При 8-недельном введении в желудок крысам ацикловира в испытанных дозах 75 и 300 мг/кг уровни содержания мочевины и креатинина в сыворотке крови контрольных и получавших ацикловир животных колебались в пределах физиологической нормы, достоверно не отличаясь друг от друга на протяжении всего субхронического эксперимента. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии повреждающего действия ацикловира в испытанных дозах на почки. Введение ацикловира в желудок крысам в дозах 75 и 300 мг/кг также не влияло на липидный обмен.

Не установлено патологических изменений внутренних органов животных, связанных с длительным введением ацикловира в дозах 75 и 300 мг/кг при патогистологическом исследовании, проведенном после окончания 8-недельного субхронического эксперимента.

Токсикологическая оценка 5% мази ацикловира в 8-недельном субхроническом эксперименте на кроликах при ежедневной ее аппликации на депилированную поверхность кожи и слизистую губ в дозах 750 и 250 мг/кг (30-кратные суточные дозы, рекомендованные для человека при данных способах применения) показала ее хорошую переносимость и отсутствие нежелательных токсических эффектов.

На протяжении эксперимента 5% мазь ацикловира в испытанных дозах при нанесении на кожу и слизистую губ не влияла на общее состояние, поведение, динамику массы тела, ректальную температуру подопытных животных. В испытанных дозах 750 и 250 мг/кг 5% мазь ацикловира при ежедневных местных аппликациях не оказывала влияния на гематологические показатели и функциональное состояние основных органов и систем организма (по данным биохимических тестов) подопытных животных.

Длительное нанесение 5% мази ацикловира на депилированную поверхность кожи спины и слизистую губ кроликов в условиях 8-недельного субхронического эксперимента не вызывало местно-раздражающего действия.

Макро- и микроскопические исследования внутренних органов, кожи и слизистой губ кроликов, ежедневно получавших в виде аппликаций на кожу и слизистую губ 5% мазь ацикловира, не выявили каких-либо патологических изменений, связанных с токсическим действием данной готовой лекарственной формы препарата.

Исследование аллергизирующих свойств 5% мази ацикловира с использованием Методических рекомендаций Фармакологического Государственного Комитета Минздрава Росии по оценке аллергенных свойств фармакологических веществ (2000) не выявило аллергизирующего действия мази в тесте гиперчувствительности замедленного типа у мышей (при внутрикожном введении сенсибилизирующей и разрешающей дозы препарата), в тесте с использованием метода накожных аппликаций у морских свинок-альбиносов и при оценке влияния 10-кратной эпикутанной сенсибилизации на уровень эозинофиллов и базофиллов в периферической крови кроликов.

При исследовании биоэквивалентности 5% мазей ацикловира и зовиракса при их однократной накожной аппликации крысам Wistar в дозе 100 мг/кг (5 мг в пересчете на активное действующее вещество) с использованием метода ВЭЖХ для определения в моче неизмененного ацикловира установлено, что за сутки с мочой выделяется 9,38 (6,70 - 11,98) % неизмененного действующего вещества после нанесения 5% мази ацикловира производства ОАО "Ассоциация АЗТ" и 9,00 (6,03 - 11,72)% - после нанесения 5% мази зовиракса фирмы 'Wellcome".

Сравнение указанных показателей резорбции (биодоступность) ацикловира из изучаемых 5% мазей ацикловира и зовиракса при накожной аппликации свидетельствует об их биоэквивалентности.

Изучение токсичности таблеток ацикловира по 0,2 г для приема внутрь проведено в опыте на собаках при ежедневном в течение 8 недель назначении таблеток в дозе 150 мг/кг. Примененная доза препарата в 10 раз превышала среднюю суточную дозу (15 мг/кг), рекомендованную для человека при лечении герпетических инфекций пероральным приемом ацикловира.

Как показали проведенные исследования, ежедневное в течение 8 недель назначение собакам таблеток ацикловира внутрь в испытанной дозе 150 мг/кг не оказывало влияния на общее состояние и поведение животных. На протяжении 8недельного субхронического эксперимента не зарегистрировано различий динамики массы и ректальной температуры у собак, получавших препарат, по сравнению с контролем. При назначении ацикловира в испытанной дозе 150 мг/кг препарат не влиял на гематологические (количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уровень гемоглобина, лейкоцитарная формула), биохимические показатели (общий белок, билирубин, мочевина, креатинин, глюкоза, триглицериды, фосфатаза, лактатдегидрогеназа, альфагидроксибутиратдегидрогеназа, аспартат- и аланинаминотрансфераза). При длительном назначении таблеток ацикловира в дозе 150 мг/кг не выявлено влияния препарата на параметры ЭКГ.

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии влияния назначения таблеток ацикловира в условиях 8-недельного субхронического эксперимента на функциональное состояние важнейших органов и систем организма подопытных собак.

Отсутствие повреждающего действия длительного назначения таблеток ацикловира в испытанной дозе 150 мг/кг на функциональное состояние внутренних органов собак подтверждено результатами патоморфологических исследований, проведенных после окончании субхронического эксперимента и показавших отсутствие токсического повреждения внутренних органов и токсико-аллергических реакций, связанных с действием изучаемой лекарственной формы препарата.

Исследование фармакокинетики таблеток ацикловира по 0,2 г для приема внутрь ОАО "Ассоциация АЗТ" проведено в сравнении с аналогичными таблетками виролекса фирмы "KRKA", изготовленными из субстанции фирмы "Wellcome", в опытах на кроликах с использованием метода ВЭЖХ для определения концентрации ацикловира в сыворотке крови животных.

Результаты количественного определения содержания ацикловира в сыворотке крови кроликов в разные промежутки времени после введения в желудок таблеток ацикловира и виролекса в дозах 50 мг/кг свидетельствуют о быстрой распадаемости таблеток, о быстром поступлении ацикловира в кровь и о сравнительно длительном поддержании высоких концентраций действующего вещества в сыворотке крови подопытных животных.

Изменение концентрации ацикловира в сыворотке крови кроликов после перорального назначения таблеток ацикловира и виролекса в дозах 50 мг/кг хорошо описывается с применением одночастевой фармакокинетической модели со всасыванием первого порядка.

Для таблеток изучаемых препаратов характерно быстрое всасывание (Ti/2a6c=0,370±0,104 час для ацикловира и 0,379±0,063 час для виролекса) с небольшим временем задержки (ТЛаг=0,0710+0,013 час для ацикловира и 0,0762±0,077 час для виролекса).

Время достижения максимальной концентрации препаратов в сыворотке крови (Тмакс) составляет 1,70±0,16 час для ацикловира и 1,79±0,12 час для виролекса. Элиминация препаратов характеризуется длительным периодом полувыведения (Ti/2f3=6,62±0,78 час у ацикловира и 7,42+0,35 час у виролекса) с общим клиренсом 77,9±4,8 мл/мин у ацикловира и 74,2±2,1 мл/мин у виролекса, что обуславливает значительные величины среднего времени их удерживания.

Ацикловир и виролекс при пероральном введении хорошо проникают в органы и ткани, о чем свидетельствуют их объемы распределения (Vi) в центральной камере \Л=44,6±2,3 л у ацикловира и 44,7±1,2 л у виролекса.

Биодоступность таблеток ацикловира, рассчитанная по величинам площадей под фармакокинетическими кривыми, составляет 95,5,% по сравнению с таблетками виролекса.

Изучение токсичности натриевой соли ацикловира в готовой лекарственной форме - стерильные лиофилизированные порошки во флаконах по 0,25 г для приготовления растворов для внутривенных инфузий проведено в условиях 4-недельного субхронического эксперимента при ежедневном внутривенном введении препарата в дозе 125 мг/кг. Доза препарата в 10 раз превышала суточную дозу, рекомендованную для человека при данном способе введения.

Проведенные исследования показали, что ежедневное в течение 4 недель внутривенное введение натриевой соли ацикловира в дозе 125 мг/кг не влияет на общее состояние и поведение животных, на гематологические показатели (количество эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, уровень гемоглобина, лейкоцитарная формула), на результаты биохимических тестов (общий белок, мочевина, креатинин, билирубин, глюкоза, триглицериды, лактатдегидрогеназа, аспартат- и аланинаминосрансфераза сыворотки крови) и параметры ЭКГ, характеризующие функциональное состояние основных внутренних органов (печень, почки, поджелудочная железа) и сердечно-сосудистой системы подопытных животных.

Отсутствие повреждающего действия длительного 4-недельного внутривенного введения натриевой соли ацикловира в дозе 125 мг/кг на внутренние органы собак подтверждено результатами патоморфологических исследований, проведенных после окончания субхронического эксперимента и показавшими отсутствие токсического действия и токсико-аллергических реакций, связанных с действием готовой лекарственной формы ацикловира.

Исследование фармакокинетики и биоэквивалентности лекарственной формы ацикловира для внутривенного введения ОАО "Ассоциация АЗТ" (стерильный лиофилизированный порошок во флаконах по 0,25 г для приготовления растворов для внутривенных инфузий) проведено в сравнении с аналогичной лекарственной формой зовиракса для внутривенного введения фирмы "Wellcome" в опытах на кроликах с использованием метода ВЭЖХ для количественного определения ацикловира в сыворотке крови животных.

Результаты определения содержания ацикловира в сыворотке крови кроликов в различные промежутки времени после внутривенного введения натриевых солей ацикловира и зовиракса в дозах 20 мг/кг свидетельствуют о быстром повышении концентрации ацикловира в сыворотки крови подопытных животных. При этом более высокие значения максимальных концентраций препарата первые 15 минут отмечались после внутривенного введения натриевой соли ацикловира. В последующие периоды наблюдения отмечалось экспоненциальное снижение уровня ацикловира в сыворотке крови, оставаясь на достаточно высоком уровне еще в течение 4-7 часов.

Изменение концентрации ацикловира в сыворотке крови кроликов после внутривенного введения натриевых солей ацикловира и зовиракса в дозе 20 мг/кг хорошо описывается с применением двучастевой фармакокинетической модели (без всасывания).

Относительная биодоступность натриевой соли ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" и принятой за 100% натриевой соли зовиракса оказалась равной 132,4%, что свидетельствует о лучшей биодоступности первой лекарственной формы. Преимущество этой лекарственной формы (натриевая соль ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ"), складывается из ряда ее более высоких фармакокинетических параметров. Так, начальная концентрация (С0) натриевой соли ацикловира составляет 8,44±0,23 мкг/мл, а для зовиракса лишь 6,72±0,21 мкг/мл. Лекарственная форма быстрее проникает в периферическую камеру, так как «12 для нее составляет 0,85 час"1, что значительно выше Ki2=0,42 час"1 для натриевой соли зовиракса. В то же время общий клиренс для натриевой соли ацикловира ниже и составляет 26,1 мл/мин по сравнению с натриевой солью зовиракса 34,5 мл/мин. Вследствие этого, среднее время удерживания было также более высоким у натриевой соли ацикловира и составляло 9,63 час по сравнению с 7,36 час для натриевой соли зовиракса.

В соответствии с международными критериями, натриевая соль ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" обладает большей биодоступностью по сравнению с натриевой солью зовиракса фирмы "Wellcome", так как ее относительная биодоступность лежит вне границ интервала 75 - 125%.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о низкой токсичности ацикловира и его натриевой соли производства ОАО "Ассоциация АЗТ" при однократном внутрибрюшинном и внутрижелудочном способах введения мышам BALB/c и крысам Wistar, об отсутствии существенных различий между показателями токсикометрии (ЛД16, ЛД5о±т, ЛДвд) для указанных субстанций ацикловира и аналогичных субстанций зовиракса фирмы 'Wellcome".

Полученные ОАО "Ассоциация АЗТ" субстанция и готовые лекарственные формы ацикловира (5% мазь для наружного применения, таблетки по 0,2 г для приема внутрь и стерильный лиофилизированный порошок натриевой соли препарата во флаконах по 0,25 г для приготовления растворов для внутривенных инфузий) характеризуются хорошей переносимостью, отсутствием местно-раздражающего действия и токсических эффектов при длительном четырех- и восьминедельном назначении лабораторным животным в дозах, в 5 - 30 раз превышающих суточные терапевтические дозы, рекомендованные для человека при соответствующих способах применения препарата.

Результаты фармакокинетических исследований готовых лекарственных форм ацикловира ОАО "Ассоциация АЗТ" показали, что 5% мазь препарата по биодоступности, а таблетки по 0,2 г для приема внутрь по биоэквивалентности соответствуют 5% мази зовиракса фирмы "Wellcome" и таблеткам виролекса по 0,2 г фирмы "KRKA" (изготовленных из субстанции фирмы 'Wellcome"). Стерильные лиофилизированные порошки натриевой соли ацикловира во флаконах по 0,25 г для приготовления растворов для внутривенных инфузий ОАО "Ассоциация АЗТ' на 32,4% превосходят по биоэквивалентности соответствующую лекарственную форму зовиракса фирмы 'Wellcome".

Полученные данные были включены в научно-техническую документацию на противовирусный лекарственный препарат ацикловир и его три лекарственные формы ОАО "Ассоциация АЗТ", на основании которой Фармакологический Государственный Комитет Минздрава России разрешил испытания на добровольцах по изучению биоэквивалентности в клинике. Успешное завершение этих испытаний позволило Минздраву России зарегистрировать ацикловир (и три лекарственные формы) производства ОАО "Ассоциация АЗТ" в качестве противовирусного лекарственного средства и разрешить широкое медицинское применение препарата.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шустова, Любовь Игоревна, 2001 год

1. Арзамасцев Е.В., Гуськова Т.А. и др. Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ / Руководство по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ, М., 2000, с. 18-25.

2. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К. и др. Герпес: этиология, диагностика, лечение,АМН СССР, М.: Мед., 1986, с.4-8.

3. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. 2 изд., Лд.: ГИ Мед. Лит., 1963.

4. Бохман Я.В., Лютра У.К. Рак шейки матки. Кишинев: Штинница, 1991, с.с. 239.

5. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999.

6. Глинских Н.П. Герпесвирусы человека / Неизвестная эпидемия герпес: Патогенез, диагностика, клиника, лечение. Сб. статей, сост. Абазова Ф.И., Смоленск, Фармспрафикс, 1993, с. 7-19.

7. Голубев М.А. Герпетическая инфекция. // Южно-Российский медицинский журнал, 1998, 3.

8. Ершов Ф.И., Чижов Н.П. Лечение вирусных инфекций // Клинич. Фармакол. и тер., 1995, №4 (4), с. 75-78.

9. Ю.Жданов В.М., Гайдамович С.Я. Общая и частная вирусология в 2-х томах. М„ 1982, т.1 с. 27-40, т.2 с. 375-411.

10. Исаков В.А. Современные методы лечения герпетической инфекции // Terra Medica Nova, 1997 (3), с. 2-7.

11. Исаков В.А., Борисова В.В. и др. Герпес: патогенез и лабораторная диагностика: руководство для врачей. Спб.: Лань, 1999, с.с. 192.

12. Исаков В.А., Сафронова М.М., Аспель Ю.В. Противовирусная терапия герпеса у больных с иммунодефицитами. // Терра Медика Нова, 1999, 2.

13. Любимов Б.И., Коваленко Л.П. и др. Методические указания по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ / Руководство поэкспериментальному изучению новых фармакологических веществ. М., 2000, с. 25-33.

14. Посевая Т.А. и др. Роль герпетической инфекции при эпителиальных дисплазиях шейки матки и опыт лечения противогерпетическими препаратами // Вопр. вирусол., 1991, №1, с. 78.

15. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М.: Геотар-Мед., 2001.

16. Соловьев В.Н., Фирсов А.А., Филов В.А. Фармакокинетика, М., М., 1980.

17. Справочник по прикладной статистике п. ред. Э. Ллойда, У. Ледержана. М.: Финансы и статистика, 1989

18. Холодов Л.Е., Яковлев В.П. Клиническая фармакокинетика, М., М., 1985.

19. Столяров Б.В., Савинов И.М. и др. Практическая газовая и жидкостная хроматография. Спб.: Изд-во С.-Петербург, ун-та, 1998, с.с. 612.

20. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б. и др. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986, с. с. 288.

21. Almond М.К. et al. Avoiding acyclovir neurotoxicity in patients with chronic renal failure undergoing haemodialysis // Nephron, Vol. 69:4, p. 428-432.

22. Appelboon T.M., Flovers F.P. Acyclovir// South. Med. J., 1983, Vol. 76, №7, p. 905-909.

23. Arzamastzev E.V. The safety of drug at the stage of screening and preclinical toxicological studies. XI Intern. Sympos. On laboratory animals and experimental medicine. Riga 2-4 oct. 1990. // J. Lab. Animals, 1991, Vol. 1, №1, p. 27-32.

24. Balfour H.H. Acyclovir//Antimicrob. Agents. Annu. 2, 1987, p. 315-329.

25. Balfour H.H., Bean B. Acyclovir in immunocompromised patients with cytomegalovirus disease. //Am. J. of Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 241-248.

26. Barrio J.R., Bryant J.D. et al. A direct method for the preparation of 2-hydroxyaethoxymethyl derivative of guanine, adenin and cytosine. // J. Med. Chem. 1980, Vol. 23, p. 572-574.

27. Bauer D.J. Acyclovir treatment of experimental herpetic keratitis in the rabbit eye. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 109-111.

28. Bauer D.J. Clinical experience with the antiviral drug marboran (1-methylisatin-3-thiosemicarbazone). // Am. NY Acad. Sci, 1965. Vol. 130, p. 110-117.

29. Bauer D.J., Collins P. Et al. Treatment of experimental herpes simplex keratitis with acycloguanosine // Br. J. Ophtalmol., 1979, Vol. 63, p. 429-435/

30. Bean B. Acyclovir in the treatment of herpesvirus infections // Postgrad. Med., 1983, Vol. 73, №3, p. 297-303.

31. Biron K.K., Elion G.B. In vitro susceptibility of varicella-zoster virus to acyclovir. //Antimicrob. Agents Chemother., 1980, Vol. 18, p. 718-728.

32. Blum M.R., Liao S.H. et al. Overview of acyclovir pharmacokinetic disposition of adults and children//Am. J. Med., 1982, Jul. 20. 73. 1a, p. 186-192.

33. Brigden D. et al. Human pharmacokinetics of acyclovir (an antiviral agent) following rapid intravenous injection. // J. Antimicrob. Chemother., 1981, Vol. 7, p. 399-404.

34. Brocklehurst P. et al. A randomized placebo controlled trial of suppressive acyclovir in late pregnancy in women with recurrent genital herpes infection. // Brit. J. Obstet. Gynecol., 1998, Vol. 105, p. 275-280.

35. Brown P.R., Hartwick R.A. High Performance Liquid Chromatography. New York, etc.: Wiley, 1989, p. 688.

36. Bryson Y.J. et al. Treatment of first episodes of genital herpes simplex virus infection with oral acyclovir: a randomized double-blind controlled trial in normal subject// N. Engl. J. Med, 1983, Vol. 308, p. 916-921.

37. Burns W. H et al. Acyclovir in mouse cytomegalovirus infections. // Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 118-124.

38. Carthew P. Therapeutic effect of acyclovir (Zovirax ™) on the pathogenesis of chronic murene cytomegalovirus infection in the immunodeficient nude mouse // Brit. J. Exp. Pathol., 1982, Vol. 63, №6, p. 625-632.

39. Charles P. et al. Acyclovir therapy of chickenpox in immunosuppressed children a collaborative studies // J. Pediat., 1981, Vol. 101, №4, p. 622625.

40. Collins P., Bauer D.G. The activity in vitro against herpes virus of 9-(2-hydroxyaethoxymethyl)guanine (acycloguanosine) a new antiviral agent. // J. Antimicrob. Chemother. 1979, Vol. 5, p. 431-436.

41. Collins P., Oliver N.M. Acyclovir treatment of coetaneous herpes in guinea pigs and herpes incephalitis in mice. // Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p.97.99.

42. Collum L.M., Benedict-Smith A. Acyclovir (Zovirax) in herpes simplex keratitis // Herpetic eye diseases, Jnt. Sump. Dtsch. Ophthalmol. Ges., Freiburg, 1214 apr, 1980, Munchen, 1981, p. 323-327/

43. Collum L.M.T. et al. Oral acyclovir (Zovirax) in herpes simplex dendritic corneal ulceration. // British J. Ophtalm., 1986, Vol. 70, p. 435-438.

44. Corey L. et al. Treatment of primary first episode genital herpes simplex virus infections with acyclovir: results of topical intravenous and oral therapy // J. antimicrob. Chemother., 1983, Vol. 12, Suppl. B, p. 79-88.

45. Corey L. et al., A trial of topical acyclovir in genital herpes simplex virus infections // N. Engl. J. Med., 1982, Vol. 306, p. 1313-1319.

46. Davies W.L., Grunert R.R. et al. Antiviral activity of 1-adamantanamine (Amantadine). // Dcience, 1964, Vol. 144, p. 862-863

47. De Clercq E., Descamps J. et al. (E)-5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridine: a potent and selective antiherpes agent. // Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 1979, Vol. 76, 2947-2951.

48. De Miranda P., Blum M.R. Pharmacokinetic of acyclovir after intravenous and oral administration. //J. Antimicrob. Chemother., 1983, Vol. 12, Suppl. В., p. 29-37.

49. De Miranda P., Krasny H.C. Species differences in the disposition of acyclovir. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 31-35.

50. Deichman W.B., Le Blanc T.J. Determination of the approximate lethal dose with about six animals. // J. Industr. Hyg. Toxicol., 1943, Vol. 25, №9, p. 415417.

51. Elion G.B. Mechanism of action and selectivity of acyclovir. // Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 7-13.

52. Elion G.B., Furman P.A. et al. Selectivity of action of an antiherpetic agent 9-(2-hydroaetoxymethyl)guanine. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, Vol. 74, 5716-5720.

53. Ernst M.E., Franey R.J. Acyclovir and ganciclovir-induced neurotoxicity // Am. Pharmacother., 1998, Jan 32:1, p. 111-113.

54. Furman P.A., St. Clair P.A. et al. Inhibition of herpes simplex virus induced DNA polymerase activity and viral DNA replication by 9-(2-hydroxyaethoxymethyl)guanine and its triphosphate. // J. Virol. 1979, Vol. 32, p. 72-77.

55. Fyfe J.A., Biron K.K. et al. Activation and antiviral effect of acyclovir in cells infected with a varicella-like simian virus. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 59-61.

56. Fyfe J.A., Keller P.M., et al. Thymidine kinase from herpes simplex virus phosphorylates the new antiviral compound 9-(2-hydroxyaethoxymethyl)guanine. // J. Biol. Chem., 1978, Vol. 253, p. 87218727.

57. Good S.S., de Miranda P. Metabolic disposition of acyclovir in the guinea pig, rabbit and monkey. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 91-95.

58. Grant D.M. Review of clinical tolerance. // Curr. Eye Res., 1987, Jan. 6: 1, p. 231-235.

59. Grumpacher C.S., Schnipper L.E. et al. Growth inhibition by acycloguanosine of herpesviruses isolated from human infections. // Antimicrob. Agents Chemother., 1979, Vol. 15, p. 642-645.

60. Hintz M. Et al. Neonatal acyclovir pharmacokinetics in patients with herpes virus infections. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 210-214.

61. Hopefl A.W. The clinical use of intravenous acyclovir // Drug. Intel. Clin. Pharm., 1983, Vol. 17, №9, p. 623-628.

62. Jones A.S., Verhelst G. et al. The synthesis of the potent anti-herpes virus agent, E-5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridine and related compounds. // Tetrahedron letts., 1979, Vol. 45, 4415-4418.

63. Kaufman H.E., Heidelberger C. Therapeutic antiviral action of 5-trifluoromethyl-2-deoxyuridine in herpes simplex keratitis. II Science, 1964, 145, p. 585-586.

64. Kawana Т., Kawaguchi T. et al. Clinical and virologic studies on genital herpes // Lancet, 1976, Vol. 2, p. 964.

65. Keeney R.E., Kirk L.E. Acyclovir tolerance in humans. // Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 1977-1981.

66. Keller P.M., Fyfe J.A. Enzymatic phosphorylation of acyclic nucleoside analogs and correlations with antiherpetic activities. // Biochem. Pharmacol., 1981, Vol. 30, p. 3071-3077.

67. Keller P.M., Fyfe J.A. et al. Prediction of antiviral activity of acyclic nucleoside analogs from herpes simplex virus (HSV) thymidine kinase studies (abstr.) 18th Interscience Conference on Antimicrobal Agent and Chemotherapy, Atlanta, 1978.

68. Kern E.R. Acyclovir treatment of experimental genital herpes simplex virus infections. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 100-107.

69. Kimberlin D.F. et al. Pharmacokinetics of oral valacyclovir and acyclovir in late pregnancy. //Am. J. Obstet. Gynecol., 1998, Vol. 179, p. 846-851.

70. King D.H. History, pharmacokinetics and pharmacology of acyclovir// J. Am. Acad. Dermatol., 1988, Jan. 18:1, pt2, p. 176-179.

71. Krasny H.C. et al. Pharmacokinetics and bioavailability of acyclovir in the dog //J. Pharmacol. Exp. Ther., 1981, Vol. 216, p. 281-288.

72. Landry M.L. et al. Effect of acyclovir on genital infection with herpes simplex virus types 1 and 2 in the guinea pig. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 143-150.

73. Laskin O.L. Clinical pharmacokinetics of acyclovir // Clin. Pharmacokinet, 1983, vol. 8, №3, p. 187-201/

74. Laskin O.L. et al. Effect of renal failure on the pharmacokinetics of acyclovir. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 197-201.

75. Lass J.H. et al. Acyclovir and corneal wound healing // Am. J. Ophtalmol., 1979, Vol. 88, p. 102-108.

76. Lewis L.D. et al. Human gastrointestinal absorption of acyclovir from tablet duodenal infusion and sipped solution // Brit. J. Clin. Pharmacol., 1986, Vol. 21, №4, p. 459-462.

77. Lin T.S., Neenan J.P. et al. Synthesis and antiviral activity of 5- and 5'-substituted thymidine analogs. //J. Med. Chem., 1976, Vol. 19, p. 495-498.

78. Pagano J. et al. Acyclovir and Epstein-Barr virus infection // J. Antimicrob Chemother., 1983, Vol. 12, Suppl. B, p. 113-121.

79. Prusoff W.H. Synthesis and biological activities of iododeoxyuridine, an analog of thymidine. // Biochem. Biophys. Acta, 1959, 32, p. 295-296.

80. Rashiq S., Briewa L. et al. Distinguishing acyclovir neurotoxicity from encephalomyelitis. //J. Intern. Med., 1993, Nov 234: 5, p. 507-511.

81. Schaeffer H.J., Gurwara S. et al. Novel substrate of adenosine deaminase. //

82. J. Med. Chem., 1971, Vol. 4, 367-369.

83. Schaffer H.J. Acyclovir chemistry and spectrum of activity. // The Am. J. of Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 4-6.

84. Scott L.L., Sanchez P.J. et al. Acyclovir suppression to prevent cesarean delivery after first episode genital herpes // Obstet. Gunecol, 1996, Vol. 87, №1, p. 69-73.

85. Shah G.M. et al. Acyclovir pharmacokinetics in a patient on continuous ambulatory peritoneal dialysis // Am. J. of Kidn. Dis., 1986, Vol. 7, №6, p. 507-510.

86. Soike K.F., Gerone P.J. Acyclovir in the treatment of Simian Varicella virus infection of the african green monkey. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 112-117.

87. Straus S.E. et al. Oral acyclovir to suppress recurring herpes simplex virus infections in immunodeficient patients //Am. Jntem. Med., 1984, Vol. 100, p. 522-524.

88. Tucker W.E. et al. Toxicology studies with acyclovir ophthalmic and coetaneous tests. // Fundam. Appl. Toxxicol., 1983, Nov.-Dec. 3:6, p. 569572.

89. Tucker W.E. Preclinical toxicology profile of acyclovir: an overvew. // Am. J. of Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 27-31.

90. Van Dyke R.B., Connor J.D. et al., Pharmacokinetics of orally administered acyclovir in patients with herpes progenitalis. //Am. J. of Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 172-175.

91. Van Ecdom L. T. S., Verstug J. Preventive and curative effects of acyclovir on central nervous system infections in hamsters inoculated with herpes simplex virus. //Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 161-164.

92. Wade J.C. et al. Intravenous acyclovir to treat mucocutaneous herpes simplex virus infection after marrow transplantation a double-blind trial // Am. J. Intern. Med., 1982, Vol. 96, p. 265-269.

93. Watanabe K.A., Reichman U. et al., Nucleosides. 110. Synthesis and antiherpes virus activity of some 2'-fluoro-2'-deoxyarabinofuranosylpyrimidinenucleosides. II J. Med. Chem., 1979, Vol. 22, p. 21-24.

94. Whithley R.J., Gnann Jr. J. W. Acyclovir: a decade later // N. Engl. J. Med., 1992, Vol. 327, p. 782-789.

95. Whitley R.J. An evolution of human tolerance and systemic absorption of topically applied acyclovir ointment. Document THRS/79/109. Burroughs Wellcome Co., 1979.

96. Whitley R.J., Blum M.R. et al. Pharmacokinetics of acyclovir in humans following intravenous administration. //Am. J. of Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 165-171.

97. Yeager A.S. Use of acyclovir in premature and term neonates. // Am. J. Med., 1983, Vol. 73, №1a, p. 205-209.