Диагностикум на основе рекомбинантного десмоглеина 3 человека для выявления циркулирующих аутоантител при вульгарной пузырчатке тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.11, кандидат медицинских наук Дзуцева, Ирина Рамазановна

• Дзуцева, Ирина Рамазановна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Дзуцева, Ирина Рамазановна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ.

Механизмы появления аутореактивных клеток.

Клинические особенности истинной пузырчатки.

Методы диагностики истинной пузырчатки.

Патогенетические основы истинной пузырчатки.

Общая характеристика аутоантигенов при пузырчатке.

Рекомбинантные белки на основе ДСГ1 и

ДСГЗ.

Патогенетическая роль аутоантител при пузырчатке.

Экспериментальные модели для исследования патогенности аутоантител.

Гетерогенность гуморального ответа при пузырчатке.

Изучение Т-клеточного ответа на

ДСГЗ.

Генетические предпосылки, обуславливающие развитие пузырчатки.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ.

Клиническая характеристика больных.

Методы исследований.

ГЛАВА 2. Разработка тест-системы на основе иммуно-ферментного анализа (ИФА) с использованием рекомбинантных белков для определения антител к десмоглеину 3 человека.

ГЛАВА 3. Анализ сывороток больных пузырчаткой и доноров с помощью ИФА на основе рекомбинантных белков

ГЛАВА 4. Использование ИФА на основе рекомбннантного десмогленна 3 для дифференциальной диагностики пузырчатки.

ОБСУЖДЕНИЕ.1.

ВЫВОДЫ.I.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Диагностикум на основе рекомбинантного десмоглеина 3 человека для выявления циркулирующих аутоантител при вульгарной пузырчатке»

Актуальность работы Пузырчатка (pemphigus) является тяжелым аутоиммунным заболеванием, этиология и патогенез которого до настоящего времени остаются окончательно не выясненными. Ряд зарубежных и отечественных исследователей показали, что в патогенезе истинной пузырчатки принимают участие как Т-клетки, так и аутоантитела. Основной патогенный эффект вызван появлением IgG4 антител к белкам межклеточной адгезии клеток эпителия кожи и слизистых оболочек, входящих в состав десмосом и формирующих контакты между клетками — десмоглеину-3 и десмоглеину-1. I Лечение пузырчатки, как и других аутоиммунных заболеваний до настоящего времени вызывает большие затруднения. Для контроля аутоиммунного процесса длительно используют кортикостероиды. Отмена кортикостероидов в большинстве случаев приводит к рецидиву заболевания.Диагностика истинной пузырчатки и дифференциальная диагностика пузырных дерматозов представляют определенные трудности, так как часть общепринятых методов диагностики (гистологическое исследование, прямая иммунофлюоресценция), трудоемки, длительны, требуют высококвалифицированного персонала и сложного оборудования, а акантолитические клетки в мазках-отпечатках (метод Тцанка) выявляется только на ранних стадиях заболевания. Зачастую, постановка диагноза — пузырчатка - требует длительного времени. Ранняя диагностика пузырчатки чрезвычайно важна, так как своевременное, массивное лечение кортикостероидными препаратами улучшает прогноз ранее абсолютно смертельного заболевания Поэтому улучшение методов диагностики истинной пузырчатки является актуальной задачей в дерматологии. Создание тест-системы на основе иммуно-ферментного анализа (ИФА) для выявления антител к десмоглеинам позволит проводить быструю (в течение 1 дня) дифференциальную диагностику пузырчатки по сыворотке крови больного, что, несомненно, ускорит постановку диагноза. Целью данной диссертации является разработка отечественной ИФА тест-системы для дифференциальной диагностики пемфигуса.ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ: Основной целью данного исследования является разработка тест-системы на I ! основе рекомбинантного десмоглеина 3 для диагностики вульгарной формы истинной пузырчатки и дифференциальной диагностики пузырных дерматозов.Задачи исследования поставлены следующие: 1) разработать диагностикум на основе иммунно-ферментного анализа (ИФА) с использованием двух форм рекомбинантного десмоглеина 3; 2) изучить возможность использования для диагностики вульгарной пузырчатки ИФА, для чего провести анализ репрезентативной выборки сывороток больных данной патологией; 3) изучить возможность использования ИФА на основе рекомбинантного десмоглеина 3 для дифференциальной диагностики различных форм пузырных дерматозов (ИФА анализ сывороток больных герпетиформным дерматозом Дюринга и буллезным пемфигоидом); 4) оценить уровень антител к десмоглеину 3 человека с помощью разработанного метода у больных пузырчаткой в зависимости от длительности и течения заболевания, а также до и после лечения.Научная новизна Разработаная отечественная тест-система на основе ИФА позволит проводить оценку уровня антител к аутоантигену пузырчатки по сыворотке крови, что является неинвазивной процедурой, а также требует значительно меньше времени (1 день вместо недели). Таким образом, данная работа является новой.Диагностикум создан на основе рекомбинантного дрожжевого белка, соответствующего доменам 1-2 десмоглеина 3 человека. Такой белок был впервые получен в мире. Основной конкурентный диагностикум, созданный в Японии группой M.Amagai, разработан на основе инсектного белка, представляющего всю внеклеточную часть ДСГЗ. Однако показано, что i патогенные антитела при пузырчатке связываются с двумя дистальными i I доменами как десмоглеина 1, так и десмоглеина 3. Таким образом, использование только дистальных доменов повышает специфичность тест-системы. В данной работе впервые создан такой диагностикум.Научно-практическое значение Диагностикумы на основе инсектных белков крайне дороги, так как экспрессия рекомбинантного белка проводится в условиях in vitro в клетках насекомых, требующих для своего роста поверхности (адгезии). В результате затраты на получение белков включают одноразовый пластик, сложные среды для культивирования клеток насекомых, а также фетальную сыворотку коров.Дрожжевые клетки наращиваются в ферментерах в объеме в среде без сыворотки, что позволяет значительно снизить стоимость рекомбинантных белков. Создание относительно дешевого отечественного диагностикума для определения аутоантител при пузырчатке, несомненно, имеет практическую значимость. Оснащение такими тест-системами кожных диспансеров, а также стоматологических клиник позволит проводить дифференциальную диагностику на ранней стадии заболевания, не травмирующим методом и быстро. В России аналогов таких тест-систем нет, в связи с чем очевидна и I научная значимость работы.Основные положения, выносимые на защиту: 1) разработан диагностикум на основе иммунно-ферментного анализа с использованием дрожжевого рекомбинантного фрагмента десмоглеина 3, соответствующего двум дистальным доменам белка, для выявления циркулирующих аутоантител IgG класса; 2) показано, что у 85% больных вульгарной пузырчаткой уровень циркулирующих аутоантител к десмоглеину 3 превышает значения, выявляемые в норме у здоровых доноров; 3) показано, что у 17% больных герпетиформным дерматитом Дюринга и буллезным пемфигоидом выявляются аутоантитела к десмоглеину 3 с низким индексом; 4) показано, что уровень антител к десмоглеину 3 человека не зависит от длительности и тяжести течения вульгарной пузырчатки, но снижается в большинстве случаев в процессе лечения.Апробация работы Основные положения диссертации представлены на XXII конгрессе Европейской Академии аллергологии и клинической иммунологии (Париж, 2003), на научно-практической конференции РГМУ (2004), на Московском научном обществе дерматовенерологов имени А.И.Поспелова (2004), на юбилейной научно-практической конференции памяти профессора М.М.Желтакова (2004).Публикации По материалам диссертации опубликовано 5 работ в отечественной и зарубежной печати.Объем и структура диссертации Работа изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов. Текст иллюстрирован 7 таблицами и 19 рисунками. Указатель литературы содержит 93 работы отечественных и зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Кожные и венерические болезни», Дзуцева, Ирина Рамазановна

ВЫВОДЫ

1. Разработана тест-система для диагностики вульгарной пузырчатки на основе дрожжевого рекомбинантного белка, соответствующего доменам 1-2 десмоглеина 3 человека.

2. Показано, что аутоантитела к десмоглеину 3 выявляются у 85% больных вульгарной пузырчаткой по сравнению со здоровыми донорами.

3. При использовании данной тест-системы выявляются аутоантитела к десмоглеину 3 с низким индексом у 17% больных дерматитом Дюринга и буллезным пемфигоидом.

4. Было показано, что в процессе лечения уровень антител к десмоглеину 3 у больных пузырчаткой снижается, однако корреляции между титром антител и тяжестью, а также длительностью заболевания не выявлено. Практические рекомендации

1. Разработана тест-система для определения уровня аутоантител к десмоглеину 3 человека на основе дрожжевого рекомбинантного белка, соответствующего двум дистальным доменам белка. Специфичность тест-системы при диагностике вульгарной пузырчатки составляет 85%, что позволяет ее рекомендовать для использования в практическом здравоохранении.

2. Предлагаемая тест-система может быть использована для оценки уровня антител при других буллезных заболеваниях (дерматит Дюринга, буллезный пемфигоид). Наличие специфической тест-системы позволит более детально понять патогенез этих заболеваний.

3. Полученные антигены пузырчатки могут быть использованы для дальнейшего изучения механизмов патогенеза пемфигуса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Пузырчатка является аутоиммунным заболеванием, сопровождающимся образованием пузырей и эрозий на коже и слизистых оболочках. В патогенезе пузырчатки принимают участие как Т-клетки, так и аутоантитела. Однако основную группу составляют больные, в сыворотке крови которых выявляют антитела преимущественно IgG4 класса к белкам адгезии десмоглеину 1 (листовидная пузырчатка) и десмоглеину 3 (вульгарная пузырчатка). Патогенные аутоантитела распознают, главным образом, два дистальных домена десмоглеинов - домены 1 и 2. Зачастую, постановка диагноза -пузырчатка — требует длительного времени. Основным инструментальным методом дифференциальной диагностики в России является прямая иммунофлюоресценция (ПИ), для чего требуется получение биоптата кожи больного. В данной работе создана тест-система на основе иммуно-ферментного анализа (ИФА) для выявления антител к десмоглеину 3 человека. Тест-система основана на использовании дрожжевого белка, соответствующего двум дистальным доменам Д1-2 десмоглеина 3 человека. Белок, используемый для нанесения на планшеты, получен генно-инженерным способом и очищен от дрожжевых примесей. Специфичность тест-системы на основе рекомбинантного белка составила 85%. Для количественного сравнения сывороток больных в работе предложено использование положительного и отрицательного контроля на каждом планшете, а также введено понятие индекса антител и серой зоны. При сравнительном анализе индекса антител у больных вульгарной пузырчаткой и прочими пузырными дерматозами было показано, что 17% больных буллезным пемфигоидом и дерматитом Дюринга содержат антитела к десмоглеину 3 в низком, но достоверно превышающем серую зону титре. Разработанная тест-система позволит проводить быструю (в течение 1 дня) диагностику пузырчатки по сыворотке крови больного, что, несомненно, ускорит постановку диагноза. Выявление аутоантител к десмоглеину 3 при других патологиях позволит изучить взаимосвязь между различными кожными заболеваниями.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Дзуцева, Ирина Рамазановна, 2005 год

1. Philpott DJ, Girardin SE. The role of Toll-like receptors and Nod proteins in bacterial infection. Mol Immunol. 2004 Nov;41(l 1):1099-108.

2. Viala J, Sansonetti P, Philpott DJ. Nods and 'intracellular' innate immunity. С R Biol. 2004 Jun;327(6):551-5.

3. Roitt I. Essential immunology, Blackwell Science, 1997.

4. Chaitra MG, Hariharaputran S, Chandra NR, Shaila MS, Nayak R. Defining putative T cell epitopes from PE and PPE families of proteins of Mycobacterium tuberculosis with vaccine potential. Vaccine. 2005 Jan 26;23(10):1265-72.

5. Ayyoub M, Merlo A, Hesdorffer CS, Speiser D, Rimoldi D, Cerottini JC, Ritter G, Chen YT, Old LJ, Stevanovic S, Valmori D. Distinct but overlapping T helper epitopes in the 37-58 region of SSX-2.Clin Immunol. 2005 Jan;l 14(l):70-8.

6. O.Gibson WT, Walter MA, Ahmed AR, Alper CA, Cox DW.The immunoglobulin heavy chain and disease association: application to pemphigus vulgaris. Hum Genet 1994 Dec;94(6):675-83

7. Anhalt GJ, Labib RS, Voorhees JJ, Beals TF, Diaz LA Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease, J Med 1982 May 20;306(20): ppl 189-1196.

8. Пасечник Б.А., Орлова JI.H. К вопросу об атипичном течении вульгарной пузырчатки. Вестн. дерматол. и венерол., 1981, №2, с.44-47

9. Хапилова В.И. Случай атипичной вульгарной пузырчатки Вестн. дерматол. и венерол., 1981, №3, с.56-57.

10. Каламкарян А.А., Мордовцев В.Н., Трофимова Л.Я., Клиническая дерматология. Редкие и атипичные дерматозы. Ереван. «Айастан», 1989, 568 с.

11. Павлов С.Т. Zur Frage des Wesens des Nikolskyphanomens bei Pemphigus folliaceus. - Arch. Dermat. u. Syph.,1933, Bd. 168, s. 116-124.

12. Lever W.P.- Pemphigus. Medicine (Baltimore), 1953, 32, 1, 1-123.

13. Tzanck A. Le cytodiagnostic immedist en dermatologie. - Ann. Dermat. et syph., 1948, 8, 205-218

14. Пузырные дерматозы. Псориаз. Под редакцией Е.В.Соколовского. СОТИС. Санкт-Петербург, 1999, 133.

15. Г.М.Цветкова, В.В.Мордовцева, А.М.Вавилов, В.Н.Мордовцев. Патоморфология болезней кожи. Москва. Медицина. 2003. с.494).

16. Jordan R.E., J.Invest. Dermatol. 1976, 67, 366-371.

17. Stanley JR, Yaar M, Hawley-Nelson P, Katz SI, Pemphigus antibodies identify a cell surface glycoprotein synthesized by human and mouse keratinocytes, J Clin Invest 1982 Aug;70(2):pp281-288

18. Eyre RW, Stanley JR, Identification of pemphigus vulgaris antigen extracted from normal human epidermis and comparison with pemphigus foliaceus antigen, J Clin Invest 1988 Mar 81(3):pp807-812

19. Korman NJ, Eyre RW, Klaus-Kovtun V, Stanley JR, Demonstration of an adhering-junction molecule (plakoglobin) in the autoantigens of pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris, N Engl J Med 1989 Sep 7;321(10):pp631-635

20. Amagai M, Klaus-Kovtun V, Stanley JR, Autoantibodies against a novel epithelial cadherin in pemphigus vulgaris, a disease of cell adhesion., Cell 1991 Nov 29;67(5):pp869-877

21. Stanley JR, Koulu L, Thivolet C.J, Distinction between epidermal antigens binding pemphigus vulgaris and pemphigus foliaceus autoantibodies, Clin Invest 1984 Aug;74(2):pp313-320

22. Emery D.J., Diaz L.A., Fairley J.A. et al. 1995. Pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris autoantibodies react with the extracellular domain of desmoglein-1. J Invest Dermatol. 104: 323-328.

23. D'Agosto G, Latini A, Carducci M, Mastroianni A, Vento A, Fei PC. Evaluation of recombinant antigen-based assays for diagnosis of bullous autoimmune diseases. Clin Diagn Lab Immunol. 2004 Jul;l l(4):762-5.

24. Takeichi M. 1991. Cadherin cell adhesion receptors as a morphogenetic regulator. Science (Wash. DC). 251: 1451-1455.

25. Takeichi M.1995. Morphogenetic roles of classic cadherins. Curr Opin Cell Biol 7:619-627.

26. Geiger B, Ayalon 0.1992. Cadherins. AnnuRev Cell Biol 8: 307-332.

27. Koch P J, Franke W W .1994. Desmosomal cadherins: another growing multigene family of adhesion molecules. Curr Opin Cell Biol 6, 682-687.

28. Koch PJ, Walsh MJ, Schmelz M et al.1990. Indentification of desmoglein, a constitutive desmosomal glycoprotein, as a member of the cadherin family of cell adhesion molecules. Eur J Cell Biol 53: 1-12.

29. Diaz L.A. et al.1978. Phylogenetic studies with pemphigus and pemphigoid antibodies. Acta Dermato Venerol. 58: 537-540.

30. Grando S.A. 1989. Fixation of pemphigus vulgaris and foliaceus antibodies in shedding snake epidermis. Dermatologica. 178: 8-11.

31. Mahoney MG, Wang Z, Rothenberger К et al. 1999. Explanations for the clinical and microscopic localization of lesions in pemphigus foliaceus and vulgaris. J Clin Invest. 103:461-468.

32. Schafer S, Koch PJ, Franke WW. 1994.Identification of the ubiquitos human desmoglein, Dsg2, and the expression catalogue of the desmoglein subfamily of desmosomal cadherins. Exp Cell Res. 211: 391-399.

33. Wu H, Yan A, Fakharzadeh S,Wheelock M J et al.2000. Protection against Pemphigus foliaceus by desmoglein 3 in neonates. The New Eng J Med . 343, 31-35.

34. Jeffes E.B., Kaplan R.P. et al. 1984. Use a human skin explants as a model of pemphigus vulgaris disease in vitro. J Clin Immunol. 4: 359-363.

35. Schiltz J R, Michel B: Production of epidermal acantolysis in normal human skin in vitro by IgG fraction from pemphigus serum. J Invest Dermatol : 67, No 1976, pp254-260

36. M.Amagai, Karpati S., Prussick R., et.al.1992, Autoantibodies aganist the amino-terminal cadherin-like binding domain of pemphigus vulgaris antigen are pathogenic. 1992,

37. Benjamin DC, Berzofsky JA, East IJ et al. 1984. The antigenic structure of proteins: a reappraisal. Annu Rev Immunol. 2: 67-101.

38. Amagai M, Ishii K, Hashimoto T et al. 1995. Conformational epitopes of pemphigus antigens (Dsgl and Dsg3) are calcium dependent and glycosylation independent. J Invest Dermatol. 105(2): 243-247.

39. Amagai M, Hashimoto T et al. 1995. Antigen-specific immunoadsorption of pathogenic autoantibodies in pemphigus foliaceus. J Invest Dermatol 104: 895901.

40. Fan J.L., Memar O. et al. 1999. BALB/c mice produce blister-causing antibodies upon immunization with a recombinant human desmoglein 3. J Immunol. 163: 6228-6235.

41. Futei Y, Amagai M, Sekiguchi M, Nishifuji K, Fujii Y, Nishikawa T. Use of domain-swapped molecules for conformational epitope mapping of desmoglein 3 in pemphigus vulgaris. J Invest Dermatol. 2000 Nov;l 15(5):829-34.

42. Sekiguchi M, Futei Y, Fujii Y, Iwasaki T, Nishikawa T, Amagai M. Dominant autoimmune epitopes recognized by pemphigus antibodies map to the N-terminal adhesive region of desmogleins. J Immunol. 2001 Nov 1;167(9):5439-48.

43. Zheng J, Kang X et al. 2000. Molecular cloning and protein expression of EC 1-2 and EC3-4 epitopes of pemphigus vulgaris antigen. Chin Med J (Engl). 113(11): 1011-1014.

44. Farb RM, Dykes R, Lazarus GS. , Anti-epidermal-cell-surface pemphigus antibody detaches viable epidermal cells from culture plates by activation of proteinase. Proc Natl Acad Sci U S A 1978 Jan;75(l): pp459-463

45. Свирщевская E.B., Матушевская E.B., Коцарева О.Д., Багаева JI.B., Дзуцева И.Р., Лысенко А.А. Блокада акантолиза эпидермиса при вульгарной пузырчатке протективными антителами. Вестник дерматологии и венерологии. 2003, 4, 4-7.

46. Hashimoto Т., Ogawa M., Konohana A. et al. 1990. Detection of pemphigus vulgaris and pemphigus foliaceus antigens by immunoblot analysis using different antigen sources. J Invest Dermatol 94: 327-331.

47. Amagai M, Hashimoto T, Green KJ, Shimizu N, Nishikawa T. Antigen-specific immunoadsorption of pathogenic autoantibodies in pemphigus foliaceus. J Invest Dermatol. 1995 Jun;104(6):895-901.

48. Koch P J et al.l997.Targeted disruption of the pemphigus vulgaris antigen (desmoglein 3) gene in mice causes loss of keratinocyte cell adhesion with a phenotype similar to pemphigus vulgaris. J Cell Biol. 137: 1091-1102.

49. Amagai M, Tsunoda К et al. 2000. Use of autoantigen- knockout mice in developing an active autoimmune disease model for pemphigus. J Invest Dermatol 105(5): 625-631.

50. Schiltz JR., Michel B, Papay R. 1979. Appearance of" pemphigus acantholysis factor" in human skin cultured with pemphigus antibody. J Invest Dermatol. 73: 575-581.

51. Fitzpatrick RE, Newcomer VD. The correlation of disease activity and antibody titers in pemphigus.Arch Dermatol 1980 Mar;l 16(3):285-90

52. Sams WM Jr, Jordon RE, Correlation of pemphigoid and pemphigus antibody titres with activity of disease,: Br J Dermatol 1971 Jan;84(l):pp7-13

53. Rivitti EA, Sanches JA, Miyauchi LM et al. 1994. Pemphigus foliaceus autoantibodies bind both epidermis squamos mucosal epithelium, but tissue injury is detected only in the epidermis. J Am Acad Dermatol. 31: 954-958.

54. Hashimoto K. et al.1983. Anti-cell surface pemphigus autoantibody stimulates plasminogen activator activity of human epidermal cell. J Exp Med. 157: 259272.

55. Bhol K, Natarajan K, Nagarwalla N et al. 1995. Correlation of peptide specificity and IgG subclass with pathogenic and nonpathogenic autoantibodies in pemphigus vulgaris: a model for autoimmunity. Proc Natl Acad Sci USA. 92: 5239-5243.

56. Brandsen R, Frusic- Zlotkin M, Lyubimov M et al. 1997. Circulating pemphigus IgG in families of patients with pemphigus: comparison of indirect immunofluorescence, direct immunofluorescence, and immunoblotting. J Am Acad Dermatol. 36: 44-52.

57. Warren SJR, Arteaga LA, Rivitti EA et al. 2003. The role of subclass switching in the pathogenic of endemic pemphigus foliaceus. J Invest Dermatol. 120: 1-5.70.0ngenae TC, Temmerman LJ et al. 1999. Intercellular IgA dermatosis. Eur J Dermatol 9: 85-94.

58. Wallach D. 1992. Intraepidermal IgA pustulosis. J Am Acad Dermatol 27: 993-1000.

59. Hertl M., Karr R.W., Amagai M. et al. 1998. Heterogeneous МНС II restriction pattern of autoreactive desmoglein 3 specific T cell responses in Pemphigus vulgaris patients and normals. J Invest Dermatol 110: 388-392.

60. Ahmed AR, Yunis EJ, Khatri К et al. 1990. MHC haplotype studies in Ashkenazi Jewish patients with pemphigus vulgaris. Proc Natl Acad Sci USA. 87: 7658- 7662.

61. Niizeki H, Inoko H et al.l 991. HLA II class antigens are associated with Japanese pemphigus patients. Hum Immunol31: 246-250.

62. Brenner S, Tur E et al. 2001. Pemphigus vulgaris: environmental factors. Occupational, behavioral, medical and qualitative food frequency questionnaire. Int J Dermatol .40: 562-569.

63. Ruocco V, Wolf R, Ruocco E et al.1996. Viruses in pemphigus: A casual or casual relationship? Int J Dermatol. 35: 782-784.

64. Hammer J., Gallazzi F., Bono C.P. et al. 1995. Peptide binding specificity of HLA-DR 4 molecules: correlation with rheumatoid arthritis association. J Exp Med. 181:1847-1855.

65. Caproni M, Giomi B, Cardinali C, Salvatore E, Pestelli E, D'Agata A, Bianchi B, Toto P, Feliciani C, Fabbri P. Further support for a role for Th2-likecytokines in blister formation of pemphigus. Clin Immunol. 2001 Feb;98(2):264-71.

66. Aalberse RC, Platts-Mills ТА. How do we avoid developing allergy: modifications of the TH2 response from a B-cell perspective. J Allergy Clin Immunol. 2004 May;113(5):983-6.

67. Wang X, Bregegere F, Soroka Y, Frusic-Zlotkin M, Milner Y. Replicative senescence enhances apoptosis induced by pemphigus autoimmune antibodies in human keratinocytes. FEBS Lett. 2004 Jun 4;567(2-3):281-6.

68. Lapiere JC, Guitart J, Ettlin DA, Chen DM, Amagai M, Chan LS. Preferential activation of the complement system in the lower epidermis of patients with pemphigus vulgaris. Br J Dermatol. 1998 Nov;139(5):851-4.

69. Saarialho-Kere UK, Vaalamo M, Airola K, Niemi KM, Oikarinen AI, Parks WC. Interstitial collagenase is expressed by keratinocytes that are actively involved in reepithelialization in blistering skin disease. J Invest Dermatol. 1995 Jun;104(6):982-8.

70. Bielory L, Lien KW, Bigelsen S. Efficacy and tolerability of newer antihistamines in the treatment of allergic conjunctivitis. Drugs. 2005;65(2):215-28.

71. Burks W, Lehrer SB, Bannon GA. New approaches for treatment of peanut allergy: chances for a cure. Clin Rev Allergy Immunol. 2004 Nov;27(3): 191-6.

72. Fan L, Busser BW, Lifsted TQ, Oukka M, Lo D, Laufer TM. Antigen presentation by keratinocytes directs autoimmune skin disease. Proc Natl Acad Sci USA. 2003 Mar 18;100(6):3386-91. Epub 2003 Mar 10.

73. Kirveskari J, Helinto M, Moilanen JA, Paavonen T, Tervo TM, Renkonen R. Hydrocortisone reduced in vivo, inflammation-induced slow rolling of leukocytes and their extravasation into human conjunctiva. Blood. 2002 Sep 15;100(6):2203-7.

74. Futei Y, Amagai M, Hashimoto T, Nishikawa T. Conformational epitope mapping and IgG subclass distribution of desmoglein 3 in paraneoplastic pemphigus. J Am Acad Dermatol. 2003 Dec;49(6): 1023-8.1. БЛАГОДАРНОСТИ