Антигенные и иммуногенные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа О, выделенных в 2014 - 2019 гг. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Фунтиков Андрей Александрович

• Фунтиков Андрей Александрович
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Фунтиков Андрей Александрович

2. Обзор литературы

2.1 Общие сведения о ящуре

2.2 Эпизоотическая ситуация по ящуру в мире за 2014 - 2019 гг

2.3 Эпизоотическая ситуация по ящуру в странах, пограничных и сопредельных с РФ в 2014 - 2019 гг

2.4 Строение и антигенные свойства вируса ящура

2.5 Клиническая диагностика ящура

2.6 Методы лабораторной диагностики ящура

2.7 Вакцинопрофилактика ящура

2.8 Адаптация вируса ящура к клеточным культурам и естественно -восприимчивым животным

2.9 Факторы, влияющие на репродукцию вируса ящура

2.10 Получение диагностических компонентов на основе вируса

ящура

2.11 Устойчивость вируса ящура и его инактивация

2.12 Очистка вирусного антигена

2.13 Концентрирование антигена вируса ящура

2.14 Электрофорез белков вируса ящура в полиакриламидном геле

2.15 Заключение по обзору литературы

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1.1 Материалы

3.1.2 Методы исследований

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Анализ эпизоотической ситуации по ящуру в странах Азиатско-

Тихоокеанского региона и Российской федерации за 2014 - 2019 гг

4.2 Изучение культуральных свойств изолятов вируса ящура типа О

4.3 Изучение стабильности изолятов при последовательных

пассажах

4.4 Оптимизация условий культивирования производственного

штамма вируса ящура О №2271/Корея/2014

4.5 Выделение и адаптация вируса на естественно-восприимчивых животных

4.6 Генетическая принадлежность изолятов и штаммов ВЯ

4.7 Определение антигенного родства в реакции микронейтрализации

4.8 Получение гипериммунных сывороток для ИФА и РСК

4.9 Получение диагностических антигенов для ИФА и РСК

4.10 Совершенствование методов получения диагностических компонентов на основе производственных штаммов и эпизоотических изолятов ВЯ

4.11 Сравнительная оценка иммуногенной активности противоящурных вакцин

4.12 Испытание эмульсионных вакцин типа О на свиньях при контрольном заражении штаммом вируса ящура

№2212/Приморский/2014

4.13 Результаты исследования сыворотки крови животных, привитых универсальными сорбированными вакцинами из штаммов ВЯ А

№2155/Забайкальский/2013 и О №2212/Приморский/2014

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5.1 Итоги выполненного исследования

5.2 Практические предложения

5.3 Перспективы дальнейшей разработки темы

6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8. ПРИЛОЖЕНИЯ

118

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Антигенные и иммуногенные свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типа О, выделенных в 2014 - 2019 гг.»

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Вспышки ящура, вызванные вирусом типа О, регистрируют во многих странах Центральной Азии, Среднего Востока и Азиатско-Тихоокеанского региона, в том числе граничащих с Россией. Следовательно, угроза заноса ящура на территорию нашей страны существует постоянно, особенно в регионах, пограничных с Монголией, Китаем, странами Центральной Азии и Закавказья [16, 20, 22, 33, 38].

Учитывая опасность заноса ящура в РФ и риск значительных экономических потерь, особое значение придается вопросу диагностики этой болезни. Согласно Кодексу здоровья наземных животных МЭБ, ящур относится к особо опасным инфекционным болезням. Исходя из этого, защита государства от заноса ящура и разработка мер оперативной диагностики, а также ликвидации вспышек является первостепенной задачей [2].

Возбудитель ящура обладает широкой антигенной вариабельностью. Уровень генетической изменчивости вируса в пределах даже одного серотипа приводит к возникновению новых штаммов, которые значительно отличаются от ранее изученных штаммов возбудителя [45, 69].

Опасность, которую представляет ящур, диктует необходимость постоянного улучшения методов и средств его диагностики, изучения выделенных в полевых условиях на месте образовавшихся очагов инфекции изолятов возбудителя, определения их вирулентности и соответствия производственным, используемым в профилактике штаммам [16].

Наибольшую опасность представляют вспышки ящура, вызванные вирусом, который отличается от производственных штаммов в антигенном отношении. Такие эпизоотии могут снизить или полностью аннулировать эффективность профилактической вакцинации, особенно моновалентными вакцинами [12].

Изучены штаммы вируса ящура типа О, применяемые в качестве производственных для получения диагностических компонентов и противоящурных вакцин на территории России до начала 21 века. К ним относятся

О1 №1618 Чечено-Ингушский, выделенный в 1966 г. и О1 № 194, выделенный в 1957 г. в Волгоградской области. В настоящее время эти штаммы поддерживаются в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» [63].

Также известны штаммы типа О: №1736/Абхазия/2000, выделенный от КРС в Гальском районе Абхазии; О №1734/Приморский/2000, полученный 13.04.2000 г. от свиней в ОПХ «Степное» с. Элитное Уссурийского района Приморского края, рекомендованные для изготовления диагностических и вакцинных препаратов [15, 64].

Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм типа О №1734/Приморский/2000 принадлежит к Паназиатской генетической линии вируса ящура типа О, которая вызвала пандемию ящура в 1999 - 2000 гг. в большинстве стран Азии, в том числе во Вьетнаме, Японии, Республике Корея (РК), Монголии, а также Армении и Грузии. Исследуемый вирус имел наиболее высокий уровень гомологии (98,74%) с изолятами О Вьетнам/99 и О Тайвань/99. Установлено, что изолят О №1734/Приморский/2000 отличается от всех выделенных ранее изолятов, в том числе и от штаммов О1 №194 и О1 №1618, используемых ранее для изготовления средств диагностики и специфической профилактики [64].

Штамм О №1734/Приморский/2000 применяли в качестве производственного при конструировании средств специфической профилактики и диагностики, используемых на всей территории РФ и в странах Содружества Независимых Государств [16].

В 2010 г. в Японии, Республике Корея, Гонконге и КНР вспышки ящура типа О были вызваны вирусом топотипа Юго-Восточная Азия, относящимся к генетической линии Муа-98. В РФ вспышки ящура типа О, принадлежащего к генетической линии Муа-98, были отмечены в июле и августе 2010 г. в Забайкальском и Шилкинском районах Забайкальского края, в 2011 г. - в Ононском районе Забайкальского края [9, 52].

В феврале 2014 г. ящур, вызванный вирусом типа О, был выявлен в Корейской Народной Демократической Республике (КНДР), а в июле 2014 г. 6 очагов ящура, вызванных этим типом вируса, были зафиксированы в Республике Корея. Заболевание регистрировали среди свиней. По данным Всемирной справочной лаборатории МЭБ по ящуру (WRLFMD, Пербрайт, Великобритания), это был новый занос возбудителя O/SEA/Mya-98, отличающегося от изолятов из предыдущих вспышек 2010 - 2011 гг. [60, 117].

В декабре 2016 г. в селе Среднеаргунск Краснокаменского района Забайкальского края среди свинопоголовья и КРС была обнаружена новая вспышка ящура. Вирус ящура типа О принадлежал к топотипу ME-SA генетической линии Ind-2001, и, предположительно, мигрировал со стороны сопредельных государств [48].

В начале 2019 г. в Приморском крае вновь были зафиксированы неоднократные (16 очагов) вспышки ящура, вызванные возбудителем типа O. Эпизоотия приобрела масштабный характер, в последствии один очаг отмечался так же на территории Хабаровского края [119].

В феврале 2019 г. вспышка ящура типа О была зарегистрирована в Забайкальском крае [120].

Учитывая тот факт, что на территории стран Азиатско-Тихоокеанского региона и Центральной Азии возникают очаги, обусловленные ВЯ различных генотипов, существует необходимость своевременного выделения, изучения биологических свойств и идентификации изолятов ВЯ, вызвавших вспышки на территории РФ, сопредельных и опосредованно граничащих стран, в последние годы (2014 - 2019 гг.) с целью подготовки новых производственных штаммов для лабораторной диагностики и создания противоящурных вакцин.

Степень разработанности проблемы. Проблемам распространения, диагностики и профилактики ящура посвящены многочисленные отечественные и зарубежные работы. Выявление антигена ВЯ проводят в реакции связывания комплемента (РСК) и методом иммуноферментного анализа (ИФА). Вирусный

геном определяют методом ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Для выделения ВЯ используют первично трипсинизированные и перевиваемые культуры клеток. Разработаны наборы для выявления антигена ВЯ, постинфекционных и поствакцинальных противоящурных антител в сыворотках крови животных для постановки ИФА [26, 39, 55]. Ввиду высокой изменчивости ВЯ возникает необходимость изучения новых изолятов, выделенных в эпизоотических очагах с целью выбора и получения актуальных для диагностики и профилактики ящура.

Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучение антигенных и иммуногенных свойств эпизоотических изолятов ВЯ типа О для выбора актуальных производственных штаммов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить эпизоотическую ситуацию по ящуру в РФ, в сопредельных и опосредованно граничащих государствах;

- изучить культуральные свойства эпизоотических изолятов ВЯ, выделенных при вспышках ящура в 2014 - 2019 гг.;

- изучить филогенетические и антигенные свойства изолятов ВЯ типа О, выделенных при вспышках в 2014 - 2019 гг.;

- обосновать к использованию актуальные штаммы ВЯ для изготовления диагностических и вакцинных препаратов;

- внедрить применение полученных вирусспецифических препаратов на основе изученных штаммов вируса для оценки иммуногенных свойств инактивированных вакцин;

- разработать методические рекомендации для получения 146Б-компонента и гипериммунных сывороток с использованием исследуемых штаммов;

- изготовить диагностические компоненты с использованием актуальных штаммов ВЯ для реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа.

Научная новизна результатов исследований. Научная новизна состоит в том, что в результате проведенных исследований:

- изучены культуральные свойства изолятов ВЯ О №2383/Приморский/2019 и О №2409/Забайкальский/2019;

- изучены основные антигенные свойства ВЯ изолятов О №2271/Корея/2014 и О №2344/Монголия/2017 с последующим их депонированием в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ»;

- выявлены особенности культивирования ВЯ О №2271/Корея/2014 в монослойной перевиваемой культуре клеток ПСГК-30;

- установлены антигенные и филогенетические отношения между производственными штаммами и эпизоотическими изолятами ВЯ типа О, выделенными в 2014 - 2019 гг.;

- оптимизированы условия для получения типоспецифических компонентов для ИФА и РСК на основе штаммов ВЯ О №2344/Монголия/2017, О №2212/Приморский/2014 и О №2271/Корея/2014;

- изучены иммуногенные свойства вакцин из штаммов ВЯ О №2212/Приморский/2014 и О №2271/Корея/2014.

Научная новизна полученных результатов послужила основанием подготовки пакета документов для оформления заявки на патент «Штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О». Заявка принята к рассмотрению Роспатентом 6 мая 2019 г.

Теоретическая и практическая значимость работы. С использованием данных по изучению эпизоотической ситуации по ящуру в странах, пограничных с РФ, принято участие в составлении «Прогноза по ящуру сельскохозяйственных животных в Российской Федерации на 2018 г.», который позволил в полной мере анализировать и прогнозировать эпизоотическую ситуацию по ящуру в странах, сопредельных с РФ, а также корректировать профилактические мероприятия в угрожаемых по ящуру регионах РФ.

Подготовлены производственные штаммы ВЯ О №2271/Корея/2014 и О №2344/Монголия/2017, депонированные в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ».

В результате проведенных исследований по оптимизации условий для получения диагностических вирусспецифических препаратов разработаны и внедрены «Методические рекомендации по получению штаммоспецифических гипериммунных сывороток для диагностики ящура в ИФА», утвержденные директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» 10.01.2019. Методические рекомендации могут быть использованы при производстве диагностических наборов на разных этапах технологического процесса.

Методология и методы исследования. Методология проведенных исследований включает стандартные процедуры с использованием различных материалов и естественно-восприимчивых к ящуру животных. В работе использовали вирусологические (вирусовыделение, титрование вируса), молекулярно-биологические (ПЦР-РВ, секвенирование), серологические (РН, РСК) и иммунохимические методы (непрямой сэндвич-вариант (сИФА) и жидкофазный блокирующий (жбсИФА), а также физико-химические (составление растворов заданной молярности, ультрацентрифугирование (УЦФ), электрофорез в ПААГ) и другие методы.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- антигенное и филогенетическое родство эпизоотических изолятов ВЯ О №2271/Корея/2014 и О №2383/Приморский/2019 с производственным штаммом О №2212/Приморский/2014; филогенетическое родство изолятов О №2344/Монголия/2017 и О №2409/Забайкальский/2019, свидетельствующее о распространении в странах Азиатско-Тихоокеанского региона, граничащих с РФ, генетических линий вируса ящура Mya-98 и !^-2001;

- эпизоотические изоляты ВЯ О №2271/Корея/2014, О №2383/Приморский/ 2019 и О №2344/Монголия/2017, О №2409/Забайкальский/ 2019, адаптированные к

культурам клеток, стабильно сохраняют инфекционную активность при последовательном пассировании;

- типоспецифические диагностические препараты на основе штаммов ВЯ О №2212/Приморский/2014 и О №2271/Корея/2014 могут быть применимы для обнаружения и типирования изолятов, выделяемых в эпизоотических очагах;

- результаты практического применения штаммов ВЯ О №2212/ Приморский/2014 и О№2271/Корея/2014 при контроле противоящурных вакцин.

Личный вклад соискателя. Основной объем исследований выполнен автором самостоятельно. При выполнении отдельных этапов работ практическую и консультативную помощь оказывали сотрудники референтной лаборатории диагностики ящура, референтной лаборатории по особо опасным болезням, лаборатории профилактики ящура, отдела биологического и технологического контроля и коллекции штаммов микроорганизмов, за что автор выражает им глубокую признательность.

Исследования по диссертационной работе были выполнены в период с 2015 по 2019 гг. в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Степень достоверности и апробация результатов работы. Основные положения диссертации были изложены на заседаниях ученого совета ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» в 2016 - 2019 гг., на IV Международной научной конференции «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», г. Владимир, 2016 г.

Достоверность проведенных исследований подтверждена статистической обработкой результатов опытов и проведением комиссионных испытаний.

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 5 научных работ, в том числе 2 в рецензируемых научных изданиях,

рекомендованных ВАК Минобрнауки России для докторских и кандидатских диссертаций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах, включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, заключение, список использованной литературы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 1 33 источника, из них 64 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 29 таблицами, 8 рисунками. В приложении к диссертации представлены копии титульных листов документов, подтверждающих результаты исследований и их внедрение.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Общие сведения о ящуре

Ящур - высоко контагиозное, остропротекающее заболевание сельскохозяйственных, диких парнокопытных и мозоленогих животных вирусной этиологии, возбудитель которого обладает значительным антигенным спектром [69].

Вирус ящура был первым возбудителем, выделенным от животных, и охарактеризованным в 1897 году Леффлером и Фрошем, они доказали, что вирус может проходить через фильтры Беркефельда, и, следовательно, значительно меньше, чем ранее изученные микроорганизмы [53].

Характерной особенностью болезни является острое стадийное течение, проявляющееся последовательной сменой инкубационного, продромального и клинического периодов, заканчивающихся выздоровлением (реконвалесценцией) или смертью [69].

Хотя заболевание у взрослых животных редко заканчивается летальным исходом, вызванным, как правило, секундарными инфекциями, потери продуктивности обычно составляют до 30%, а косвенные потери, связанные с затратами на ликвидацию вспышек, а также вследствие наложения запрета на

торговлю могут нанести значительный ущерб государству, экономика которого зависит от экспорта сельскохозяйственных продуктов [5, 33].

При современном уровне экономических и культурных контактов между странами, в мире нет региона, который не подвергался бы риску заноса вируса ящура и возникновения эпизоотии [5, 25].

Поэтому проблема эпизоотий ящура в настоящее время остается актуальной для государств, как свободных от данной инфекции, так и тех регионов, где заболевание присутствует [24].

2.2 Эпизоотическая ситуация по ящуру в мире за 2014 - 2019 гг.

За период наблюдения с 2014 по 2019 гг. в мире было зарегистрировано 64 неблагополучных страны по ящуру. Наибольшее их количество отмечено в странах Африканского континента, где регистрировали типы А, О, SAT-1,2,3 в 36 регионах. Вторым по значимости неблагополучия явился Азиатский континент, где были отмечены более 20 государств, неблагополучных по ящуру типов О, А, Азия-1, SAT-1, 2 [48, 49].

В Южной Америке ящур был зарегистрирован только в единственной стране - Колумбии, где в 2017 - 2018 гг. был зарегистрирован тип О, последний раз ящур в стране регистрировался 9 лет назад. Учитывая тесные торгово-экономические отношения Колумбии с поставщиками сельскохозяйственной продукции в РФ, возник значительный риск заноса возбудителя на территорию нашей страны [49].

Представленные данные МЭБ о неблагополучии стран мира по ящуру свидетельствуют о стационарном присутствии вируса в популяциях восприимчивых животных двух континентов. В странах Азиатского континента заболевание было отмечено среди крупного рогатого скота (КРС), буйволов, свиней, овец и коз (МРС). На Африканском континенте - в основном среди КРС, меньше - среди буйволов, овец и коз. На Азиатском континенте за указанный промежуток времени, в странах, граничащих с РФ, ящур типов А и О был выявлен

среди КРС, свиней, овец и коз в КНР, в Монголии среди КРС, овец, коз, в КНДР среди свиней и КРС [48, 49].

2.3 Эпизоотическая ситуация по ящуру в странах, пограничных и сопредельных с РФ в 2014 - 2019 гг.

На Азиатском континенте вдоль границ с Российской Федерацией

неблагополучными странами по ящуру были Народная Республика Монголия (2014 - 2019 гг.), КНР (2014 - 2019 гг.), КНДР (2014 г.). В сопредельных странах ящур регистрировался в Кыргызстане (2014 г. - не типирован). Из других сопредельных стран ящур регистрировался в Турции (типы А, О, Азия-1 в 2014 -2019 гг.), Иране (типы А, О, Азия-1 в 2014 - 2019 гг.), Афганистане (типы А, О, Азия-1), Республике Корея (типы А, О в 2014 - 2018 гг.) [22, 44, 48, 49].

Республика Казахстан. В Республике Казахстан ящур в 2014 - 2018 гг. не был зарегистрирован. Республика Казахстан в 2015 г. получила статус страны свободной от ящура без вакцинации для 9 областей: Акмолинской, СевероКазахстанской, Костанайской, Западно-Казахстанской, Актюбинской, Атырауской, Павлодарской, Мангистауской и Карагандинской. С целью недопущения заноса ящура в южные регионы Казахстана Республика проводит профилактическую вакцинацию животных от ящура на территории ряда областей: Восточно-Казахстанская, Алматинская, Жамбылская, Южно-Казахстанская. В 2017 г. территория Республики была признана благополучной по ящуру с вакцинацией по 5 областям [109, 113].

На официальной церемонии 87-й Генеральной сессии МЭБ в мае 2019 г. Казахстану были вручен сертификат о статусе благополучия по ящуру [72].

Народная Республика Монголия. За 2014 - 2015 гг. был зарегистрирован ящур типа О в 4 аймаках, всего диагностировано 19 вспышек [50, 59].

В 2014 - 2015 гг. на территории аймаков Монголии была зарегистрирована 21 вспышка ящура типа О. Всего в 2015 г. возбудитель данного типа был диагностирован в 6 ящурных очагах. Проведенный генетический анализ изолятов

вируса ящура (WRLFMD) показал их близкое родство с изолятами вируса ящура O/MAY/2/2014 и O/VIT/18/2014, выделенными на территории Юго-Восточной Азии (Вьетнам, Мьянма) [116].

В январе 2017 г. на территории Республики были зафиксированы новые вспышки ящура типа О, в период с января по март 2017 г. в ряде провинций заболевание отмечалось среди поголовья крупного и мелкого рогатого скота. Вспышка приобрела значительное распространение, к маю 2017 г. очаги были обнаружены более чем в 13 провинциях, изоляты относились к генетическим линиям SEA/Mya-98 и ME-SA/PanAsia [114, 115].

КНР, КНДР, Республика Корея. На протяжении последних пяти лет (2014 - 2019 гг.) на территории КНР сложилась неблагополучная ситуация по ящуру. За указанный период было зафиксировано более 40 вспышек в регионе [12, 22, 48].

За 2014 г. на территории КНР было отмечено 7 вспышек: 2 вспышки ящура типа О и 5 вспышек типа А (провинции Цзянсу, Цзянси, Тибет) [48, 49].

В декабре 2015 г. вирус ящура типа O/Cathay был зарегистрирован в Гонконге

[49].

В 2014 г. КНДР уведомила МЭБ о регистрации на территории страны 33 вспышек ящура типа О среди КРС и свиней. Этот факт мог осложнить эпизоотическую ситуацию в регионе и увеличить риск заноса инфекции на территорию Приморского края РФ, который имеет общую границу с КНДР.

В 2015 - 2019 гг. официальных сообщений в МЭБ о вспышках ящура на территории КНДР не поступало [109, 113].

Однако, на территории таких стран, как Республика Корея, Камбоджа, Мьянма и др. отмечалось значительное количество эпизоотических очагов [49].

Самая крупная эпизоотия ящура в Республике Корея наблюдалась в период с 2010 по 2012 гг. ^общение о возникновении вспышек ящура типа О было впервые опубликовано 12 апреля 2010 г., возбудитель относился к топотипу SEA генетической линии Mya-98. Вспышки распространились сразу по нескольким

провинциям, впервые их зарегистрировали в провинции Гангва. Нуклеотидное секвенирование подтвердило родство корейских изолятов со штаммами O/MYA/6/2009 и O/HKN/15/2010. За период с апреля по июнь 2010 г. были выявлены 7 вспышек типа О/SEA/Mya-98. После применения политики «стемпинг-аут» и дезинфекции, вакцинация и серологические исследования были прекращены, но в ноябре 2010 г. Корейские специалисты сообщили о новых вспышках ящура типа О, вызванных вирусом, генетически родственным предыдущим изолятам 2010 г. [48, 60].

Изолят вируса типа О, выявленный 21 ноября 2010 г. в провинции Ангдон, имел генетическое родство с российским O/RUS/Jul 2010 и японским O/JPN/2010 (N1^^ Япония) изолятами. 16 декабря 2010 г., был выявлен новый изолят в провинциях Янгджу и Янчон, также генетически родствененный O/JPN/2010. Из этого можно сделать вывод, что эпизоотия продвигалась вглубь страны. Следующая вспышка была обнаружена в городе Пайю. Всего по состоянию на 2010 г. в Республике Корея зафиксировали 36 вспышек ящура типа О и одну вспышку типа А в четырех провинциях [48, 49, 60].

Согласно данным ветеринарных специалистов и картографии Республики Корея первые вспышки ящура были отмечены на границе с КНДР и затем начали продвигаться вглубь страны. На тот момент ветеринарная служба страны обозначила пять угрожаемых зон, разделив их по степени риска. Но если в ноябре 2010 г. ситуация по болезни имела статус «Угрожаемой», то уже 29 декабря 2010 г. ветеринарные эксперты вынуждены были признать, что ситуация приобрела статус «Критической». Несмотря на все предпринятые со стороны корейских властей меры по ликвидации, эпизоотия продвигалась вглубь региона. В большей степени этому способствовали климатические условия. В 2010 г. в регионе отмечалось рекордное похолодание и значительное количество осадков. Дезинфектанты, используемые южнокорейскими ветеринарами, теряли свои свойства в условиях минусовых температур, в результате чего дезинфекция оказывалась неэффективной. Общие экономические затраты на ликвидацию эпизоотии и

ограничительные мероприятия только в 2010 г. приблизительно составляли 157 млн долларов США. Всемирная Справочная лаборатория МЭБ по ящуру при выявлении новой вспышки в провинции Гангвон 21 марта 2011 г. подтвердила наличие вируса ящура типа О топотипа SEA генетической линии Mya-98 [60, 93].

В общей сложности эпизоотия ящура типа О 2010 - 2012 гг. поразила более 3700 ферм практически на всей территории Республики, для ликвидации вспышки ветеринарные службы страны уничтожили 3,48 млн голов животных, а экономический ущерб составил более 2,7 млрд долларов США. Вспышка, продолжавшаяся в регионе с ноября 2010 г. по апрель 2012 г., нанесла огромный ущерб животноводству страны, в результате чего, производство собственной продукции сократилось на 30%, а импорт продукции из других стран вырос на 90%.

С 2012 по 2014 гг., вспышек ящура на территории страны не наблюдали, и правительство Республики вновь возобновило работу по получению статуса региона, как страны, свободной от ящура без вакцинации. Но уже в июле 2014 г. ветеринарная служба была вынуждена признать, что в стране появилась новая эпизоотия. 8 августа 2014 г. Всемирная справочная лаборатория МЭБ по ящуру подтвердила наличие в регионе вируса ящура типа О, данный штамм был обнаружен в провинции Бьян-Мьен и относился к топотипу SEA линии Mya-98. Первые три вспышки наблюдали среди свиней. По данным Всемирной справочной лаборатории это был новый занос вируса O/SEA/Mya-98 в регион, отличающегося от вируса из предыдущих вспышек 2010 - 2011 гг. [60].

Начиная с мая 2015 г. вспышек в регионе не наблюдалось, однако 2 новых очага было зарегистрировано на свиноферме в провинции Чолла-Пукто на Юго-Западе региона. Вспышку ящура типа О на территории Республики ликвидировали больше 2-х лет. В начале 2016 г. корейской ветеринарной службе пришлось уничтожить порядка 11 тыс. свиней. Первое сообщение в 2016 г. поступило 18 января, с применением метода «стемпинг-аут» ветеринарная служба страны уничтожила 10172 свиньи. Второе сообщение было опубликовано 21 февраля, на конец месяца в Республике были отмечены две вспышки в провинции Чхунчхон -

Намдо, ветеринарной службой были уничтожены 3144 свиньи. Несмотря на предпринятые меры, 20 марта 2016 г. в той же провинции ветеринарная служба РК зафиксировала 10 очагов, в которых были уничтожены 10575 животных (свиньи). Последнее сообщение было опубликовано 27 марта, на тот момент было зафиксировано 6 действующих очагов, на территории которых было уничтожено 4654 головы свиней [60, 116].

2.4 Строение и антигенные свойства вируса ящура

Вирион возбудителя представляет собой одноцепочную линейную молекулу РНК (молекулярная масса 2,8*108), заключенную в белковую оболочку, состоящую из 4 структурных белков УР1, УР2, УР3 и УР4. Основным антигенным белком является УР1. Вирионные полипептиды изменяются с различной скоростью: УР1 и УР3 изменяются очень быстро, тогда как УР4 почти не изменяется [16, 69, 97].

Вирионная РНК окружена капсидом и является инфекционной, имеет ту же полярность, что и РНК в инфицированной клетке. Как и у других пикорнавирусов, считается, что с нее транслируется один крупный белок. Этот полипротеин в последствии быстро расщепляется с образованием четырех полипептидов -предшественников, которые являются первичными, замеченными в инфицированных клетках. Предшественники, в последствии, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных белков вируса. В инфицированных клетках накапливается 6 неструктурных белков. Только для одного из них - VP56a - определена функция, именно - он является РНК-зависимой РНК-полимеразой. РНК реплицируется с помощью этой полимеразы, сначала синтезируется комплементарная РНК, с которой затем копируется новая вирионная РНК. Вирионы представляют собой мелкие частицы икосаэдрической формы диаметром 23-27 нм. Они состоят из внутренней части, представленной РНК, и белкового капсида, который состоит из 32 структурных капсомеров, расположенных в кубической симметрии. В вирионе содержится приблизительно

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Фунтиков Андрей Александрович, 2020 год

- С. 83.

18. Исследование некоторых биохимических параметров культуры клеток ВНК-21/2-17 после криоконсервирования и кратковременного хранения при температуре 4-8°С / Д.А. Лозовой, М.Н. Гусева, Б.Л. Манин [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - 2015. - Т. 13. - С. 145-163.

19. Камалова, Н.Е. Значение комплекса методов лабораторной диагностики в борьбе с ящуром / Н.Е. Камалова // Ветеринарная патология. - 2006. - №2 4. - С. 2731..

20. Красочко, П. Ящур: болезнь изученная и новая. Эпизоотия и клинические признаки / П. Красочко // Белорусское сельское хоз-во. - 2017. - № 1. - С. 47-48.

21. Кременчугская, С.Р. Оценка эффективности противоящурной вакцинации животных в буферной зоне Российской Федерации в 2014 г. / С.Р. Кременчугская, Н.Н. Луговская, С.Н. Фомина // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - 2015. - Т. 13. - С. 20-28.

22. Лозовой, Д.А. Обострение эпизоотической ситуации по ящуру животных в Азиатском регионе / Д.А. Лозовой // Распространение и меры борьбы особо опасных болезней животных и птиц. 5-я Междунар. науч. конф.: сб. материалов конф. - Самарканд, 2016. - С. 153-156.

23. Лозовой, Д.А. Профилактическая вакцинация животных против ящура в Российской Федерации / Д.А. Лозовой // Проблемы теории и практики соврем. вет. науки. - 2018. - Т. 64. - С. 135-142.

24. Лозовой, Д.А. Эпизоотическая ситуация по ящуру в мире в 2013-2015 гг. и меры борьбы с ним / Д.А. Лозовой, А.М. Рахманов // Ветеринария сегодня. - 2016.

- № 1. - С. 38-42.

25. Лозовой, Д.А. Ящур: профилактика и меры борьбы / Д.А. Лозовой // Животноводство России. - 2019. - № 4. - С. 65-68.

26. Методические рекомендации по выделению и очистке 146S-anrareHa вируса ящура: утв. ФГБУ "ВНИИЗЖ" 23.09.2014 / 56-14 / Н.Н.. Луговская, К.С. Малкова; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2014. - 19 с.

27. Методические рекомендации по определению полноты инактивации антигена вируса ящура в сырье для вакцины с применением монослойных клеточных линий: утв. ФГБУ "ВНИИЗЖ" 31.08.2018 / 25-18 / В.А. Стариков, М.И. Доронин, Д.А. Лозовой [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2018. -34 с.

28. Методические указания по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 / МУ 43-17; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2017. - 35 с.

29. Методические указания по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации: утв. Россельхознадзором 13.09.2017 / МУ 76-12; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2017. - 24 с.

30. Методические указания по выявлению и типированию вируса ящура в непрямом сэндвич-варианте иммуноферментного анализа: методический материал / С.А. Дудников, Ж.А. Шажко, Н.С. Мудрак [и др.] // Методические указания по диагностике заболеваний с.-х. животных иммуноферментным методом. -Владимир, 1998. - С. 83-97.

31. Михалишин, В.В. Адъюванты и их использование / В.В. Михалишин, Н.С. Мамков // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2008. - Т.6. - С. 340-37.

32. Михалишин, В.В. Иммунобиологические свойства противоящурной поливалентной вакцины нового поколения / В.В. Михалишин, А.И. Дудников, Н.А. Улупов // Вирусные и микробные болезни животных: сб. науч. тр. / ВНИИЗЖ. -Владимир,1995. - С. 217-222

33. Михалишин, Д.В. Подбор оптимальной дозы вируса для заражения суспензии клеток ВНК-21 / Д.В. Михалишин, Н.Е. Беляев, Б.Л. Манин // Актуальные пробл. патологии с.-х. животных: материалы Междунар. научно-практ. конф. - Минск, 2000. - С. 154-155.

34. Мищенко, А.В. О путях распространения и механизмах передачи вируса ящура / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко // Ветеринария. - 2015. - № 1. - С. 19-22.

35. Мищенко, А.В. О роли овец в эпизоотическом процессе при ящуре / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко // VIII Междунар. вет. конгр. "Единый мир - единое здоровье". - М., 2018. - С. 84-88.

36. Мищенко, А.В. Эпизоотическая ситуация по трансграничным и экономически значимым инфекционным болезням КРС в России в 2013 -2014 гг. / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко // 10-й Балтийский форум вет. медицины и продовольственной безопасности 2014: тез. конф. - СПб, 2014. - С. 165-167.

37. Мищенко, А.В. Ящур свиней в Приморском крае / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко, А.К. Караулов // Ветеринария. - 2015. - № 8. - С. 15-17.

38. Мищенко, А.В. Эпизоотическая ситуация по ящуру в странах Западной Евразии 2015 г. / А.В. Мищенко // 7th Regional FMD West Eurasia Roadmap Meeting, Bishkek, Kyrgyzstan, 2016. - 13 p.

39. Непрямой вариант ИФА для выявления антител к неструктурным белкам вируса ящура в сыворотках крови свиней / А.С. Яковлева, А.В. Каньшина, А.В. Щербаков // Ветеринария сегодня. - 2018. - № 3. - С. 13-20.

40. Никифоров, В.В. Методические рекомендации о правилах перемещения живых животных и продукции животного происхождения для поддержания официального статуса МЭБ благополучия по ящуру в субъектах Российской Федерации / В.В. Никифоров, А.К. Караулов, А.Н. Спиридонов; ФГБУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 2016. - 22 с.

41. Общий производственный процесс производства противоящурных вакцин / Merck Millipore. - Дармштадт, Германия 2015. - 8 с.

42. Оптимизация процесса промышленного культивирования культуры клеток ВНК-21/13-13 для производства вакцин против ящура, болезни Ауески и бешенства / А.Я. Самуйленко, Н.В. Мельник, С.А. Гринь [и др.] // Ветеринарный врач. - 2018.

- № 1. - С. 24-28.

43. Оптимизация состава питательных сред для культивирования суспензии клеток BНK-21/2-17 / М.Н. Гусева, Д.В. Михалишин, А.А. Шишкова [и др.] // Ветеринария сегодня. - 2016. - № 4. - С. 35-39.

44. Пассивный контроль ящура, как элемент эпизоотического благополучия / А.В. Мищенко, В.П. Семакина, В.А. Мищенко [и др.] // IX Междунар. вет. конгр. "Единый мир - единое здоровье", 17-20 апр. 2019 г., г. Светлогорск, Калинингр. обл. Конф. "Актуальные вет. аспекты молочного и мясного животноводства". -Светлогорск, Калинингр. обл., 2019. - 8 с.

45. Пономарев, А.П. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства / А.П. Пономарев, В.Л. Узюмов, К.Н. Груздев. - Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.

46. Проблема клинической диагностики ящура у овец и коз / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко, В.Н. Шевкопляс [и др.] // Ветеринария Кубани. - 2016. - № 6. - С. 8-10.

47. Проблема противоящурного иммунитета у молодняка крупного рогатого скота / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко, С.Н. Фомина, О.Ю. Черных // Ветеринария Кубани. - 2018. - № 5. - С. 3-5.

48. Прогноз по ящуру сельскохозяйственных животных в Российской Федерации на 2018 год / А.К. Караулов, В.М. Гуленкин, Д.А. Лозовой [и др.] // Прогнозы по заразным болезням животных в Российской Федерации на 2018 год. - Владимир, 2018. - С. 3-55.

49. Прогноз по ящуру сельскохозяйственных животных в Российской Федерации на 2017 год / А.К. Караулов, В.М. Гуленкин, Д.А. Лозовой [и др.] // Прогнозы по ряду болезней животных в Российской Федерации на 2017 год. - Владимир, 2016.

- С. 3-48.

50. Распространение ящура в Монголии / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко, П. Болортуяа [и др.] // Ветеринария. - 2017. - № 2. - С. 23-26.

51. Результаты и перспективы совместных действий ветеринарных служб стран СНГ в области диагностики и контроля инфекционных болезней животных / Д.А. Лозовой, А.Е. Метлин, А.М. Рахманов, Ил.А. Чвала // Междунар. с.-х. журн. - 2019.

- Т. 62, № 2 (368). - С. 48-52.

52. Результаты изучения изолятов вируса ящура типа О, вызвавших вспышки в Забайкальском крае в 2010-2011 гг. / С.Р. Кременчугская, Н.Е. Камалова, А.В. Мищенко, Т.К. Майорова // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. - 2015.

- №1 (25). - С. 34-38.

53. Рёрер, Х. Ящур / Х. Рёрер. - М.: Колос, 1971. - 303 с.

54. Синтез и антисептические свойства бета-пропиолактона / Н.И. Даниляк, Х.З. Котович, М.Г. Покатило [и др.] // Актуальные пробл. вет. вирусологии: тез. докл. -Владимир, 1980. - С. 61-62.

55. Способы получения специфических препаратов противоящурных антител для иммунохимических реакций в лабораторной диагностике ящура / Н. Е. Камалова // Рос. вет. журн. С.-х. животные. - 2008. - Сент.: Спец. вып., посвящ. 50-летию ФГУ "ВНИИЗЖ". - С. 23-26.

56. Сравнительное изучение азиридинов в качестве вирус-инактивирующих средств / Л. Фаркаш, Т. Перэни, Ф. Целленг [и др.] // СЭВ. Протокол по подтеме У.1.1.Ш. - Будапешт, 1982. - Приложение 3.

57. Тимина, А.М. Применение ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления вируса ящура в молоке КРС / А.М. Тимина, С.Н. Фомина, Т.К. Майорова // Ветеринария сегодня. - 2019. - № 1 (28). - С. 22-28.

58. Филогенетическая характеристика изолятов вируса ящура типа О, выделенных в Российской Федерации / Д.А. Лозовой, А.В. Щербаков, В.М. Захаров, С.Н. Фомина // Ветеринария. - 2018. - № 5. - С. 3-8.

59. Филогенетический анализ изолятов вируса ящура, выявленных на постсоветском пространстве и в Монголии в 2016 году / А.М. Тимина, Н.Г.

Зиняков, А.В. Щербаков, Д.А. Лозовой // Ветеринария сегодня. - 2017. - № 4. - С. 3-8.

60. Фунтиков, А.А. Вспышки ящура на территории Южной Кореи и экономические последствия / А.А. Фунтиков, С.Р. Кременчугская // Ветеринария сегодня. - 2017. - № 1. - С. 30-33.

61. Шажко, Ж.А Научно-пракитческие аспекты получения типоспецифических ящурных антител, конъюгированных различными маркерами / Ж.А. Шажко, Л.А. Морозова, В.А. Мищенко // Актуальные пробл. вет. вирусологии.: тез. докл. науч. конф. / ВНИЯИ. - Владимир, 1987. - Ч. 2. - С. 46-47.

62. Шажко, Ж.А. Концентрирование вируса ящура отечественными и импортными полиэтиленгликолями / Ж.А. Шажко, Э.Г. Кошецян, А.Б. Смирнов // Актуальные вопр. вирусологии. - Казань, 1980. - С. 66.

63. Штамм № 1734 "Приморский-2000" вируса ящура типа О для изготовления диагностических и вакцинных препаратов: патент 2204599 РФ, МПК8 C12N 7/00 / В. М. Захаров, Т. А. Фомина, В. К. Спирин [и др.]; ФГУ "ВНИИЗЖ". - № 2001129664/13; заявл. 01.11.2001; опубл. 20.05.2003, Бюл. № 14.

64. Штамм О № 2212/Приморский/2014 вируса ящура АрЫ:ае epizooticae типа О для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О: пат. 2650768 Российская Федерация: МПК С12Ш1|/00 / Д.А. Лозовой, А.В. Мищенко, Д.В. Михалишин [и др.]; ФГБУ "ВНИИЗЖ". - № 2016140459; заявл. 14.10.2016; опубл. 17.04.2018, Бюл. № 11. -Введ. с 14.10.2016 по 14.10.2036.

65. Щербаков, А.В. Молекулярная диагностика особо опасных болезней в ФГУ «ВНИИЗЖ» А.В. Щербаков // Труды Федерального центра охраны здоровья животных: междунар. науч.-практ. конф. - Владимир , 2008. - Т. 6. - С. 64- 77.

66. Экономические последствия от ящура в Приморском крае в 2014 году / В.М. Гуленкин, А.. Караулов, А.В. Мищенко, Д.Ю. Кузин // Ветеринарный врач. - 2015. - № 4. - С. 9-12.

67. Экспертная оценка риска заноса ящура на территорию Российской Федерации из неблагополучных государств / В.М. Гуленкин, А.К. Караулов, Д.А. Лозовой, В.М. Захаров // Ветеринария сегодня. - 2018. - № 2. - С. 36-41.

68. Эпизоотическая ситуация по ящуру в мире в период с 2013 по 2019 гг. / Д.А. Лозовой, С.Н. Фомина, А.К. Караулов, В.П. Семакина // IX Междунар. вет. конгр. "Единый мир - единое здоровье", 17-20 апр. 2019 г., г. Светлогорск, Калинингр. обл. Конф. "Актуальные вет. аспекты молочного и мясного животноводства". -Светлогорск, Калинингр. обл., 2019. - 7 с.

69. Ящур / А. Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.]; под ред. А. Н. Бурдова. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.

70. 42nd General Session of the European Commission for the Control of Foot-and-Mouth Disease (EuFMD), Rome, Italy, 20-21 April 2017: Meeting documents / European Commission for the Control of Foot-and-Mouth Disease ; FAO. - Rome : FAO, 2017. - 125 p.

71. 43nd General Session of the European Commission for the Control of Foot-and-Mouth Disease (EuFMD), Rome, Italy, 17-18 April 2019: Meeting documents / European Commission for the Control of Foot-and-Mouth Disease ; FAO. - Rome : FAO, 2019. - 48 p.

72. Association of the time that elapsed from last vaccination with protective effectiveness against foot-and-mouth disease in small ruminants / E. Elnekave, B. Even-Tov, B. Gelman [et al.] // Vet. Sci. - 2015. - Vol. 16, N 1. - P. 87-92.

73. Binh, D.X. Epidemic characteristics of foot and mouth disease on the buffaloes and cows in Lang Son province, Vietnam / D.X. Binh, D. T.P. Mai // Animal and Vet. Sci. -2016. - Vol. 4, N 4. - P. 62-71.

74. Clavijo, A. Developments in diagnostic techniques for differentiating infection from vaccination in FMD / A. Clavijo, P. Wright, P. Kitching // Vet. J. - 2004. - Vol. 167. - P. 9-22.

75. Comparison of test methodologies for foot-and-mouth disease virus serotype a vaccine matching / T. Tekleghiorghis, K. Weerdmeester, F. van Hemert-Kluitenberg [et al.] // Clin. Vaccine Immunol. - 2014. - Vol. 21, N 5. - P. 674-683.

76. Control of foot and mouth disease during 2010 - 2011 epidemic South Korea / J.H. Park, K.N. Lee, Y.J. Ko [et al.] // Emerg. Infect. Dis. 2013. - Vol.19, N 4. -P.655-659.

77. Effect of Imidocarb dipropionate on the immune response to foot and mouth disease vaccine in healthy and anaplasmosis-infected calves / N. A. Afifi, I.M. Shihata, H.Y. El-zorba, I. M. Ismail // Vet. World. - 2014. - Vol. 7, N 3. - P. 162-167.

78. Efficacy of a high potency O1 Manisa foot-and-mouth disease vaccine in cattle against heterologous challenge with a field virus from the 0/ME-SA/Ind-2001 lineage collected in North Africa / E. Fishbourne, A.B. Ludi, G. Wilsden [et al.] // Vaccine. -2017. - Vol. 35, N 20. - P. 2761-2765.

79. Efficacy of a high potency 01 Manisa monovalent vaccine against heterologous challenge with a FMDV O Mya98 lineage virus in pigs 4 and 7 days post vaccination / V. Wilna, N. T.T. Hong, F.T. Geoffrey [et al.] // Vaccine. - 2015. - Vol. 33, N 24. - P. 2778-2785.

80. Expression non-structural protein gene 3ABC of foot-and-mouth disease virus in E. coli / Y.-M. Cao, Z.-X. Liu, Z -J. Lu [et al.] // Acta Vet. Zootechn. Sinica. - 2004. -Vol. 35, N 1. - P. 115-118.

81. Ferris, N.P. The World Reference Laboratory for Food and Mouth Disease: a review of thirty-three years of activity (1958-1991) / N.P. Ferris, A.I. Donaldson // Rev. Sci. Tech. Off. Intern. Epiz. - 1992. - Vol. 11, N 3. - P. 657-684.

82. Fomina, T.A. Foot-and-mouth disease vims type Asia-1 in Transcaucasia: diagnosis and immunobiological properties / T.A. Fomina, V.M. Zakharov, V.K. Spirin // 6-th Inernt. Congr. Vet. Virol. Virus Persistence and Evolution: Proc. - Saint-Malo, France, 2003. - P. 120.

83. Foot and Mouth Disease Vaccination and Post-Vaccination Monitoring. Guidelines / G. Ferrari, D. Paton, S. Duffy [et al.]; ed.: S. Metwally, S. Münstermann. - Rome: FAO; Paris : OIE, 2016. - 74 p.

84. Foot-and-mouth disease vaccine potency testing: The influence of serotype, type of adjuvant, valency, fractionation method, and virus culture on the dose-response curve in cattle / S.M. Jamal, A. Bouma, J. van den Broek [et al.] // Vaccine. - 2008. - Vol. 26, N 50. - P6317-6321.

85. Gene cloning, prokaryotic expression and purification of the VPI of foot-and-mouth disease virus serotype Asia 1 / J.-Z. Du, H.-Y. Chang, G.-Z. Cong [et al.] // Acta Vet. Zootechn. Sinica. - 2005. - Vol. 36, N 6. - P. 631-634.

86. Genetic and antigenic analysis of foot-and-mouth disease virus serotype O responsible for outbreaks in India during 2013 / S. Subramaniam, J. K. Mohapatra, B. Das [et al.] // Infection, Genetics and Evolution. - 2015. - Vol. 30. - P. 59-64.

87. Genetic diversity in the VP1 gene of foot-and-mouth disease virus serotype Azia-1 / C.B. Gummuthy, A. Sanyal, R. Venkataramanan [et al.] // Arch. Virol. - 2002. - Vol. 147. - P. 85-102.

88. Grubman, M.J. Development of novel strategies to control foot-and-mouth disease: marker vaccines and antivirals / M.J. Grubman // Biologicals. - 2005. -Vol. 33, N 4. - P. 227-234.

89. Gurhan, S. Adaptation of the new a/an FMDV strain to the cell cultures of different origin / S. Gurhan // Europ. Comm. Cont. FMD: Rep. Sess. Res. Group Stand. Techn. Comm.: - Rome. - 1998. - P. 29-37

90. Haas, B. Die Maul-und-Klauneseuche. Klinik, aktuelle Seuchenlage, Bekampfungsverfahren, Probennahme und Diagnostik / B. Haas // Tierarztl. Umschau. -2001. - Bd. 56, N 12. - S. 619-628.

91. Hamblin, C.A rapid enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of foot-and-mouth disease virus in epithelial tissues / C.A. Hamblin, R.M. Armstrong, R.S. Hedger // Vet. Microbiol. - 1984. - Vol. 9, N 5. - P. 435-443.

92. Haydon, D.T. The generation and persistence of genetic variation in foot-and-mouth disease virus / D.T. Haydon, A.D. Bastos, N.J. Knowles // Preventive Vet. Medicine. - 2001. - Vol. 51. - P. 111-124.

93. Hyun-Mi Kim. Investigation of disinfectants for foot-and-mouth disease in the Republic of Korea / Hyun-Mi Kim // J. Infection and Public Health. - 2013. - Vol. 6, N 5. - Р. 331-338.

94. Implementation of the Global FMD control strategy / L. Weber-Vintzel, G. Torres, N. Leboucq [et al.] // Bull. Off. Intern. Epiz. - 2017. - N 1. - P. 75-80.

95. Improvement of serodiagnostic strategy for foot-and-mouth disease virus surveillance in cattle under systematic vaccination: a combined system of an indirect ELISA-3 ABC with an enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay / I.E. Bergmann, V. Malirat, E. Neitzert [et al.] // Arch. Virol. - 2000. - Vol. 145. - P. 473-489

96. Indirect ELISA using recombinant nonstructural protein 3D to detect foot and mouth disease virus infection associated antibodies / S. Mahajan, J.K. Mohapatra, L.K. Pandey [et al.] // Biologicals. - 2015. - Vol. 43, N 1. - P. 47-54.

97. Jamal, S.M. Foot-and-mouth disease: past, present and future / S.M. Jamal, G.J. Belsham // Vet .Research. - 2013. - Vol. 44. - P.116.

98. Kitching, R.P. Clinical variation in foot-and-mouth disease: cattle / R.P. Kitching // Rev. Sci. Techn. Off. Intern. Epiz. - 2002. - Vol. 21, N 3. - P. 499-504.

99. Kitching, R.P. Problems of diagnosis of foot-and-mouth disease in domestic animals / R.P. Kitching // FMD: Control Strategies: Proc. Intern. Symp. 2-5 June 2002, Lyons, Franct - Paris, 2003. - P. 353-359.

100. Kremenchugskaya, S.R. FMD situation and measures for FMD introduction and spread prevention in Russia / S.R. Kremenchugskaya // Management of Transboundary Diseases (FMD, HPAI) Through International Collaboration. -South Korea, 2015. - P. 105-116.

101. Kremenchugskaya, S.R. Foot-and-mouth disease epidemic situation in Russian Federation / S.R. Kremenchugskaya // Workshop [Взаимодействие и сотрудничество между странами Азиатско-Тихоокеанского региона по искоренению высокопатогенного гриппа птиц и ящура: Междунар. семинар, Республика Корея, Ансон, Кенгидо]. - 2014. - P. 173-180.

102. Kumar, R. Construction and characterization of recombinant human adenovirus type 5 expressing foot-and-mouth disease virus capsid proteins of Indian vaccine strain, O/IND/R2/75 / R. Kumar, B.P. Sreenivasa, R.P. Tamilselvan // Vet. World. - 2015. -Vol. 8, N 2. - P. 147-155.

103. Laboratory animal models to study foot-and-mouth disease: a review with emphasis on natural and vaccine-induced immunity / M. Habiela, J. Seago, E. Perez-Martin [et al.] // J. Gen. Virol. - 2014. - Vol. 95, N 11. - P. 2329-2345.

104. Lozovoy, D.A. / D. A. Lozovoy // Innovation in Agriculture: The 8th Intern. Scientific and Practical Conf.: Conf. Papers. - Moscow, 2016. - P. 60-63.

105. MacDonald, C. Development of new cell lines for animal cell biotechnology / C. MacDonald // CRC Crit Rev. Biotechnol. - 1990. - V. 10, № 2. - P. 155-178

106. Mahapatra, M. Foot and mouth disease vaccine strain selection: current approaches and future perspectives / M. Mahapatra, S. Parida // Expert Review of Vaccines. - 2018. - Vol. 17, N 7. - P. 577-591.

107. Mischenko, A.V. Surveillance and control of FMD and other major epizootic transboundary diseases. Russia Federation / A.V. Mischenko, A.K. Karaulov // Europ. Commiss. Control FMD. TransCaucasus Regional Workshop on FMD Control and PCR Progress, Georgia, 11 Febr. 2018. - Georgia, 2018. - 24 р.

108. Niedbalski, W. Comparison of three ELISA kits for the detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus non-structural proteins / W. Niedbalski // Bull. Vet. Inst. Pulawy. - 2004. - Vol. 49. - P. 147-151.

109. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Oct-%20Dec%202018.pdf (дата

FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Jul-Sep%202018.pdf (дата обращения 06.06.2019)

111. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Apr-Jun%202018.pdf (дата обращения 06.06.2019)

112. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Jan-Mar%202018.pdf (дата обращения 06.06.2019)

113. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Oct-Dec%202017.pdf (дата обращения 06.06.2019)

114. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Jul-Sep%202017.pdf (дата обращения 06.06.2019)

115. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Apr-Jun%202017.pdf (дата обращения 06.06.2019)

116. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Jan-Mar%202017.pdf (дата обращения 06.06.2019)

117. OIE and FAO World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease (WRLFMD URL: https://wrlfmd.org/sites/world/files/quick_media/OIE-FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Jul - Sep%202014.pdf (дата обращения 06.06.2019)

118. OIE. Маша! of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 2019. -Chapter

3.1.8https: //www.oie. int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/3.01.0 8_FMD.pdf (дата обращения 11.08.2018)

119. OIE Reporting history (WAHIS interface) URL: https://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Reviewreport/Review?page_refer=MapF ullEventReport&reportid=29171 (дата обращения 17.09.2019)

120. OIE Reporting history (WAHIS interface) URL: https://www.oie.int/wahis_2/public/wahid.php/Reviewreport/Review?page_refer=MapF ullEventReport&reportid=29826 (дата обращения 17.09.2019)

121. WRLFMD Quarterly Report January to March 2019 URL: http://www.wrlfmd.org/sites/world/files/quick_media/OIE-

FAO%20FMD%20Ref%20Lab%20Report%20Jan%20-%20Mar%202019.pdf (дата обращения 17.09.2019)

122. Potency control of foot-and-mouth disease vaccine in cattle. Comparison of the 50% protective dose and the protection against generalization / Y.L. Vianna Filho, V. Astudillo, I. Gomes [et al.] // Vaccine. - 1993. - Vol. 11, N 14. - P. 1424-1428.

123. Pustiglione, N.L. Adaptacao do virus C Waldmann, da febre ai aftoza a ovos embrionados de gallinha / N.L. Pustiglione, A. A. Pinto, O. Suga // Arq. Inst. Biol. - S. Paulo, 1970. - Vol. 37, №1. - P. 15-20

124. Relationship between the anti-FMD virus antibody reaction as measured by different assays, and protection in vivo against challenge infection // K.C. McCullough, L. Bruckner, R. Schaffner [et al.] // Vet. Microbiol. - 1992. - Vol. 30, N 2-3. - P. 99-112.

125. Shojaee, M. Purification of 146s antigen of foot-and-mouth disease (FMD) virus serotypes by using the sucrose gradient procedure / M. Shojaee, S. Zibaee // Intern. J Infect. 2017. - Vol. 4, N 1:e41322.

126. Spatio-temporal analysis of foot-and-mouth disease epidemic situation among farm animals in the Republic of Kazakhstan for the period of 1955 - 2013 / S.K. Abdrakhmanov, S.B. Tyulegenov, I.I. Sytnik [et al.] // Europ. Comiss. Control FMD.

Open Sess. Standing Techn. Research Comm. Europ. Commiss. Control FMD. OS16. The Practice of Innovation. - Rome, 2016. - P. 142.

127. Spatiotemporal analysis of foot-and-mouth disease outbreaks in the Republic of Kazakhstan, 1955 - 2013 / S.K. Abdrakhmanov, S.B. Tyulegenov, F.I. Korennoy [et al.] // Transbound. Emerg. Dis. - 2018. - Vol. 65, N 5. - P. 1235-1245.

128. Stabilizing effects of excipients on dissociation of intact (146S) foot-and-mouth disease virions into 12S particles during storage as oil-emulsion vaccine / M.M. Harmsen, H.P.D. Fijten, D.F. Westra, A. Dekker // Vaccine. - 2015. - Vol. 33, N 21. - P. 24772484.

129. SVANOVA veterinary diagnostics URL: https://www.svanova.com/products/new_release/rp201606.html (дата обращения 12.11.2019)

130. The impact of importation of live ruminants on the epizootiology of foot and mouth disease in Saudi Arabia / I.H.A. Abd El-Rahim, A.M. Mohamed, A.H. Asghar, S.M. Fat'hi // Rev. Sci. Techn. Off. Intern. Epiz. - 2016. - Vol. 35, N 3. -P. 769-778.

131. The serological response against foot and mouth disease virus elicited by repeated vaccination of dairy cattle / E. Elnekave, A. Dekker, P. Eble [et al.] // Vaccine. - 2016. - Vol. 34, N 41. - P. 4920-4926.

132. Vaccine for foot and mouth disease (FMD) specific prevention in farm animals. Reviev of preparations manufactured in FGBI "ARRIAH" / A.E. Metlin, D.A. Lozovoy, D.V. Mikhalishin, A.V. Borisov // BITs 1st Annu. Intern. Congr. of Biotherapy-2017. BITs 9th Annu. Intern. Congr. of Antibody-2017. BITs 9th Annu. World Congr. of Vaccine-2017. - Beijing, China, 2017. - P. 145.

133. VP1 sequencing protocol for foot and mouth disease virus molecular epidemiology / N.J. Knowles, J. Wadsworth, K. Bachanek-Bankowska, D.P. King // Rev. Sci. Techn. Off. Intern. Epiz. - 2016. - Vol. 35, N 3. - P. 741-755.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 3 (продолжение)

'Заявление о выдаче патента Российской Федерации на изобретение

ДАТА ГИЯОЯУЦДДОИЯ (дата рсгисфацин) оригиналов док^ мошон заявки 0 5 МАи 2019 (Л ИПГ ЛТ 9В1. (21) РЕГИСТРАЦИОННЫЙ № ВХОДЯЩИЙ №

(85) ДАТА ПЕРЕВОДА международно!! заявки на нашшн&и>ную фазу

□ (86) (регистрационный номер международной заявки и опта международной подачи установленные получающим ведомством) □(87) (номер и Оата международной публикации международной заявки) □(96) (номер евратийской заявки и дата ее подачи) □ (97) [номер и дата публикачин евразийской к/явно АДРЕС ДЛЯ ПЕРЕПИСКИ (почтовый адрес, фамилия и инициалы или наименование адресата1 111), России, 600901, Владимир, мкр. Юрьевен, ФГБУ «ВНИИЗЖ», Лозовому ДА. Телефон: [phone] Факс:[phone] Адрес электронной почты: [e-mail] АДРЕС ДЛЯ СЕКРЕТНОЙ ПЕРЕПИСКИ (заполняется при подаче заявки на секретное изобретение/

ЗАЯВЛЕНИЕ и выдаче патента Российской Федерации на изобретение В Федеральную службу по интеллектуальной собственности Бережковская наб., д. 30, корн. I, г. Москва, Г-59, ГСП-3, 125993, Российская Федерация

(54) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм О №2344/Монголия/2017 вируса ящура /\phtae ер1гоо1кае типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О

(7!) ЗАЯВИТЕЛЬ'фамитя. имя отчетно (пос.чеОнее при наличии) физического лица или наименование юридического .11111а (согласно учредительное документу), место жительства или место нахождения, название страны и почтовый индекс) Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), 600901, Россия, Владимирская область, г. Владимир, мкр. Юрьевен V изобретение создано за счет средств федерального бюджета Заявитель является: □ государственным заказчиком □ муниципальным заказчиком исполнитель работ (указать наименованиеу V исполнителем работ по: Vгосударственному контракту в рамках реализации Федерально!! целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2015-2020 годы)» на выполнение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по созданию новых защитных препаратов на основе циркулирующих вновь выделенных изолятов особо опасных и экзотических инфекции животных и их испытание (противоящурная инактивированная вакцина для ранней защит$ против ящура типа О) Ж?"^ Контракт от 20.03.2018 г. № 15/18 ИДЕНТИФИКАТОРЫ ЗАЯВИТЕЛЯ ОГРН 1023301283720 КПП 3327010П1 ИНН СНИЛС ДОКУ М РМТ/серия номер1 КОД СТРАН Ы /если он \стинов.*ен) ни У0ДЖВТН& . ■

(74) ПРЕДСТАВ И ТЕЛ 1,(11) ЗАЯВИТЕЛЯ (указываются -—--—-.VГ.. 4,1 Е ^^¡пШЗД^Д

Жг ^^ РУСАЛЕЕВ

Авторы: Фунтиков A.A.

Калинина E.H. Малкова К.С. Кременчугская С.Р. Фомина С.Н.