Анализ влияния антиревматической терапии на фенотипические особенности и апоптоз лимфоцитов при ревматоидном артрите тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.39, кандидат медицинских наук Колосова, Ирина Раисовна

• Колосова, Ирина Раисовна
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Колосова, Ирина Раисовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Роль межклеточных коопераций в патогенезе ревматоидного артрита.

1.2 Рецептор апоптоза СБ95 в патогенезе ревматоидного артрита.—

1.3 Отдельные вопросы терапии ревматоидного артрита.

1.4 Р-гликопротеин - фактор множественной лекарственной устойчивости, его роль при ревматоидный артрите.

Глава 2. Материал и методы.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ влияния антиревматической терапии на фенотипические особенности и апоптоз лимфоцитов при ревматоидном артрите»

Ревматоидный артрит (РА) является распространенным ревматическим заболеванием (около 1% от общей численности населения), приводящим к инвалидизации и сокращению продолжительности жизни больных [6, 134]. Ведущая роль в патогенезе РА отводится нарушениям клеточного и гуморального иммунитета, для исследования которых применяется ряд методов, в том числе определение различных субпопуляций лимфоцитов [17].

При аутоиммунной патологии наблюдается значительное изменение популяционного состава лимфоцитов, поэтому в последние годы серия российских [1, 2, 8, 22, 23] и зарубежных исследований [107, 114, 149] посвящена изучению фенотипа лейкоцитов у больных РА.

Появление в 1975г. гибридомной технологии, получение моноклональных антител к различным поверхностным антигенам клеток и создание нового типа проточных цитофлюориметров создало предпосылку для более точного определения лейкоцитарного фенотипа. В результате оказалось возможным установить роль конкретных поверхностных молекул в развитии аутоиммунного процесса и его чувствительности к терапии.

При РА хорошо изучен уровень экспрессии лишь отдельных дифференцировочных антигенов (CD3, CD4, CD8, CD 16, CD20) [107, 111, 149]. О большинстве других поверхностных молекул имеется отрывочная и противоречивая информация. Практически, совершенно не изучено воздействие на них антиревматической терапии. В то же время, имеются основания считать, что ряд таких молекул может существенно влиять на особенности патогенеза, течения и эффективности терапии при РА.

Одной из таких молекул является гликопротеин-Р (Р§р-170). Он находится на плазматической мембране и служит для удаления из клеток метаболических токсинов. Благодаря гиперэкспрессии этого гликопротеина на опухолевых клетках, развивается феномен множественной лекарственной устойчивости. [4]. Эта проблема привлекла особое внимание, так как в настоящее время возрастает число больных РА, имеющих резистентность ко всей известной базисной терапии. Известно, что базисные антиревматические препараты реализуют свой лечебный эффект посредством действия на лимфоидные клетки, и можно предположить, что гиперэкспрессия Р§р-170 имеет место при развитии устойчивости к терапии при ревматических заболеваниях.

Вторым возможным механизмом устойчивости клеток к терапии является снижение экспрессии этими клетками главного рецептора апоптоза СБ95 [4]. Особый интерес представляет изучение экспрессии этого маркера с позиции его участия в патогенезе РА. В обзоре литературы, посвященном апоптозу при РА, К. МвЫока (1998) [126] указывает, что дефект РаБ-медитируемого апоптоза в ходе лимфоцитарного развития может являться причиной аутоиммунных расстройств, включая артриты. Имеется несколько противоречивых сообщений о влиянии антиревматической терапии на экспрессию С095 и апоптоз лимфоцитов при РА [73, 91,122, 151].

Для развития РА существенное значение могут иметь также определяемые на лимфоцитах молекулы адгезии (CDllb, CD18, CD50, CD54), облегчающие поступление сенсибилизированных лимфоцитов в очаги поражения и молекулы гистосовместимости 2 класса, участвующие в представлении антигена иммунокомпетентным клеткам. Кроме того, при РА значительно нарастает количество активированных лимфоцитов, поэтому определенное значение имеет изучение влияния антиревматической терапии на маркеры активации лимфоцитов (CD25, CD26, CD71 и др.).

Вопросы влияния терапии на фенотипические особенности и апоптоз лимфоцитов при РА остаются малоизученными, что определяет целесообразность данного исследования. Оно может выявить новые точки приложения препаратов, используемых для лечения РА, и внести определенный вклад в изучение патогенеза ревматоидного артрита.

Цель: Изучить влияние антиревматической терапии на фенотипические особенности и апоптоз лимфоцитов больных РА.

Задачи:

1. Провести сравнительное исследование фенотипа и спонтанного апоптоза лимфоцитов больных РА и здоровых доноров.

2. Провести корреляционный анализ между основными клиническими показателями активности РА, результатами фенотипирования и исследования спонтанного апоптоза лимфоцитов у больных РА.

3. Проанализировать результаты антиревматической терапии в зависимости от показателя системы множественной лекарственной резистентности - гликопротеина-Р у больных РА.

4. Исследовать влияние антиревматической терапии на спонтанный апоптоз и экспрессию его рецептора CD 95.

5. Исследовать влияние антиревматической терапии на экспрессию молекул адгезии и активации лимфоцитов.

Научная новизна.

1. В данной работе впервые произведен анализ одновременно целого ряда поверхностных антигенов лимфоцитов у больных ревматоидным артритом. Было выявлено, что при ревматоидном артрите отмечается уменьшение количества CD8+, CD5+- клеток, а также уменьшена экспрессия адгезивых молекул CD18+, CD50+ на лимфоцитах периферической крови.

2. Проведена комплексная оценка влияния антиревматической терапии на фенотип и спонтанный апоптоз лимфоцитов у больных ревматоидным артритом, что позволило дополнить представления о механизмах действия стандартных антиревматических препаратов, таких как метотрексат и глюкокортикостероиды, и новых средств, таких как антитела к ФНОа.

3. Впервые в России исследовалось патогенетическое участие фактора множественной лекарственной устойчивости Р-гликопротеина при ревматоидном артрите, его динамика под влиянием антиревматической терапии.

Практическая ценность.

1. Полученные результаты дополнили известные данные о патогенезе ревматоидного артрита и позволили уточнить некоторые механизмы лечебного действия антиревматических препаратов.

2. Впервые в России вопрос о лекарственной неэффективности при ревматоидном артрите рассматривался с позиции развития множественной лекарственной устойчивости иммунекомпетентных клеток.

Положения, выносимые на защиту:

1. Особенностью фенотипа лимфоцитов периферической крови больных ревматоидным артритом является более низкий по сравнению со здоровыми процент СБ5+-, СБ8+-, СБ18+- и СБ50+- лимфоцитов.

2. Терапия метотрексатом не влияет на такие основные популяции лимфоцитов периферической крови, как CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, и достоверно уменьшает экспрессию антигенов CD50 и CD26. На фоне терапии глюкокортикостероидами не было выявлено значимой динамики большинства исследуемых антигенов. Терапия антителами к ФНОа привела к значительному снижению экспрессии антигенов CD25, CD26, HLA-DR, CD54 на лимфоцитах периферической крови.

3. Эффективность антиревматической терапии обнаружила определенную зависимость от особенностей лимфоцитарного фенотипа больного ревматоидным артритом. Терапия меюгрексатом оказалась неэффективной у больных, у которых определялись повышенные уровни экспрессии HLA-DR. Более высокая эффективность при лечении глюкокортикостероидами наблюдалась у пациентов, у которых выявлялись более высокие уровни экспрессии антигенов CD20 и CD56. Выявлена обратная связь между эффектом терапии антителами к ФНОа и экспрессией антигенов CD1 lb и CD56.

4. При ревматоидном артрите обнаруживается увеличение количества лимфоцитов, экспрессирующих гликопротеин-Р. Более высокая экспрессия этого антигена выявляется у больных получивших в процессе болезни 3 и более базисных препарата.

5. Пульс-терапия мегадозами глюкокортикостероидов приводит к значительному уменьшению количества лимфоцитов экспрессирующих гликопротеин - Р. Терапия метотрексатом не оказывает влияния на уровень экспрессии гликопротеина-Р.

6. Исследование спонтанного апоптоза при РА показало, что его уровень уменьшается с увеличением стадии ревматоидного артрита. Апоптозу преимущественно подвергаются активированные лимфоциты периферической крови. Под влиянием антиревматической терапии уровень апоптоза уменьшается, что обусловлено уменьшением количества активированных лимфоцитов.

Внедрение результатов исследования.

Результаты исследования используются в практике ГУ Института Ревматологии РАМН.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, 2 работы приняты в печать.

Апробация работы.

Основные положения диссертации представлены на Школе молодого ревматолога (май, Москва-2002), на Ученом Совете Института Ревматологии РАМН, на конгрессах ЕЦЪАК-2001 (Прага), АРЬАЯ-2002 (Тайланд), ЕЦЬАЯ-2002 (Стокгольм). Статья «Фактор множественной лекарственной устойчивости

- гликопротеин Р при ревматоидном артрите» была представлена на Конкурсе молодых ученых (май, Москва, 2002) и удостоена 3 премии в номинации «Оригинальная работа».

Диссертационная работа выполнена в ГУ Институте Ревматологии РАМН, директор член.-корр. РАМН Е. Л. Насонов.

Заключение диссертации по теме «Ревматология», Колосова, Ирина Раисовна

Выводы:

1. Особенностью фенотипа лимфоцитов периферической крови больных ревматоидным артритом является более низкий по сравнению со здоровыми процент CD5+- лимфоцитов (р<0,05), супрессорных CD8+ -клеток (р<0,05), а также лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии - р2- интегринов (CD18+) (р<0,05) и ICAM-3 (CD50+) (р<0,01).

2. При оценке влияния антиревматической терапии на фенотипические особенности лимфоцитов периферической крови было установлено, что терапия метотрексатом не влияет на такие основные популяции лимфоцитов периферической крови, как CD3+ CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, и достоверно уменьшает процент активированных лимфоцитов за счет уменьшения экспрессии лиганда для р2- интегринов (молекулы ICAM-3 -CD50) (р=0,01) и активационного антигена - дипептидилпептидазы- 4 (CD26) (р=0,02). На фоне терапии глюкокортикостероидами (как при пульс-терапии, так и в малых дозах) в коротком периоде наблюдения не было выявлено значимой динамики большинства исследуемых антигенов. Наиболее заметное влияние на мембранный фенотип оказала терапия антителами к ФНОа, которая привела к значительному снижению процента лимфоцитов, экспрессирующих антигены CD25, CD26, HLA-DR, CD54 (р<0,05).

3. Эффективность антиревматической терапии обнаружила определенную зависимость от особенностей лимфоцитарного фенотипа больного ревматоидным артритом. Более высокая эффективность при лечении глюкокортикостероидами наблюдалась у пациентов, у которых выявлялись более высокие уровни экспрессии антигенов СЭ20 (р=0,03) и С056 (р=0,02). Терапия метотрексатом оказалась неэффективной у больных, у которых определялись повышенные уровни экспрессии НЬА-ЭЯ (р=0,03). Корреляционный анализ позволил выявить обратную связь между эффектом терапии антителами к ФНОа и экспрессией антигенов С011Ь(р=0,03) и С056 (р=0,04).

4. При ревматоидном артрите обнаруживается увеличение количества лимфоцитов, экспрессирующих гликопротеин-Р (р=0,0005), который является продуктом гена множественной лекарственной устойчивости и участвует в выбросе токсических веществ из клеток. Уровень экспрессии этого антигена коррелирует с уровнем фибриногена (р=0,02) и не зависит от других показателей активности РА, продолжительности болезни, демографических особенностей больных. Более высокая экспрессия этого антигена выявляется у больных получивших в процессе болезни 3 и более базисных препарата (р<0,05).

5. Пульс-терапия мегадозами глюкокортикостероидов приводит к значительному уменьшению количества лимфоцитов, экспрессирующих гликопротеин - Р (р<0,05). Такая же тенденция наблюдается при использовании малых доз глюкокортикостероидов и антител к ФНОа Терапия метотрексатом не оказывает влияния на уровень экспрессии гликопротеина-Р, не было обнаружено связей между эффектом терапии и исходным уровнем экспрессии этого гликопротеина.

6. Исследование спонтанного апоптоза при РА показало, что его уровень уменьшается с увеличением стадии ревматоидного артрита (р=0,0001). Апоптозу преимущественно подвергаются активированные лимфоциты периферической крови. Под влиянием антиревматической терапии имеется тенденция к уменьшению уровня апоптоза, что обусловлено уменьшением количества активированных лимфоцитов (р<0,05).

Практические рекомендации:

1. Больным РА, у которых предшествующая базисная терапия была неэффективной, перед назначением нового базисного средства, целесообразно проводить пульс-терапию кортикостероидами.

2. При повторном назначении ранее неэффективного метотрексата у больных РА целесообразно определение уровня экспрессии НЬА-ОЯ, так как при его повышенном уровне терапия метотрексатом мало эффективна.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Колосова, Ирина Раисовна, 2003 год

1. Артемеико H.A., Сизякина А.П. Клииико-иммуиологические особенности различных вариантов течения ревматоидного артрита. Russian Jornal of Immunology. 1998, 3,2,167-172.

2. Баракат Б.Х. Сравнительная оценка иммуномодулирующих препаратов при лечении ревматоидного артрита. Автореф. Канд. Дис. 1991г.

3. Барышников А.Ю., Кадагидзе З.Г., Махонова JI.A., Тупицын H.H. Иммунологический фенотип лейкозной клетки. М: Медицина, 1989, 239с.

4. Барышников А.Ю., Степанова Е.В. Проблемы лекарственной резистентности. Материалы третьей ежегодной Российской онкологической конференции 29 ноября-1 декабря 1999года, Санкт-Петербург.

5. Барышников А.Ю. Тоневицкий А.Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. Москва. 1997,212с.

6. Беневоленская JI. И., Бржезовский М.М. Эпидемиология ревматических болезней. М: Медицина. 1988, 100-101.

7. Бененсон Е.В., Цай Е.Г., Лобаченко О.В. Цитофлюорометрический анализ функциональной активности лимфоцитов крови при ревматоидном артрите. Иммунология, 1991,2, 49-52.

8. Васильева Е.В., Сенчило И.В. Изменение фенотипа лимфоцитов больных с ревматоидным артритом в присутствии базисных лечебных препаратов. Иммунология. 1994,1,48-50.

9. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М.: «Практика». 1998,459 с.

10. Доненко Ф.В. Резистентность опухолей к проводимому лечению и пути ее преодоления. Док. дис. Москва, 1994,291-292.

11. Каратеев Д.Е., Иванова М.М. Базисная терапия ревматоидного артрита и исход болезни: ретроспективная оценка данных многолетнего наблюдения. Научно-практическая ревматология 2000,1,5-12.

12. Кузнецова С.А., Косицкая JI.C., Тихомиров И.И. и соавт. Влияние иммунных комплексов на экспрессию CD54 и CD95 на поверхности эндотелиальных клеток линии ECV-304. Russian Journal of immunology. 2000, 5,3,279-288.

13. Лашина Н.Ю., Соловьев С.К., Балабанова P.M. Сравнительное изучение эффективности сврхвысоких доз дексавена (дексаметазона) и метипреда (6-метилпреднизолона) у больных ревматоидным артритом. Тер. Архив. 2000, 5, 28-31.

14. Лукина Г.В., Сигидин Я.А., Скуркович C.B., Скуркович Б.С. Новые подходы к биологической иммуномодулирующей терапии ревматоидного артрита: нейтрализация основных цитокинов. Тер. Архив. 1998, 5,32-37.

15. Лукина Г.В., Сигидин Я.А., Скуркович C.B., Скуркович Б.С. Двойное слепое исследование эффективности антител к интерферону-у и фактору некроза опухоли а при ревматоидном артрите (промежуточные результаты). Тер. Архив. 2001,5,12-15.

16. Насонова В.А., Астапенко М.Г. Клиническая ревматология. М.: Медицина, 1989,253-315.

17. Под ред. Насоновой В.А., Бунчука Н.В. Руководство по внутренним болезням / Ревматические болезни.- М.: Медицина, 1997,257-261.

18. Насонов Е.Л. 50 лет применения метотрексата в ревматологии. Русский Медицинский журнал. 2000,8-9,372-376.

19. Насонов Е.Л., Самсонов М.Ю., Тилз Г.П. и соавт. Растворимые молекулы адгезии (Р-селектин, 1САМ-1 и 1САМ-3) при ревматоидном артрите. Тер. Архив, 1999, 5,17-20.

20. Насонов Е.Л., С.К.Соловьев, Н.Ю.Лашина. Лечение ревматоидного артрита: роль глюкокортикоидов. Клиническая медицина. 1999,4,4-8.

21. Никонова М.Ф., Литвина М.М., Варфоломеева М.И. и соавт. Апоптоз и пролиферация как альтернативные формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию. Иммунология, 1999,2,20-23.

22. Саидов М.З., Насонова В.А., Османов А.О. и соавт. Иммунофенотипирование клеток воспалительного инфильтрата при ревматоидных синовитах. Иммунология. 2002, 1, 18-22.

23. Сейсенбаев А.Ш. Олюнин Ю.Н., Сперанский А.И. и соавт. Фенотип лимфоидных клеток в крови и суставах больных ревматоидным артритом. Тер. Архив. 1990, 5,44-48.

24. Сепиашвили Р. И., Шубин М. Г., Колесникова Н.В. и соавт. Апоптоз в иммунологических процессах. Аллергология и иммунология. 2000, 1, 1, 1523.

25. Сигидин Я.А., Лукина Г.В. Новые направления в иммунотропной терапии ревматоидного артрита. Лекция. Клин, ревматология. 1994,4,2-8.

26. Сигидин Я.А., Лукина Г.В. Базисная (патогенетическая) терапия ревматоидного артрита. М: «Фабрика офсетной печати». 2000,7-27.

27. Сигидин Я.А., Лукина Г.В. Новые подходы к анализу патогенеза и патогенетической терапии ревматоидного артрита. Научно-практическая ревматология. 2001, 5,4-11.

28. Соловьев С.К., Иванова М.М., Насонов Е.Л. Интенсивная терапия ревматических заболеваний. М: МИК.2001, 5-6.

29. Ставровская A.A. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Биохимия, 2000, том 65, вып.1,112-126.

30. Чередеев А.Н., Горлина Н.К., Козлов И.Г. СД-маркеры в практике клинико-диагностических лабораторий (лекция). Клиническая лабораторная диагностика. 1999,6, 25-32.

31. Ярилина A.A. Роль молекул адгезии в патогенезе ревматоидного артрита. Научно-практическая ревматология. 2000,1,61- 69.

32. Ярилина A.A., Никонова М.Ф., Литвина М.М и соавт. Влияние а-интерферона на митогенез Т-клеток больных ревматоидным артритом впроцессе лечения реальдероном и циклофероном. Иммунология. 1999, 3, 5155.

33. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме. Лекция. Физиология. Экспериментальная терапия. 1998,2,38-48.

34. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М: «Медицина» 1999,606 с.

35. Agura Е., Howard M., Collins S. Identification and sequence analysis of the promoter for the leukocyte integrin beta-subunit (CD 18): a retinoic acid-inducible gene. Blood, 1992,1,79(3), 602-9.

36. Aoki S., Imai K., Yachi A. Soluble intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) antigen in patients with rheumatoid arthritis. Scand J. Immunol. 1993, 38(5), 48590.

37. Arai K., Yamamura S., Seki S. et al. Increased of CD57+ T cells in knee joints and adjacent bone marrow of rheumatoid arthritis (RA) patients: implication for an anti-inflammatory role. Clin. Exp. Immunol. 1998,111(2), 345-52.

38. Afeltra A., Galeazzi M., Sebastiani G. et al. Coexpression of CD69 and HLADR activation markers on synovial fluid T lymphocytes of patients affected by rheumatoid arthritis: a three-color cytometric analysis. Int. J. Exp. Pathol. 1997, 78(5), 331-6.

39. Al.- Azem I., Fernandez-Madrid F., Long P.M. et al. The immunoregulation of rheumatoid factor by the CD8 T lymphocyte subset in rheumatoid arthritis. J.Rheumatol. 1992,19(9), 1337-41.

40. Arnett F.A., Edworthy S.M., Bloch D.A. et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arth.Rheum.1988,31,3,315-324.

41. Balsa A., Gamallo C., Martin-Mola E. et al. Histologic changes in rheumatoid synovitis induced by naproxen and methotrexate. J Rheumatol. 1993, 20(9), 14727.

42. Bharat B. Agarwal. Tumor necrosis receptor associated signalling molecules and their role in activation of apoptosis, JNK and NF-kB. Ann. Rheum. Dis. 2000, 59 (suppl 1), i6-il6.

43. Barnes P. Anti-inflammatory actions of glucocorticoids: molecular mechanisms. Clin Sci (Colch). 1998,94(6), 557-72.

44. Blann A.D., Herrick A., Jayson M.I. Altered levels of soluble adhesion molecules in rheumatoid arthritis, vasculitis and systemic sclerosis. Br. J. Rheumatol. 1995,34(9), 814-9.

45. Bologna C.,Viu P., Picot M.C. et al. Long-term follow-up of 453 rheumatoid arthritis patients treated with methotrexate: an open, retrospective observational study. Br. J. Rheum. 1997, 36, 5, 535-540.

46. Bond A., Hay F.C. L-selectin expression on the surface of peripheral blood leucocytes from rheumatoid arthritis patients is linked to disease activity. Scand. Immunol. 1997,46(3), 312-6.

47. Boumpas D.T., Chrousos G.P., Wilder R.L. et al. Glucocorticoid therapy for immune-mediated diseases: basic and clinical correlates. Ann. Intern. Med.1993,119,1198-1208.

48. Buttgereit F., da Silva J.A., Boers M. et al. Standardised nomenclature for glucocorticoid dosages and glucocorticoid treatment regimens: current questions and tentative answers in rheumatology. Ann. Rheum. Dis. 2002,61(8), 718-22.

49. Buttgerat F., Wehling M., Burmester G.-R. A new hypothesis of modular glucocorticoid actions. Arthritis Rheum. 1998,41(5), 761-767.

50. Cantwell M., Hua T., Zvaifler N. et al. Deficient Fas ligand expression by synovial lymphocytes from patients with rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1997,40(9), 1644-52.

51. Caramaschi P., Canestrini S., Biasi D. et al. Infliximab in aggressive and refractory rheumatoid arthritis. A pilot study. Recenti. Prog. Med. 2002, 93(1), 1924.

52. Clark E.A., Brugge J.S. Integrins and signal transduction pathways: the road taken. Science. 1995,14,268(5208), 233-9.

53. Conn D.L. Resolved: Low dose prednisolone is indicated as a standard treatment in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 2001,45(5), 462 -7.

54. Cogalgil S., Taysi S. Sialic acid, intercellular adhesion molecule-1 and rheumatoid arthritis: a study on the erythrocyte membrane. Clin. Chem. Lab. Med. 2002,40,4, 356-60.

55. Carthy D., Taylor M., Bernhagen J. et al. Leucocytes integrin and CR1 expression on peripheral blood leucocytes of patients with rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis.1992, 51(3), 307-12.

56. Ceponis A, Hietanen J., Tamulaitiene M. A comparative quantitative morphometric study of cell apoptosis in synovial membrans in psoriatic, reactive and rheumatoid arthritis. Rheumatology (Oxford), 1999,38(5), 431-440.

57. Ciconelli R.M., Ferraz M.B., Visioni R.A. et al. A randomized double-blind controlled trial of sulphasalazine combined with pulses of methylprednisolone or placebo in the treatment of rheumatoid arthritis. Br. J. Rheumatol. 1996, 35(2),. 150-4.

58. Claus R., Bittorf T., Walzel H. et al. High concentration of soluble HLA-DR in the synovial fluid: generation and significance in "rheumatoid-like" inflammatory joint diseases. Cell Immunol. 2000,15,206(2), 85-100.

59. Cush J.J., Lipsky P.E. Phenotypic analysis of synovial tissue and peripheral blood lymphocytes isolated from patients with rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1988,31(10), 1230-8.

60. Cutolo M., Barone A., Accardo S. et al. Effect of cyclosporin on apoptosis in human cultured monocytic THP-1 cells and synovial macrophages. Clin. Exp. Immunol. 1998,16,417- 422.

61. Cutolo M., Sulli A., Pizzorni C. et al. Anti-inflammatory mehanisms of methotrexate in rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis., 2001,60,729-735.

62. Dinther-Jansson A., Kraal G., Soesbergen R. et al. Immunogistological and functional analisis of adgesion molecule expression on rheumatoid synovial layer. Implication for synovial lining cell destruction. J. Rheumatol. 1994, 21(11), 19982004.

63. Dolhain R. J., Tak P. P., Dijkmans B. A. et al. Methotrexate reduces inflammatory cell numbers, expression of monokines and of adhesion molecules in synovial tissue of patients with rheumatoid arthritis. Br. J. Rheumatol. 1998, 37(5), 502-8.

64. Ebo D., DeClerck L. S., Bridts C. H. et al. Expression of Cd5 and Cd23 on B cells of patients with rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematosus and Sjogren's syndrome. Relationship with activity and treatment. In Vivo. 1994, 8(4), 577-80.

65. Elliot M. J., Maini R. N., Feldman M. et al. Randomised duble-blind comparsion of chimeric monoclonal antibody to tumor necrosis factor a (cA2) versus placebo in rheumatoid arthritis. Lancet. 1994,344,1105-10.

66. El-Gabalawy H., Canvin J., Ma G.M. et al. Synovial distribution of alpha d/CD 18, a novel leukointegrin. Comparsion with other integrins and theia ligands. Arthritis Rheum. 1996,39, 1913-21.

67. Fairbanks L. D., Ruckemann K., Qiu Y. et al. Methotrexate inhibits the first committed step of purine biosynthesis in mitogen-stimulated human Tlymphocytes: a metabolic basis for efficacy in rheumatoid arthritis? Biochem. J. 1999,15,342 (ptl), 143-52.

68. Feldman M., Brennan F. M., Maini R. N. Rheumatoid Arthritis. Cell. 1996, 85(3), 307-310.

69. Fernandez-Gutierrez B., Hernandez-Garcia C., Banares A. A.et al. CD 23 hyperexpression in rheumatoid arthritis: evidence for a B cell hyperexpression to cognate and noncognate T-cell signals. Clin. Immunol. Immunopatol. 1994, 72(3), 321-7.

70. Flescher E, Rotem R., Kwon P. et al. Aspirin enhances multidrug resistance gene 1 expression in human Molt-4 T lymphoma cells. Anticancer Res. 2000, 20(6B),4441- 4.

71. Fürst D. E., Koehnke R., Burmeister L. F. et al. Increasing methotrexate effect with increasing dose in the treatment rheumatoid arthritis. J.Rheum.,1989, 16, 3, 313-320.

72. Genestier L., Paillot R., Fournel S. et al. Immunosupressive properties of methotexate: apoptosis and clonal deletion of activated peripheral T cells. J.Ckin. Invest. 1998, 15,102(2), 322-8.

73. Gerli R., Muscat C., Bertotto A. et al. CD26 surface molecule involvement in T cell activation and lymfokine synthesis in rheumatoid and other inflammatory synovitis. Clin. Immunol. Immunopathol. 1996, 80(1), 31-7.

74. Hasimoto H., Tanaka M., Suda T. et al. Soluble Fas ligand in the joints of patients with rheumatoid arthritis and osteoarthritis. Arthritis Rheum. 1998,41(4), 657-62.

75. Hasunuma T., Kayagaki N., Asahara H. et al. Accumulation of soluble Fas in inflamed joints of patients with rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1997, 40(1), 80-6.

76. Hasunuma T., Kato T., Kobata T. et al. Molecular mechanism of immune response, synovial proliferation and apoptosis in rheumatoid arthritis. Springer Semin. Immunopathol. 1998, 20(1-2), 41-52.

77. Heijde D., Simon L., Smolen J. et al. How to report radiographic data in randomized clinical trials in rheumatoid arthritis: guidelines from a roundtable discussion. Arthritis Rheum. 2002,15,47(2), 215-8.

78. Hendrich C., Kuipers J., Kolanus W. et al. Activation of CD16+ effector cells by rheumatoid factor complex. Role of natural killer cells in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1991, 34 (4), 423-31.

79. Hildner K., Finotto S, Becker C. et al. Tumor necrosis factor (TNF) production by Tcell receptor-primed T lymphocytes is a target for low dose methotrexate in rheumatoid arthritis. Clin. Exp. Immunol. 1999,118(1), 137-46.

80. Hirohata S. Ingibition of human B cell activation by gold compounds. Clin. Immunol. Immunopatol. 1996,81(2), 175-81.

81. Huang Q.R., Danis V., Lassere M. et al. Evaluation of new Apo-l/Fas promotor polymorphism in rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus patients. Rheumatology. 1999,38,645-651.

82. Inazuka M., Tahira T., Horiuchi T. et al. Analis of p53 tumor supressor gene somatic mutation in rheumatoid arthritis sinovium. Rheumatology. 2000, 39(3), 262-266.

83. Isomaki P., Soderstrom K., Punnonen J. et al. Expression of bcl-2 in Rheumatoid arthritis. Br. J. of Rheum. 1996,35, 611-619.

84. Jorgensen C., Sun. R., Rossi J.F. et al. Expression of multidrug resistance gene in human rheumatoid synovium. Rheumatol. Int. 1995,15(2), 83-6.

85. Kavanaugh A., Clair E., Cune W. et al. Chimeric anti-tumor necrosis factor-alfa monoclonal antibody treatment of patients with rheumatoid arthritis receiving methotrexate therapy. J.Rheumatol. 2000,27(4), 841-850.

86. Kim H.A., Song Y.W. Apoptotic chondrocyte death in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1999,42(7), 1528-37.

87. Kim S.-G., Suh H.-S., Choe J.-Y. et al. Is leflunomide, a newly developed DMARD, also a substrate of P-glycoprotein. Arthritis Rheum. Abstract supplement 2001 Annual scientific meeting, November 10-15,2001, pS216.

88. Kirsch A.H., Mahmood A.A., Endres J. et al. Apoptosis of human T-cells: induction by glucocorticoids or surface receptor ligation in vitro and in vivo. J.Biol. Regul. Homeost. Agents. 1999,13(2), 80-9.

89. Kirwan J. The effects of glucocorticoids on joint destruction in rheumatoid arthritis. New Engl. J. Med.1995,333,142-146.

90. Kobayashi T., Okamoto K., Hasunuma T. et al. Tumor necrosis factor alpha regulation of the Fas-mediated apoptosis-signaling pathway in synovial cells. Arthritis Rheum. 1999,42(3), 519-26.

91. Kuryliszyn-Moskal A. Cytokines and Soluble CD4 and CD8 Molecules in Rheumatoid Arthritis: Relationship to Systematic Vasculitis and Microvascular Capillaroscopic Abnormalities. Clin. Rheumatol. 1998, 17, 489-495.

92. Kusaba M., Honda J., Fukuda T. et al. Analysis of type 1 and type 2 T cella in synovial fluid and peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 1998, 25(8), 1466-71.

93. Lacki J., Leszczynski P., Mackiewicz S. Intravenous cyclophosphamide combined with methylprednisolone in the treatment of severe refractory rheumatoid arthritis the effect on lymphocytes. J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. 1996,6(4), 232-6.

94. Lacki J.K., Mackiewicz S.H. Relations between absolute number of CD4+CD29+ memory cells and levels of interleukin-6, rheumatoid factors, and phase proteins in rheumatoid synovial fluid. Rev. Rhum. Engl. Ed. 1997, 64(3), 160-5.

95. Lacki J.K., Mackiewicz S.H. The effect of immunosuppressive drugs on expression of surface antigens of limphocytes in patients with rheumatoid arthritis. Pol.Arch. Med. Wewn. 1997,97(2), 134-43.

96. Lacki J.K., Mackiewicz S.H., Wiktorowicz U. Contrasting effect of oral and intravenous cyclophosphamide treatment on phenotypes of human peripheral blood lymphocytes. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1994,42,4,291- 4.

97. Lacki J.K., Mackiewicz S.H., Wiktorowicz U. Lymphocyte phenotype studies of rheumatoid arthritis patients treated with methotrexate. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1994,42(4), 287-90.

98. Lacki J.K., Muller W., Mackiewicz S.H. Does cyclophosphamide combined with methilprednisolone affect the expression of leukocyte function associated antigen 1 in refractory rheumatoid arthritis Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1997, 45(4), 285-87.

99. Lacki J.K., Schochat T., Sobieska M. et al. Immunological studies with rheumatoid arthritis treated with methotrexate or cyclophosphamide. Z. Rheumatol. 1994, 53(2), 76-82.

100. Lazarovits A.I., White M.J., Karsh J. CD7-T cells in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1992, 35(6), 615-24.

101. Liebling M.R., Leib E., McLaughlin K. et al. Pulse methylprednisolone therapy in active rheumatoid arthritis: a doubleblind study. Ann. Intern. Med. 1983,94,21-26.1.l

102. Littler A.J., Buckley C.D., Wordsworth P. et al. A distinct profile of six soluble adhesion molecules (ICAM-1, ICAM-3, VCAM-1, E-selectin, L-selectin and P-selectin) in rheumatoid arthritis. Br. J. Rheumatol. 1997,36(2), 164-9.

103. Llorente L., Richaud-Patin Y., Diaz-Borjon A. et al. Increased P-glycoprotein activity in lymphocytes from rheumatoid arthritis patients might influence disease outcome. Joint Bone Spine. 2000,67(1), 30-9.

104. Macey M.C., Wilton J.M., Carbon R. et al. Leucocyte activation and function-associated in inflammatory disease. Agent Action 1993, 38, 39-40.

105. Maillefert J.F., Duchamp O., Solary E. et al. Effect of cyclosporin at various concentrations on dexamethasone intracellulsr uptake in multidrug resistant cells. Ann. Rheumatic Dis. 2000, 59, 146-148.

106. Markeljevic J., Marusic M., Uzarevic B. et al. Natural killer cell number and activity in remission phase of systemic connective tissue diseases. J.Clin. Lab. Immunol. 1991,35(3), 133-8.

107. Masuco-Hongo K., Sekine T., Ueda S.et al. Long-term persistent accumulation of CD8+ T cells in synovoal fluid of rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis. 1997, 56(10), 613-21.

108. Mason J.C., Karahi P., Hascard D.O. Detection of increased levels of circulating intercellular adhesion molecule 1 in some patients with rheumatoid arthritis but not in patients with systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum. 1993,36,519-27.

109. Mazure G., Jayawardene S.A., Perry J.D. et al. Abnormal binding properties of blood monocytes in rheumatoid arthritis. Agent Actions. 1993, 38, 41-3.

110. Mizokami A., Eguchi K., Kawakami A. et al. Increased population of high fluorescence 1F7 (CD26) antigen on T cells in synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 1996, 23(12), 2022-6.

111. Moieland L.W., Sewell K.L., Trentham D.E. et al. Interleukin-2 diphtheria fusion protein (DAB486IL-2) in refractory rheumatoid arthritis. A double-blind, placebo-controlled trial with open-label extension. Arthritis Rheum. 1995, Sep, 38(9), 1177-86.

112. Morassut P., Goldstain R., Cyr M. et al. Gold sodium thiomalate compard to low dose methotrexate in treatment of RA randomised, dubl blind 26-week treal. I. Rheum. 1989,16(3), 302-6.

113. Moreland L.W., Schiff M.N., Baumgartner S.W. et al. Etanersept therapy in rheumatoid arthritis. A randomized, controlled trial. Ann.Interm.Med. 1999, 130, 478-86.

114. Muscat C., Bertotto A., Agea E. et al. Expression and functional role of 1F7 (CD26) antigen on periferal blood and synovial fluid T cells in rheumatoid arthritis patients. Clin. Exp. Immunol. 1994,98(2), 252-6.

115. Nakashima T., Sasaki H., Tsuboi M. et al. Inhibitory effect of glucocorticoid for osteoblast apoptosis induced by activated peripheral blood mononuclear cells. J. Rheumatol. 1998, 25(8), 1466-71.

116. Nakazawa F., Matsuno H., Yudoh K. et al. Methotrexate inhibits rheumatoid synovitis by inducing apoptosis. J. Rheumatol. 2001,28(8), 1800-1808.

117. Nakashima T., Sasaki H., Tsuboi M. et al. Ingibitory effect of glucocorticoid for asteoblast apoptosis induced by activated peripheral blood mononuclear cells. Endocrinology 1998,139(4), 2032-40.

118. Nielsen H., Petersen A.A., Skjodt H. et al. Blood levels of CD1 lb+ memory T lymphocytes are selectively upregulated in patients with active rheumatoid arthritis. APMIS 1999 Dec; 107(12): 1124-30.

119. Nishioka K., Hasunuma T., Kato T. et al. Apoptosis in Rheumatoid arthritis. Arthritis Rhum. 1998,41(1), 1-9.

120. Nonaka S., Yasuda M., Nobunaga M. In vitro IgM rheumatoid factor production by peripheral blood mononuclear cells from patients with seronegative rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 1993,20(9), 1478-84.

121. Norbiato G., Bevilacqua M., Vago T. et al. Glucocorticoides and Th-1, Th-2 type cytokines in rheumatoid arthritis, osteoarthritis, astma, atopic dermatitis and AIDS. Clin. Exp. Rheumatol. 1997,15(3), 315-23.

122. Olsen N.J., Brooks R.H., Cush J.J. et al. A double-blind, placebo-controlled study of anti-CD5 immunoconjugate in patients with rheumatoid arthritis. The Xoma RA Investigator Group. Arthritis Rheum. 1996, 39(7), 1102-8.

123. Oooto Y., Ikemoto T., Nakagama T. et al. Quantitative flowcytometric analysis of B cell surface antigens in patients with autoimmune diseases. Rinsh. Byori. 1995,43(4), 381-4.

124. Panayi G.S. T-cell-dependent pathways in rheumatoid arthritis. Current opinion in Rheumatology. 1997, 9,236-240.

125. Pincus T. The paradox of effective therapies but poor long-term outcomes in rheumatoid arthritis. Semin. Arthritis Rheum. 1992,21(6), Suppl 3, 2-15.

126. Potocnik A.J., Kinne R., Menninger H. et al. Expression of activation antigens on T cells in rheumatoid arthritis patients. Scand J. Immunol. 1990, 31(2), 213-24.

127. Rahman P., Hefferton D., Robb D. Increased MDR1 P-glycoprotein expression in methotraxate resistance: comment on the article by Yudoh et al. Arthritis Rheum. 2000,43(7), 1661-2.

128. Relic B., Guicheux J., Mezin F. et al. IL-4 and IL-13, but not IL-10, protect human synoviocytes from apoptosis. J. Immunol. 2001, 15, 166(4), 2775-82.

129. Reparon-Schuijt C.C., Esch W. J., Kooten C. et al. Regulation of synovial B cell survival in rheumatoid arthritis by vascular cell adhesion molecule 1 (CD 106) expressed on fibroblast-like synoviocytes. Arth. Rheum. 2000,43(5), 1115-21.

130. Roon J., Verhoef C., Roy J. et al. Decrease in peripheral type 1 over type 2 T cell cytokine production in patients with rheumatoid arthritis correlates with an increase in severity of disease. Ann. Rheum. Dis. 1997, 56,656-660.

131. Ryan L., Brooks P. Disease-modifying antirheumatic drugs. Current Opinion in Rheumatology, 1999,11,161-166.

132. Saag K.G., Kohler J.A., Furst D.E. Low dose long-term corticosteroid therapy in rheumatoid arthritis: an analysis of serious adverse events. Amer. J. Med. 1994, 96,115-123.

133. Sacito S., Ueki Y., Eguchi K. et al. Serum cytokines in patients with rheumatoid arthritis. Correlation of interferon gamma and tumor necrosis factor alpha with the characteristics of peripheral blood mononuclear cells. Rheum. Int. 1995, 15(1), 317.

134. Salaffi F., Carotti M., Sartini A. et al. A prospective study of the long term efficasy and toxicity of low-dose methotrexate in rheumatoid arthritis. Clin. Exp. Rheum. 1995,13(1), 23-28.

135. Salmon S.E., Dalton W.S. Relevance of multidrug resistance to rheumatoid arthritis: development of a new therapeutic hypotesis. J. Rheumatol. Suppl. 1996, 44,97-101.

136. Scallon B., Cai A., Solowski N., Rosenberg A. et al. Binding and functional comparisons of two types of tumor necrosis factor antagonists. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002,301(2), 418-26.

137. Schirmer M., Vallejo A.N., Weyand C.M. et al. Resistance to apoptosis and elevated expression of Bcl-2 in clonally expanded CD4+CD28- T cells from rheumatoid arthritis patients. J.Immunol. 1998,15,161(2), 1018-25.

138. Schmidt D., Goronzy J.J., Weyand C.M. CD4+CD7-CD28- T cells are expanded in rheumatoid arthritis and are characterized by autoreactivity. J.Clin.Invest. 1996,97(9), 2027-37.

139. Schwartz L.M., Osborne B.A. Programmed cell death, apoptosis and killer genes. Immunol Tuday. 1993, 14,12, 582-590.

140. Seitz M., Zwicker M., Loetscher P. Effects of methotrexate on differentiation of monocytes and production of cytokine inhibitors by monocytes. Arthritis Rheum. 1998,41(11), 2032-8.

141. Sfikakis P., Charalambopoulos D., Vaiopoulos G. et al. Circulating P- and L-Selectin and T-Lymphocyte Activation in Patients with Autoimmune Rheumatic Diseases. Clin. Rheumatol. 1999,18,28-32.

142. Sfikakis P., Dimopoulos M., Souliotis V., Charalambopoulos D., Mavrik; s M., Panayiotidis P. Effect of 2-chlorodeoxyadenosine and gold sodium thiomalate on human bcl-2 gene expression. Immunofarmacol. Immunotoxicol. 1998, 20(1), 63-77.

143. Spencer-Green G. Etenarsept (Enbrel): update on therapeutic use. Ann. Rheum.Dis. 2000, 59, (suppl 1), i46-i49.

144. Storgaard M., Jensen M.P., Stengaard-Pedersen K. et al. Effects of methotrexate, sulphasalazine and aurothiomalate on polymorphonuclear leucocytes in rheumatoid arthritis. Scand. J. Rheumatol. 1996,25(3), 168-73.

145. Sugiyama M., Tsukazaki T., Yonekura A. et al. Localisation of apoptosis and expression of apoptosis related proteins in the synovium of patients with rheumatoid arthritis. Ann. Rheum. Dis. 1996,55,442-449.

146. Sumida T., Hoa T.T., Asahara H. et al. T cell receptor of Fas-sensitive T cells in rheumatoid synovium. J.Immunol 1997,15,158 (4), 1965-70.

147. Takahashi H., Soderstrom K., Nilsson E. et al. Integrins and other adhesion molecules on lymphocytes from synovial fluid and peripheral blood of rheumatoid arthritis patients. Eur J.Immunol. 1992,22(11), 2879-85.

148. Takemura S., Klimiuk P.A., Braun A. et al. T cell activation in rheumatoid synovium is B cell dependent. J. Immunol. 2001,15, 167, 8,4710-8.

149. Tanaka S., Murakami T., Horikawa H. et al. Suppression of arthritis by inhibitors of dipeptidylpeptidase 4. Int. J. Immunopharmacol. 1997,19,15-24.

150. Tanaka Y., Nomi M., Fujii K. et al. Intercellular adhesion molecule 1 underlies the functional heterogeneity of synovial cells in patients with rheumatoid arthritis: involvement of cell cycle machinery. Arthritis Rheum. 2000,43(11), 2513-22.

151. Tebib J.G. Apoptosis: essential information for the rheumatologist. Rheumatology in Europe. 1998,27(2), 63-6.1. Thomas R r* „ 1,91. Carroll G i d„j .

152. U J- deduction of lenirrko ^methotrexate. Arthritis Rheum. 1993,36(9) ^ ^ ^

153. T°rSteinSd0ttir >' N.g. Ha,|gren R (ime8rinS - Peripheral hlood neutropi,( ^ ' "and the effec( of trOPh"S Pa'ients1999,50(4), 433-9. ^-con^, , ,mmunol

154. Torsteinsdottir I., Arvidson NG Ha.

155. U ' Hallgren R. et al a* rheumatoid arthritls (RA); ^ ^ ^ Oocyte activation i„expression and the effect of„, ' " ^^ ^ C°mp,em™ receptorect of glucocorticoids. Clin. Exp. Immunol. 1999^ 115(3)

156. Tsuboi M., Kawakami A., Nakashima T et al Tuiterleukin-lbeta increase the P 'me Fas-mediated aDont • Lab. Clin. Med. 1999,134(3); 222.3, ^ osteob^ts. J.

157. Voskuyl A E Ma,- s ^'0(2), 90*y A.E., Mamn S„ Melchers I « aI , .adhesion molecule-1 and n, ' °f Circu'ati"8 intercellulari„creasedinpMie; 7rcu,at-—-cocyle adhesion3.311,1, ri,eUma'0id V8SCUlilis- J- Rheum. ,995,

158. Wakisaka S., Suzuki N., Takeba Y. et al. Modulatoin by proinflammatory cytokines of Fas/Fas ligand-mediated apoptotic cell death of synovia' cells in patients with rheumatoid arthritis (RA). Clin. Exp. Immunol.1998,114(1), 119-28.

159. Weusten B.A.M., Jacobs J.W.G., Bijlsma J.W.J. Corticosteroid pulse therapy in active rheumatoid arthritis. Ibid. 1993,23,183-192.

160. Wiktorowicz K.E., Lacki J.K., Blazczak P. et al. Does C-reactive protein modulate T-lymphocyte function in methotraxate-treated rheumatoid arthritis patients? J.Investig. Allergol. Clin. Immunol. 1992,2(6), 329-32.

161. Yao Q., Wang S., Glorioso J.C. et al. Gene Transfer of p53 to Arthritic Joints Stimulates Synovial Apoptosis and Inhibits Inflammation. Mol. Ther. 2001, 3(6), 901-10.

162. Yazici Y., Erkan D., Kulman Let al. Decreased flares of rheumatoid arthritis during the first year of etanercept treatment: further evidence of clinical effectiveness in the "real world". Ann. Rheum. Dis. 2002, 61(7), 638-40.

163. Yudoh K., Matsuno H., Nakazawa F. et al. Increased expression of multidrug resistance of P-glycoprotein on Thl cells correlates with drug resistance in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 1999,42(9), 2014-18.

164. Yanagihara Y., Shiozawa K., Takai M. et al. Natural killer (NK) T cells are significantly decreased in peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis (RA). Clin. Exp. Immunol. 1999,118(1), 131-6.

165. Zhang X., Jiang M., Zheng D. Rheumatoid arthritis synoviocyte hyperplasia and expression of fas and bcl-2 genes. Zhonghua Yi Xue Za Zhi 1998, 78(3), 1758.

166. Zhou W.D., Zhang H.Q., Fang M.et al. Induction of expression of MDRlgene by retinoic acid and DMSO and effects on rhodamine-123 efflux in HL-60 cell lines and resistant sublines. Yao Hsueh Pao. 1996, 31(1), 1-5.