Биологические особенности трансформации плазматических клеток и лабораторная диагностика множественной миеломы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат биологических наук Русанова, Екатерина Борисовна

• Русанова, Екатерина Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Русанова, Екатерина Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.б

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Множественная миелома.

1.1.1. Традиционные методы выявления моноклонального белка.

1.1.2. Современная клиническая лабораторная диагностика множественной миеломы.

1.1.3. Метод иммунофиксации для выявления моноклонального белка.

1.2. Биология плазматических клеток.

1.2.1. Фенотипические особенности дифференцировки плазматических клеток.

1.2.2. Трансформированные плазматические клетки.

1.2.3. Иммунофенотипирование плазматических клеток.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Пациенты.

2.2. Методы.

2.2.1. Нефелометрический метод анализа белков сыворотки крови и мочи.

2.2.1.1. Оценка содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови.

2.2.1.2. Определение концентрации легких цепей сыворотки крови и мочи.

2.2.1.3. Определение бета-2-микроглобулина в 39 сыворотке

2.2.2. Метод иммунофиксации для выявления моноклонального белка.

2.2.2.1. Протокол исследования.

2.2.2.2. Интерпретация результатов иммунофиксации.

2.2.3. Иммунофенотипирование методом проточной цитометрии.

2.2.3.1. Информативность иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии.

2.2.3.2. Оценка интенсивности экспрессии маркеров.

2.2.3.3. Пробоподготовка.

2.3. Статистический анализ данных.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Этап первичной диагностики.

3.1.1. Иммунофиксация белков периферической крови.

3.1.2. Иммунофиксация белков суточной мочи.

3.1.3. Иммунофиксация белков в двух биологических материалах.

3.1.4. Результаты иммунофиксации и концентрации иммуноглобулинов сыворотки.

3.1.5. Результаты иммунофиксации и концентрации легких цепей.

3.1.5.1. Результаты иммунофиксации и концентрации легких цепей сыворотки крови.

3.1.5.2. Результаты иммунофиксации и концентрации легких цепей суточной мочи.

3.1.6. Результаты иммунофиксации и уровень бета - 2 -микроглобулина.

3.1.7. Иммунофенотипирование клеток костного мозга.

3.1.8. Относительное количество плазматических клеток по результатам световой микроскопии и проточной цитометрии.

3.1.9. Сопоставление результатов иммунофенотипирования и иммунофиксации.

3.2. Этап диагностики минимальной остаточной болезни и оценки эффективности терапии.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСЮЖ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические особенности трансформации плазматических клеток и лабораторная диагностика множественной миеломы»

Актуальность проблемы

Множественная миелома — заболевание системы крови, биологической основой которого является накопление трансформированных плазматических клеток и продуцируемого ими патологического белка. Сопутствующие органные нарушения включают деструкцию костной ткани, гиперкальциемию, почечную недостаточность и анемию. Согласно классификации Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) 2008 г., множественная миелома (ММ) относится к В-клеточным лимфоидным опухолям низкой степени злокачественности. Для постановки диагноза и определения стадии ММ требуется наличие таких признаков, как (1) содержание плазматических клеток в костном мозге более 10% и/или наличие плазмоцитомы, подтверждённой гистологическим исследованием, (2) наличие моноклонального белка в сыворотке и/или в моче, (3) органная недостаточность, обусловленная миеломной болезнью [31].

ММ занимает 1% среди всех онкологических заболеваний, составляя при этом 10% от всех злокачественных заболеваний системы крови [50, 72]. Распространенность заболевания ММ в России и Европе колеблется от 1,2 до 6 случаев на 100000 населения в год. В Санкт-Петербурге в 2004 году заболеваемость составила 2,5 на 100000 населения, было зарегистрировано 387 больных и 97 новых случаев ММ [3]. Возрастная медиана заболевания 71 год, лица до 40 лет среди общего количества больных составляют не более 2%, а доля пациентов моложе 30 лет колеблется от 0,18 до 1% среди всех случаев верифицированной ММ [7]. В последние годы отмечают тенденцию увеличения показателя заболеваемости ММ, что объяснимо совершенствованием лабораторной диагностики ММ и вовлечением новых современных технологий [15, 27]. Появление новых лекарственных препаратов и новых возможностей лечения ММ приводит к особой востребованности выявления минимальной остаточной болезни (МОБ) и верификации ремиссии заболевания.

Опухолевая трансформация В-лимфоцитов при ММ происходит в терминальных центрах периферических лимфоидных органов после соматических гипермутаций реаранжированных генов иммуноглобулинов и изотипического переключения антител [26]. Трансформированные, претерпевшие опухолевую трансформацию плазматические клетки, наряду с нормальными мигрируют обратно в костный мозг, где при участии микроокружения костного мозга формируют опухолевый клон, что приводит к о стео деструкции. Цитокины, секретируемые стромальными элементами костного мозга, играют важную роль для вновь прибывших в костный мозг плазматических клеток. В частности, показано, что IL-6 является фактором роста для миеломных клеток. В результате ряда последующих активационных процессов в трансформированных плазматических клетках последние приобретают высокую пролиферативную активность вместе со снижением их способности к апоптотической гибели [29]. Иммунофенотипический профиль миеломных клеток имеет ряд особенностей: в процессе дифференцировки В-лимфоцитов происходит потеря пан-В-клеточных маркеров, таких как CD 19 и CD20, и приобретение большого количества молекул адгезии [34]. Приобретение этих молекул связано с возвращением миеломных клеток обратно в костный мозг после изотипического переключения синтеза иммуноглобулинов в лимфатическом узле. Маркер адгезии CD56 отсутствует на поверхности плазматических клеток в норме, экспрессируется миеломными клетками и исчезает на этапе прогрессии заболевания [6, 32].

В настоящее время в Санкт-Петербурге и в Российской Федерации, несмотря на проведение современного высокотехнологичного лечения, отсутствует единый алгоритм первичной диагностики и выявления МОБ при ММ. Поэтому вопрос о критериях оценки эффективности терапии в различных лечебно-профилактических учреждениях остается открытым и сегодня. Аналогичные работы за пределами Российской Федерации также носят эпизодический характер и не могут быть с уверенностью перенесены в диагностические лаборатории. Настоящее исследование посвящено определению характера продукции моноклонального белка плазматическими клетками и выявлению иммунофенотипических особенностей плазматических клеток при ММ с применением современных методов лабораторной диагностики: иммунофиксации и иммунофенотипирования методом проточной цитометрии.

Цель работы

Выявить биологические особенности трансформации плазматических клеток при множественной миеломе для оптимизации диагностики и лабораторного мониторинга.

Задачи работы

1. Оценить характер продукции белков трансформированными плазматическими клетками при множественной миеломе.

2. Выявить особенности сочетанной продукции различных белков при множественной миеломе.

3. Разработать способ идентификации плазматических клеток методом проточной цитометрии и оценить иммунофенотипические особенности трансформированных плазматических клеток при множественной миеломе.

4. Сформировать комплекс лабораторных исследований для диагностики и мониторинга множественной миеломы.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Впервые определены иммунологические варианты продукции моноклонального белка при множественной миеломе и оценена аберрантность (отклонение от нормы) иммунофенотипического профиля трансформированных плазматических клеток для популяции больных РФ (Северо-Западного региона). Разработана стратегия логических ограничений для идентификации целевой популяции плазматических клеток методом проточной цитометрии для выявления сохранных и трансформированных плазматических клеток на этапах первичной диагностики и оценки минимальной остаточной болезни.

Впервые изучены биологические особенности аберрантности иммунофенотипа плазматических клеток и иммунологического варианта продукции моноклонального белка при различных типах множественной миеломы. Показано, что миеломные клетки с моноклональной продукцией иммуноглобулина А и легкой цепью лямбда типа иммунологического варианта моноклонального белка во всех случаях позитивны по маркеру CD 19 и в большинстве случаев экспрессируют маркеры CD56 и CD 117. Впервые проведено комплексное сопоставление результатов определения концентраций основных классов иммуноглобулинов сыворотки крови, легких цепей каппа и лямбда типа сыворотки крови и мочи, уровня бета-2-микроглобулина и иммунофиксации для выявления и определения типа моноклонального белка при множественной миеломе. Впервые выявлены тендерные различия больных множественной миеломой на этапе оценки минимальной остаточной болезни: положительный результат иммунофиксации сыворотки и увеличение содержания IgA чаще наблюдали у мужчин, в то время как увеличение концентрации легких цепей каппа типа в сыворотке чаще наблюдали у женщин. Предложен алгоритм расчета относительного количества плазматических клеток, позволяющий на основании значений, полученных методом проточной цитометрии, предположить относительное количество плазматических клеток, которое будет определено методом световой микроскопии. Показано, что иммунологический вариант моноклонального белка сохраняется в ходе заболевания и позволяет проводить диагностику минимальной остаточной болезни.

Практическая значимость работы

Для выявления моноклонального белка в сыворотке крови и моче с целью определения иммунологического варианта его продукции при диагностике множественной миеломы показано использование метода иммунофиксации на этапах диагностики, оценки эффективности терапии и определения минимальной остаточной болезни множественной миеломы. Предложенная стратегия иммунофенотипирования методом проточной цитометрии выявляет относительное количество и первичный иммунофенотип плазматических клеток в дебюте заболевания, что позволяет проводить мониторинг эффективности терапии с выявлением сохранных и трансформированных плазматических клеток.

Для диагностики множественной миеломы и мониторинга эффективности терапии лабораторное обследование включает количественное определение основных классов иммуноглобулинов сыворотки IgA, IgM и IgG, легких цепей каппа и лямбда типов сыворотки крови и мочи, определение уровня бета-2-микроглобулина, выявление моноклонального белка, определение его состава методом иммунофиксации и иммунофенотипирование методом проточной цитометрии плазматических клеток костного мозга.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Метод иммунофиксации идентифицирует моноклональный белок, что у свидетельствует о трансформации плазматических клеток и является одним из критериев множественной миеломы на этапах диагностики и оценки минимальной остаточной болезни.

2. Особенности иммунофенотипического профиля плазматических клеток на этапах диагностики и оценки эффективности терапии позволяют проводить определение относительного количества трансформированных и нормальных плазматических клеток для мониторинга минимальной остаточной болезни множественной миеломы.

3. Предложенный комплекс иммунологической диагностики ММ; включающий классические методы (определения концентраций иммуноглобулинов основных классов сыворотки крови, бета-2-микроглобулина, легких цепей сыворотки и мочи, морфологическую оценку состава клеток костного мозга), и современные методы, иммунофенотипирование и иммунофиксацию, выявляет биологические особенности трансформированных плазматических клеток каждого больного множественной миеломой, подтверждает клональность заболевания и выявляет минимальную остаточную болезнь.

Апробация

Основные положения диссертационного исследования были доложены на X Всероссийском научном форуме с международным участием имени акад. В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (2006), на научном совете СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова в качестве победителя конкурса «Стипендия I года 2007», на 7-й летней иммунологической школы им. проф. Дж. Хамфри (Москва, 2007), на Международной встрече памяти P.M. Горбачевой (Санкт-Петербург, 2007), на межвузовской конференции Общества молодых ученых СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова «Санкт-Петербургские научные чтения» -2007 и 2008, на Международной конференции Европейской ассоциации по гематологии (Берлин, 2009). По теме диссертационного исследования были получены гранты Правительства Санкт-Петербурга Фундаментального Естествознания в 2006, 2007 и 2008 гг., грант Правительства Санкт-Петербурга в области науки и техники 2007 г., грант для молодых ученых СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова в 2007 и 2008 гг.

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертационного исследования внедрены в клиническую практику отделений гематологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова, Российского научно-исследовательского института гематологии и трансфузиологии, Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова, ГУЗ городских больниц № 15, № 17 и № 31 г. Санкт-Петербурга, Ленинградской областной клинической больницы, Негосударственного учреждения здравоохранения ОАО «РЖД» Дорожной клинической больницы г. Санкт-Петербурга, Республиканской больницы имени В.А. Баранова г. Петрозаводска.

Результаты работы применяют в преподавательской деятельности на кафедре клинической лабораторной диагностики с курсом молекулярной медицины СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова в рамках основной программы обучения студентов 6 курса, при работе с иностранными студентами 6 курса лечебного факультета, при проведении совместных элективов для магистров первого и второго года обучения на кафедре цитологии и гистологии биолого-почвенного факультета Санкт-Петербургского государственного университета, в рамках факультета повышения образования СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова на курсах повышения образования.

Личный вклад автора в разработку темы

Данные, представленные в работе, получены лично автором. Автором показано, что для проведения лабораторной диагностики множественной миеломы необходимо повышение информативности проводимых диагностических методов исследования множественной миеломы. Автором внедрены и апробированы методы иммунофиксации и иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии для оценки биологических особенностей плазматических клеток; создан алгоритм выявления плазматических клеток в костном мозге; разработаны алгоритмы для первичной диагностики множественной миеломы, для определения минимальной остаточной болезни и оценки эффективности терапии. Оценена аберрантность фенотипа трансформированных плазматических клеток на этапах первичной диагностики и определения минимальной остаточной болезни. Разработан комплекс лабораторных исследований для диагностики множественной миеломы и мониторинга эффективности терапии. Выполнена статистическая обработка, анализ полученных данных и обобщение результатов исследования. Оценка содержания иммуноглобулинов основных классов и бета-2-микроглобулина сыворотки, легких цепей сыворотки крови и мочи была проведена сотрудниками лаборатории клинической иммунологии и молекулярной диагностики ЦЛД СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова. Оценка относительного содержания плазматических клеток костного мозга методом световой микроскопии была выполнена сотрудниками лаб. клинической гематологии ЦЛД СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова Е.Т. Поляковой и О.В. Штапровой.

Публикации

По теме диссертационного исследования опубликовано 14 работ, в том числе 3 публикации в изданиях, определенных перечнем ВАК, 2 учебно-методических пособия для студентов медицинских ВУЗов, врачей и специалистов.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения собственных данных, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа проиллюстрирована 27 рисунками и 46 таблицами. Список литературы включает 116 источников, из них 12 отечественных и 104 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Русанова, Екатерина Борисовна

1. Результаты исследования предназначены для использования специалистами лабораторной службы, врачами-гематологами медицинских учреждений.

2. Использование метода иммунофиксации показано для выявления моноклонального белка и определения его состава на всех этапах диагностики множественной миеломы. Этап первичной диагностики позволяет определить иммунологический вариант патологического белка, в то время как проведение этапа лабораторного мониторинга множественной миеломы включает необходимость подтверждения моноклональной продукции белка при его наличии.

3. Для определения относительного количества плазматических клеток в костном мозге, выявления аберрантности их иммунофенотипа показано использование метода иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии.

4. Для оценки эффективности проведенной терапии и выявления минимальной остаточной болезни показано использование метода иммунофенотипирования с помощью проточной цитометрии, который позволяет выявить относительное количество трансформированных плазматических клеток среди всех плазматических клеток. Для проведения диагностики минимальной остаточной болезни показана необходимость определения первичного иммунофенотипа ч плазматических клеток и подтверждение моноклонального характера продукции белка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Русанова, Екатерина Борисовна, 2009 год

1. Андреева Н.Е. Иммуноглобулинопатии / Н.Е. Андреева, Е.Б. Чернохвостова.-М.: Медицина, 1985. - 240 с.

2. Андреева Н.Е. Множественная миелома: прошлое, настоящее, будущее / Н.Е. Андреева // Гематология и трансфузиология 1998. - №3. — С.4.

3. Бессмельцев С.С. Множественная миелома / С.С. Бессмельцев, К.М. Абдулкадыров. СПб.: Диалект, 2004. - 448 с.

4. Волкова М.А. Клиническая онкогематология / М.А. Волкова. М.: Медицина, 2007. - 847-867 с.

5. Зуева Е.Е. Иммунная система. Иммунограмма. Рекомендации по назначению и применению в лечебно-диагностическом процессе / Е.Е. Зуева, Е.Б. Русанова, А.В. Куртова, А.П. Рыжак, О.В. Галкина, Д.В. Чередниченко. -СПб.: Триада, 2008. 60 с.

6. Лисунов И.А. Иммунологические аспекты множественной миеломы / И.А. Лисунов. Новосибирск: Наука, 2003. - 157 с.

7. Луговская С.А. Иммунофенотипирование в диагностике гемобластозов / С.А. Луговская, М.Е. Почтарь, Н.Н. Тупицын.- Тверь: Триада, 2005. -С. 168.

8. Римашевская Е. В. Множественная миелома с секрецией иммуноглобулина А: особенности течения, прогноза и ответа на терапию / Е. В. Римашевская, Н. Е. Андреева // Гематология и трансфузиология. 2005. №4. С. 21-26.

9. Ю.Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Брюстофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000. -С.582.

10. И.Хайдуков С.В. Избранные вопросы современной проточной цитометрии / С.В. Хайдуков, А.В. Зурочка. — Челябинск: Челябинская государственная медицинская академия, 2007. С. 84.

11. Эмануэль B.JI. Лабораторная диагностика заболеваний почек. —2-е изд., исп. и доп. Тверь: Триада, 2006. С. 248.

12. Arinkin MI. Die intravitale Untersuchungsmethodik des Knochenmarks / Leipzig: Folia Haemat, 1929. P. 233.

13. Awisati G. The role of interferon-alpha in the management of myelomatosis / G. Awisati, F. Mandelli // Hemat. Oncol. Clin N. Amer. -1992. Vol.6. -P. 395405.

14. Bailliere's clinical hematology. International Practice and research. Multiple Myeloma / Guest ed. Mandelli. London — Philadelphia - Sydney: Baillie Tindall, 1995.

15. Bataille R. A cellular model for myeloma cell growth and,maturation based on an intraclonal CD45 expression /R. Bataille, N. Robillard, C. Pellat-Deceunynck, M. Amiot // Immunol. Rev. 2003. - Vol. 194. - P. 105-111.

16. Bataille R. Serum beta2 microglobulin and survival duration in multiple myeloma: a simple reliable marker for staging / R. Bataille, B. Durie, J. Grenier // Brit. J. Haemat. 1983. -№3. - Vol.55. -P.439-447.

17. Bence Jones H. Chemical Pathology / Bence Jones H. Lancet. - 1847- №2. - P. 88-92.

18. Bence Jones H. On the new substance occurring in the urine of patient with mollities ossium / Bence Jones H. // Philos. Trans. R. Soc. Lond. 1848. -Vol.138. -P.55-62.

19. Bettini R. Prognostic value of serum beta2-microglobulin in multiple myeloma / R. Bettini, S. Redaelli, C. Maino, S. Bertuol, C. Costantini, A. Lazzarini, L. Brivio, M. Gorini // Recenti. Prog. Med. 2005. -№2. -Vol.96. - P.81-6.

20. Le Bricon T. Laboratory identification and measurement of urinary proteins / T. Le Bricon // Ann. Biol. Clin. (Paris). -2002. №5. - Vol.60. - P.525-40.

21. Boccadoro M. Plasma cell disorders: Benign monoclonal gammopathy, solitary plasmocytoma, mlriple myeloma and plasma cell leukemia. Textbook of Malignant Hematology / M. Boccadoro., Eds L. Degos, D. Linch, B. Lowenberg. -Martin Dunitz, 1999. P.609-618.

22. DeVita Eds V.T. Cancer: principles and practice of oncology / Eds V.T. DeVita, S. Hellman, S.A. Rosenberg Philadelphia etc.: Lippincott Williams&Wikins, 2001.

23. Collette M. Crucial role of phosphatase CD45 in determining signaling and proliferation of human myeloma cells / M. Collette, G. Descamps, C. Pellat-Deceunynck, R. Bataille, M. Amiot // Eur. Cytokine. Netw. 2007. -№3. -Vol.18.-P.120-6.

24. Chen-Kiang S. Biology of plasma cells / S. Chen-Kiang // Best. Pract. Res. Clin. Haematol. 2005. - №18. - P.493-507.

25. Criteria for the classification of monoclonal gammopathies, multiple myeloma and related disorders: a report of the international myeloma working group // Br. J. Haematol. -2003. -№5. Vol.121. -P.749-757.

26. DiGiuseppe J.A. Flow cytometric immunophenotyping of plasmacytic neoplasms / J.A. DiGiuseppe // Am. J. Clin. Pathol. 2007. - №2. - Vol.127. - P. 172-4.

27. Dispenzieri A. Multiple myeloma: clinical features and indications for therapy / A. Dispenzieri, Robert A. Kyle // Best practice and research clinical haemotology. — 2005. №4. - Vol. 18. - P. 553-568.

28. Dhodapkar M.V. Syndecan-1 is a multifunctional regulator of myeloma pathobiology: control of tumor cell survival, growth, and bone cell differentiation,/ M.V. Dhodapkar, E. Abe, A. Theus et al. // Blood. 1998. - Vol.91. - P.2679-2688.

29. Davies F.E. Minimal residual disease monitoring in multiple myeloma / F.E. Davies, A.C. Rawstron, G.J. Morgan // Best Pract. Res. Clin. Haematol. 2002. -№1. -Vol. -15. -P. 197-222.

30. De Vos J. Microarray-based understanding of normal and malignant plasma cells / J. De Vos, D. Horse, T. Reme et al. // Immunol. Rev. 2006. -Vol.210. -P.86-104.

31. Durie B.G. Initial recommendations International Myeloma Working Group / B.G. Durie, R.A. Kyle, A. Belch // A publication of International Myeloma Foundation. -2003.-P.30.

32. Jego G. Reactive plasmacytoses are expansions of plasmablasts retaining the capacity to differentiate into plasma cells / G. Jego // Blood. 1999. - Vol.94. -P.701-712.

33. Esparis-Ogando A. Bortezomib is an efficient agent in plasma cell leukemias / A. Esparis-Ogando, A. Alegre, B. Aguado, G. Mateo, N. Gutierrez, J. Blade, D. Schenkein, A. Pandiella, J.F. San Miguel // Int. J. Cancer. 2005. -№4. -Vol.114. -P.665-7.

34. Eds R. E. Lenbard. Clinical oncology / Lenbard Eds R. E., R. T. Osteen, T. Gansler. American//Cancer Society, 2001.

35. Flucke U. Pathology along the liver sinusoids: intrasinusoidal findings / U. Flucke, H.P. Fischer // Pathologe. 2008. - №1. - Vol.29. - P.27-36.

36. Greipp P.R. Multiple Myeloma: significance of plasmablastic subtype in morhological classification / P.R. Greipp, N.M. Raymond, R.A. Kyle, M. O'Fallon // Blood. 1985. - Vol.65. -P.305-10.

37. Grabar P. Methode permettant l'etude conjuguee des proprieties electrophoretiques et immunochimiques d'un melange de proteins; application au serum sanguine / P. Grabar, C.A. Williams // Biochim. Biophys. Acta. 1953. - Vol.10. - P.193-194.

38. Geffroy-Luseau A. Osteoclasts support the survival of human plasma cells in vitro / A. Geffroy-Luseau, G. Jego, R. Bataille, L. Campion, C. Pellat-Deceunynck // Int. Immunol. 2008. - №6. - Vol.20. - P.775-82.

39. Greipp P.R. International staging system for multiple myeloma / J. San Miguel,

40. B.G. Durie, J.J. Crowley, B. Barlogie, J. Blade, M. Boccadoro,J.A. Child, H. Avet-Loiseau, R.A. Kyle, J.J. Lahuerta, H. Ludwig, G. Morgan, R. Powles, K. Shimizu,

41. C. Shustik, P. Sonneveld, P. Tosi, I. Turesson, JJ. Westin // Clin. Oncol. 2005. -№15. - Vol.23. -P.3412-20.

42. George E.D. Multiple myeloma: recognition and management / E.D. George, R. Sadovsky // Am. Fam. Physician. 1999. - №7. - Vol.59. - P. 1885-94.

43. Hideshima T. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets / T. Hideshima, C. Mitsiades // Nature publishing Group. 2007. - Vol.7. - 585-598.

44. Hlif S. Monoclonal gammopathy: natural history studied with a retrospective approach. / S. Hlif, V. Haraldsdottir, I. Olafsson, V. Gudnason // Haematologica. -2007.-Vol.92.-P.l 131-1134.

45. Halaycio M.E. Clinical Malignant Hematology / M.E. Halaycio, M.A. Sekeres,B.J. Bolwell // Mc Graw Hill. -.2007. P.1224.

46. Ironside P. Clinical value of immunoelectrophoresis in multiple myeloma / P. Ironside // Pathology. 1970. - №1. - Vol.2. - P.53-60.

47. Jean-Luc Harousseau. The role of complete response in multiple myeloma / H. Jean-Luc, M. Attal, H. Avet-Loiseau // Blood. 2009. - Vol. 114. - P.3139-3146.

48. Jain M. Familial myeloma and monoclonal gammopathy: a report of eight African American families / M. Jain, J. Ascensao, G. Schechter // P. Am. J. Hematol. -2009. №1. - Vol.84. - P.34-8.

49. Katzmann J. A. Screening Panels for Monoclonal Gammopathies: Time to Change / J. A. Katzmann // Clin. Biochem. Rev. 2009. - Vol.30. - P.105-111.

50. Katzel J.A. Multiple myeloma: charging toward a bright future / J.A. Katzel, P. Hari, D.H. Vesole // CA Cancer. J. Clin. 2007. - №5. - Vol.57. - P.301-18.

51. Keren D.F. Strategy to diagnose monoclonal gammopathies in serum: high-resolution electrophoresis, immunofixation, and kappa/lambda quantification / D.F. Keren, J.S. Warren, J.B Lowe // Clin. Chem. 1988. - №11. -Vol.34. -P.2196-201.

52. Keren D.F. Procedures for the evaluation of monoclonal immunoglobulins / D.F. Keren // Arch. Pathol. Lab. Med. 1999. - №2. -Vol.123. - P.126-32.

53. Kanderson К С. Multiple myeloma: new insights and therapeutic approaches / К С. Kanderson, R. A. Kyle, W. S. Dalton, T. Landowski, K. Shain, R. Jove, L. Hazlehurst, J. Berenson // American Society of hematology. Hematology. 2000. -P.147-165.

54. Kumar S. CD45 expression by bone marrow plasma cells in MM: clinical and biological correlation / S. Kumar, S.V. Rajkumar, T. Kimlinger et al. // Leukemia. -2005. -№8. Vol.19. - P.1466-70.

55. Kyle R.A. Criteria for diagnosis, staging,, risk stratification and response assessment of multiple myeloma / R.A. Kyle, S.V Rajkumar // Leukemia. 2009. -№1. -Vol.23. -P.3-9.

56. Kyle R. A. Multiple myeloma / R. A. Kyle, S. V. Rajkumar // Blood. 2008. -Vol. 111.- P.2962-2972.

57. Kyle R.A. Review of 1027 patients with newly diagnosed multiple myeloma / R.A. Kyle, M.A. Gertz, Т.Е. Witzig, J.A. Lust, M.Q. Lacy, A. Dispenzieri, R.

58. Fonseca, S.V. Rajkumar, J.R. Offord, D.R. Larson, M.E. Plevak, T.M. Therneau, P.R. Greipp // Mayo Clin Proc. 2003. - №1. - Vol.78. - P.21-33.

59. Landgren O. Patterns of monoclonal gammopathy of undetermined significance and multiple myeloma in various ethnic/racial groups: support for genetic factors in pathogenesis / O. Landgren, B.M. Weiss // Leukemia. 2009. - №10. - Vol.23. -P.1691-7.

60. Lin P. Flow cytometric immunophenotyping analysis of 306 cases of multiple myeloma / P. Lin, R. Owens, G. Tricot, C.S. Wilson // Am. J. Clin. Pathol. 2004. - №4. - Vol. 121.- P.482-8.

61. Liu Y.J. Regulation of B-cell commitment to plasma cells or to memory В cells / Y.J. Liu, J. Banchereau // Semin. Immunol. 1997. - Vol.9.P.235-240.

62. Lynch H.T. Phenotypic heterogeneity in multiple myeloma families / P. Watson, S. Tarantolo, P.H. Wiernik, B. Quinn-Laquer, Bergsagel Isgur K., L.

63. Huiart, 0.1. Olopade, H. Sobol, W. Sanger, D. Hogg, D Weisenburger // J. Clin. Oncol. 2005. - №4. - Vol.23. - P.685-93.

64. Marti G. Overview of monoclonal B-cell lymphcytosis / G. F. Marti, Abbasi // Br. J. ofHaemotol. -2007. Vol.l39. -P.701-708

65. Marc S. Raab. Multiple myeloma / Marc S. Raab, Klaus Podar, Iris Breitkreutz, Paul G. Richardson, Kenneth C. Anderson // Lancet. 2009. - Vol.374. - P.324-39.

66. Hernandez, L. Palomera, D. Carrera, R. Martinez, J. De la Rubia, A. Martin, J. Blade, J J. Lahuerta, A. Orfao, J.F. San Miguel // Blood. 2008. - №10. -Vol.112. -P.4017-23.

67. Pellat-Deceunynck C. The absence of CD56 (NCAM) on malignant plasma cells is a hallmark of plasma cell leukemia and of a special subset of multiple myeloma / C. Pellat-Deceunynck //Leukemia. 1998. -№12.-Vol.12. -P.1977-1982.

68. Pellat-Deceunynck C. Normal and malignant human plasma cells: proliferation, differentiation and expansions in relation to CD45 expression / C. Pellat-Deceunynck, R, Bataille // Blood Cells, Molecules, and Disease. 2004. -Vol.32. — P.293-301.

69. Potdevin F. Immunofixation in agarose gel for the identification of monoclonal immunoglobulins / F. Potdevin, M. Roncato, F. Drupt, M. Paris, M. Leclerc // Ann. Immunol. (Paris). 1983. -№1. - Vol.134. -P.105-23.

70. Rajkumar S.V. Bone marrow angiogenesis in patients achieving complete response after stem cells transplantation for multiple myeloma / S.V. Rajkumar // Leukemia. 1999. - №3. - Vol.13. - P.469-472.

71. Rawstron A.C. Immunophenotyping of plasma cells / A.C. Rawstron // Curr. Protoc. Cytom. 2006. - Chapter 6. - Unit 6.23.

72. Rawstron A.C. European Myeloma Network. Report of the European Myeloma Network on multiparametric flow cytometry in multiple myeloma and related disorders / A.C. Rawstron, A. Orfao, M. Beksac, L. Bezdickova, R.A.

73. Renuka L. Detection by immunofixation of M proteins in hypogammaglobulinemic patients with normal serum protein electrophoresis results / L. Renuka, Yueju Li, K. Janatpour, L. Beckett, I. Jialal // Am. J. Clin. Pathol. 2007. - Vol.127. - P.746-751.

74. Riccardi A. Changing clinical presentation of multiple myeloma / A. Riccardi // Eur. J. Cancer. 1991. -№11. - Vol.27. - P. 1401-1405.

75. Richard A. McPherson. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods / Richard A. McPherson, Matthew R. Pincus. Twenty-first edition. 2007. - Chapter VI. - P.789-974.

76. Robillard N. Phenotypic characterization of the human myeloma cell growth fraction / N. Robillard, C. Pellat-Deceunynck, R. Bataille // Blood. 2005. -№12. - Vol.105. - P.4845-8.

77. Ruiz-Arguelles G.J. Cell surface markers in multiple myeloma / GJ. Ruiz-Argtielles, J.F. San Miguel // Mayo Clin. Proc. 1994. - №7. - Vol. 69. - P.684-90.

78. Rumke C.L. The unreliability of the determination of the blood lymphocyte count / C.L. Rumke // Ned. Tijdschr. Geneeskd. 1985. -№11.- Vol.129. - P.493-5.

79. San Miguel J.F. Conventional diagnostics in multiple myeloma / J.F. San Miguel, N.C. Gutierrez, G. Mateo, A. Orfao // Eur. J. Cancer. 2006 - №11. - Vol.42. -P. 1510-9.

80. San Miguel J.F. Immunophenotype and DNA cell content in multiple myeloma / J.F. San Miguel // Baillieres Clin. Haematol. 1995. - №4. - Vol.8. - P.735-59.

81. San Miguel J. Individualizing treatment of patients with myeloma in the era of novel agents / J. San Miguel, J.L. Harousseau, D. Joshua, K.C. Anderson // J. Clin. Oncol. 2008. - №16. - Vol.26. - P.2761-6.

82. San Miguel J.F. Prognostic features of multiple myeloma / J.F. San Miguel, R. Garcia-Sanz // Best Pract. Res. Clin. Haematol. 2005. - №4. - Vol.18. -P.569-83.

83. Sarasquete M.E., MRD monitoring in multiple myeloma: a comparison between allelic-specific oligonucleotide real-time quantitative PCR and flow cytometry / M.E. Sarasquete, R. Garsia-Sanz, D. Gonsalez // Hematologica. -2005. Vol.90. - P. 1365-72.

84. Seidel C. Serum syndecan-1: a new independent prognostic marker in multiple myeloma / C. Seidel, A. Sundan, M. Hjorth, I. Turesson, I.M. Dahl, N. Abildgaard, A. Waage, M Borset II Blood. 2000. - №2. - Vol.95. - P.388-92.

85. Shirlyn B. McKenzie. Clinical laboratory hematology / Shirlyn B. McKenzie // Pearson: Prentice Hall. 2003. - P. 956.

86. Stephan R. Vavricka. Serum protein electrophoresis: An underused but very useful test / Stephan R. Vavricka, Emanuel Burri, Christoph Beglinger, Lukas Degen, Michael Manz // Digestion. 2009. - Vol.79. - P.203-210.

87. Tisellius A. A new apparatus for electrophoretic analisys of colloidal mixtures / A. Tisellius // Trans. Faraday Society. 1937. - Vol.33. - P.524.

88. Tisellius A. Electrophoretic study of immune sera and purified antibody preparation / A. Tisellius, E.A. Kabat // Journal of Exp. Medicine. 1939. -Vol.69.-P.l 19-131.

89. Tichy M. Laboratory identification of monoclonal immunoglobulin / M. Tichy, V. Maisnar // Vnitr. Lek. 2006. - Vol.52. - Suppl. 2. -P.41-5.

90. Vincent R.S. Plasmablastic morphology as an independent predictor of poor survival after autologous stem-cell transplantation for multiple myeloma*/ R.S. Vincent, R. Fonseca, M.Q. Lacy // J. Clin. Oncol. 1999. - Vol.17. - P.1551-7.

91. Wilson A.T. Direct Immunoelectrophoresis / A.T. Wilson // J. Immunology. 1964. - Vol.92. - P.431-434.

92. Yaccoby S. The phenotypic plasticity of myeloma plasma cells as expressed by dedifferentiation into an immature, resilient, and apoptosis-resistant phenotype / S. Yaccoby // Clin. Cancer. Res. 2005. №11.- Vol.21. - P.7599-606.